一种小麦胚芽提取物脂质体、制备方法及其应用与流程
本发明属于化妆品,具体而言,涉及到一种小麦胚芽提取物脂质体、制备方法及其应用。
背景技术:
1、随着全球人口老龄化进程加速,抗衰老已成为生物医药和化妆品领域的研究热点。衰老是一个涉及多因素、多通路的复杂生物学过程,其核心特征包括基因组不稳定性、表观遗传改变、蛋白质稳态丧失、线粒体功能障碍、细胞衰老以及慢性炎症等。
2、小麦胚芽又称麦芽粉、胚芽,金黄色颗粒状,是小麦生命的根源,也是小麦中营养价值最高的部分。小麦胚芽是从优质小麦经小麦胚芽切割机提炼而成,其中富含多种蛋白质、维生素、矿物质、氨基酸以及亚精胺等。其中,亚精胺作为一种天然多胺化合物,近年来在抗衰老研究领域受到高度关注。
3、亚精胺,又称三盐酸亚精胺,h2n(ch2)3nh(ch2)4nh2,普遍存在于动植物以及微生物细胞中,是由腐胺(丁二胺)和腺苷甲硫氨酸生物合成的。天然提取的亚精胺具有抗衰老,抗癌,保护心血管,改善阿尔茨海默病,改善代谢性疾病,改善肌肉的再生能力,提高记忆能力,降低神经变性,改善血压,降低心血管疾病的发病率、死亡率、具有广泛的抗炎作用以及抗氧化能力。研究表明,其含量最高的植物来源是小麦胚芽,约是其他植物含量的2-10倍,从小麦中提取分离亚精胺是一种较优的选择。相较于化学合成亚精胺,小麦胚芽来源的亚精胺具有天然、安全、来源广泛的优势,且小麦胚芽提取物中还协同含有维生素e、谷胱甘肽、多酚等抗氧化成分,可形成多靶点抗衰老协同效应。除此之外,小麦胚芽是小麦加工过程中产量最大的副产物之一,目前大部分仅作为饲料原料低价售卖,资源附加值低,是提取天然抗衰老成分的理想低成本原料。但是目前,亚精胺的提取多数来源于其他的动物植物。目前已有少量研究探索了小麦胚芽提取物的提取工艺,但存在提取参数未系统优化、富集纯化步骤缺失等问题,所得粗提液中有效成分纯度不足,无法满足下游应用要求。此外,小麦胚芽提取物中的抗衰老活性成分存在稳定性差和生物利用度低的问题,如:亚精胺作为多胺类化合物,其分子结构中含有多个氨基,化学性质活泼,在光照、高温、氧化等条件下易发生降解;维生素e、多酚等活性成分同样对光、热、氧敏感,导致产品货架期短、功效不稳定;亚精胺在口服给药时存在首过效应,且经皮给药时由于皮肤角质层的屏障作用,透皮吸收效率有限。现有的小麦胚芽提取物产品难以实现活性成分的高效递送和靶向释放。
4、检索到的相关专利文献:
5、公开国别中国,公开号cn116271948a,公开日期2023年06月23日,该文献公开了一种富含亚精胺的小麦胚芽提取物的制备方法,该方法利用大孔吸附树脂结合硅胶柱层析技术实现了从小麦胚芽制备富含亚精胺的小麦胚芽提取物,具体为:(1)取小麦胚芽原料,加入乙醇进行热回流提取多次,收集合并提取液,过滤,将滤液浓缩至浸膏状,得到浸膏;(2)向所述浸膏中加入乙醇,加热搅拌溶解至澄清,冷却过夜,抽滤,收集浸膏滤液;(3)将所述浸膏滤液用大孔吸附树脂进行柱层析,并用乙醇进行洗脱,在气相监控下收集亚精胺类组分洗脱液;(4)将所述亚精胺类组分洗脱液浓缩至干,得到固体,加入乙醇进行加热搅拌溶解至澄清,冷却过夜,进行抽滤处理,得到固体滤液;(5)将所述固体滤液用硅胶进行柱层析,并用乙酸乙酯正己烷溶液进行洗脱,在气相监控下得到高纯度亚精胺类组分洗脱液;(6)将所述高纯度亚精胺类组分洗脱液进行浓缩,减压干燥,得到小麦胚芽提取物。该方法加工过程简单,制备时间短,提取率高,可有效避免热敏性成分受热降解,能够获得亚精胺含量较高的小麦胚芽提取物。
6、公开国别中国,公开号cn122140628a,公开日期2026年06月05日,该文献公开了一种提高小麦肽稳定性和生物利用度的方法,具体为:以l-α-磷脂酰乙醇胺和胆固醇氯甲酸酯为原料,优化条件为pe与chol质量比1:5、包肽量30%,经溶解、注入、超声、旋转蒸发制得包肽脂质体。该脂质体粒径235.4±1.18nm,pdi为0.20±0.02,包封率95.16%、负载率67.55%。
7、前述文献代表的现有技术至少存在以下未解决的技术问题或缺陷:
8、1.cn116271948a中制备的含亚精胺的小麦胚芽提取物生物利用度较差、储存稳定性、抗衰老和抗氧化效果较差。
9、2.cn122140628a中制备的含小麦肽的脂质体储存稳定性、释放率效果差、抗老效果较差。
10、本发明在解决上述问题或克服上述缺陷时,曾遇到以下困难和障碍:
11、小麦胚芽提取物成分复杂,目标活性成分的提取、富集及纯化条件较难确定;同时,提取物与脂质体进行复合时,脂质组成比例、提取物与空白脂质体的比例、孵育温度及时间等参数均会影响脂质体的包载效果及稳定性。
技术实现思路
1、本发明的目的在于提供:
2、一种小麦胚芽提取物脂质体、制备方法及其应用,及其相关技术,以解决现有小麦胚芽提取物的提取工艺提取具有抗衰老物质纯度不够、稳定性差和生物利用度低等技术问题或其组合。
3、术语说明:
4、除非另有定义,否则本文所有科技术语具有的涵义与权利要求主题所属领域技术人员通常理解的涵义相同。除非另有说明,本文全文引用的所有专利、专利发明、公开材料通过引用方式整体并入本文。如果本文对术语有多个定义,以本章的定义为准。
5、应理解,上述简述和下文的详述为示例性且仅用于解释,而不对本发明的主题作任何限制。在本发明中,除非另有具体说明,否则使用单数时也包括复数。还应注意,除非另有说明,否则所用“或”、“或者”表示“和/或”。此外,所用术语“包括”以及其它形式,例如“包含”、“含”和“含有”并非限制性。
6、除非提出具体定义,本文中使用的各类市售产品的使用,均采用标准技术。例如,可利用厂商对试剂盒的使用说明,或者按照本领域公知的方式或本发明的说明来进行实施。通常可根据本说明书中引用和讨论的多个概要性和较具体的文献中的描述,按照本领域熟知的常规方法实施上述技术和方法。
7、术语“任选/任意”或“任选地/任意地”是指随后描述的事件或情况可能发生或可能不发生,该描述包括发生所述事件或情况和不发生所述事件或情况。
8、本文所用的术语“超声”,指:利用频率高于20 khz的声波在液体介质中产生的空化效应、机械振动和热效应,对物料进行分散、乳化、破碎或促进化学反应的过程,本研究中用于辅助脂质体混悬液的制备和粒径控制。
9、本文所用的术语“d113阳离子交换树脂”,指:一种具有大孔结构的弱酸性丙烯酸系阳离子交换树脂,其功能基团为羧基(—cooh),对金属阳离子具有吸附交换能力,本研究中用于去除或置换体系中的特定金属离子。
10、本文所用的术语“na型”,指:阳离子交换树脂或其它离子交换材料上的活性位点所携带的反离子为钠离子(na+)的状态,本研究中特指d113树脂经碱化和钠盐处理后转为钠离子饱和形式,用于后续离子交换操作。
11、本文所用的术语“ab-8大孔吸附树脂”,指:一种非极性的苯乙烯型大孔吸附树脂,具有较大的比表面积和孔径,适用于吸附富集中等极性的有机小分子,本研究中用于从粗提物中吸附纯化亚精胺等活性成分。
12、本文所用的术语“亚精胺”,指:一种天然存在的多胺类小分子化合物,化学名为n-(3-氨基丙基)-1,4-丁二胺,广泛存在于生物体内,参与细胞增殖、自噬和抗氧化等生理过程,本研究将其作为模型药物或活性物质进行包载和递送。
13、本文所用的术语“湿法装柱”,指:将色谱柱或层析柱垂直固定后,先用初始流动相或溶剂充满柱体,再将吸附剂(如树脂或凝胶)以浆状形式缓慢倒入柱中,同时保持柱底流出,依靠重力或加压使吸附剂均匀沉降,避免气泡和裂隙的装柱方法。
14、本文所用的术语“富集”,指:通过吸附、萃取、沉淀、膜分离或色谱等手段,将目标成分从大量样品中分离并提高其在总物料中的相对含量或浓度的过程,本研究中特指利用ab-8树脂对亚精胺进行选择性吸附和洗脱浓缩。
15、本文所用的术语“恒温磁力搅拌”,指:在设定恒定温度条件下,利用磁力搅拌器驱动搅拌子旋转,对反应容器内的液体物料进行持续均匀搅拌的操作,本研究中用于脂质体膜水合、药物溶解及反应体系温度控制。
16、本文所用的术语“透析”,指:利用半透膜的选择性透过性,使小分子溶质和溶剂在浓度梯度驱动下跨膜扩散,而大分子或胶体颗粒被截留,从而实现脱盐、除杂或更换外相溶剂的分离纯化方法,本研究中用于去除未包封的游离药物或调节脂质体外相溶液。
17、本文所用的术语“截留分子量”,指:透析膜或超滤膜所能保留(截留)的大分子的近似最小相对分子质量,通常定义为膜对90%以上某一特定分子量溶质具有阻留能力时的分子量值,本研究中用以表征透析袋的孔径规格。
18、本文所用的术语“空白脂质体”,指:不含任何包载药物或活性成分的脂质体,其磷脂双分子层囊泡结构完整,组成与载药脂质体相同但未负载目标物质,本研究中用作对照,以排除脂质体辅料本身对实验结果的影响。
19、本文所用的术语“孵育”,指:在设定的温度、湿度和时间条件下,将样品(如细胞、脂质体、组织或反应体系)置于恒温培养箱或水浴中静置或轻微振荡,使体系充分平衡、反应完全或达到特定生物学效应的过程。
20、本文所用的术语“凝胶色谱法”,指:又称体积排阻色谱法,以具有三维网状结构的凝胶颗粒为固定相,依据被分离物质分子大小的不同,大分子因不能进入凝胶孔内而被先洗脱,小分子因进入孔内路径增长而后洗脱,从而实现分离的方法,本研究中用于测定脂质体的粒径分布或分离游离药物。
21、本文所用的术语“粒径”,指:分散体系中颗粒(如脂质体、纳米粒)的几何直径,通常用动态光散射法测得的流体力学直径表示,单位为纳米(nm),本研究中用以表征脂质体的大小。
22、本文所用的术语“多分散系数”,指:polydispersity index, pdi,是表征颗粒粒径分布均一程度的无量纲参数,由动态光散射测得的累积量分析得到,其值介于0-1之间,数值越小表示粒径分布越窄、体系越均一,本研究中用于评价脂质体的质量均一性。
23、本文所用的术语“透射电子显微镜”,指:tem,是一种利用高能电子束穿透超薄样品,经电磁透镜放大成像,观察样品内部超微结构的显微技术,本研究中用于直接观测脂质体的形态、粒径和囊泡结构。
24、本文所用的术语“体外释放行为”,指:在模拟生理条件(如特定温度、ph和离子强度)的体外环境中,考察包载于脂质体或其他载体中的药物或活性成分从载体中释放至释放介质中的动力学过程,本研究中用以评价亚精胺脂质体的缓释特性。
25、本文所用的术语“释放率”,指:在特定时间点,从载体中释放到外部介质中的药物累积量占载体中总包载药物量的百分比,通常以质量比或物质的量比表示,本研究中用于绘制释放曲线并比较不同制剂的释放差异。
26、本文所用的术语“快速突释效应”,指:在药物释放初期(通常前1~2小时内),药物从载体中突然大量释放、释放速率远高于后续平稳释放阶段的现象,本研究中用于评价脂质体是否具有良好的缓释屏障性能。
27、本文所用的术语“细胞生物相容性”,指:材料或制剂与活细胞接触后,不引起明显的细胞毒性、炎症反应或细胞功能抑制,且能支持细胞正常生长、增殖和代谢的生物学特性,本研究中通过mtt法评价亚精胺脂质体的安全性。
28、本文所用的术语“mtt法”,指:一种基于四唑盐(3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐,mtt)被活细胞线粒体脱氢酶还原生成不溶性紫色甲臜结晶,用有机溶剂溶解后通过吸光度值定量反映活细胞数量的比色分析方法,本研究中用于检测细胞存活率和细胞毒性。
29、本文所用的术语“细胞摄取行为”,指:靶细胞对纳米载体或药物分子的内吞、吸收和胞内分布情况,包括摄取量、摄取速率及摄取途径(如网格蛋白介导、小窝蛋白介导等),本研究中用以评价亚精胺脂质体能否有效进入靶细胞。
30、本文所用的术语“胞内递送”,指:将外源性药物、核酸或活性分子通过载体系统跨越细胞膜并释放至细胞质、细胞核或其他特定细胞器内,使其发挥预期生物学功能的过程,本研究中特指脂质体将亚精胺有效运送到细胞内部。
31、本文所用的术语“β-半乳糖苷酶(sa-β-gal)活性染色”,指:一种利用衰老细胞中高表达的溶酶体β-半乳糖苷酶在ph 6.0条件下催化底物x-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-d-半乳糖苷)水解生成蓝色产物的细胞化学染色方法,本研究中用于检测细胞衰老程度。
32、本文所用的术语“钙黄绿素(calcein-am)/碘化丙啶(pi)双染法”,指:一种同时使用活细胞荧光探针calcein-am(可被细胞内酯酶水解产生绿色荧光,标记活细胞)和死细胞核酸染料pi(仅能穿透受损细胞膜产生红色荧光,标记死细胞)的荧光染色方法,本研究中用于区分和定量检测活细胞与死细胞。
33、本文所用的术语“ros”,指:reactive oxygen species,活性氧,包括超氧阴离子(o2-)、过氧化氢(h2o2)、羟基自由基(-oh)和单线态氧(¹o2)等含氧的高反应活性分子,本研究中作为氧化应激的重要指标进行检测。
34、本文所用的术语“ros清除能力”,指:样品或制剂清除或中和活性氧自由基的能力,通常通过化学发光、荧光探针(如dcfh-da)或比色法测定其抗氧化活性,本研究中用以评价亚精胺及其脂质体的抗氧化效果。
35、本文所用的术语“促细胞迁移能力”,指:在体外划痕实验或transwell实验中,细胞在受到药物、因子或材料刺激后,向损伤区域或下室方向移动、覆盖缺损面积的能力,本研究中用以评价亚精胺对创伤愈合或组织修复的促进作用。
36、本文所用的术语“线虫寿命”,指:在标准培养条件下,模式生物秀丽隐杆线虫(caenorhabditis elegans)从孵化至死亡所经历的天数,本研究中通过生存曲线统计平均寿命和最大寿命,用以评价亚精胺脂质体的抗衰老效果。
37、本文所用的术语“脂褐素”,指:一种由脂质和蛋白质氧化交联形成的自发荧光性不溶性老年色素颗粒,随年龄增长在细胞(特别是神经细胞和心肌细胞)中逐渐积累,本研究中通过荧光显微镜检测线虫体内脂褐素水平,作为衡量衰老程度的指标之一。
38、第一方面,本发明提供了:一种小麦胚芽提取物脂质体的制备方法,包括如下步骤:
39、(1)小麦胚芽提取物的制备:
40、a.小麦胚芽粗提液制备:取小麦胚芽粉加水、调节ph进行预浸提、超声提取,超声结束后收集提取液、离心,取上清重复进行超声提取,合并上清液,得小麦胚芽粗提液;
41、b.小麦胚芽粗提液预处理:将小麦胚芽粗提液调节ph后离心,收集上清液;重复离心,合并上清液、过滤后,得上柱样品;
42、c.将树脂a浸泡后,再用hcl溶液浸泡后再洗涤至中性,随后用naoh溶液浸泡后再冲洗至中性,得处理后树脂a;
43、d.将树脂b经预处理后、装柱,取步骤b制备的上柱样品上柱,收集流出液;
44、e.富集:
45、取步骤c的处理后树脂a装柱采用缓冲溶液稳定后通入步骤d的流出液,用缓冲溶液冲洗、洗脱,收集洗脱液,经真空冷冻干燥,得小麦胚芽提取物;
46、(2)空白脂质体的制备:
47、将蛋黄卵磷脂、胆固醇和乙醇混合再加入硫酸铵溶液搅拌,冷却、超声、过滤,取滤液进行透析,得空白脂质体;
48、(3)将步骤e制备的小麦胚芽提取物加入步骤(2)制备的空白脂质体孵育载药,得小麦胚芽提取物脂质体悬液;
49、(4)取sephadex g-50凝胶溶胀后装柱,平衡后将小麦胚芽提取物脂质体悬液上样至凝胶柱表面、洗脱、纯化,即得小麦胚芽提取物脂质体。
50、优选地,步骤a所述的小麦胚芽粉和水的质量体积比选自1-10g:30-150ml之间的任意值或范围,具体可选自:1g:30ml、1g:150ml、5g:50ml、10g:30ml、10g:150ml或其二者之间范围。
51、再优选地,步骤a所述的小麦胚芽粉和水的质量体积比选自5-10g:50-150ml之间的任意值或范围,具体可选自:5g:50ml、5:150ml、10g:30ml、10g:150ml或其二者之间范围。
52、进一步优选地,步骤a所述的小麦胚芽粉和水的质量体积比为5g:10ml。
53、优选地,步骤a所述的水为去离子水。
54、优选地,步骤a所述的ph的调节剂为hcl溶液。
55、优选地,所述的hcl溶液的浓度选自0.5-2.0mol/l之间的任意值或范围,具体可选自:0.5mol/l、0.6mol/l、0.7mol/l、0.8mol/l、0.9mol/l、1.0mol/l、1.1mol/l、1.2mol/l、1.3mol/l、1.4mol/l、1.5mol/l、1.6mol/l、1.7mol/l、1.8mol/l、1.9mol/l、2.0mol/l或其二者之间范围。
56、进一步优选地,所述的hcl溶液的浓度为1.0mol/l。
57、优选地,步骤a所述的ph选自2-6之间的任意值或范围,具体可选自:2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6或其二者之间范围。
58、进一步优选地,步骤a所述的ph为2。
59、优选地,步骤a所述的预浸提的温度选自30-70℃之间的任意值或范围,具体可选自:30℃、40℃、45℃、50℃、55℃、60℃、65℃、70℃或其二者之间范围。
60、进一步优选地,步骤a所述的预浸提的温度为50℃。
61、优选地,步骤a所述的预浸提的时间选自1-20min之间的任意值或范围,具体可选自:1min、2min、3min、4min、5min、6min、7min、8min、9min、10min、11min、12min、13min、14min、15min、16min、17min、18min、19min、20min或其二者之间范围。
62、进一步优选地,步骤a所述的预浸提的时间为10min。
63、优选地,步骤a所述的超声的脉冲程序为1.5开/1.5s关。
64、优选地,步骤a所述的超声的功率选自220-380w之间的任意值或范围,具体可选自:220w、250w、260w、280w、300w、310w、320w、330w、340w、380w或其二者之间范围。
65、进一步优选地,步骤a所述的超声的功率为300w。
66、优选地,步骤a所述的超声的时间选自30-75min之间的任意值或范围,具体可选自:30min、40min、45min、50min、60min、65min、75min或其二者之间范围。
67、进一步优选地,步骤a所述的超声的时间为45min。
68、优选地,步骤a所述的离心的转速选自8000-15000rpm之间的任意值或范围,具体可选自:8000rpm、9000rpm、10000rpm、11000rpm、12000rpm、13000rpm、14000rpm、15000rpm或其二者之间范围。
69、进一步优选地,步骤a所述的离心的转速为12000rpm。
70、优选地,步骤a所述的离心的时间选自15-60min之间的任意值或范围,具体可选自:15min、20min、25min、30min、40min、50min、60min或其二者之间范围。
71、进一步优选地,步骤a所述的离心的转速为30min。
72、优选地,步骤b所述的ph的调节剂为hcl溶液。
73、优选地,所述的hcl溶液的浓度选自0.1-2mol/l之间的任意值或范围,具体可选自:0.1mol/l、0.2mol/l、0.5mol/l、0.6mol/l、0.8mol/l、1mol/l、1.5mol/l、2mol/l或其二者之间范围。
74、进一步优选地,所述的hcl溶液的浓度为1mol/l。
75、优选地,步骤b所述的调节ph选自3-6之间的任意值或范围,具体可选自:3、3.5、4、4.5、5、5.5、6或其二者之间范围。
76、进一步优选地,步骤b所述的调节ph为4.5。
77、优选地,步骤b所述的离心的温度选自2-8℃之间的任意值或范围,具体可选自:2℃、3℃、4℃、5℃、6℃、7℃、8℃或其二者之间范围。
78、进一步优选地,步骤b所述的离心的温度为4℃。
79、优选地,步骤b所述的离心的转速选自8000-15000rpm之间的任意值或范围,具体可选自:8000rpm、9000rpm、10000rpm、11000rpm、12000rpm、13000rpm、14000rpm、15000rpm或其二者之间范围。
80、进一步优选地,步骤b所述的离心的转速为12000rpm。
81、优选地,步骤b所述的离心的时间选自20-50min之间的任意值或范围,具体可选自:20min、25min、30min、35min、40min、45min、50min或其二者之间范围。
82、进一步优选地,步骤b所述的离心的时间为30min。
83、优选地,步骤b所述的过滤的滤膜孔隙选自0.22-1μm之间的任意值或范围,具体可选自:0.22μm、0.45μm、0.65μm、0.8μm、0.9μm、1μm或其二者之间范围。
84、进一步优选地,步骤b所述的过滤的滤膜孔隙为0.45μm。
85、优选地,步骤b所述的上柱样品的保存温度选自2-8℃之间的任意值或范围,具体可选自:2℃、3℃、4℃、5℃、6℃、7℃、8℃或其二者之间范围。
86、进一步优选地,步骤b所述的上柱样品的保存温度为4℃。
87、优选地,步骤c所述的树脂a浸泡具体为:浸入水中浸泡去清除其中杂质及漂浮的树脂碎末。
88、优选地,所述的水为去离子水。
89、优选地,步骤c所述的树脂a为d113阳离子交换树脂。
90、优选地,步骤c所述的hcl溶液的浓度选自0.1-2mol/l之间的任意值或范围,具体可选自:0.1mol/l、0.3mol/l、0.5mol/l、0.7mol/l、0.9mol/l、1mol/l、1.3mol/l、1.4mol/l、1.5mol/l、1.8mol/l、2mol/l或其二者之间范围。
91、再优选地,步骤c所述的hcl溶液的浓度选自1-1.5mol/l之间的任意值或-围,具体可选自:1mol/l、1.3mol/l、1.4mol/l、1.5mol/l或其二者之间范围。
92、进一步优选地,步骤c所述的hcl溶液的浓度为1mol/l。
93、优选地,步骤c所述的hcl溶液的浸泡时间选自2-8h之间的任意值或范围,具体可选自:2h、3h、4h、5h、6h、7h、8h或其二者之间范围。
94、进一步优选地,步骤c所述的hcl溶液的浸泡时间为4h。
95、优选地,步骤c所述的naoh溶液的浓度选自0.1-2mol/l之间的任意值或范围,具体可选自:0.1mol/l、0.3mol/l、0.5mol/l、0.7mol/l、0.9mol/l、1mol/l、1.3mol/l、1.4mol/l、1.5mol/l、1.8mol/l、2mol/l或其二者之间范围。
96、再优选地,步骤c所述的naoh溶液的浓度选自1-1.5mol/l之间的任意值或范围,具体可选自:1mol/l、1.3mol/l、1.4mol/l、1.5mol/l或其二者之间范围。
97、进一步优选地,步骤c所述的naoh溶液的浓度为1mol/l。
98、优选地,步骤c所述的naoh溶液的浸泡时间选自2-8h之间的任意值或范围,具体可选自:2h、3h、4h、5h、6h、7h、8h或其二者之间范围。
99、进一步优选地,步骤c所述的naoh溶液的浸泡时间为4h。
100、优选地,步骤c所述洗涤和冲洗均为用去离子水洗至中性。
101、优选地,所述的步骤d所述的上柱样品的上柱、预处理过程均依靠自然重力控制流速,无额外加压操作。
102、优选地,步骤d所述的树脂b为ab-8大孔吸附树脂。
103、优选地,步骤d所述的预处理为:使用乙醇充分浸泡树脂b去除其中残留物质,用去离子水冲洗至无白色浑浊,随后用hcl溶液浸泡去离子水洗至中性,接着再用naoh溶液浸泡,最后用去离子水冲洗至流出液ph为中性,得预处理后的树脂b。
104、优选地,所述的乙醇为无水乙醇。
105、优选地,所述的水为去离子水。
106、优选地,所述的冲洗均为冲洗至中性。
107、优选地,所述的hcl溶液的浓度选自0.1-2mol/l之间的任意值或范围,具体可选自:0.1mol/l、0.3mol/l、0.5mol/l、0.7mol/l、0.9mol/l、1mol/l、1.3mol/l、1.4mol/l、1.5mol/l、1.8mol/l、2mol/l或其二者之间范围。
108、优选地,所述的hcl溶液的浓度选自1-1.5mol/l之间的任意值或范围,具体可选自:1mol/l、1.3mol/l、1.4mol/l、1.5mol/l或其二者之间范围。
109、进一步优选地,所述的hcl溶液的浓度为1mol/l。
110、优选地,所述的hcl溶液的浸泡时间选自2-8h之间的任意值或范围,具体可选自:2h、3h、4h、5h、6h、7h、8h或其二者之间范围。
111、进一步优选地,所述的hcl溶液的浸泡时间为4h。
112、优选地,所述的naoh溶液的浓度选自0.1-2mol/l之间的任意值或范围,具体可选自:0.1mol/l、0.3mol/l、0.5mol/l、0.7mol/l、0.9mol/l、1mol/l、1.3mol/l、1.4mol/l、1.5mol/l、1.8mol/l、2mol/l或其二者之间范围。
113、再优选地,所述的naoh溶液的浓度选自1-1.5mol/l之间的任意值或范围,具体可选自:1mol/l、1.3mol/l、1.4mol/l、1.5mol/l或其二者之间范围。
114、进一步优选地,所述的naoh溶液的浓度为1mol/l。
115、优选地,所述的naoh溶液的浸泡时间选自2-8h之间的任意值或范围,具体可选自:2h、3h、4h、5h、6h、7h、8h或其二者之间范围。
116、进一步优选地,所述的naoh溶液的浸泡时间为4h。
117、优选地,所述的步骤d所述的装柱的方法为湿法装柱。
118、优选地,所述的步骤e所述的处理后树脂a为na型d113弱酸性阳离子交换树脂。
119、优选地,所述的步骤e所述的处理后树脂a的树脂柱内径选自1-2cm之间的任意值或范围,具体可选自:1cm、1.1cm、1.2cm、1.3cm、1.4cm、1.5cm、1.6cm、1.7cm、1.8cm、1.9cm、2cm或其二者之间范围。
120、进一步优选地,所述的步骤e所述的处理后树脂a的树脂柱内径为1.6cm。
121、优选地,所述的步骤e所述的处理后树脂a的树脂柱高度选自10-50cm之间的任意值或范围,具体可选自:10cm、15cm、20cm、25cm、30cm、35cm、40cm、45cm、50cm或其二者之间范围。
122、进一步优选地,所述的步骤e所述的处理后树脂a的树脂柱高度为20cm。
123、优选地,所述的步骤e所述的处理后树脂a的树脂床体积选自10-50ml之间的任意值或范围,具体可选自:10ml、15ml、20ml、25ml、30ml、35ml、40ml、45ml、50ml或其二者之间范围。
124、进一步优选地,所述的步骤e所述的处理后树脂a的树脂床体积为20ml。
125、优选地,所述的步骤e所述的装柱的方法为湿法装柱。
126、优选地,所述的步骤e所述的富集的上样均依靠自然重力控制流速,无额外加压操作。
127、优选地,步骤e所述的富集的过柱速率选自30-90滴/min之间的任意值或范围,具体可选自:30滴/min、40滴/min、50滴/min、60滴/min、70滴/min、80滴/min、90滴/min或其二者之间范围。
128、进一步优选地,步骤e所述的富集的过柱速率为60滴/min。
129、优选地,步骤e所述的缓冲溶液为醋酸-醋酸钠缓冲溶液。
130、优选地,所述的醋酸-醋酸钠缓冲溶液的浓度选自10-30mmol/l之间的任意值或范围,具体可选自:10mmol/l、15mmol/l、20mmol/l、25mmol/l、30mmol/l或其二者之间范围。
131、进一步优选地,所述的醋酸-醋酸钠缓冲溶液的浓度为20mmol/l。
132、优选地,所述的醋酸-醋酸钠缓冲溶液的ph选自5-7之间的任意值或范围,具体可选自:5、5.5、6、6.5、7或其二者之间范围。
133、进一步优选地,所述的醋酸-醋酸钠缓冲溶液的ph为6。
134、优选地,所述的醋酸-醋酸钠缓冲溶液的体积选自20-50ml之间的任意值或范围,具体可选自:20ml、25ml、30ml、35ml、40ml、45ml、50ml或其二者之间范围。
135、进一步优选地,所述的醋酸-醋酸钠缓冲溶液的体积为30ml。
136、优选地,步骤e所述的稳定为流出液ph稳定。
137、优选地,所述的流出液ph稳定的ph选自5-7之间的任意值或范围,具体可选自:5、5.5、6、6.5、7或其二者之间范围。
138、进一步优选地,所述的流出液ph稳定的ph为6。
139、优选地,所述的流出液ph稳定的ph调节剂为hcl溶液。
140、优选地,所述的hcl溶液的浓度选自0.05-0.2mol/l之间的任意值或范围,具体可选自:0.05mol/l、0.08mol/l、0.09mol/l、0.1mol/l、0.12mol/l、0.13mol/l、0.15mol/l、0.18mol/l、0.2mol/l或其二者之间范围。
141、进一步优选地,所述的hcl溶液的浓度为0.1mol/l。
142、优选地,步骤e所述的缓冲溶液冲洗的缓冲溶液体积选自10-30ml之间的任意值或范围,具体可选自:10ml、15ml、20ml、25ml、30ml或其二者之间范围。
143、进一步优选地,步骤e所述的缓冲溶液冲洗的缓冲溶液体积为20ml。
144、优选地,步骤e所述的缓冲溶液冲洗的缓冲溶液浓度选自10-30mmol/l之间的任意值或范围,具体可选自:10mmol/l、15mmol/l、20mmol/l、25mmol/l、30mmol/l或其二者之间范围。
145、进一步优选地,步骤e所述的缓冲溶液冲洗的缓冲溶液浓度为20mmol/l。
146、优选地,步骤e所述的缓冲溶液冲洗的缓冲溶液ph选自5-7之间的任意值或范围,具体可选自:5、5.5、6、6.5、7或其二者之间范围。
147、进一步优选地,步骤e所述的缓冲溶液冲洗的缓冲溶液ph为6。
148、优选地,步骤e所述的洗脱为hcl溶液洗脱。
149、优选地,所述的hcl溶液的浓度选自0.1-2mmol/l之间的任意值或范围,具体可选自:0.1mmol/l、0.5mmol/l、1mmol/l、1.5mmol/l、2mmol/l或其二者之间范围。
150、进一步优选地,所述的hcl溶液的浓度为1mmol/l。
151、优选地,步骤e所述的冷冻干燥的温度选自-40~-10℃之间的任意值或范围,具体可选自:-40℃、-35℃、-30℃、-25℃、-20℃、-15℃、-10℃或其二者之间范围。
152、进一步优选地,步骤e所述的冷冻干燥的温度为-20℃。
153、优选地,步骤e所述的冷冻干燥的时间选自5-20h之间的任意值或范围,具体可选自:5h、6h、7h、8h、9h、10h、11h、12h、13h、14h、15h、16h、17h、18h、19h、20h或其二者之间范围。
154、进一步优选地,步骤e所述的冷冻干燥的时间为12h。
155、优选地,步骤(2)所述的蛋黄卵磷脂、胆固醇和乙醇的质量体积比选自1-8g:1g:0.5-2ml之间的任意值或范围,具体可选自:1g:1g:0.5ml、4g:1g:1ml、8g:1g:2ml或其二者之间范围。
156、进一步优选地,步骤(2)所述的蛋黄卵磷脂、胆固醇和乙醇的质量体积比为4g:1g:1ml。
157、优选地,步骤(2)所述的乙醇为无水乙醇。
158、优选地,步骤(2)所述的硫酸铵溶液的浓度选自100-300mm之间的任意值或范围,具体可选自:100mm、150mm、200mm、250mm、300mm或其二者之间范围。
159、进一步为优选地,步骤(2)所述的硫酸铵溶液的浓度200mm
160、优选地,步骤(2)所述的硫酸铵溶液的温度选自50-80℃之间的任意值或范围,具体可选自:50℃、55℃、60℃、65℃、70℃、75℃、80℃或其二者之间范围。
161、进一步优选地,步骤(2)所述的硫酸铵溶液的温度为60℃。
162、优选地,步骤(2)所述的搅拌的转速选自100-300rpm之间的任意值或范围,具体可选自:100rpm、150rpm、200rpm、230rpm、250rpm、300rpm或其二者之间范围。
163、进一步优选地,步骤(2)所述的搅拌的转速为200rpm。
164、优选地,步骤(2)所述的搅拌的时间选自20-40min之间的任意值或范围,具体可选自:20min、25min、30min、35min、40min或其二者之间范围。
165、优选地,步骤(2)所述的搅拌的时间为30min。
166、优选地,步骤(2)所述的冷却的温度为室温。
167、优选地,步骤(2)述的超声的温度选自2-8℃之间的任意值或范围,具体可选自:2℃、3℃、4℃、5℃、6℃、7℃、8℃或其二者之间范围。
168、进一步优选地,步骤(2)所述的超声的温度为4℃。
169、优选地,步骤(2)所述的超声的时间选自5-20min之间的任意值或范围,具体可选自:5min、6min、8min、9min、10min、11min、12min、13min、14min、15min、16min、17min、18min、19min、20min或其二者之间范围。
170、进一步优选地,步骤(2)所述的超声的时间为10min。
171、优选地,步骤(2)所述的过滤的滤膜孔隙选自0.1-0.45μm之间的任意值或范围,具体可选自:0.1μm、0.22μm、0.25μm、0.3μm、0.35μm、0.4μm、0.45μm或其二者之间范围。
172、进一步优选地,步骤(2)所述的过滤的滤膜孔隙为0.22μm。
173、优选地,步骤(2)所述的透析的截留分子量选自8-14kda之间的任意值或范围,具体可选自:8kda、9kda、10kda、11kda、12kda、13kda、14kda或其二者之间范围。
174、进一步优选地,步骤(2)所述的透析的截留分子量为10kda。
175、优选地,步骤(2)所述的透析的透析液为蔗糖磷酸盐缓冲液(蔗糖pbs缓冲液)。
176、优选地,步骤(2)所述的蔗糖磷酸盐缓冲液的ph选自5.5-7.4之间的任意值或范围,具体可选自:5.5、5.7、5.8、6.0、6.3、6.5、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4或其二者之间范围。
177、进一步优选地,步骤(2)所述的蔗糖磷酸盐缓冲液的ph为7.4。
178、优选地,步骤(2)所述的蔗糖磷酸盐缓冲液的浓度选自5-20mm之间的任意值或范围,具体可选自:5mm、6mm、7mm、8mm、9mm、10mm、11mm、12mm、13mm、14mm、15mm、16mm、17mm、18mm、19mm、20mm或其二者之间范围。
179、进一步优选地,步骤(2)所述的蔗糖磷酸盐缓冲液的浓度为10mm。
180、优选地,步骤(2)所述的蔗糖磷酸盐缓冲液的蔗糖浓度选自5-20%(w/v)之间的任意值或范围,具体可选自:5%(w/v)、6%(w/v)、7%(w/v)、8%(w/v)、9%(w/v)、10%(w/v)、14%(w/v)、16%(w/v)、18%(w/v)、19%(w/v)、20%(w/v)或其二者之间范围。
181、进一步优选地,步骤(2)所述的蔗糖磷酸盐缓冲液的蔗糖浓度为10%(w/v)。
182、优选地,步骤(3)所述的小麦胚芽提取物与空白脂质体质量比选自1:3-7之间的任意值或范围,具体可选自:1:3、1:4、1:5、1:6、1:7或其二者之间范围。
183、进一步优选地,步骤(3)所述的小麦胚芽提取物与空白脂质体质量比为1:5。
184、优选地,步骤(3)所述的空白脂质体的温度选自50-80℃之间的任意值或范围,具体可选自:50℃、55℃、60℃、65℃、70℃、75℃、80℃或其二者之间范围。
185、进一步优选地,步骤(3)所述的空白脂质体的温度为60℃。
186、优选地,步骤(3)所述的所述的孵育的时间选自30-70min之间的任意值或范围,具体可选自:30min、35min、40min、45min、50min、55min、60min、65min、70min或其二者之间范围。
187、进一步优选地,步骤(3)所述的所述的孵育的时间为60min。
188、优选地,步骤(4)的具体操作为:采用凝胶色谱法除去未包封的游离亚精胺,取sephadex g-50凝胶,经蒸馏水充分溶胀后装柱,用步骤(3)的蔗糖pbs缓冲液平衡凝胶柱;将小麦胚芽提取物脂质体悬液小心上样至凝胶柱表面,以步骤(3)的蔗糖pbs缓冲液洗脱,间隔收集流出液,待出现白色混浊组分时开始收集,经高效液相色谱检测后合并含脂质体的流出组分,即得纯化的小麦胚芽提取物脂质体。
189、优选地,步骤(4)的sephadex g-50凝胶添加量选自20g-100g之间的任意值或范围,具体可选自:20g、30g、40g、50g、60g、70g、80g、90g、100g或其二者之间范围。
190、进一步优选地,步骤(4)的sephadex g-50凝胶添加量为50g。
191、基于对本发明的技术问题的进一步解决或同时解决多个技术问题,在本发明第一方面所提供的技术方案中,优选方案包括:
192、第一项优先方案:一种小麦胚芽提取物脂质体的制备方法。该技术方案在解决了技术问题“现有小麦胚芽提取物的提取工艺提取具有抗衰老物质纯度不够”的基础上,进一步解决了技术问题“包载能力、稳定性和生物利用度差”。
193、第二项优先方案:一种小麦胚芽提取物脂质体。该技术方案在解决了技术问题“包载能力、稳定性和生物利用度差”的基础上,进一步解决了技术问题“良好的抗衰老和抗氧化效果差,且无法实现胞内递送”。
194、第二方面,本发明提供了:一种小麦胚芽提取物的方法,包括如下步骤:
195、s1、小麦胚芽粗提液制备:取小麦胚芽粉加水、调节ph进行预浸提、超声提取,超声结束后收集提取液、离心,取上清重复进行超声提取,合并上清液,得小麦胚芽粗提液;
196、s2、小麦胚芽粗提液预处理:将小麦胚芽粗提液调节ph后离心,收集上清液;重复离心,合并上清液、过滤后,得上柱样品;
197、s3、将树脂a浸泡后,再用hcl溶液浸泡后再洗涤至中性,随后用naoh溶液浸泡后再冲洗至中性,得处理后树脂a;
198、s4、将树脂b经预处理后、装柱,取步骤s2制备的上柱样品上柱,收集流出液;
199、s5、富集:取步骤s3的处理后树脂a装柱采用缓冲溶液稳定后通入步骤s4的流出液,用缓冲溶液冲洗、洗脱,收集洗脱液,经真空冷冻干燥,得小麦胚芽提取物。
200、优选地,步骤s1所述的小麦胚芽粉和水的质量体积比选自1-10g:30-150ml之间的任意值或范围,具体可选自:1g:30ml、1g:150ml、5g:50ml、10g:30ml、10g:150ml或其二者之间范围。
201、再优选地,步骤s1所述的小麦胚芽粉和水的质量体积比选自5-10g:50-150ml之间的任意值或范围,具体可选自:5g:50ml、5:150ml、10g:30ml、10g:150ml或其二者之间范围。
202、进一步优选地,步骤s1所述的小麦胚芽粉和水的质量体积比为5g:100ml。
203、优选地,步骤s1所述的水为去离子水。
204、优选地,步骤s1所述的ph的调节剂为hcl溶液。
205、优选地,所述的hcl溶液的浓度选自0.5-2.0mol/l之间的任意值或范围,具体可选自:0.5mol/l、0.6mol/l、0.7mol/l、0.8mol/l、0.9mol/l、1.0mol/l、1.1mol/l、1.2mol/l、1.3mol/l、1.4mol/l、1.5mol/l、1.6mol/l、1.7mol/l、1.8mol/l、1.9mol/l、2.0mol/l或其二者之间范围。
206、优选地,所述的hcl溶液的浓度选自1-1.5mol/l之间的任意值或范围,具体可选自:1.0mol/l、1.1mol/l、1.2mol/l、1.3mol/l、1.4mol/l、1.5mol/l或其二者之间范围。
207、进一步优选地,所述的hcl溶液的浓度为1.0mol/l。
208、优选地,步骤s1所述的ph选自2-6之间的任意值或范围,具体可选自:2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6或其二者之间范围。
209、进一步优选地,步骤s1所述的ph为2。
210、优选地,步骤s1所述的预浸提的温度选自30-70℃之间的任意值或范围,具体可选自:30℃、40℃、45℃、50℃、55℃、60℃、65℃、70℃或其二者之间范围。
211、进一步优选地,步骤s1所述的预浸提的温度为50℃。
212、优选地,步骤s1所述的预浸提的时间选自1-20min之间的任意值或范围,具体可选自:1min、2min、3min、4min、5min、6min、7min、8min、9min、10min、11min、12min、13min、14min、15min、16min、17min、18min、19min、20min或其二者之间范围。
213、进一步优选地,步骤s1所述的预浸提的时间为10min。
214、优选地,步骤s1所述的超声脉冲程序为1.5开/1.5s关。
215、优选地,步骤s1所述的超声的功率选自220-380w之间的任意值或范围,具体可选自:220w、250w、260w、280w、300w、310w、320w、330w、340w、380w或其二者之间范围。
216、进一步优选地,步骤s1所述的超声的功率为300w。
217、优选地,步骤s1所述的超声的时间选自30-75min之间的任意值或范围,具体可选自:30min、40min、45min、50min、60min、65min、75min或其二者之间范围。
218、进一步优选地,步骤s1所述的超声的时间为45min。
219、优选地,步骤s1所述的离心的转速选自8000-15000rpm之间的任意值或范围,具体可选自:8000rpm、9000rpm、10000rpm、11000rpm、12000rpm、13000rpm、14000rpm、15000rpm或其二者之间范围。
220、进一步优选地,步骤s1所述的离心的转速为12000rpm。
221、优选地,步骤s1所述的离心的时间选自15-60min之间的任意值或范围,具体可选自:15min、20min、25min、30min、40min、50min、60min或其二者之间范围。
222、进一步优选地,步骤s1所述的离心的转速为30min。
223、优选地,步骤s2所述的ph的调节剂为hcl溶液。
224、优选地,所述的hcl溶液的浓度选自0.1-2mol/l之间的任意值或范围,具体可选自:0.1mol/l、0.2mol/l、0.5mol/l、0.6mol/l、0.8mol/l、1mol/l、1.5mol/l、2mol/l或其二者之间范围。
225、再优选地,所述的hcl溶液的浓度选自1-1.5mol/l之间的任意值或范围,具体可选自:1mol/l、1.1mol/l、1.2mol/l、1.3mol/l、1.4mol/l、1.5mol/l或其二者之间范围。
226、进一步优选地,所述的hcl溶液的浓度为1mol/l。
227、优选地,步骤s2所述的调节ph选自3-6之间的任意值或范围,具体可选自:3、3.5、4、4.5、5、5.5、6或其二者之间范围。
228、进一步优选地,步骤s2所述的调节ph为4.5。
229、优选地,步骤s2所述的离心的温度选自2-8℃之间的任意值或范围,具体可选自:2℃、3℃、4℃、5℃、6℃、7℃、8℃或其二者之间范围。
230、进一步优选地,步骤s2所述的离心的温度为4℃。
231、优选地,步骤s2所述的离心的转速选自8000-15000rpm之间的任意值或范围,具体可选自:8000rpm、9000rpm、10000rpm、11000rpm、12000rpm、13000rpm、14000rpm、15000rpm或其二者之间范围。
232、进一步优选地,步骤s2所述的离心的转速为12000rpm。
233、优选地,步骤s2所述的离心的时间选自20-50min之间的任意值或范围,具体可选自:20min、25min、30min、35min、40min、45min、50min或其二者之间范围。
234、进一步优选地,步骤s2所述的离心的时间为30min。
235、优选地,步骤s2所述的过滤的滤膜孔隙选自0.22-1μm之间的任意值或范围,具体可选自:0.22μm、0.45μm、0.65μm、0.8μm、0.9μm、1μm或其二者之间范围。
236、进一步优选地,步骤s2所述的过滤的滤膜孔隙为0.45μm。
237、优选地,步骤s2所述的上柱样品的保存温度选自2-8℃之间的任意值或范围,具体可选自:2℃、3℃、4℃、5℃、6℃、7℃、8℃或其二者之间范围。
238、进一步优选地,步骤s2所述的上柱样品的保存温度为4℃。
239、优选地,步骤s3所述的树脂a浸泡具体为:浸入水中浸泡去清除其中杂质及漂浮的树脂碎末。
240、优选地,所述的水为去离子水。
241、优选地,步骤s3所述的树脂a为d113阳离子交换树脂。
242、优选地,步骤s3所述的hcl溶液的浓度选自0.1-2mol/l之间的任意值或范围,具体可选自:0.1mol/l、0.3mol/l、0.5mol/l、0.7mol/l、0.9mol/l、1mol/l、1.3mol/l、1.4mol/l、1.5mol/l、1.8mol/l、2mol/l或其二者之间范围。
243、再优选地,步骤s3所述的hcl溶液的浓度选自1-1.5mol/l之间的任意值或范围,具体可选自:1mol/l、1.3mol/l、1.4mol/l、1.5mol/l或其二者之间范围
244、进一步优选地,步骤c所述的hcl溶液的浓度为1mol/l。
245、优选地,步骤s3所述的hcl溶液的浸泡时间选自2-8h之间的任意值或范围,具体可选自:2h、3h、4h、5h、6h、7h、8h或其二者之间范围。
246、进一步优选地,步骤c所述的hcl溶液的浸泡时间为4h。
247、优选地,步骤s3所述的naoh溶液的浓度选自0.1-2mol/l之间的任意值或范围,具体可选自:0.1mol/l、0.3mol/l、0.5mol/l、0.7mol/l、0.9mol/l、1mol/l、1.3mol/l、1.4mol/l、1.5mol/l、1.8mol/l、2mol/l或其二者之间范围。
248、再优选地,步骤s3所述的naoh溶液的浓度选自1-1.5mol/l之间的任意值或范围,具体可选自:1mol/l、1.3mol/l、1.4mol/l、1.5mol/l或其二者之间范围。
249、进一步优选地,步骤s3所述的naoh溶液的浓度为1mol/l。
250、优选地,步骤s3所述的naoh溶液的浸泡时间选自2-8h之间的任意值或范围,具体可选自:2h、3h、4h、5h、6h、7h、8h或其二者之间范围。
251、进一步优选地,步骤s3所述的naoh溶液的浸泡时间为4h。
252、优选地,步骤s3所述洗涤和冲洗均为用去离子水洗至中性。
253、优选地,所述的步骤s4所述的上柱样品的上柱、预处理过程均依靠自然重力控制流速,无额外加压操作。
254、优选地,步骤s4所述的树脂b为ab-8大孔吸附树脂。
255、优选地,步骤s4所述的预处理为:使用乙醇充分浸泡树脂b去除其中残留物质,用去离子水冲洗至无白色浑浊,随后用hcl溶液浸泡去离子水洗至中性,接着再用naoh溶液浸泡,最后用去离子水冲洗至流出液ph为中性,得预处理后的树脂b。
256、优选地,所述的乙醇为无水乙醇。
257、优选地,所述的水为去离子水。
258、优选地,所述的冲洗均为冲洗至中性。
259、优选地,所述的hcl溶液的浓度选自0.1-2mol/l之间的任意值或范围,具体可选自:0.1mol/l、0.3mol/l、0.5mol/l、0.7mol/l、0.9mol/l、1mol/l、1.3mol/l、1.4mol/l、1.5mol/l、1.8mol/l、2mol/l或其二者之间范围。
260、再优选地,所述的hcl溶液的浓度选自1-1.5mol/l之间的任意值或范围,具体可选自:1mol/l、1.3mol/l、1.4mol/l、1.5mol/l:或其二者之间范围。
261、进一步优选地,所述的hcl溶液的浓度为1mol/l。
262、优选地,所述的hcl溶液的浸泡时间选自2-8h之间的任意值或范围,具体可选自:2h、3h、4h、5h、6h、7h、8h或其二者之间范围。
263、进一步优选地,所述的hcl溶液的浸泡时间为4h。
264、优选地,所述的naoh溶液的浓度选自0.1-2mol/l之间的任意值或范围,具体可选自:0.1mol/l、0.3mol/l、0.5mol/l、0.7mol/l、0.9mol/l、1mol/l、1.3mol/l、1.4mol/l、1.5mol/l、1.8mol/l、2mol/l或其二者之间范围。
265、再优选地,所述的naoh溶液的浓度选自1-1.5mol/l之间的任意值或范围,具体可选自:1mol/l、1.3mol/l、1.4mol/l、1.5mol/l或其二者之间范围。
266、进一步优选地,所述的naoh溶液的浓度为1mol/l。
267、优选地,所述的naoh溶液的浸泡时间选自2-8h之间的任意值或范围,具体可选自:2h、3h、4h、5h、6h、7h、8h或其二者之间范围。
268、进一步优选地,所述的naoh溶液的浸泡时间为4h。
269、优选地,所述的步骤s4所述的装柱的方法为湿法装柱。
270、优选地,所述的步骤s5所述的处理后树脂a为na型d113弱酸性阳离子交换树脂。
271、优选地,所述的步骤s5所述的处理后树脂a的树脂柱内径选自1-2cm之间的任意值或范围,具体可选自:1cm、1.1cm、1.2cm、1.3cm、1.4cm、1.5cm、1.6cm、1.7cm、1.8cm、1.9cm、2cm或其二者之间范围。
272、进一步优选地,所述的步骤s5所述的处理后树脂a的树脂柱内径为1.6cm。
273、优选地,所述的步骤s5所述的处理后树脂a的树脂柱高度选自10-50cm之间的任意值或范围,具体可选自:10cm、15cm、20cm、25cm、30cm、35cm、40cm、45cm、50cm或其二者之间范围。
274、进一步优选地,所述的步骤s5所述的处理后树脂a的树脂柱高度为20cm。
275、优选地,所述的步骤s5所述的处理后树脂a的树脂床体积选自10-50ml之间的任意值或范围,具体可选自:10ml、15ml、20ml、25ml、30ml、35ml、40ml、45ml、50ml或其二者之间范围。
276、进一步优选地,所述的步骤s5所述的处理后树脂a的树脂床体积为20ml。
277、优选地,所述的步骤s5所述的装柱的方法为湿法装柱。
278、优选地,所述的步骤s5所述的富集的上样均依靠自然重力控制流速,无额外加压操作。
279、优选地,步骤s5所述的富集的过柱速率选自30-90滴/min之间的任意值或范围,具体可选自:30滴/min、40滴/min、50滴/min、60滴/min、70滴/min、80滴/min、90滴/min或其二者之间范围。
280、进一步优选地,步骤s5所述的富集的过柱速率为60滴/min。
281、优选地,步骤s5所述的缓冲溶液为醋酸-醋酸钠缓冲溶液。
282、优选地,所述的醋酸-醋酸钠缓冲溶液的浓度选自10-30mmol/l之间的任意值或范围,具体可选自:10mmol/l、15mmol/l、20mmol/l、25mmol/l、30mmol/l或其二者之间范围。
283、进一步优选地,所述的醋酸-醋酸钠缓冲溶液的浓度为20mmol/l。
284、优选地,所述的醋酸-醋酸钠缓冲溶液的ph选自5-7之间的任意值或范围,具体可选自:5、5.5、6、6.5、7或其二者之间范围。
285、进一步优选地,所述的醋酸-醋酸钠缓冲溶液的ph为6。
286、优选地,所述的醋酸-醋酸钠缓冲溶液的体积选自20-50ml之间的任意值或范围,具体可选自:20ml、25ml、30ml、35ml、40ml、45ml、50ml或其二者之间范围。
287、进一步优选地,所述的醋酸-醋酸钠缓冲溶液的体积为30ml。
288、优选地,步骤s5所述的稳定为流出液ph稳定。
289、优选地,所述的流出液ph稳定的ph选自5-7之间的任意值或范围,具体可选自:5、5.5、6、6.5、7或其二者之间范围。
290、进一步优选地,所述的流出液ph稳定的ph为6。
291、优选地,所述的流出液ph稳定的ph调节剂为hcl溶液。
292、优选地,所述的hcl溶液的浓度选自0.05-0.2mol/l之间的任意值或范围,具体可选自:0.05mol/l、0.08mol/l、0.09mol/l、0.1mol/l、0.12mol/l、0.13mol/l、0.15mol/l、0.18mol/l、0.2mol/l或其二者之间范围。
293、进一步优选地,所述的hcl溶液的浓度为0.1mol/l。
294、优选地,步骤s5所述的缓冲溶液冲洗的缓冲溶液体积选自10-30ml之间的任意值或范围,具体可选自:10ml、15ml、20ml、25ml、30ml或其二者之间范围。
295、进一步优选地,步骤s5所述的缓冲溶液冲洗的缓冲溶液体积为20ml。
296、优选地,步骤s5所述的缓冲溶液冲洗的缓冲溶液浓度选自10-30mmol/l之间的任意值或范围,具体可选自:10mmol/l、15mmol/l、20mmol/l、25mmol/l、30mmol/l或其二者之间范围。
297、进一步优选地,步骤s5所述的缓冲溶液冲洗的缓冲溶液浓度为20mmol/l。
298、优选地,步骤s5所述的缓冲溶液冲洗的缓冲溶液ph选自5-7之间的任意值或范围,具体可选自:5、5.5、6、6.5、7或其二者之间范围。
299、进一步优选地,步骤s5所述的缓冲溶液冲洗的缓冲溶液ph为6。
300、优选地,步骤s5所述的洗脱为hcl溶液洗脱。
301、优选地,所述的hcl溶液的浓度选自0.1-2mmol/l之间的任意值或范围,具体可选自:0.1mmol/l、0.5mmol/l、1mmol/l、1.5mmol/l、2mmol/l或其二者之间范围。
302、进一步优选地,所述的hcl溶液的浓度为1mmol/l。
303、优选地,步骤s5所述的冷冻干燥的温度选自-40~-10℃之间的任意值或范围,具体可选自:-40℃、-35℃、-30℃、-25℃、-20℃、-15℃、-10℃或其二者之间范围。
304、进一步优选地,步骤s5所述的冷冻干燥的温度为-20℃。
305、优选地,步骤s5所述的冷冻干燥的时间选自5-20h之间的任意值或范围,具体可选自:5h、6h、7h、8h、9h、10h、11h、12h、13h、14h、15h、16h、17h、18h、19h、20h或其二者之间范围。
306、进一步优选地,步骤s5所述的冷冻干燥的时间为12h。
307、第三方面,本发明提供了:一种上述的制备方法制备的小麦胚芽提取物脂质体。
308、第四方面,本发明提供了:上述的制备方法制备的小麦胚芽提取物脂质体在制备抗衰老化妆品中的应用。
309、本发明至少具有如下有益效果:
310、1、本发明制备的脂质体可有效保护小麦胚芽提取物中亚精胺、维生素e这类热敏性和光敏性活性成分包裹于磷脂双分子层内部或嵌入层间,有效隔绝光、氧、酶等外界因素,显著提高活性成分的化学稳定性、经皮渗透率和生物利用度。
311、2、本发明制备的脂质体能够促进活性成分的缓释和控释,延长作用时间,提高局部药物浓度,是实现多组分协同抗衰老(自噬诱导+抗氧化+抗炎)的高效递送系统。
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