SHP2抑制剂及其组合物和应用的制作方法

shp2抑制剂及其组合物和应用
技术领域
1.本发明涉及一系列作为含src同源区2蛋白质酪氨酸磷酸酶2(srchomologyregion 2-containing protein tyrosine phosphatase 2、shp2)抑制剂的化合物及其制备方法、药物组合物。本发明还涉及上述化合物或其药物组合物在治疗 shp2介导的疾病中的用途。


背景技术：

2.含src同源区2蛋白质酪氨酸磷酸酶2(src homologyregion 2-containingprotein tyrosine phosphatase 2、shp2)是由一种由ptpn11基因编码的非受体型蛋白质酪氨酸磷酸酶，ptpn11是首个被发现的编码酪氨酸磷激酶的原癌基因 (chan r j et al.ptpn11 is the first identified proto-oncogene that encodes a tyrosinephosphatase.blood、2007、109:862-867)，其编码的shp2蛋白含有n端的shp2 结构域(n-shp2)、c端shp2结构域(c-shp2)、蛋白质磷酸酶催化结构域(ptp)，两个c端的酪氨酸残基(y542和y580)以及一个富含脯氨酸(pro)的模体。
3.近年来研究主要认为ras/erk通路是shp2发挥作用最重要的一条信号转导通路，其机制(dance m et al.the molecular functions of shp2 in the ras/mitogen
‑ꢀ
activated protein kinase(erk1/2)pathway.cell signal、2008、20:453-459)大致为：生长因子受体活化后，其酪氨酸残基发生自体磷酸化，为grb2和shp2(含有 sh2结构域的衔接蛋白)磷酸酪氨酸结合区域sh2提供停靠位点。grb2与磷酸化的生长因子受体的结合导致sos蛋白在胞膜的聚集。sos作为一种鸟嘌呤核苷酸交换因子(guanine nucleotide exchange factor、gef)，可以催化膜结合蛋白 ras从无活性的ras-gdp转换为有活性的ras-gtp。ras-gtp再进一步与下游的信号系统发生联系，激活ser/thr激酶raf1等，进而在调节激酶mek的作用下使erk活化，erk活化后直接作用于细胞质的靶分子或转移到细胞核内调节基因转录，使细胞增殖或分化。这一过程可能还受到shp2结合蛋白和底物(shpsubstrate-1、shps-1)、ras-gtp酶活化蛋白(ras-gap)以及其他src成员的影响。
4.据报道，shp2蛋白不仅调控ras/erk信号通路，还调控多种信号通路，如 jak-stat3,nf-κb,pi3k/akt,rho和nfat，从而调节细胞增殖、分化、迁移和凋亡等生理功能。
5.shp2已被证明与多种疾病有关，约50％的noonan综合征患者被发现有 ptpn11的错义突变。此外，研究发现ptpn11突变是jmml和多发性白血病的重要原因(tartaglia m et al.nat genet、2003、34:148-150；loh ml et al.blood、 2004、103:2325-2331；tartaglia m et al.br j haematol、2005、129:333-339；xu ret al.blood、2005、106:3142-3149)。随着对ptpn11/shp2研究的深入，发现 ptpn11/shp2与肺癌、胃癌、结肠癌、黑色素瘤、甲状腺癌等多种癌症的发生有关(tang chunlan et al.china journal of lung cancer、2010,13:98-101；higuchi m etal.cancer sci、2004、95:442-447；bentires al j m et al.cancer res、2004、64:8816
‑ꢀ
8820；martinelli s et al.cancer gene cycle et al、2006、166:124-129)。
6.目前，shp2抑制剂作为潜在的癌症治疗药物越来越受到关注。有多种shp2 抑制剂正在开发中，如诺华研发的tno155于2017年进入i期临床试验，用于治疗实体瘤；jacobio pharm开发的jab-3068于2018年1月正式获得美国fda 新药临床试验；由revolution开发的rmc-4630在2018年半年进行了首次人体临床试验。目前国内外市场尚无针对该靶点的药物，因此开发出能够靶向抑制 shp2活性的小分子药物，为患者提供更安全有效的shp2抑制剂具有重要意义。


技术实现要素：

7.本发明涉及一种作为含src同源区2蛋白质酪氨酸磷酸酶2(shp2)抑制剂的化合物。这种shp2抑制剂可用于治疗癌症。
8.这种shp2抑制剂涉及化合物或其药学上可接受的盐、异构体、立体异构体、前药、螯合物、非共价复合物或溶剂合物，所述化合物如式i所示：
[0009][0010]
其中，
[0011]
为单键或双键
[0012]
环a选自芳基或5-10元杂环基；其中所述5-10元杂环基任选地含有1、2 或3个独立地选自n、s或o的杂原子；
[0013]
b环选自芳基、5-10元杂芳基或不存在；
[0014]
环c选自5-8元杂环基或不存在；
[0015]
其中，当环b不存在时，x1和x2独立地选自ch2、o或nh；
[0016]
其中，当环b是芳基或5-10元杂芳基时，x1和x2独立地选自c或n；
[0017]
其中，当环c不存在，y1和y2独立地选自cr5或nr
5'
；
[0018]
其中，当环c是5-8元杂环基，y
l
和y2独立地选自c或n；
[0019]
y3选自ch、o或n；
[0020]
m选自ch2、o、nh或s；
[0021]
r1和r2独立地选自氢、卤素、-cn、-no2和c
1-6
烷基；其中c
1-6
烷基任选地被一个或多个独立地选自卤素、-cn、-no2、-or6、-nr7r8的取代基取代；
[0022]
每个r3和r4独立地选自氢、卤素、-cn、-no2、＝o、c
1-6
烷基、c
3-8
环烷基、芳基、3-8元杂环基、-or6、-nr7r8、-sr9、-c(＝o)or
10
、-c(＝o)nr
11r12
、
ꢀ‑
s(＝o)2r
13
、-s(＝o)2or
14
、-s(＝o)2nr
15r16
、-o(ch2)
p
or
17
、-o(ch2)
p
nr
17r18
、
ꢀ‑
nr
19
(ch2)qnr
20r21
、-nr
22
(ch2)qor
23
；其中c
1-6
烷
基、c
3-8
环烷基、芳基、3
‑ꢀ
8元杂环基被一个或多个选自卤素、-cn、-no2、＝o、-or6、-nr7r8、-sr9、c
3-8
环烷基、3-8元杂环基或-c
1-6
烷基的取代基取代；
[0023]
r5选自氢、＝o、c
1-6
烷基或c
3-8
环烷基；
[0024]r5'
选自氢、c
1-6
烷基或c
3-8
环烷基；
[0025]
r6、r7、r8、r9、r
10
、r
11
、r
12
、r
13
、r
14
、r
15
、r
16
、r
17
、r
18
、r
19
、r
20
、 r
21
、r
22
和r
23
独立地为氢、c
1-4
烷基、c
3-8
环烷基、3-8元杂环基、c
2-4
烯基或c
2-4
炔基；
[0026]
m选自0、1、2、3或4；
[0027]
n选自0、1、2、3或4；
[0028]
p选自1、2、3或4；
[0029]
q选自1、2、3或4；
[0030]
其中，若环c不存在时，环a为苯基，y1为n，y2为ch，y3为n，则m 不为0，则各r3不为氢。
[0031]
在式i的一些实施方案中，环a为芳基。
[0032]
在式i的一些实施方案中，环a为苯基。
[0033]
在式i的一些实施方案中，环a为5-10元杂环基。
[0034]
在式i的一些实施方案中，环a为噻吩基、呋喃基、咪唑基、异恶唑基、恶唑基、吡唑、吡咯基、噻唑基、噻二唑基、三唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吲哚基、喹啉基或异喹啉基、喹啉基或异喹啉基、
[0035]
在式i的一些实施方案中，环b不存在。
[0036]
在式i的一些实施方案中，环b为芳基或5-10元杂芳基。
[0037]
在式i的一些实施方案中，环b为芳基。
[0038]
在式i的一些实施方案中，环b为苯基。
[0039]
在式i的一些实施方案中，环b为5-10元杂芳基。
[0040]
在式i的一些实施方案中，环b为噻吩基、呋喃基、咪唑基、异恶唑基、恶唑基、吡唑、吡咯基、噻唑基、噻二唑基、三唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基，
[0041]
在式i的一些实施方案中，环c不存在。
[0042]
在式i的一些实施方案中，环c为5-8元杂环基。
[0043]
在式i的一些实施方案中，环c为
[0044]
在式i的一些实施方案中，r1和r2独立地选自氢、卤素和c
1-6
烷基；其中c
1-6
烷基任选地被一个或多个独立地选自卤素、-cn、-no2、-or6、-nr7r8的取代基取代；
[0045]
其中，r6、r7和r8独立地为氢、c
1-4
烷基、c
3-8
环烷基、c
2-4
烯基、c
2-4
炔基。
[0046]
在式i的一些实施方案中，每个r3独立地选自氢、卤素、-cn、-no2、＝ o、c
1-6
烷基、c
3-8
环烷基、芳基、3-8元杂环基、-or6、-nr7r8、-sr9、-c(＝o)or
10
、
ꢀ‑
c(＝o)nr
11r12
、-s(＝o)2r
13
、-s(＝o)2or
14
、-s(＝o)2nr
15r16
、-o(ch2)
p
or
17
，
‑ꢀ
o(ch2)
p
nr
17r18
，-nr
19
(ch2)qnr
20r21
，-nr
22
(ch2)qor
23
；其中c
1-6
烷基、c
3-8
环烷基、芳基、3-8元杂环基任选地被一种或多种独立选自卤素、-cn、-no2、＝o、
ꢀ‑
or6、-nr7r8、-sr9、c
3-8
环烷基、3-8元杂环基或-c
1-6
烷基的取代基取代。
[0047]
其中，r6、r7、r8、r9、r
10
、r
11
、r
12
、r
13
、r
14
、r
15
、r
16
、r
17
、r
18
、r
19
、 r
20
、r
21
、r
22
和r
23
独立地为氢、c
1-4
烷基、c
3-8
环烷基、c
2-4
烯基、c
2-4
炔基。
[0048]
在式i的一些实施方案中，每个r4独立地选自氢、卤素、-cn、c
1-6
烷基、
ꢀ‑
or6；其中c
1-6
烷基被一个或多个选自卤素、-or6、-nr7r8的取代基取代；
[0049]
其中，r6、r7和r8独立地为氢、c
1-4
烷基、c
3-8
环烷基、c
2-4
烯基、c
2-4
炔基。
[0050]
在式i的一些实施方案中，每个r1和r2独立地选自氢、卤素、ch2oh。
[0051]
在式i的一些实施方案中，每个r3独立地选自氢、och3、och2ch3、cl、 nh2、cn、-conh2、ochf2、-cooch3、ch3、ch2oh、ch2ch2oh、oh、-so2ch3、cf3、f、ocf3、-so2nh2、ch(oh)ch3、、nh2、n(ch3)2、ch(ch3)2、och2ch2n(ch3)2、och2ch2och3、 n(ch3)ch2ch2n(ch3)2[0052]
在式i的一些实施方案中，每个r4独立地选自氢、cn、f、och3。
[0053]
在式i的一些实施方案中，m选自0、1、2或3。
[0054]
在式i的一些实施方案中，n选自0、1或2。
[0055]
在式i的一些实施方案中，p选自1或2。
[0056]
在式i的一些实施方案中，其中所述化合物具有式ii，或其药学上可接受的盐、异构体、立体异构体、前药、螯合物、非共价复合物或溶剂合物，
[0057][0058]
其中，
[0059]
是单键或双键；
[0060]
环a选自芳基或5-10元杂环基；其中所述5-10元杂环基任选地含有1、2 或3个独立地选自n、s或o的杂原子；
[0061]
b环选自芳基或5-10元杂芳基；
[0062]
x1和x2独立地选自c或n；
[0063]
y1和y2独立地选自cr5或nr
5'
；
[0064]
y3选自ch、o或n；
[0065]
m选自ch、o、nh或s；
[0066]
r1和r2独立地选自氢、卤素、-cn、-no2和c
1-6
烷基；其中c
1-6
烷基任选地被一个或多个独立地选自卤素、-cn、-no2、-or6、-nr7r8的取代基取代；
[0067]
每个r3和r4独立地选自氢、卤素、-cn、-no2、＝o、c
1-6
烷基、c
3-8
环烷基、芳基、3-8元杂环基、-or6、-nr7r8、-sr9、-c(＝o)or
10
、
‑ꢀ
c(＝o)nr
11r12
、-s(＝o)2r
13
、-s(＝o)2or
14
、-s(＝o)2nr
15r16
、-o(ch2)
p
or
17
、
‑ꢀ
o(ch2)
p
nr
17r18
，-nr
19
(ch2)qnr
20r21
，-nr
22
(ch2)qor
23
；其中c
1-6
烷基、c
3-8
环烷基、芳基、3-8元杂环基被一个或多个选自卤素、-cn、-no2、＝o、
‑ꢀ
or6、-nr7r8、-sr9、c
3-8
环烷基、3-8元杂环基或-c
1-6
烷基的取代基取代；
[0068]
r5选自氢、＝o、c
1-6
烷基或c
3-8
环烷基；
[0069]r5'
选自氢、c
1-6
烷基或c
3-8
环烷基；
[0070]
r6、r7、r8、r9、r
10
、r
11
、r
12
、r
13
、r
14
、r
15
、r
16
、r
17
、r
18
、r
19
、 r
20
、r
21
、r
22
和r
23
独立地选自氢、c
1-4
烷基、c
3-8
环烷基、3-8元杂环基、 c
2-4
烯基或c
2-4
炔基；
[0071]
m选自0、1、2、3或4；
[0072]
n选自0、1、2、3或4；
[0073]
p选自1、2、3或4；
[0074]
q选自1、2、3或4；
[0075]
其中，若y1为n，y2为ch，y3为n，则m不为0，则r3不为氢。
[0076]
在式ii的一些实施方案中，其中y1和y2之间的是双键。
[0077]
在式ii的一些实施方案中，其中y1是n并且y2是ch。
[0078]
在式ii的一些实施方案中，环a为芳基。
[0079]
在式ii的一些实施方案中，环a为苯基。
[0080]
在式ii的一些实施方案中，环a为5-10元杂环基。
[0081]
在式ii的一些实施方案中，环a是噻吩基、呋喃基、咪唑基、异恶唑基、恶唑基、吡唑、吡咯基、噻唑基、噻二唑基、三唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吲哚基、喹啉基或异喹啉基喹啉基或异喹啉基
[0082]
在式ii的一些实施方案中，环b为芳基或5-10元杂芳基。
[0083]
在式ii的一些实施方案中，环b为芳基。
[0084]
在式ii的一些实施方案中，环b为苯基。
[0085]
在式ii的一些实施方案中，环b为5-10元杂芳基。
[0086]
在式ii的一些实施方案中，环b为噻吩基、呋喃基、咪唑基、异恶唑基、恶唑基、吡
唑、吡咯基、噻唑基、噻二唑基、三唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基
[0087]
在式ii的一些实施方案中，r1和r2独立地选自氢、卤素和c
1-6
烷基；其中c
1-6
烷基被一个或多个选自卤素、-cn、-no2、-or6、-nr7r8的取代基取代；
[0088]
其中，r6、r7和r8独立地选自氢、c
1-4
烷基、c
3-8
环烷基、c
2-4
烯基、c
2-4
炔基。
[0089]
在式ii的一些实施方案中，每个r3独立地选自氢、卤素、-cn、-no2、＝o、c
1-6
烷基、c
3-8
环烷基、芳基、3-8元杂环基、-or6、-nr7r8、-sr9、
‑ꢀ
c(＝o)or
10
、-c(＝o)nr
11r12
、-s(＝o)2r
13
、-s(＝o)2or
14
、-s(＝o)2nr
15r16
、
‑ꢀ
o(ch2)
p
or
17
，-o(ch2)
p
nr
17r18
，-nr
19
(ch2)qnr
20r21
，-nr
22
(ch2)qor
23
；其中c
1-6
烷基、c
3-8
环烷基、芳基、3-8元杂环基任选地被一个或多个独立地选自卤素、-cn、-no2、＝o、-or6、-nr7r8、-sr9、c
3-8
环烷基、3-8元杂环基或
‑ꢀc1-6
烷基的取代基取代；
[0090]
其中，r6、r7、r8、r9、r
10
、r
11
、r
12
、r
13
、r
14
、r
15
、r
16
、r
17
、r
18
、 r
19
、r
20
、r
21
、r
22
和r
23
独立地选自氢、c
1-4
烷基、c
3-8
环烷基、c
2-4
烯基、 c
2-4
炔基。
[0091]
在式ii的一些实施方案中，每个r4独立地选自氢、卤素、-cn、c
1-6
烷基、-or6；其中c
1-6
烷基被一个或多个选自卤素、-or6、-nr7r8的取代基取代；
[0092]
其中，r6、r7和r8独立地为选自氢、c
1-4
烷基、c
3-8
环烷基、c
2-4
烯基、 c
2-4
炔基。
[0093]
在式ii的一些实施方案中，每个r1和r2独立地选自氢、卤素、ch2oh。
[0094]
在式ii的一些实施方案中，每个r3独立地选自氢、och3、och2ch3、 c
l
、nh2、cn、-conh2、ochf2、-cooch3、ch3、ch2oh、ch2ch2oh、 oh、-so2ch3、cf3、f、ocf3、-so2nh2、ch(oh)ch3、、nh2、n(ch3)2、 ch(ch3)2、och2ch2n(ch3)2、och2ch2och3、n(ch3)ch2ch2n(ch3)2.
[0095]
在式ii的一些实施方案中，每个r4独立地选自氢、cn、f、och3。
[0096]
在式ii的一些实施方案中，m选自0、1、2或3。
[0097]
在式ii的一些实施方案中，n选自0、1或2。
[0098]
在式ii的一些实施方案中，p选自1或2。
[0099]
在式i的一些实施方案中，其中所述化合物具有式ii'，或其药学上可接受的盐、异构体、立体异构体、前药、螯合物、非共价复合物或溶剂合物。
[0100][0101]
其中，
[0102]
是单键或双键；
[0103]
环a为芳基或5-10元杂环基；其中所述5-10元杂环基含有1、2或3个选自n、s或o的杂原子；
[0104]
x1和x2选自ch2、o或nh；
[0105]
y1和y2选自cr5或nr
5'
；
[0106]
y3选自ch、o或n；
[0107]
m选自ch、o、nh或s；
[0108]
r1和r2独立地选自氢、卤素、-cn、-no2和c
1-6
烷基；其中c
1-6
烷基任选地被一个或多个独立地选自卤素、-cn、-no2、-or6、-nr7r8的取代基取代；
[0109]
每个r3和r4独立地选自氢、卤素、-cn、-no2、＝o、c
1-6
烷基、c
3-8
环烷基、芳基、3-8元杂环基、-or6、-nr7r8、-sr9、-c(＝o)or
10
、-c(＝o)nr
11r12
、
ꢀ‑
s(＝o)2r
13
、-s(＝o)2or
14
、-s(＝o)2nr
15r16
、-o(ch2)
p
or
17
、-o(ch2)
p
nr
17r18
、
ꢀ‑
nr
19
(ch2)qnr
20r21
、-nr
22
(ch2)qor
23
；其中c
1-6
烷基、c
3-8
环烷基、芳基、3
‑ꢀ
8元杂环基任选地被一个或多个独立地选自卤素、-cn、-no2、＝o、-or6、-nr7r8、
ꢀ‑
sr9、c
3-8
环烷基、3-8元杂环基或-c
1-6
烷基的取代基取代；
[0110]
r5选自氢、＝o、c
1-6
烷基或c
3-8
环烷基；
[0111]r5'
选自氢、c
1-6
烷基或c
3-8
环烷基；
[0112]
r6、r7、r8、r9、r
10
、r
11
、r
12
、r
13
、r
14
、r
15
、r
16
、r
17
、r
18
、r
19
、r
20
、 r
21
、r
22
和r
23
独立地为氢、c
1-4
烷基、c
3-8
环烷基、3-8元杂环基、c
2-4
烯基或 c
2-4
炔基；
[0113]
m选自0、1、2、3或4；
[0114]
n选自0、1、2、3或4；
[0115]
p选自1、2、3或4；
[0116]
q选自1、2、3或4；
[0117]
其中，若y1为n，y2为ch，y3为n，则m不为0，则r3不为氢。
[0118]
在式ii'的一些实施方案中，环a为芳基。
[0119]
在式ii'的一些实施方案中，环a为苯基。
[0120]
在式ii'的一些实施方案中，环a为5-10元杂环基。
[0121]
在式ii'的一些实施方案中，环a为噻吩基、呋喃基、咪唑基、异恶唑基、恶唑基、吡
唑、吡咯基、噻唑基、噻二唑基、三唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吲哚基、喹啉基或异喹啉基、喹啉基或异喹啉基、
[0122]
在式ii'的一些实施方案中，r1和r2独立地选自氢、卤素和c
1-6
烷基；其中 c
1-6
烷基任选地被一个或多个独立地选自卤素、-cn、-no2、-or6、-nr7r8的取代基取代；
[0123]
其中，r6、r7和r8独立地选自氢、c
1-4
烷基、c
3-8
环烷基、c
2-4
烯基、c
2-4
炔基。
[0124]
在式ii'的一些实施方案中，每个r3独立地选自氢、卤素、-cn、-no2、＝o、 c
1-6
烷基、c
3-8
环烷基、芳基、3-8元杂环基、-or6、-nr7r8、-sr9、-c(＝o)or
10
、
ꢀ‑
c(＝o)nr
11r12
、-s(＝o)2r
13
、-s(＝o)2or
14
、-s(＝o)2nr
15r16
、-o(ch2)
p
or
17
、
‑ꢀ
o(ch2)
p
nr
17r18
、-nr
19
(ch2)qnr
20r21
、-nr
22
(ch2)qor
23
；其中c
1-6
烷基、c
3-8
环烷基、芳基、3-8元杂环基任选地被一个或多个独立地选自卤素、-cn、-no2、＝o、-or6、-nr7r8、-sr9、c
3-8
环烷基、3-8元杂环基或-c
1-6
烷基的取代基取代；
[0125]
其中，r6、r7、r8、r9、r
10
、r
11
、r
12
、r
13
、r
14
、r
15
、r
16
、r
17
、r
18
、r
19
、 r
20
、r
21
、r
22
和r
23
独立地选自氢、c
1-4
烷基、c
3-8
环烷基、c
2-4
烯基、c
2-4
炔基。
[0126]
在式ii'的一些实施方案中，每个r4独立地选自氢、卤素、-cn、c
1-6
烷基、
ꢀ‑
or6；其中c
1-6
烷基任选地被一个或多个独立地选自卤素、-or6、-nr7r8的取代基取代；
[0127]
其中，r6、r7和r8独立地选自氢、c
1-4
烷基、c
3-8
环烷基、c
2-4
烯基、c
2-4
炔基。
[0128]
在式ii'的一些实施方案中，每个r1和r2独立地选自氢、卤素、ch2oh。
[0129]
在式ii'的一些实施方案中，每个r3独立地选自氢、och3、och2ch3、c
l
、 nh2、cn、-conh2、ochf2、-cooch3、ch3、ch2oh、ch2ch2oh、oh、-so2ch3、cf3、f、ocf3、-so2nh2、ch(oh)ch3、、nh2、n(ch3)2、ch(ch3)2、och2ch2n(ch3)2、 och2ch2och3、n(ch3)ch2ch2n(ch3)2.
[0130]
在式ii'的一些实施方案中，每个r4独立地选自氢、cn、f、och3。
[0131]
在式ii'的一些实施方案中，m选自0、1、2或3。
[0132]
在式ii'的一些实施方案中，n选自0、1或2。
[0133]
在式ii'的一些实施方案中，p选自1或2。
[0134]
在式i的一些实施例中，其中化合物为式iii，或其药学上可接受的盐、异构体、立体异构体、前药、螯合物、非共价复合物或溶剂化物。
[0135][0136]
其中，
[0137]
环a为芳基或5-10元杂环基；其中所述5-10元杂环基任选地含有1、2 或3个独立地选自n、s或o的杂原子；
[0138]
b环为芳基或5-10元杂芳基；
[0139]
x1和x2独立地选自c或n；
[0140]
y3选自ch、o或n；
[0141]
m选自ch、o、nh或s；
[0142]
r1和r2独立地选自氢、卤素、-cn、-no2和c
1-6
烷基；其中c
1-6
烷基任选被一个或多个独立地选自卤素、-cn、-no2、-or6、-nr7r8的取代基取代；
[0143]
每个r3和r4独立地选自氢、卤素、-cn、-no2、＝o、c
1-6
烷基、c
3-8
环烷基、芳基、3-8元杂环基、-or6、-nr7r8、-sr9、-c(＝o)or
10
、-c(＝o)nr
11r12
、
ꢀ‑
s(＝o)2r
13
、-s(＝o)2or
14
、-s(＝o)2nr
15r16
、-o(ch2)
p
or
17
、-o(ch2)
p
nr
17r18
，
‑ꢀ
nr
19
(ch2)qnr
20r21
，-nr
22
(ch2)qor
23
；其中c
1-6
烷基、c
3-8
环烷基、芳基、3-8 元杂环基任选地被一个或多个独立地选自卤素、-cn、-no2、＝o、-or6、-nr7r8、
ꢀ‑
sr9的取代基取代，c
3-8
环烷基、3-8元杂环基或-c
1-6
烷基；
[0144]r5'
选自氢、c
1-6
烷基或c
3-8
环烷基；
[0145]
r6、r7、r8、r9、r
10
、r
11
、r
12
、r
13
、r
14
、r
15
、r
16
、r
17
、r
18
、r
19
、 r
20
、r
21
、r
22
和r
23
独立地选自氢、c
1-4
烷基、c
3-8
环烷基、3-8元杂环基、c
2-4
烯基或c
2-4
炔基；
[0146]
m选自0、1、2、3或4；
[0147]
n选自0、1、2、3或4；
[0148]
p选自1、2、3或4；
[0149]
q选自1、2、3或4。
[0150]
在式iii的一些实施方案中，r
5'
选自氢。
[0151]
在式iii的一些实施方案中，环a为芳基。
[0152]
在式iii的一些实施方案中，环a为苯基。
[0153]
在式iii的一些实施方案中，环a为5-10元杂环基。
[0154]
在式iii的一些实施方案中，环a为噻吩基、呋喃基、咪唑基、异恶唑基、恶唑基、吡唑、吡咯基、噻唑基、噻二唑基、三唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吲哚基、喹啉基或异喹啉基、
[0155]
在式iii的一些实施方案中，环b为芳基或5-10元杂芳基。
[0156]
在式iii的一些实施方案中，环b为芳基。
[0157]
在式iii的一些实施方案中，环b为苯基。
[0158]
在式iii的一些实施方案中，环b为5-10元杂芳基。
[0159]
在式iii的一些实施方案中，环b为噻吩基、呋喃基、咪唑基、异恶唑基、恶唑基、吡唑、吡咯基、噻唑基、噻二唑基、三唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基，
[0160]
在式iii的一些实施方案中，r1和r2独立地选自氢、卤素和c
1-6
烷基；其中c
1-6
烷基任选地被一个或多个独立地选自卤素、-cn、-no2、-or6、-nr7r8的取代基取代；
[0161]
其中，r6、r7和r8独立地选自氢、c
1-4
烷基、c
3-8
环烷基、c
2-4
烯基、c
2-4
炔基。
[0162]
在式iii的一些实施方案中，每个r3独立地选自氢、卤素、-cn、-no2、＝ o、c
1-6
烷基、c 3-8
环烷基、芳基、3-8元杂环基、-or6、-nr7r8、-sr9、-c(＝o)or
10
、
ꢀ‑
c(＝o)nr
11r12
、-s(＝o)2r
13
、-s(＝o)2or
14
、-s(＝o)2nr
15r16
、-o(ch2)
p
or
17
，
‑ꢀ
o(ch2)
p
nr
17r18
，-nr
19
(ch2)qnr
20r21
，-nr
22
(ch2)qor
23
；其中c
1-6
烷基、c
3-8
环烷基、芳基、3-8元杂环基任选地被一个或多个独立地选自卤素、-cn、-no2、＝o、-or6、-nr7r8、-sr9、c
3-8
环烷基、3-8元杂环基或-c
1-6
烷基的取代基取代；
[0163]
其中，r6、r7、r8、r9、r
10
、r
11
、r
12
、r
13
、r
14
、r
15
、r
16
、r
17
、r
18
、r
19
、 r
20
、r
21
、r
22
和r
23
独立地选自氢、c
1-4
烷基、c
3-8
环烷基、c
2-4
烯基、c
2-4
炔基。
[0164]
在式iii的一些实施方案中，每个r4独立地选自氢、卤素、-cn、c
1-6
烷基、
ꢀ‑
or6；其中c
1-6
烷基任选被一个或多个独立地选自卤素、-or6、-nr7r8的取代基取代；
[0165]
其中，r6、r7和r8独立地选自氢、c
1-4
烷基、c
3-8
环烷基、c
2-4
烯基、c
2-4
炔基。
[0166]
在式iii的一些实施方案中，每个r1和r2独立地选自氢、卤素、ch2oh。
[0167]
在式iii的一些实施方案中，每个r3独立地选自氢、och3、och2ch3、c
l
、 nh2、cn、-conh2、ochf2、-cooch3、ch3、ch2oh、ch2ch2oh、oh、-so2ch3、 cf3、f、ocf3、-so2nh2、ch(oh)ch3、、nh2、n(ch3)2、ch(ch3)2、och2ch2n(ch3)2、 och2ch2och3、n(ch3)ch2ch2n(ch3)2.
[0168]
在式iii的一些实施方案中，每个r4独立地选自氢、cn、f、och3。
[0169]
在式iii的一些实施方案中，m选自0、1、2或3。
[0170]
在式iii的一些实施方案中，n选自0、1或2。
[0171]
在式iii的一些实施方案中，p选自1或2。
[0172]
在式i的一些实施方案中，其中所述化合物是式iv的化合物或其药学上可接受的
盐、异构体、立体异构体、前药、螯合物、非共价复合物或溶剂合物，
[0173][0174]
其中，
[0175]
是单键或双键；
[0176]
环a选自芳基或5-10元杂环基；其中所述5-10元杂环基任选地含有1、2 或3个独立地选自n、s或o的杂原子；
[0177]
b环选自芳基或5-10元杂芳基；
[0178]
x1和x2独立地选自c或n；
[0179]
y3选自ch、o或n；
[0180]
m选自ch、o、nh或s；
[0181]
z1选自ch或n；
[0182]
z2选自ch、ch2、n或nh；
[0183]
r1和r2独立地选自氢、卤素、-cn、-no2和c
1-6
烷基；其中c
1-6
烷基任选地被一个或多个独立地选自卤素、-cn、-no2、-or6、-nr7r8的取代基取代；
[0184]
每个r3和r4独立地选自氢、卤素、-cn、-no2、＝o、c
1-6
烷基、c
3-8
环烷基、芳基、3-8元杂环基、-or6、-nr7r8、-sr9、-c(＝o)or
10
、-c(＝o)nr
11r12
、
ꢀ‑
s(＝o)2r
13
、-s(＝o)2or
14
、-s(＝o)2nr
15r16
、-o(ch2)
p
or
17
、-o(ch2)
p
nr
17r18
，
‑ꢀ
nr
19
(ch2)qnr
20r21
，-nr
22
(ch2)qor
23
；其中c
1-6
烷基、c
3-8
环烷基、芳基、3-8 元杂环基任选地被一个或多个独立地选自卤素、-cn、-no2、＝o、-or6、-nr7r8、
ꢀ‑
sr9、c
3-8
环烷基、3-8元杂环基或-c
1-6
烷基的取代基取代；
[0185]
r6、r7、r8、r9、r
10
、r
11
、r
12
、r
13
、r
14
、r
15
、r
16
、r
17
、r
18
、r
19
、 r
20
、r
21
、r
22
和r
23
独立地选自氢、c
1-4
烷基、c
3-8
环烷基、3-8元杂环基、 c
2-4
烯基或c
2-4
炔基；
[0186]
m选自0、1、2、3或4；
[0187]
n选自0、1、2、3或4；
[0188]
p选自1、2、3或4；
[0189]
q选自1、2、3或4。
[0190]
在式iv的一些实施方案中，环a为芳基。
[0191]
在式iv的一些实施方案中，环a为苯基。
[0192]
在式iv的一些实施方案中，环a为5-10元杂环基。
[0193]
在式iv的一些实施方案中，环a为噻吩基、呋喃基、咪唑基、异恶唑基、恶唑基、吡唑、吡咯基、噻唑基、噻二唑基、三唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吲哚基、喹啉基或异喹啉基
[0194]
在式iv的一些实施方案中，环b选自芳基或5-10元杂芳基。
[0195]
在式iv的一些实施方案中，环b为芳基。
[0196]
在式iv的一些实施方案中，环b为苯基。
[0197]
在式iv的一些实施方案中，环b为5-10元杂芳基。
[0198]
在式iv的一些实施方案中，环b选自噻吩基、呋喃基、咪唑基、异恶唑基、恶唑基、吡唑、吡咯基、噻唑基、噻二唑基、三唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基
[0199]
在式iv的一些实施方案中，z1选自n；z2选自ch。
[0200]
在式iv的一些实施方案中，z1选自n；z2选自n。
[0201]
在式iv的一些实施方案中，z1选自n；z2选自ch2。
[0202]
在式iv的一些实施方案中，r1和r2独立地选自氢、卤素和c
1-6
烷基；其中 c
1-6
烷基任选地被一个或多个独立地选自卤素、-cn、-no2、-or6、-nr7r8的取代基取代；
[0203]
其中，r6、r7和r8独立地选自氢、c
1-4
烷基、c
3-8
环烷基、c
2-4
烯基、c
2-4
炔基。
[0204]
在式iv的一些实施方案中，每个r3独立地选自氢、卤素、-cn、-no2、＝ o、c
1-6
烷基、c
3-8
环烷基、芳基、3-8元杂环基、-or6、-nr7r8、-sr9、-c(＝o)or
10
、
ꢀ‑
c(＝o)nr
11r12
、-s(＝o)2r
13
、-s(＝o)2or
14
、-s(＝o)2nr
15r16
、-o(ch2)
p
or
17
，
‑ꢀ
o(ch2)
p
nr
17r18
，-nr
19
(ch2)qnr
20r21
，-nr
22
(ch2)qor
23
；其中c
1-6
烷基、c
3-8
环烷基、芳基、3-8元杂环基任选地被一个或多个独立地选自卤素、-cn、-no2、＝o、-or6、-nr7r8、-sr9、c
3-8
环烷基、3-8元杂环基或-c
1-6
烷基的取代基取代；
[0205]
其中，r6、r7、r8、r9、r
10
、r
11
、r
12
、r
13
、r
14
、r
15
、r
16
、r
17
、r
18
、r
19
、 r
20
、r
21
、r
22
和r
23
独立地选自氢、c
1-4
烷基、c
3-8
环烷基、c
2-4
烯基、c
2-4
炔基。
[0206]
在式iv的一些实施方案中，每个r4独立地选自氢、卤素、-cn、c
1-6
烷基、
ꢀ‑
or6；其中c
1-6
烷基任选地被一个或多个独立地选自卤素、-or6、-nr7r8的取代基取代；
[0207]
其中，r6、r7和r8独立地为氢、c
1-4
烷基、c
3-8
环烷基、c
2-4
烯基、c
2-4
炔基。
[0208]
在式iv的一些实施方案中，每个r1和r2独立地选自氢、卤素、ch2oh。
[0209]
在式iv的一些实施方案中，每个r3独立地选自氢、och3、och2ch3、c
l
、nh2、cn、-conh2、ochf2、-cooch3、ch3、ch2oh、ch2ch2oh、 oh、-so2ch3、cf3、f、ocf3、-so2nh2、ch(oh)ch3，，nh2、n(ch3)2、 ch(ch3)2、och2ch2n(ch3)2、och2ch2och3、n(ch3)ch2ch2n(ch3)2.
[0210]
在式iv的一些实施方案中，每个r4独立地选自氢、cn、f、och3。
[0211]
在式iv的一些实施方案中，m选自0、1、2或3。
[0212]
在式iv的一些实施方案中，n选自0、1或2。
[0213]
在式iv的一些实施方案中，p选自1或2。
[0214]
在式i的一些实施方案中，其中所述化合物具有式iv'，或其药学上可接受的盐、异构体、立体异构体、前药、螯合物、非共价络合物或溶剂合物，
[0215][0216]
其中，
[0217]
是单键或双键；
[0218]
环a是芳基或5-10元杂环基；其中所述5-10元杂环基任选地含有1、2或 3个独立地选自n、s或o的杂原子；
[0219]
x1和x2独立地选自ch2、o或nh；
[0220]
其中，当环c为不存在时，y1和y2独立地选自cr5或nr
5'
；
[0221]
其中，当环c为5-8元杂环基时，y
l
和y2独立地选自c或n；
[0222]
y3选自ch、o或n；
[0223]
m选自ch、o、nh或s；
[0224]
z1选自ch或n；
[0225]
z2选自ch、ch2、n或nh；
[0226]
r1和r2独立地选自氢、卤素、-cn、-no2和c
1-6
烷基；其中c
1-6
烷基任选被一个或多个独立地选自卤素、-cn、-no2、-or6、-nr7r8的取代基取代；
[0227]
每个r3和r4独立地选自氢、卤素、-cn、-no2、＝o、c
1-6
烷基、c
3-8
环烷基、芳基、3-8元杂环基、-or6、-nr7r8、-sr9、-c(＝o)or
10
、-c(＝o)nr
11r12
、
ꢀ‑
s(＝o)2r
13
、-s(＝o)2or
14
、-s(＝o)2nr
15r16
、-o(ch2)
p
or
17
、-o(ch2)
p
nr
17r18
，
‑ꢀ
nr
19
(ch2)qnr
20r21
，-nr
22
(ch2)qor
23
；其中c
1-6
烷基、c
3-8
环烷基、芳基、3-8 元杂环基被一个或多个独立地选自卤素、-cn、-no2、＝o、-or6、-nr7r8、-sr9的取代基取代，c
3-8
环烷基、3-8元杂环基或-c
1-6
烷基；
[0228]
r5选自氢、＝o、c
1-6
烷基或c
3-8
环烷基；
[0229]r5'
选自氢、c
1-6
烷基或c
3-8
环烷基；
[0230]
r6、r7、r8、r9、r
10
、r
11
、r
12
、r
13
、r
14
、r
15
、r
16
、r
17
、r
18
、r
19
、 r
20
、r
21
、r
22
和r
23
选自氢、c
1-4
烷基、c
3-8
环烷基、3-8元杂环基、c
2-4
烯基或c
2-4
炔基；
[0231]
m选自0、1、2、3或4；
[0232]
n选自0、1、2、3或4；
[0233]
p选自1、2、3或4；
[0234]
q选自1、2、3或4。
[0235]
在式iv'的一些实施方案中，环a为芳基。
[0236]
在式iv'的一些实施方案中，环a为苯基。
[0237]
在式iv'的一些实施方案中，环a为5-10元杂环基。
[0238]
在式iv'的一些实施方案中，环a选自噻吩基、呋喃基、咪唑基、异恶唑基、恶唑基、吡唑、吡咯基、噻唑基、噻二唑基、三唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吲哚基、喹啉基或异喹啉基、喹啉基或异喹啉基、
[0239]
在式iv'的一些实施方案中，z1选自n；z2选自ch。
[0240]
在式iv'的一些实施方案中，z1选自n；z2选自n。
[0241]
在式iv'的一些实施方案中，z1选自n；z2选自ch2。
[0242]
在式iv'的一些实施方案中，r1和r2独立地选自氢、卤素和c
1-6
烷基；其中 c
1-6
烷基任选被一个或多个独立地选自卤素、-cn、-no2、-or6、-nr7r8的取代基取代；
[0243]
其中，r6、r7和r8独立地为氢、c
1-4
烷基、c
3-8
环烷基、c
2-4
烯基、c
2-4
炔基。
[0244]
在式iv'的一些实施方案中，每个r3独立地选自氢、卤素、-cn、-no2、＝o、 c
1-6
烷基、c
3-8
环烷基、芳基、3-8元杂环基、-or6、-nr7r8、-sr9、-c(＝o)or
10
、
ꢀ‑
c(＝o)nr
11r12
、-s(＝o)2r
13
、-s(＝o)2or
14
、-s(＝o)2nr
15r16
、-o(ch2)
p
or
17
、
‑ꢀ
o(ch2)
p
nr
17r18
、-nr
19
(ch2)qnr
20r21
、-nr
22
(ch2)qor
23
；其中c
1-6
烷基、c
3-8
环烷基、芳基、3-8元杂环基任选地被一个或多个独立地选自卤素、-cn、-no2、＝o、-or6、-nr7r8、-sr9、c
3-8
环烷基、3-8元杂环基或-c
1-6
烷基的取代基取代；
[0245]
其中，r6、r7、r8、r9、r
10
、r
11
、r
12
、r
13
、r
14
、r
15
、r
16
、r
17
、r
18
、r
19
、 r
20
、r
21
、r
22
和r
23
独立地为氢、c
1-4
烷基、c
3-8
环烷基、c
2-4
烯基、c
2-4
炔基。
[0246]
在式iv'的一些实施方案中，每个r4独立地选自氢、卤素、-cn、c
1-6
烷基、-or6；其中c
1-6
烷基任选被一个或多个独立地选自卤素、-or6、-nr7r8的取代基取代；
[0247]
其中，r6、r7和r8独立地为氢、c
1-4
烷基、c
3-8
环烷基、c
2-4
烯基、c
2-4
炔基。
[0248]
在式iv'的一些实施方案中，每个r1和r2独立地选自氢、卤素、ch2oh。
[0249]
在式iv'的一些实施方案中，每个r3独立地选自氢、och3、och2ch3、c
l
、 nh2、cn、-conh2、ochf2、-cooch3、ch3、ch2oh、ch2ch2oh、oh、-so2ch3、 cf3、f、ocf3、-so2nh2、ch(oh)ch3、、nh2、n(ch3)2、ch(ch3)2、och2ch2n(ch3)2、 och2ch2och3、n(ch3)ch2ch2n(ch3)2。
[0250]
在式iv'的一些实施方案中，每个r4独立地选自氢、cn、f、och3。
[0251]
在式iv'的一些实施方案中，m选自0、1、2或3。
[0252]
在式iv'的一些实施方案中，n选自0、1或2。
[0253]
在式iv’的一些实施例中，p选自1或2。
[0254]
在式i的一些实施例中，其中化合物为：
[0255]
(s)-1
’‑
(3-(1-(吡嗪-2-基)乙烯基)-1h-吡唑[3,4-b]吡嗪-6-基)-1,3
‑ꢀ
二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1-胺；
[0256]
(s)-1
’‑
(3-(1-(噻吩-2-基)乙烯基)-1h-吡唑[3,4-b]吡嗪-6-基)-1,3
‑ꢀ
二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1-胺；
[0257]
(s)-1
’‑
(3-(1-(4-氟苯基)乙烯基)-1h-吡唑[3,4-b]吡嗪-6-基)-1,3
‑ꢀ
二氢螺环[茚-2,4
’‑
哌啶]-1-胺；
[0258]
(s)-1
’‑
(3-(1-(3,5-二氟苯基)乙烯基)-1h-吡唑[3,4-b]吡嗪-6-基)
‑ꢀ
1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1-胺；
[0259]
(s)-1
’‑
(3-(1-(2,6-二甲氧基苯基)乙烯基)-1h-吡唑[3,4-b]吡嗪-6
‑ꢀ
基)-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1-胺；
[0260]
(s)-1
’‑
(3-(1-(嘧啶-5-基)乙烯基)-1h-吡唑[3,4-b]吡嗪-6-基)-1,3
‑ꢀ
二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1-胺；
[0261]
(s)-1
’‑
(3-(1-(吡啶-3-基)乙烯基)-1h-吡唑[3,4-b]吡嗪-6-基)-1,3
‑ꢀ
二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1-胺盐酸盐；
[0262]
(s)-3-(1-(6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-1h-吡唑[3,4
‑ꢀ
b]吡嗪-3-基)乙烯基)苯酚；
[0263]
(s)-1
’‑
(3-(1-(2-氨基-3-氯吡啶-4-基)乙烯基)-1h-吡唑[3,4-b]吡嗪
‑ꢀ
6-基)-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1-胺；
[0264]
(s)-1
’‑
(3-(1-(2-氯苯基)乙烯基)-1h-吡唑[3,4-b]吡嗪-6-基)-6-甲氧基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1-胺；
[0265]
(s)-1-氨基-1
’‑
(3-(1-(3,5-二甲氧基苯基)乙烯基)-1h-吡唑[3,4-b]吡嗪-6-基)-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-6-碳腈；
[0266]
(s)-1
’‑
(3-(1-(2-氨基-3-氯吡啶-4-基)乙烯基)-1h-吡唑[3,4-b]吡嗪
‑ꢀ
6-基)-6-甲氧基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1-胺；
[0267]
(s)-1'-(3-(1-(2-氨基-3-氯吡啶-4-基)乙烯基)-1h-吡唑[3,4-b]吡嗪
‑ꢀ
6-基)-6-氟-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1-胺；
[0268]
(s)-2-(1-(6-(1-氨基-5,6-二氟-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-1h
‑ꢀ
吡唑[3,4-b]吡嗪-3-基)乙烯基)苯甲腈；
[0269]
(r)-8-(3-(1-(2-氨基-3-氯吡啶-4-基)乙烯基)-1h-吡唑[3,4-b]吡嗪
‑ꢀ
6-基)-8-氮杂螺环[4.5]癸-1-胺；
[0270]
(r)-8-(3-(1-(噻吩-2-基)乙烯基)-1h-吡唑[3,4-b]吡嗪-6-基)-1-氧杂-8-氮杂螺环[4.5]癸-4-胺；
[0271]
(r)-1
’‑
(3-(1-(2-氨基-3-氯吡啶-4-基)乙烯基)-1h-吡唑[3,4-b]吡嗪
‑ꢀ
6-基)-3h-螺环[苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-胺；
[0272]
(s)-1
’‑
(3-(1-(2-氨基嘧啶-5-基)乙烯基)-1h-吡唑[3,4-b]吡嗪-6
‑ꢀ
基)-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1-胺；
[0273]
(s)-甲基4-(1-(6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-1h-吡唑[3,4-b]吡嗪-3-基)乙烯基)苯甲酸酯；
[0274]
(s)-3-(1-(6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-1h-吡唑[3,4
‑ꢀ
b]吡嗪-3-基)乙烯基)-1-甲基吡啶-2(1h)-酮；
[0275]
(s)-1
’‑
(3-(1-(3-(二氟甲氧基)苯基)乙烯基)-1h-吡唑[3,4-b]吡嗪-6-基)-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1-胺；
[0276]
(s)-2-(1-(6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-1h-吡唑[3,4
‑ꢀ
b]吡嗪-3-基)乙烯基)苯甲腈；
[0277]
(s)-1
’‑
(3-(1-(邻甲苯基)乙烯基)-1h-吡唑[3,4-b]吡嗪-6-基)-1,3
‑ꢀ
二氢螺环[茚-2,4
’‑
哌啶]-1-胺；
[0278]
(s)-(2-(1-(6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-1h-吡唑 [3,4-b]吡嗪-3-基)乙烯基)苯基)甲醇；
[0279]
(s)-1
’‑
(3-(1-(2-甲氧基苯基)乙烯基)-1h-吡唑[3,4-b]吡嗪-6-基)
‑ꢀ
1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1-胺；
[0280]
(s)-1
’‑
(3-(1-(3,5-二甲氧基苯基)乙烯基)-1h-吡唑[3,4-b]吡嗪-6
‑ꢀ
基)-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1-胺；
[0281]
(s)-1
’‑
(3-(2,2-二氟-1-苯基乙烯基)-1h-吡唑[3,4-b]吡嗪-6-基)-1,3
‑ꢀ
二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1-胺；
[0282]
(s，e)-3-(6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-1h-吡唑[3,4
‑ꢀ
b]吡嗪-3-基)-3-苯基丙-2-en-1-醇；
[0283]
(s)-1
’‑
(3-(1-(2-甲基吡啶-4-基)乙烯基)-1h-吡唑[3,4-b]吡嗪-6
‑ꢀ
基)-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1-胺；
[0284]
(s)-1
’‑
(3-(1-(2-氯苯基)乙烯基)-1h-吡唑[3,4-b]吡嗪-6-基)-1,3
‑ꢀ
二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1-胺；
[0285]
(s)-2-(1-(6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-1h-吡唑[3,4
‑ꢀ
b]吡嗪-3-基)乙烯基)苯酚；
[0286]
(s)-1
’‑
(3-(1-(2-(甲磺酰基)苯基)乙烯基)-1h-吡唑[3,4-b]吡嗪
‑ꢀ
6-基)-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1-胺；
[0287]
(s)-3-(1-(6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-1h-吡唑[3,4
‑ꢀ
b]吡嗪-3-基)乙烯基)-2-甲氧基苯酚；
[0288]
(s)-1
’‑
(3-(3-(三氟甲基)苯基)乙烯基)-1h-吡唑[3,4-b]吡嗪-6
‑ꢀ
基)-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1-胺；
[0289]
(s)-1
’‑
(3-(1-(2-氟苯基)乙烯基)-1h-吡唑[3,4-b]吡嗪-6-基)-1,3
‑ꢀ
二氢螺环[茚-2,4
’‑
哌啶]-1-胺；
[0290]
(s)-1
’‑
(3-(1-(3,4-二甲氧基苯基)乙烯基)-1h-吡唑[3,4-b]吡嗪-6
‑ꢀ
基)-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1-胺；
[0291]
(s)-1
’‑
(3-(1-(2-(三氟甲基)苯基)乙烯基)-1h-吡唑[3,4-b]吡嗪
‑ꢀ
6-基)-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1-胺；
[0292]
(s)-1
’‑
(3-(1-(2-(三氟甲氧基)苯基)乙烯基)-1h-吡唑[3,4-b]吡嗪-6-基)-1,
3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1-胺；
[0293]
(s)-3-(1-(6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-1h-吡唑[3,4
‑ꢀ
b]吡嗪-3-基)乙烯基)苯甲腈；
[0294]
(s)-4-(1-(6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-1h-吡唑[3,4
‑ꢀ
b]吡嗪-3-基)乙烯基)吡啶腈；
[0295]
(s)-1
’‑
(3-(3-(三氟甲氧基)苯基)乙烯基)-1h-吡唑[3,4-b]吡嗪-6
‑ꢀ
基)-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1-胺；
[0296]
(s)-1
’‑
(3-(1-(喹啉-4-基)乙烯基)-1h-吡唑[3,4-b]吡嗪-6-基)-1,3
‑ꢀ
二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1-胺；
[0297]
(s)-1
’‑
(3-(1-(3-氯-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)乙烯基)-1h-吡唑 [3,4-b]吡嗪-6-基)-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1-胺；
[0298]
(s)-3-(1-(6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-1h-吡唑[3,4
‑ꢀ
b]吡嗪-3-基)乙烯基)-4-甲氧基-1-甲基吡啶-2(1h)-酮；
[0299]
(s)-1
’‑
(3-(1-(2-甲基噻唑-5-基)乙烯基)-1h-吡唑[3,4-b]吡嗪-6
‑ꢀ
基)-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1-胺；
[0300]
(s)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(1-(2-氨基-3-氯吡啶-4-基)乙烯基)-1,5-二氢-4h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4-酮；
[0301]
(s)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(1-(2-氨基嘧啶
‑ꢀ
5-基)乙烯基)-1,5-二氢-4h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4-酮；
[0302]
(s)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(1-(3-羟基苯基)乙烯基)-1,5-二氢-4h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4-酮；
[0303]
(s)-3-(1-(6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-4-氧代-4,5
‑ꢀ
二氢-1h-吡唑[3,4-d]嘧啶-3-基)乙烯基)苯甲酰胺；
[0304]
(s)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(1-(1-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)乙烯基)-1,5-二氢-4h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4-酮；
[0305]
(s)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(1-(3-(二氟甲氧基)苯基)乙烯基)-1,5-二氢-4h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4-酮；
[0306]
(s)-2-(1-(6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-4-氧代-4,5
‑ꢀ
二氢-1h-吡唑[3,4-d]嘧啶-3-基)乙烯基)苯甲腈；
[0307]
(s)-4-(1-(6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-4-氧代-4,5
‑ꢀ
二氢-1h-吡唑[3,4-d]嘧啶-3-基)乙烯基)苯甲酸甲酯；
[0308]
(s)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(1-(邻甲苯基) 乙烯基)-1,5-二氢-4h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4-酮；
[0309]
(s)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(1-(2-(羟甲基)苯基)乙烯基)-1,5-二氢-4h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4-酮；
[0310]
(s)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(1-(2-甲氧基苯基)乙烯基)-1,5-二氢-4h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4-酮；
[0311]
(s)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(1-(3,5-二甲氧基苯基)乙烯基)-1,5-二氢-4h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4-酮；
基)乙烯基)-1,5-二氢-4h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4-酮；
[0332]
(s)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(1-苯基乙烯基)
‑ꢀ
1,5-二氢-4h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4-酮；
[0333]
(s)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(1-(噻吩-2-基) 乙烯基)-1,5-二氢-4h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4-酮；
[0334]
(s)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(1-(噻唑-2-基) 乙烯基)-1,5-二氢-4h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4-酮；
[0335]
(s)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(1-(3-甲基异恶唑-5-基)乙烯基)-1,5-二氢-4h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4-酮；
[0336]
(s)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(1-(噻吩-3-基) 乙烯基)-1,5-二氢-4h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4-酮；
[0337]
(s)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(1-(5-氯噻吩-2
‑ꢀ
基)乙烯基)-1,5-二氢-4h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4-酮；
[0338]
(s)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(1-(5-(羟甲基)噻吩-2-基)乙烯基)-1,5-二氢-4h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4-酮；
[0339]
(s)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(1-(4-甲基噻唑
‑ꢀ
2-基)乙烯基)-1,5-二氢-4h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4-酮；
[0340]
(s)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(1,3,5-三甲基-1h
‑ꢀ
吡唑-4-基)乙烯基)-1,5-二氢-4h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4-酮；
[0341]
(s)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(1-(1-甲基-1h
‑ꢀ
咪唑-5-基)乙烯基)-1,5-二氢-4h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4-酮；
[0342]
(s)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(1-(2-甲氧基吡啶-4-基)乙烯基)-1,5-二氢-4h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4-酮；
[0343]
(s)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(1-(4-羟基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)乙烯基)-1,5-二氢-4h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4-酮；
[0344]
(s)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(1-(5-氯-2-甲氧基吡啶-3-基)乙烯基)-1,5-二氢-4h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4-酮；
[0345]
(s)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(1-(2-甲氧基-6
‑ꢀ
甲基吡啶-4-基)乙烯基)-1,5-二氢-4h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4-酮；
[0346]
(s)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(1-(3-甲基-1h
‑ꢀ
吲唑-5-基)乙烯基)-1h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4(5h)-酮；
[0347]
(s)-2-(1-(6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-4-氧代-4,5
‑ꢀ
二氢-1h-吡唑[3,4-d]嘧啶-3-基)乙烯基)苯磺酰胺；
[0348]
6-(s)-1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(1-(3-(1-羟乙基) 苯基)乙烯基)-1,5-二氢-4h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4-酮；
[0349]
(s)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(1-(3-环丙基苯基)乙烯基)-1,5-二氢-4h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4-酮；
[0350]
(s)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(1-(2-(二甲氨基)吡啶-4-基)乙烯基)-1,5-二氢-4h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4-酮；
基)乙烯基)-1,5-二氢-4h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4-酮；
[0371]
(s)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(1-(5-甲氧基
‑ꢀ
1h-吡咯[2,3-c]吡啶-3-基)乙烯基)-1,5-二氢-4h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4-酮；
[0372]
(s)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(1-(2-氨基嘧啶
‑ꢀ
4-基)乙烯基)-1,5-二氢-4h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4-酮；
[0373]
(s)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(1-(2-(三氟甲基)嘧啶-4-基)乙烯基)-1,5-二氢-4h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4-酮；
[0374]
(s)-4-(1-(6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-4-氧代-4,5
‑ꢀ
二氢-1h-吡唑[3,4-d]嘧啶-3-基)乙烯基)嘧啶-2-碳腈；
[0375]
(s)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(1-(2,6-二甲基嘧啶-4-基)乙烯基)-1,5-二氢-4h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4-酮；
[0376]
(s)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(1-(3-环丙基
‑ꢀ
1h-吡唑-4-基)乙烯基)-1,5-二氢-4h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4-酮；
[0377]
(s)-5-(1-(6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-4-氧代-4,5
‑ꢀ
二氢-1h-吡唑[3,4-d]嘧啶-3-基)乙烯基)吡啶腈；
[0378]
(s)-3-(1-(6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-4-氧代-4,5
‑ꢀ
二氢-1h-吡唑[3,4-d]嘧啶-3-基)乙烯基)-5-甲基吡啶腈；
[0379]
(s)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(1-(2-氨基-5
‑ꢀ
(三氟甲基)吡啶-3-基)乙烯基)-1,5-二氢-4h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4-酮；
[0380]
(s)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(1-(2-氨基-5-氯吡啶-3-基)乙烯基)-1,5-二氢-4h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4-酮；
[0381]
(s)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(1-(5-甲基吡啶
‑ꢀ
3-基)乙烯基)-1,5-二氢-4h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4-酮；
[0382]
(s)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(1-(2-氯-6-(羟甲基)吡啶-4-基)乙烯基)-1,5-二氢-4h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4-酮；
[0383]
(s)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(1-(6-(2-羟乙基)吡啶-3-基)乙烯基)-1,5-二氢-4h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4-酮；
[0384]
(s)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(1-(6-(3-羟基氧杂环戊烷-3-基)吡啶-3-基)乙烯基)-1,5-二氢-4h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4-酮；
[0385]
6-(s)-1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(1-(2-(1-羟乙基) 吡啶-4-基)乙烯基)-1,5-二氢-4h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4-酮；
[0386]
(s)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(1-(6-异丙基吡啶-2-基)乙烯基)-1,5-二氢-4h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4-酮；
[0387]
甲基(s)-4-(1-(6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-4-氧代
‑ꢀ
4,5-二氢-1h-吡唑[3,4-d]嘧啶-3-基)乙烯基)吡啶甲酸酯；
[0388]
(s)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(1-(2-(羟甲基)吡啶-3-基)乙烯基)-1,5-二氢-4h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4-酮；
[0389]
(s)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(1-(2-(二氟甲基)吡啶-4-基)乙烯基)-1,5-二氢-4h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4-酮；
基)乙烯基)-1h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4(5h)-酮；
[0410]
(s)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(1-(5,6-二氯吡啶-3-基)乙烯基)-1h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4(5h)-酮；
[0411]
(s)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(1-(3-氯-5-羟基吡啶-4-基)乙烯基)-1h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4(5h)-酮；
[0412]
(s)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(1-(喹啉-4-基) 乙烯基)-1h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4(5h)-酮；
[0413]
(s)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(1-(2,3-二氯苯基)乙烯基)-1h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4(5h)-酮；
[0414]
(s)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(1-(3-氯-2-甲基吡啶-4-基)乙烯基)-1h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4(5h)-酮；
[0415]
(s)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(1-(3-(甲磺酰基)苯基)乙烯基)-1h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4(5h)-酮；
[0416]
(s)-3-(1-(6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-4-氧代-4,5
‑ꢀ
二氢-1h-吡唑[3,4-d]嘧啶-3-基)乙烯基)苯磺酰胺；
[0417]
(s)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(1-(2-(甲磺酰基)吡啶-4-基)乙烯基)-1h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4(5h)-酮；
[0418]
(s)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(1-(6-氯-1-甲基
‑ꢀ
2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)乙烯基)-1h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4(5h)-酮；
[0419]
(s)-甲基5-(1-(6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-4-氧代
‑ꢀ
4,5-二氢-1h-吡唑[3,4-d]嘧啶-3-基)乙烯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-羧酸盐；
[0420]
(s)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(1-(5-(羟甲基)-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)乙烯基)-1h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4(5h)-酮；
[0421]
(s)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(1-(2-氟-3-甲氧基苯基)乙烯基)-1h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4(5h)-酮；
[0422]
(s)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(1-(2-氯-3-甲氧基苯基)乙烯基)-1h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4(5h)-酮；
[0423]
(s)-3-(1-(6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-4-氧代-4,5
‑ꢀ
二氢-1h-吡唑[3,4-d]嘧啶-3-基)乙烯基)-2-氟苯甲腈；
[0424]
(s)-3-(1-(6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-4-氧代-4,5
‑ꢀ
二氢-1h-吡唑[3,4-d]嘧啶-3-基)乙烯基)-2-氯苯甲腈；
[0425]
(s)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(1-(5-氯-6-甲基吡啶-3-基)乙烯基)-1h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4(5h)-酮；
[0426]
(s)-3-(1-(6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-4-氧代-4,5
‑ꢀ
二氢-1h-吡唑[3,4-d]嘧啶-3-基)乙烯基)-5-氯吡啶腈；
[0427]
(s)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(1-(2-(2-甲氧基乙氧基)吡啶-4-基)乙烯基)-1h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4(5h)-酮；
[0428]
6-(s)-1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(1-(2-(四氢呋喃-3
‑ꢀ
基)氧基)吡啶-4-基)乙烯基)-1h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4(5h)-酮；
[0429]
(s)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(1-(2,3-二氢-1,4] 二氧基[2,3-b]吡啶-8-基)乙烯基)-1h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4(5h)-酮；
[0430]
(s)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(1-(5-氯-2-甲氧基吡啶-4-基)乙烯基)-1h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4(5h)-酮；
[0431]
(s)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(1-(3-氯苯基) 乙烯基)-1h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4(5h)-酮；
[0432]
(s)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(1-(3-氟苯基) 乙烯基)-1h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4(5h)-酮；
[0433]
(s)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(1-(3-(二氟甲基)苯基)乙烯基)-1h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4(5h)-酮；
[0434]
(s)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(1-(3-甲氧基苯基)乙烯基)-1h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4(5h)-酮；
[0435]
(s)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(1-(3-(羟甲基)苯基)乙烯基)-1h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4(5h)-酮；
[0436]
(s)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(1-(3-(2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)苯基)乙烯基)-1h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4(5h)
‑ꢀ
酮；
[0437]
(s)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(1-(3-(吡咯烷
‑ꢀ
1-基)苯基)乙烯基)-1h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4(5h)-酮；
[0438]
(s)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(1-(3-吗啉苯基)乙烯基)-1h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4(5h)-酮；
[0439]
(s)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(1-(3-(吗啉甲基)苯基)乙烯基)-1h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4(5h)-酮；
[0440]
(s)-6-(1-氨基-6-氟-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(1-苯基乙烯基)-1h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4(5h)-酮；
[0441]
(s)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(1-(2,3-二氟苯基)乙烯基)-1h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4(5h)-酮；
[0442]
(s)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(1-(6-甲基吡啶
‑ꢀ
2-基)乙烯基)-1h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4(5h)-酮；
[0443]
(s)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(1-(2-氯吡啶-4
‑ꢀ
基)乙烯基)-1h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4(5h)-酮；
[0444]
(s)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(1-(2-氯-3-甲基苯基)乙烯基)-1h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4(5h)-酮；
[0445]
(s)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-5-甲基-3-(1-苯基乙烯基)-1,5-二氢-4h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4-酮；
[0446]
(s)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-5-甲基-3-(1-(6-甲基吡啶-3-基)乙烯基)-1,5-二氢-4h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4-酮；
[0447]
(s)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-5-甲基-3-(1-(噻唑
‑ꢀ
5-基)乙烯基)-1,5-二氢-4h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4-酮；
[0448]
(s)-6-(1-氨基-6-甲氧基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-5-甲基-3
‑ꢀ
(1-苯基乙烯基)-1,5-二氢-4h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4-酮；
[0449]
(s)-2-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-甲基-5-(1-苯基乙烯基)-3,7-二氢-4h-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-酮；
[0450]
(s)-2-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-5-(1-(6-氨基-5-氯吡啶-3-基)乙烯基)-3-甲基-3,7-二氢-4h-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-酮；
[0451]
(s)-2-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-甲基-5-(1-(噻吩
‑ꢀ
2-基)乙烯基)-3,7-二氢-4h-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-酮；
[0452]
(s)-2-(1-氨基-6-氟-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-甲基-5-(1-苯基乙烯基)-3,7-二氢-4h-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-酮；
[0453]
(s)-2-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-5-(1-苯基乙烯基)
‑ꢀ
3,7-二氢-4h-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-酮；
[0454]
(s)-2-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-5-(1-(3-甲氧基苯基)乙烯基)-3,7-二氢-4h-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-酮；
[0455]
(s)-5-(1-(2-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-4-氧代-4,7
‑ꢀ
二氢-3h-吡咯[2,3-d]嘧啶-5-基)乙烯基)烟腈；
[0456]
(s)-2-(1-氨基-6-甲氧基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-5-(1-苯基乙烯基)-3,7-二氢-4h-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-酮；
[0457]
(s)-1
’‑
(9-(1-苯基乙烯基)-2,7-二氢-3h-咪唑并[1,2-c]吡唑[4,3-e]嘧啶
ꢀ‑
5-基)-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1-胺；
[0458]
(s)-1
’‑
(9-(1-苯基乙烯基)-7h-吡唑[4,3-e][1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶-5
‑ꢀ
基)-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1-胺；
[0459]
(s)-1
’‑
(9-(1-(2-甲基吡啶-4-基)乙烯基)-7h-吡唑[4,3-e][1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶-5-基)-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1-胺；
[0460]
(s)-1
’‑
(9-(1-(嘧啶-5-基)乙烯基)-7h吡唑[4,3-e][1,2,4]三唑[4,3-c] 嘧啶-5-基)-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1-胺；
[0461]
(s)-1
’‑
(9-(1-(2-甲氧基苯基)乙烯基)-7h-吡唑[4,3-e][1,2,4]三唑并 [4,3-c]嘧啶-5-基)-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1-胺；
[0462]
(s)-1
’‑
(9-(1-(2,6-二甲氧基苯基)乙烯基)-7h-吡唑[4,3-e][1,2,4]三唑[4,3-c]嘧啶-5-基)-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1-胺；
[0463]
(s)-2-(1-(5-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-7h-吡唑[4,3
‑ꢀ
e][1,2,4]三唑[4,3-c]嘧啶-9-基)乙烯基)苯甲腈
[0464]
(s)-1
’‑
(9-(1-(2-(三氟甲基)苯基)乙烯基)-7h-吡唑[4,3-e][1,2,4] 三唑[4,3-c]嘧啶-5-基)-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1-胺；
[0465]
(s)-1
’‑
(9-(1-(噻唑-2-基)乙烯基)-7h-吡唑[4,3-e][1,2,4]三唑[4,3-c] 嘧啶-5-基)-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1-胺；
[0466]
(s)-1
’‑
(9-(1-(噻吩-2-基)乙烯基)-7h-吡唑[4,3-e][1,2,4]三唑[4,3-c] 嘧啶-5-基)-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1-胺；
[0467]
(s)-1
’‑
(9-(1-(3,5-二氟苯基)乙烯基)-7h-吡唑[4,3-e][1,2,4]三唑[4,3-c]嘧啶-5-基)-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1-胺；
[0468]
(s)-1
’‑
(9-(1-(2-氨基-3-氯吡啶-4-基)乙烯基)-7h-吡唑[4,3-e][1,2,4] 三唑并[4,3-c]嘧啶-5-基)-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1-胺；
[0469]
(r)-8-(9-(1-(2-氨基-3-氯吡啶-4-基)乙烯基)-7h吡唑[4,3-e][1,2,4] 三唑[4,3-c]嘧啶-5-基)-8-氮杂螺[4.5]癸-1-胺；
[0470]
(r)-1
’‑
(9-(1-苯基乙烯基)-7h-吡唑[4,3-e][1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶-5
‑ꢀ
基)-3h-螺环[苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-胺；
[0471]
(r)-8-(9-(1-苯基乙烯基)-7h-吡唑[4,3-e][1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶-5
‑ꢀ
基)-1-氧杂-8-氮杂螺环[4.5]癸-4-胺；
[0472]
(r)-5-氟-1
’‑
(9-(1-苯基乙烯基)-7h-吡唑[4,3-e][1,2,4]三唑[4,3-c]嘧啶
ꢀ‑
5-基)-3h-螺环[苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-胺；
[0473]
(s)-6-甲氧基-1
’‑
(9-(1-苯基乙烯基)-7h-吡唑[4,3-e][1,2,4]三唑并[4,3
‑ꢀ
c]嘧啶-5-基)-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1-胺；
[0474]
(s)-1
’‑
(9-(1-(嘧啶-5-基)乙烯基)-7h吡唑[4,3-e][1,2,4]三唑[4,3-c] 嘧啶-5-基)-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1-胺；
[0475]
(r)-8-(9-(1-(噻吩-3-基)乙烯基)-7h-吡唑[4,3-e][1,2,4]三唑[4,3-c] 嘧啶-5-基)-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-胺；
[0476]
(r)-8-(9-(1-(2-甲基吡啶-4-基)乙烯基)-7h-吡唑[4,3-e][1,2,4]三唑 [4,3-c]嘧啶-5-基)-8-氮杂螺环[4.5]癸-1-胺；
[0477]
(s)-2-甲氧基-1
’‑
(9-(1-(2-甲基吡啶-4-基)乙烯基)-7h-吡唑[4,3
‑ꢀ
e][1,2,4]三唑[4,3-c]嘧啶-5-基)-4,6-二氢螺环[环戊基[d]噻唑-5,4'-哌啶]-4-胺；
[0478]
(s)-1
’‑
(9-(1-苯基乙烯基)-7h咪唑[1,2-c]吡唑[4,3-e]嘧啶-5-基)-1,3
‑ꢀ
二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1-胺；
[0479]
(s)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(1-(3-甲氧基-2
‑ꢀ
甲基苯基)乙烯基)-1h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4(5h)-酮；
[0480]
(s)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(1-(3-羟基-2-甲基苯基)乙烯基)-1h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4(5h)-酮；
[0481]
(s)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(1-(2-氯-3-羟基苯基)乙烯基)-1h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4(5h)-酮；
[0482]
(s)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(1-(2-氟-3-羟基苯基)乙烯基)-1h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4(5h)-酮；
[0483]
(s)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(1-(2,5-二氟苯基)乙烯基)-1h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4(5h)-酮；
[0484]
(s)-6-(4-氨基-4,6-二氢螺环[环戊烷[d]噻唑-5,4'-哌啶]-1'-基)-3-(1-苯基乙烯基)-1h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4(5h)-酮；
[0485]
(s)-3-(1-(6-(4-氨基-4,6-二氢螺环[环戊基噻唑-5,4'-哌啶]-1'-基)-4
‑ꢀ
氧代-4,5-二氢-1h-吡唑[3,4-d]嘧啶-3-基)乙烯基)苯甲腈；
[0486]
(s)-3-(1-(2-氨基-3-氯吡啶-4-基)乙烯基)-6-(4-氨基-4,6-二氢螺环 [环戊基噻唑-5,4'-哌啶]-1'-基)-1h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4(5h)-酮；
[0487]
(s)-6-(4-氨基-4,6-二氢螺环[环戊烷[d]噻唑-5,4'-哌啶]-1'-基)-3-(1
‑ꢀ
(2,
3-二氯苯基)乙烯基)-1h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4(5h)-酮；
[0488]
(s)-6-(4-氨基-4,6-二氢螺环[环戊烷[d]噻唑-5,4'-哌啶]-1'-基)-5-甲基-3
‑ꢀ
(1-苯基乙烯基)-1h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4(5h)-酮；
[0489]
(s)-3-(1-(6-(4-氨基-4,6-二氢螺环[环戊基噻唑-5,4'-哌啶]-1'-基)-5
‑ꢀ
甲基-4-氧代-4,5-二氢-1h-吡唑[3,4-d]嘧啶-3-基)乙烯基)苯甲腈；
[0490]
(s)-3-(1-(2-氨基-3-氯吡啶-4-基)乙烯基)-6-(4-氨基-4,6-二氢螺环 [环戊基噻唑-5,4'-哌啶]-1'-基)-5-甲基-1h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4(5h)-酮；
[0491]
(s)-6-(4-氨基-4,6-二氢螺环[环戊烷[d]噻唑-5,4'-哌啶]-1'-基)-3-(1
‑ꢀ
(2,3-二氯苯基)乙烯基)-5-甲基-1h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4(5h)-酮；
[0492]
(s)-2-(4-氨基-4,6-二氢螺环[环戊烷[d]噻唑-5,4'-哌啶]-1'-基)-3-甲基-5
‑ꢀ
(1-苯基乙烯基)-3h-吡咯[2,3-d]嘧啶-4(7h)-酮；
[0493]
(s)-2-(4-氨基-4,6-二氢螺环[环戊烷[d]噻唑-5,4'-哌啶]-1'-基)-5-(1-苯基乙烯基)-3h-吡咯[2,3-d]嘧啶-4(7h)-酮。
[0494]
本发明还提供一种药物组合物，其特征为含有本发明任一项的化合物、药学上可接受的盐、异构体、立体异构体、前药、螯合物、非共价复合物或溶剂化物，以及至少一种药学上可接受的载体或赋形剂。
[0495]
本发明还提供了本发明化合物或其药物组合物在制备药物中的应用。
[0496]
在一些实施方案中，所述药物用于治疗、预防、延迟或预防癌症、癌症转移、心血管疾病、免疫疾病、纤维化或眼部疾病。
[0497]
在一些实施方案中，所述药物用于治疗由shp2介导的疾病。
[0498]
在一些实施方案中，所述疾病是癌症。
[0499]
在一些实施方案中，所述癌症是noonan综合征、豹斑综合征、幼年型粒单核细胞白血病、神经母细胞瘤、黑色素瘤、头颈部鳞状细胞癌、急性髓性白血病、乳腺癌、食道癌、肺癌、结肠癌、头癌、胃癌癌、淋巴瘤、胶质母细胞瘤和/或胰腺癌。
[0500]
本发明还提供了本发明化合物或其药物组合物在制备shp2抑制剂中的应用。
[0501]
本发明还提供一种治疗或预防由shp2介导的疾病的方法，所述方法向有需要的患者施用本发明任一项的化合物或药物组合物。
[0502]
在一些实施方案中，所述疾病是癌症。
[0503]
本发明还提供一种治疗癌症的方法，所述方法向有需要的患者施用本发明任一项的化合物或药物组合物。
[0504]
在一些实施方案中，其中癌症是noonan综合征、豹斑综合征、幼年型粒单核细胞白血病、神经母细胞瘤、黑色素瘤、头颈部鳞状细胞癌、急性髓性白血病、乳腺癌、食道癌、肺癌、结肠癌、头癌、胃癌癌、淋巴瘤、胶质母细胞瘤和/或胰腺癌。
[0505]
上式中使用的一般化学术语具有其通常含义。例如，本文所用的术语“卤素”，除非另有说明，是指氟、氯、溴或碘。优选的卤素基团包括f、cl和br。
[0506]
如本文所用，除非另有说明，否则烷基包括具有直链或支链部分的饱和一价烃基。例如，烷基包括甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、3-(2-甲基)丁基、2-戊基、2-甲基丁基、新戊基、正己基、2-己基和2-甲基戊基。c
1-8
，如在c
1-8
烷基中，定义为具有1、2、3、4、5、6、7或 8个直链或支链碳原子的基团
[0507]
烯基和炔基包括直链、支链或环状烯烃和炔烃。同样，“c
2-8
烯基”和“c
2-8
炔基”是指具有直链或支链排列的2、3、4、5、6、7或8个碳原子的烯基或炔基。炔基包括乙炔基、丙炔基等。
[0508]
烷氧基是由前述直链、支链或环状烷基形成的氧醚。例如，烷氧基包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、环丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、环丁氧基、正戊氧基、3-(2-甲基)丁氧基、2-戊氧基、2-甲基丁氧基、新戊氧基、环戊氧基、正己氧基、2-己氧基、2-甲基戊氧基和环己氧基。
[0509]
如本文所用，除非另有说明，否则术语“芳基”是指含有碳环原子的未取代或取代的单环或多环系统。优选的芳基是单环或双环6-10元芳环系统。苯基和萘基是优选的芳基。最优选的芳基是苯基。
[0510]
除非另有说明，本文所用的术语“杂环基”表示未取代或取代的稳定的三至十元环系统，其由碳原子和一至三个选自n、o或s的杂原子组成，其中氮或硫杂原子可被氧化，并且氮杂原子可被季铵化。杂环基可连接在任何杂原子或碳原子上，从而产生稳定的结构。杂环基由单键或单键和双键形成。术语“杂环基”代表未取代或取代的稳定三元或七元单环系统或未取代或取代的六元或十元双环系统。此类杂环基的实例包括但不限于氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、氧代哌嗪基、氧代哌啶基、氧代氮杂基、氮杂环庚烷基、四氢呋喃基、二氧戊环基、四氢咪唑基、四氢噻唑基、四氢恶唑基、四氢吡喃基、吗啉基和亚硫基吗啉基、噻吗啉基恶二唑基、1,2,3,4-四氢异喹啉基、噻吩基、呋喃基、咪唑基、异恶唑基、恶唑基、吡唑、吡咯基、噻唑基、噻二唑基、三唑基、吡啶基、哒嗪基、吲哚基、氮杂吲哚基、吲唑基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并呋喃基、苯并噻唑基苯并恶唑基、苯并吡唑、苯并噻唑基、苯并噻二唑基、苯并三唑基腺嘌呤基、喹啉基或异喹啉基。
[0511]
除非另有说明，本文使用的术语“杂芳基”表示未取代或取代的稳定五或六元单环芳环系统或未取代或取代的九或十元苯并稠合杂芳环系统或双环杂芳环系统，其由碳原子和1-4个选自n、o或s的杂原子，其中氮或硫杂原子可以任选地被氧化，并且氮杂原子可以任选地被季铵化。杂芳基可以连接在任何杂原子或碳原子上，从而产生稳定的结构。杂芳基的实例包括但不限于噻吩基、呋喃基、咪唑基、异恶唑基、恶唑基、吡唑、吡咯基、噻唑基、噻二唑基、三唑基、吡啶基、哒嗪基、吲哚基、氮杂吲哚基、吲唑基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并异恶唑基、苯并恶唑基、苯并吡唑、苯并噻唑基、苯并噻二唑基、苯并三唑基腺嘌呤基、喹啉基或异喹啉基。
[0512]
术语“烯氧基”是指基团-o-烯基，其中烯基如上所定义。
[0513]
术语“烷氧基”是指基团-o-炔基，其中炔基如上所定义。
[0514]
术语“环烷基”指具有3至12个碳原子的环状饱和烷基链，例如环丙基、环丁基、环戊基或环己基。
[0515]
术语“取代”是指其中一个或多个氢原子各自独立地被相同或不同的取代基取代的基团。典型的取代基包括但不限于卤素(f、cl、br或i)、c
1-8
烷基、 c
3-12
环烷基、-or1、sr1、＝o、＝s、-c(o)r1、-c(s)r1、＝nr1、-c(o)or1、-c(s)or1、
ꢀ‑
nr1r2、-c(o)nr1r2、氰基、硝基、-s(o)2r1、-os(o2)or1、-os(o)2r1、
‑ꢀ
op(o)(or1)(or2)；其中r1和r2独立地选自-h、低级烷基、低级卤代烷基。在一些实施方案中，取代基独立地选自-f、-cl、-br、-i、-oh、三氟甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、叔-丁氧基、-sch3、-sc2h5、甲醛基团、-c(och3)、
氰基、硝基、cf3、-ocf3、氨基、二甲氨基、甲硫基、磺酰基和乙酰基。
[0516]
本文中使用的术语“组合物”旨在涵盖包含指定量的指定成分的产品，以及直接或间接由指定量的指定成分组合产生的任何产品。因此，含有本发明化合物作为活性成分的药物组合物以及制备速溶化合物的方法也是本发明的一部分。此外，化合物的一些晶型可以多晶型存在，因此拟包括在本发明中。此外，一些化合物可与水(即水合物)或常见有机溶剂形成溶剂化物，并且此类溶剂化物也拟包含在本发明的范围内。
[0517]
取代烷基的实例包括但不限于2-氨基乙基、2-羟乙基、五氯乙基、三氟甲基、甲氧基甲基、五氟乙基和哌嗪基甲基。
[0518]
取代的烷氧基的实例包括但不限于氨基甲氧基、三氟甲氧基、2-二乙基氨基乙氧基、2-乙氧基羰基乙氧基、3-羟基丙氧基。
[0519]
本发明的化合物也可以药学上可接受的盐的形式存在。对于医药用途，本发明化合物的盐是指无毒的“药学上可接受的盐”。药学上可接受的盐形式包括酸性/阴离子或碱性/阳离子盐。药学上可接受的酸性/阴离子盐通常采用碱性氮被无机或有机酸质子化的形式。代表性的有机或无机酸包括盐酸、氢溴酸、氢碘酸、高氯酸、硫酸、硝酸、磷酸、乙酸、丙酸、乙醇酸、乳酸、琥珀酸、马来酸、富马酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、扁桃酸、甲磺酸、羟基乙磺酸、苯磺酸、草酸、双羟萘酸、2-萘磺酸、对甲苯磺酸、环己烷氨基磺酸、水杨酸、糖精或三氟乙酸。药学上可接受的碱性/阳离子盐包括但不限于铝、钙、氯普鲁卡因、胆碱、二乙醇胺、乙二胺、锂、镁、钾、钠和锌。
[0520]
本发明在其范围内包括本发明化合物的前药。一般来说，此类前药将是化合物的功能衍生物，在体内容易转化为所需化合物。因此，在本发明的治疗方法中，术语“给药”应包括用具体公开的化合物或用可能未具体公开但在给受试者给药后在体内转化为指定化合物的化合物描述的各种疾病的治疗。用于选择和制备合适的前药衍生物的常规程序描述，例如“前药设计”，h.bundgaard博士，爱思唯尔，1985。
[0521]
分子中特定位置的任何取代基或变量的定义与该分子中其他位置的定义无关。应当理解，本领域的普通技术人员可以选择本发明化合物上的取代基和取代模式，以提供化学稳定性的化合物，并且可以通过本领域已知的技术以及本文所述的方法容易地合成。
[0522]
本发明包括本文所述的化合物可以包含一个或多个不对称中心，因此可以产生非对映异构体和光学异构体。本发明包括所有此类可能的非对映体及其外消旋混合物、其基本上纯净的拆分对映体、所有可能的几何异构体以及其医药上可接受的盐。
[0523]
上式i在某些位置没有明确的立体化学显示。本发明包括式i的所有立体异构体及其药学上可接受的盐。此外，还包括立体异构体的混合物以及分离的特定立体异构体。在用于制备此类化合物的合成过程中，或在使用本领域技术人员已知的外消旋化或差向异构化过程中，此类过程的产物可以是立体异构体的混合物。
[0524]
当存在式i化合物的互变异构体时，除非另有特别说明，否则本发明包括任何可能的互变异构体及其医药上可接受的盐及其混合物。
[0525]
当式i化合物及其医药上可接受的盐以溶剂化物或多晶型物的形式存在时，本发明包括任何可能的溶剂化物和多晶型物。只要溶剂在药理学上是可接受的，则形成溶剂化物的溶剂类型不受特别限制。例如，可以使用水、乙醇、丙醇、丙酮等。
[0526]
术语“药学上可接受的盐”是指由药学上可接受的无毒碱或酸制备的盐。当本发明
的化合物呈酸性时，其相应的盐可以方便地由药学上可接受的无毒碱制备，包括无机碱和有机碱。衍生自此类无机碱的盐包括铝、铵、钙、铜(ic和ous)、铁、亚铁、锂、镁、锰(ic和ous)、钾、钠、锌等盐。特别优选的是铵盐、钙盐、镁盐、钾盐和钠盐。衍生自药学上可接受的有机无毒碱的盐包括伯胺、仲胺和叔胺的盐，以及环状胺和取代胺，例如天然存在的和合成的取代胺。可形成盐的其他药学上可接受的有机无毒碱包括离子交换树脂，例如精氨酸、甜菜碱、咖啡因、胆碱、n'，n'-二苄基乙二胺、二乙胺、2-二乙氨基乙醇、2-二甲氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、n-乙基吗啉、n-乙基哌啶、葡糖胺、葡糖胺、组氨酸、海巴胺、异丙胺、赖氨酸、甲基葡糖胺、吗啉、哌嗪、哌啶、多胺树脂、普鲁卡因、嘌呤、可可碱、三乙胺、三甲胺、三丙胺、氨丁三醇和这一类。
[0527]
当本发明的化合物为碱性时，其相应的盐可以方便地由药学上可接受的无毒酸制备，包括无机酸和有机酸。此类酸包括，例如，乙酸、苯磺酸、苯甲酸、樟脑磺酸、柠檬酸、乙磺酸、甲酸、富马酸、葡糖酸、谷氨酸、氢溴酸、盐酸、羟乙基磺酸、乳酸、马来酸、苹果酸、扁桃酸、甲磺酸、粘液酸、硝酸、泛酸、泛酸、磷酸、琥珀酸、硫酸、酒石酸、对甲苯磺酸等。优选柠檬酸、氢溴酸、甲酸、盐酸、马来酸、磷酸、硫酸和酒石酸，特别优选甲酸和盐酸。由于式i化合物打算用作药物用途，它们基本上以醇的形式提供，例如至少60％醇，更合适地至少 75％醇，尤其是至少98％醇(％以重量比计基础)。
[0528]
本发明的药物组合物包含由式i表示的化合物(或其医药上可接受的盐)作为活性成分、医药上可接受的载体和任选的其他治疗成分或佐剂。所述组合物包括适用于口服、直肠、局部和肠外(包括皮下、肌肉内和静脉内)给药的组合物，尽管在任何给定情况下最合适的途径将取决于特定宿主以及正在给药的活性成分的条件的性质和严重性。药物组合物可以方便地以单位剂型呈现，并通过药学领域中众所周知的任何方法制备。
[0529]
在实践中，本发明的由式i表示的化合物或前药或代谢物或其医药上可接受的盐可以根据传统的药物配制技术与药物载体紧密混合作为活性成分进行组合。根据给药所需的制剂形式，载体可以采取多种形式，例如口服或肠外(包括静脉注射)。因此，本发明的药物组合物可以呈现为适合口服的离散单元，例如胶囊、缓冲剂或片剂，每个都含有预定量的活性成分。此外，所述组合物可以呈现为粉末、颗粒、溶液、水性液体中的悬浮液、非水性液体、水包油乳液或水包油液体乳液。除上述常见剂型外，由式i表示的化合物或其医药上可接受的盐也可通过控释装置和/或递送装置施用。所述组合物可通过任何药学方法制备。通常，此类方法包括将活性成分与构成一种或多种必需成分的载体结合的步骤。通常，通过将活性成分与液体载体或精细分割的固体载体或两者均匀且紧密地混合来制备组合物。然后可以方便地将产品塑造成所需的外观。
[0530]
因此，本发明的药物组合物可包括医药上可接受的载体和式i的化合物或医药上可接受的盐。式i的化合物或其医药上可接受的盐也可与一种或多种其他治疗活性化合物组合包括在药物组合物中。
[0531]
所用的药物载体可以是固体、液体或气体。固体载体如乳糖、白土、蔗糖、滑石、明胶、琼脂、果胶、阿拉伯胶、硬脂酸镁和硬脂酸。液体载体如糖浆、花生油、橄榄油和水。气态载体如二氧化碳和氮气。在制备口服剂型的组合物时，可以使用任何方便的药物介质。例如，水、乙二醇、油、醇、调味剂、防腐剂、着色剂等可用于制作口服液体制剂，例如混悬剂、酏剂和溶液；而载体如淀粉、糖、微晶纤维素、稀释剂、制粒剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂等可用
于制作口服固体制剂如粉剂、胶囊剂和片剂。为了便于给药，片剂和胶囊剂是首选的口服剂量单位，其中使用了固体药物载体。其中片剂可以通过标准的水性或非水性技术进行包衣。
[0532]
含有本发明组合物的片剂可与一种或多种辅助成分或佐剂通过压制或模塑制备。压制片剂可以通过在合适的机器中压制自由流动形式例如粉末或颗粒的活性成分来制备，与粘合剂、润滑剂、惰性稀释剂、表面活性剂或分散剂混合后制作而成。模制片剂可以通过在合适的机器中模制粉末状化合物的混合物用惰性液体稀释剂润湿而制成。每个片剂含有约0.05mg至约5g的活性成分，每个扁囊剂或胶囊含有约0.05mg至约5g的活性成分。例如，用于人类口服给药的制剂可含有约0.5mg至约5g的活性剂，与适量的载体材料混合，载体材料的量可占总组合物的约5％至约95％。单位剂型通常含有约1mg至约2g的活性成分，通常为 25mg、50mg、100mg、200mg、300mg、400mg、500mg、600mg、800mg或1000mg。
[0533]
适用于肠胃外给药的本发明药物组合物可制备成活性化合物在水中的溶液或悬浮液，包括合适的表面活性剂，例如羟丙基纤维素，也可在甘油、液体聚乙二醇及其在油中的混合物中制备分散体。此外，可添加防腐剂以防止微生物的有害生长。
[0534]
适用于可注射用途的本发明药物组合物包括无菌水溶液或分散液。此外，组合物可以是用于临时制备这种无菌可注射溶液或分散体的无菌粉末形式。在所有情况下，最终的可注射形式需无菌并且为有效流体以便于注射。药物组合物需在生产和储存条件下稳定；因此，其保存应防止微生物如细菌和真菌的污染作用。载体可以是溶剂或分散介质，如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液体聚乙二醇)、植物油及其合适的混合物。
[0535]
本发明的药物组合物为适合局部使用的形式，如气雾剂、乳膏剂、软膏剂、洗剂、扑粉等。此外，组合物为适用于经皮装置的形式。这些制剂可以利用本发明式i表示的化合物或其药学上可接受的盐通过常规加工方法制备。例如，通过将亲水材料和水以及约5wt％至约10wt％的化合物混合以制备具有所需稠度的乳膏或软膏。
[0536]
本发明的药物组合物是适合于直肠给药的形式，其中载体是固体。优选混合物形成单位剂量栓剂。合适载体包括可可脂和本领域常用的其他材料。栓剂可通过先将组合物与软化或熔化的载体混合后在模具中冷却和成型以便于形成。
[0537]
除上述载体成分外，上述药物制剂可适量添加一种或多种附加载体成分，例如稀释剂、缓冲剂、调味剂、粘合剂、表面活性剂、增稠剂、润滑剂、防腐剂(包括抗氧化剂)之类的。此外，可添加其他佐剂以使制剂与预期接受者的血液等渗。含有式i所述化合物或其药学上可接受的盐的组合物也可以制备成粉末或液体浓缩物形式。
[0538]
通常，每日约0.01mg/kg至约150mg/kg体重量级的剂量水平可用于治疗以下病症，或者每名患者每日约0.5mg至约7g。例如，结肠癌、直肠癌、套细胞淋巴瘤、多发性骨髓瘤、乳腺癌、前列腺癌、胶质母细胞瘤、鳞状细胞食管癌、脂肪肉瘤、t细胞淋巴瘤黑色素瘤、胰腺癌或肺癌，可以通过每天每公斤体重施用约0.01至50mg的化合物，或每名患者每日约0.5mg至约3.5g。
[0539]
然而，特殊情况下可能需要比以上所述更低或更高的剂量。任何特定受试者的具体剂量水平和治疗方案将取决于多种因素，包括所用具体化合物的活性、年龄、体重、一般健康状况、性别、饮食、给药时间、给药途径、给药速率排泄、药物组合、正在接受治疗的特定疾病的严重程度和病程、受试者对疾病的倾向以及治疗医师的判断。
[0540]
这些和其他方面将从本发明的以下书面描述中变得较为明显。
[0541]
提供以下实施例以更好地说明本发明。除非另有明确说明，所有份数和百分比均以重量计，所有温度均为摄氏度。
[0542]
本发明将通过具体实施例更详细地描述。提供以下实施例用于说明目的，并不旨在以任何方式限制本发明。本领域技术人员将便于认识到可改变或修改的多种非关键参数以产生基本相同的结果。根据本文所述，一种以上的测定结果发现实施例的化合物抑制enpp1。
具体实施方式
[0543]
下面提供了本发明化合物的实验程序。
[0544]
实施例中使用了下列缩略语：
[0545]
acoh：乙酸；
[0546]
dcm：二氯甲烷；
[0547]
dibal-h：二异丁基氢化铝；
[0548]
di乙酸乙酯：n,n-二异丙基乙胺；
[0549]
dmf：二甲基甲酰胺；
[0550]
dmap：4-二甲氨基吡啶；
[0551]
dmso：二甲基亚砜；
[0552]
ea：乙酸乙酯；
[0553]
edta：乙二胺四乙酸；
[0554]
hatu：六氟磷酸盐氮杂苯并三唑四甲基脲；
[0555]
hepes：4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸；
[0556]
lcms：液相色谱-质谱；
[0557]
h或hrs：小时或小时；
[0558]
pe：石油醚；
[0559]
meoh：甲醇；
[0560]
min：分钟；
[0561]
ncs：n-氯代琥珀酰亚胺；
[0562]
rt或r.t：室温；
[0563]
tfa：三氟乙酸；
[0564]
thf：四氢呋喃；
[0565]
tlc：制备薄层色谱；
[0566]
1n:1mol.l-1，(2n:2mol.l-1等)。
[0567]
中间体化合物m4的制备
[0568][0569]
步骤1：化合物m4-3的制备
[0570]
氮气保护下，向-78℃的1-(叔丁基)4-乙基哌啶-1，4-二羧酸(2.83g，11.00 mmol)thf(50ml)溶液中，逐滴添加lda(2m，6.00ml，12.00mmol)。在该温度下将所得混合物搅拌1小时。然后逐滴添加2-氯-5-(氯甲基)噻唑(在 3ml四氢呋喃中，1.69g，10.06mmol)并搅拌1小时。用盐水(50ml)淬火反应混合物，用ea(2
×
30ml)萃取。合并的有机层在无水硫酸钠上干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶色谱法纯化残余物(用ea:hex＝1:20，v/v洗脱)，得到化合物m4-3(1.15g)。
[0571]
步骤2：化合物m4-5的制备
[0572]
氮气保护下，将lda(2m，3.00ml，6.00mmol)逐滴添加到-78℃的化合物m4-3(900mg，2.31mmol)thf(50ml)溶液中。在该温度下将所得混合物搅拌30分钟，并用盐水(30ml)淬火。用ea(2
×
30ml)提取所得混合物，合并有机层，在无水硫酸钠上干燥，过滤并减压浓缩，得到化合物m4-5(832mg)。
[0573]
步骤3：化合物m4-6的制备
[0574]
向m4-5(800mg，2.33mmol)在2ml ti(oet)4中的溶液中分批添加2
‑ꢀ
甲基丙烷-2-亚磺酰胺(847mg，6.99mmol)，在90℃下将所得混合物搅拌12.0 小时。当反应混合物冷却至室温时，通过添加50ml冰水使反应混合物冷却。用 etoac(30ml
×
3)和组合有机相萃取混合物，用盐水(20ml
×
3)洗涤，在无水硫酸钠上干燥，过滤并减压浓缩，得到粗化合物m4-6(1.02g)。
[0575]
步骤4：化合物m4-7的制备
[0576]
向-50℃的化合物m4-6(1.02g，2.29mmol)的thf(10ml)溶液中逐滴添加bh3/thf(1m，6.6ml，6.87mmol)。将所得混合物加热至室温并搅拌16 小时。通过逐滴添加盐水使反应混合物淬火。分离各层，用盐水(1
×
10ml)洗涤有机层，在无水硫酸钠上干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶色谱法纯化残余物 (用ea:hex＝1:2，v/v洗脱)，得到化合物m4-7(516mg)。
[0577]
步骤5：化合物m4的制备
[0578]
氢气保护下，将化合物m4-7(500mg，1.12mmol)、tea(2ml)和pd/c (10％，138mg)在甲醇(10ml)中的悬浮液在40℃的氢气氛下搅拌24小时。过滤所得混合物，并向过滤中添加额外部分钯/碳(10％，280mg)。将所得混合物在50℃再搅拌16小时。过滤所得混合物，在减压下浓缩过滤。通过硅胶色谱法纯化残余物(用ea:hex＝1:1，v/v洗脱)，得到中间体m4(255mg)。 ms:414[m h] 。
[0579]
氢气保护下，将化合物m4-7(500mg、1.12mmol)、t乙酸乙酯(2ml)和 pd/c(10％、138mg)在meoh(10ml)中的悬浮液于40℃搅拌24h。将所得混合物过滤，并将额外部分的pd/c
(10％，280mg)加入再过滤。将所得混合物于 50℃再搅拌16小时。过滤所得混合物，减压浓缩过滤。残余物通过硅胶色谱法纯化(用乙酸乙酯:hex＝1:1、v/v洗脱)得到中间体m4(255mg)。ms：414[m h] 。
[0580]
中间体m5的制备
[0581][0582]
步骤1：化合物m5-3的制备
[0583]
在氮气保护下，向200ml dmf中的m5-1(25.00g，189.4mmol)溶液中分批添加nah(22.7g，567.5mmol)，在0℃下搅拌所得混合物1.0小时。然后缓慢添加m5-2(54.96g，227.1mmol)。将所得混合物在0℃下搅拌1.0小时，并在60℃下再搅拌1.0小时。当反应混合物冷却至0℃时，通过添加500ml冰水使反应混合物淬火。用etoac(500ml
×
3)结合有机相萃取混合物，用盐水 (200ml
×
3)洗涤，在无水硫酸钠上干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶色谱法纯化残余物，得到棕色油状化合物m5-3(29.0g)。
[0584]
步骤2：化合物m5-5的制备
[0585]
向50ml ti(oet)4中的m5-3(29.00g，96.4mmol)溶液中分批添加m5-4 (34.99g，288.7mmol)，所得混合物在90℃下搅拌12.0小时。当反应混合物冷却至室温时，通过添加500ml冰水使反应混合物淬火。用etoac(300ml
×
3) 和组合有机相萃取混合物，用盐水(200ml
×
3)洗涤，在无水na2so4上干燥，过滤并减压浓缩，得到粗化合物m5-5(39.0g)，为棕色油。
[0586]
步骤3：化合物m5-6的制备
[0587]
在氮气保护下，在-20℃下向500ml四氢呋喃中的m5-5(48.00g，118.8mmol) 溶液中分批添加nabh4(6.37g，167.5mmol)。将所得混合物加热至室温并搅拌 2.5小时。通过添加300ml冰水使反应混合物冷却。混合物用乙酸乙酯(300ml
×
3) 和组合有机层萃取。用盐水(200ml
×
3)洗涤有机层，在无水硫酸钠上干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶色谱法纯化残余物，得到棕色油状化合物m5-6(25.4g)。
[0588]
步骤4：化合物m5的制备
[0589]
向100ml dcm中的m5-6(10.0g，24.6mmol)溶液中添加tfa(28.04g， 246.0mmol)。将所得混合物在室温下搅拌1.5小时。通过添加100ml饱和nahco3 溶液使反应混合物冷却。混合物用乙酰乙酸(100ml
×
3)萃取，并结合有机层。用盐水(100ml
×
3)洗涤有机层，在无水na2so4上干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶色谱法纯化残余物，得到黄色固体的化合物m5(7.64g)。
[0590]
化合物m5:1h nmr(500mhz，dmso-d6)：δ7.26-7.16(m，4h)，5.50 (d，j＝10.0hz，1h)，4.30(d，j＝10.0hz，1h)，3.04(d，j＝16.0hz，1h)， 2.87-2.80(m，2h)，2.67-2.58(m，3h)，1.88-1.82(m，1h)，1.59-1.53(m， 1h)，1.37-1.34(m，1h)，1.21(s，9h)，1.12-12 1.09(m，1h)。
[0591]
中间体化合物m6的制备
[0592][0593]
步骤1：化合物m6-3的制备
[0594]
将m6-2(19.5g，114.0mmol)和k2co3(26.2g，189.8mmol)添加到m6-1 (19.5g，95.2mmol)于100ml mecn中的溶液中。将所得混合物在90℃下搅拌 3.0小时。当冷却至室温时，过滤固体并用etoac(50ml
×
2)洗涤，滤液在减压下浓缩。通过硅胶色谱法纯化残余物，得到化合物m6-3(5.9g)。
[0595]
步骤2：化合物m6-4的制备
[0596]
向m6-3(1.5g，7.7mmol)的15ml甲苯溶液中滴加pbr3(1.1ml)。将所得混合物在105℃下搅拌12小时。将反应混合物浓缩并用15ml水淬火。用4mnaoh溶液将ph值调节至9。然后用etoac(50ml
×
2)萃取混合物并结合有机层。用盐水(30ml
×
3)洗涤有机层，在无水硫酸钠上干燥，过滤并减压浓缩，得到化合物m6-4(1.5g)。
[0597]
步骤3：化合物m6-6的制备
[0598]
将nah(271mg，6.8mmol)在0℃下分批添加到m6-5(450mg，3.4mmol) 于6ml dmf中的溶液中，所得混合物在60℃下搅拌1.0小时。然后将混合物冷却至室温，缓慢添加m6-4(1.2g，3.7mmol)。将所得混合物在60℃下再搅拌1.0 小时。反应完成后，将反应混合物冷却至0℃，并通过添加30ml冰水进行淬火。用etoac(30ml
×
3)组合有机相萃取混合物，用盐水(50ml
×
3)洗涤，在无水硫酸钠上干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶色谱法纯化残余物，得到化合物m6
‑ꢀ
6(160mg)。
[0599]
步骤4：化合物m6-7的制备
[0600]
在0℃下向2ml dce中的m6-6(160mg，0.55mmol)溶液中逐滴添加acecl(155mg，1.4mmol)，在室温下将所得混合物搅拌2.0小时。然后浓缩混合物，将残渣溶解在4ml甲醇中，然后将混合物在80℃搅拌3小时。再次浓缩所得混合物，将残渣溶解在4ml dcm中。然后向混合物中添加(boc)2o(242mg， 1.1mmol)和dipea(239mg，1.9mmol)，所得混合物在室温下搅拌12h。反应完成后，通过添加30ml冰水使反应混合物冷却。用etoac(30ml
×
3)萃取混合物，合并有机相，用盐水(50ml
×
3)洗涤，在无水硫酸钠上干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶色谱法纯化残余物，得到化合物m6-7(25mg)。
[0601]
步骤5：化合物m6的制备
[0602]
从中间体m6-7合成化合物m6的步骤与m5-3到m5的步骤相同
[0603]
中间体化合物m11的制备
[0604][0605]
步骤1：化合物m11-3的制备
[0606]
在氮气保护下，向-78℃的m11-2(2.83g，18.1mmol)50ml thf溶液中滴加lda(2m，6ml)thf/hex溶液。将所得混合物搅拌1.0小时后缓慢添加m11
‑ꢀ
1(1.56g，6.1mmol)在3ml thf中的溶液。再将所得混合物搅拌1.0小时。通过添加50ml盐水使反应混合物冷却。用etoac(30ml
×
3)组合有机层萃取混合物，用盐水(50ml
×
3)洗涤，在无水硫酸钠上干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶色谱法纯化残余物，得到淡黄色油状化合物m11-3(1.44g)。
[0607]
步骤2：化合物m11-4的制备
[0608]
向50g ppa中添加m11-3(1.9g，5.04mmol)，将所得混合物在130℃下搅拌2小时。通过添加50ml冰水使反应混合物冷却至室温。用4m naoh溶液将混合物调节至ph＝8，用etoac(150ml
×
2)组合有机层萃取，用盐水(50ml
×
3) 洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶色谱法纯化残余物，得到淡黄色固体形式的化合物m11-4(1.04g)。
[0609]
步骤3：化合物m11-5的制备
[0610]
向m11-4(1.0g，4.3mmol)的50ml乙醇溶液中添加tea(2.0ml)和boc20 (2.1g，9.6mmol)。将所得混合物在室温下搅拌3小时。通过添加50ml盐水使反应混合物淬火，并用etoac(150ml
×
2)和组合有机层萃取，并用盐水(50ml
×
3) 洗涤，在无水硫酸钠上干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶色谱法纯化残余物，得到淡黄色固体形式的化合物m11-5(1.2g)。
[0611]
步骤4：化合物m11的制备
[0612]
由中间体m11-5合成化合物m11的步骤与m5-3至m5的步骤相同
[0613]
中间体化合物m7、m8、m9和m10的制备
[0614]
以下化合物(如m7、m8、m9和m10)是使用上述步骤(如m11)或用相应的起始材料改进的步骤合成的。
[0615][0616]
中间体化合物m15的制备
[0617][0618]
向sm1(560mg，2.0mmol)的20ml dmf溶液中添加m5(670mg， 2.2mmol)和dipea(860mg，6.6mmol)。将所得混合物在80℃下搅拌3小时。当冷却至室温时，通过添加20ml盐水使反应混合物淬火，并用etoac (100ml
×
3)和组合有机层萃取，并用盐水(50ml
×
3)洗涤，在无水硫酸钠上干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶色谱法纯化残余物，得到淡黄色固体形式的化合物m15(990mg)。
[0619]
m16、m17、m18、m19和m20中间化合物的制备
[0620]
以下化合物(例如m16、m17、m18、m19和m20)是使用上述步骤(例如m15)或具有相应起始材料的改进步骤合成的。
[0621][0622]
实施例9(s)-1
’‑
(3-(1-(2-氨基-3-氯吡啶-4-基)乙烯基)-1h-吡唑并 [3,4-b]吡嗪-6-基)-1,3-二氢螺环[indene-2,4'-哌啶]-1-胺(a9)的合成
[0623][0624]
步骤1：化合物a9-2的制备
[0625]
在氮气保护下，向a9-1(2.07g，10.0mmol)在30ml甲苯中的溶液中添加乙炔基三甲基硅烷(1.0g，10.1mmol)、tea(2.02g.20.0mmol)、cui(190mg， 1.0mmol)和pd(pph3)2cl2(105mg.0.15mmol)。将所得混合物在60℃下搅拌 5.0小时。当冷却至室温时，通过添加100ml水使反应混合物冷却。用etoac (100ml
×
3)结合有机相萃取混合物，用盐水(50ml
×
3)洗涤，在无水na2so4 上干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶色谱法纯化残余物，得到白色固
体形式的化合物a9-2(2.11g)。
[0626]
步骤2：化合物a9-3的制备
[0627]
向a9-2(1.12g，5.0mmol)的20ml mecn溶液中添加k2co3(1.38g， 10.0mmol)。将所得混合物在室温下搅拌3小时。通过添加100ml水使反应混合物冷却。混合物用乙酸乙酯(100ml
×
3)萃取，合并有机相，用盐水(50ml
×
3) 洗涤，在无水硫酸钠上干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶色谱法纯化残余物，得到黄色固体形式的化合物a9-3(720mg)。
[0628]
步骤3：化合物a9-4的制备
[0629]
在氮气气氛下，向a9-3(456mg，3.0mmol)在10ml thf中的溶液中添加三丁烷(1.5g，5.1mmol)和pd(pph3)2cl2(75mg.0.075mmol)。将所得混合物在室温下搅拌24小时。通过添加100ml水使反应混合物冷却。混合物用乙酸乙酯(100ml
×
3)萃取，合并有机相，用盐水(50ml
×
3)洗涤，在无水硫酸钠上干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶色谱法纯化残余物，得到化合物a9-4(1.11g)。
[0630]
步骤4：化合物a9的制备
[0631]
将m15(400mg，0.7mmol)、cui(106mg，0.7mmol)和pd(pph3)2cl
2 (49mg.0.07mmol)添加到a9-4(444mg，1.0mmol)于10ml无水dmf中的溶液中。将所得混合物在80℃下搅拌0.5小时。当冷却至室温时，通过添加100mlhcl(3n)使反应混合物淬火，并在室温下将混合物再搅拌2小时。用naoh(2n) 溶液将混合物中和至ph＝8。用etoac(100ml
×
3)组合有机层萃取混合物，用盐水(50ml
×
3)洗涤，在无水硫酸钠上干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶色谱法纯化残余物，得到浅黄色固体形式的化合物a9(380mg)。
[0632]
化合物a1-a47的制备
[0633]
以下化合物(例如a1-a47)是使用上述a9步骤或具有相应起始材料的改进步骤合成的。
[0634]
[0635]
[0636]
[0637]
[0638]
[0639][0640]
化合物a5:1h nmr(500mhz，dmso-d6)δ8.60(d，j＝5.1hz，4h)，8.50 (s，1h)，7.77
–
7.48(m，1h)，7.42
–
7.16(m，5h)，6.84(d，j＝2.3hz，1h)， 6.68(d，j＝8.3hz，3h)，5.32(d，j＝2.2hz，1h)，4.48
–
4.25(m，4h)，3.62(s， 6h)，3.43(s，1h)，3.37
–
3.20(m)，4h)，3.01(d，j＝16.1hz，1h)，1.82(dd， j＝13.0，3.6hz，2h)，1.58(d，j＝15.7hz，2h)。
[0641]
中间化合物m21的制备
[0642]
[0643]
步骤1：化合物m21-2的制备
[0644]
向m21-1(3.15g，10.0mmol)的30ml二氧六环溶液中添加20ml氢氧化钠(4m)溶液。将所得混合物在室温下搅拌24小时。用hcl(1n)溶液将混合物中和至ph＝7。过滤该固体并用水洗涤并在真空下干燥，得到淡黄色固体形式的化合物m21-2(2.1g)。
[0645]
步骤2：化合物m21的制备
[0646]
向m21-2(572mg，2.0mmol)的20ml dmf溶液中添加m5(670mg， 2.2mmol)和dip乙酸乙酯(860mg，6.7mmol)。将所得混合物在100℃下搅拌3小时。冷却至室温后，用20ml水将混合物淬火。混合物用乙酸乙酯 (100ml
×
3)萃取，合并有机相，用盐水(50ml
×
3)洗涤，在无水硫酸钠上干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶色谱法纯化残余物，得到化合物m21 (860mg)。
[0647]
实施例47 6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(1
‑ꢀ
(2-氨基-3-氯吡啶-4-基)乙烯基)-1,5-二氢-4h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4-酮 (b1)的合成
[0648][0649]
将m21(340mg，0.7mmol)、cui(106mg，0.7mmol)和pd(pph3)2cl2 (49mg.0.07mmol)添加到a9-4(444mg，1.0mmol)于10ml无水dmf中的溶液中。将所得混合物在110℃下搅拌0.5小时。当冷却至室温时，通过添加 100ml hcl(3n)使反应混合物淬火，并在室温下将混合物再搅拌2小时。用氢氧化钠(2n)溶液将混合物中和至ph＝8。用乙酸乙酯(100ml
×
3)萃取混合物，合并有机层，用盐水(50ml
×
3)洗涤，在无水硫酸钠上干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶色谱法纯化残余物，得到浅黄色固体形式的化合物b1(190mg)。
[0650]
化合物b1-b150的制备
[0651]
以下化合物(b1-b150)是使用上述b1程序或使用相应起始材料的改进程序合成的
[0652]
[0653]
[0654]
[0655]
[0656]
[0657]
[0658]
[0659]
[0660]
[0661]
[0662]
[0663]
[0664]
[0665]
[0666]
[0667]
[0668]
[0669][0670][0671]
化合物b16:1h nmr(500mhz、dmso-d6)δ12.77(s、1h)、8.32(s、3h)、 7.49
–
7.27(m、4h)、7.28
–
7.14(m、4h)、5.47(d、j＝1.7hz、1h)、4.23(d、j ＝13.7hz、2h)、3.96(s、1h)、3.32
–
3.13(m、2h)、3.09(d、j＝15.7hz、1h)、 2.70(d、j＝15.8hz、1h)、1.88
–
1.59(m、2h)、1.48(d、j＝13.2hz、1h)、1.17 (d、j＝13.4hz、1h).
[0672]
化合物b20:1h nmr(500mhz、dmso-d6)δ10.90(s、1h)、8.51(s、2h)、 7.69(m、3h)、7.58(d、j＝7.9hz、2h)、7.45
–
7.23(m、3h)、6.81(s、1h)、5.79 (s、1h)、4.49
–
3.99(m、4h)、3.36
–
3.12(m、3h)、2.97(d、j＝16.1hz、1h)、 1.76(d、j＝6.1hz、2h)、1.51(d、j＝11.0hz、2h).
[0673]
化合物b28:1h nmr(500mhz、dmso-d6)δ12.95(s、1h)、7.46(dd、j＝ 16.3、7.8hz、3h)、7.39
–
7.20(m、5h)、6.73(s、1h)、5.77(s、1h)、4.23(d、 j＝21.4hz、2h)、3.33(s、3h)、3.28
–
3.07(m、3h)、2.95
–
2.80(m、1h)、1.83
ꢀ–
1.61(m、1h)、1.49(d、j＝13.5hz、1h)、1.39
–
1.16(m、2h).
[0674]
化合物b33:1h nmr(500mhz、dmso-d6)δ10.87(s、1h)、8.59(d、j＝5.4 hz、1h)、7.60(d、j＝7.4hz、1h)、7.50
–
7.17(m、9h)、6.57(s、1h)、5.69(d、 j＝1.5hz、1h)、4.51
–
4.11(m、4h)、3.36
–
3.12(m、3h)、2.97(d、j＝16.0hz、 1h)、1.78(dt、j＝12.9、3.6hz、2h)、1.50(t、j＝13.8hz、2h).
[0675]
中间体化合物m22的制备
[0676][0677]
步骤1：化合物m22-2的制备
[0678]
向m22-1(3.15g，10.0mmol)在30ml dcm中的溶液中加入(2-(氯甲氧基)乙基)三甲基硅烷(2.0g，12.0mmol)和dip乙酸乙酯(2.58g，20.0mmol)。将所得混合物在室温下搅拌1.5小时。通过添加100ml水淬灭反应混合物。混合物用乙酸乙酯(100ml
×
3)萃取，合并有机层，用盐水(50ml
×
3)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过硅胶色谱法纯化，得到化合物m22-2(3.61g)。
[0679]
步骤2：化合物m22-3的制备
[0680]
向m22-2(2.20g、5.0mmol)的20ml thf溶液中加入4ml氢氧化钠(5m) 溶液。将所得混合物在室温下搅拌7.5小时。通过添加100ml水淬灭反应混合物。用乙酸乙酯(100ml
×
3)萃取混合物，合并有机层，用盐水(100ml
×
2)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过硅胶色谱法纯化，得到化合物 m22-3(1.61g)。
[0681]
步骤3：化合物m22-4的制备
[0682]
向m22-3(1.28g，3.0mmol)的10ml dmf溶液中加入mei(0.56g，4.0mmol) 和k2co3(0.82g，6.0mmol)。将所得混合物在室温下搅拌1.5小时。反应混合物用100ml水淬灭。用乙酸乙酯(100ml
×
3)萃取混合物，合并有机层，用盐水 (100ml
×
2)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过硅胶色谱纯化，得到化合物m22-4(0.81g)。
[0683]
步骤4：化合物m22的制备
[0684]
向m22-4(441mg，1.0mmol)在10ml二恶烷中的溶液中加入3ml hcl(4m) 在二恶烷中的溶液。将所得混合物在室温下搅拌8小时。反应混合物用10ml水淬灭并用氢氧化钠(2n)溶液中和至ph＝8。过滤固体，用盐水(10ml
×
2)洗涤，真空干燥，得到化合物m22(210mg)。
[0685]
中间体化合物m23的制备
[0686][0687]
向m22(620mg，2.0mmol)的20ml dmf溶液中加入m5(670mg，2.2mmol) 和dip乙酸乙
酯(860mg，6.6mmol)。将所得混合物在90℃搅拌3小时。当冷却至室温时，反应混合物用20ml水淬灭。用乙酸乙酯(100ml
×
3)萃取混合物，合并有机层，用盐水(100ml
×
2)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过硅胶色谱法纯化，得到化合物m23(810mg)。
[0688]
中间体化合物m24和m25的制备
[0689]
使用上述m21、m22和m23的步骤或使用相应起始材料的改进步骤合成以下化合物(m24和m25)
[0690][0691]
实施例178(s)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-5-甲基-3-(1-苯基乙烯基)-1,5-二氢-4h-吡唑[3,4-d]嘧啶-4-酮(c1)的合成
[0692][0693]
步骤1：化合物c1-2的制备
[0694]
在氮气保护下，向10ml无水四氢呋喃中的c1-1(510mg，5.0mmol)溶液中添加三丁烷(1.5g，5.0mmol)和pd(pph3)2cl2(210mg.0.3mmol)。将所得混合物在室温下搅拌24小时。通过添加100ml水使反应混合物淬火，并用乙酸乙酯(100ml
×
3)萃取，结合有机层，并用盐水(50ml
×
3)洗涤，在无水硫酸钠上干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶色谱法纯化残余物，得到化合物c1-2(1.31g)。
[0695]
步骤2：化合物c1-3的制备
[0696]
在氮气保护下，将m23(350mg，0.7mmol)、cui(106mg，0.7mmol)和pd(pph3)2cl2(49mg.0.07mmol)添加到10ml无水dmf中的c1-2(393mg，1.0mmol)溶液中。将所得混合物在80℃下搅拌0.5小时。当冷却至室温时，通过添加100ml水使反应混合物淬火，并用乙酸乙酯(100ml
×
3)组合有机层萃取，并用盐水(50ml
×
3)洗涤，在无水硫酸钠上干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶色谱法纯化残余物，得到淡黄色固体形式的化合物c
1-3
(310mg)。
[0697]
步骤3：化合物c1的制备
[0698]
向10ml二氧六环中的c1-3(278mg，0.5mmol)溶液中添加4ml二氧六环中的hcl(4m)溶液。在室温下将混合物搅拌3.5小时。通过添加100mlnahco3饱和溶液使反应混合物淬火，并用乙酸乙酯(100ml
×
3)萃取，结合有机层，并用盐水(50ml
×
3)洗涤，在无水硫酸钠上干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶色谱法纯化残余物，得到浅黄色固体形式的化合物c1(190mg)。
[0699]
化合物c1-c4、d1-d4和e1-e4的制备
[0700]
以下化合物(c1-c4、d1-d4和e1-e4)是使用上述c1步骤或使用相应起始材料的改进步骤合成的。
[0701]
[0702][0703][0704]
中间体化合物m26的制备
[0705][0706]
步骤1：化合物m26-2的制备
[0707]
向m26-1(3.15g，10.0mmol)在30ml二恶烷中的溶液中加入2-氨基乙醇 (2.0ml)。将所得混合物在室温下搅拌16小时。过滤固体，用二恶烷洗涤，真空干燥，得到白色固体形式化合物m26-2(2.44g)。
[0708]
步骤2：化合物m26的制备
[0709]
向m26-2(1.7g，5.0mmol)在20ml chcl3中的溶液中加入 socl2(2.0ml)。将所得混合物在80℃搅拌6小时。当冷却至室温时，通过加入100ml水淬灭反应混合物并用dcm(100ml
×
2)萃取，合并有机层，用盐水 (50ml
×
3)洗涤，经无水硫酸钠干燥，减压下过滤并浓缩。通过硅胶色谱法纯化残余物，得到化合物m26(964.5mg)。
[0710]
中间体化合物m27的制备
[0711][0712]
步骤1：化合物m27-1的制备
[0713]
向m26-1(3.15g，10.0mmol)的30ml乙醇溶液中添加水合肼(80％) (3.0ml)。将所得混合物在室温下搅拌16小时。过滤固体，用乙醇洗涤，在真空下干燥固体，得到浅黄色固体形式的化合物m27-1(2.75g)。
[0714]
步骤2：化合物m27的制备
[0715]
向m27-1(1.55g，5.0mmol)的20ml二氧六环溶液中添加三乙氧基甲烷 (2.0ml)。将所得混合物在60℃下搅拌5小时。当冷却至室温时，通过添加 100ml水使反应混合物淬火，并用dcm(100ml
×
2)萃取，结合有机层，并用盐水(50ml
×
3)洗涤，在无水硫酸钠上干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶色谱法纯化残余物，得到浅黄色固体化合物m27(1.30g)。
[0716]
中间化合物m28的制备
[0717][0718]
步骤1：化合物m28-1的制备
[0719]
向m26-1(3.15g，10.0mmol)的30ml甲醇溶液中添加2,2-二甲氧基乙胺 (2.0ml)。
将所得混合物在室温下搅拌16小时。过滤固体并用甲醇洗涤，并在真空下干燥，得到黄色固体化合物m28-1(3.45g)。
[0720]
步骤2：化合物m28的制备
[0721]
向m28-1(1.92g，5.0mmol)的20ml二氧六环溶液中添加acoh(2.0ml)。将所得混合物在90℃下搅拌5小时。当冷却至室温时，通过添加100ml nahco3饱和溶液使反应混合物淬火，并用dcm(100ml
×
2)萃取，结合有机层，并用盐水(50ml
×
3)洗涤，在无水硫酸钠上干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶色谱法纯化残余物，得到淡黄色固体化合物m28(767mg)
[0722]
实施例190(s)-1
’‑
(9-(1-苯基乙烯基)-2,7-二氢-3h-咪唑并[1,2-c] 吡唑[4,3-e]嘧啶-5-基)-1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]-1-胺(f1)
[0723][0724]
步骤1：化合物f1-1的制备
[0725]
向m26(643mg，2.0mmol)的20ml dmf溶液中添加m5(670mg，2.2mmol) 和dip乙酸乙酯(860mg，6.6mmol)。将所得混合物在80℃下搅拌3小时。当冷却至室温时，通过添加20ml盐水使反应混合物淬火，并用乙酸乙酯(100ml
×
3) 和组合有机层萃取，并用盐水(50ml
×
3)洗涤，在无水硫酸钠上干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶色谱法纯化残余物，得到化合物f1-1(893mg)。
[0726]
步骤2：化合物f1-2的制备
[0727]
氮气保护下，将c1-2(393mg，1.0mmol)、cui(106mg，0.7mmol)和pd (pph3)2cl2(49mg.0.07mmol)添加到f1-1(413mg，0.7mmol)于10ml无水dmf中的溶液中。将所得混合物在80℃下搅拌1.5小时。当冷却至室温时，通过添加100ml水使反应混合物淬火，并用乙酸乙酯(100ml
×
3)萃取，结合有机层，并用盐水(50ml
×
3)洗涤，在无水硫酸钠上干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶色谱法纯化残余物，得到浅黄色固体形式的化合物f1-2(330mg)
[0728]
步骤3：化合物f1的制备
[0729]
向f1-2(283mg，0.5mmol)于10ml二氧六环中的溶液中添加4ml hcl (4m)于二氧六环中的溶液。在室温下将混合物搅拌3.5小时。通过添加100mlnahco3饱和溶液使反应混合物淬火，并用乙酸乙酯(100ml
×
3)萃取，结合有机层，并用盐水(50ml
×
3)洗涤，在无水硫酸钠上干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶色谱法纯化残余物，得到浅黄色固体形式的化合物f1(208mg)。
[0730]
化合物g1-g23和h1的制备
[0731]
以下化合物(g1-g23和h1)是使用上述f1程序或使用相应起始材料的改进程序合成的。
[0732][0733]
[0734]
[0735][0736]
实施例228 shp2变构抑制剂酶活性测定
[0737]
shp2通过双酪氨酰磷酸化肽与其src同源2(sh2)结构域的结合而被激活。随后的激活步骤导致shp2的自动抑制界面释放，进而激活shp2蛋白酪氨酸磷酸酶(ptp)，可用于底物识别和反应催化。shp2的催化活性使用替代 difmup以快速荧光测定形式进行监测。
[0738]
shp2通过双酪氨酸磷酸化肽与其src同源2(sh2)结构域的结合而激活。随后的激活步骤导致shp2自动抑制界面的释放，该界面反过来激活shp2蛋白酪氨酸磷酸酶(ptp)，并可用于底物识别和反应催化。使用快速荧光分析格式的替代difmup监测shp2的催化活性
[0739]
测定程序如下：
[0740]
(1)复方配方：
[0741]
将本发明化合物(10mm原液)用100％dmso和测定缓冲液稀释至合适倍数，本发明化合物的最终测试浓度为10μm、3.333μm、1.111μm、0.3704μm、 0.1235μm、0.0412μm、0.0137μm、0.0046μm、0.0015μm、0.00μm；
[0742]
(2)酶反应工作液的制备：
[0743]
shp2酶活检在室温下使用50μl的最终反应体积和以下测定缓冲液条件在 96孔黑色聚苯乙烯板(平底、低法兰、非粘合表面)(perki elmer，cat#6005270) 中进行：60mm hepes、75mm nacl、75mm kcl、0.05％brij-35、1mm edta、 5mm dtt。
[0744]
(3)酶催化反应及数据监测：
[0745]
将本发明的化合物加入相应的96孔板中，不提供化合物和酶作为空白测试孔。shp2活化肽(irs1_py1172(dpeg8)py1222)置于冰上融化，每孔加入0.5μm，然后将0.2ng shp2蛋白样品加入相应的孔板中，室温孵育1小时。在室温下将底物difmup(invitrogen、cat#d6567)添加到反应中1小时。使用酶阅读器 (envision、perki elmer)分别使用340nm和450nm的激发波长和发射波长监测荧光信号。
[0746]
(4)数据分析：
[0747]
计算公式：
[0748]
抑制率％＝[1-(conversion_sample-conversion_min)/(conversion_max
‑ꢀ
conversion_min)]
×
100％
[0749]
其中：conversion_sample是样本的转换读数；conversion_min是空白对照孔的平均值，代表没有酶活孔的转化读数；conversion_max是阳性对照孔比平均值，表示没有化合物抑制孔的转化读数。使用分析软件graphpad prism的 log(inhibitor)vs.response-variable斜率拟合功效曲线，计算化合物对酶活性的 ic50值。
[0750]
结果以ic50表示，化合物对shp2的抑制活性如表1所示，本发明化合物，如实施例中所举例说明的ic50值在以下范围内：“a”代表“ic50≤100nm”；“b”代表“100nm《ic50≤500nm”；“c”代表ic50＞500nm。
[0751]
表1
[0752]
[0753]
[0754]
[0755][0756]
实施例229细胞增殖测定
[0757]
使用体外细胞测试评估本发明化合物对白血病细胞mv-4-11和肺癌细胞 nci-h358增殖的影响。该测定中使用的检测方法是cell titer-glo(ctg) 发光法，通过对atp进行定量测定，可以检测活细胞的数量。由于atp参与生物体内的各种酶促反应，是活细胞新陈代谢的指标，其含量直接反应细胞数量和细胞状态，因此在实验过程中加入了celltiter-glo试剂。细胞培养基，测量发光值，发光值与atp的量成正比，atp也与活细胞的数量直接相关；因此，可以通过检测atp含量来观察细胞活力。
[0758]
测定程序如下：
[0759]
(1)细胞铺板：
[0760]
取一瓶对数生长期的nci-h358细胞，消化重悬细胞后计数，将细胞密度接种于96孔超低附着平板，每孔接种2000个细胞，37℃平板接种，5％co2培养箱24小时后加入本发明化合物处理；
[0761]
取一瓶对数mv-4-11细胞，收集细胞后计数，将细胞密度接种到96孔板中，每孔接
种4000个细胞，将板置于37℃，5％co2培养箱中24小时，然后加入本发明化合物进行治疗；
[0762]
(2)细胞复合处理：
[0763]
本发明的化合物被配制用于细胞治疗，化合物的终浓度为1000nm、333.3 nm、111.1nm、37.04nm、12.35nm、4.115nm、1.372nm、0.4572nm、0.1524 nm、0nm。至低，将孔板置于37℃、5％co2培养箱中120小时。只添加没有细胞孔的培养基作为空白组；化合物在对照组中的浓度为0nm。
[0764]
(3)ctg检测：
[0765]
mv-4-11细胞：细胞培养120小时后，每孔加入50μl luminescent cell viability assay溶液，轻轻摇动2分钟，室温继续孵育10分钟，在多功能酶标仪上读取每个孔的检测值。
[0766]
nci-h358细胞：细胞培养96小时后，每孔加入50μl luminescent cell viability assay溶液，轻轻摇动2分钟，室温继续孵育10分钟，培养移至96孔写板中，并在多功能酶阅读器上读取每个孔的检测值。
[0767]
(4)数据分析：
[0768]
根据排放值读数计算抑制比，
[0769]
抑制百分比＝(1-(管理组值-空白组值)/(控制组值-空白组值)*100
[0770]
graphpad prism的log(抑制剂)对响应-变量斜率拟合量化曲线并计算化合物抑制细胞增殖的ic50，如表2所示，如实施例中举例说明的本公开的化合物显示ic50值在以下范围：“a”代表“ic50≤100nm”；“b”代表“100nm《ic50≤500nm”；“c”代表ic50＞500nm。
[0771]
表格2
[0772]
[0773]
[0774]
[0775]
[0776]
[0777]
[0778][0779]
实施例230人、大鼠、猴和犬肝微粒体中的体外代谢稳定性
[0780]
缓冲液：
[0781]
将1900mgmgcl2溶解到最终体积为400ml的超纯水中。
[0782]
分别将17.42gk2hpo4和13.65gkh2po4溶解到最终体积为1000ml的超纯水中。混合k2hpo4和kh2po4以制备100mm磷酸钾(pbs)缓冲液。将最终溶液的ph值调节至ph7.30
±
0.10。
[0783]
反应停止方案：
[0784]
冷乙腈(包括10ng/ml拉贝洛尔和10ng/ml格列本脲)于4℃保存。
[0785]
工作液配制：
[0786]
使用meoh/acn/h2o溶液(1:1:2、v/v/v)将维拉帕米(阳性对照)和测试化合物储备溶液分别稀释成50μm和200μm的浓度。
[0787]
程序
[0788]
1)将40μlmgcl2和306μlpbs添加到96个板孔(空白孔、复合孔、不含nadph孔的化合物)中
[0789]
2)上述孔中加入4μl复合工作液(空白：4μlpbs缓冲液)(注：最终培养体系中dmso的体积≤0.5％)
[0790]
3)每孔加入10μl微粒体(20mg/ml)。将混合物在37.0℃加热10分钟。
[0791]
4)加入40μl10mmnadph工作液开始反应。总体积为400μl。
[0792]
5)在0、5、15、45分钟从反应溶液中取出50μl样品。加入400μl终止液终止反应溶液。
[0793]
6)将采样板摇晃约10分钟。5分钟。
[0794]
7)样品在3200rcf下离心10分钟。然后将50μl转移到用200μlh2o稀释的新板中，用于lc/ms/ms分析。
[0795]
数据分析
[0796]
使用一级动力学方程计算t1/2和cl：
[0797]
k＝-斜率
[0798]
t1/2＝0.693/k
[0799]
clint＝k/c蛋白
[0800]
其中k代表消除常数，它是根据剩余百分比与时间的对数线性图计算得出的。t1/2代表半衰期。c蛋白是肝微粒体的浓度。
[0801]
人、大鼠、猴、犬肝微粒体代谢稳定性结果见表3。
[0802]
表格3
[0803]