一种基于沙利度胺类似物的细胞内自组装蛋白降解剂及其制备方法和应用

1.本发明属于药物制备技术领域，涉及一种基于沙利度胺类似物的细胞内自组装蛋白降解剂及其制备方法和应用。


背景技术：

2.索拉菲尼是一种新型多靶点抗肿瘤药物，可同时作用于肿瘤细胞和肿瘤血管，具有双重的抗肿瘤作用：既可通过阻断由raf/mek/erk介导的细胞信号传导通路而直接抑制肿瘤细胞的增殖，还可通过抑制血管内皮生长因子受体vegfr和血小板衍生生长因子受体pdgfr而阻断肿瘤新生血管的形成，间接地抑制肿瘤细胞的生长，但是临床治疗中常发生严重不良反应，且长期应用极易产生耐药性。
3.蛋白降解靶向嵌合体(proteolysis targeting chimera，protac)是一种能够同时结合靶蛋白和e3泛素连接酶的双功能分子，通过同时结合靶蛋白和e3泛素连接酶，拉近靶蛋白和e3连接酶之间的距离，从而诱导靶蛋白的泛素化，泛素化的靶蛋白能够被26s蛋白酶体识别并降解，达到彻底清除疾病相关蛋白的目的。与小分子抑制剂相比，protac具有用量少，不易产生耐药性等优点，所以在新药研发领域呈现出蓬勃发展的态势。但蛋白降解靶向嵌合体固有的特性——分子量大导致其理化性质及细胞渗透性差，限制了其进一步发展，因此亟需对其药代动力学性质进行优化。


技术实现要素：

4.本发明的目的在于提供一种基于沙利度胺类似物的细胞内自组装蛋白降解剂及其制备方法和应用，通过带有生物正交基团降冰片烯的靶蛋白配体分子与带有生物正交基团四嗪的e3泛素连接酶配体分子先后进入细胞，在细胞内发生生物正交反应自组装形成蛋白降解靶向嵌合体，最终利用泛素-蛋白酶体系统将靶蛋白进行降解。本发明构建的自组装型蛋白降解靶向嵌合体具有诱导pdgfr-β蛋白降解的功能，可用于制备新型用于抗肿瘤的药物。
5.为达到上述目的，本发明采用以下技术方案：
6.一种基于沙利度胺类似物的细胞内自组装蛋白降解剂，该降解剂的结构式如下：
[0007][0008]
其中x＝2～10，r1为甲基或氢，r2为亚甲基或苯基，r4为亚甲基或羰基，r3为亚甲基
或者
[0009]
一种如上所述的基于沙利度胺类似物的细胞内自组装蛋白降解剂的制备方法，包括以下步骤：
[0010]
将烷基二胺将索拉菲尼和降冰片烯连接，获得带有降冰片烯基团的靶蛋白配体；
[0011]
通过连接链将四嗪基团修饰在e3泛素连接酶配体上，得到带有四嗪基团的e3泛素连接酶配体；
[0012]
使带有降冰片烯基团的靶蛋白配体与带有四嗪基团的e3泛素连接酶配体先后进入细胞，在细胞内发生生物正交反应，自组装形成基于沙利度胺类似物的细胞内自组装蛋白降解剂。
[0013]
进一步的，带有降冰片烯基团的靶蛋白配体的结构式如下：
[0014][0015]
其中，x＝2～10。
[0016]
进一步的，带有降冰片烯基团的靶蛋白配体通过以下过程制得：
[0017]
将索拉菲尼经水解，得到带有活性反应基团羧基的化合物，带有活性反应基团羧基的化合物与烷基二胺经酰胺缩合反应，得到带有活性反应基团氨基的化合物，将带有活性反应基团氨基的化合物与5-降冰片烯-2-羧酸经酰胺缩合反应，得到带有降冰片烯基团的靶蛋白配体。
[0018]
进一步的，带有四嗪基团的e3泛素连接酶配体的结构式如下：
[0019][0020]
其中，r1为甲基或氢，r2为亚甲基或苯基，r4为亚甲基或羰基，r3为亚甲基或者
[0021]
进一步的，带有四嗪基团的e3泛素连接酶配体通过以下过程制得：
[0022]
将乙腈、氰基化合物以及水合肼在三氟甲磺酸锌或三氟甲磺酸镍的作用下，或将醋酸甲脒、氰基化合物以及水合肼在三氟甲磺酸锌的作用下，经环化反应，氧化脱氢形成带有1,2,4,5-四嗪类化合物，然后将1,2,4,5-四嗪类化合物在三氟乙酸的作用下脱去boc保护，再通过连接链与e3泛素连接酶配体沙利度胺类似物连接，形成带有四嗪基团的e3泛素连接酶配体。
[0023]
进一步的，连接链为γ-氨基丁酸或
[0024]
进一步的，e3泛素连接酶配体沙利度胺类似物为来那度胺或泊马度胺。
[0025]
进一步的，基于沙利度胺类似物的细胞内自组装蛋白降解剂通过以下过程制得：
[0026]
将带有降冰片烯基团的靶蛋白配体溶液加入到含细胞的培养皿中孵育后，再加入带有四嗪基团的e3泛素连接酶配体溶液，孵育，在细胞内经自组装形成基于沙利度胺类似物的细胞内自组装蛋白降解剂。
[0027]
一种如上所述的基于沙利度胺类似物的细胞内自组装蛋白降解剂在制备用于抗肿瘤药物中的应用。
[0028]
进一步的，抗肿瘤药物为抗乳腺癌药物或抗神经胶质瘤药物。
[0029]
进一步的，抗肿瘤药物为以pdgfr-β为靶点的药物。
[0030]
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
[0031]
本发明通过构建一类带有生物正交基团的靶向识别分子，通过分步给药使其能够在细胞内自组装形成蛋白降解剂，相比于整体型蛋白降解靶向嵌合体，本发明构建的细胞内自组装型蛋白降解剂，不仅能够利用降解剂的作用机制降解疾病相关蛋白，还能够以自组装的方式减小化合物的分子量，解决整体蛋白降解剂分子量大的问题，增加细胞渗透性，优化其理化性质，增强作用效果。本发明构建的细胞内自组装形成蛋白降解剂的制备方法简单，易于实现，并且收率较高。
[0032]
本发明的小分子蛋白降解靶向嵌合体能够用于制备治疗癌症的药物中，尤其用于制备以pdgfr-β为靶点的抗肿瘤药物中。
附图说明
[0033]
图1为本发明构建的靶向识别分子s4n-1与tzl生物正交反应过程(2-32h)的高效液相色谱图；
[0034]
图2为本发明构建的靶向识别分子s4n-1与tzf生物正交反应过程(2-32h)的高效液相色谱图；
[0035]
图3为本发明构建的靶向识别分子s4n-1与tzl自组装形成的蛋白降解剂对u87细胞的蛋白降解效果考察；其中，a为s4n-1，b为tzl；
[0036]
图4为本发明构建的靶向识别分子s4n-1与tzf自组装形成的蛋白降解剂对u87细胞的蛋白降解效果考察，其中，a为s4n-1，b为tzf。
具体实施方式
[0037]
下面结合附图和具体的实施例对本发明做进一步的详细说明，所述是对本发明的解释而不是限定。
[0038]
生物正交反应是指能够在活体细胞或组织中发生的、并且能够不干扰生物自身生化反应条件下可以进行的一类化学反应，具有简单、高效、高特异性的特点。研究表明，四嗪可以在无需催化剂的条件下与环状烯烃或炔烃快速高效地发生生物正交反应生成稳定的产物，且此反应对细胞无损害。因此拟将蛋白降解靶向嵌合技术与生物正交反应结合起来，构建带有生物正交基团的、分别靶向靶蛋白和e3泛素连接酶的化合物分子，两部分先后进入细胞，在细胞内发生生物正交反应自组装形成蛋白降解剂，进而发挥降解靶蛋白的作用。基于该策略，可以降低protac分子量，优化其药动药代性质，增加细胞渗透性，以期提高其作用效果。
[0039]
本发明通过使用不同长度的二胺将靶蛋白配体索拉菲尼和生物正交基团降冰片
烯连接获得带有生物正交基团降冰片烯的靶蛋白配体分子；
[0040]
通过不同类型的连接链将四嗪基团修饰在e3泛素连接酶配体上得到带有生物正交基团四嗪的e3泛素连接酶配体。
[0041]
通过分步给药的方法，使得这二者能够先后进入细胞，在细胞内发生生物正交反应自组装形成蛋白降解剂，从而达到减小分子量，增加细胞渗透性，优化传统蛋白降解剂固有缺陷的目的。本发明中在细胞内自组装形成的蛋白降解剂能够在制备用于治疗癌症的药物中应用。本发明涉及的蛋白降解靶向嵌合体(protacs)能够选择性诱导pdgfr-β蛋白的降解。
[0042]
本发明提供了一种于沙利度胺类似物的细胞内自组装蛋白降解剂，该蛋白降解剂在体外具有抗肿瘤活性，可应用于抗肿瘤药物的制备。
[0043]
下面结合图中所示的合成路线和具体的合成实施例来详细说明本发明提供的一类用于细胞内自组装形成蛋白降解剂的靶向识别分子的制备方法和活性筛选方法。
[0044]
实施例1
[0045]
一种带有降冰片烯基团的靶蛋白配体的制备方法，包括以下合成步骤：
[0046][0047]
1)在氮气保护下，1.9mmol sorafenib,29mmol氢氧化钠以及20ml无水乙醇于80℃回流反应10h。tlc检测反应完毕后，减压旋除无水乙醇，加入少量水，用2mol/l盐酸调节ph至3，有黄色固体析出，抽滤，滤饼干燥，得黄褐色粉末，即为化合物1(0.8g)，结构式如下，收率91.45％。lc-ms(esi,m/z):452.00[m h]

，450.00[m-h]-。
[0048][0049]
2)将1.33mmol化合物1，2.66mmol pybop(六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷，英文名:benzotriazol-1-yl-oxytripyrrolidino-phosphonium hexafluorophosphate)溶于30ml干燥二氯甲烷中，加入1ml dmf(n,n-二甲基甲酰胺)助溶，在冰浴条件下，逐滴加入5.31mmol三乙胺，搅拌15min后，加入2.66mmol 1,4-丁二胺或1,8-辛二胺，室温搅拌，tlc检测反应完毕后，减压旋除溶剂，加水，乙酸乙酯萃取(3
×
)，饱和氯化钠洗涤，无水na2so4干燥。抽滤除去干燥剂，经柱色谱分离得棕黄色油状产物，即化合物2a～2b，结构式如下，其中，化合物2a(0.61g)，收率88.52％，化合物2b(0.66g)，收率84.05％。lc-ms(esi,m/z)2a:522.25[m h]

。2b:578.20[m h]

，576.00[m-h]-。
[0050]
[0051]
x为2时，为化合物2a，x为6时，为化合物2b。
[0052]
3)将0.77mmol 5-降冰片烯-2-羧酸，1.15mmol hatu(2-(7-氮杂苯并三氮唑)-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸酯，英文名2-(7-azabenzotriazol-1-yl)-n,n,n',n'-tetramethyluronium hexafluorophosphate)溶于30ml干燥二氯甲烷中，在冰浴条件下逐滴加入3.1mmol dipea(二异丙基乙胺)，反应30min后加入0.77mmol产物2a。室温搅拌过夜(本发明中的过夜即12h)，tlc检测反应结束后，减压旋除有机相，加水，乙酸乙酯萃取(3
×
)，合并有机相并用1mol/l盐酸洗涤1次，再用饱和nacl洗涤2次，无水na2so4干燥。抽滤除去干燥剂，经柱色谱分离纯化，可得产物s4n-1(0.10g)，结构如下所示，产率20.22％。lc-ms(esi,m/z):642.25[m h]

。
[0053][0054]
4)将0.69mmol 5-降冰片烯-2-羧酸，1.04mmol hatu溶于30ml干燥二氯甲烷中，在冰浴条件下逐滴加入2.77mmol dipea，反应10min后加入0.77mmol产物2b。室温搅拌过夜，tlc检测反应结束后，减压旋除有机相，加水，乙酸乙酯萃取(3
×
)，合并有机相并用1mol/l盐酸洗涤1次，再用饱和nacl洗涤2次，无水na2so4干燥。抽滤除去干燥剂，经柱色谱分离纯化可得带有降冰片烯基团的靶蛋白配体，记为s8n-1(0.09g)，结构式如下，产率18.75％。lc-ms(esi,m/z):698.25[m h]

，696.40[m-h]-。
[0055][0056]
将实施例1中的1,4-丁二胺或1,8-辛二胺改为十二烷二胺即可制备带有生物正交基团降冰片烯的靶蛋白配体s12n，具有如下结构式：
[0057][0058]
实施例2
[0059]
一种带有生物正交基团四嗪的e3泛素连接酶配体tzl的制备方法，包括以下合成步骤：
[0060][0061]
1)在氮气保护下，25mmol乙腈、2.5mmol(4-氰基苄基)氨基甲酸叔丁酯、1.25mmol
三氟甲磺酸锌以及125mmol(6.067ml)的80％水合肼(质量分数)混合置于60℃反应36h，反应液冷却至室温，将50mmol亚硝酸钠溶液(3.45g亚硝酸钠溶于20ml的水)加入反应液中，然后缓慢滴加1mol/l盐酸直到无气泡产生且ph为3。乙酸乙酯萃取2次，合并有机相，无水na2so4干燥。抽滤除去干燥剂，经柱层析分离得到紫红色粉末，即化合物3(0.11g)，结构式如下，产率为14.67％，lc-ms(esi,m/z):302.40[m h]

。
[0062][0063]
2)将0.43mmol化合物3溶于4ml干燥二氯甲烷中，在冰浴条件下滴加三氟乙酸，室温搅拌2h，直接旋干，得到化合物4，快速用于下一步反应，将化合物4与0.43mmol丁二酸酐混溶于10ml干燥二氯甲烷溶液中，加入200μl dmf助溶，在冰浴条件下逐滴加入1.73mmol dipea，室温反应过夜。反应结束后，减压旋除二氯甲烷，经柱色谱分离得红色粉末，即化合物5(0.12g)，结构式如下，产率为93.02％，lc-ms(esi,m/z):302.30[m h]

。
[0064][0065]
3)将48.5mmolγ-氨基丁酸溶于80ml的四氢呋喃并置于冰水浴中，加入1mol/l的氢氧化钠溶液80ml，然后逐滴滴加53.3mmol二碳酸二叔丁酯的四氢呋喃溶液，并室温(本发明中的室温为25℃)搅拌，茚三酮检测反应进程，待反应完毕后，减压旋除可挥发性溶剂，用1mol/l盐酸调节至2～3，乙酸乙酯萃取，饱和氯化钠洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，抽滤，减压旋除溶剂即得浅黄色化合物6(8.24g)，结构式如下，产率为83.65％，lc-ms(esi,m/z):204.30[m h]

，202.10[m h]

。
[0066][0067]
4)将0.85mmol化合物6与1.16mmol hatu溶于6ml dmf中，在冰浴条件下，滴加1.54mmol三乙胺，室温搅拌15min，加入0.77mmol来那度胺(lenalidomide)，室温搅拌过夜，加水，乙酸乙酯萃取，饱和氯化钠洗涤有机相，无水na2so4干燥，抽滤除去干燥剂，减压旋除溶剂，经柱色谱分离得透明油状化合物7(0.42g)，结构式如下，产率为97.66％，lc-ms(esi,m/z):467.10[m na]

，443.05[m-h]-。
[0068][0069]
5)将0.94mmol化合物7溶于2mol/l氯化氢的乙酸乙酯溶液中，室温搅拌2h，抽滤所
得滤饼(白色固体)，即为化合物8(0.32g)，结构式如下，产率为99.76％，lc-ms(esi,m/z):345.05[m h]

，342.90[m-h]-。
[0070][0071]
6)将0.42mmol化合物5与0.71mmol hatu溶于dmf中，在冰浴条件下，逐滴加入1.9mmol dipea，搅拌15min后，加入0.42mmol化合物8，室温搅拌8h。反应完毕后，加入适量的水，二氯甲烷萃取(3
×
)，无水na2so4干燥。抽滤除去干燥剂，减压旋除溶剂，经柱色谱分离得红色产物，即带有四嗪基团的e3泛素连接酶配体tzl(75mg)，结构式如下，产率为28.52％，lc-ms(esi,m/z):650.65[m na]

，626.15[m-h]-。
[0072][0073]
实施例3
[0074]
一种带有生物正交基团四嗪的e3泛素连接酶配体分子tzf的制备方法，包括以下合成步骤：
[0075][0076]
1)在氮气保护下，25mmol乙腈、2.5mmol(4-氰基苄基)氨基甲酸叔丁酯、1.25mmol三氟甲磺酸锌以及125mmol(6.067ml)的80％水合肼(质量分数)混合置于60℃反应36h，反应液冷却至室温，将50mmol亚硝酸钠溶液(3.45g亚硝酸钠溶于20ml的水)加入反应液中，然后缓慢滴加1mol/l盐酸直到无气泡产生且ph为3。乙酸乙酯萃取2次，合并有机相，无水na2so4干燥。抽滤除去干燥剂，经柱层析分离得到紫红色粉末，即化合物3(0.11g)，结构式如下，产率为14.67％，lc-ms(esi,m/z):302.40[m h]

。
[0077][0078]
2)将0.63mmol化合物4ml 3溶于干燥二氯甲烷中，在冰浴条件下滴加1ml三氟乙酸，室温搅拌2h，直接旋干，得到化合物4，结构式如下，快速用于下一步反应。
[0079][0080]
3)将1.81mmol化合物thalidomide fluoride，2.00mmol甘氨酸叔丁酯盐酸盐，2.72mmol dipea，4ml dmf混溶于100ml茄形瓶中，置于微波反应仪中于85℃下反应50min,反应完毕后，加水，乙酸乙酯萃取，饱和氯化钠洗涤，无水na2so4干燥。抽滤除去干燥剂，减压旋除溶剂，经柱色谱分离得黄色荧光物质，即为化合物9(0.48g)，结构式如下，产率为68.57％，lc-ms(esi,m/z):410.05[m na]

，386.00[m-h]-。
[0081][0082]
4)将0.93mmol化合物9溶于6ml干燥二氯甲烷中，在冰浴条件下，逐滴加入2ml三氟乙酸，室温搅拌过夜，减压旋干，经柱色谱分离得黄色荧光产物，即为化合物10(0.11g)，结构式如下，产率为35.48％。lc-ms(esi,m/z):331.00[m h]

，329.90[m-h]-。
[0083][0084]
5)将0.63mmol化合物10，0.94mmol hatu溶于dmf中，在冰浴条件下，逐滴加入2.51mmol dipea，搅拌10min后，加入0.63mmol化合物4，室温搅拌8h。反应完毕后，加入适量的水，二氯甲烷萃取(3
×
)，无水na2so4干燥。抽滤除去干燥剂，减压旋除溶剂，经柱色谱分离得带有黄色荧光的红色产物，即带有生物正交基团四嗪的e3泛素连接酶配体tzf(40mg)，结构式如下，产率为12.51％，lc-ms(esi,m/z):515.05[m h]

，513.05[m-h]-。
[0085][0086]
实施例4
[0087]
带有生物正交基团(降冰片烯)的靶蛋白配体分子与带有生物正交基团(四嗪)的e3泛素连接酶配体分子在细胞内经自组装形成的蛋白降解剂。
[0088]
1)生物正交反应生成蛋白降解剂
[0089]
采用高效液相色谱在体外监测两部分靶向识别分子能否发生生物正交反应、反应速率以及反应进程。相同浓度的两部分靶向识别分子置于pbs和乙腈(v:v＝1:1)混合体系中按体积比(1:1)混匀，置于37℃恒温摇床上反应，在不同时间点取样进行检测，结果如图1
和图2所示，所有的靶向识别分子都能够发生生物正交反应形成蛋白降解剂。
[0090]
2)细胞内自组装生成蛋白降解剂
[0091]
先用实施例1制备的带有生物正交基团(降冰片烯)靶蛋白配体分子(终浓度为10μm)处理细胞2h后，再给予细胞实施例2或实施例3制备的带有生物正交基团(四嗪)的e3泛素连接酶配体分子(终浓度为10μm)，置于37℃，5％co2恒温培养箱中孵育24h，然后将细胞消化离心收集，用pbs洗涤细胞三次，加入1ml甲醇:乙腈:水(v:v:v＝2:2:1)并置于液氮中快速淬灭15min，冰上复溶，用细胞破碎仪进行破碎(超2s,停1s,共超20min)，置于-20℃孵育1h沉淀蛋白，4℃，13000rpm，离心15min，取上清冻干，再进行电喷雾质谱测定，验证自组装蛋白降解剂的生成。
[0092]
实施例5
[0093]
带有生物正交基团降冰片烯的靶蛋白配体分子对vegfr-2激酶的抑制活性筛选。
[0094]
采用的是adp-glo发光方法测定带有生物正交基团(降冰片烯)的靶向识别分子索拉菲尼对vegfr-2激酶的抑制活性。
[0095]
用buffer(tris 80mm,mgcl
2 20mm,bsa 0.2mg/ml,dtt 2mm)稀释atp(10mm)为250μm；将atp和底物poly(4:1glu,tyr)peptide按体积1:1配成atp(125μm)-poly(4:1glu,tyr)peptide(0.5μg/μl)混合溶液；用buffer稀释激酶为1.5ng/μl。将待测化合物配成6个浓度梯度的溶液，于384孔板上依次加入2μl atp-poly(4:1glu,tyr)peptide溶液、1μl样品溶液、2μl酶溶液启动反应。30℃孵育60min后，加入adp-glo试剂5μl终止反应。再加入kinase detection试剂10μl将adp转化为atp，在25℃孵育30min，使用perkinelmer多功能酶标仪的化学发光模块测定发光值，计算抑制率。
[0096]
数值处理：抑制率＝(阳性值-给药组值)/(阳性值-阴性值)
×
100％；
[0097]
化合物的实验结果见表1：
[0098]
表1靶向识别分子对vegfr-2激酶的抑制活性结果
[0099][0100]
从表1可以看出，本发明制备的带有生物正交基团降冰片烯的靶蛋白配体分子对vegfr-2激酶具有较好的抑制活性。
[0101]
实施例6
[0102]
带有生物正交基团降冰片烯的靶蛋白配体分子的细胞增殖抑制活性测定。
[0103]
带有生物正交基团降冰片烯的靶向识别分子索拉菲尼在细胞水平的活性检测采用mtt检测法。将处于对数增长期的ea.hy926细胞，mda-mb-453细胞以及u87细胞，用0.25％胰蛋白酶消化，制成单细胞悬液，接种于96孔板(4000个/孔)，每孔180μl。放入37℃，5％co2恒温培养箱中培养，24h后待细胞贴壁后加药。每组设置4个复孔，阴性对照组与空白组均加入20μl/孔无血清培养基，实验组加入不同浓度的药物20μl/孔(以无血清培养基稀释药
物)，放入37℃，5％co2恒温培养箱中继续培养。药物作用48h后，加入mtt溶液(终浓度为0.5mg/ml)22μl/孔，37℃孵育4h后，小心吸弃上清液，加入dmso 150μl/孔，置于摇床上充分振摇15min。用酶联免疫检测仪于490nm波长下测定各孔吸光度(od)值。
[0104]
数值处理：抑制率＝(od
阴性组-od
给药组
)/(od
阴性组-od
空白组
)
×
100％；
[0105]
部分化合物的实验结果见表2：
[0106]
表2靶向识别分子的细胞增殖抑制活性
[0107][0108]
从表2可以看出，本发明制备靶向识别分子s4n-1与s8n-1对ea.hy926细胞具有较好的抑制活性。
[0109]
实施例7
[0110]
细胞内自组装型蛋白降解剂对靶蛋白降解效果的考察。
[0111]
将处于对数增长期的u87细胞，用0.25％胰蛋白酶消化，制成单细胞悬液，接种于6孔板(5
×
105个/孔)，每孔2ml。放入37℃，5％co2恒温培养箱中培养，24h后待细胞贴壁后加药。先用固定浓度(终浓度为10μm)或不同浓度(终浓度为0.016μm，0.08μm，0.4μm，2μm，10μm)的靶蛋白配体分子处理细胞2h后，再给予不同浓度(终浓度为0.016μm，0.08μm，0.4μm，2μm，10μm)或者固定浓度(终浓度为10μm)的带有四嗪标签的e3泛素连接酶配体处理细胞，置于37℃，5％co2恒温培养箱中孵育48h，然后进行蛋白提取，再采用western blot免疫印迹法检测相关蛋白水平，参见图3中a和b和图4中a和b，结果显示，经由靶蛋白配体分子s4n-1与带有四嗪标签的e3泛素连接酶配体tzl自组装形成的蛋白降解剂对pdgfr-β蛋白有较好的降解效果，对于vegfr-2和ephb4蛋白也有一定的降解效果，表明以s4n-1和tzl为靶向识别分子构建的自组装型蛋白降解剂具有良好的应用前景，可用于抗肿瘤药物的制备。