一种培养单鞭金藻的培养液及其培养方法与流程

1.本发明属于水生生物技术领域，具体涉及一种培养单鞭金藻的培养液及其培养方法。


背景技术：

2.单鞭金藻(chromulina)，单细胞，其细胞呈球形、卵形、椭圆形、梨形或纺锤形。具1条鞭毛，可自由游动的单细胞藻类。可以生活在透明度较大，温度较低，有机质含量较少的池塘、沼泽和湖泊中。在水体中多分布于中下层。是一种适合鱼类幼体作为饵料的一种水生生物，其个体微小，原生质体多数裸露，含有白糖素、油滴脂肪等丰富的营养物质，是鱼类易于消化、吸收的食饵。在早春晚秋低温季节也能够生长，此时正值鱼类繁殖幼鱼生长开始摄食时期，其作为鱼类开口饵料作用较大；并且单鞭金藻大量增殖高峰，正是其它藻类数量较少，处在生殖低谷时期，更显示出单鞭金藻具有独特的饵料意义。
3.随着水产养殖业精养、高产的发展需要，人工育苗是至关重要的环节。尤其是鱼类在幼鱼培育时，生物饵料的数量和品质是培育的关键因素。
4.现有方法培育的单鞭金藻生产效率低，培养基使用化学药品，大批量生产不仅成本高，还易造成对环境的污染，应用在鱼类养殖过程中，作为一种生物饵料，不能发挥其天然生物饵料的独特优点，鱼类养殖效率偏低。本发明利用植物、自然产物作为培养基，对环境不易造成污染，原料成本低、适合大批量生产。


技术实现要素：

5.本发明针对上述问题，提供一种培养单鞭金藻的培养液及其培养方法。所培养的单鞭金藻产量高、成本低；作为生物饵料养殖幼鱼，经统计学方法检验存活率、增重率都有所提高，且效果显著。
6.为实现上述目的，本发明具体技术方案如下：
7.本发明首先提供一种培养单鞭金藻的培养液，所述培养液由如下重量份的原料配制而成：稻草浸出液30～40份、砂质土浸出液2.3～4.8份、谷氨酸钠10.5～15.5份、甘氨酸3.5～6.0份、l-丙氨酸3.5～6.0份、酪蛋白胰酶水解物8.3～12.5份、酵母自溶物8.3～12.5份、蔗糖15.5～20.5份、维生素液0.1～0.2份。
8.优选的是，所述稻草浸出液，是将干稻草200～300g,切成2～4cm小段,在800～1000g水中煮沸1～1.5小时后,将稻草取出加水至1000g。
9.优选的是，所述砂质土浸出液，是用水与砂质土3∶1的质量比例，均匀搅拌浸泡后8～12h，取上清液，所述砂质土大于60目。
10.优选的是，所述维生素液，是在100mg水中加入维生素b215～20μg，叶酸70～95μg，维生素b530～35μg配置而成。
11.本发明首先提供利用上述培养液培养单鞭金藻的方法，包括：
12.将培养箱进行消毒处理后，加入培养液，然后加入单鞭金藻，培养水温7～26℃；光
照3000～7000lx；ph值7.0～8.5，用1mol/l的盐酸或钠氢氧化钠调节ph值；
13.单鞭金藻增殖数量达到平台期时，由排出口取出，取出量为总体积的1/4～2/3，再添加新的培养液补充取出的藻液体积。
14.优选的是，所述的培养箱包括箱体，所述的箱体上方设置led光源，箱体顶部设有无油空气压缩机，底部设有纳米微孔曝气管，纳米微孔曝气管呈回形排列，所述的无油空气压缩机通过连接管与纳米微孔曝气管连接；
15.所述的箱体上还设有水温加热器、水温自动控制器和排出孔。
16.优选的是，所述的箱体用透明有机玻璃制成，长300～400cm、宽50～100cm、高50～100cm。
17.优选的是，所述纳米微孔曝气管直径为3～5cm。
18.优选的是，所述排出孔的直径10～20cm。
19.优选的是，所述的水温加热器为2个，分别设置在箱体中垂线上水平位置1/4和3/4处，功率为3～5kw。
20.本发明的有益效果
21.本发明提供一种培养单鞭金藻的培养液及其培养方法，所培养的单鞭金藻具有细胞增殖速度快、培养液中的细胞密度大并具有良好的稳定性；培养液对养殖水体等环境零污染，对鱼苗的影响较小，提高育苗的应用效果，用单鞭金藻作为鱼类饵料培养鱼类，其生长速度快、成活率较高。
22.本发明采用压缩空气经纳米管曝气，有效地降低了培养液中不利于单鞭金藻生长的有害物，如nh3、h2s等的含量，增加了培养液溶氧值，缩短培养时间，对极端水温耐受性较大，低温条件下培养也可以旺盛生长，进一步降低培养成本，适合大批量生产。
附图说明
23.图1为本发明培养箱的立体图。
24.图2为本发明培养箱的侧视图。
25.图3为本发明培养箱的俯视图。
26.图4为本发明实施例1-3对照组培养密度和所需时间关系线形图。
27.图中：1、无油空气压缩机；2、水温加热器；3、水温自动控制器；4、纳米微孔曝气管；5、排出孔；6、led光源；7、箱体。
具体实施方式
28.本发明首先提供一种培养单鞭金藻的培养液，所述培养液由如下重量份的原料配制而成：稻草浸出液30～40份、砂质土浸出液2.3～4.8份、谷氨酸钠10.5～15.5份、甘氨酸3.5～6.0份、l-丙氨酸3.5～6.0份、酪蛋白胰酶水解物8.3～12.5份、酵母自溶物8.3～12.5份、蔗糖15.5～20.5份、维生素液0.1～0.2份。
29.按照本发明，所述稻草浸出液是将干稻草200～300g,切成2～4cm小段,在800～1000g水中煮沸1～1.5小时后,将稻草取出加水至1000g。
30.按照本发明，所述砂质土浸出液，是用水与砂质土3∶1的质量比例，均匀搅拌浸泡后8～12h，取上清液，所述砂质土大于60目。
31.按照本发明，所述的酪蛋白胰酶水解物是将酪蛋白与水以质量比1∶17的比例混合后，按胰蛋白酶生产厂家使用条件要求加入胰蛋白酶，2小时后，调ph到7.0，煮沸灭酶活性10min，冷却后，取上清液。
32.按照本发明，所述的酵母自溶物的来源为商购，优选购于徐州赛傅生物有限科技公司，蛋白含量不小于45％。
33.按照本发明，所述维生素液，是在100mg水中加入维生素b215～20μg，叶酸70～95μg，维生素b530～35μg配置而成。
34.本发明首先提供利用上述培养液培养单鞭金藻的方法，包括：
35.将培养箱用4～5mg/l高锰酸钾消毒处理后，加入培养液，加入单鞭金藻，培养水温7～26℃；光照3000～7000lx；ph值7.0～8.5，用1mol/l的盐酸或钠氢氧化钠调节ph值；
36.单鞭金藻增殖数量达到平台期时，由排出口取出，取出量为总体积的1/4～2/3，再添加新的培养液补充取出的藻液体积。
37.一种单鞭金藻是在培养箱中培养，所述培养箱是长方体封闭结构，如图1、图2和图3所示。所述箱体7是用透明有机玻璃制成，长300～400cm、宽50～100cm、高50～100cm；所述无油润滑空气压缩机1设置在箱体7外部的顶部，功率为0.5kw～3.0kw，通过连接管与纳米微孔曝气管4连接，所述纳米微孔曝气管直径为3～5cm，在培养箱底部呈回形排列，保持水中溶解氧含量不小于6.5mg/l。所述水温加热器2有2个，分别设置在箱体7分别设置在箱体中垂线上水平位置1/4和3/4处，功率为3～5kw。所述水温自动控制器3，设置在箱体水平和垂直位置的中间，可自动控制水温加热器2的开关，当水温低于设定温度时，自动开启加热；水温达到设定温度时，自动停止加热。所述排出孔5，直径10～20cm，是所培育单鞭金藻采收口；所述led光源6，是为单鞭金藻培育过程中提供光照，功率是200～1500w。
38.为了更好地了解本发明的目的、结构及功能，下面结合附图，对本发明一种培养单鞭金藻的培养液及其方法做进一步详细的描述。以下结合附图和具体实施例，对本发明作进一步描述：
39.实施例1
40.长方体封闭式培养箱用透明有机玻璃制成，长300cm、宽50cm、高50cm；无油润滑空气压缩机1设置在箱体7外部，功率为0.5kw，通过连接管与纳米微孔曝气管4连接，所述纳米微孔曝气管直径为3cm，在培养箱底部呈回形排列，保持水中溶解氧含量不小于6.5mg/l。所述水温加热器2有2个，分别设置在箱体中垂线上水平位置1/4和3/4处，功率为3kw。所述水温自动控制器3，设置在箱体水平和垂直位置的中间，可自动控制水温加热器2的开启和关闭，当水温低于设定温度时，自动开启加温；水温达到设定温度时，自动停止加热。所述排出孔5，直径10cm，是所培育单鞭金藻采收口；所述led光源6，是为单鞭金藻培育过程中提供光照，功率是200w。
41.培养箱用4mg/l高锰酸钾消毒处理后，加入培养液，所述培养液由如下重量份的原料配制而成：稻草浸出液150kg、砂质土浸出液19.5kg、谷氨酸钠65kg、甘氨酸20kg、l-丙氨酸25kg、酪蛋白胰酶水解物60kg、酵母自溶物60kg、蔗糖100kg、维生素液0.5kg。
42.所述稻草浸出液，是将干稻草30kg,切成小段,在120kg水中煮沸1小时后,将稻草取出加水至150kg，得到150kg稻草浸出液。
43.所述砂质土浸出液，用水与砂质土3∶1的质量比例，均匀搅拌浸泡后8h，取上清液，
所述砂质土大于60目。
44.所述维生素液，在100mg水中加入维生素b215μg，叶酸70μg，维生素b530μg。
45.培养水温7℃；光照3000lx；ph值7.0～8.5，用1mol/l的盐酸或钠氢氧化钠调节ph值。
46.单鞭金藻增殖数量达到平台期时，由排出口取出，取出量为总体积的1/4。再添加新的培养液补充取出的藻液体积。
47.实施例2
48.长方体封闭式培养箱用透明有机玻璃制成，长350cm、宽80cm、高70cm；所述无油润滑空气压缩机1设置在箱体7外部，功率为1.5kw，通过连接管与纳米微孔曝气管4连接，所述纳米微孔曝气管直径为4cm，在培养箱底部呈回形排列，保持水中溶解氧含量不小于6.5mg/l。所述水温加热器2有2个，分别设置在箱体中垂线上水平位置1/4和3/4处，功率为4kw。所述水温自动控制器3，设置在箱体水平和垂直位置的中间，可自动控制水温加热器2的开启和关闭，当水温低于设定温度时，自动开启加热；水温达到设定温度时，自动停止加热。所述排出孔5，直径15cm，是所培育单鞭金藻采收口；所述led光源6，是为单鞭金藻培育过程中提供光照，功率是1000w。
49.培养箱用4.5mg/l高锰酸钾消毒处理后，加入培养液，所述培养液由如下重量份的原料配制而成：稻草浸出液144kg、砂质土浸出液9.2kg、谷氨酸钠62kg、甘氨酸14kg、l-丙氨酸14kg、酪蛋白胰酶水解物41kg、酵母自溶物33.2kg、蔗糖82kg、维生素液0.6kg。
50.所述稻草浸出液，是将干稻草36kg,切成小段,在129.6kg水中煮沸1.2小时后,将稻草取出加水至144kg。
51.所述砂质土浸出液，用水与砂质土3∶1的质量比例，均匀搅拌浸泡后10h，取上清液，所述砂质土大于60目。
52.所述维生素液，在100mg水中加入维生素b218μg，叶酸80μg，维生素b532μg。
53.培养水温20℃；光照4000lx；ph值7.0～8.5，用1mol/l的盐酸或钠氢氧化钠调节ph值。
54.单鞭金藻增殖数量达到平台期时，由排出口取出，取出量为总体积的1/4～2/3。再添加新的培养液补充取出的藻液体积。
55.实施例3
56.长方体封闭式培养箱用透明有机玻璃制成，长400cm、宽100cm、高100cm；所述无油润滑空气压缩机1设置在箱体7外部，功率为3.0kw，通过连接管与纳米微孔曝气管4连接，所述纳米微孔曝气管直径为5cm，在培养箱底部呈回形排列，保持水中溶解氧含量不小于6.5mg/l。所述水温加热器2有2个，分别设置在箱体中垂线上水平位置1/4和3/4处，功率为5kw。所述水温自动控制器3，设置在箱体水平和垂直位置的中间，可自动控制水温加热器2的开启和关闭，当水温低于设定温度时，自动开启加热；水温达到设定温度时，自动停止加热。所述排出孔5，直径20cm，是所培育单鞭金藻采收口；所述led光源6，是为单鞭金藻培育过程中提供光照，功率是1500w。
57.培养箱用5mg/l高锰酸钾消毒处理后，加入培养液，所述培养液由如下重量份的原料配制而成：稻草浸出液240kg、砂质土浸出液19.8kg、谷氨酸钠63kg、甘氨酸33kg、l-丙氨酸36kg、酪蛋白胰酶水解物60kg、酵母自溶物54kg、蔗糖93kg、维生素液1.2kg。
58.所述稻草浸出液，是将干稻草72kg,切成小段,在240kg水中煮沸1.5小时后,将稻草取出加水至240kg。
59.所述砂质土浸出液，用水与砂质土3∶1的质量比例，均匀搅拌浸泡后12h，取上清液，所述砂质土大于60目。
60.所述维生素液，在100mg水中加入维生素b220μg，叶酸95μg，维生素b535μg。
61.培养水温26℃；光照7000lx；ph值7.0～8.5，用1mol/l的盐酸或钠氢氧化钠调节ph值。
62.单鞭金藻增殖数量达到平台期时，由排出口取出，取出量为总体积的1/4～2/3。再添加新的培养液补充取出的藻液体积。
63.以本发明3个实施例作为实验组，以现有技术作为对照组。(对照组培养液为：1l水中去麸水稻的添加的量为12.5-50g/l、nano3:140mg、kh2po4:10mg、k2hpo4:5mg、维生素b6:1μg和维生素b
12
:1μg。)验证开始单鞭金藻密度相同，为350
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104cell/ml。
64.表1生长最大密度和所需时间比较(104cell/ml)
[0065][0066]
表2培养密度和所需时间关系(104cell/ml)
[0067][0068][0069]
图4为本发明实施例1-3对照组培养密度和所需时间关系线形图，从表1、2和图4可以看出，实施例1、实施例2、实施例3的7天培养过程中，最高细胞密度分别是13073
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104cell/ml、14296
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104cell/ml、14822
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104cell/ml；细胞增殖高峰的时间在3～4天，现有培养方法的对照组是8174
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104cell/ml；细胞增殖高峰的时间在4～5天。实施例1、实施例2、实施例3与对照组培养的细胞最高密度有显著差异。到达细胞增殖高峰时间实施例1、实施例2、实施例3较现有技术对照组所需时间少，提高了培养效率。