用于流动池上文库制备和甲基化检测的试剂盒和方法与流程

背景技术：

1、脱氧核糖核酸（dna）甲基化是哺乳动物基因组中的表观遗传机制，该机制涉及将甲基基团或羟甲基转移到胞嘧啶的c5位置上以分别形成5-甲基胞嘧啶或5-羟甲基胞嘧啶。dna甲基化通过募集参与基因阻遏的蛋白质或通过抑制转录因子与dna的结合来调控基因表达。dna甲基化影响发育、分化和疾病（诸如多发性硬化症、糖尿病、精神分裂症和癌症）中基因表达的调控。

技术实现思路

1、本文公开的流动池包括用于流动池上标签片段化和延伸的表面化学，该表面化学使得能够在流动池上产生完全适配的dna片段。在本文公开的示例中，完全适配的dna片段也可以在流动池上暴露于酶促甲基化转化。然后可以对转化的单链dna片段进行扩增和测序。因此，本文公开的示例除了全基因组指标之外还提供了甲基化碱基信息。

1.一种试剂盒，所述试剂盒包括：

2.根据权利要求1所述的试剂盒，所述试剂盒还包括对所述第一转座体复合物和所述第二转座体复合物中的每一者的附接机制呈惰性的变性试剂。

3.根据权利要求1至2中的一项所述的试剂盒，其中：

4.根据权利要求1至3中的一项所述的试剂盒，其中所述延伸混合物包含载液、聚合酶和核苷酸。

5.根据权利要求1至4中的一项所述的试剂盒，其中所述酶促甲基化转化混合物包含载液和经改变的胞苷脱氨酶。

6.一种方法，所述方法包括：

7.根据权利要求6所述的方法，其中启动所述标签片段化包括：

8.根据权利要求6至7中的一项所述的方法，其中：

9.根据权利要求6至7中的一项所述的方法，其中去除所述转座酶包括将所述流动池加热至约60℃。

10.根据权利要求6至9中的一项所述的方法，其中启动所述延伸反应包括将延伸混合物引入到所述流动池中，所述延伸混合物包含载液、聚合酶和核苷酸。

11.根据权利要求6至10中的一项所述的方法，其中使所述第二完全适配的dna片段变性包括将所述流动池加热至范围为约20℃至约60℃的温度。

12.根据权利要求6至11中的一项所述的方法，其中启动所述酶促甲基化转化包括将经改变的胞苷脱氨酶在适于(i)通过脱氨使5-甲基胞嘧啶（5mc）转化为胸苷（t）的速率大于通过脱氨使胞嘧啶（c）转化为尿嘧啶（u）的速率的条件下引入到所述流动池中，以产生转化的单链dna，或者在适于(ii)通过脱氨使c转化为u以及通过脱氨使5mc转化为t的速率大于通过脱氨使5-羟甲基胞嘧啶（5hmc）转化为5-羟甲基尿嘧啶（5hmu）的速率的条件下引入到所述流动池中。

13.根据权利要求6至12中的一项所述的方法，其中所述酶促甲基化转化产生转化的完全适配的dna片段，并且所述方法还包括加工所述转化的完全适配的dna片段以产生测序文库。