一种去除西索米星和小诺霉素的大庆霉素分离纯化工艺的制作方法

1.本发明涉及大庆霉素制备技术领域，特别是涉及一种去除西索米星和小诺霉素的大庆霉素分离纯化工艺。


背景技术：

2.庆大霉素是一种氨基糖苷类广谱抗生素，有效成分主要为c1、c2、c1a、c2a等，同时还包括西索米星、小诺霉素等多种小组分。2010版《中华人民共和国药典》对其c组分和各杂质含量有了更加严格的要求，而现有的常规除杂方法，产品往往达不到新药典要求，或者收率很低。所以，必需采用新的除杂方法，方可能生产出质量较好，符合新药典杂质含量要求的庆大霉素。


技术实现要素：

3.为了克服现有技术的不足，本发明提供一种去除西索米星和小诺霉素的大庆霉素分离纯化工艺。
4.为解决上述技术问题，本发明提供如下技术方案：一种去除西索米星和小诺霉素的大庆霉素分离纯化工艺，包括以下步骤：
5.s1：种子部分；
6.s2：发酵部分；
7.s3：提取部分；
8.s4：精制部分；
9.s5：无菌喷粉部分；
10.s6：压缩部分。
11.作为本发明的一种优选技术方案，所述s1种子部分包括以下步骤：
12.s11：种子瓶制备；
13.s12：接种。
14.作为本发明的一种优选技术方案，所述s2发酵部分包括以下步骤：
15.s21：一级种子罐；
16.s22：二级种子罐；
17.s23：发酵罐制备。
18.作为本发明的一种优选技术方案，所述s3提取部分包括以下步骤：
19.s31:酸化中和；
20.s32：树脂静态吸附；
21.s33：饱和树脂的洗涤、解吸及脱色；
22.s34：薄膜浓缩。
23.作为本发明的一种优选技术方案，所述s4精制部分包括以下步骤：
24.第一步：加入的浓缩液进行搅拌,用12n的h2so4调ph6.0～6.2，加浓缩液体积的
7％左右的活性炭进行脱色,温度为65～75℃，历时60～90分钟；
25.第二步：趁热减压过滤，脱色液透光度95％以上,效价15万μ/ml左右；
26.第三步：经pe管精滤器过滤，用于水针剂的制备或用于无菌喷雾干燥。
27.作为本发明的一种优选技术方案，所述s5无菌喷粉部分包括以下步骤：
28.第一步：对原料药生产的精、烘、包工序采用洁净技术设计，精制好的硫酸庆大霉素浓缩液，按10万μ/ml配制后,经过滤除菌，用转子流量计15l/小时送至喷雾干燥塔；
29.第二步:雾化浓缩液的压缩空气经冷却，分离油水,过滤除去细菌和异物后送至喷雾干燥塔,压力0.9～1.0kg/cm2；
30.第三步：干燥用热空气经预过滤,加热,中效过滤和高效过滤后得到净化热空气进入喷雾干燥塔，进口温度120～130℃,出口温度70～80℃；
31.第四步：干燥后，热空气和成品自喷雾干燥塔出口送至旋风分离器,经分离得到硫酸庆大霉素无菌粉,在100级层流保护下用玻璃瓶收集，尾气经袋滤器过滤后排空。
32.作为本发明的一种优选技术方案，所述s6压缩部分包括以下步骤：
33.第一步：采用两级冷却、加热除菌流程，第一次却器冷却后，大部分的水、油都已结成较大的雾粒，且雾粒浓度较大，用旋风分离器分离；
34.第二步：第二冷却器使空气进一步冷却后析出一部分较小雾粒，采用丝网分离器分离，发挥丝网能够分离较小直径的雾粒和分离效果高的作用，第一级冷却到30至35℃，第二级冷却到20至25℃；
35.第三步：除水后，空气的相对湿度仍是100％，用丝网分离器后的加热器加热，将空气中的相对湿度降低至50％～60％。
36.作为本发明的一种优选技术方案，所述一级种子罐的配方包括淀粉、黄豆饼粉、葡萄糖、玉米粉、硝酸钾、碳酸钙、氯化钴和豆油，所述二级种子罐的配方包括淀粉、黄豆饼粉、蛋白胨、葡萄糖、玉米粉、硝酸钾、碳酸钙、氯化钴和豆油，所述发酵罐的配方包括淀粉、黄豆饼粉、蛋白胨、葡萄糖、鱼粉、玉米粉、硝酸钾、碳酸钙、氯化钴、硫酸铵和豆油，所述一级种子罐、二级种子罐和发酵罐的消前ph均为7.5。
37.作为本发明的一种优选技术方案，所述s11种子瓶制备包括以下步骤：
38.第一步：按种子瓶配方配制好培养基，装入500ml摇瓶中,装量50ml；
39.第二步：用1kg/cm2饱和蒸汽120℃灭菌30分钟,冷却备用。
40.作为本发明的一种优选技术方案，所述s12接种包括以下步骤：
41.第一步：在超净工作台上，火焰保护下,用蒸汽消过毒的无菌接种铲挖取斜面孢子0.5cm2于种子瓶中,放于摇床上,35℃
±
0.5℃培养40小时左右；
42.第二步：涂片观察菌丝形态，形态为大菊花团边缘已经散开，即可下瓶作为生产用种。
43.与现有技术相比，本发明能达到的有益效果是：
44.由于结构上的细微差异，庆大霉素各组分与hzd-2弱酸性阳离子交换树脂的吸附能力不同，先后用不同浓度的氨水洗涤除去西梭米星、小诺霉素等杂质，收率达65％左右，从而提高产品质量，得到符合2010版新药典质量要求的产品，在一定程度上能够缓解现有市场对高品质庆大霉素供不应求的压力。
附图说明
45.图1为本发明的整体流程示意图；
46.图2为本发明中提取部分的流程示意图。
具体实施方式
47.为了使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施例，进一步阐述本发明，但下述实施例仅仅为本发明的优选实施例，并非全部。基于实施方式中的实施例，本领域技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得其它实施例，都属于本发明的保护范围。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
48.实施例:
49.如图1-图2所示，一种去除西索米星和小诺霉素的大庆霉素分离纯化工艺，包括以下步骤：
50.s1：种子部分；
51.s2：发酵部分；
52.s3：提取部分；
53.s4：精制部分；
54.s5：无菌喷粉部分；
55.s6：压缩部分；
56.所述s1种子部分包括以下步骤：
57.s11：种子瓶制备；
58.s12：接种；
59.所述s11种子瓶制备包括以下步骤：
60.第一步：按种子瓶配方配制好培养基，装入500ml摇瓶中,装量50ml；
61.第二步：用1kg/cm2饱和蒸汽120℃灭菌30分钟,冷却备用；
62.所述s12接种包括以下步骤：
63.第一步：在超净工作台上，火焰保护下,用蒸汽消过毒的无菌接种铲挖取斜面孢子0.5cm2于种子瓶中,放于摇床上,35℃
±
0.5℃培养40小时左右；
64.第二步：涂片观察菌丝形态，形态为大菊花团边缘已经散开，即可下瓶作为生产用种；
65.所述s2发酵部分包括以下步骤：
66.s21：一级种子罐，按一级种子罐配方配好培养基，移入一级种子罐内搅拌后,直接进蒸汽进行实罐消毒，消后体积250l，降温至35℃后，在火焰的保护下，利用压差法将种子接入一级种子罐内,接种量5～6瓶,进行培养，培养温度35℃，罐压0.4kg/cm2，培养时间38小时，搅拌转速200～220转/分，移种标准为菌丝形态呈菊花团边缘全部散开或呈网状，无杂菌；
67.s22：二级种子罐，空罐消毒、实罐消毒及分过滤器消毒均同一级种子罐，移种管道消毒为2～3kg/cm2保压2小时，按二级种子罐配方配好培养基，移入二级种子罐内搅拌后，直接进蒸汽进行实罐消毒，消后体积1.5l，降温至35℃后，通过移种管道将一级种子罐的成
熟种子移入，进行培养，培养温度:35℃，罐压：0.3kg/cm2，培养时间：22小时，搅拌转速：200～220转/分，移种标准为菌丝形态呈网状，量多无杂菌；
68.s23：发酵罐制备，按发酵罐配方配好培养基，移入罐内搅拌后，直接进蒸汽进行实罐消毒，降温至35℃后，通过移种管道接入二级种子罐内的种子,进行发酵培养，培养温度35℃，罐压24小时前0.2kg/cm2，24小时后0.1kg/cm2，搅拌转速：不少于170转/分；
69.所述一级种子罐的配方包括淀粉、黄豆饼粉、葡萄糖、玉米粉、硝酸钾、碳酸钙、氯化钴和豆油，所述二级种子罐的配方包括淀粉、黄豆饼粉、蛋白胨、葡萄糖、玉米粉、硝酸钾、碳酸钙、氯化钴和豆油，所述发酵罐的配方包括淀粉、黄豆饼粉、蛋白胨、葡萄糖、鱼粉、玉米粉、硝酸钾、碳酸钙、氯化钴、硫酸铵和豆油，所述一级种子罐、二级种子罐和发酵罐的消前ph均为7.5；
70.所述s3提取部分包括以下步骤：
71.s31:酸化中和，将放罐发酵液放入发酵罐，加盐酸酸化至ph1.5～2.0，然后加工业用naoh中和至ph6.4～6.8，酸化可使庆大霉素由菌丝中充分溶出,中和有利于732树脂的吸附；
72.s32：树脂静态吸附，中和后的发酵液按6万μ/ml树脂的交换容量，投入铵型732树脂搅拌吸附6～7小时，测废液单位在20μ/m1以下，过60目振荡筛分离树脂，树脂抽入漂洗柱，反冲漂洗干净；
73.s33：饱和树脂的洗涤、解吸及脱色，饱和树脂装入树脂柱,先用自来水反向冲洗至无悬浮物，然后用0.4n的hcl正向冲洗，流速为每分钟流树脂体积的1/20，约洗树脂体积的20－30倍量，洗至无ca2

、mg2

后(以naoh检查),再用无盐水冲至无cl
－
，再通人4.5％的氨水进行解吸,流速上1/100v/分钟，至流出液ph＝7.0时与711树脂柱串联，收集树脂体积的8倍量,流出单位在300μ/ml以下之后，9～10倍量作下次解吸氨水套用；
74.s34：薄膜浓缩,解吸流出液约半倍量后，开始浓缩，浓缩过程中蒸汽压力,不超过0.5kg/cm2，真空度在600mmhg以上，浓缩2－3遍后，用萘氏试剂检查浓缩液应无nh4

,浓度达到6be(波美度)，化学效价15万μ/ml左右，以备转盐、碳脱，压入炭脱罐；
75.所述s4精制部分包括以下步骤：
76.第一步：加入的浓缩液进行搅拌,用12n的h2so4调ph6.0～6.2，加浓缩液体积的7％左右的活性炭进行脱色,温度为65～75℃，历时60～90分钟；
77.第二步：趁热减压过滤，脱色液透光度95％以上,效价15万μ/ml左右；
78.第三步：经pe管精滤器过滤，用于水针剂的制备或用于无菌喷雾干燥；
79.所述s5无菌喷粉部分包括以下步骤：
80.第一步：对原料药生产的精、烘、包工序采用洁净技术设计，精制好的硫酸庆大霉素浓缩液，按10万μ/ml配制后,经过滤除菌，用转子流量计15l/小时送至喷雾干燥塔；
81.第二步:雾化浓缩液的压缩空气经冷却，分离油水,过滤除去细菌和异物后送至喷雾干燥塔,压力0.9～1.0kg/cm2；
82.第三步：干燥用热空气经预过滤,加热,中效过滤和高效过滤后得到净化热空气进入喷雾干燥塔，进口温度120～130℃,出口温度70～80℃；
83.第四步：干燥后，热空气和成品自喷雾干燥塔出口送至旋风分离器,经分离得到硫酸庆大霉素无菌粉,在100级层流保护下用玻璃瓶收集，尾气经袋滤器过滤后排空；
84.根据《药品生产质量管理规范，gmp》的要求，对原料药生产的精、烘、包工序必须采用洁净技术设计，设立控制区(洁净度100000级)、洁净区(洁净度10000级)，局部采用100级层流净化。并按照gmp要求进行生产管理。在无菌喷雾干燥过程中，所有进入系统的物料、空气、人员、设备等都必须按规定净化、消毒，产品的收集也必须在100级层流保护下进行；
85.所述s6压缩部分包括以下步骤：
86.第一步：采用两级冷却、加热除菌流程，第一次却器冷却后，大部分的水、油都已结成较大的雾粒，且雾粒浓度较大，用旋风分离器分离；
87.第二步：第二冷却器使空气进一步冷却后析出一部分较小雾粒，采用丝网分离器分离，发挥丝网能够分离较小直径的雾粒和分离效果高的作用，第一级冷却到30至35℃，第二级冷却到20至25℃；
88.第三步：除水后，空气的相对湿度仍是100％，用丝网分离器后的加热器加热，将空气中的相对湿度降低至50％～60％；
89.好氧微生物在培养过程中，需要大量的氧气，以满足微生物的生长、繁殖以及代谢的需要。这些氧气通常是由空气提供的。空气主要是由氮气、氧气、二氧化碳、惰性气体、水蒸气以及悬浮在空气中的尘埃等组成的混合物；
90.这种两级冷却、加热除菌流程，是一个比较完善的空气除菌流程，可适应各种气候条件,能充分地分离油水，使空气达到低的相对湿度下进入过滤器，以提高过滤效率。该流程的特点是两次冷却、两次分离、适当加热.两次冷却、两次分离油水的好处是能提高传热系数,节约冷却用水，油水分离得比较完全。经第一次却器冷却后，大部分的水、油都已结成较大的雾粒，且雾粒浓度较大，故适宜用旋风分离器分离。第二冷却器使空气进一步冷却后析出一部分较小雾粒，宜采用丝网分离器分离，这样发挥丝网能够分离较小直径的雾粒和分离效果高的作用.第上级冷却到30～35℃，第二级冷却到20～25℃。除水后，空气的相对湿度仍是100％，须用丝网分离器后的加热器加热，将空气中的相对湿度降低至50％～60％,以保证过滤器的正常运行，两级冷却、加热除菌流程尤其适用于潮湿的地区，其他地区可根据当地的情况，对流程中的设备作适当的增减。
91.工作原理：由于结构上的细微差异，庆大霉素各组分与hzd-2弱酸性阳离子交换树脂的吸附能力不同，先后用不同浓度的氨水洗涤除去西梭米星、小诺霉素等杂质，收率达65％左右，从而提高产品质量，得到符合2010版新药典质量要求的产品，在一定程度上能够缓解现有市场对高品质庆大霉素供不应求的压力。
92.上面结合附图对本发明的实施方式作了详细说明，但是本发明并不限于此，在所属技术领域的技术人员所具备的知识范围内，在不脱离本发明宗旨的前提下还可以作出各种变化。