一种肺癌类器官无血清专用培养基的制作方法

技术特征：
1.一种肺癌类器官无血清专用培养基，其特征在于：包括基础培养基和培养添加物，基础培养基为含有1％青-链霉素、1％hepes缓冲液、1％glutamax溶液的advanced dmem/f12培养基，培养添加物包括生长因子fgf2、fgf7、fgf10，胰岛素，氢化可的松，小分子抑制剂y-27632、sb202190，牛垂体提取物(bpe)、b27supplement。2.根据权利要求1所述的一种肺癌类器官无血清专用培养基，其特征在于，所述培养添加物的工作浓度为：fgf2：5-50ng/ml、fgf7：5-50ng/ml、fgf10：10-100ng/ml，胰岛素：0.5-50μg/ml，氢化可的松：50-500ng/ml，小分子抑制剂y-27632：1-10μm、sb202190：0.1-1μm，牛垂体提取物：5-50μg/ml、b27 supplement：1％。3.根据权利要求1所述的一种肺癌类器官无血清专用培养基，其特征在于，所述基础培养基为无血清培养基。4.根据权利要求1或2所述的一种肺癌类器官无血清专用培养基，其特征在于，所述培养基不需要添加wnt信号调节重组蛋白r-spondin或者发育调控蛋白noggin等重组蛋白或单独制备的wnt条件培养基、r-spondin条件培养基或noggin条件培养基。5.根据权利要求1或2所述的一种肺癌类器官无血清专用培养基，其特征在于，使用时在已配制好的基础培养基中，按照工作浓度加入所有培养添加物，混合均匀后即可获得。6.一种肺癌类器官培养方法，其特征在于，将手术或活检获取的肺癌组织样本用锋利的手术剪尽可能剪碎，然后通过100μm孔径细胞滤网，离心后重悬于2ml已配制好的肺癌类器官无血清专用培养基中，放入37℃细胞培养箱过夜；第二天，按照8000个细胞团块/ml重悬于冷的cultrextm growth factor reduced bme type2中，接种于24孔细胞培养板，每孔40-60μl；待30分钟后含有细胞的bme固化后，每孔加入上述肺癌类器官无血清专用培养基400μl，放入5％co2浓度、37℃细胞培养箱培养，每2-3天更换一次上述肺癌类器官无血清专用培养基，7天左右即可获得所需肺癌类器官。

技术总结
本发明涉及肿瘤类器官培养领域。具体涉及一种肺癌类器官无血清专用培养基和培养方法。所述培养基为一种无需添加Wnt等重组蛋白或条件培养基的无血清专用培养基，由基础培养基和培养添加物组成，基础培养基为含有1％青链霉素、1％HEPES缓冲液、1％GlutaMax的Advanced DMEM/F12培养基。培养添加物包括生长因子FGF2、FGF7、FGF10，胰岛素、氢化可的松，小分子抑制剂Y-27632、SB202190，BPE、B27supplement。将患者肺癌组织样本剪碎，于所述培养基中过夜，重悬于冷的Cultrex


技术研发人员：郑维越 扈晖 扈晓玉
受保护的技术使用者：扈晖
技术研发日：2022.10.20
技术公布日：2022/11/25