用于激肽释放酶（KLKB1）基因编辑的组合物和方法与流程

技术特征：
1.一种向导rna，其包括：a.向导序列，所述向导序列包括与选自seq id no:15、8和41的序列至少95％、90％或85％相同的序列；b.向导序列，所述向导序列包括选自seq id no:15、8和41的序列的至少17个、18个、19个或20个连续核苷酸；或c.向导序列，所述向导序列选自seq id no:15、8和41。2.根据权利要求1所述的向导rna，其进一步包括seq id no:202的核苷酸序列。3.根据权利要求1所述的向导rna，其中所述向导rna进一步包括选自seq id no:170、171、172和173的核苷酸序列，其中seq id no:170、171、172或173的所述序列在所述向导序列的3'位。4.根据权利要求1到3中任一项所述的向导rna，其中所述向导rna进一步包括3'尾。5.根据权利要求1到4中任一项所述的向导rna，其中所述向导rna包括至少一个修饰。6.根据权利要求5所述的向导rna，其中所述修饰包括5'端修饰。7.根据权利要求5或6所述的向导rna，其中所述修饰包括3'端修饰。8.根据权利要求1到7中任一项所述的向导rna，其中所述向导rna包括发夹区中的修饰。9.根据权利要求1到8中任一项所述的向导rna，其中所述修饰包括2'-o-甲基(2'-o-me)修饰的核苷酸。10.根据权利要求1到9中任一项所述的向导rna，其中所述修饰包括核苷酸之间的硫代磷酸酯(ps)键。11.根据权利要求1到10中任一项所述的向导rna，其中所述修饰包括2'-氟(2'f)修饰的核苷酸。12.根据权利要求1或3到11中任一项所述的向导rna，其进一步包括seq id no:171的核苷酸序列。13.根据权利要求12所述的向导rna，其根据seq id no:405的核苷酸序列的模式进行修饰。14.根据权利要求1或3到11中任一项所述的向导rna，其进一步包括seq id no:173的核苷酸序列。15.根据权利要求14所述的向导rna，其根据seq id no:248-255或450的模式进行修饰。16.根据权利要求12到15中任一项所述的向导rna，其中所述向导序列是seq id no:15。17.根据权利要求12到15中任一项所述的向导rna，其中所述向导序列是seq id no:8。18.根据权利要求12到15中任一项所述的向导rna，其中所述向导序列是seq id no:41。19.根据权利要求1或4到11中任一项所述的向导rna，其中所述向导rna根据seq id no:300的模式进行修饰，其中n共同作为权利要求1的向导序列。20.根据权利要求16所述的向导rna，其中seq id no:300中的每个n是任何天然核苷酸或非天然核苷酸。
21.根据权利要求19所述的向导rna，其中所述向导序列是seq id no:15，并且所述向导rna根据uugcguaugggacacaaguuuuagamgmcmumamgmamama mumamgmcaaguuaaaauaaggcuaguccguuaucamamcmumumgmamama mamamgmumgmgmcmamcmcmgmamgmumcmgmgmumgmcmu*mu*mu*mu进行修饰，其中“ma”、“mc”、“mu”或“mg”表示已用2'-o-me修饰的核苷酸，*表示硫代磷酸酯键，并且n是天然核苷酸。22.根据权利要求19所述的向导rna，其中所述向导序列是seq id no:8，并且所述向导rna根据mu*ma*mc*ccgggaguugacuuuggguuuuagamgmcmumam gmamamamumamgmcaaguuaaaauaaggcuaguccguuaucamamcmumum gmamamamamamgmumgmgmcmamcmcmgmamgmumcmgmgmumgmcmu*mu*mu*mu进行修饰，其中“ma”、“mc”、“mu”或“mg”表示已用2'-o-me修饰的核苷酸，*表示硫代磷酸酯键，并且n是天然核苷酸。23.根据权利要求19所述的向导rna，其中所述向导序列是seq id no:41，并且所述向导rna根据mu*ma*mu*uaucaaaucacauuaccguuuuagamgmcmuma mgmamamamumamgmcaaguuaaaauaaggcuaguccguuaucamamcmumu mgmamamamamamgmumgmgmcmamcmcmgmamgmumcmgmgmumgmcmu*mu*mu*mu进行修饰，其中“ma”、“mc”、“mu”或“mg”表示已用2'-o-me修饰的核苷酸，*表示硫代磷酸酯键，并且n是天然核苷酸。24.一种组合物，其包括根据权利要求1到23中任一项所述的向导rna。25.根据权利要求24所述的组合物，其进一步包括rna引导的dna结合剂或编码rna引导的dna结合剂的核酸。26.根据权利要求25所述的组合物，其中所述编码rna引导的dna结合剂的核酸包括mrna，所述mrna包括编码rna引导的dna结合剂的开放阅读框(orf)。27.根据权利要求25或26所述的组合物，其中所述rna引导的dna结合剂是cas9。28.根据权利要求27所述的组合物，其中所述cas9是酿脓链球菌cas9(s.pyogenes cas9)。29.根据权利要求26到28中任一项所述的组合物，其中所述orf是经修饰的orf。30.根据权利要求24到29中任一项所述的组合物，其进一步包括药用赋形剂。31.根据权利要求24到30中任一项所述的组合物，其中所述向导rna与脂质纳米颗粒(lnp)缔合。32.根据权利要求31所述的组合物，其中所述lnp包括阳离子脂质。33.根据权利要求32所述的组合物，其中所述阳离子脂质是十八碳-9,12-二烯酸(9z,12z)-3-((4,4-双(辛氧基)丁酰基)氧基)-2-((((3-(二乙基氨基)丙氧基)羰基)氧基)甲基)丙酯，也称为(9z,12z)-十八碳-9,12-二烯酸3-((4,4-双(辛氧基)丁酰基)氧基)-2-((((3-(二乙基氨基)丙氧基)羰基)氧基)甲基)丙酯。34.根据权利要求31到33中任一项所述的组合物，其中所述lnp包括十八碳-9,12-二烯酸(9z,12z)-3-((4,4-双(辛氧基)丁酰基)氧基)-2-((((3-(二乙基氨基)丙氧基)羰基)氧基)甲基)丙酯——也称为(9z,12z)-十八碳-9,12-二烯酸3-((4,4-双(辛氧基)丁酰基)氧基)-2-((((3-(二乙基氨基)丙氧基)羰基)氧基)甲基)丙酯、dspc、胆固醇和peg2k-dmg。35.一种药物组合物，其包括根据权利要求1到23中任一项所述的向导rna或根据权利要求24到34中任一项所述的组合物。36.一种药物组合物，其包括根据权利要求1到23中任一项所述的向导rna或根据权利
要求24到34中任一项所述的组合物，所述药物组合物用于诱导细胞中的klkb1基因内的双链断裂或单链断裂或减少细胞中的klkb1的表达，或一种根据权利要求1到23中任一项所述的向导rna或根据权利要求24到34中任一项所述的组合物用于诱导细胞中的klkb1基因内的双链断裂或单链断裂或减少细胞中的klkb1的表达的用途。37.根据权利要求36所述的药物组合物或用途，其用于减少细胞或受试者中的所述klkb1基因的表达。38.一种药物组合物，其包括根据权利要求1到23中任一项所述的向导rna或根据权利要求24到34中任一项所述的组合物，所述药物组合物用于治疗患有遗传性血管性水肿(hae)的受试者，或一种根据权利要求1到23中任一项所述的向导rna或根据权利要求24到34中任一项所述的组合物用于治疗患有hae的受试者的用途。39.根据权利要求38所述的药物组合物或用途，其包括降低hae发作的频率和/或严重程度。40.一种药物组合物，其包括根据权利要求1到23中任一项所述的向导rna或根据权利要求24到34中任一项所述的组合物，所述药物组合物用于治疗或预防与hae相关的血管性水肿、缓激肽产生和累积、缓激肽诱导的肿胀、气道的血管性水肿阻塞或窒息，或一种根据权利要求1到23中任一项所述的向导rna或根据权利要求24到34中任一项所述的组合物用于治疗或预防与hae相关的血管性水肿、缓激肽产生和累积、缓激肽诱导的肿胀、气道的血管性水肿阻塞或窒息的用途。41.一种药物组合物，其用于降低受试者的总血浆激肽释放酶活性或降低前激肽释放酶和/或激肽释放酶水平，或一种根据权利要求1到23中任一项所述的向导rna或根据权利要求24到34中任一项所述的组合物用于降低受试者的总血浆激肽释放酶活性或降低前激肽释放酶和/或激肽释放酶水平的用途。42.根据权利要求41所述的药物组合物或用途，其中所述总血浆激肽释放酶活性降低超过60％。43.一种用于诱导细胞中的klkb1基因内的双链断裂或单链断裂或减少细胞中的klkb1的表达的方法，所述方法包括使细胞与根据权利要求1到23中任一项所述的向导rna或根据权利要求24到34中任一项所述的组合物接触。44.根据权利要求43所述的方法，其中所述细胞位于受试者体内。45.一种治疗患有遗传性血管性水肿(hae)的受试者的方法，所述方法包括施用根据权利要求1到23中任一项所述的向导rna或根据权利要求24到34中任一项所述的组合物，由此治疗所述受试者。46.根据权利要求45所述的方法，其中治疗所述受试者包括降低hae发作的频率和/或严重程度。47.一种治疗或预防与hae相关的血管性水肿、缓激肽产生和累积、缓激肽诱导的肿胀、气道的血管性水肿阻塞或窒息的方法，所述方法包括向受试者施用根据权利要求1到23中任一项所述的向导rna或根据权利要求24到34中任一项所述的组合物，由此治疗或预防所述受试者的与hae相关的血管性水肿、缓激肽产生和累积、缓激肽诱导的肿胀、气道的血管性水肿阻塞或窒息。48.一种降低受试者的总血浆激肽释放酶活性的方法，所述方法包括施用根据权利要
求1到23中任一项所述的向导rna或根据权利要求24到34中任一项所述的组合物，由此降低受试者的总血浆激肽释放酶活性。49.根据权利要求48所述的方法，其中所述受试者的所述总血浆激肽释放酶活性降低超过60％。50.一种根据权利要求1到23中任一项所述的向导rna或根据权利要求24到34中任一项所述的组合物在制备用于实践根据权利要求43到49中任一项所述的方法的药物中的用途。

技术总结
本发明提供了用于在KLKB1基因内进行编辑，例如引入双链断裂，的组合物和方法。本发明提供了用于治疗患有遗传性血管性水肿(HAE)的受试者的组合物和方法。受试者的组合物和方法。受试者的组合物和方法。


技术研发人员：S
受保护的技术使用者：因特利亚治疗公司
技术研发日：2021.02.05
技术公布日：2022/11/18