一种特定小干扰RNA及其在制备治疗四溴双酚A诱导肝损伤药物中的应用

本发明涉及生物医药与核酸干预领域，具体涉及一种特定小干扰rna及其在制备治疗四溴双酚a诱导肝损伤药物中的应用。

背景技术：

1、四溴双酚a（tetrabromobisphenol a，tbbpa）是一种广泛应用的溴系阻燃剂，具有较强的环境持久性和广泛暴露特征。肝脏作为外源化学物质代谢和解毒的重要器官，是tbbpa潜在毒性作用的重要靶器官。已有研究表明，tbbpa暴露可引起肝细胞氧化应激、线粒体功能障碍、脂质过氧化、铁稳态紊乱、炎症反应及细胞死亡等多种病理改变。

2、目前，针对tbbpa相关肝损伤的研究主要集中于毒性表型观察及相关作用机制解析，对于能够直接作用于关键致损分子的分子靶向干预手段仍较为缺乏。虽然组学分析、生物信息学及机器学习等方法能够筛选出与肝损伤相关的候选基因，但单纯的表达差异或统计学相关性并不能充分证明候选基因具有实际干预价值。

3、小干扰rna（small interfering rna，sirna）可通过rna干扰机制特异性降低靶基因表达，具有靶向性明确、设计灵活等特点，已成为基因功能研究及核酸药物开发的重要技术手段。现有技术中已经公开部分分别靶向mmp2、clec7a、fabp4、fcgr2a或cxcl8的sirna序列，但上述序列主要用于相应靶基因的一般性表达抑制或其他研究体系，并未针对tbbpa诱导肝细胞损伤进行系统的功能筛选，也缺乏针对tbbpa相关肝损伤保护效果的直接比较证据。

4、对于同一靶基因，不同sirna由于靶位点及核苷酸序列组成不同，其基因沉默效率、作用稳定性以及最终产生的细胞功能效应均可能存在差异。即使不同sirna均能够有效降低同一靶基因表达，也不能据此直接判断其在tbbpa诱导肝细胞损伤模型中具有相同的保护效果。

5、因此，有必要针对tbbpa诱导肝损伤筛选具有明确功能干预价值的分子靶点，并进一步获得针对上述靶点的特定sirna序列，通过与现有公开的同靶点sirna序列进行直接比较，确定在有效抑制靶基因表达的同时，对tbbpa诱导肝细胞损伤具有更优保护作用的核酸干预药物。

6、但目前针对tbbpa诱导肝损伤的研究主要集中于毒性表型、氧化应激、炎症反应及细胞死亡等机制解析，缺乏能够直接作用于关键致损分子的核酸干预药物。因此，需要开发具有明确分子靶点基础的干预药物，以减轻tbbpa暴露所致肝细胞损伤。

7、现有技术中虽公开了部分靶向mmp2、clec7a、fabp4、fcgr2a或cxcl8的sirna序列，但现有序列主要用于靶基因的一般性表达抑制或其他研究体系，并未针对tbbpa诱导肝细胞损伤的功能保护效果进行系统筛选；对于同一靶基因，不同sirna即使均能够降低相应靶基因表达，其对tbbpa诱导肝细胞损伤，尤其是细胞凋亡的改善程度仍可能存在明显差异。因此，进一步需要提供针对mmp2、clec7a、fabp4、fcgr2a和cxcl8的特定sirna序列，使其在具有有效基因沉默能力的基础上，相对于现有公开的同靶点参比sirna表现出更优的tbbpa肝细胞损伤保护作用。

8、现有文献或专利中已公开部分针对 mmp2、clec7a、fabp4、fcgr2a 或 cxcl8 的sirna 序列，但主要用于相应基因的一般性表达抑制或其他疾病模型，并未针对 tbbpa 诱导肝细胞损伤的保护效果进行筛选和优化。不同 sirna 即使具有相近的靶基因抑制能力，其对 tbbpa 诱导细胞损伤，尤其是细胞凋亡的改善效果仍可能存在明显差异。因此，有必要获得既能够有效降低靶基因表达，又能够更有效减轻 tbbpa 诱导肝细胞凋亡的特定sirna 序列，实现在制备治疗四溴双酚a诱导肝损伤药物中的应用，但至今未见有公开报道。

技术实现思路

1、针对上述情况，为克服现有技术之不足，本发明之目的在于，提供一种特定小干扰rna及其在制备治疗四溴双酚a诱导肝损伤药物中的应用，有效解决治疗四溴双酚a诱导肝损伤的用药问题。

2、本发明解决的技术方案是：一种特定小干扰rna，为靶向基质金属蛋白酶2（matrixmetalloproteinase 2，mmp2）、c型凝集素结构域家族7成员a（c-type lectin domaincontaining 7a，clec7a）、脂肪酸结合蛋白4（fatty acid binding protein 4，fabp4）、fcγ受体iia（fc gamma receptor iia，fcgr2a）或c-x-c基序趋化因子配体8（c-x-c motifchemokine ligand 8，cxcl8）的特定小干扰rna（small interfering rna，sirna）的一种；

3、所述sirna在制备治疗四溴双酚a（tetrabromobisphenol a，tbbpa）诱导肝损伤药物中的应用。

4、本发明相对于现有 sirna 序列具有更优的肝细胞保护作用，靶向明确，直接针对与tbbpa肝损伤相关的核心基因进行表达抑制；且有多靶点干预优势，所涉及的5个核心基因分别与不同损伤环节相关，抑制不同靶点均可产生一定的细胞保护作用；采用sirna进行直接基因敲低，并通过rt-qpcr、cck-8及annexin v-fitc/pi流式细胞术验证其功能效果，从而形成“靶基因抑制—细胞损伤减轻”的直接实验证据，提高了相关靶点作为干预对象的可靠性，为tbbpa暴露相关肝损伤的进一步应用研究提供技术基础，具有实际的应用价值。

1.一种特定小干扰rna（sirna），其特征在于，该特定小干扰rna为靶向基质金属蛋白酶2（mmp2）、c型凝集素结构域家族7成员a（clec7a）、脂肪酸结合蛋白4（fabp4）、fcγ受体iia（fcgr2a）或c-x-c基序趋化因子配体8（cxcl8），其核酸序列分别为：

2.根据权利要求1所述的特定小干扰rna，其特征在于，为至少含有一种所述sirna以及lipofectamine 3000的核酸组合物，其中lipofectamine 3000作为所述sirna的核酸递送试剂。

3.权利要求1或2所述的特定小干扰rna在制备治疗四溴双酚a诱导肝损伤药物中的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的诱导肝损伤的细胞为thle2。