一种用鲜罗汉果工业生产罗汉果甜苷、罗汉果糖/酒、甘露醇的方法与流程

1.本发明属于植物提取分离技术和食品领域，具体涉及一种用鲜罗汉果工业生产罗汉果甜苷、罗汉果糖/酒、甘露醇的方法。


背景技术：

2.罗汉果(siraitia grosvenorii(swingle)c.jeffrey)，英文名：fructus momordicae，葫芦科多年生藤本植物的果实，被人们誉为“神仙果，主要产于广西壮族自治区桂林市永福县龙江乡、百寿镇，龙胜各族自治县，临桂区等地。罗汉果是国家首批批准的药食两用品种之一，其主要功效是润肺止咳、生津化痰。
3.罗汉果及无籽罗汉果含有丰富的风味和营养成分，以及三萜皂苷类非糖甜味成分：葫芦素烷型三萜皂苷，主要是罗汉果甜苷v、iv、11-o-罗汉果甜苷v、赛门苷等，鲜果含量 0.3～0.5％，其中罗汉果甜苷v为主要甜味成分，无毒、低热量、高甜度、热稳定性好，其含量是评价鲜罗汉果质量好坏的主要标准；葡萄糖、果糖和蔗糖等还原糖，鲜果含量 9～14％；蛋白质、氨基酸等氨基化合物，干果含量7.1％-7.8％；脂肪酸、黄酮类化合物、维生素c以及锰、铁、镍、硒、锡、碘、钼等26种无机元素和微量元素等。
4.一、罗汉果甜苷
5.罗汉果甜苷是罗汉果果实中含有的非糖甜味成分，主要是以罗汉果醇为苷元的三萜皂苷，以罗汉果苷(mogroside)
ⅴ
、ⅳ为代表。其中，罗汉果苷
ⅴ
的甜度是蔗糖的256-344 倍，罗汉果苷ⅳ的甜度为蔗糖的126倍。
6.有甜味的罗汉果三萜皂苷主要有11-o-罗汉果苷v、新罗汉果苷、罗汉果苷v、罗汉果苷iv、异罗汉果苷v、赛门苷i、罗汉果苷vi、罗汉果苷ive、罗汉果苷iva等。
7.二、罗汉果糖
8.罗汉果糖是罗汉果甜苷与非糖甜味物质，如赤藓糖醇、阿拉伯糖、阿洛酮糖、甘露醇等复配而得的一类天然、零卡或低卡的生态绿色食品，是一种适合所有人群，特别是糖尿病、高血压、肥胖以及不宜食糖人群的糖，可作为餐桌甜味料，是一种理想的蔗糖替代品。
9.三、罗汉果保鲜后熟
10.采收后的水果仍是一个生命的有机体，还会进行休眠、水分蒸发、呼吸作用等复杂的生命活动，仍维持消耗o2、排出co2和c2h4的新陈代谢。影响水果新陈代谢活动及贮藏效果的外界因素主要是温度、气体成分、湿度。
11.温度影响水果贮藏中的物理、生化及诱变反应，是决定水果贮藏质量的重要因素。低温可以抑制水果呼吸和其它一些代谢过程，并且能减少水分子的动能，使液态水的蒸发速率降低，从而延缓衰老，保持水果的新鲜与饱满。植物细胞的代谢主要是氧化和还原反应，其中，氧气的利用率决定代谢的速度，从而影响水果贮藏的质量。对贮藏水果而言，适宜的温度、二氧化碳和氧气之间存在着拮抗和增效作用，它们之间的相互配合作用远强于某个因素的单独作用。采收后的水果中水分的损失可以引起结构、质地和表面的变化，因此减
少水分损失对于保持水果新鲜度和质量起着关键的作用。相对湿度表示环境空气的干湿程度，是影响水果贮藏质量的重要因素，它会受到温度和空气流速的影响。贮藏过程中对湿度的控制，既要考虑它对贮藏质量的影响，又必须兼顾到它对微生物活动的影响。
12.四、现有技术
13.国内对罗汉果的研究很多，涉及罗汉果的种质资源、种苗、种植、管护、化学成分研究、主要生物活性成分如罗汉果甜苷等三萜皂苷的提取分离、罗汉果浓缩汁的制备、罗汉果和罗汉果甜苷的药理毒理及终端应用等；对罗汉果的综合利用也有一定研究，对生产过程产生的废弃物进行资源化再利用制备副产品；但对罗汉果保鲜贮存与糖化后熟的研究很少，对罗汉果生物活性成分提取分离及精深加工的工业生产技术体系研究很少。
14.(一)罗汉果保鲜贮存与糖化后熟。
15.现阶段的普遍做法是待罗汉果到成熟期即采收、销售、加工，而存放的方式大部分为室外搭棚存放，或堆积于室内，短时分批销往植物提取物企业或烘烤制备干罗汉果。国内鲜罗汉果的主要生产加工企业，由于采购量大，采取直接提取加工与常规冷库存放2～3月再加工相结合的方式。上述存放方式，即常温或较长时间的常规冷库存放，代价是坏果率≥2％。常温存放虽然时间较短，一般12～25天，但条件不易控制，外部因素影响过大，坏果率高。常规冷库存放虽然保持了低温，并控制了相对湿度，但由于时间较长，仍具有较高的坏果率；且存放过程中，由于控制问题，鲜罗汉果脱水以及其他因素对内在品质的影响，所存放的鲜罗汉果难以糖化后熟，从而导致加工成品
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罗汉果甜苷的滋味口感欠缺；此外，冷藏时间不超过3个月，不利于丰产年大量、较长时间贮存鲜罗汉果，也不利于对丰产鲜罗汉果的总量进行宏观调控。对于每月生产加工3500吨的大型罗汉果生产加工企业而言，若年采购3万吨鲜罗汉果，综合提取分离加工设备的配套以及生产连续性等影响因素，则不能及时将鲜罗汉果生产加工完，导致大量坏果，直接造成重大经济损失；若直接将鲜罗汉果简单加工成提取浓缩液，由于鲜果尚未糖化后熟好，会直接导致成品罗汉果提取物的滋味口感欠缺，进而严重影响产品的销售。是否能将鲜罗汉果保鲜贮存好，会引起鲜罗汉果市场价格的大幅波动，进而影响种植户和企业的利益。
16.因此，对采收后的鲜罗汉果较长时间的保鲜贮存，并使其能正常糖化后熟，保证鲜罗汉果批量供应，进行市场调节以及保持加工的成品罗汉果甜苷、罗汉果浓缩汁、罗汉果糖等的优良品质，是罗汉果产业化过程中的一个瓶颈。目前尚无通过ε-聚赖氨酸盐酸盐与丙酸钙的混合药剂，协同臭氧气调，与低温、高湿增效，实现鲜罗汉果的长期保鲜贮存；通过调控温度和相对湿度、氧气和二氧化碳浓度，恢复与提高保鲜罗汉果的代谢并产生内源乙烯，辅以外源乙烯并诱导保鲜罗汉果产生内源乙烯共同作用催熟，实现保鲜罗汉果糖化后熟的报道。
17.现有技术关于对采收后的鲜罗汉果进行处理，包括延长存储期、保鲜、促进糖化后熟等技术方案，均不涉及通过药剂以及气体、温度和相对温度的协同作用对罗汉果长期保鲜贮存，属于短期保存；也不涉及通过加入外源乙烯在温湿度的双重影响下催熟。
18.(二)罗汉果生物活性成分提取分离。
19.现阶段的普遍做法是从罗汉果中提取单一罗汉果甜苷或同时制备多种罗汉果皂苷类成分、罗汉果浓缩汁等罗汉果提取物主产品，或从生产废液和废渣中制备罗汉果籽油、氨基酸、膳食纤维等副产品，极少有同时制备罗汉果甜苷、罗汉果浓缩汁以及终端产品罗汉
果糖，甚至同一生产线连续制备副产品罗汉果酒和甘露醇的报导。目前大部分公开技术都存在一定问题，总结如下：(1)虚标罗汉果甜苷的含量。仅通过大孔吸附树脂、离子交换树脂、膜分离等精制和脱色技术，声称将罗汉果甜苷v制备到纯度90％以上。事实上，该领域专业技术人员可知，此类技术不可能制备到65％以上罗汉果甜苷v。且目前市场上主流的罗汉果提取物中罗汉果甜苷v的含量仅50％左右，极少有60％规格品种。而更高规格的品种目前仅有极少量作为试剂供应，尚未形成工业产品。(2)不具备工业实用性。将制备液相分离罗汉果甜苷、硅胶层析、高速逆流色谱分离技术等实验室技术，操作繁复，设备昂贵。
20.综上，现有技术制备罗汉果甜苷，技术目的较为单一，很少涉及罗汉果的综合利用，以及同时制备多种产品；虽然涉及到大孔吸附树脂与离子交换树脂的联用，但有部分存在本末倒置，犯技术原则错误，不涉及热水-碱的梯度处理联用树脂以达到解决生产中层析柱堵塞、树脂使用寿命、高效脱色的问题。因此，随着技术的升级和完善，有必要建立一套罗汉果提取分离及精深加工较为完善的工业生产技术体系。


技术实现要素：

21.本发明所要解决的技术问题是，克服以上不足，提供一种用鲜罗汉果工业生产罗汉果甜苷、罗汉果糖/酒、甘露醇的方法：以新鲜成熟的罗汉果为原料，(1)提供一种罗汉果保鲜贮存与糖化后熟的方法，为罗汉果产业长年提供优质原料，调控鲜罗汉果市场，解决鲜罗汉果贮存时间、品质、冷藏后糖化后熟的难题；(2)高品质罗汉果甜苷工业生产的简单、实用工艺技术。改变现有技术的复杂、繁琐程序，减少生产工艺过程和步骤，提高罗汉果甜苷的回收率、精制脱色效果、产品品质和甜味性能，解决生产过程中层析柱堵塞影响树脂使用寿命和降低生产效率的难题；(3)建立较为完善的罗汉果提取分离及精深加工生产技术体系。以制备罗汉果提取物-罗汉果甜苷为主，再利用所得高品质罗汉果甜苷与非糖甜味物质复配制备终端产品-罗汉果糖；对生产废液综合利用，使废弃物资源化，将葡萄糖、蔗糖等采用液态法发酵转化成广西桂林的特色农副产品-罗汉果酒，最后从酿酒以后的底液中提取甘露醇，从而实现生产线连续制备4种产品的完善的连续化工业生产技术体系。
22.本发明解决其技术问题所采用的技术方案如下：一种用鲜罗汉果工业生产罗汉果甜苷、罗汉果糖/酒、甘露醇的方法，包括以下步骤：
23.s1、保鲜后熟：
24.(s1-1)选果入库：先从采收的鲜罗汉果中挑选去除老青果和扫棚果，入库堆放；
25.(s1-2)保鲜：罗汉果在库中静置60-240天，按照一定时间间隔喷洒ε-聚赖氨酸盐酸盐与丙酸钙混合水溶液，以及开启臭氧循环；保鲜时库条件是温度2-6℃；日常相对湿度 80-90％；每次喷药剂后12h内保持55-65％；
26.(s1-3)糖化后熟：在库中，以0.15-0.35℃/h的升温速率升温至22-26℃，升温过程保持相对湿度80-90％，温度达到后相对湿度70-80％，每22-26h换气一次，保持氧气正常浓度；以碱液吸收并调节二氧化碳浓度，每4-6天均匀喷一次乙烯利水溶液，后熟流程持续15-30天；
27.s2、罗汉果甜苷的制备：
28.(s2-1)水提：破碎糖化后熟好的鲜罗汉果，用水提取，得提取液；
29.(s2-2)提取液进行陶瓷膜微滤；
30.(s2-3)梯度处理联用树脂：将陶瓷膜清液依次经过以下树脂的吸附和解吸：第一大孔吸附树脂柱，阴离子交换树脂，第二大孔吸附树脂；解吸得联用树脂精制液；
31.(s2-4)浓缩联用树脂精制液至17～25波美(baume degree)，得浓缩液。
32.(s2-5)喷雾干燥浓缩液，得罗汉果甜苷；
33.s3、罗汉果糖的制备：
34.(s3-1)适量取步骤(s2)的罗汉果甜苷，加纯化水溶解，作为粘合剂；
35.(s3-2)将赤藓糖醇、阿拉伯糖、阿洛酮糖、甘露醇四种非糖甜味物质中的任一种或其任意比例的组合物逐步投入沸腾制粒机，均匀喷入粘合剂，沸腾制粒、干燥，得罗汉果糖；
36.s4、罗汉果酒的制备：
37.(s4-1)液态发酵第一大孔吸附树脂流出液：收集步骤(s2-3)中第一大孔吸附树脂进料流出液，与水洗液，进料流出液和水洗液合并，浓缩至5～25brix，加入复合酶制剂，发酵，至酒香浓郁，得发酵液；
38.(s4-2)蒸馏发酵液，分别收集蒸馏底液和馏出部分；
39.(s4-3)向馏出部分加入步骤(s2)所得罗汉果甜苷，得罗汉果酒。
40.s5、甘露醇的制备：
41.(s5-1)取步骤s4中蒸馏底液，通过陶瓷膜成套设备微滤，收集滤液，得陶瓷膜清液；
42.(s5-2)将陶瓷膜清液进行纳滤脱色得脱色液；
43.(s5-3)脱色液浓缩，趁热加入乙醇，冷却析晶得到甘露醇。
44.优选地，步骤(s1-1)选果入库中，所述选果，是挑选去除老青果和扫棚果等无法自然生长成熟的罗汉果，只能用当季采收的新鲜成熟的罗汉果、无籽罗汉果，并且完好、无破损、无霉烂才能入库。老青果和扫棚果在自然条件下由于天气、温度等原因无法成熟，按本技术的方法保鲜与后熟也难以成熟，会影响罗汉果的品质，应挑选去除。所述入库鲜罗汉果的堆积高度是将罗汉果堆叠3～5层。堆积过低造成存储空间浪费，且不利于筐内鲜罗汉果在成熟过程中挥发性物质积累以及相互之间促进成熟；过高则承重易超过罗汉果标准筐的承受范围，易压坏鲜罗汉果而增加坏果率。
45.优选地，步骤(s1-2)保鲜中，药剂为ε-聚赖氨酸盐酸盐与丙酸钙的混合水溶液，其中，ε-聚赖氨酸盐酸盐浓度0.1～0.3％，丙酸钙浓度1.0～2.0％；每25～30天均匀喷1次；喷洒的药剂浓度不能过高或者过低，浓度太低，需要喷入体积过大，导致鲜果积水(鲜罗汉果表面能承载的水量有限)，空气中相对湿度过大，不利于水分挥发；浓度太高，需要喷入体积过小，使鲜罗汉果不够湿润。ε-聚赖氨酸盐酸盐与丙酸钙的喷洒量使罗汉果表面润湿即可。在本发明一个具体实施例中，每kg罗汉果喷洒ε-聚赖氨酸盐酸盐与丙酸钙的混合水溶液50-100ml，优选60～80ml。
46.ε-聚赖氨酸盐酸盐具有广谱抑菌作用，丙酸钙具有防霉和引湿作用，二者联用的抑菌防霉效果显著，且少量存在的丙酸钙具有引湿作用，可以适当保持鲜罗汉果表面的水分。臭氧具有杀菌作用；通过氧化作用消除并抑制鲜罗汉果产生的乙烯，降低代谢；诱导罗汉果表皮气孔收缩，减少水分散失。但在使用过程中会逐渐消耗、散失，故需要定期补充。臭氧气调，与ε-聚赖氨酸盐酸盐、丙酸钙混合药剂联用，可以显著增强抑菌、杀菌、防霉作用，从而可以使罗汉果长期保鲜。
47.每14～16天或每次开关库门后，开启臭氧循环40～60min，臭氧的量为5-15ppm。
48.臭氧具有杀菌作用；通过氧化作用消除并抑制鲜罗汉果产生的乙烯，降低代谢；诱导罗汉果表皮气孔收缩，减少水分散失。但在使用过程中会逐渐消耗、散失，故需要定期补充。臭氧气调，与ε-聚赖氨酸盐酸盐、丙酸钙混合药剂联用，可以显著增强抑菌、杀菌、防霉作用，从而可以使罗汉果长期保鲜。
49.步骤(s1-2)保鲜中，所述贮存条件：温度2～6℃；日常相对湿度80～90％，每次喷药剂后12h内保持55～65％。较低温度可以显著提高罗汉果保鲜效果而不造成冻伤；较高相对湿度可以减少罗汉果的水分散失，并与药剂、臭氧协同保湿，作用显著。每次喷洒药剂后，为防止鲜罗汉果表面过于潮湿而引起变质，需要适时控制相对湿度，以促进表面水分蒸发。保鲜时间是60～240天。对于加工罗汉果的大型企业而言，这个保鲜时间与鲜罗汉果的采购、生产设备等已匹配，若再放置更长时间也无明显意义，不仅会增加成本，还会由于外部天气炎热而增加环果率，从而直接造成经济损失。
50.优选地，步骤(s1-3)糖化后熟中，所述温度，按每3～6h温度升高1℃，使温度从保鲜贮存期的2～6℃升温至20～26℃。缓慢升温有助于使保鲜罗汉果从低温休眠状态逐渐恢复至正常状态，提高糖化后熟的效果。升温过程保持相对湿度80～90％，温度达到20～26℃后，调控相对湿度为70～80％。升温过程继续保持原有相对湿度，可以使保鲜罗汉果在恢复过程中逐渐适应环境，提高适应性。当达到糖化后熟的温度以后，降低相对湿度，可以使罗汉果在后熟过程中缓慢失去部分水分，与微生物、酶共同作用，提高糖化后熟的效果。
51.步骤(s1-3)糖化后熟中，每22～26h换气一次，保持氧气正常浓度；碱液为naoh 和ca(oh)2的混合溶液，naoh浓度0.2～1.0wt％，ca(oh)2为饱和石灰水。在鲜罗汉果的糖化后熟过程中，约22～24h时库内氧气浓度下降到10％左右，需要通风换气至约21％氧气浓度，以促进鲜罗汉果的后熟。naoh和ca(oh)2的水溶液可以持续吸收鲜罗汉果呼吸作用产生的co2，减少co2造成的呼吸伤害，显著降低坏果率。
52.优选地，步骤(s1-3)糖化后熟中，所述催熟，采用乙烯利水溶液，释放外源乙烯催熟；乙烯利的浓度为400～800ppm，每kg罗汉果喷洒40-80ml乙烯利水溶液；每4～6天均匀喷1次。在保鲜罗汉果从休眠状态恢复以后，自身会产生一定量内源乙烯；乙烯利水溶液不仅会释放乙烯，还能诱导鲜罗汉果产生内源乙烯。维持外源乙烯一定的浓度，通过内源与外源乙烯的共同作用，在适宜的温度、相对湿度、氧气和低二氧化碳浓度条件下，可以显著促进保鲜后罗汉果的后熟，降低坏果率。
53.优选地，步骤(s1-3)糖化后熟时间是15～30天。
54.优选地，步骤(s2-1)中，提取方式为连续逆流提取或提取罐提取；提取温度65～99℃；提取溶剂为水。在本发明一个具体实施中，连续逆流提取：时间：2～3h；加水量：1.2～3.0 倍(水体积/鲜罗汉果，v/w)；两节提取槽，每节提取完后挤压过滤，合并不断流出的提取液，得逆流提取液。在本发明另一个具体实施中，提取罐提取：时间：1.5～2.5、1.0～2.0、 0.5～1.5h；次数：3次；加水量：每次2～4倍(水体积/鲜罗汉果，v/w)；搅拌方式：开启机械搅拌或压缩空气反冲。每次提取完后过滤，第1、2次提取渣进入下一次提取，合并1、2次提取液，得提取罐提取液。
55.步骤(s2-2)中，陶瓷膜微滤为两到四次，并且进行陶瓷膜微滤时，温度从45-60℃降低至15-30℃；优先地，进行两次陶瓷膜微滤；具体是将提取液冷却至45～60℃，离心，再
过第一陶瓷膜成套设备微滤，收集滤液，继续将滤液冷却至15～30℃，再过第二陶瓷膜成套设备微滤，收集滤液，得陶瓷膜清液。
56.罗汉果提取液中含有果胶、蛋白质等粘性物质，极易堵塞陶瓷膜。首先在较高温度下 45-60℃时不易堵塞陶瓷膜，且有较大的通量，可以快速实现微滤澄清。若以此条件下的陶瓷膜清液进大孔吸附树脂柱，则树脂较易板结，继而引起层析柱堵塞。当将45℃以上的陶瓷膜清液进一步降温至15-30℃以下时，陶瓷膜通量下降不明显，但此条件下的陶瓷膜清液不引起树脂板结，所进的层析柱也不会发生堵塞。但若直接将提取液冷却至30℃以下再过陶瓷膜微滤澄清，则直接堵塞陶瓷膜，且通量极小。因此，发明人经反复实验和论证，确定了高低温度的两次以上的陶瓷膜微滤澄清作为进层析系统的前处理，配合温度从 45-60℃逐渐降低至15-30℃，不仅保持了较大的陶瓷膜通量，得到澄清透明的溶液，还解决了罗汉果工业生产中大孔吸附树脂板结和层析柱堵塞的难题。
57.步骤(s2-3)中，所述梯度处理联用树脂具体是：1)将陶瓷膜清液进第一大孔吸附树脂柱，进完料后进1.5～3.0bv温度50～80℃的热纯化水，收集进料流出液与1.0～2.5bv纯化水洗液，得流出液；再以2～3bv/h的流速进温度50～60℃、浓度0.5～0.9wt％、体积0.6～1.0bv 的naoh水溶液处理树脂柱，之后进常温纯化水至树脂柱流出液ph为6.8～7.5，然后用含水乙醇解吸，收集解吸液，浓缩回收乙醇，得吸附树脂处理液；2)调节吸附树脂处理液糖度4～8brix，进碱性阴离子交换树脂柱，进完料后进3～5bv纯化水洗树脂柱，依次收集进料流出液和水洗液；3)将阴离子交换树脂柱进料流出液和水洗液按顺序进大孔吸附树脂柱，进完料后进1.5～3.0bv常温纯化水，再进浓度0.3～0.6％、体积0.6～1.0bv柠檬酸水溶液处理树脂柱，继续进纯化水至树脂柱流出液ph为5.5～7.0，然后用含水乙醇解吸，收集解吸液，得联用树脂精制液。进一步地，所述含水乙醇中，乙醇的浓度为50-70％。
58.理论上认为，罗汉果甜苷进行树脂柱吸附，解吸的提纯过程中，在热碱中被部分破坏，含量会降低，且回收率也会降低，所以一般再对罗汉果甜苷进行纯化处理时，是要避免热的碱性条件的。发明人预料不到地发现，如果热碱条件合适，处理及时，控制了进热碱的时间和体积，并及时用纯化水处理，所得罗汉果甜苷成品色泽较浅，最终罗汉果甜苷中罗汉果甜苷v的含量能够提高5wt％至8wt％，而且罗汉果甜苷v的收率因此提高。这是发明人在一次实验出现操作失误时意外的发现。推测原因可能是：用热碱处理大孔吸附树脂柱，可以把部分色素，蛋白等粘性物质，以及其他杂质充分洗出树脂柱，从而提高罗汉果甜苷v的含量；另一种可能的原因是减少了杂质对罗汉果甜苷的竞争吸附，使罗汉果甜苷的吸附和解吸附性能更佳，从而提高了收率。发明人发现，小心地使用热碱可以省去了罗汉果甜苷提纯繁琐的工艺步骤，提高了罗汉果甜苷的纯度和收率。
59.本发明方法不仅减少了后期脱色用阴离子交换树脂的量，也显著提高了脱色效果；滋味口感很好，甜味纯正；并且还解决了层析柱堵塞和树脂板结的难题；当把该批产品用阴离子交换树脂脱色精制以后，直接在碱性条件下进第二次大孔吸附树脂，并及时处理至中性后解吸，所得最终成品罗汉果甜苷v50中各项农残均未检出。
60.碱性阴离子树脂的流出液(罗汉果甜苷在此部分)呈碱性，ph约10，进第二大孔吸附树脂柱以后，效果是起脱色和去除外来不明物质等对滋味口感有影响的成分，但碱性条件下不容易将树脂柱洗至中性，不仅浪费纯化水，而且在后期也没起到特别作用。因此，用稀柠檬酸水溶液进柱，起到中和碱性条件的作用，就是当碱性条件至一定程度时，已达到脱
色和精制效果，这个时候中和至酸性或中性，树脂柱就很容易用纯化水洗至中性。
61.总结：节水和提高生产效率。
62.优选地，步骤(s2-3)梯度处理联用树脂中，所述第一吸附树脂是大孔吸附树脂，包括非极性d101、lx-100b、lx-t28等，弱极性ab-8等；用量为每1000kg鲜罗汉果用 400～550kg。处理方式：进完料后进1.5～3.0bv温度50～80℃的热纯化水，再进温度50～80℃、浓度0.5～1.2％、体积0.6～1.0bv的naoh水溶液以2～3bv/h的流速处理树脂柱，之后进常温纯化水至树脂柱流出液ph为6.8～7.5。
63.先用热纯化水处理大孔吸附树脂有利于将经陶瓷膜微滤澄清后所余的少量粘性物质洗出树脂柱，在陶瓷膜微滤澄清基础上进一步降低树脂板结，避免层析柱堵塞。低浓度、小体积的热碱溶液快速通过大孔吸附树脂柱，单因素所引起的罗汉果甜苷的损失率≤3％；同浓度下颜色(稀释后溶液的吸光度测试得到)约为传统工艺的50-65％；配合阴离子交换树脂脱色以及碱性条件下第二次大孔吸附树脂精制，可以完全去除农残；与前述两次以上的陶瓷膜微滤澄清相结合，完全解决树脂板结以及层析柱堵塞难题，显著延长树脂使用寿命，缩短树脂再生处理周期，提高生产效率。
64.所述阴离子交换树脂是碱性阴离子交换树脂，包括凝胶型及大孔型丙烯酸弱碱阴离子树脂、丙烯酸系强碱和弱碱阴离子树脂、凝胶型及大孔型苯乙烯系强碱阴离子树脂、大孔型丙烯酸强碱阴离子树脂、大孔型苯乙烯系弱碱阴离子树脂，优选型号：d900、d941、 d316、d296、d280；用量为每1000kg鲜罗汉果用70～140kg。
65.所述第二吸附树脂是大孔吸附树脂，包括非极性d101、lx-100b、lx-t28等，弱极性ab-8等；用量为每1000kg鲜罗汉果用140～220kg。处理方式：进完料后进1.5～3.0bv 常温纯化水，再进0.6～1.0bv浓度0.3～0.6％的柠檬酸水溶液处理树脂柱，继续进纯化水至树脂柱流出液ph为5.5～7.0。
66.经阴离子交换树脂所得的罗汉果脱色液为碱性，ph约10-11，在此条件下进大孔吸附树脂柱，罗汉果甜苷被吸附，而酚酸、色素类物质以及经离子交换树脂交换吸附脱色所引入的外来物质不被吸附而进一步去除，与第一大孔吸附树脂相配合，不仅可以提高罗汉果甜苷的含量，还可以完全去除农残和对滋味口感有不良影响的物质，制备得到甜味性能好的高品质罗汉果甜苷，其中罗汉果甜苷v的含量在51-58wt％，而如果按照常规方法，不用适当的热碱处理，所得甜苷含量较低，在47-53wt％左右，收率也偏低。
67.步骤(s2-4)中，所述浓缩采用真空浓缩，温度50-70℃，真空度0.01-0.1mpa。
68.优选地，步骤(s3)中，所述罗汉果糖由罗汉果甜苷与赤藓糖醇、阿拉伯糖、阿洛酮糖、甘露醇四种非糖甜味物质中的任一种或其任意比例组合物组成，最终使罗汉果糖中罗汉果甜苷v的含量为0.10～2.60％，甜度为蔗糖的1～10倍范围内可调，滋味口感纯正、零卡、低卡或具有减糖降糖功效、适用所有人群的甜味性能佳的罗汉果糖。
69.优选地，步骤(s4)中，所述罗汉果酒由罗汉果甜苷与蒸馏时的馏出部分组成，罗汉果甜苷加入量按照每l馏出部分加入步骤(s2)制得的0.05-0.30kg罗汉果甜苷产品。罗汉果甜苷的加入量根据消费者口味而定。
70.优选地，步骤(s4-1)中，发酵是密封发酵7～30天；复合酶制剂包括以下质量份的组分：蔗糖酶1.5～2.5份、根霉1～2份、蛋白酶2～3份、酯化红曲0.5～1份、酿酒酵母5～10 份、产香酵母1～2份；复合酶制剂用量为每100kg浓缩液用0.4～1.2kg复合制剂。
71.优选地，步骤(s4-2)中，蒸馏的温度是95-100℃。
72.第一大孔吸附树脂流出液中含有葡萄糖、果糖、蔗糖、蛋白质、氨基酸等不被树脂吸附的物质，经微生物和酶的作用，蔗糖可以分解成葡萄糖和果糖，葡萄糖经无氧发酵可以生成酒精；蛋白质、氨基酸可为发酵过程提供氮源和能量；酯化红曲和产香酵母可以使富含多种成分的发酵体系产生更多的罗汉果特征香味物质，从而可以制备得到具有罗汉果特征的特色农副产品-罗汉果酒。
73.优选地，步骤(s5-2)中，所述纳滤脱色是通过截留分子量300～800da的纳滤膜成套设备脱色，收集透过液。
74.现有技术是收集一定截留分子量纳滤膜的截留液，之后再采用树脂层析和结晶制备甘露醇，而本技术创造性地通过前置发酵 小分子截留量纳滤膜，只收集透过液，可在精制甘露醇的过程中省去吸附树脂层析的复杂步骤，只需通过结晶的简单方法制备。
75.优选地，步骤(s5-3)中，脱色液浓缩至15～25brix，趁热加入食用乙醇自然冷却析晶。所述析晶是加入食用乙醇后，搅拌均匀，室温自然冷却析晶，过滤，得结晶i；母液浓缩后同法重结晶，得结晶ii，合并结晶i和结晶ii，干燥，得甘露醇。
76.罗汉果中含有一定量的甘露醇。甘露醇的理化性质稳定，本发明的制备原料来源于第一大孔吸附树脂流出液，经复合制酶剂发酵以后，甘露醇保留下来，但罗汉果中的大部分色素首先被第一大孔吸附树脂吸附，未被吸附的色素被复合制剂发酵和蒸馏进一步分解或去除，而糖和蛋白类物质被分解，因此，通过纳滤，仅有直链或小分子物质可以透过，而色素、具有较大空间位阻的物质以及大部分杂质被截留。甘露醇在纳滤膜透过的物质中具有相对高的含量，可以利用浓度和溶解度的差异结晶分离，从而制备得到高纯度甘露醇产品。
77.本发明的有益效果在于：
78.(1)本发明提供了一种罗汉果保鲜贮存与后熟的方法。改变现有的鲜罗汉果常温或较长时间的常规冷库存放方式，通过ε-聚赖氨酸盐酸盐抑菌，丙酸钙防霉、引湿以保持鲜罗汉果水分，协同臭氧气调杀菌、消除果实呼吸作用产生的乙烯、收缩果皮气孔以减少水分散失，低温降低鲜罗汉果的代谢，高湿减少水分蒸发，即药剂、气体、温湿度环境协同增效，实现鲜罗汉果的长期保鲜贮存，保鲜时间60～240天；通过调控温度和相对湿度、氧气和二氧化碳浓度，逐步恢复与提高保鲜罗汉果的代谢，减少呼吸作用产生的二氧化碳对果实造成的伤害，产生乙烯，辅以外源乙烯直接作用以及诱导保鲜罗汉果产生内源乙烯，共同作用催熟，实现保鲜罗汉果的糖化后熟，时间15～30天。
79.(2)本发明的罗汉果保鲜贮存与后熟方法促进了罗汉果产业的调控和发展。通过对鲜罗汉果长期保鲜贮存，并使得经过保鲜的罗汉果可以正常糖化后熟，从而长年可为生产罗汉果提取物、烘焙干罗汉果等罗汉果生产加工企业提供优质的鲜罗汉果，延长了鲜罗汉果的可用周期，在一定程度上加强了鲜罗汉果原料的市场调控，促进罗汉果产业健康、平稳、规范、有序发展，维护了种植户和企业的双边利益。
80.(3)本发明使鲜罗汉果的贮存与后熟从现有技术的25天、坏果率≥2％，显著延长到 270天、坏果率≤2％，解决了鲜罗汉果贮存品质及冷藏后糖化后熟的难题，具有先进性和工业实用性。
81.(4)本发明通过高低温度的两次陶瓷膜微滤澄清、前后串联的大孔吸附树脂 阴离子交换树脂 大孔吸附树脂，采用热水 热碱 纯化水 稀酸的处理技术，解决了罗汉果生产
过程中层析柱堵塞和树脂板结而缩短树脂使用寿命、降低生产效率的难题；显著减少脱色树脂的用量并提高了脱色精制效果，得到接近纯白色的高品质罗汉果甜苷；省去了膜分离、树脂或萃取方式脱农残的复杂步骤，并完全去除了农残。
82.(5)本发明形成了适合工业化生产的罗汉果提取分离及精深加工核心生产技术体系。包括层次分明、特色明显的主副产品：制备主导产品罗汉果提取物-罗汉果甜苷，制备目前国内外产销最大的罗汉果终端产品-罗汉果糖，利用制备罗汉果甜苷的生产废液先发酵制备广西桂林的特色农副产品-罗汉果酒，再从蒸馏酒以后的底液中回收提取甘露醇。
83.(6)本发明工艺技术先进、简易、实用：制备高品质罗汉果甜苷的主要工艺过程仅有水提、过滤澄清、梯度处理联用树脂(第一吸附树脂 阴离子交换树脂 第二吸附树脂)、浓缩、喷雾干燥步骤，未涉及复杂的鲜果干燥、去果皮、酶解或絮凝澄清、膜分离、无机脱色剂如活性炭和氧化铝脱色、聚酰胺层析、mci柱层析、树脂及萃取脱农残、改善罗汉果甜苷的甜味性能等技术，仅通过看似常规的工艺过程但采用颠覆现有认知的操作方法，解决了罗汉果提取分离及精深加工过程中遇到的诸多难题，以简易和实用的特征达到技术水平的先进。
84.(7)本发明提供了一种药用辅料级高品质罗汉果甜苷的工业生产制备方法。主要工艺步骤为第一吸附树脂 阴离子交换树脂 第二吸附树脂，关键在于进料后树脂柱的非常规操作。其中第一吸附树脂主要采用热碱快速处理的方式，以温度50～80℃、浓度0.5～1.2％、体积0.6～1.0bv的naoh水溶液快速通过树脂柱为操作要点，可以显著提高罗汉果甜苷的含量并去除大部分色素，从而减少离子交换树脂的用量并显著提高脱色精制效果；第二吸附树脂主要采用呈碱性的阴离子交换树脂柱的流出液直接进层析柱，在阴离子交换树脂脱色基础上去一步脱色和精制，去除离子交换树脂交换吸附引入的对罗汉果甜苷的滋味口感有影响的外来物质。通过前后2次大孔吸附树脂的处理方式，显著提升罗汉果甜苷的精制和脱色效果，使罗汉果甜苷的含量大幅提升并改善色泽；还去除了农残并改善了罗汉果甜苷的甜味性能，从而制备得到滋味口感好的药用辅料级高品质的罗汉果甜苷。
85.(8)本发明提供了一种制备甘露醇的方法。与现有技术不同，本技术制备甘露醇是先将溶液发酵制备罗汉果酒，再用蒸馏酒之后的底液仅通过纳滤脱色和结晶的简单方法制备得到，省去了吸附树脂层析的复杂步骤。由于物料经历了特定的精制和发酵过程，因此，本技术改变了过往技术收集纳滤膜截留液，再采用吸附树脂层析和结晶精制的方法，创造性地通过收集纳滤膜透过液和结晶的简单方法制备。
具体实施方式
86.以下结合实施例对本发明进行进一步的说明。
87.本发明实施例所使用的鲜罗汉果，购于广西桂林市永福县，采收时间10月下旬。
88.所使用的ε-聚赖氨酸盐酸盐、丙酸钙、臭氧、氢氧化钠、氢氧化钙、乙烯利，如无特殊说明，均通过常规商业途径获得。
89.所使用纯化水为纯水机自制，所使用的大孔吸附树脂、阴离子交换树脂、赤藓糖醇、阿拉伯糖、阿洛酮糖、甘露醇，如无特殊说明，均通过常规商业途径获得。
90.本发明实施例中，罗汉果甜苷v的含量根据《中国药典2020版》“罗汉果”项下用高效液相色谱法(hplc)测定；甘露醇的含量根据《中国药典2020版》“甘露醇”项下用滴定法测
定；罗汉果甜苷和罗汉果糖的滋味口感用感观测定；罗汉果甜苷中的农残、罗汉果酒的度数用气相色谱法(gc)测定。
91.实施例1
92.s1保鲜后熟
93.(1)选果入库。
94.先从采收的鲜罗汉果中挑选去除老青果和扫棚果，再挑选完好、无破损、无霉烂的罗汉果，用罗汉果专用量果板按大小分成特果、大果、中果、小果、外果共5个等级，按以下标准分开：240个小果、180个中果、140个大果/筐；特果和外果按13.5公斤/筐。成筐装好，按等级入库堆放，每堆长
×
宽
×
高为5筐
×
5筐
×
5筐，堆间距60cm。
95.(2)保鲜。
96.入库鲜罗汉果按以下程序和条件处理：
97.时间：静置220天。
98.①
药剂：第1、27、53、79、105、130、158、173、200天各均匀喷1次0.25％ε-聚赖氨酸盐酸盐与1.5％丙酸钙混合水溶液；喷洒量按照每kg罗汉果喷洒70ml；
99.②
气体：第1、15、30、45、60、75、90、105、120、135、150、165、180、195、 210天按每15天定期，以及与步骤
①
药剂喷洒当天、每次不定期检视后开启臭氧循环 45min，臭氧的浓度控制在12
±
3ppm；
100.贮存条件：设定冷库温度3；℃日常相对湿度85％，与步骤
①
药剂喷洒后12h内保持 60％。
101.(3)后熟。
102.保鲜贮存后的罗汉果按以下程序和条件处理：
103.①
温度：每4h温度升高1，℃从3℃升温至25；℃
104.②
相对湿度：升温过程(0～88h)保持相对湿度85％，温度达到25℃后相对湿度72％；
105.③
气体：每24h换气一次，保持氧气浓度约21％；以0.5％浓度naoh和饱和ca(oh)2的混合溶液吸收并调节二氧化碳浓度，每4m2设1个混合溶液点；
106.④
催熟：自温度达到25℃时起，按第1、5、10天各均匀喷1次浓度600ppm的乙烯利水溶液。
107.时间：静置15天。
108.经检视，65％以上鲜罗汉果表面已变成绿豆黄色，30％左右已变成黄色，颜色符合率≥90％；罗汉果特征果香味明显，手拈起糖丝，口尝滋味口感纯正；经过235天的保鲜(220 天)和后熟(15天)处理后，坏果率约1.3％(以入库鲜罗汉果计)。
109.本发明还对步骤s1中的保鲜后熟的条件进行改变，保鲜后熟总时间不变，均为235 天，结果如下表1所示：
110.表1
[0111][0112][0113]
还对步骤(2)保鲜中的贮存条件改为：设定冷库温度3；℃日常相对湿度85rh％，与步骤
①
药剂喷洒后12h内保持60rh％。经过试验，保鲜时间无明显变化；但坏果率从1.3％升高到1.7％。
[0114]
因此，综上所述，本发明选择保鲜过程中喷洒的混合溶液含0.25％ε-聚赖氨酸盐酸盐， 1.5％丙酸钙，喷洒间隔为26天；每隔15天进行臭氧循环，使库内臭氧浓度保持在12
±
3ppm 的水平。
[0115]
s2、罗汉果甜苷的制备：
[0116]
(1)水提。取1500kg糖化后熟好的鲜罗汉果，其中罗汉果甜苷v平均含量0.49wt％，用罗汉果破碎机进行保持种籽完好的破碎，碎料输送至6m3提取罐，用自来水提取。
[0117]
操作条件：温度92℃；时间：2.0、1.5、0.5h；次数：3次；加水量：4000l、3000l、 4000l；搅拌方式：每隔15min开启压缩空气反冲5min。每次提取完后过滤，第1、2次提取渣进入第3次提取，第3次提取液另器收集，合并1、2次提取液，得6200l提取液。
[0118]
(2)过滤澄清。通过板式换热器将提取液的温度降至55℃，先经卧式螺旋沉降离心，再过碟式离心，之后过材质为氧化锆、孔径500nm的第1陶瓷膜成套设备微滤，收集滤液。继续通过板式换热器将滤液冷却至24℃，再过材质为氧化锆、孔径200nm的第2陶瓷膜成套设备微滤，收集滤液，得陶瓷膜清液。
[0119]
(3)梯度处理联用树脂。
[0120]
第一大孔吸附树脂。预先在不锈钢层析柱内装d101大孔吸附树脂700kg，用酸碱再生处理好待用。将陶瓷膜清液进大孔吸附树脂柱，进完料后进1600l温度70℃的热纯化水，收集进料流出液与1200l纯化水洗液，得流出液；再以1400l/h的流速进温度55℃、浓度 0.8％、体积550l的naoh水溶液处理树脂柱，之后以850l/h的流速进常温纯化水至树脂柱流出液ph为7.0，然后用1800l浓度65％的食用乙醇解吸，收集解吸液。在真空度
ꢀ‑
0.09mpa、温度62℃减压浓缩回收乙醇至无醇味，得吸附树脂处理液。
[0121]
阴离子交换树脂。预先在内部衬塑的不锈钢层析柱内装d941弱碱性阴离子交换树脂 110kg，用酸碱再生处理好待用。调节吸附树脂处理液糖度6brix，进碱性阴离子交换树脂柱，进完料后进500l纯化水洗树脂柱，依次收集进料流出液和水洗液。
[0122]
第二大孔吸附树脂。预先在不锈钢层析柱内装未吸附过色素且本身为白色的d101大孔吸附树脂240kg，用90％乙醇和纯化水处理好待用。将阴离子交换树脂柱进料流出液和水洗液按顺序进大孔吸附树脂柱，进完料后进500l常温纯化水，再进浓度0.4％、体积200l 柠檬酸水溶液处理树脂柱，继续进600l纯化水至树脂柱流出液ph为6.3，然后用520l 浓度65％的食用乙醇解吸，收集解吸液，得联用树脂精制液。
[0123]
(4)浓缩。在真空度-0.09mpa、温度63℃减压浓缩联用树脂精制液，至18波美，得真空浓缩液。
[0124]
(5)喷雾干燥。调节喷雾干燥进风温度185℃，出风温度87℃，干燥真空浓缩液，得11.4kg罗汉果甜苷，经过测试，罗汉果甜苷v含量57.11wt％，罗汉果甜苷v收率为 88.56％，白色粉末。
[0125]
s3、罗汉果糖的制备：
[0126]
(1)取步骤(2)的罗汉果甜苷0.48kg，加8kg纯化水溶解，固形物含量5.66％，作为粘合剂。
[0127]
(2)将99.52kg赤藓糖醇投入流化床，温度72℃、真空度-0.088mpa，以3kg/h的速度均匀喷入粘合剂，干燥，得原味罗汉果糖99.1kg，所得罗汉果糖甜度约为蔗糖的1倍。
[0128]
s4、罗汉果酒的制备：
[0129]
(1)液态发酵第一吸附树脂流出液。收集步骤(2)第一吸附树脂进料流出液与1200l 纯化水洗液，浓缩至13brix，得825kg浓缩液，冷却至室温，调节环境温度25℃，加入 5.0kg复合制剂(具体组成：蔗糖酶1.8份、根霉1.2份、蛋白酶2.5份、酯化红曲0.6份、酿酒酵母9份、产香酵母1.4份)，搅拌均匀，密封发酵20天，至酒香浓郁，得发酵液。
[0130]
(2)蒸馏。蒸馏与精馏发酵液，分别收集蒸馏底液和馏出部分，馏出部分得罗汉果基酒，按酒精度53vol计，得25.3kg。
[0131]
(3)调配罗汉果甜苷。取53度的精馏罗汉果基酒10l，加入0.005kg步骤(2)的罗汉果甜苷，混匀，罐装，得罗汉果酒。
[0132]
s5、甘露醇的制备：
[0133]
(1)微滤蒸馏底液。将蒸馏底液通过材质为氧化锆、孔径500nm的陶瓷膜成套设备微滤，收集滤液，得陶瓷膜清液。
[0134]
(2)纳滤脱色。将陶瓷膜清液通过截留分子量500da的纳滤膜成套设备脱色，收集透过液，得脱色液。
[0135]
(3)结晶。减压浓缩脱色液至22brix，得115.2kg浓缩液，趁热加入150l浓度95％食用乙醇，搅拌均匀，室温自然冷却析晶，过滤，得结晶i；母液浓缩后同法重结晶1次，得结晶ii。
[0136]
合并结晶i和ii，干燥，得4.3kg甘露醇。
[0137]
经检测，罗汉果甜苷中罗汉果苷v含量57.11％，类白色粉末，未检出农残；经口尝，滋味口感纯正。罗汉果糖甜度为蔗糖1倍，甜味持续时间6.5秒。罗汉果酒的酒精度53vol％。甘露醇含量99.20％。
[0138]
实施例2
[0139]
其他条件、操作和实施例1相同，区别在于步骤s2、罗汉果甜苷的制备的制备过程如下：
[0140]
步骤(1)(2)同实施例1
[0141]
(3)梯度处理联用树脂。
[0142]
第一大孔吸附树脂。预先在不锈钢层析柱内装lx-100b大孔吸附树脂825kg，用酸碱再生处理好待用。将陶瓷膜清液进大孔吸附树脂柱，进完料后进1500l温度80℃的热纯化水，收集进料流出液与1200l纯化水洗液，得流出液；再以1500l/h的流速进温度50℃、浓度0.9％、体积800l的naoh水溶液处理树脂柱，之后以800l/h的流速进常温纯化水至树脂柱流出液ph为7.0，然后用2000l浓度60％的食用乙醇解吸，收集解吸液。在真空度
ꢀ‑
0.09mpa、温度62℃减压浓缩回收乙醇至无醇味，得吸附树脂处理液。
[0143]
阴离子交换树脂。预先在内部衬塑的不锈钢层析柱内装d900弱碱性阴离子交换树脂 120kg，用酸碱再生处理好待用。调节吸附树脂处理液糖度6brix，进碱性阴离子交换树脂柱，进完料后进500l纯化水洗树脂柱，依次收集进料流出液和水洗液。
[0144]
第二大孔吸附树脂。预先在不锈钢层析柱内装lx-100b大孔吸附树脂280kg，用90％乙醇和纯化水处理好待用。将阴离子交换树脂柱进料流出液和水洗液按顺序进大孔吸附树脂柱，进完料后进600l常温纯化水，再进浓度0.4％、体积200l柠檬酸水溶液处理树脂柱，继续进800l纯化水至树脂柱流出液ph为6.4，然后用550l浓度65％的食用乙醇解吸，收集解吸液，得联用树脂精制液。
[0145]
(4)浓缩。在真空度-0.09mpa、温度63℃减压浓缩联用树脂精制液，至18波美，得真空浓缩液。
[0146]
(5)喷雾干燥。调节喷雾干燥进风温度185℃，出风温度87℃，干燥真空浓缩液，得11.4kg罗汉果甜苷，经过测试，罗汉果甜苷v含量56.68wt％，罗汉果甜苷v收率为 87.91％，白色粉末。
[0147]
实施例3
[0148]
其他条件、操作和实施例1相同，区别在于s3、罗汉果糖的制备：
[0149]
(1)取步骤(2)的罗汉果甜苷0.48kg，加8kg纯化水溶解，固形物含量5.66％，作为粘合剂。
[0150]
(2)将50.0kg赤藓糖醇、49.0kg阿洛酮糖投入流化床，温度72℃、真空度-0.088mpa，以3kg/h的速度均匀喷入粘合剂，干燥，得原味罗汉果糖98.5kg，所得罗汉果糖甜度约为蔗糖的1倍。
[0151]
实施例4
[0152]
其他条件、操作和实施例1相同，区别在于s4、罗汉果酒的制备：
[0153]
(1)液态发酵第一吸附树脂流出液。收集步骤(2)第一吸附树脂进料流出液与1200l 纯化水洗液，浓缩至20brix，得550kg浓缩液，冷却至室温，调节环境温度25℃，加入 4.5kg复合制剂(具体组成：蔗糖酶1.8份、根霉1.2份、蛋白酶2.5份、酯化红曲0.6份、酿酒酵母9份、产香酵母1.4份)，搅拌均匀，密封发酵30天，至酒香浓郁，得发酵液。
[0154]
(2)蒸馏。蒸馏与精馏发酵液，分别收集蒸馏底液和馏出部分，馏出部分得罗汉果基酒，按酒精度26vol％计，得51.2kg。
[0155]
(3)调配罗汉果甜苷。取26度的精馏罗汉果基酒10l，加入0.030kg步骤(2)的罗汉果甜苷，混匀，罐装，得罗汉果酒。
[0156]
实施例5
[0157]
其他条件、操作和实施例1相同，区别在于步骤s2(2)的过滤澄清中，两次陶瓷膜成套设备微滤的温度都是55℃，所得清液进层析柱以后，由于还有部分粘性物质的存在，在一定程度上使树脂柱板结，从而降低大孔吸附树脂对罗汉果甜苷的吸附，罗汉果甜苷中罗汉果苷v含量56.24％，收率85.63％。
[0158]
对比例1
[0159]
其他条件、操作和实施例1相同，区别在于步骤s2(3)的梯度处理联用树脂中，第一大孔吸附树脂不用热碱液处理，而是常规操作：将陶瓷膜清液进大孔吸附树脂柱，进完料后进常温纯化水，至流出液澄清透明接近无色止(用水量较大)，然后用65％食用乙醇解吸，在真空度-0.09mpa、温度62℃减压浓缩回收乙醇至无醇味，得吸附树脂处理液。之后和实施例1相同，依次进阴离子交换树脂柱和第二大孔吸附树脂柱。
[0160]
最终产品中罗汉果甜苷中罗汉果苷v含量51.35％，收率83.51％。其他产品没有显著影响。
[0161]
对比例2
[0162]
其他条件、操作和实施例1相同，区别在于步骤s2(3)的梯度处理联用树脂中，省去了阴离子交换树脂的处理。最终罗汉果甜苷为淡黄色粉末，罗汉果苷v含量42.63％，罗汉果甜苷收率88.25％。说明阴离子交换树脂是罗汉果甜苷中苷v含量突破50％的关键。此外，未经阴离子交换树脂操作所得罗汉果甜苷产品的口感滋味不如实施例1，有发涩的现象存在。