短双歧杆菌NHNK-630及其在制备防治视网膜黄斑变性的产品中的应用的制作方法

本发明涉及微生物，具体涉及短双歧杆菌nhnk-630及其在制备防治视网膜黄斑变性的产品中的应用。

背景技术：

1、黄斑变性主要侵害视网膜中心区域（黄斑），导致视力进行性下降。其中，年龄相关性黄斑变性与衰老、生活方式、饮食习惯等密切相关，好发于老年人群，其典型病理特征包括视网膜色素上皮细胞的退行性病变及黄斑区细胞凋亡。

2、年龄相关性黄斑变性分为湿性和干性两种类型，其中，干性年龄相关性黄斑变性的主要病理机制包括氧化应激累积、慢性炎症反应及视网膜色素上皮细胞凋亡。活性氧的过量生成导致蛋白质错误折叠、脂质过氧化以及免疫系统的持续激活，进而诱导视网膜色素上皮细胞损伤和光感受器变性。湿性年龄相关性黄斑变性的主要病理机制包括起源于眼睛的脉络膜层的异常血管生长到视网膜中，以及流体从血液渗漏到视网膜中。

3、目前，针对视网膜黄斑变性等视网膜退行性疾病中视网膜炎症的主要治疗方法是玻璃体腔注射曲安奈德，虽然其可以有效地抑制炎症引发的视网膜水肿和炎症细胞的浸润，然而，诸如激素性青光眼和急性眼内炎等并发症很常见。抗血管内皮生长因子（vegf）治疗被公认为湿性年龄相关性黄斑变性临床治疗的最首要的方案。然而，抗vegf药剂通常经由玻璃体内注射施用，这既不受受试者欢迎，又可能伴随副作用（例如，红眼、眼痛、感染等）。注射的次数或频率也可能给患者带来经济负担，并且导致对疾病的控制下降。

技术实现思路

1、为了克服上述问题，本发明提供了短双歧杆菌nhnk-630及其在制备防治视网膜黄斑变性的产品中的应用。

2、为实现上述技术目的，本发明采用如下技术方案：

3、本发明的第一个方面，提供了一种短双歧杆菌（

bifidobacterium breve）nhnk-630，于2025年03月10日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国.武汉.武汉大学，保藏编号为cctcc no：m 2025432。

4、本发明中所述的短双歧杆菌（

bifidobacterium breve）nhnk-630，来源于健康女婴粪便，经16s rdna鉴定为短双歧杆菌（

bifidobacterium breve）。该菌株为革兰氏阳性，显微镜下呈棒状或杆状；在含有0.1%（m/v）半胱氨酸的德曼-罗戈萨-夏普（mrs）固体平板上生长，可形成表面光滑不透明的菌落，边缘整齐，呈乳白色圆形凸起；在含有0.1%（m/v）半胱氨酸的mrs液体培养基中呈均匀混浊生长，久置菌体呈白色沉淀，最适生长温度37℃。

5、本发明的第二个方面，提供一种微生态制剂，包括第一方面所述的短双歧杆菌（

bifidobacterium breve）nhnk-630菌株、纯培养物、灭活菌体、提取物、发酵产物溶胞物或其组合。

6、本发明的第三个方面，提供第二方面所述微生态制剂在制备防治视网膜黄斑变性的产品中的应用。

7、在一种或多种实施方式中，所述防治视网膜黄斑变性包括：

8、（a1）提高视网膜抗氧化能力；

9、（a2）增加视网膜屏障；

10、（a3）减少视网膜凋亡；

11、（a4）减少视网膜新生血管；

12、（a5）减少视网膜炎症。

13、优选地，所述提高视网膜抗氧化能力包括：增加人视网膜色素上皮细胞的谷胱甘肽（gsh）分泌量；增加氧化损伤人视网膜色素上皮细胞的存活率；上调氧化损伤人视网膜色素上皮细胞的抗氧化相关基因即核因子e2相关因子2（nrf2）和血红素加氧酶-1（ho-1）的表达。

14、优选地，所述增加视网膜屏障包括：上调氧化损伤人视网膜色素上皮细胞的屏障相关基因‌即闭锁小带蛋白1（zo-1）和紧密连接蛋白4（cld4）的表达。

15、优选地，所述减少视网膜凋亡包括：下调氧化损伤人视网膜色素上皮细胞的细胞凋亡相关基因即细胞肿瘤抗原p53（p53）和细胞周期依赖性蛋白激酶抑制因子1a（p21）的表达。

16、优选地，所述减少视网膜新生血管包括：下调氧化损伤人视网膜色素上皮细胞的新生血管相关基因即抗血管内皮生长因子（vegf）的表达。

17、优选地，所述减少视网膜炎症包括：下调氧化损伤人视网膜色素上皮细胞的促炎因子相关基因即白细胞介素8（il-8）和白细胞介素6（il-6）的表达。

18、在一种或多种实施方式中，所述产品包括药物及药物组合物。

19、本发明的第四个方面，提供一种防治视网膜黄斑变性的产品，包括第二方面所述微生态制剂。

20、在一种或多种实施方式中，所述防治视网膜黄斑变性包括：

21、（a1）提高视网膜抗氧化能力；

22、（a2）增加视网膜屏障；

23、（a3）减少视网膜凋亡；

24、（a4）减少视网膜新生血管；

25、（a5）减少视网膜炎症。

26、优选地，所述提高视网膜抗氧化能力包括：增加人视网膜色素上皮细胞的谷胱甘肽（gsh）分泌量；增加氧化损伤人视网膜色素上皮细胞的存活率；上调氧化损伤人视网膜色素上皮细胞的抗氧化相关基因即核因子e2相关因子2（nrf2）和血红素加氧酶-1（ho-1）的表达。

27、优选地，所述增加视网膜屏障包括：上调氧化损伤人视网膜色素上皮细胞的屏障相关基因‌即闭锁小带蛋白1（zo-1）和紧密连接蛋白4（cld4）的表达。

28、优选地，所述减少视网膜凋亡包括：下调氧化损伤人视网膜色素上皮细胞的细胞凋亡相关基因即细胞肿瘤抗原p53（p53）和细胞周期依赖性蛋白激酶抑制因子1a（p21）的表达。

29、优选地，所述减少视网膜新生血管包括：下调氧化损伤人视网膜色素上皮细胞的新生血管相关基因即抗血管内皮生长因子（vegf）的表达。

30、优选地，所述减少视网膜炎症包括：下调氧化损伤人视网膜色素上皮细胞的促炎因子相关基因即白细胞介素8（il-8）和白细胞介素6（il-6）的表达。

31、在一种或多种实施方式中，所述产品包括药物及药物组合物。

32、本发明的有益效果在于：

33、本发明从健康女婴粪便中分离获取短双歧杆菌（

bifidobacterium breve）nhnk-630，其活菌、灭活菌体或发酵产物具有提高视网膜抗氧化能力、增加视网膜屏障、减少视网膜凋亡、减少视网膜新生血管和减少视网膜炎症的功能；此外，短双歧杆菌（

bifidobacterium breve）nhnk-630自身的生物膜可以增加对肠上皮细胞的定植能力，因此短双歧杆菌（

bifidobacterium breve）nhnk-630可用于制备防治视网膜黄斑变性的产品。