共聚聚羟基烷酸酯混合物的制造方法、以及转化微生物与流程

技术特征：
1.一种制造共聚聚羟基烷酸酯混合物的方法，该方法包括：对生产所述共聚聚羟基烷酸酯混合物的微生物进行培养的工序，所述共聚聚羟基烷酸酯混合物含有聚羟基烷酸酯级分(i)和聚羟基烷酸酯级分(ii)，所述聚羟基烷酸酯级分(i)包含具有3-羟基丁酸结构单元及3-羟基己酸结构单元的共聚聚羟基烷酸酯，而且3-羟基己酸的平均组成比率为20摩尔％以上，所述聚羟基烷酸酯级分(ii)包含具有3-羟基丁酸结构单元的聚羟基烷酸酯，而且3-羟基己酸的平均组成比率为0摩尔％以上且15摩尔％以下，所述共聚聚羟基烷酸酯混合物中3-羟基己酸的平均组成比率为22摩尔％以下。2.根据权利要求1所述的制造方法，其中，所述共聚聚羟基烷酸酯混合物中的所述聚羟基烷酸酯级分(i)的重量比例为10～90％。3.根据权利要求1或2所述的制造方法，其中，所述共聚聚羟基烷酸酯混合物中3-羟基己酸的平均组成比率为10～22摩尔％。4.根据权利要求1～3中任一项所述的制造方法，其中，所述微生物具有编码下述酶的基因：对3-羟基己酰基-coa的聚合活性彼此不同的2种聚羟基烷酸酯合成酶。5.根据权利要求4所述的制造方法，其中，所述对3-羟基己酰基-coa的聚合活性彼此不同的2种聚羟基烷酸酯合成酶的氨基酸序列的序列同一性为90％以下。6.根据权利要求4或5所述的制造方法，其中，编码所述对3-羟基己酰基-coa的聚合活性彼此不同的2种聚羟基烷酸酯合成酶的基因为以下的基因(a)和基因(b)，所述基因(a)编码对3-羟基己酰基-coa的聚合活性比野生型聚羟基烷酸酯合成酶高的聚羟基烷酸酯合成酶，所述野生型聚羟基烷酸酯合成酶来源于具有序列号1中记载的氨基酸序列的豚鼠气单胞菌，所述基因(b)编码对3-羟基己酰基-coa的聚合活性比野生型聚羟基烷酸酯合成酶低的聚羟基烷酸酯合成酶，所述野生型聚羟基烷酸酯合成酶来源于所述豚鼠气单胞菌。7.根据权利要求6所述的制造方法，其中，所述基因(a)为来源于气单胞菌属微生物的聚羟基烷酸酯合成酶基因或其突变体。8.根据权利要求7所述的制造方法，其中，所述基因(a)是编码下述氨基酸序列的基因：相对于序列号2或序列号3所示的氨基酸序列具有99.5～100％的序列同一性的氨基酸序列。9.根据权利要求6～8中任一项所述的制造方法，其中，所述基因(b)是将来源于气单胞菌属微生物的聚羟基烷酸酯合成酶基因的一部分和来源于贪铜菌属微生物的聚羟基烷酸酯合成酶基因的一部分组合而成的。10.根据权利要求9所述的制造方法，其中，所述基因(b)是编码相对于序列号6所示的氨基酸序列具有90～100％的序列同一性的氨基酸序列的基因。11.根据权利要求6～8中任一项所述的制造方法，其中，
所述基因(b)为来源于色杆菌属微生物的聚羟基烷酸酯合成酶基因或其突变体。12.根据权利要求11所述的制造方法，其中，所述基因(b)是编码相对于序列号4或序列号5所示的氨基酸序列具有90～100％的序列同一性的氨基酸序列的基因。13.根据权利要求6～8中任一项所述的制造方法，其中，所述基因(b)为来源于芽孢杆菌属微生物的聚羟基烷酸酯合成酶基因或其突变体。14.根据权利要求13所述的制造方法，其中，所述基因(b)是编码相对于序列号7及序列号8所示的氨基酸序列具有90～100％的序列同一性的氨基酸序列的基因。15.根据权利要求1～14中任一项所述的制造方法，其中，所述微生物为转化微生物，所述转化微生物进行了如下转化：与该微生物的野生株相比，细胞内的3-羟基己酰基-coa相对于聚羟基烷酸酯合成酶的供给增大。16.根据权利要求15所述的制造方法，其中，所述转化微生物进行了如下转化：油脂或脂肪酸的β氧化中碳原子数6的中间代谢物的分解受到抑制。17.根据权利要求16所述的制造方法，其中，所述转化微生物进行了如下转化：编码β-酮硫解酶的基因的表达受到抑制，所述β-酮硫解酶对作为碳原子数6的β-酮酰基-coa的β-酮己酰基-coa具有硫解活性。18.根据权利要求17所述的制造方法，其中，所述β-酮硫解酶具有相对于序列号9或序列号10所示的氨基酸序列显示出90～100％的序列同一性的氨基酸序列。19.根据权利要求1～18中任一项所述的制造方法，其中，所述微生物为具有下述基因的微生物：编码显示出r体特异性烯酰-coa水合酶活性的蛋白质的基因。20.根据权利要求1～19中任一项所述的制造方法，其中，在所述培养工序中添加包含油脂或脂肪酸的碳源。21.根据权利要求20所述的制造方法，其中，所述包含油脂或脂肪酸的碳源为包含碳原子数6～12的中链脂肪酸或该中链脂肪酸的甘油酯的碳源。22.根据权利要求21所述的制造方法，其中，所述中链脂肪酸为己酸。23.根据权利要求1～22中任一项所述的制造方法，其中，所述微生物属于贪铜菌属、或为贪铜菌属微生物的转化体。24.根据权利要求23所述的制造方法，其中，所述微生物为杀虫贪铜菌、或杀虫贪铜菌的转化体。25.一种转化微生物，其是生产共聚聚羟基烷酸酯混合物的转化微生物，所述转化微生物具有编码下述酶的基因：对3-羟基己酰基-coa的聚合活性彼此不同的2种聚羟基烷酸酯合成酶，
所述转化微生物进行了如下转化：与所述转化微生物的野生株相比，细胞内的3-羟基己酰基-coa相对于聚羟基烷酸酯合成酶的供给增大，所述共聚聚羟基烷酸酯混合物含有聚羟基烷酸酯级分(i)和聚羟基烷酸酯级分(ii)，所述聚羟基烷酸酯级分(i)包含具有3-羟基丁酸结构单元及3-羟基己酸结构单元的共聚聚羟基烷酸酯，而且3-羟基己酸的平均组成比率为20摩尔％以上，所述聚羟基烷酸酯级分(ii)包含具有3-羟基丁酸结构单元的聚羟基烷酸酯，而且3-羟基己酸的平均组成比率为0摩尔％以上且15摩尔％以下，所述共聚聚羟基烷酸酯混合物的3-羟基己酸的平均组成比率为22摩尔％以下。

技术总结
本发明提供制造共聚聚羟基烷酸酯混合物的方法。该方法包括对生产共聚聚羟基烷酸酯混合物的微生物进行培养的工序。上述混合物含有级分(I)和级分(II)，所述级分(I)包含具有3-羟基丁酸结构单元及3-羟基己酸结构单元的共聚聚羟基烷酸酯、且3-羟基己酸的平均组成比率为20摩尔％以上，所述级分(II)包含具有3-羟基丁酸结构单元的聚羟基烷酸酯、且3-羟基己酸的平均组成比率为0摩尔％以上且15摩尔％以下。上述共聚聚羟基烷酸酯混合物中3-羟基己酸的平均组成比率为22摩尔％以下。均组成比率为22摩尔％以下。


技术研发人员：有川尚志 佐藤俊辅 古馆祥
受保护的技术使用者：株式会社钟化
技术研发日：2021.04.08
技术公布日：2022/11/18