一种芍药苷-姜黄素复方脂质体及其制备方法和应用

本发明属于药物制剂，具体涉及一种芍药苷-姜黄素复方脂质体及其制备方法和应用。

背景技术：

1、急性肝损伤（acute liver injury，ali）是临床常见的肝脏疾病，其病理进程与氧化应激、炎症反应以及细胞凋亡密切相关，因此开发利用具有抗氧化和抗炎作用的天然活性成分对防治ail有着重要意义。

2、来源于传统中药白芍的芍药苷（paeoniflorin，pf）和姜黄的姜黄素（curcumin，cur）均具有包括抗炎、抗氧化、抗凋亡、免疫调节在内的多种药理作用，且已有研究证实其联用优势。然而，芍药苷与姜黄素虽被报道具有协同保肝作用，但二者理化性质差异显著（芍药苷为水溶性成分，姜黄素为脂溶性成分），现有联用研究多停留在药效学层面，仍因两种药物极性相反，导致联用后的产品难以通过缓释与肝靶向实现两种药物在肝脏病灶部位的同步、持续递送。

技术实现思路

1、为克服现有技术中芍药苷与姜黄素联用后的产品难以通过缓释与肝靶向实现两种药物在肝脏病灶部位的同步、持续递送的难题，本发明提供了一种芍药苷-姜黄素复方脂质体及其制备方法和应用。本发明制备的芍药苷-姜黄素复方脂质体（pf-cur-lips, pcls）能够提高两种药物的药效，为传统中药成分的开发应用与ali的防治提供新的研究思路和实验依据。为实现上述目的，本发明采用如下技术方案。

2、本发明提供了一种芍药苷-姜黄素复方脂质体，所述芍药苷-姜黄素复方脂质体是由芍药苷、姜黄素和脂质载体制成，具有脂质双层囊泡结构；所述芍药苷和姜黄素共同包载于脂质载体中；所述芍药苷与脂质载体的质量比为1:13~17，所述姜黄素与脂质载体的质量比为1:38~42。

3、所述脂质载体由卵磷脂和胆固醇制成；其中，所述卵磷脂与胆固醇的质量比为5~7：1。

4、本发明通过构建特定的复方脂质体产品，解决了现有技术中芍药苷与姜黄素联用产品难以通过缓释与肝靶向实现两种药物在肝脏病灶部位同步、持续递送的难题。具体而言，本发明限定的芍药苷-姜黄素复方脂质体，是由芍药苷、姜黄素和脂质载体（卵磷脂和胆固醇）构成，并精确控制芍药苷与脂质载体的质量比为1:13~17、姜黄素与脂质载体的质量比为1:38~42、卵磷脂与胆固醇的质量比为5~7:1。该特定配比方案是针对芍药苷（水溶性）与姜黄素（脂溶性）这对性质迥异药物组合的专用设计，能够使两种药物在脂质载体中形成稳定的分子间相互作用，避免因极性相反导致的包封行为相互干扰，从而实现二者在脂质双层囊泡结构中的高效、稳定共存。并且，完整的脂质双层囊泡结构赋予了芍药苷-姜黄素复方脂质体良好的缓释特性（6h累积释放率<50%），使两种药物在到达靶部位前始终保持有效包封状态，并在抵达肝脏后实现同步、持续释放。由此，本发明能够将芍药苷与姜黄素的协同保肝优势从药效学层面充分转化为制剂产品的治疗获益，有效解决了现有产品因缺乏结构优化而难以同时实现缓释与肝靶向的核心难题。

5、优选地，所述芍药苷-姜黄素复方脂质体的粒径为177nm~184nm，多分散系数为0.16~0.18，zeta电位为-42.0mv~ -41.3mv。本发明所得复方脂质体产品具备约180nm的平均粒径、pdi≤0.20的均一分散性及zeta电位绝对值≥30mv的优良分散稳定性。该粒径范围使产品能够通过被动靶向机制实现肝脏病灶部位的选择性蓄积。

6、本发明还提供了所述芍药苷-姜黄素复方脂质体的制备方法，包括如下步骤：

7、将卵磷脂、胆固醇和姜黄素（cur）通过超声充分分散于三氯甲烷中，经蒸发处理，除去三氯甲烷，得到均匀的脂质薄膜；其中，所述卵磷脂与胆固醇的质量比为5~7：1，且所述卵磷脂与胆固醇的总质量与姜黄素的质量比为38~42：1。

8、将芍药苷（pf）溶解于ph=5.0~6.0的磷酸盐缓冲液中，所得溶液加入至所述脂质薄膜中，充分振摇后，水化处理，得到水化溶液；其中，所述卵磷脂和胆固醇的总质量与芍药苷的质量比为13~17：1。

9、将所述水化溶液进行超声处理，得到超声处理液；将所述超声处理液经截留分子量为3kda~4kda的超滤离心处理，得到截留液；将所述截留液过滤，即得所述芍药苷-姜黄素复方脂质体（pcls）。

10、卵磷脂、胆固醇和姜黄素在有机溶剂三氯甲烷中有较好的溶解性，三者在三氯甲烷中充分混合后，通过蒸发处理除去三氯甲烷，可形成均匀负载有姜黄素的脂质薄膜。其中，卵磷脂与胆固醇的质量比为5~7：1，该比例下胆固醇能够嵌入磷脂双分子层中，调节膜的流动性与刚性，使脂质薄膜结构致密且均一稳定；卵磷脂与胆固醇的总质量与姜黄素的质量比为38~42：1，该比例范围确保了姜黄素在脂质薄膜中的稳定分散与高效包载，避免因姜黄素负载量过高导致药物析出或膜结构崩塌。

11、芍药苷在ph=5.0~6.0的磷酸盐缓冲液中具有较好的稳定性，将该溶液加入至脂质薄膜后，脂质薄膜在酸性水化条件下自发溶胀水合，排列形成由脂质双分子层构成的纳米囊泡。在此过程中，水溶性药物芍药苷被包埋于脂质体的内部水相中，而脂溶性药物姜黄素则因其疏水特性定位于脂质双分子层的烷基链区域，从而实现两种理化性质迥异的药物在同一递送体系中的同步包载。卵磷脂和胆固醇的总质量与芍药苷的质量比为13~17：1，该比例能够在保证脂质体完整囊泡结构的前提下提供充足的内部水相空间，使芍药苷被充分包裹，避免因水相体积不足导致包封率低下。通过水化及后续的超声处理，可形成粒径均一、分散良好的小单层脂质体，确保制剂的均一性和稳定性。

12、应用超滤离心法可除去未包埋的游离芍药苷，过微孔滤膜可除去未包埋的游离姜黄素及可能存在的沉淀或杂质，两步纯化操作协同作用，确保终产品中游离药物被充分去除，从而获得包封率高、粒径均一的芍药苷-姜黄素复方脂质体。

13、脂质体进入机体后的分布主要受到网状内皮系统的调控，尤其是肝脏的巨噬细胞对其摄取较多，这使脂质体对肝脏有天然靶向性，其封闭囊泡结构不仅能保护包载的药物免受体液中酶和酸碱环境的降解，提高药物的稳定性，还能实现缓释控释。且脂质体能在水溶液中充分分散，借助其与生物膜类似的脂质双分子层结构能有效透过细胞膜。故本发明提供的制备方法同时解决了芍药苷稳定性较差、对酸碱环境敏感、难以透过细胞膜和姜黄素稳定性较差、体内代谢迅速、难以在体液中充分分散的理化缺陷。

14、优选地，所述卵磷脂和胆固醇的总质量（脂质）与三氯甲烷的质量体积比为27mg~31mg：1ml。

15、优选地，所述芍药苷与磷酸盐缓冲液的质量体积比为2mg~3mg：1ml。

16、优选地，所述水化的条件为：温度40℃~50℃、振荡至水化充分。

17、优选地，所述超声处理的条件为：超声波细胞粉碎机功率100w~200w，超声工作模式为2s~4s、间隔2s~4s，总超声时长8min~12min。

18、优选地，所述超滤离心处理的条件为0℃~8℃、3000g~5000g条件下离心30min~60min。

19、优选地，所述过滤是使用孔径为0.44μm~0.46μm的微孔滤膜完成的

20、更优选地，所述过滤是使用孔径为0.45μm的微孔滤膜完成的。

21、优选地，所述蒸发处理的温度为45℃~55℃。

22、本发明还提供了所述芍药苷-姜黄素复方脂质体在制备抗炎、抗氧化或抗肿瘤药物中的应用。

23、与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

24、1、本发明提供了一种芍药苷-姜黄素复方脂质体，通过限定芍药苷与脂质载体质量比为1:13~17、姜黄素与脂质载体质量比为1:38~42、卵磷脂与胆固醇质量比为5~7:1，构建了一种针对水溶性芍药苷与脂溶性姜黄素这对极性相反组合的专用脂质载体环境，使两种药物在脂质双分子层中各自占据适宜的分布位点（芍药苷分布于水相区域、姜黄素嵌入脂质双分子层），避免因极性排斥导致的包封行为相互干扰，同时在该特定配比下，卵磷脂与胆固醇以5~7:1的比例协同形成致密且稳定的脂质双层膜结构，使两种药物在载体内部形成稳定的分子间相互作用（经ft-ir和uv-vis验证），从而在制剂层面同时确保了两种药物在囊泡结构中的高效共包载与稳定保留。在此基础上，该芍药苷-姜黄素复方脂质体具有被动肝靶向能力（可通过肝脏窦状隙内皮细胞窗孔实现选择性蓄积）和缓释特性（药物需跨过完整脂质双层膜才能释放，6h释放率<50%），使得包载于同一脂质体中的芍药苷与姜黄素能够以同步方式被递送至肝脏病灶部位并持续释放，最终将二者在药效学层面的协同保肝优势转化为制剂产品的治疗获益，有效解决了现有产品因缺乏针对该组合的载体组成优化而难以同时实现缓释与肝靶向递送的核心难题。

25、2、本发明提供的该芍药苷-姜黄素复方脂质体的制备方法首先将卵磷脂、胆固醇与姜黄素以特定比例共溶于三氯甲烷中，经蒸发处理形成负载姜黄素的脂质薄膜，其中卵磷脂与胆固醇的质量比为5~7：1以优化膜的流动性与刚性，卵磷脂和胆固醇的总质量与姜黄素的质量比为38~42：1以确保姜黄素在脂质膜中的稳定分散与高效负载；随后将芍药苷溶于ph=5.0~6.0的磷酸盐缓冲液中，加入至所述脂质薄膜进行水化处理，在此酸性条件下芍药苷保持稳定并随着脂质薄膜的水合溶胀自发包埋于脂质体内部水相中，而姜黄素因疏水特性被锚定于脂质双分子层的烷基链区域，两种溶解性质迥异的药物通过“薄膜形成-酸性水化自组装”的步骤在同一载体中实现分区同步包载，其中卵磷脂和胆固醇的总质量与芍药苷的质量比控制为13~17：1，以确保提供充足的内部水相空间保障芍药苷的包封率；水化后经超声处理调控脂质体粒径，使制剂均一稳定，再利用截留分子量为3kda~4kda的超滤管去除未包埋的游离芍药苷，并经微孔滤膜过滤去除未包埋的游离姜黄素，通过两步纯化操作的协同作用确保终产品中游离药物被充分去除。由此制得的芍药苷-姜黄素复方脂质体，其封闭囊泡结构可有效保护包载药物免受体液中酶和酸碱环境的降解，提高体内稳定性，借助与生物膜类似的脂质双分子层结构能有效透过细胞膜并在水溶液中充分分散，且因脂质体进入机体后主要被肝脏巨噬细胞摄取而具有天然的肝脏靶向性，可将两种药物同步递送至肝脏。因此，本发明有效克服了现有技术中芍药苷与姜黄素因理化性质差异显著及各自稳定性差、生物利用度低所带来的共载难题，解决了常规脂质体制备方法不适用于芍药苷与姜黄素这两种性质迥异药物的同步共包封的问题。

26、3、本发明通过体外和体内实验考察了上述制备方法制备得到的芍药苷-姜黄素复方脂质体的毒性。结果表明，本发明提供的芍药苷-姜黄素复方脂质体在设定的给药周期和剂量范围内，未观察到与药物相关的毒性反应。

27、4、本发明通过与游离药物对比探究了上述芍药苷-姜黄素复方脂质体对急性肝损伤的干预作用。结果表明，本发明提供的芍药苷-姜黄素复方脂质体相较于游离药物具备更为显著的保肝作用。