一种吡维氯铵脂质纳米颗粒及其制备方法和应用

本发明属于生物医药，具体涉及一种吡维氯铵脂质纳米颗粒及其制备方法和应用。

背景技术：

1、恶性肿瘤严重威胁人类生命健康，传统手术、化疗、放疗治疗模式存在创伤大、全身性毒副作用显著、易复发转移等诸多局限性。近年来，以免疫检查点抑制剂、过继性t细胞疗法为代表的肿瘤免疫治疗技术取得突破性进展，在部分血液肿瘤及少数实体瘤中展现出显著疗效。

2、然而，现有肿瘤免疫治疗体系仍存在诸多难以突破的固有技术瓶颈：免疫检查点抑制剂单药治疗实体瘤响应率有限，且多数患者治疗后期会出现获得性耐药；过继性t细胞疗法应用于实体瘤时，肿瘤微环境的物理屏障及免疫抑制特性会严重阻碍t细胞的肿瘤浸润与功能维持。目前，临床探索的免疫联合治疗策略主要包括免疫药物联用、化疗联合免疫治疗、放疗联合免疫治疗等，但上述策略或因缺乏肿瘤选择性导致全身毒性叠加，或因作用机制单一无法有效重塑肿瘤免疫微环境，临床获益仍十分有限。目前，本领域亟需一种能够有效逆转肿瘤免疫抑制微环境、提升实体瘤免疫治疗响应率的免疫增敏制剂。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种吡维氯铵脂质纳米颗粒及其制备方法和应用，本发明构建的脂质纳米颗粒具备优异的肿瘤靶向富集能力；所载吡维氯铵能够提升肿瘤细胞的力学硬度，进而增强t细胞介导的肿瘤杀伤作用。该脂质纳米颗粒可依托机体免疫系统依赖途径发挥抑瘤活性，并能够显著提升免疫检查点抑制剂、过继性t细胞疗法的抗肿瘤治疗效果。

2、本发明提供了一种吡维氯铵脂质纳米颗粒，包括吡维氯铵脂质体和/或吡维氯铵脂质胶束；

3、所述吡维氯铵脂质体包括吡维氯铵和脂质混合物；所述脂质混合物包括磷脂、胆固醇和靶向配体-脂质偶联物；

4、所述吡维氯铵脂质胶束包括吡维氯铵、peg-脂质和靶向配体-脂质偶联物；

5、所述靶向配体-脂质偶联物包括dspe-peg2000-crgd和/或dmg-peg2000-crgd。

6、作为一种优选方案，所述吡维氯铵脂质体中，所述脂质混合物与吡维氯铵的质量比为5~20:1；以脂质混合物的总摩尔数计，所述磷脂的摩尔百分比为40%~70%，所述胆固醇的摩尔百分比为25%~50%，所述靶向配体-脂质偶联物的摩尔百分比为5%~10%；

7、所述吡维氯铵脂质胶束中，所述吡维氯铵脂质胶束的载药量为0.2~1 mg/ml；以所述peg-脂质和靶向配体-脂质偶联物的总摩尔数计，所述peg-脂质的摩尔百分比为50%~90%，所述靶向配体-脂质偶联物的摩尔百分比为10%~50%。

8、作为一种优选方案，所述磷脂包括hspc、dspc、dotap中的至少一种；

9、所述peg-脂质包括dspe-peg2000和/或dmg-peg2000。

10、本发明还提供了上述方案所述的吡维氯铵脂质纳米颗粒中吡维氯铵脂质体的制备方法，包括薄膜分散法和/或逆向蒸发法；

11、所述薄膜分散法包括以下步骤：将吡维氯铵和脂质混合物溶解于有机溶剂得到混合液；去除混合液中的有机溶剂得到薄膜；在所述薄膜中加入水性介质进行水化，得到混悬液；将所述混悬液进行超声，超滤浓缩得到所述吡维氯铵脂质体；

12、所述逆向蒸发法包括以下步骤：将吡维氯铵和脂质混合物溶解于有机溶剂，得到有机相溶液；将所述有机相溶液滴加至水性介质进行自组装，得到自组装体系；去除所述自组装体系中的有机溶剂，得到脂质悬浮液；将所述脂质悬浮液进行超声，超滤浓缩得到所述吡维氯铵脂质体；

13、所述有机溶剂包括乙醇，氯仿和吡啶中的至少一种；

14、所述超滤浓缩选用截留分子量为10~30 kda的超滤膜进行。

15、作为一种优选方案，所述水化的温度为42~45℃；所述水化的时间为30 min。

16、作为一种优选方案，所述超声的功率为150~300 w；所述超声的时间为1~5 min。

17、本发明还提供了上述方案所述的吡维氯铵脂质纳米颗粒中吡维氯铵脂质胶束的制备方法，包括以下步骤：将所述peg-脂质、靶向配体-脂质偶联物和水混合，得到脂质溶液；将所述吡维氯铵溶解于有机溶剂，得到吡维氯铵溶液；在搅拌条件下，将所述吡维氯铵溶液滴加至脂质溶液中，形成预混液；将所述预混液进行旋转蒸发、超声，得到混悬液；将所述混悬液进行过滤、超滤浓缩，得到所述吡维氯铵脂质胶束；

18、所述吡维氯铵溶液和所述脂质溶液的体积比为1:10；所述搅拌的转速为600~1000rpm。

19、本发明还提供了上述方案所述的吡维氯铵脂质纳米颗粒在制备抗肿瘤药物中的应用。

20、作为一种优选方案，所述药物用于提高肿瘤细胞硬度和/或增强肿瘤免疫。

21、本发明还提供了一种药物组合物，包括上述方案所述的吡维氯铵脂质纳米颗粒和抗肿瘤免疫抑制剂；所述抗肿瘤免疫抑制剂包括免疫检查点抑制剂和/或过继性t细胞制剂。

22、有益效果：本发明提供了一种吡维氯铵脂质纳米颗粒，包括吡维氯铵脂质体和/或吡维氯铵脂质胶束；所述吡维氯铵脂质体包括吡维氯铵和脂质混合物；所述脂质混合物包括磷脂、胆固醇和靶向配体-脂质偶联物；所述吡维氯铵脂质胶束包括吡维氯铵、peg-脂质和靶向配体-脂质偶联物；所述靶向配体-脂质偶联物包括dspe-peg2000-crgd和/或dmg-peg2000-crgd。本发明选用磷脂类物质（磷脂以及靶向配体-脂质偶联物中的脂质）、胆固醇作为膜材组装形成脂质体囊泡结构，通过靶向配体实现脂质体肿瘤靶向修饰，将吡维氯铵包封于脂质双分子层中，得到吡维氯铵脂质纳米颗粒。本发明构建的吡维氯铵脂质纳米颗粒具备优异的肿瘤靶向富集能力；所载吡维氯铵能够提升肿瘤细胞的力学硬度，进而增强t细胞介导的肿瘤杀伤作用，且依托机体免疫系统依赖途径发挥抑瘤活性。本发明所述的吡维氯铵脂质纳米颗粒与免疫检查点抑制剂、过继性t细胞制剂联用后可明显增强抗肿瘤免疫应答，实现肿瘤免疫增敏联合治疗。

1.一种吡维氯铵脂质纳米颗粒，其特征在于，包括吡维氯铵脂质体和/或吡维氯铵脂质胶束；

2.根据权利要求1所述的吡维氯铵脂质纳米颗粒，其特征在于，所述吡维氯铵脂质体中，所述脂质混合物与吡维氯铵的质量比为5~20:1；以脂质混合物的总摩尔数计，所述磷脂的摩尔百分比为40%~70%，所述胆固醇的摩尔百分比为25%~50%，所述靶向配体-脂质偶联物的摩尔百分比为5%~10%；

3.根据权利要求1所述的吡维氯铵脂质纳米颗粒，其特征在于，所述磷脂包括hspc、dspc、dotap中的至少一种；

4.权利要求1~3中任意一项所述的吡维氯铵脂质纳米颗粒中吡维氯铵脂质体的制备方法，其特征在于，包括薄膜分散法和/或逆向蒸发法；

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述水化的温度为42~45℃；所述水化的时间为30 min。

6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述超声的功率为150~300 w；所述超声的时间为1~5 min。

7.权利要求1~3中任意一项所述的吡维氯铵脂质纳米颗粒中吡维氯铵脂质胶束的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将所述peg-脂质、靶向配体-脂质偶联物和水混合，得到脂质溶液；将所述吡维氯铵溶解于有机溶剂，得到吡维氯铵溶液；在搅拌条件下，将所述吡维氯铵溶液滴加至脂质溶液中，形成预混液；将所述预混液进行旋转蒸发、超声，得到混悬液；将所述混悬液进行过滤、超滤浓缩，得到所述吡维氯铵脂质胶束；

8.权利要求1~3任意一项所述的吡维氯铵脂质纳米颗粒在制备抗肿瘤药物中的应用。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述药物用于提高肿瘤细胞硬度和/或增强肿瘤免疫。

10.一种药物组合物，其特征在于，包括权利要求1~3任意一项所述的吡维氯铵脂质纳米颗粒和抗肿瘤免疫抑制剂；所述抗肿瘤免疫抑制剂包括免疫检查点抑制剂和/或过继性t细胞制剂。