一类并环化合物及其制备和应用的制作方法

1.本发明涉及医药技术领域，具体而言，涉及作为hpk1抑制剂的一类化合物以及所述化合物的制备方法及用途。


背景技术：

2.造血祖细胞激酶1(hematopoietic progenitor kinase 1，hpk1,也称为map4k1)是造血特异性蛋白丝氨酸-苏氨酸激酶，属于哺乳动物ste20相关蛋白激酶map4k家族的成员(kiefer,f.et al.embo j.15:7013
–
7025)。据报道，包括map4k1/hpk1、map4k2/gck、map4k3/glk、map4k4/hgk、map4k5/khs和map4k6/mink在内的map4k通过激活map3k-map2k级联来诱导jnk激活(huai-chia chuang,.et al.adv immunol.2016；129:277)。
3.hpk1的表达仅限于造血区室(例如t细胞、b细胞、树突状细胞)(hu et al.,1996；kiefer et al.,1996)，由n端激酶结构域、中间sh3结合的脯氨酸丰富基序和c端citron同源结构域组成。hpk1中间富含脯氨酸的基序介导hpk1与许多含sh3域的蛋白质的相互作用。通过y381磷酸化激活hpk1可以结合和磷酸化t和b细胞信号转导的关键衔接子(分别为slp76和blnk)。
4.hpk1通过分别诱导slp-76和blnk的磷酸化/泛素化来抑制t细胞受体(tcr)信号和b细胞受体信号，是免疫细胞激活、抗原呈递和t细胞对免疫抑制因子反应的负调节剂。
5.tcr激活后，胞质hpk1被募集到质膜，从而通过其在y381，s171和t165残基处的磷酸化来完全激活激酶，活性hpk1使s376上的衔接蛋白slp76磷酸化，为负调控子14-3-3产生一个停靠位点，最终破环tcr信号复合物(lat-gadsslp76)的稳定，并阻止下游的促分裂原激活蛋白(map)激酶信号转导的t细胞活化和增殖的作用(lasserre et al.,2011；shui et al.,2007)。
6.除tcr信号传导外，hpk1还以pka依赖性方式通过前列腺素e2(pge2)受体对t细胞信号传导负调节(sawasdikosol等，2003，2007；alzabin等，2010)。hpk1也可能通过与slp76 sh2结构域结合的蛋白(adap)直接竞争，在调节t细胞上白细胞功能相关抗原-1(lfa-1)整合素激活方面发挥作用(patzak et al.,2010)。
7.hpk1激酶活性限制了tcr信号传导和效应细胞因子的分泌，hpk1激酶功能的丧失增强了t细胞受体信号传导和细胞因子分泌。响应慢性淋巴细胞性脉络膜脑膜炎病毒(lcmv)感染或肿瘤攻击，hpk1.kd小鼠的病毒清除率和肿瘤生长抑制作用增强，并伴有效应cd8 t细胞功能的增强。
8.hpk1抑制剂在临床前的研究中已显示具有免疫激活作用，包括减轻t细胞受体(tcr)的抑制作用，破坏细胞因子的异常表达，通过效应细胞(即调节性t细胞/treg)改变肿瘤免疫抑制环境。因此，除了单药治疗的潜力外，与免疫药物的联用有望提高免疫治疗的应答率和有效率。
9.目前临床在研的分子有treadwell的cfi-402411、百济神州的bgb-15025、nimbus公司的ndi-101150以及珠海宇繁的prj1-3024。


技术实现要素：

10.本发明的目的在于提供一种作为hpk1抑制剂的具有并环类结构的化合物、其化合物的制备方法及其通过抑制hpk1生物活性产生的免疫细胞活化作用对相关疾病治疗方面的用途。
11.本发明的第一方面，提供了一种如下式(i)所示的化合物，或其互变异构体、立体异构体或其药学上可接受的盐，其具有如下结构
[0012][0013]
其中，r选自h、卤素和-l
1-cy1-(r1)m，
[0014]
x1、x2分别独立选自：键、-o-、-co-、-co
2-、-s-、-so-、-so
2-、-nr
a-、-(crara)
1-6-、
[0015]-con(ra)-、-n(ra)co-、-nracon(ra)-、-nrasonr
a-或-nraso
2-，条件是-x
1-x
2-主链内没有两个杂原子相邻连接；
[0016]
每个ra独立选自：氢、氘、卤素、c
1-6
烷基、c
2-6
烯基、c
2-6
炔基、c
3-10
环烷基、c
4-10
环烯基、3元至10元杂环基、c
6-10
芳基及5元至10元杂芳基，其中所述c
1-6
烷基、c
2-6
烯基、c
2-6
炔基、c
3-10
环烷基、c
4-10
环烯基、3元至10元杂环基、c
6-10
芳基及5元至10元杂芳基任选被一或多个相同或不同的r
a1
取代；或-(crara)
1-6-中两个ra可以和所连接的碳原子形成任选被一或多个相同或不同的r
a1
取代的c
3-6
元环烷基；
[0017]
每个r
a1
独立地选自：氢、氘、卤素、-or
a2
、-nr
a2ra2
、-cn、-c(o)r
a2
、-c(o)or
a2
、-c(o)nr
a2ra2
、-s(o)2r
a2
、-s(o)2nr
a2ra2
、-nhc(o)r
a2
、-n(c
1-4
烷基)c(o)r
a2
、-nhc(o)or
a2
或-n(c
1-4
烷基)c(o)or
a2
；
[0018]
每个r
a2
独立地选自：氢、氘、c
1-6
烷基、c
1-6
卤代烷基、c
2-6
烯基、c
2-6
炔基、c
3-10
环烷基、c
4-10
环烯基、3元至10元杂环基、c
6-10
芳基及5元至10元杂芳基；
[0019]
y1、y2分别独立选自crb或n；
[0020]
rb选自：氢、氘、卤素、c
1-8
烷基、c
2-8
烯基、c
2-8
炔基、c
3-12
环烷基、3元至12元杂环基、c
6-12
芳基、5元至12元杂芳基、-cn、-no2、-or
b1
、-so2r
b1
、-cor
b1
、-co2r
b1
、-conr
b1rb2
、-c(＝nr
b1
)nr
b2rb3
、-nr
b1rb2
、-nr
b1
cor
b2
、-nr
b1
conr
b2rb3
、-nr
b1
sonr
b2rb3
或-nr
b1
so2r
b2
，其中所述c
1-8
烷基、c
2-8
烯基、c
2-8
炔基、c
3-12
环烷基、3元至12元杂环基、c
6-12
芳基、5元至12元杂芳基任选地被一个或多个卤素、羟基、c
1-8
烷氧基、c
3-12
环烷基、3元至12元杂环基、c
6-12
芳基、5元至12元杂芳基取代；
[0021]rb1
、r
b2
、r
b3
分别独立地选自：氢、氘、c
1-8
烷基、c
2-8
烯基、c
2-8
炔基、c
3-12
环烷基、3元至12元杂环基、c
6-12
芳基、5元至12元杂芳基；
[0022]
l1选自键、-nh-、-o-、-s-、-c
1-6
亚烷基-、-o-c
1-6
亚烷基-、-c
1-6
亚烷基-o-、-nh-c
1-6
亚烷基-、-c
1-6
亚烷基-nh-、-c
2-8
亚烯基-、-o-c
2-8
亚烯基-、-c
2-8
亚烯基-o-、-nh-c
2-8
亚烯基-、-c
2-8
亚烯基-nh-、-nhc(o)-、-c(o)nh-；
[0023]
cy1选自：c
3-12
环烷基、3元至20元杂环基、c
6-16
芳基、5元至16元杂芳基；
[0024]
每个r1可独立地选自：氢、氘、卤素、c
1-20
烷基、c
2-20
烯基、c
2-20
炔基、c
3-12
环烷基、3元
ch2ch
2-；x1选自-o-，且x2选自-ch2(ch3)ch
2-；x1选自-o-，且x2选自x1选自-s-，且x2选自-ch
2-；x1选自-s-，且x2选自-ch2ch
2-；x1选自-s-，且x2选自-ch2ch2(ch3)-；x1选自-so-，且x2选自-ch
2-；x1选自-so
2-，且x2选自-ch
2-；x1选自-nh-，且x2选自-ch
2-；x1选自-ch
2-，且x2选自-ch
2-。
[0050]
在本发明的一个优选实施方案中，本发明提供的化合物或其互变异构体、立体异构体或其药学上可接受的盐，其中，每个ra独立选自：氢、氘、卤素、c
1-6
烷基、c
2-6
烯基、c
2-6
炔基或c
3-10
环烷基，其中所述c
1-6
烷基、c
2-6
烯基、c
2-6
炔基或c
3-10
环烷基任选被一或多个相同或不同的r
a1
取代；或-(crara)
1-6-中两个ra可以和所连接的碳原子形成任选被一或多个相同或不同的r
a1
取代的c
3-6
元环烷基；
[0051]
在进一步优选实施方案中，其中，每个ra独立选自：氢、卤素、c
1-3
烷基或c
3-6
环烷基，其中所述c
1-3
烷基或c
3-6
环烷基任选被一或多个相同或不同的r
a1
取代；-(crara)
1-6-中两个ra可以和所连接的碳原子形成任选被一或多个相同或不同的r
a1
取代的c
3-6
元环烷基，优选为环丙基；
[0052]
在进一步优选实施方案中，其中，每个ra独立选自：氢、甲基。
[0053]
在本发明的一个优选实施方案中，本发明提供的化合物或其互变异构体、立体异构体或其药学上可接受的盐，其中，每个r
a1
独立地选自：氢、卤素、-or
a2
、-nr
a2ra2
、-cn、-c(o)r
a2
或-c(o)or
a2
；
[0054]
在进一步优选实施方案中，其中，每个r
a1
独立地选自：氢、卤素或-or
a2
；
[0055]
在进一步优选实施方案中，其中，每个r
a1
独立选自：氢。
[0056]
在本发明的一个优选实施方案中，本发明提供的化合物或其互变异构体、立体异构体或其药学上可接受的盐，其中，每个r
a2
独立地选自：氢、氘、c
1-6
烷基、c
3-10
环烷基、3元至10元杂环基、c
6-10
芳基及5元至10元杂芳基；
[0057]
在进一步优选实施方案中，其中，每个r
a2
独立地选自：氢、c
1-3
烷基或c
3-6
环烷基；
[0058]
在进一步优选实施方案中，其中，每个r
a2
独立地选自：氢。
[0059]
在本发明的一个优选实施方案中，本发明提供的化合物或其互变异构体、立体异构体或其药学上可接受的盐，其中，y1、y2分别独立选自crb或n；
[0060]
在进一步优选实施方案中，其中，y1和y2均为crb；或者y1选自crb，y2选自n；或者y1选自n，y2选自crb。
[0061]
rb选自：氢、卤素、c
1-8
烷基、-or
b1
、-so2r
b1
、-cor
b1
或-co2r
b1
，其中所述c
1-8
烷基任选地被一个或多个卤素、羟基、c
1-8
烷氧基、c
3-12
环烷基、3元至12元杂环基、c
6-12
芳基、5元至12元杂芳基所取代；
[0062]
在进一步优选实施方案中，其中，rb选自：氢、卤素、c
1-6
烷基、-or
b1
，其中所述c
1-6
烷基任选地被一个或多个卤素、羟基所取代；
[0063]
在进一步优选实施方案中，其中，rb选自：氢、卤素、c
1-3
烷基，其中所述c
1-3
烷基任选地被一个或多个卤素、羟基所取代；
[0064]
在进一步优选实施方案中，其中，rb选自：氢。
[0065]
在本发明的一个优选实施方案中，本发明提供的化合物或其互变异构体、立体异构体或其药学上可接受的盐，其中，r
b1
、r
b2
、r
b3
分别独立地选自：氢、氘、c
1-6
烷基、c
2-6
烯基、c2-6
炔基、c
3-6
环烷基、3元至10元杂环基、c
6-10
芳基、5元至10元杂芳基；
[0066]
在进一步优选实施方案中，其中，r
b1
、r
b2
、r
b3
分别独立地选自：氢、c
1-4
烷基、c
6-10
芳基或5-10元杂芳基；
[0067]
在进一步优选实施方案中，其中，r
b1
、r
b2
、r
b3
分别独立地选自：氢、c
1-3
烷基或c
6-10
芳基；
[0068]
在进一步优选实施方案中，其中，r
b1
、r
b2
、r
b3
分别独立地选自：氢。
[0069]
在本发明的一个优选实施方案中，本发明提供的化合物或其互变异构体、立体异构体或其药学上可接受的盐，其中，l1选自键、-c
1-3
亚烷基-、-nh-、-o-、-s-、-nhc(o)-、-c(o)nh-；
[0070]
在进一步优选实施方案中，其中，l1选自键。
[0071]
在本发明的一个优选实施方案中，本发明提供的化合物或其互变异构体、立体异构体或其药学上可接受的盐，其中，cy1选自：c
3-10
环烷基、3元至12元杂环基、c
6-12
芳基、5元至12元杂芳基；
[0072]
在进一步优选实施方案中，其中，cy1选自：3元至10元杂环基、c
6-10
芳基、5元至10元杂芳基；
[0073]
在进一步优选实施方案中，其中，cy1选自：苯基、吡啶基、吡唑基、嘧啶基或
[0074]
在进一步优选实施方案中，其中，cy1选自：苯基。
[0075]
在本发明的一个优选实施方案中，本发明提供的化合物或其互变异构体、立体异构体或其药学上可接受的盐，其中，每个r1可独立地选自：氢、卤素、c
1-6
烷基、c
3-6
环烷基、3元至12元杂环基、c
6-12
芳基、5元至12元杂芳基、-or
c1
、-so2r
c1
、-so2nr
c1rc2
、-cor
c1
、-co2r
c1
、-conr
c1rc2
、-nr
c1
cor
c2
、-nr
c1
conr
c2rc3
或-nr
c1
so2r
c2
，其中所述c
1-6
烷基、c
3-6
环烷基、3元至12元杂环基、c
6-12
芳基、5元至12元杂芳基任选被一个或多个r
c4
取代；
[0076]
在进一步优选实施方案中，其中，每个r1可独立地选自：氢、f、cl、br、c
1-3
烷基、c
6-10
芳基、5元至10元杂芳基、-or
c1
、-so2r
c1
、-so2nr
c1rc2
、-cor
c1
、-co2r
c1
、-conr
c1rc2
、-nr
c1
cor
c2
、-nr
c1
conr
c2rc3
或-nr
c1
so2r
c2
，其中所述c
6-10
芳基、5元至10元杂芳基任选被一个或多个r
c4
取代；
[0077]
在进一步优选实施方案中，其中，每个r1可独立地选自：c
1-3
烷基、-or
c1
、-cor
c1
、-co2r
c1
或-conr
c1rc2
。
[0078]
在进一步优选实施方案中，其中，每个r1可独立地选自：可独立地选自：
[0079]
在进一步优选实施方案中，其中，每个r1可独立地选自：氢、f、甲基、
[0080]
在进一步优选实施方案中，其中，每个r1可独立地选自：甲基、甲基、
[0081]
在本发明的一个优选实施方案中，本发明提供的化合物或其互变异构体、立体异构体或其药学上可接受的盐，其中，r
c1
、r
c2
、r
c3
分别独立地选自氢、氘、c
1-6
烷基、-cor
c5
、-c
1-6
烷氧基-c
1-6
烷基、c
2-6
烯基、c
2-6
炔基、c
3-10
环烷基、3元至10元杂环基、c
6-10
芳基、5元至10元杂芳基，其中所述；c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基-c
1-6
烷基、c
2-6
烯基、c
2-6
炔基、c
3-10
环烷基、3元至10元杂环基、c
6-10
芳基、5元至10元杂芳基任选被一个或多个r
c5
取代；
[0082]
(r
c1
和r
c2
)、(r
c1
和r
c3
)或(r
c2
和r
c3
)与其相连的原子一起构成含1、2或3个杂原子的3-12元杂环，所述杂原子分别独立地选自n、o或任选氧化的s，所述3-12元杂环任选被一个或多个r
c5
取代；
[0083]
在进一步优选实施方案中，其中，r
c1
、r
c2
、r
c3
分别独立地选自氢、c
1-4
烷基、-cor
c5
、c
3-6
环烷基、3元至10元杂环基；
[0084]
在进一步优选实施方案中，其中，r
c1
、r
c2
、r
c3
分别独立地选自氢、c
1-4
烷基、-cor
c5
、c
3-5
环烷基、3元至6元杂环基；
[0085]
在进一步优选实施方案中，其中，r
c1
、r
c2
、r
c3
分别独立地选自氢、甲基、乙基、丙基、环丙基、四氢吡咯、哌啶基、哌嗪基；
[0086]
在进一步优选实施方案中，其中，r
c1
、r
c2
、r
c3
分别独立地选自氢、甲基、乙基、丙基、四氢吡咯；
[0087]
在进一步优选实施方案中，其中，(r
c1
和r
c2
)与其相连的原子一起构成含1、2或3个杂原子的3-10元杂环，所述杂原子分别独立地选自n、o或任选氧化的s，所述3-10元杂环任选被一个或多个r
c5
取代；
[0088]
在进一步优选实施方案中，其中，(r
c1
和r
c2
)与其相连的氮原子一起构成任选被一个或多个r
c5
取代的
[0089]
在进一步优选实施方案中，其中，(r
c1
和r
c2
)与其相连的氮原子一起构成任选被一个或多个r
c5
取代的
[0090]
在本发明的一个优选实施方案中，本发明提供的化合物或其互变异构体、立体异构体或其药学上可接受的盐，其中，r
c4
和r
c5
分别独立地选自：氢、卤素、c
1-8
烷基、c
3-12
环烷基、3元至12元杂环基、c
6-12
芳基、-or
c6
、-so2r
c6
、-cor
c6
、-co2r
c6
、-conr
c6rc7
、-nr
c6rc7
、-nr
c6
cor
c7
、-nr
c6
conr
c7rc8
、-nr
c6
sonr
c7rc8
或-nr
c6
so2r
c7
，其中所述c
1-8
烷基、c
2-8
烯基、c
2-8
炔基、c
3-12
环烷基、3元至12元杂环基、c
6-12
芳基、5元至12元杂芳基任选被一个或多个氘、卤素、c
1-8
烷基、-or
c9
、-nr
c9rc10
、c
3-12
环烷基、3元至12元杂环基、c
6-12
芳基、5元至12元杂芳基取代；
[0091]
在进一步优选实施方案中，其中，r
c4
和r
c5
分别独立地选自：氢、卤素、c
1-4
烷基、c
3-12
环烷基、-or
c6
、-conr
c6rc7
、-nr
c6rc7
、-nr
c6
cor
c7
；其中所述c
1-4
烷基任选被一个或多个卤素、-or
c9
、-nr
c9rc10
、c
3-6
环烷基、3元至6元杂环基取代；
[0092]
在进一步优选实施方案中，其中，r
c4
和r
c5
分别独立地选自：氢、卤素、c
1-4
烷基、-or
c6
、-conr
c6rc7
、-nr
c6rc7
、-nr
c6
cor
c7
；其中所述c
1-4
烷基任选被一个或多个卤素、-or
c9
、-nr
c9rc10
、c
3-6
环烷基、3元至6元杂环基取代；
[0093]
在进一步优选实施方案中，其中，r
c4
和r
c5
分别独立地选自：氢、甲基、-nh2、-n(ch3)2、-con(ch3)2、-oh、在本发明的一个优选实施方案中，本发明提供的化合物或其互变异构体、立体异构体或其药学上可接受的盐，其中，r
c6
、r
c7
、r
c8
、r
c9
、r
c10
分别独立地选自：氢、氘、c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基-c
1-6
烷基、c
2-4
烯基、c
2-4
炔基、c
3-6
环烷基、3元至10元杂环基、c
6-10
芳基、5元至10元杂芳基；
[0094]
在进一步优选实施方案中，其中，r
c6
、r
c7
、r
c8
、r
c9
、r
c10
分别独立地选自：氢、c
1-4
烷基、c
2-4
烯基、c
2-4
炔基或c
3-6
环烷基；
[0095]
在进一步优选实施方案中，其中，r
c6
、r
c7
、r
c8
、r
c9
、r
c10
分别独立地选自：氢或c
1-4
烷基；
[0096]
在进一步优选实施方案中，其中，r
c6
、r
c7
、r
c8
、r
c9
、r
c10
分别独立地选自：氢、甲基。
[0097]
在本发明的一个优选实施方案中，本发明提供的化合物或其互变异构体、立体异构体或其药学上可接受的盐，其中，cy2选自：c
3-8
环烷基、3元至8元杂环烷基、c
4-6
环烯基、4元至6元杂环烯基、c
6-12
芳基或5元至12元杂芳基；
[0098]
在进一步优选实施方案中，其中，cy2选自：c
3-6
环烷基、3元至6元杂环烷基、c
6-10
芳基或5元至10元杂芳基；
[0099]
在进一步优选实施方案中，其中，cy2选自：c
6-8
芳基或5元至6元杂芳基；
[0100]
在进一步优选实施方案中，其中，cy2选自：苯基、吡啶基；
[0101]
在进一步优选实施方案中，其中，cy2选自：苯基。
[0102]
在本发明的一个优选实施方案中，本发明提供的化合物或其互变异构体、立体异构体或其药学上可接受的盐，其中，r2选自：氢、卤素、c
1-8
烷基、c
2-8
烯基、c
2-4
炔基、cy3、-or
d1
、-so2r
d1
、-cor
d1
、-co2r
d1
、-conr
d1rd2
、-nr
d1rd2
、-nr
d1
cor
d2
、-nr
d1
conr
d2rd3
或-nr
d1
so2r
d2
，其中所述c
1-8
烷基、c
2-8
烯基、c
2-4
炔基、cy3任选被一个或多个r
d4
取代；
[0103]
在进一步优选实施方案中，其中，r2选自：氢、卤素、c
1-6
烷基、c
2-6
烯基、-nr
d1
cor
d2
、cy3，其中所述c
1-6
烷基、cy3任选被一个或多个r
d4
取代；
[0104]
在进一步优选实施方案中，其中，r2选自：氢、卤素、c
1-4
烷基、-nr
d1
cor
d2
、cy3，其中所述c
1-4
烷基、cy3任选被一个或多个r
d4
取代；
[0105]
在进一步优选实施方案中，其中，r2选自：氢、f、甲基、cy3；
[0106]
在进一步优选实施方案中，其中，r2选自：cy3。
[0107]
在本发明的一个优选实施方案中，本发明提供的化合物或其互变异构体、立体异构体或其药学上可接受的盐，其中，cy3选自：c
3-10
环烷基、3元至10元杂环烷基、c
4-10
环烯基、4元至10元杂环烯基、c
6-12
芳基或5元至12元杂芳基，其中所述c
3-10
环烷基、3元至10元杂环烷基、c
4-10
环烯基、4元至10元杂环烯基、c
6-12
芳基或5元至12元杂芳基任选被一个或多个r3取代；
[0108]
在进一步优选实施方案中，其中，cy3选自：c
3-8
环烷基、5元至10元杂环烷基、5元至10元杂环烯基、c
6-10
芳基或5元至10元杂芳基；其中所述c
3-8
环烷基、5元至10元杂环烷基、5元至10元杂环烯基、c
6-10
芳基或5元至10元杂芳基任选被一个或多个r3取代；
[0109]
在进一步优选实施方案中，其中，cy3选自：5元至8元杂环烷基、5元至8元杂环烯基；其中所述5元至8元杂环烷基、5元至8元杂环烯基任选被一个或多个r3取代；
[0110]
在进一步优选实施方案中，其中，cy3选自：任选被一个或多个r3取代的取代的
[0111]
在进一步优选实施方案中，其中，cy3选自：任选被一个或多个r3取代的
[0112]
在本发明的一个优选实施方案中，本发明提供的化合物或其互变异构体、立体异构体或其药学上可接受的盐，其中，r3选自：氢、c
1-8
烷基、c
3-10
环烷基、3元至10元杂环基、c
6-12
芳基、5元至12元杂芳基、-or
d1
、-so2r
d1
、-cor
d1
、-co2r
d1
、-conr
d1rd2
、-nr
d1rd2
、-nr
d1
cor
d2
或-nr
d1
so2r
d2
，其中所述c
1-8
烷基、c
3-10
环烷基、3元至10元杂环基、c
6-12
芳基、5元至12元杂芳基任选被一个或多个r
d4
取代；
[0113]
在进一步优选实施方案中，其中，r3选自：氢、c
1-6
烷基、c
3-6
环烷基、3元至6元杂环基、c
6-10
芳基或5元至10元杂芳基，其中所述c
1-6
烷基、c
3-6
环烷基、3元至6元杂环基、c
6-10
芳基或5元至10元杂芳基任选被一个或多个r
d4
取代；
[0114]
在进一步优选实施方案中，其中，r3选自：氢、c
1-6
烷基、3元至6元杂环基，其中所述c
1-6
烷基、3元至6元杂环基任选被一个或多个r
d4
取代；
[0115]
在进一步优选实施方案中，其中，r3选自：氢、c
1-3
烷基、4元至6元杂环基，其中所述c
1-3
烷基、4元至6元杂环基任选被一个或多个r
d4
取代；
[0116]
在进一步优选实施方案中，其中，r3选自：氢、甲基、乙基、哌啶基，其中所述甲基、乙基、哌啶基任选被一个或多个r
d4
取代；
[0117]
在进一步优选实施方案中，其中，r3选自：氢、甲基。
[0118]
在本发明的一个优选实施方案中，本发明提供的化合物或其互变异构体、立体异构体或其药学上可接受的盐，其中，r
d1
、r
d2
和r
d3
分别独立地选自：氢、c
1-6
烷基、c
3-10
环烷基、3元至10元杂环基、c
6-10
芳基、5元至10元杂芳基，其中所述c
1-6
烷基、c
3-10
环烷基、3元至10元杂环基、c
6-10
芳基、5元至10元杂芳基任选被一个或多个r
d5
取代；
[0119]
在进一步优选实施方案中，其中，r
d1
、r
d2
和r
d3
分别独立地选自：氢、c
1-3
烷基，其中所述c
1-3
烷基任选被一个或多个r
d5
取代；
[0120]
在进一步优选实施方案中，其中，r
d1
、r
d2
和r
d3
分别独立地选自：氢、甲基，其中所述甲基任选被一个或多个r
d5
取代。
[0121]
在本发明的一个优选实施方案中，本发明提供的化合物或其互变异构体、立体异构体或其药学上可接受的盐，其中，r
d4
和r
d5
分别独立地选自氢、卤素、c
1-6
烷基、c
3-10
环烷基、3元至10元杂环基、c
6-10
芳基、5元至10元杂芳基、-or
d6
、-so2r
d6
、-cor
d6
、-co2r
d6
、-conr
d6rd7
、-nr
d6rd7
、-nr
d6
cor
d7
或-nr
d6
so2r
d7
，其中所述c
1-6
烷基、c
3-10
环烷基、3元至10元杂环基、c
6-10
芳基、5元至10元杂芳基任选被一个或多个c
1-8
烷基、-or
d9
、-nr
d9rd10
、c
3-12
环烷基、3元至12元杂环基、c
6-12
芳基、5元至12元杂芳基取代；
[0122]
在进一步优选实施方案中，其中，r
d4
和r
d5
分别独立地选自氢、c
1-4
烷基、-or
d6
、3元至10元杂环基，其中所述c
1-4
烷基、3元至10元杂环基任选被一个或多个c
1-8
烷基取代；
[0123]
在进一步优选实施方案中，其中，r
d4
和r
d5
分别独立地选自氢、c
1-3
烷基、-or
d6
、4元至6元杂环基，其中所述c
1-3
烷基、4元至6元杂环基任选被一个或多个c
1-4
烷基取代；
[0124]
在进一步优选实施方案中，其中，r
d4
和r
d5
分别独立地选自氢、-oh、甲基、
[0125][0126]
在本发明的一个优选实施方案中，本发明提供的化合物或其互变异构体、立体异构体或其药学上可接受的盐，其中，r
d6
、r
d7
、r
d8
、r
d9
、r
d10
分别独立地选自氢、氘、c
1-5
烷基、c
1-5
烷氧基-c
1-5
亚烷基；
[0127]
在进一步优选实施方案中，其中，r
d6
、r
d7
、r
d8
、r
d9
、r
d10
分别独立地选自氢、c
1-3
烷基；
[0128]
在进一步优选实施方案中，其中，r
d6
、r
d7
、r
d8
、r
d9
、r
d10
分别独立地选自氢。
[0129]
在本发明的一个优选实施方案中，本发明提供的化合物或其互变异构体、立体异构体或其药学上可接受的盐，其中，m选自0、1、2、3或4；在进一步优选实施方案中，其中，m为1。
[0130]
n选自0、1、2或3；在进一步优选实施方案中，其中，n为1。
[0131]
除非另有说明，上述杂环烷基、杂芳基、杂环基中的杂原子独立地选自o、n或s，杂原子数量为1个、2个、3个或4个。
[0132]
在本发明的一个优选实施方案中，式(i)或(ii)所示的化合物，或其互变异构体、立体异构体或其药学上可接受的盐选自如下化合物：
[0133]
[0134]
[0135][0136]
本发明的目的还包括提供制备式(ii)所示的化合物，或其互变异构体、立体异构体或其药学上可接受的盐的方法。
[0137][0138]
i)化合物ii-a6通过卤代反应得到化合物ii-a7；
[0139]
如以化合物ii-a6和卤代试剂(例如，nis)等为基本原料，反应得到化合物ii-a7；
[0140]
ii)化合物ii-a7通过偶联反应得到通式化合物ii；
[0141]
如以化合物ii-a7和硼酸衍生物等为基本原料，发生偶联反应得到通式化合物ii；
[0142]
其中，上述制备方法中，x为卤素(如氟、氯、溴或碘，优选溴或碘)，所示化合物中各取代基定义如前所述。
[0143]
在一个实施方案中，式ii中x1为o，x2为-(ch2)
1-2-的化合物可通过下述步骤制备：
[0144][0145]
i)化合物i-a6通过碘代反应得到化合物i-a7；
[0146]
如以化合物i-a6和碘代试剂(例如，nis)等为基本原料，反应得到化合物i-a7；
[0147]
ii)化合物i-a7通过偶联反应得到通式化合物i-a8；
[0148]
如以化合物i-a7和硼酸衍生物等为基本原料，发生偶联反应得到通式化合物i-a8；
[0149]
其中，上述制备方法中，所示化合物中各取代基定义如前所述。
[0150]
在进一步优选实施方案中，其中，化合物i-a6可通过下述步骤制备：
[0151][0152]
i)化合物i-a5发生环合反应得到化合物i-a6；
[0153]
如以化合物i-a5和还原剂(例如，四氢铝锂等)以及氢化钠等碱为基本原料，反应得到关环化合物i-a6；其中，上述制备方法中，所示化合物中各取代基定义如前所述。
[0154]
在一个实施方案中，所述化合物，或其互变异构体、立体异构体或其药学上可接受的盐可通过下述步骤制备：
[0155][0156]
i)化合物i-a1发生化学转化得到化合物i-a2；
[0157]
如以化合物i-a1和溴代试剂(例如，nbs)等为基本原料，得到化合物i-a2；
[0158]
ii)化合物i-a2发生化学转化得到化合物i-a3；
[0159]
如以化合物i-a2和硼酸频那醇酯等为基本原料，反应得到化合物i-a3；
[0160]
iii)化合物i-a3和化合物i-a4发生化学转化得到化合物i-a5；
[0161]
如化合物i-a3和化合物i-a4发生耦联反应得到化合物i-a5；
[0162]
iv)化合物i-a5发生化学转化得到化合物i-a6；
[0163]
如以化合物i-a5和还原剂(例如，四氢铝锂等)以及氢化钠等碱为基本原料，反应
得到关环化合物i-a6；
[0164]
v)化合物i-a6发生化学转化得到化合物i-a7；
[0165]
如以化合物i-a6和碘代试剂(例如，nis)等为基本原料，反应得到化合物i-a7；
[0166]
vi)化合物i-a7发生化学转化得到通式化合物i-a8；
[0167]
如以化合物i-a7和硼酸衍生物等为基本原料，发生偶联反应得到通式化合物i-a8；其中，上述制备方法中，所示化合物中各取代基定义如前所述。
[0168]
本发明的第二方面，提供了一种药用组合物，其包含本发明所示式(i)或式(ii)所示的化合物，或其互变异构体、立体异构体或其药学上可接受的盐。
[0169]
在一些实施方案中，所述药用组合物，其包含本发明所述式(i)或式(ii)所示的化合物，或其互变异构体、立体异构体或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的辅料。
[0170]
本发明的第三方面，提供了本发明所述式(i)或式(ii)所示的化合物，或其互变异构体、立体异构体或其药学上可接受的盐，或所述药用组合物在制备hpk1抑制剂的药物中的用途。
[0171]
本发明的第四方面，提供了本发明所述式(i)或式(ii)所示的化合物，或其互变异构体、立体异构体或其药学上可接受的盐，或所述药用组合物作为hpk1抑制剂在制备用于治疗hpk1相关疾病的药物中的应用。
[0172]
在一些实施方案中，所述hpk1相关疾病为癌症或肿瘤相关疾病。
[0173]
在进一步优选实施方案中，所述的癌症或肿瘤相关疾病选自乳腺癌、多发性骨髓瘤、膀胱癌、子宫内膜癌、胃癌、宫颈癌、横纹肌肉瘤、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、多形性肺癌、卵巢癌、食管癌、黑色素瘤、结肠直肠癌、肝细胞瘤、头颈部肿瘤、肝胆管细胞癌、骨髓增生异常综合征、恶性胶质瘤、前列腺癌、甲状腺癌、徐旺氏细胞瘤、肺鳞状细胞癌、苔辟样角化病、滑膜肉瘤、皮肤癌、胰腺癌、睾丸癌或脂肪肉瘤。
[0174]
本发明的第五方面，提供了一种作为hpk1抑制剂预防和/或治疗hpk1相关疾病的方法，其包括向患者施用治疗有效剂量的本发明所述的式(i)或式(ii)所示的化合物，或其互变异构体、立体异构体或其药学上可接受的盐或本发明所述药用组合物。
[0175]
定义
[0176]
除另有规定外，术语“烷基”指一价饱和脂肪族烃基团，包含1-20个碳原子的直链或支链基团，优选包含1-10个碳原子(即c
1-10
烷基)，进一步优选包含1-8个碳原子(c
1-8
烷基)，更优选包含1-6个碳原子(即c
1-6
烷基)，更优选包含1-4个碳原子(即c
1-6
烷基)，更优选包含1-3个碳原子(即c
1-3
烷基)，例如“c
1-6
烷基”指的是该基团为烷基，且碳链上的碳原子数量在1-6之间(具体地为1个、2个、3个、4个、5个或6个)。实例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、新戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、正庚基、正辛基等。
[0177]
除另有规定外，术语“环烷基”指的是选自饱和环状烃基中的烃基，所述饱和环状烃基包括单环和多环(例如，双环和三环)基团，包括稠合环烷基、桥接环烷基或螺环烷基。
[0178]
例如，环烷基可以包含3至12个(诸如3至10个，进一步诸如3至8个，进一步诸如3至6个、3至5个或3至4个)碳原子。甚至进一步例如，环烷基可以选自包含3至12个(诸如3至10个，进一步诸如3至8个、3至6个)碳原子的单环基团。单环环烷基的例子包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环己二烯基、环庚基、环辛基、环壬基、环癸基、环十一烷基、和环十二烷
基。具体地，饱和单环环烷基(例如，c3-8环烷基)的例子包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基和环辛基。在优选的实施方案中，环烷基是包含3至6个碳原子的单环(缩写为c3-6环烷基)，其包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基和环己基。双环环烷基的例子包括具有7至12个环原子的那些，所述环原子排列为选自[4,4]、[4,5]、[5,5]、[5,6]或[6,6]环系中的稠合双环，或排列为选自双环[2.2.1]庚烷、双环[2.2.2]辛烷和双环[3.2.2]壬烷中的桥接双环。双环环烷基的其他例子包括排列为选自[5,6]和[6,6]环系中的双环的环。环可以是饱和的或具有至少一个双键(即，部分不饱和的)，但不是完全共轭的，并且不是芳香族的，因为本文中定义了芳香族。
[0179]
术语“螺环烷基”是指含有碳原子并且由共用一个原子的至少两个环形成的环状结构。术语“7至12元螺环烷基”是指含有7至12个碳原子并且由共用一个原子的至少两个环形成的环状结构。
[0180]
术语“稠合环烷基”是指含有碳原子并且由共用两个相邻原子的两个或更多个环形成的稠合环。术语“4至10元稠合环烷基”是指含有4至10个环碳原子并且由共用两个相邻原子的两个或更多个环形成的稠合环。
[0181]
例子包括但不限于双环[1.1.0]丁基、双环[2.1.0]戊基、双环[3.1.0]己基、双环[4.1.0]庚基、双环[3.3.0]辛基、双环[4.2.0]辛基、十氢化萘，以及苯并3至8元环烷基、苯并c4-6环烯基、2,3-二氢-1h-茚基、1h-茚基、1,2,3,4-四唑基、1,4-二氢萘基等。优选的实施方案是8至9元稠合环，所述稠合环是指在以上例子中含有8至9个环原子的环状结构。
[0182]
术语“桥接环烷基”是指含有碳原子并且由共用彼此不相邻的两个原子的两个环形成的环状结构。术语“7至10元桥接环烷基”是指含有7至12个碳原子并且由共用彼此不相邻的两个原子的两个环形成的环状结构。
[0183]
术语“环烯基”是指3至10个碳原子的非芳香族环状烷基，其具有单环或多环并且具有至少一个双键并且优选1至2个双键。在一个实施方案中，环烯基是环戊烯基(1-环戊-1-烯基、1-环戊-2-烯基、1-环戊-3-烯基)或环己烯基(1-环己-1-烯基、1-环己-2-烯基、1-环己-3-烯基)，优选环己烯基。
[0184]
除另有规定外，术语“烷氧基”指-o-烷基，所述烷基的定义同上，即包含1-20个碳原子，优选地，包含1-10个碳原子，较佳地1-8个碳原子，更佳地1-6个碳原子(具体地为1个、2个、3个、4个、5个或6个)，更佳地1-4个碳原子，更佳地1-3个碳原子。代表的例子包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、1-甲基丙氧基、2-甲基丙氧基、叔丁氧基、戊氧基、1-甲基丁氧基、2-甲基丁氧基、3-甲基丁氧基、1,1-二甲基丙氧基、1,2-二甲基丙氧基、2,2-二甲基丙氧基、1-乙基丙氧基等。
[0185]
术语“烷氧基-烷基
‑”
是指进一步被如上所定义的烷氧基取代的如上所定义的烷基。烷氧基-烷基-(例如，c
1-8
烷氧基-c
1-8
烷基-)的例子包括但不限于甲氧基甲基、乙氧基甲基、异丙氧基甲基、或丙氧基甲基等。
[0186]
除另有规定外，术语“烯基”是指由碳原子和氢原子组成的直链或支链的具有至少一个双键的不饱和脂肪族烃基。烯基可以包含2-20个碳原子，优选包含2-10个碳原子(即c
2-10
烯基)，进一步优选包含2-8个碳原子(c
2-8
烯基)，更优选包含2-6个碳原子(即c
2-6
烯基)、2-5个碳原子(即c
2-5
烯基)、2-4个碳原子(即c
2-4
烯基)、2-3个碳原子(即c
2-3
烯基)、2个碳原子(即c2烯基)，例如“c
2-6
烯基”指的是该基团为烯基，且碳链上的碳原子数量在2-6之
间(具体地为2个、3个、4个、5个或6个)。烯基的非限制性实例包括但不限于乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、1-丁烯基、异丁烯基和1,3-丁二烯基等。
[0187]
除另有规定外，术语“炔基”是指由碳原子和氢原子组成的直链或支链的具有至少一个叁键的不饱和脂肪族烃基。炔基可以包含2-20个碳原子，优选包含2-10个碳原子(即c
2-10
炔基)，进一步优选包含2-8个碳原子(c
2-8
炔基)，更优选包含2-6个碳原子(即c
2-6
炔基)、2-5个碳原子(即c
2-5
炔基)、2-4个碳原子(即c
2-4
炔基)、2-3个碳原子(即c
2-3
炔基)、2个碳原子(即c2炔基)，例如“c
2-6
炔基”指的是该基团为炔基，且碳链上的碳原子数量在2-6之间(具体地为2个、3个、4个、5个或6个)。炔基的非限制性实例包括但不限于乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基和1-丁炔基等。
[0188]
除另有规定外，术语“卤素”或“卤代”是指f、cl、br、i。术语“卤代烷基”是指如上所定义的烷基中一个、两个或多个氢原子或全部氢原子被卤素取代。卤代烷基的代表性例子包括ccl3、cf3、chcl2、ch2cl、ch2br、ch2i、ch2cf3、cf2cf3等。
[0189]
除另有规定外，术语“杂环基”或“杂环”指包含一个或多个选自氮、氧或任选氧化的硫中的杂原子作为环成员并且其余的环成员是碳的非芳香族杂环基，包括单环的环、稠合环、桥接环和螺环，即，含有单环杂环基、桥接杂环基、螺杂环基、和稠合杂环基团。本文所用术语“任选氧化的硫”是指s、so或so2。
[0190]
术语“单环杂环基”是指其中至少一个环成员是选自氮、氧或任选氧化的硫中的杂原子的单环基团。杂环可以是饱和的或部分饱和的。
[0191]
示例性单环4至9元杂环基包括但不限于(如从指定优先级1的连接位置编号)吡咯烷-1-基、吡咯烷-2-基、吡咯烷-3-基、咪唑烷-2-基、咪唑烷-4-基、吡唑烷-2-基、吡唑烷-3-基、哌啶-1-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、2,5-哌嗪基、吡喃基、吗啉基、吗啉代、吗啉-2-基、吗啉-3-基、环氧乙烷基、氮杂环丙烷-1-基、氮杂环丙烷-2-基、氮杂环辛烷-1-基、氮杂环辛烷-2-基、氮杂环辛烷-3-基、氮杂环辛烷-4-基、氮杂环辛烷-5-基、硫杂环丙烷基、氮杂环丁烷-1-基、氮杂环丁烷-2-基、氮杂环丁烷-3-基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、1,2-二硫杂环丁烷基、1,3-二硫杂环丁烷基、二氢吡啶基、四氢吡啶基、硫代吗啉基、氧杂硫杂环己烷基、哌嗪基、高哌嗪基、高哌啶基、氮杂环庚烷-1-基、氮杂环庚烷-2-基、氮杂环庚烷-3-基、氮杂环庚烷-4-基、氧杂环庚烷基、硫杂环庚烷基、1,4-氧杂硫杂环己烷基、1,4-二氧杂环庚烷基、1,4-氧杂硫杂环庚烷基、1,4-氧杂氮杂环庚烷基、1,4-二硫杂环庚烷基、1,4-硫杂氮杂环庚烷基和1,4-二氮杂环庚烷基、1,4-二硫杂环己烷基、1,4-氮杂硫杂环己烷基、氧氮杂卓基、二氮杂卓基、硫杂氮杂卓基、二氢噻吩基、二氢吡喃基、二氢呋喃基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、四氢吡喃基、四氢硫代吡喃基、1-吡咯啉基、2-吡咯啉基、3-吡咯啉基、吲哚啉基、2h-吡喃基、4h-吡喃基、1,4-二氧杂环己烷基、1,3-二氧戊环基、吡唑啉基、吡唑烷基、二噻烷基、二硫杂环戊烷基、吡唑烷基、咪唑啉基、嘧啶酮基、或1,1-二氧代-硫代吗啉基。
[0192]
术语“螺杂环基”是指具有通过一个共用碳原子(称为螺原子)连接的环的5至20元多环杂环基，包含一个或多个选自氮、氧或任选氧化的硫中的杂原子作为环成员，其余的环成员是碳。螺杂环基的一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子体系。优选地，螺杂环基是6至14元的，并且更优选7至12元的。根据共用螺原子的数量，螺杂环基分为单螺杂环基、二螺杂环基、或多螺杂环基，并且优选地是指单螺杂环基或二螺杂环基，并且更优选4元/4元、3元/5元、4元/5元、4元/6元、5元/5元、或5元/6元单螺
杂环基。螺杂环基的代表性例子包括但不限于以下基团：2,3-二氢螺[茚-1,2
’‑
吡咯烷](例如，2,3-二氢螺[茚-1,2
’‑
吡咯烷]-1
’‑
基)、1,3-二氢螺[茚-2,2
’‑
吡咯烷](例如，1,3-二氢螺[茚-2,2
’‑
吡咯烷]-1
’‑
基)、氮杂螺[2.4]庚烷(例如，5-氮杂螺[2.4]庚烷-5-基)、氮杂螺[3.4]辛烷(例如，6-氮杂螺[3.4]辛烷-6-基)、2-氧杂-6-氮杂螺[3.4]辛烷(例如，2-氧杂-6-氮杂螺[3.4]辛烷-6-基)、氮杂螺[3.4]辛烷(例如，6-氮杂螺[3.4]辛-6-基)、氮杂螺[3.4]辛烷(例如，6-氮杂螺[3.4]辛-6-基)、1,7-二氧杂螺[4.5]癸烷、2-氧杂-7-氮杂-螺[4.4]壬烷(例如，2-氧杂-7-氮杂-螺[4.4]壬-7-基)、7-氧杂-螺[3.5]壬基和5-氧杂-螺[2.4]庚基。
[0193]
术语“稠合杂环基团”是指其中体系中的每个环与另一个环共用相邻的一对原子(碳和碳原子或碳和氮原子)的5至20元多环杂环基团，包含一个或多个选自氮、氧或任选氧化的硫中的杂原子作为环成员，其余的环成员是碳。稠合杂环基团的一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子体系。优选地，稠合杂环基是6至14元的，优选7至12元的并且更优选7至10元的。根据成员环的数量，稠合杂环基分为双环、三环、四环、或多环稠合杂环基，优选地是指双环或三环稠合杂环基，并且更优选5元/5元、或5元/6元双环稠合杂环基。稠合杂环的代表性例子包括但不限于以下基团：八氢环戊二烯并[c]吡咯(例如，八氢环戊二烯并[c]吡咯-2-基)、八氢吡咯并[3,4-c]吡咯基、八氢异吲哚基、异吲哚啉基(例如，异吲哚啉-2-基或异吲哚啉-5-基)、八氢-苯并[b][1,4]二噁英、二氢吡啶并噁嗪基(例如，2,3-二氢-1h-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪基)或二氢苯并氧氮杂卓基(例如，5-氧代-3,4-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓基)、苯并氮杂卓基(例如，2,3,4,5-四氢-1-氧代-2-苯并氮杂卓-6-基)、苯并氧氮杂卓基(例如，5-氧代-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并氧氮杂卓-8-基)、二氢异喹啉基(例如，1-氧代-2-甲基-3,4-二氢异喹啉-6-基)、四氢异喹啉基(例如，2-甲基-1-氧代-1,2,3,4-四氢异喹啉-6-基)、二氢苯并噁嗪(例如，3,4-二氢-2h-1,4-苯并噁嗪-6-基)。
[0194]
术语“桥接杂环基”是指其中体系中每两个环共用两个不相连的原子的5至14元多环杂环烷基，包含一个或多个选自氮、氧或任选氧化的硫中的杂原子作为环成员，其余的环成员是碳。桥接杂环基的一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子体系。优选地，桥接杂环基是6至14元的，并且更优选7至10元的。根据成员环的数量，桥接杂环基分为双环、三环、四环或多环桥接杂环基，并且优选地是指双环、三环或四环桥接杂环基，并且更优选双环或三环桥接杂环基。桥接杂环基的代表性例子包括但不限于以下基团：2-氮杂双环[2.2.1]庚基、氮杂双环[3.1.0]己基、2-氮杂双环[2.2.2]辛基和2-氮杂双环[3.3.2]癸基。
[0195]
除另有规定外，术语“杂环烷基”是指单环、饱和的如上文定义的“杂环基”或“杂环”，环原子定义同上，即包含3-20个环原子(“3-20元杂环烷基”)，杂原子数量为1个、2个、3个或4个(1-4个)，优选1个、2个或3个(1-3个)，其中杂原子各自独立地选自n、o或s。优选包含3-12个环原子(“3-12元杂环烷基”)，进一步优选包含3-10个环原子(“3-10元杂环烷基”)，更进一步优选包含3～8个环原子(“3-8元杂环烷基”)，更进一步优选包含4-7个环原子(“4-7元杂环烷基”)，更进一步优选地包含5-10个环原子(“5-10元杂环烷基”)，更进一步优选包含5-6个环原子(“5-6元杂环烷基”)。在某些实施例中，杂环烷基的每个例子独立地是可任选取代的，例如，未取代的(一种“未取代的杂环烷基”)或被一个或多个取代基取代
的(一种“取代的杂环烷基”)。上文“杂环基”或“杂环”部分已给出了部分示例性的“杂环烷基”，还包括，但不限于氧杂环己烷基、硫代吗啉基、氧杂硫杂环己基、噁唑烷基、噻唑烷基、吡唑烷基、咪唑啉啶等。
[0196]
除另有规定外，术语“杂环烯基”单环、不饱和的如上文定义的“杂环基”或“杂环”，环原子定义同上，即包含4-12个环原子(“4-12元杂环烯基”)，杂原子数量为1个、2个、3个或4个(1-4个)，优选1个、2个或3个(1-3个)，其中杂原子各自独立地选自n、o或s。优选包含4-10个环原子(“4-10元杂环烯基”)，进一步优选包含4-8个环原子(“4-8元杂环烯基”)，更进一步优选包含4-6个环原子(“4-6元杂环烯基”)，更进一步优选包含5-6个环原子(“5-6元杂环烯基”)。在某些实施例中，杂环烯基的每个例子独立地是可任选取代的，例如，未取代的(一种“未取代的杂环烯基”)或被一个或多个取代基取代的(一种“取代的杂环烯基”)。
[0197]
除另有规定外，术语“芳基”或“芳环基”表示含有6-16个碳原子，或6-14个碳原子，或6-12个碳原子，或6-10个碳原子的单环、双环和三环的芳香碳环体系，优选6-10个碳原子，术语“芳基”可以和术语“芳香环”交换使用。芳基基团的实例可以包括但不限于苯基、萘基、蒽基、菲基或芘基等。
[0198]
除另有规定外，术语“杂芳基”或“杂芳环基”表示含有5-16元结构，优选5-14元结构、5-12元结构、5-10元结构、5-8元结构，更优选5-6元结构的芳香单环、双环或者多环环状系统，其中1个、2个、3个或更多个环原子为杂原子且其余原子为碳，杂原子独立地选自o、n或s，杂原子数量优选为1个、2个或3个。双环或多环杂芳基包括稠环杂芳基。杂芳基的实例包括但不限于呋喃基、噻吩基、噁唑基、噻唑基、异噁唑基、噁二唑基、噻二唑基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、三唑基、四唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、硫代二唑基、三嗪基、酞嗪基、喹啉基、异喹啉基、喋啶基、嘌呤基、吲哚基、异吲哚基、吲唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并吡啶基、苯并嘧啶基、苯并吡嗪基、苯并咪唑基、苯并酞嗪基、吡咯并[2,3-b]吡啶基、咪唑并[1,2-a]吡啶基、吡唑并[1,5-a]吡啶基、吡唑并[1,5-a]嘧啶基、咪唑并[1,2-b]哒嗪基、[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪基、[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶基、[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶基等。
[0199]
术语“亚烷基”是指如上所定义的二价烷基。术语“亚烯基”是指如上所定义的二价烯基。术语“亚炔基”是指如上所定义的二价炔基。术语“亚环烷基”是指如上所定义的二价环烷基。术语“亚杂环基”是指如上所定义的二价杂环基。术语“亚芳基”是指如上所定义的二价芳基。术语“亚杂芳基”是指如上所定义的二价亚杂芳基。
[0200]
除另有规定外，术语“药学上可接受的盐”或“可药用盐”是指在合理医学判断范围内适用于与哺乳动物特别是人的组织接触而无过度毒性、刺激、过敏反应等并与合理的效益/风险比相称的盐。可以在本发明化合物的最终分离和纯化期间原位制备所述盐，或单独通过将游离碱或游离酸与合适的试剂反应制备所述盐。
[0201]
本发明化合物还包括其“同位素衍生物”，除另有规定外，术语“同位素衍生物”是指本发明的化合物可以以同位素示踪的或富集形式存在，含有一个或多个原子，这些原子的原子量或质量数不同于自然界中发现的最大量的原子的原子量或质量数。同位素可以是放射性或非放射性的同位素。通常用作同位素标记的同位素是：氢同位素，2h和3h；碳同位素：
13
c和
14
c；氯同位素：
35
cl和
37
cl；氟同位素：
18
f；碘同位素：
123
i和
125
i；氮同位素：
13
n和
15
n；氧同位素：
15
o,
17
o和
18
o和硫同位素
35
s。这些同位素标记化合物可以用来研究药用分子在组
织中的分布情况。尤其是3h和
13
c，由于它们容易标记且方便检测，运用更为广泛。某些重同位素，比如重氢(2h)，的取代能增强代谢的稳定性，延长半衰期从而达到减少剂量的目的而提供疗效优势的。同位素标记的化合物一般从已被标记的起始物开始，用已知的合成技术象合成非同位素标记的化合物一样来完成其合成。
[0202]
本发明化合物还包括其溶剂合物，除另有规定外术语“溶剂合物”、“溶剂化物”意指本发明化合物与一个或多个溶剂分子(无论有机的还是无机的)的物理缔合。该物理缔合包括氢键。在某些情形中，例如当一个或多个溶剂分子纳入结晶固体的晶格中时，溶剂化物将能够被分离。溶剂化物中的溶剂分子可按规则排列和/或无序排列存在。溶剂合物可包含化学计量或非化学计量的溶剂分子。“溶剂合物”涵盖溶液相和可分离的溶剂合物。溶剂化方法是本领域公知的。
[0203]
除另有规定外，术语“立体异构体”是指具有相同化学构造，但原子或基团在空间上排列方式不同的化合物。立体异构体包括对映异构体、非对映异构体、构象异构体(旋转异构体)、几何异构体(顺/反)异构体、阻转异构体等。所得的任何立体异构体的混合物可以依据组分物理化学性质上的差异被分离成纯的或基本纯的几何异构体，对映异构体，非对映异构体，例如，通过色谱法和/或分步结晶法。
[0204]
除另有规定外，术语“互变异构体”是指具有不同能量的可通过低能垒互相转化的结构异构体。若互变异构是可能的(如在溶液中)，则可以达到互变异构体的化学平衡。例如，质子互变异构体(也称为质子转移互变异构体)包括通过质子迁移来进行的互相转化，如酮-烯醇异构化和亚胺-烯胺异构化。价键互变异构体包括通过一些成键电子的重组来进行的互相转化。
[0205]
除非其他方面表明，本发明所描述的结构式包括所有的同分异构形式(如对映异构，非对映异构，和几何异构(或构象异构))：例如含有不对称中心的r、s构型，双键的(z)、(e)异构体，和(z)、(e)的构象异构体。因此，本发明的化合物的单个立体化学异构体或其对映异构体，非对映异构体，或几何异构体(或构象异构体)的混合物都属于本发明的范围。
[0206]
本发明化合物还包括其前药，除另有规定外，术语“前药”是指在体内转化为母体药物的药物。前药通常是有用的，其可以改善一些确定的、不合需要的物理或生物学性质。物理性能通常是相关的溶解度(过高或不足的脂质或水溶性)或稳定性，而有问题的生物学特性包括代谢太快或生物利用率差，这本身可能与物理化学性质相关。例如，它们可以通过口服而被生物利用，而母体则不能。与母体药物相比，前药在药物组合物中的溶解度也有所提高。前药的一个例子，但不限于此，可以是任何本发明的化合物，其作为酯(“前药”)给药，以促进穿过细胞膜的传递，其中水溶性对迁移性有害，但一旦进入细胞内水溶性是有益的，其随后被代谢水解成羧酸，即活性实体。前药的另一个例子可以是与酸基团结合的短肽(聚氨基酸)，其中肽被代谢以显示活性部分。
[0207]
除另有规定外，术语“任选取代”指所述基团的可取代位点的氢未被取代，或被一个或多个取代基所取代，所述取代基优先选自下组的取代基：卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、氨基、叠氮基、氧代基、羧基、c
2-6
链烯基、c
2-6
炔基、c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基、c
3-10
环烷基、c
3-10
环烷基磺酰基、3-10元杂环烷基、c
6-14
芳基或5-10元杂芳环基，其中，所述c
2-6
链烯基、c
2-6
炔基、c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基、c
3-10
环烷基、c
3-10
环烷基磺酰基、3-10元杂环烷基、c
6-14
芳基或5-10元杂芳环基可任选地被选自卤素、羟基、氨基、氰基、c
1-6
烷基或c
1-6
烷氧基中的一个或多个
所取代，所述氧代基是指相同取代位的两个h被同一个o替代形成双键。
[0208]
制备实施例、实施例及本文其他地方使用的缩写词是：
[0209]
(boc)2o二碳酸二叔丁酯
[0210]
boc叔丁氧基羰基
[0211]
cdcl3氘代氯仿
[0212]
dmso-d6氘代二甲基亚砜
[0213]
dcm二氯甲烷
[0214]
diean,n-二异丙基乙胺
[0215]
dmfn,n-二甲基甲酰胺
[0216]
ea乙酸乙酯
[0217]
esi电喷雾电离
[0218]
g克
[0219]
h小时
[0220]
hplc高效液相色谱
[0221]
l升
[0222]
lc液相色谱
[0223]
ml毫升
[0224]
meoh甲醇
[0225]
mg毫克
[0226]
ml毫升
[0227]
mm毫米
[0228]
mmol毫摩尔
[0229]
ms质谱
[0230]
mhz兆赫
[0231]
nah氢化钠
[0232]
nabh4硼氢化钠
[0233]
nmr核磁共振
[0234]
nah氢化钠
[0235]
nbsn-溴代丁二酰亚胺
[0236]
nisn-碘代丁二酰亚胺
[0237]
pd(dppf)cl2[1,1
′‑
双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(ii)
[0238]
pe石油醚
[0239]
tfa三氟乙酸
[0240]
thf四氢呋喃
[0241]
tlc薄层层析
[0242]
tea三乙胺
[0243]
xphos-pd-g3甲烷磺酸(2-二环己基膦基-2',4',6'-三-异丙基-1,1'-联苯基)(2'-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(ii)
[0244]
本发明的有益效果为：
[0245]
本发明设计了一类结构新颖的化合物，为hpk1抑制剂类的药物的发展提供了一个新的方向。体外酶活抑制活性研究显示，这些化合物对hpk1都具有较强的抑制作用，可作为治疗hpk1相关的疾病的前景化合物。此外，本发明研究了特定的合成方法，该合成方法工艺简单，操作便捷，利于规模化工业生产和应用。
具体实施方式
[0246]
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或者按照制造厂商所建议的条件。除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域专业人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法之中。文中所示的较佳实施方法与材料仅做示范之用。
[0247]
本发明的化合物结构是通过核磁共振(nmr)或/和液质联用色谱(lc-ms)或/和液相色谱(hplc)来确定的。nmr的测定使用的仪器是avance iii 600mhz；lc-ms使用的仪器是waters arc/qda；hplc使用的仪器是waters e2695_2998。
[0248]
本发明实施例中的起始原料是已知的并且可以在市场上买到，或者可以采用或按照本领域已知的方法来合成。
[0249]
中间体的制备：
[0250]
中间体制备例1：(s)-3-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯氧基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯的合成
[0251][0252]
步骤1：(s)-3-(4-溴苯氧基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯的合成
[0253]
在250ml反应瓶中加入(s)-3-羟基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(5.4g，28.8mmol)，dmf(50ml)，然后控制温度0～5℃下缓慢加入60％ nah(1.7g，42.5mmol)，添加完成后将反应体系升至室温搅拌0.5h，随后加入1-溴-4-氟苯(5.0g，28.6mmol)。将反应体系升温至100℃反应2h，lc-ms监控反应完毕。加入饱和氯化铵溶液(100ml)淬灭反应，然后乙酸乙酯(250ml)萃取，分液，有机相水洗一次后减压浓缩至干，残留物通过柱层析纯化(pe:ea＝2:1，v/v)得(s)-3-(4-溴苯氧基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(浅黄色油状物，7.3g，产率：74.6％)。esi-ms(m/z):342.06/344.06[m h]

。
[0254]
步骤2：(s)-3-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯氧基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯的合成
[0255]
在250ml反应瓶中依次加入1,4-二氧六环(100ml)、(s)-3-(4-溴苯氧基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(3g，8.8mmol)、联硼酸频那醇酯(3.3g，13.0mmol)、pd(dppf)cl2(0.65g，0.89mmol)和醋酸钾(1.7g，17.3mmol)，在氮气保护下将反应体系升温至100℃反应5h。lc-ms监控反应完成后，将反应体系冷却至室温，加入水(100ml)，随后用乙酸乙酯(250ml)萃取，有机相用饱和食盐水洗涤，然后减压浓缩至干，浓缩物通过柱层析纯化(pe:ea＝10:1～3：1，v/v)，得到(s)-3-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯氧基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(浅黄色油状物，3.1g，90.5％)。esi-ms(m/z):390.24[m h]

。
[0256]
中间体制备例2：(r)-3-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯氧基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯的合成
[0257][0258]
合成方法同中间体制备例1，只是用(r)-3-羟基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯代替(s)-3-羟基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯，得到(r)-3-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯氧基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯，收率为89.2％。esi-ms(m/z):390.24[m h]

。
[0259]
中间体制备例3：4-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的合成
[0260][0261]
合成方法同中间体制备例1，只是用4-羟基哌啶-1-羧酸叔丁酯代替(s)-3-羟基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯，得到4-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯，收率为95％。esi-ms(m/z):404.25[m h]

。
[0262]
实施例1
[0263]
(s)-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-3-(4-(吡咯烷-3-基氧基)苯基)-1,5-二氢异苯并吡喃[3,4-d]吡咯并[2,3-b]吡啶(1)的合成：
[0264][0265]
步骤1：2-溴-5-(4-甲基哌嗪-1-基)苯甲酸甲酯的合成
[0266]
在500ml反应瓶中依次加入二氯甲烷(100ml)和3-(4-甲基哌嗪-1-基)苯甲酸甲酯(5g，21.3mmol)，然后控制温度0～5℃下缓慢加入nbs(4.56g，25.6mmol)，添加完成后将反应体系升至室温，并在室温下反应4h，tlc监控反应完毕，静置反应液，析出白色固体，抽滤
收集固体，并用少量的二氯甲烷进行洗涤，得2-溴-5-(4-甲基哌嗪-1-基)苯甲酸甲酯(白色固体，4.4g，产率：65.8％)。esi-ms(m/z):313.05/315.05[m h]

。
[0267]
步骤2：5-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯甲酸甲酯的合成
[0268]
在500ml反应瓶中依次加入1,4-二氧六环(100ml)、2-溴5-(4-甲基哌嗪-1-基)苯甲酸甲酯(4.4g，14mmol)、联硼酸频那醇酯(5.35g，21.1mmol)、pd(dppf)cl2(1.03g，1.4mmol)和醋酸钾(4.13g，42mmol)，在氮气保护下将反应体系升温至100℃反应5h。lcms监控反应完成后，将反应体系冷却至室温，加入水(30ml)，随后用乙酸乙酯(50ml
×
3)萃取，合并有机相并用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥有机相，然后浓缩至干，浓缩物通过柱层析纯化(dcm:meoh＝20:1，v/v)，得到5-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯甲酸甲酯(深棕色油状物，4.54g，89.7％)。esi-ms(m/z):361.22[m h]

。
[0269]
步骤3：2-(4-氟-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)-5-(4-甲基哌嗪-1-基)苯甲酸甲酯的合成
[0270]
在100ml反应瓶中依次加入1,4-二氧六环(30ml)、水(6ml)、5-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯甲酸甲酯(3.2g，8.88mmol)、5-溴-4-氟-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶(1.59g，7.4mmol)、pd(dppf)cl2(541mg，0.74mmol)和碳酸钾(2.56g，18.5mmol)，反应体系在氮气保护下升温至90℃反应5h。lcms监控反应结束后将反应体系冷却至室温，加入水(30ml)，随后将反应液用乙酸乙酯(50ml
×
3)萃取，合并有机相并用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥后浓缩至干，浓缩物通过柱层析纯化(dcm:meoh＝20:1，v/v)，得到2-(4-氟-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)-5-(4-甲基哌嗪-1-基)苯甲酸甲酯(0.96g，产率：35.2％)。esi-ms(m/z):369.16[m h]

。
[0271]
步骤4：(2-(4-氟-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)-5-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)甲醇的合成
[0272]
在100ml反应瓶中依次加入四氢呋喃(20ml)和2-(4-氟-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)-5-(4-甲基哌嗪-1-基)苯甲酸甲酯(0.96g，2.61mmol)，控制温度0～5℃下缓慢加入四氢铝锂(297mg，7.83mmol)，随后将反应体系升至室温，在室温下反应2h。lcms监控反应完成后向反应体系中加入冰水(20ml)淬灭反应，抽滤，滤饼用二氯甲烷洗涤，随后将滤液减压浓缩溶剂至干，浓缩物通过柱层析纯化(dcm:meoh＝10:1，v/v)，得(2-(4-氟-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)-5-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)甲醇(360mg，产率：40.5％)。esi-ms(m/z):341.17[m h]

。
[0273]
步骤5：7-(4-甲基哌嗪-1-基)-1,5-二氢异苯并吡喃[3,4-d]吡咯并[2,3-b]吡啶的合成
[0274]
在50ml反应瓶中依次加入dmf(10ml)和(2-(4-氟-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)-5-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)甲醇(360mg，1.06mmol)，控制温度0～5℃下缓慢加入nah(85mg，2.11mmol)，随后将反应体系升至60℃反应2h。lc-ms检测反应完成后冷却至室温，向反应液中加水(20ml)淬灭反应，随后用乙酸乙酯(30ml
×
3)萃取反应液，合并有机相，经无水硫酸钠干燥后浓缩至干，得7-(4-甲基哌嗪-1-基)-1,5-二氢异苯并吡喃[3,4-d]吡咯并[2,3-b]吡啶粗品(300mg)。esi-ms(m/z):321.16[m h]

。
[0275]
步骤6：3-碘-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-1,5-二氢异苯并吡喃[3,4-d]吡咯[2,3-b]吡
啶的合成
[0276]
在50ml反应瓶中依次加入dmf(10ml)、7-(4-甲基哌嗪-1-基)-1,5-二氢异苯并吡喃[3,4-d]吡咯并[2,3-b]吡啶(300mg，粗品)和nis(211mg，0.94mmol)，并在室温下反应3h。tlc监控反应完成后，向反应液中加入水(30ml)，随后将反应液用乙酸乙酯(30
×
2ml)萃取，合并有机相并用水(50ml
×
2)和饱和食盐水洗涤，有机相减压浓缩至干即得3-碘-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-1,5-二氢异苯并吡喃[3,4-d]吡咯[2,3-b]吡啶粗品(350mg)。esi-ms(m/z):447.06[m h]

。
[0277]
步骤7：3-碘-7-(4-甲基哌嗪-1-基)异苯并吡喃[3,4-d]吡咯并[2,3-b]吡啶-1(5h)-羧酸叔丁酯的合成
[0278]
在50ml反应瓶中依次加入二氯甲烷(10ml)、3-碘-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-1,5-二氢异苯并吡喃[3,4-d]吡咯[2,3-b]吡啶(350mg，粗品)、(boc)2o(257mg，1.18mmol)和tea(238mg，2.35mmol)，室温下反应3h。tlc监控反应完成后向反应体系中加水(20ml)，将反应液用二氯甲烷(30ml
×
3)萃取，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，有机相浓缩至干，浓缩物通过柱层析纯化(dcm:meoh＝20:1，v/v)，得3-碘-7-(4-甲基哌嗪-1-基)异苯并吡喃[3,4-d]吡咯并[2,3-b]吡啶-1(5h)-羧酸叔丁酯(220mg)。esi-ms(m/z):547.11[m h]

。
[0279]
步骤8：(s)-3-(4-((1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-3-基)氧基)苯基)-7-(4-甲基哌嗪-1-基)异苯并吡喃[3,4-d]吡咯并[2,3-b]吡啶-1(5h)-羧酸叔丁酯的合成
[0280]
在50ml反应瓶中依次加入水(1ml)、1,4-二氧六环(5ml)、3-碘-7-(4-甲基哌嗪-1-基)异苯并吡喃[3,4-d]吡咯并[2,3-b]吡啶-1(5h)-羧酸叔丁酯(220mg，0.40mmol)、中间体1(235mg，0.61mmol)、xphos-pd-g3(33.7mg，0.04mmol)和磷酸钾(255mg，1.2mmol)，反应体系在氮气保护下，升温至90℃反应6h。lcms监控反应完成后，减压浓缩除去溶剂，浓缩物通过柱层析纯化(dcm:meoh＝20:1，v/v)纯化，得(s)-3-(4-((1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-3-基)氧基)苯基)-7-(4-甲基哌嗪-1-基)异苯并吡喃[3,4-d]吡咯并[2,3-b]吡啶-1(5h)-羧酸叔丁酯(160mg，产率：58.7％)。esi-ms(m/z):682.75[m h]

。
[0281]
步骤9：(s)-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-3-(4-(吡咯烷-3-基氧基)苯基)-1,5-二氢异苯并吡喃[3,4-d]吡咯并[2,3-b]吡啶的合成
[0282]
在50ml反应瓶中依次加入盐酸乙醇溶液(2m，10ml)和(s)-3-(4-((1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-3-基)氧基)苯基)-7-(4-甲基哌嗪-1-基)异苯并吡喃[3,4-d]吡咯并[2,3-b]吡啶-1(5h)-羧酸叔丁酯(160mg，0.23mmol)，将反应置于50℃下反应3h。lc-ms监控反应完成后，将反应液减压浓缩至干，随后加入乙酸乙酯(50ml)，饱和碳酸氢钠溶液(20ml)，分液，有机相减压浓缩至干，浓缩物通过柱层析纯化(dcm:meoh＝10:1，v/v)纯化，得到(s)-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-3-(4-(吡咯烷-3-基氧基)苯基)-1,5-二氢异苯并吡喃[3,4-d]吡咯并[2,3-b]吡啶(33mg，产率：29.8％)。esi-ms(m/z):482.25[m h]

。1h nmr(600mhz,cdcl3)δ:1.155(d,j＝6hz,1h),1.302-1.346(m,2h),2.213-2.135(m,2h),2.385(s,3h),2.647-2.663(m,4h),3.184-3.224(m,2h),3.271-3.286(m,4h),3.429(d,j＝5.4hz,1h),5.107(s,1h),5.183(s,2h),6.855(d,j＝1.2hz,1h),6.975(d,j＝6hz,2h),7.051(dd,j＝8.4,2.4hz,1h),7.289(s,1h),7.589(d,j＝8.4hz,2h),7.724(d,j＝8.4hz,1h),8.577-8.583(m,1h)。
[0283]
实施例2
[0284]
n,n-二甲基-4-(7-(4-甲基哌嗪-1-基)-1,5-二氢异苯并吡喃[3,4-d]吡咯并[2,
基)苯甲酸甲酯(5)的合成：
[0297][0298]
实施例5的合成方法同实施例1的合成方法，第8步用4-甲氧羰基苯硼酸代替中间体制备例1，得到4-(7-(4-甲基哌嗪-1-基)-1,5-二氢异苯并吡喃[3,4-d]吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯甲酸甲酯(0.03g，收率为47％)。esi-ms(m/z):455.20[m h]

。
[0299]
实施例6
[0300]
n、n-二甲基-4-(7-(哌嗪-1-基)-1,5-二氢异苯并吡喃并[3,4-d]吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯甲酰胺(7)的合成
[0301][0302]
合成方法同实施例1的合成方法，第一步用4-(3-(甲氧基羰基)苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯代替3-(4-甲基哌嗪-1-基)苯甲酸甲酯，得到n、n-二甲基-4-(7-(哌嗪-1-基)-1,5-二氢异苯并吡喃并[3,4-d]吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯甲酰胺。esi-ms(m/z):454.22[m h] ，1h nmr(600mhz,cdcl3)δ9.27(s,1h),8.65(s,1h),7.68(d,j＝8.0hz,3h),7.46(d,j＝8.2hz,2h),7.28(d,j＝9.1hz,1h),6.97(dd,j＝8.5,2.4hz,1h),6.70(d,j＝2.3hz,1h),5.17(s,2h),3.24
–
3.18(m,4h),3.08(dd,j＝10.8,5.7hz,6h),1.26(s,4h),0.87(d,j＝7.2hz,1h).
[0303]
实施例7
[0304]
4-(7-(哌嗪-1-基)-1,5-二氢异苯并吡喃[3,4-d]吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯甲酸甲酯(15)的合成
[0305][0306]
合成方法同实施例1的合成方法，第一步用4-(3-(甲氧基羰基)苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯代替3-(4-甲基哌嗪-1-基)苯甲酸甲酯，第八步用4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苯甲酸甲酯代替中间体制备例1，得到4-(7-(哌嗪-1-基)-1,5-二氢异苯并吡喃[3,4-d]吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯甲酸甲酯(0.04g，收率为42％)。esi-ms(m/z):441.18[m h]

；1h nmr(600mhz，dmso-d6)δ12.07(s,1h),8.69(s,1h),7.97(d,j＝8.2hz,2h),7.82(d,j＝8.1hz,2h),7.77(d,j＝8.6hz,1h),7.72(s,1h),6.98(d,j＝8.4hz,1h),
6.86(s,1h),5.22(s,2h),3.86(d,j＝30.4hz,3h),3.11(s,4h),2.87(s,4h)。
[0307]
实施例8
[0308]
(3-(二甲基氨基)氮杂环丁烷-1-基)(4-(7-(哌嗪-1-基)-1,5-二氢异苯并吡喃[3,4-d]吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯基)甲酮(16)的合成
[0309][0310]
步骤1：4-(7-(4-(叔丁氧基羰基)哌嗪-1-基)-1,5-二氢异苯并吡喃[3,4-d]吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯甲酸的合成
[0311]
在250ml反应瓶中依次加入7-(4-(叔丁氧羰基)哌嗪-1-基)-3-(4-(甲氧羰基)苯基)异苯并吡喃[3,4-d]吡咯并[2,3-b]吡啶-1(5h)羧酸叔丁酯(450mg，0.703mmol)，thf(8ml)，h2o(4ml)，甲醇(4ml)，氢氧化钠(85mg，2.13mmol)，将反应液升温至60℃反应3h。lcms显示反应完毕，后处理，减压浓缩除掉thf以及甲醇，浓缩物用3n盐酸调节溶液的ph为5，纯化得4-(7-(4-(叔丁氧基羰基)哌嗪-1-基)-1,5-二氢异苯并吡喃[3,4-d]吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯甲酸(400mg)esi-ms(m/z):527.22[m h]

。
[0312]
步骤2：4-(3-(4-(4-(3-二甲基氨基)氮杂环丁烷-1-羰基)苯基)-1,5-二氢异苯并吡喃[3,4-d]吡咯并[2,3-b]吡啶-7-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的合成
[0313]
在250ml反应瓶中依次加入4-(7-(4-(叔丁氧基羰基)哌嗪-1-基)-1,5-二氢异苯并吡喃[3,4-d]吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯甲酸(100mg，0.190mmol)、n,n-二甲基氮杂环丁烷-3-胺盐酸盐(40mg，0.231mmol)、dmf(10ml)，tea(100mg，0.988mmol)、tbtu(68mg，0.212mmol)，将反应液在室温下反应1.5h。lcms显示反应完毕。后处理，加入水(30ml)，乙酸乙酯(100ml)，萃取，分液，得到的有机相分别用水以及饱和食盐水洗涤一次后，减压浓缩至干，浓缩物进行柱层析进行纯化(dcm:meoh＝20:1(v/v))，得到4-(3-(4-(4-(3-二甲基氨基)氮杂环丁烷-1-羰基)苯基)-1,5-二氢异苯并吡喃[3,4-d]吡咯并[2,3-b]吡啶-7-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(80mg)。esi-ms(m/z):609.31[m h]

。
[0314]
步骤3：(3-(二甲基氨基)氮杂环丁烷-1-基)(4-(7-(哌嗪-1-基)-1,5-二氢异苯并吡喃[3,4-d]吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯基)甲酮的合成
[0315]
合成方法同实施例1中的步骤9，得到(3-(二甲基氨基)氮杂环丁烷-1-基)(4-(7-(哌嗪-1-基)-1,5-二氢异苯并吡喃[3,4-d]吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯基)甲酮(0.06g，收率为58％)。esi-ms(m/z):509.26[m h]

；1h nmr(600mhz，dmso-d6)δ12.01(s,1h),8.69(s,1h),7.76(dd,j＝18.8,8.5hz,3h),7.66(d,j＝8.3hz,3h),6.98(d,j＝8.7hz,1h),6.87(s,1h),5.21(s,2h),4.38(s,1h),4.16(s,1h),4.08(s,1h),3.86(s,1h),3.12(dd,j＝10.9,5.9hz,5h),2.96-2.81(m,4h),2.11(s,6h)。
[0316]
实施例9
[0317]
n-(环丙基甲基)-4-(7-(哌嗪-1-基)-1,5-二氢异苯并吡喃[3,4-d]吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯甲酰胺(17)的合成
[0318][0319]
合成方法同实施例8的合成方法，得到n-(环丙基甲基)-4-(7-(哌嗪-1-基)-1,5-二氢异苯并吡喃[3,4-d]吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯甲酰胺(0.03g，收率为38％)。esi-ms(m/z):480.23[m h]

；1h nmr(600mhz，dmso-d6)δ:12.01(s,1h),8.69(s,1h),8.55(t,j＝5.6hz,1h),7.88(t,j＝10.3hz,2h),7.83-7.70(m,3h),7.66(s,1h),6.98(dd,j＝8.6,2.0hz,1h),6.87(s,1h),5.21(s,2h),3.18(dd,j＝18.3,12.0hz,6h),2.92(s,4h),1.08-1.06(m,1h),0.54-0.37(m,2h),0.35-0.18(m,2h).
[0320]
实施例10
[0321]
(4-(7-(哌嗪-1-基)-1,5-二氢异苯并吡喃[3,4-d]吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯基)(2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)甲酮(18)的合成
[0322][0323]
合成方法同实施例8的合成方法，得到(4-(7-(哌嗪-1-基)-1,5-二氢异苯并吡喃[3,4-d]吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯基)(2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)甲酮(0.04g，收率为42％)。esi-ms(m/z):508.23[m h]

；1h nmr(600mhz，dmso-d6)δ:12.01(s,1h),8.68(s,1h),7.75(dd,j＝13.7,8.5hz,3h),7.69-7.60(m,3h),6.97(d,j＝8.4hz,1h),6.86(s,1h),5.21(s,2h),4.71(s,4h),4.57(s,2h),4.24(s,2h),3.10(s,4h),2.85(s,4h).
[0324]
实施例11
[0325]
n-((二甲氨基)(3-(4-(3-(二甲基氨基)氮杂环丁烷-1-羰基)苯基)-7-(哌嗪-1-基)异苯并吡喃[3,4-d]吡咯并[2,3-b]吡啶-1-(5h)-基)亚甲基)-n-甲基甲胺(19)的合成
[0326][0327]
步骤1：n-((7-(4-(叔丁氧基羰基)哌嗪-1-基)-3-(4-(3-(二甲基氨基)氮杂环丁烷-1-羰基)苯基)异苯并吡喃[3,4-d]吡咯并[2,3-b]吡啶-1-(5h)-基)(二甲氨基)亚甲基)-n-甲基甲胺的合成
[0328]
在250ml反应瓶中依次加入4-(7-(4-(叔丁氧基羰基)哌嗪-1-基)-1,5-二氢异苯并吡喃[3,4-d]吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯甲酸(100mg，0.190mmol)、n,n-二甲基氮杂环
丁烷-3-胺盐酸盐(40mg，0.231mmol)、dmf(10ml)，tea(100mg，0.988mmol)、hatu(110mg，0.290mmol)，将反应液在室温下反应1.5h。lcms显示反应完毕。后处理，加入水(30ml)，乙酸乙酯(100ml)，萃取，分液，得到的有机相分别用水以及饱和食盐水洗涤一次后，减压浓缩至干，浓缩物进行柱层析进行纯化(dcm:meoh＝20:1(v/v))，得到n-((7-(4-(叔丁氧基羰基)哌嗪-1-基)-3-(4-(3-(二甲基氨基)氮杂环丁烷-1-羰基)苯基)异苯并吡喃[3,4-d]吡咯并[2,3-b]吡啶-1-(5h)-基)(二甲氨基)亚甲基)-n-甲基甲胺(50mg)。esi-ms(m/z):707.40[m h]

。
[0329]
步骤2：n-((二甲氨基)(3-(4-(3-(二甲基氨基)氮杂环丁烷-1-羰基)苯基)-7-(哌嗪-1-基)异苯并吡喃[3,4-d]吡咯并[2,3-b]吡啶-1-(5h)-基)亚甲基)-n-甲基甲胺的合成
[0330]
合成方法同实施例1中的步骤9，得到n-((二甲氨基)(3-(4-(3-(二甲基氨基)氮杂环丁烷-1-羰基)苯基)-7-(哌嗪-1-基)异苯并吡喃[3,4-d]吡咯并[2,3-b]吡啶-1-(5h)-基)亚甲基)-n-甲基甲胺(0.02g，收率为43％)。esi-ms(m/z):607.35[m h]

。
[0331]
实施例12
[0332]
n-(2-(二甲基氨基)乙基)-4-(7-(哌嗪-1-基)-1,5-二氢异苯并吡喃[3,4-d]吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯甲酰胺(20)的合成
[0333][0334]
合成方法同实施例8的合成方法，得到n-(2-(二甲基氨基)乙基)-4-(7-(哌嗪-1-基)-1,5-二氢异苯并吡喃[3,4-d]吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯甲酰胺(0.07g，收率为58％)。esi-ms(m/z):497.26[m h]

；1h nmr(600mhz，dmso-d6)δ:12.01(s,1h),8.68(s,1h),8.36(t,j＝5.3hz,1h),7.86(d,j＝8.1hz,2h),7.75(dd,j＝14.2,8.5hz,3h),7.65(s,1h),6.97(d,j＝7.5hz,1h),6.86(s,1h),5.20(s,2h),3.39-3.37(m,4h),3.10(s,3h),2.85(s,3h),2.43(t,j＝6.8hz,2h),2.21(s,6h)。
[0335]
实施例13
[0336]
(2-(二甲基氨基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)(4-(7-(哌嗪-1-基)-1,5-二氢异苯并吡喃[3,4-d]吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯基)甲酮(21)的合成
[0337][0338]
合成方法同实施例8的合成方法，得到(2-(二甲基氨基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)(4-(7-(哌嗪-1-基)-1,5-二氢异苯并吡喃[3,4-d]吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯基)甲酮(0.06g，收率为48％)。esi-ms(m/z):577.32[m h]

；1h nmr(600mhz，dmso-d6)δ:11.96(s,1h),8.68(s,1h),7.76(d,j＝8.7hz,1h),7.71(d,j＝7.9hz,2h),7.62(s,1h),7.38(d,j＝
7.9hz,2h),6.97(d,j＝8.1hz,1h),6.85(s,1h),5.21(s,2h),3.10(s,3h),2.85(s,3h),2.63(s,3h),2.00(d,j＝17.6hz,8h),1.53(d,j＝36.0hz,7h),1.23(d,j＝16.1hz,3h)。
[0339]
实施例14
[0340]
氮杂环丁烷-1-基(4-(7-(哌嗪-1-基)-1,5-二氢异苯并吡喃[3,4-d]吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯基)甲酮(22)的合成
[0341][0342]
合成方法同实施例8的合成方法，得到氮杂环丁烷-1-基(4-(7-(哌嗪-1-基)-1,5-二氢异苯并吡喃[3,4-d]吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯基)甲酮(0.04g，收率为45％)。esi-ms(m/z):466.22[m h]

；1h nmr(600mhz，dmso-d6)δ:12.00(s,1h),8.68(s,1h),7.75(dd,j＝17.2,8.4hz,3h),7.64(d,j＝8.2hz,3h),6.97(d,j＝8.5hz,1h),6.86(s,1h),5.21(s,2h),4.39(s,2h),4.08(s,2h),3.10(s,4h),2.85(s,4h),2.34-2.23(m,2h).
[0343]
实施例15
[0344]
((1s,4s)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)(4-(7-(哌嗪-1-基)-1,5-二氢异苯并吡喃[3,4-d]吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯基)甲酮(23)的合成
[0345][0346]
合成方法同实施例8的合成方法，得到((1s,4s)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)(4-(7-(哌嗪-1-基)-1,5-二氢异苯并吡喃[3,4-d]吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯基)甲酮(0.05g，收率为51％)。esi-ms(m/z):508.23[m h]

；1h nmr(600mhz，dmso-d6)δ:12.00(s,1h),8.68(s,1h),7.82
–
7.69(m,3h),7.64(s,1h),7.58(d,j＝7.5hz,1h),7.52(d,j＝7.8hz,1h),6.97(d,j＝6.6hz,1h),6.86(s,1h),5.21(s,2h),4.86-4.51(m,2h),3.96-3.75(m,3h),3.08(dd,j＝23.3,18.3hz,4h),2.85(d,j＝4.6hz,5h),1.95-1.78(m,2h)。
[0347]
实施例16
[0348]
((1r,4r)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)(4-(7-(哌嗪-1-基)-1,5-二氢异苯并吡喃[3,4-d]吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯基)甲酮(24)的合成
[0349][0350]
合成方法同实施例8的合成方法，得到((1r,4r)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)(4-(7-(哌嗪-1-基)-1,5-二氢异苯并吡喃[3,4-d]吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯基)甲酮(0.03g，收率为45％)。esi-ms(m/z):508.23[m h]

；1h nmr(600mhz，dmso-d6)δ:12.00(s,1h),8.68(s,1h),7.82
–
7.69(m,3h),7.64(s,1h),7.58(d,j＝7.5hz,1h),7.52(d,j＝7.8hz,1h),6.97(d,j＝6.6hz,1h),6.86(s,1h),5.21(s,2h),4.86-4.51(m,2h),3.96-3.75(m,3h),3.08(dd,j＝23.3,18.3hz,4h),2.85(d,j＝4.6hz,5h),1.95-1.78(m,2h)。
[0351]
实施例17
[0352]
n、n，2-三甲基-4-(7-(哌嗪-1-基)-1,5-二氢异苯并吡喃并[3,4-d]吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯甲酰胺(25)的合成
[0353][0354]
步骤1：7-(4-(叔丁氧基羰基)哌嗪-1-基)-3-(4-(二甲基氨基甲酰基)-3-甲基苯基)异苯并吡喃并[3,4-d]吡咯并[2,3-b]吡啶-1(5h)羧酸叔丁酯的合成
[0355]
在20ml反应瓶中依次加入水(1ml)、1,4-二氧六环(5ml)、7-(4-(叔丁氧基羰基)哌嗪-1-基)-3-碘异苯并吡喃并[3,4-d]吡咯并[2,3-b]吡啶-1(5h)羧酸叔丁酯(200mg，0.32mmol)、4-(二甲氨基甲酰基)-3-甲基苯基硼酸频哪醇酯(110mg，0.38mmol)、xphos-pd-g3(27mg，0.03mmol)和磷酸钾(201mg，0.95mmol)，反应体系在氮气保护下，升温至90℃反应6h。lc-ms监控反应完成后，减压浓缩除去溶剂，浓缩物通过柱层析纯化(dcm:meoh＝20:1，v/v)纯化，得7-(4-(叔丁氧基羰基)哌嗪-1-基)-3-(4-(二甲基氨基甲酰基)-3-甲基苯基)异苯并吡喃并[3,4-d]吡咯并[2,3-b]吡啶-1(5h)羧酸叔丁酯(132mg，产率：62.6％)。esi-ms(m/z):668.34[m h]

。
[0356]
步骤2：n、n，2-三甲基-4-(7-(哌嗪-1-基)-1,5-二氢异苯并吡喃并[3,4-d]吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯甲酰胺的合成
[0357]
在25ml反应瓶中依次加入盐酸乙醇溶液(2m，3ml)和7-(4-(叔丁氧基羰基)哌嗪-1-基)-3-(4-(二甲基氨基甲酰基)-3-甲基苯基)异苯并吡喃并[3,4-d]吡咯并[2,3-b]吡啶-1(5h)羧酸叔丁酯(78mg，0.12mmol)，将反应置于50℃下反应2h。lc-ms监控反应完成后，将反应液减压浓缩至干，随后加入乙酸乙酯(50ml)，饱和碳酸氢钠溶液(20ml)，分液，有机相减压浓缩去除溶剂，浓缩物通过柱层析(dcm:meoh＝10:1，v/v)纯化，得到n、n，2-三甲基-4-(7-(哌嗪-1-基)-1,5-二氢异苯并吡喃并[3,4-d]吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯甲酰胺(31mg，产率：57.4％)。esi-ms(m/z):468.23[m h]

，1h nmr(600mhz,dmso)δ11.91(s,1h),
8.67(s,1h),7.76(d,j＝8.7hz,1h),7.57(d,j＝6.0hz,2h),7.51(d,j＝7.8hz,1h),7.15(d,j＝7.8hz,1h),6.97(dt,j＝8.3,4.1hz,1h),6.86(d,j＝2.1hz,1h),5.21(s,2h),3.11
–
3.07(m,4h),3.04(s,3h),2.88
–
2.82(m,7h),2.26(s,3h),1.23(dd,j＝26.3,11.5hz,1h)。
[0358]
实施例18
[0359]
(s)-n-(2-羟丙基)-4-(7-(哌嗪-1-基)-1,5-二氢异苯并吡喃[3,4-d]吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯甲酰胺(26)的合成
[0360][0361]
合成方法同实施例8的合成方法，得到(s)-n-(2-羟丙基)-4-(7-(哌嗪-1-基)-1,5-二氢异苯并吡喃[3,4-d]吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯甲酰胺(0.02g，收率为42％)。esi-ms(m/z):484.23[m h]

；1h nmr(600mhz，dmso-d6)δ:12.00(s,1h),8.69(s,1h),8.38(d,j＝5.2hz,1h),7.88(d,j＝8.1hz,2h),7.79(d,j＝8.6hz,1h),7.74(d,j＝8.0hz,2h),7.65(s,1h),7.00(d,j＝7.5hz,1h),6.88(s,1h),5.21(s,2h),4.77(d,j＝4.6hz,1h),3.85-3.77(m,1h),3.24(d,j＝4.8hz,2h),3.17(s,4h),2.96(s,4h),1.10(d,j＝6.1hz,3h)。
[0362]
实施例19
[0363]
n、n-二甲基-4-(7-(哌嗪-1-基)-4,5-二氢-1h-苯并[c]吡咯并[2,3-h][1,6]萘啶-3-基)苯甲酰胺(27)的合成
[0364][0365]
合成方法同实施例8，得到n、n-二甲基-4-(7-(哌嗪-1-基)-4,5-二氢-1h-苯并[c]吡咯并[2,3-h][1,6]萘啶-3-基)苯甲酰胺。esi-ms(m/z):438.21[m h]

，1h nmr(600mhz,dmso)δ12.41(s,1h),9.76(d,j＝11.1hz,1h),9.37(s,1h),8.86(d,j＝9.2hz,1h),8.05(d,j＝8.2hz,2h),7.84
–
7.75(m,2h),7.59(d,j＝2.5hz,1h),7.47(d,j＝8.2hz,2h),3.39(d,j＝13.5hz,2h),3.05(s,6h),3.03
–
2.97(m,4h),1.33
–
1.21(m,4h),0.89
–
0.83(m,1h).
[0366]
参照实施例1或8的合成和操作，采用相对应的主要起始原料，制备如下实施例：
[0367][0368][0369]
生物学测试评价
[0370]
以下结合测试例进一步描述解释本发明，但这些测试例并非意味着限制本发明的范围。
[0371]
英文简写对照表：
[0372]
简写全称中文hpk1hematopoietic progenitor kinase 1造血祖细胞激酶1
mbpmvelin basic protein髓鞘碱性蛋白bsavovine serum albumin牛血清白蛋白
[0373]
测试例1
[0374]
1、实验目的：
[0375]
本实验的目的是为了检测本发明化合物对hpk1酶的抑制活性，测定方法：adp-glo酶学活性测试法(adp-glo
tm
kinase assay for hpk1)。
[0376]
2、实验材料与设备：
[0377][0378]
3、实验步骤(1)配制1x激酶缓冲液：
[0379]
1倍体积5x激酶缓冲液加4倍体积蒸馏水，稀释后1x缓冲液添加至含有50μmdtt。
[0380]
1x激酶反应缓冲液：
[0381]
40mm tris(ph 7.4)
[0382]
20mm mgcl2[0383]
0.1mg/ml bsa
[0384]
50μm dtt
[0385]
(2)待测化合物配制
[0386]
1)化合物的溶解与稀释：化合物溶于dmso，配置成10mm浓度的储备液。
[0387]
2)10mm化合物稀释100倍(ep管中稀释)，稀释后浓度为100μm。
[0388]
3)转移到384稀释板(p-05525-bc)中，进行3倍梯度稀释。
[0389]
(3)准备试验板
[0390]
用echo转移50nl化合物稀释液到384孔分析板(784075)中，最终的工作浓度为1μm-0.0508nm，共10个浓度梯度。
[0391]
(4)激酶反应
[0392]
1)在1x激酶缓冲液中制备2x酶溶液。
[0393]
2)2.5μl的2x酶加入到384孔分析板中。
[0394]
3)以1000g离心384孔分析板30s，再室温平衡10min。
[0395]
4)在1x激酶缓冲液中制备2x底物和atp混合液。
[0396]
5)384孔分析板加入2.5μl atp和底物的混合液，开始反应。1000g离心分析板30s，密封分析板，置于室温反应2h。
[0397]
6)加入4μl adp-glo试剂，室温下孵育40分钟。
[0398]
7)加入8μl激酶检测试剂，室温下孵育40分钟。
[0399]
(5)在envision 2104平板酶标仪上读取发光信号。
[0400]
(6)分别计算化合物孔、阳性对照孔和空白对照孔的平均值，化合物孔检测平均值记为signalcmpd，阳性对照孔检测平均值记为signalave_vc，空白对照空检测平均值记为signalave_vc。依据公式计算抑制率：
[0401]
％inhibition＝100-(signalcmpd-signalave_pc)/(signalave_vc-signalave_pc)
×
100。
[0402]
用graphpad8.0拟合抑制值(％)和化合物浓度对数值的非线性回归(剂量-变量斜率)，计算ic
50
值。
[0403]
y＝bottom (top-bottom)/(1 10^((logic
50-x)*hillslope))
[0404]
x：抑制浓度对数值；y：抑制率(％)
[0405]
4、实验结果：
[0406]
bg-12作为对照分子，选自百济神州专利wo2019238067a1。分子结构为：
[0407][0408]
化合物编号hpk1 ic50(nm)bg-12b1a5c
7a15b16a17a18a19a20a21b22a23b24b25b26b
[0409]
a代表ic
50
≤1nm，b代表1nm＜ic
50
≤5nm，c代表5nm＜ic
50
≤10nm。