黄芩素脂质体注射剂及其制备方法和应用

本发明涉及药物制备，具体涉及黄芩素脂质体注射剂及其制备方法和应用。

背景技术：

1、黄芩素（baicalein，分子式c15h10o5，cas号491-67-8，化学名5,6,7-三羟基黄酮，也常被称作黄芩苷元），主要提取自唇形科黄芩属植物的黄芩根。经大量药理试验证实，黄芩素是一种活性丰富的天然黄酮类化合物，具备抗氧化、抗过敏、抗病毒以及抗肿瘤等多重药理功效，能够通过抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡、提升机体免疫能力等多种路径发挥抗癌作用，凭借安全、低毒的天然药物优势，成为当下抗肿瘤靶向制剂研发的热门原料。同时，脂质体递送系统作为成熟的药物载体技术，已广泛应用于临床化疗药物制剂制备，多款抗肿瘤脂质体药物实现商业化应用，临床疗效与市场应用价值均得到充分验证。

2、在实际药物研发与临床应用过程中，天然黄芩素的自身特性和传统给药方式存在诸多难以规避的缺陷。首先，黄芩素属于难水溶性黄酮类物质，水中溶解性能极差，且其在天然黄芩根中的含量极低，仅为0.04%~0.28%，工业上需依托酸水解或酶水解工艺分解黄芩苷获取，原料获取成本较高。其次，传统口服给药模式下，黄芩素口服生物利用度低，进入人体后代谢速度快、体内留存时间短，难以持续发挥抗肿瘤药效。这些固有缺陷直接导致黄芩素的药理活性无法充分发挥，极大限制了其在抗肿瘤临床治疗中的落地应用。

3、为解决黄芩素水溶性差、体内代谢快、药效不足的问题，目前行业主流解决方案是采用脂质体递送系统包裹修饰黄芩素。脂质体是一种人工制备的双层磷脂囊泡载体，能够从根本上优化黄芩素的给药性能，具体可实现三大技术改良效果：一是大幅提升黄芩素的水溶性与体外稳定性，延长药物在人体血液循环中的留存时长；二是借助肿瘤组织的渗透滞留效应实现被动靶向富集，有效提升肿瘤病灶部位的药物浓度；三是通过缓释、控释作用平稳释放药物，降低药物对正常机体的毒副作用。现阶段业内已开展多种黄芩素脂质体研发试验，研究人员通过不同磷脂原料、高分子改性材料、制备工艺优化制剂结构，同时peg（polyethylene glycol，聚乙二醇）修饰、多糖改性等技术也被广泛用于优化黄芩素脂质体的靶向性与稳定性，以此改善其抗肿瘤应用效果。

4、尽管现有脂质体技术能够初步改善黄芩素的给药缺陷，但当前各类研究制备的黄芩素脂质体制剂仍存在显著技术短板，尚未达到产业化与临床应用标准。根据中国药典规范，合格脂质体制剂需满足包封率不低于80%、载药量不低于10%，而现有研究产物参数均远低于该标准，如部分制剂载药量仅3.36%、6.1%，或包封率仅有32%，制剂载药性能极差。同时，现有药效评价体系存在明显局限性，大多仅针对单一肿瘤细胞开展体外试验，缺乏多癌种细胞、动物活体层面的系统性药效与安全性验证。此外，现有相关制剂多为代谢调节、抗菌用途，且仅适配腹腔注射方式，并非标准化抗肿瘤注射剂型，同时制剂粒径、载药量、包封率等关键参数无法精准调控，整体制剂稳定性、适用性不足，难以满足临床多癌种抗肿瘤规范化治疗的使用需求。

技术实现思路

1、为了解决现有技术中存在的问题，本发明提供一种黄芩素脂质体注射剂及其制备方法和应用。通过优化薄膜水化制备工艺，限定高磷脂酰胆碱纯度的蛋黄卵磷脂膜材，调控黄芩素、蛋黄卵磷脂与胆固醇的投料配比，配合高真空延时旋蒸除溶剂、高温水化、脉冲超声匀质的一体化改良工艺，有效提升了黄芩素脂质体的包封率、载药量与胶体储存稳定性，可显著提高黄芩素体内生物利用度与肿瘤靶向富集能力，对多种实体肿瘤实现高效广谱抑制效果。

2、为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种黄芩素脂质体，包括磷脂双分子层脂质体囊泡、嵌合于脂质体磷脂疏水层的黄芩素；所述磷脂双分子层脂质体囊泡膜材包括蛋黄卵磷脂、胆固醇；所述蛋黄卵磷脂中磷脂酰胆碱pc质量含量≥98%；所述黄芩素脂质体平均水合粒径为50~150nm，pdi为0.10~0.30，黄芩素包封率≥85%，黄芩素载药量≥10%。

3、本发明还提供一种黄芩素脂质体冻干制剂，所述黄芩素脂质体冻干制剂由上述黄芩素脂质体与冻干赋形剂经真空冷冻干燥制得。

4、进一步的，所述冻干赋形剂为浓度为3%~5%的葡萄糖。

5、本发明还提供一种黄芩素脂质体注射剂，所述黄芩素脂质体注射剂由上述黄芩素脂质体或上述黄芩素脂质体冻干制剂与注射用水性介质配制而成，制剂中黄芩素终浓度为4.5~7.5mg/ml。

6、本发明还提供一种黄芩素脂质体注射剂的制备方法，包括以下步骤：

7、将黄芩素、蛋黄卵磷脂、胆固醇按投料重量比1:3:0.8~1.5混合，加入有机溶剂完全溶解，得到混合物料溶液；

8、对混合物料溶液进行真空旋转蒸发处理，控制旋转蒸发真空度≥0.08mpa、水浴温度37~40℃，待形成脂质薄膜后，继续维持工况旋蒸15~35min，得到质地致密的脂质薄膜；

9、制备液体注射剂型时，向脂质薄膜中加入注射用水性介质，水化、匀质处理，得到分散均匀的脂质体粗分散液；

10、制备冻干注射剂型时，向脂质薄膜中加入质量浓度3%~5%的葡萄糖水溶液，水化、匀质处理，得到分散均匀的脂质体粗分散液；

11、将所得脂质体粗分散液经无菌微孔滤膜过滤除菌，液体剂型过滤后得到黄芩素脂质体注射剂，冻干剂型过滤后经真空冷冻干燥处理，得到黄芩素脂质体冻干制剂，黄芩素脂质体冻干制剂与注射用水性介质混合、振荡，得到黄芩素脂质体冻干注射剂。

12、进一步的，所述水化、匀质处理具体为：先采用普通超声清洗机于37~40℃水浴下完成脂质薄膜水化，再采用非接触式超声细胞破碎仪进行脉冲均质，超声工作模式为900w，超声5s、间歇5s。

13、进一步的，过滤除菌工序采用孔径≤0.3μm的无菌微孔滤膜。

14、进一步的，成品储存条件为：液体剂型于2~8℃避光保存，冻干剂型于4℃~-80℃避光密封保存。

15、本发明还提供一种黄芩素脂质体注射剂在制备广谱抗肿瘤药物中的应用，所述抗肿瘤药物为静脉给药制剂，适用治疗的肿瘤种类包括乳腺癌、卵巢癌、肺癌、结直肠癌。

16、进一步的，所述黄芩素脂质体注射剂用于制备抗卵巢癌药物。

17、与现有技术相比，本发明至少具有以下有益效果：

18、本发明提供一种黄芩素脂质体注射剂，包封率可达95%以上、载药量稳定≥10%，最优样品包封率达97.3%、载药量达12.5%，远超行业现有研究水平。同时制剂平均水合粒径稳定控制在90.5nm左右、pdi为0.10~0.30，颗粒分散均一、胶体状态稳定，4℃静置30天无分层、沉淀与药物析出现象，有效解决了传统制剂溶解性差、稳定性弱、有效载药含量低的问题，显著改善黄芩素体内作用基础，满足临床静脉注射的药用质量要求。

19、进一步的，本发明通过限定磷脂酰胆碱pc含量≥98%的注射级精制蛋黄卵磷脂作为膜材，区别于常规80%低纯度磷脂易形成絮凝浑浊体系的缺陷，可成型透光性好、结构规整的完整磷脂双分子层；同时将黄芩素、蛋黄卵磷脂、胆固醇配比控制在1:3:0.8~1.5，在保障磷脂膜刚性结构稳定的前提下，避免胆固醇过量挤占载药位点导致药效下降。本发明同时兼容液体注射剂型与冻干剂型，冻干制品可在4℃至-80℃长期保存，复溶后粒径、包封率、载药量无明显衰减，有效解决液体制剂储存周期短的问题，大幅拓宽制剂储运与临床使用场景。

20、本发明提供一种黄芩素脂质体注射剂的制备方法，在0.08mpa以上高真空度、37~40℃水浴条件下，成膜后持续延时旋蒸15~35min，可剥离体系残留微量有机溶剂，制备得到致密坚硬的脂质薄膜，从工艺根源杜绝药物析出问题。配合37~40℃水浴超声水化、高功率脉冲式超声匀质及梯度细化工艺，各工序参数相互匹配、物料转化闭环连贯，小试及十倍规模化放大试验均能稳定产出高品质制剂，放大后包封率仍可达95.2%、载药量12.1%，工艺重复性好、容错率高，具备良好的工业化生产转化潜力。

21、进一步的，本发明采用脉冲式分步匀质工艺，兼顾脂质体成型完整性与体系分散均匀性，搭配≤0.3μm无菌微孔滤膜精密过滤，有效剔除大颗粒与杂质，保障制剂无菌、均一的注射级品质。同时针对性设置差异化储存条件，液体制剂2~8℃避光保存、冻干制剂低温长效储存，可确保制剂从生产、储运到临床使用的全流程质量稳定，有效降低制剂失效、变质风险。

22、本发明脂质体注射剂依托纳米粒径优势，可通过实体瘤渗透滞留效应实现肿瘤靶向富集，在大幅缩短治疗周期的同时提升抑瘤效果。动物体内药效试验表明，同等25mg/kg给药剂量下，仅需5次隔日静脉给药，即可远超游离黄芩素21天持续灌胃的治疗效果，对乳腺癌、卵巢癌、肺癌、结直肠癌四大实体瘤均具备明确抑制作用，实现了广谱抗肿瘤治疗效果。

23、进一步的，本发明通过多癌种动物模型量化验证差异化治疗优势，制剂对skov3卵巢癌抑瘤率高达77.3%，治疗效果最优；对mc38结直肠癌、llc肺癌抑瘤率分别达55.3%、52.2%，抑瘤效果稳定；对4t1乳腺癌抑瘤率可达48.3%，可有效延缓肿瘤增殖进程。基于明确的量化药效差异，本发明可针对性优先应用于卵巢癌靶向治疗，同时适配多种实体瘤辅助治疗，临床适配性强、治疗靶向度高，具备优异的临床应用价值与药物开发前景。