N’-(2-(苯并[1,3]二氧戊烷-5-基)酰基)芳酰肼类化合物及其合成和用途

n
’‑
(2-(苯并[1,3]二氧戊烷-5-基)酰基)芳酰肼类化合物及其合成和用途
技术领域
[0001]
本发明属于药物制备技术领域，涉及一种n
′‑
(2-(苯并[1,3]二氧戊烷-5-基)酰基)芳酰肼类化合物及其制备方法和用途。


背景技术：

[0002]
登革热病毒(denv)是由埃及伊蚊和白纹伊蚊叮咬传播的虫媒病毒，它们与黄热病病毒(yfv)、西尼罗病毒(wnv)、日本脑炎病毒(jev)、丙型肝炎病毒(hcv)等同属于黄病毒科病毒。登革热病毒感染的潜伏期为4-7天，疾病范围从无症状感染和中度发热性疾病 (登革热)到更严重的表现，如登革热出血热(dhf)和登革热休克综合征(dss)。后两者称重症登革热，造成多达20％的患者死亡。重症登革热的致病机制目前尚不明确，二次感染登革热病毒会导致机体产生更严重的疾病，并且重症登革热的病死率也较高。在登革热治疗方面，目前尚无特效药物上市，登革热患者仅能通过对症治疗缓解临床症状。利巴韦林是广谱核苷类抗病毒药物，对多种rna和dna病毒的复制有一定抑制作用，有文献报道利巴韦林能够抑制登革病毒的复制，但确切的作用机制尚不明确。2015年末，由赛诺菲巴斯德公司开发的首个登革热疫苗dengvaxia(cyd-tdv)在菲律宾、巴西、墨西哥等国家注册，供流行区的9～45岁居民使用，但该疫苗的安全性和有效性仍有待于观察研究。迄今为止denv药物和疫苗的研制尚无重大突破，安全有效的抗登革药物的研发迫在眉睫。
[0003]
胡椒环广泛存在于天然产物中，并且具有多种活性，多个含有胡椒环的药物已经上市，例如抗癌药、抗癫痫药、抗菌药、抗抑郁药、抑制胃酸分泌药等。
[0004]
目前未见与本发明化合物的相关报道。


技术实现要素：

[0005]
针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种n
′‑
(2-(苯并[1,3]二氧戊烷-5-基)酰基) 芳酰肼类化合物及其制备方法和用途。
[0006]
为达此目的，本发明采用以下技术方案：
[0007]
本发明n
′‑
(2-(苯并[1,3]二氧戊烷-5-基)酰基)芳酰肼类化合物结构式如式ⅰ所示：
[0008][0009]
式ⅰ中，n1＝0或1；n2为0～3之间的任一整数；r为甲氧基、三氟甲基、氟基中的任意一种或至少两种的组合。
[0010]
本发明把胡椒环这一结构单元引入到化合物结构中，并导入酰胺基团，合成了系列链式 n
′‑
(2-(苯并[1,3]二氧戊烷-5-基)酰基)芳酰肼类化合物，体外实验证明该类化合
物具有明显的抗 denv活性。
[0011]
本发明所述n
′‑
(2-(苯并[1,3]二氧戊烷-5-基)酰基)芳酰肼类化合物为表1所示结构之一：
[0012]
表1
[0013]
[0014][0015]
本发明另一目的是提供上述n
′‑
(2-(苯并[1,3]二氧戊烷-5-基)酰基)芳酰肼类化合物的制备方法，步骤如下：
[0016]
(1)在溶剂存在、强酸催化下，胡椒甲酸或胡椒乙酸与c1-c5醇发生酯化反应制得式ⅱ所示的胡椒乙酸酯或胡椒甲酸酯，反应式如下：
[0017][0018]
其中n1为0或1，r1为c1-c5烷基；
[0019]
所述c1-c5醇为甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、戊醇中的任意一种，胡椒乙酸或胡椒甲酸:c1-c5 醇的摩尔比为1:(5-40)，在本发明中，醇既作为反应原料也作为反应溶剂，因此需要较多的醇；强酸作为催化剂，优选98％的浓硫酸；在50-80℃下反应1-8小时；
[0020]
(2)在溶剂存在条件下，胡椒乙酸酯或胡椒甲酸酯与水合肼反应制得式ⅲ所示的胡椒乙酰肼或胡椒甲酰肼，反应式如下：
[0021][0022]
所述胡椒乙酸酯或胡椒甲酸酯:水合肼的摩尔比为1:(1-4)；溶剂为乙二醇甲醚；反应在 110-130℃下进行5-24小时；
[0023]
(3)在溶剂存在条件下，由式ⅳ所示的芳香羧酸与氯化试剂反应制备得到式
ⅴ
所示芳基酰氯，反应式如下：
[0024]
其中n2为0～3之间的任一整数；
[0025]
所述氯化试剂为二氯亚砜、三氯化磷、五氯化磷中的一种或几种，芳香羧酸与氯化试剂的摩尔比为1:(2-6)；反应中所用溶剂为四氢呋喃，优选地在四氢呋喃中加入1-3滴dmf；反应在0-30℃下进行1-4小时；
[0026]
(4)在溶剂、碱性试剂存在下，式ⅲ所示的胡椒乙酰肼或胡椒甲酰肼与式
ⅴ
所示的芳基酰氯反应制得式ⅰ所示n
′‑
(2-(苯并[1,3]二氧戊烷-5-基)酰基)芳酰肼类化合物，反应式如下：
[0027][0028]
所述胡椒乙酰肼或胡椒甲酰肼:芳基酰氯的摩尔比为1:(1-2)，碱性试剂为三乙胺；碱性试剂:胡椒乙酰肼或胡椒甲酰肼的摩尔比为1:(1-3)；反应在0-30℃下进行2-24小时。
[0029]
本发明另一目的是将上述n
′‑
(2-(苯并[1,3]二氧戊烷-5-基)酰基)芳酰肼类化合物应用在制备抗登革病毒药物中，实验证明该类化合物具有明显的抗denv活性，可作为抗登革病毒药物的活性成分候选物。
[0030]
本发明所述的抗登革病毒药物的成分(或有效成分)为n
′‑
(2-(苯并[1,3]二氧戊烷-5-基) 酰基)芳酰肼类化合物，还可以加入一种或多种药物上可接受的辅料，以改善药物吸收效果或便于服用，如制成胶囊或丸剂、粉剂、片剂、粒剂、口服液和注射液等，即制成药剂学上适宜的使用剂型；还可以与其他活性成分组合制得抗登革病毒的药物。
[0031]
相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：
[0032]
本发明制备的n
′‑
(2-(苯并[1,3]二氧戊烷-5-基)酰基)芳酰肼类化合物对denv病毒具有明显的抑制作用，抗denv病毒治疗指数高于现临床药物利巴韦林(ribavirin)，可作为抗denv 药物候选物，并且本发明的制备方法简单、产率高，适用于工业生产。
具体实施方式
[0033]
下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。
[0034]
实施例1，在本实施例中，通过以下方法制备式
ⅰ‑
1化合物：
[0035]
(1)在500ml干燥圆底烧瓶中，依次加入8.3g胡椒甲酸(50mmol)、60ml甲醇、3ml 98％浓硫酸，在70℃油浴中反应，反应约1-3小时，薄层色谱(tlc)跟踪反应进度至完全反应后，0℃下加入饱和碳酸氢钠溶液淬灭反应，减压蒸馏除去甲醇，加入50ml水，用乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，依次用饱和碳酸氢钠溶液和水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤无水硫酸钠，减压蒸馏除去溶剂，得到式ⅱ胡椒甲酸甲酯粗产物，本品无需纯化直接用于下一步反
应；
[0036]
(2)在500ml圆底烧瓶中加入胡椒甲酸甲酯(48mmol)，并用40ml乙二醇甲醚溶解，随后加入5ml水合肼，在油浴115℃中加热回流反应约20小时，薄层色谱(tlc)跟踪反应进度至完全反应后，冷却至室温，加入50ml水，静置析出白色固体，抽滤得到粗产物，用乙醇重结晶得到式ⅲ白色固体胡椒甲酰肼；
[0037]
(3)在50ml干燥圆底烧瓶中，依次加入1.5mmol取代芳香羧酸、5ml无水四氢呋喃(滴加一滴dmf)，在0℃冰浴条件下加入0.5ml氯化亚砜，室温下反应1h，tlc跟踪反应进度至完全反应后，减压蒸馏除去溶剂，得式
ⅴ
所示芳基酰氯粗产物，可直接用于下一步反应；
[0038]
(4)在50ml干燥圆底烧瓶中，依次加入1mmol胡椒甲酰肼、5ml无水四氢呋喃，然后加入1.5ml经无水处理的三乙胺，在0℃冰浴条件下缓慢滴加入含3,4二甲氧基苯丙酰氯 (1.5mmol)的无水四氢呋喃溶液(将步骤(3)芳基酰氯溶解在少量的无水四氢呋喃溶液)，产生沉淀，继续室温下反应12h，tlc跟踪反应进度至完全反应后，减压蒸馏除去溶剂，乙酸乙酯溶解，有机相用依次用水和饱和氯化钠溶液洗涤，减压浓缩得到粗产物，用乙醇重结晶得到白色或淡黄色
ⅰ‑
1固体产物，产率：68％。mp：185.7℃；
[0039][0040]
对得到的产物进行核磁氢谱和质谱表征，结果如下：
[0041]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ(ppm):10.16(s,1h,nh),9.86(s,1h,nh),7.49(d,j＝8.1, 1h,arh),7.40(s,1h,arh),7.02(d,j＝8.1hz,1h,arh),6.88
–
6.83(m,2h,arh),6.76(d,j＝ 2.2hz,1h,arh),6.11(s,2h,ch2),3.75(s,3h,ch3),3.72(t,j＝7.7hz,2h,ch2),2.81(t,j＝ 7.7hz,2h,ch2)；m/z 372.1[m

1]。
[0042]
实施例2
[0043]
在本实施例中，制备式
ⅰ‑
2到式
ⅰ‑
12的化合物，制备方法与实施例1式
ⅰ‑
1化合物的制备方法相同，不同在于：步骤(4)中使用的芳基酰氯分别为步骤(4)中使用的芳基酰氯分别为
[0044]
在本实施例中，制备式
ⅰ‑
13到式
ⅰ‑
26的化合物，制备方法与实施例1式
ⅰ‑
1化合物的制备相同，不同在于，步骤(1)中使用的是胡椒乙酸，步骤(2)中使用的是胡椒乙酸甲酯，步骤(4)中使用的芳基酰氯分别为
[0045]
制备得到的式
ⅰ‑
2到式
ⅰ‑
26化合物的性状、产率以及结构表征结果如下：
[0046]n′‑
(2-(苯并[1,3]二氧戊烷-5-基)甲酰基)-2-甲氧基-苯丙酰肼(式
ⅰ‑
2)：白色固体，产率： 81％，mp:135.9℃；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ(ppm):10.17(s,1h,nh),9.86(s,1h,nh), 7.50(d,j＝8.2hz,1h,arh),7.41(s,1h,arh),7.23-7.19(m,2h,arh),7.03(d,j＝8.2hz,1h, arh),6.97(d,j＝8.1hz,1h,arh),6.88(t,j＝7.4hz,1h,arh),6.13(s,2h,ch2),3.82(s,3h, ch3),2.84(t,j＝7.9hz,2h,ch2),2.49
–
2.42(t,j＝7.9hz,2h,ch2)；m/z 342.1[m

1]。
[0047]n′‑
(2-(苯并[1,3]二氧戊烷-5-基)甲酰基)-4-甲氧基-苯丙酰肼(式
ⅰ‑
3)：白色固体，产率： 61％，mp:176.81℃；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ(ppm):10.17(s,1h,nh),9.87(s,1h,nh), 7.49(d,j＝8.3hz,1h,arh),7.40(s,1h,arh),7.21
–
7.14(m,2h,arh),7.02(d,j＝6.5hz,1h), 6.89
–
6.83(m,2h,arh),6.12(s,2h,ch2),3.72(s,3h,ch3),2.81(t,j＝7.8hz,2h,ch2),2.46 (t,j＝7.8hz,2h,ch2)；m/z 342.1[m

1]。
[0048]n′‑
(2-(苯并[1,3]二氧戊烷-5-基)甲酰基)-4-甲氧基苯乙酰肼(式
ⅰ‑
4)：白色固体，产率： 72％，mp:197.5℃；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ(ppm):10.17(s,1h,nh),10.07(s,1h,nh), 7.46(dd,j＝8.1,1.8hz,1h,arh),7.38(d,j＝1.8hz,1h,arh),7.26
–
7.21(m,2h,arh),6.99 (d,j＝8.1hz,1h,arh),6.89
–
6.84(m,2h,arh),6.09(s,2h,ch2),3.72(s,3h,ch3),3.44(s, 2h,ch2)；m/z 328.1[m

1]。
[0049]n′‑
(2-(苯并[1,3]二氧戊烷-5-基)甲酰基)-3-甲氧基苯乙酰肼(式
ⅰ‑
5)：白色固体，产率：70％，mp:161.2℃；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ(ppm):10.22(s,1h,nh),10.13(s,1h,nh), 7.48(dd,j＝8.1,1.8hz,1h,arh),7.39(d,j＝1.8hz,1h,arh),7.22(d,j＝7.9hz,1h,arh), 7.01(d,j＝8.1hz,1h,arh),6.95(s,1h,arh),6.91(d,j＝7.6hz,1h,arh),6.11(s,2h,ch2), 3.75(s,3h,ch3),3.50(s,2h,ch2)；m/z 328.1[m

1]。
[0050]n′‑
(2-(苯并[1,3]二氧戊烷-5-基)甲酰基)-2-三氟甲基苯丙酰肼(式
ⅰ‑
6)：白色固体，产率： 54％，mp:192.88℃；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ(ppm):10.18(s,1h,nh),9.93(s,1h,nh), 7.70(dd,j＝7.9,1.3hz,1h,arh),7.64(t,j＝7.7hz,1h,arh),7.56(d,j＝7.7hz,1h,arh), 7.50(dd,j＝8.2,1.8hz,1h,arh),7.44(t,j＝7.7hz,1h,arh),7.40(d,j＝1.7hz,1h,arh), 7.02(d,j＝8.1hz,1h,arh),6.12(s,2h,ch2),3.05(t,j＝8.0hz,2h,ch2),2.53(t,j＝8.0hz, 2h,ch2)；m/z 380.1[m

1]。
[0051]n′‑
(2-(苯并[1,3]二氧戊烷-5-基)甲酰基)-2-三氟甲基苯乙酰肼(式
ⅰ‑
7)：白色固体，产率： 65％，mp:239.1℃；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ(ppm):10.27(s,1h,nh),10.19(s,1h,nh), 7.71(d,j＝7.7hz,1h,arh),7.65(d,j＝7.5hz,1h,arh),7.61(d,j＝7.4hz,1h,arh),7.49(m, 2h,arh),7.41(d,j＝1.7hz,1h,arh),7.02(d,j＝8.2hz,1h,arh),6.11(s,2h,ch2),3.77(s, 2h,ch2)；m/z 366.1[m

1]。
[0052]n′‑
(2-(苯并[1,3]二氧戊烷-5-基)甲酰基)-3,5-二甲氧基苯乙酰肼(式
ⅰ‑
8)：白
色固体，产率：42％，mp:190.9℃；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ(ppm):10.21(s,1h,nh),10.10(s,1h, nh),7.49(dd,j＝8.2,1.8hz,1h,arh),7.40(d,j＝1.8hz,1h,arh),7.02(d,j＝8.2hz,1h, arh),6.55(d,j＝2.3hz,2h,arh),6.38(t,j＝2.3hz,1h,arh),6.12(s,2h,ch2),3.74(s,6h, 2ch3),3.46(s,2h,ch2)；m/z 358.1[m

1]。
[0053]n′‑
(2-(苯并[1,3]二氧戊烷-5-基)甲酰基)-3,4-二甲氧基苯乙酰肼(式
ⅰ‑
9)：白色固体，产率：51％，mp:185.3℃；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ(ppm):10.21(s,1h,nh),10.08(s,1h, nh),7.49(dd,j＝8.2,1.7hz,1h,arh),7.39(d,j＝1.7hz,1h,arh),7.04
–
6.98(m,2h,arh), 6.92
–
6.83(m,2h,arh),6.11(s,2h,ch2),3.76(s,3h,ch3),3.73(s,3h,ch3),3.45(s,2h,ch2)； m/z 358.1[m

1]。
[0054]n′‑
(2-(苯并[1,3]二氧戊烷-5-基)甲酰基)-2-氟苯乙酰肼(式
ⅰ‑
10)：白色固体，产率：60％， mp:195.8℃；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ(ppm):10.27(s,1h,nh),10.21(s,1h,nh),7.49 (dd,j＝8.2,1.8hz,1h,arh),7.47
–
7.42(m,1h,arh),7.41(d,j＝1.7hz,1h,arh),7.30(d,j＝ 2.2hz,1h,arh),7.20
–
7.14(m,2h,arh),7.02(d,j＝8.2hz,1h,arh),6.11(s,2h,ch2),3.60 (s,2h,ch2)；m/z 316.1[m

1]。
[0055]n′‑
(2-(苯并[1,3]二氧戊烷-5-基)甲酰基)-3-甲氧基苯丙酰肼(式
ⅰ‑
11)：白色固体，产率：65％，mp:146.1℃；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ(ppm):10.16(s,1h,nh),9.86(s,1h,nh), 7.49(dd,j＝8.2,1.8hz,1h,arh),7.40(d,j＝1.7hz,1h,arh),7.20(t,j＝8.1hz,1h,arh), 7.01(d,j＝8.2hz,1h,arh),6.85
–
6.81(m,2h,arh),6.76(dd,j＝8.2,1.5hz,1h,arh),6.11(s, 2h,ch2),3.74(s,3h,ch3),2.85(t,2h,ch2),2.53
–
2.47(m,2h,ch2)；m/z 342.1[m

1]。
[0056]n′‑
(2-(苯并[1,3]二氧戊烷-5-基)甲酰基)-2-氟苯丙酰肼(式
ⅰ‑
12)：白色固体，产率：54％， mp:187.6℃；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ(ppm):10.19(s,1h,nh),9.92(s,1h,nh),7.49(dd, j＝8.1,1.7hz,1h,arh),7.40(d,j＝1.7hz,1h,arh),7.36(td,j＝7.8,1.6hz,1h,arh),7.30
–ꢀ
7.23(m,1h,arh),7.19
–
7.12(m,2h,arh),7.02(d,j＝8.1hz,1h,arh),6.12(s,2h,ch2),2.90 (t,j＝7.8hz,2h,ch2),2.51(t,j＝7.8hz,2h,ch2)；m/z 330.1[m

1]。
[0057]n′‑
(2-(苯并[1,3]二氧戊烷-5-基)乙酰基)-3,4-二甲氧基苯丙酰肼(式
ⅰ‑
13)：白色固体，产率：92％，mp:217.4℃；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ(ppm):10.03(s,1h,nh),9.85(s,1h,nh), 6.88(d,j＝1.6hz,1h,arh),6.85
–
6.81(m,3h,arh),6.73(ddd,j＝12.8,8.0,1.7hz,2h,arh), 5.98(s,2h,ch2),3.72(s,3h,ch3),3.70(s,3h,ch3),3.38(s,2h,ch2),2.76(t,j＝7.7hz,2h, ch2),2.41(t,j＝7.7hz,2h,ch2)；m/z 386.1[m

1]。
[0058]n′‑
(2-(苯并[1,3]二氧戊烷-5-基)乙酰基)-2-甲氧基苯丙酰肼(式
ⅰ‑
14)：白色固体，产率： 53％，mp:211.4℃；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ(ppm):9.95(s,1h,nh),9.78(s,1h,nh), 7.23
–
7.15(m,2h,arh),6.96(d,j＝8.1hz,1h,arh),6.91
–
6.83(m,3h,arh),6.77(d,j＝8.0, 1h,arh),5.99(s,2h,ch2),3.81(s,3h,ch3),3.40(s,2h,ch2),2.81(t,j＝9.1,2h,ch2),2.40(t, j＝9.1,2h,ch2)；m/z 356.1[m

1]。
[0059]n′‑
(2-(苯并[1,3]二氧戊烷-5-基)乙酰基)-3-甲氧基苯丙酰肼(式
ⅰ‑
15)：白色固体，产率： 37％，mp:179.3℃；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ(ppm):10.01(s,1h,nh),9.85(s,1h,nh), 7.20(t,j＝8.1hz,1h,arh),6.90
–
6.84(m,2h,arh),6.83
–
6.79(m,2h,arh),6.77
(m,2h, arh),6.00(s,2h,ch2),3.75(s,3h,ch3),3.40(s,2h,ch2),2.83(t,j＝7.7hz,2h,ch2),2.46(t, j＝7.7hz,2h,ch2)；m/z 356.1[m

1]。
[0060]n′‑
(2-(苯并[1,3]二氧戊烷-5-基)乙酰基)-4-甲氧基苯丙酰肼(式
ⅰ‑
16)：白色固体，产率： 63％，mp:222.7℃；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ(ppm):10.01(s,1h,nh),9.85(s,1h,nh), 7.16(d,j＝8.2hz,2h,arh),6.91(d,j＝1.6hz,1h,arh),6.89
–
6.84(m,3h,arh),6.78(dd,j ＝8.0,1.6hz,1h,arh),6.00(s,2h,ch2),3.74(s,3h,ch3),3.41(s,2h,ch2),2.80(t,j＝7.7hz, 2h,ch2),2.42(t,j＝7.7hz,2h,ch2)；m/z 356.1[m

1]。
[0061]n′‑
(2-(苯并[1,3]二氧戊烷-5-基)乙酰基)-2-三氟甲基苯丙酰肼(式
ⅰ‑
17)：白色固体，产率： 41％，mp:234.9℃；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ(ppm):10.04(s,1h,nh),9.93(s,1h,nh), 7.70(d,j＝7.9hz,1h,arh),7.63(t,j＝7.5hz,1h,arh),7.54(d,j＝7.7hz,1h,arh),7.44(t, j＝7.6hz,1h,arh),6.90(d,j＝1.6hz,1h,arh),6.86(d,j＝7.9hz,1h,arh),6.77(dd,j＝8.0, 1.7hz,1h,arh),6.00(s,2h,ch2),3.40(s,2h,ch2),3.03(t,j＝8.0hz,2h,ch2),2.48(t,j＝ 8.0hz,2h,ch2)；m/z 394.1[m

1]。
[0062]n′‑
(2-(苯并[1,3]二氧戊烷-5-基)乙酰基)-2-氟苯丙酰肼(式
ⅰ‑
18)：白色固体，产率：46％， mp:247.6℃；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ(ppm):10.00(s,1h,nh),9.87(s,1h,nh),7.33(d, j＝7.7hz,1h,arh),7.29
–
7.23(m,1h,arh),7.18
–
7.11(m,2h,arh),6.90(d,j＝1.7hz,1h, arh),6.85(d,j＝7.9hz,1h,arh),6.77(d,j＝7.9hz,1h,arh),5.99(s,2h,ch2),3.40(s,2h, ch2),2.88(t,j＝7.8hz,2h,ch2),2.47(t,j＝7.8hz,2h,ch2)；m/z 344.1[m

1]。
[0063]n′‑
(2-(苯并[1,3]二氧戊烷-5-基)乙酰基)-2-甲氧基苯乙酰肼(式
ⅰ‑
19)：白色固体，产率： 67％，mp:202.9℃；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ(ppm):10.01(s,1h,nh),9.90(s,1h,nh), 7.24(t,j＝7.3hz,2h,arh),6.97(d,j＝7.7hz,1h,arh),6.92
–
6.87(m,2h,arh),6.85(d,j＝ 8.0hz,1h,arh),6.76(dd,j＝7.9,1.7hz,1h,arh),5.99(s,2h,ch2),3.77(s,3h,ch3),3.45(s, 2h,ch2),3.39(s,2h,ch2)；m/z 342.1[m

1]。
[0064]n′‑
(2-(苯并[1,3]二氧戊烷-5-基)乙酰基)-3-甲氧基苯乙酰肼(式
ⅰ‑
20)：白色固体，产率： 66％，mp:187.8℃；1h nmr(600mhz,dmso-d6)δ(ppm):10.14(s,1h,nh),10.12(s,1h,nh), 7.20(t,j＝7.9hz,1h,arh),6.90(t,j＝2.0hz,1h,arh),6.88
–
6.85(m,2h,arh),6.83(d,j＝ 7.9hz,1h,arh),6.79(dd,j＝8.2,2.6hz,1h,arh),6.74(dd,j＝7.9,1.7hz,1h,arh),5.97(s, 2h,ch2),3.73(s,3h,ch3),3.43(s,2h,ch2),3.38(s,2h,ch2)；m/z 342.1[m

1]。
[0065]n′‑
(2-(苯并[1,3]二氧戊烷-5-基)乙酰基)-4-甲氧基苯乙酰肼(式
ⅰ‑
21)：白色固体，产率： 59％，mp:210.8℃；1h nmr(600mhz,dmso-d6)δ(ppm):10.05(s,2h,2nh),7.20(d,j＝8.2hz, 2h,arh),6.92
–
6.80(m,4h,arh),6.74(dd,j＝8.0,1.6hz,1h,arh),5.97(s,2h,ch2),3.72(s, 3h,ch3),3.38(s,2h,ch2),3.36(s,2h,ch2)；m/z 342.1[m

1]。
[0066]n′‑
(2-(苯并[1,3]二氧戊烷-5-基)乙酰基)-3,4-二甲氧基苯乙酰肼(式
ⅰ‑
22)：白色固体，产率：60％，mp:214.6℃；1h nmr(600mhz,dmso-d6)δ(ppm):10.05(s,2h,2nh),6.93(d,j＝2.0 hz,1h,arh),6.87
–
6.85(m,2h,arh),6.83(d,j＝7.9hz,1h,arh),6.79(dd,j＝8.2,2.0hz, 1h,arh),6.74(dd,j＝8.0,1.7hz,1h,arh),5.97(s,2h,ch2),3.73(s,3h,ch3),3.71(s,3h, ch3),3.37(s,2h,ch2),3.36(s,2h,ch2)；m/z 372.1[m

1]。
[0067]n′‑
(2-(苯并[1,3]二氧戊烷-5-基)乙酰基)-3,5-二甲氧基苯乙酰肼(式
ⅰ‑
23)：白色固体，产率：51％，mp:210.6℃；1h nmr(600mhz,dmso-d6)δ(ppm):10.11(s,2h,2nh),6.88(d,j＝1.7 hz,1h,arh),6.83(d,j＝8.0hz,1h,arh),6.74(dd,j＝8.0,1.7hz,1h,arh),6.49(d,j＝2.3 hz,2h,arh),6.35(t,j＝2.3hz,1h,arh),5.97(s,2h,ch2),3.71(s,6h,2ch3),3.39(s,2h, ch2),3.38(s,2h,ch2)；m/z 372.1[m

1]。
[0068]n′‑
(2-(苯并[1,3]二氧戊烷-5-基)乙酰基)-2-氟苯乙酰肼(式
ⅰ‑
24)：白色固体，产率：48％， mp:230.4℃；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ(ppm):10.13(s,1h,nh),10.10(s,1h,nh),7.42
–ꢀ
7.36(m,1h,arh),7.35
–
7.26(m,1h,arh),7.20
–
7.12(m,2h,arh),6.90
–
6.82(m,2h,arh), 6.75(d,j＝8.0hz,1h,arh),5.98(s,2h,ch2),3.54(s,2h,ch2),3.38(s,2h,ch2)；m/z 330.1[m

1]。
[0069]n′‑
(2-(苯并[1,3]二氧戊烷-5-基)乙酰基)-4-氟苯乙酰肼(式
ⅰ‑
25)：白色固体，产率：51％， mp:228.4℃；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ(ppm):10.18(s,1h,nh),10.13(s,1h,nh),7.37 (dd,j＝8.4,5.6hz,2h,arh),7.18(t,j＝8.8hz,2h,arh),6.93
–
6.87(m,2h,arh),6.79(dd,j ＝7.9,1.6hz,1h,arh),6.02(s,2h,ch2),3.51(s,2h,ch2),3.42(s,2h,ch2)；m/z 330.1[m

1]。
[0070]n′‑
(2-(苯并[1,3]二氧戊烷-5-基)乙酰基)-3-氟苯乙酰肼(式
ⅰ‑
26)：白色固体，产率：53％， mp:224.4℃；1h nmr(600mhz,dmso-d6)δ(ppm):10.17(s,1h,nh),10.11(s,1h,nh),7.36
–ꢀ
7.33(m,1h,arh),7.14
–
7.12(m,2h,arh),7.10
–
7.04(m,1h,arh),6.87(d,j＝1.6hz,1h, arh),6.83(d,j＝7.8hz,1h,arh),6.74(dd,j＝8.0,1.8hz,1h,arh),5.97(s,2h,ch2),3.51(s, 2h,ch2),3.38(s,2h,ch2)；m/z 330.1[m

1]。
[0071]
实施例4
[0072]
在本实施例中，对式
ⅰ‑
1到式
ⅰ‑
26化合物的体外抗denv活性进行评价，采用vero细胞，denv-ii d01090(genbank:ky882458)病毒株进行体外细胞水平抗denv活性评价，方法如下：
[0073]
mtt法检测药物细胞毒性：在96孔细胞培养板内，将vero细胞按3
×
105个/孔接种，37℃、 5％co2培养24h；待细胞长成单层后，弃去培养上清液，加入含梯度稀释待测化合物的dmem 培养基，每个浓度设置3个复孔，并设正常细胞对照、溶剂对照、空白对照，培养3天后，每孔添加20μl 5mg/ml mtt，在37℃恒温培养箱中继续孵育4h，弃去100μl上清液，加入 100μl 12％sds-50％dmf溶液，继续37℃孵育过夜，待结晶完全溶解后，震荡混合均匀， bio-tek酶标仪检测od值(检测波长570nm，参考波长630nm)；根据实验结果绘制剂量反应曲线，使用reed&muench法计算得到50％抑制细胞生长浓度(cc
50
)值。
[0074]
噬斑法测定化合物对病毒的抑制活性：在12孔细胞培养板内，将vero细胞按3
×
105个/ 孔接种,37℃、5％co2培养24h；待细胞长成单层后，弃培养上清，1
×
pbs洗1遍。在含 2％新生牛血清(ncs)的dmem细胞维持液中加入denv-2(moi.＝0.05)，每孔加入400μl，设3个重复孔，并设正常细胞对照组、阴性对照、溶剂对照、阳性对照，37℃、5％co2培养箱培养4h后，加入适量的1
×
pbs洗涤12孔板。待测样品用4％ncs dmem培养基浓度梯度稀释后，每孔各加入1ml待测样品稀释液和1ml 2％低熔点琼脂糖混合培养基；待琼脂糖凝固后，转移至培养箱中倒置细胞板，连续培养5d后记录并观察细胞的病变程度。4％多聚甲醛固定琼脂块10-15min后，将其轻轻吹掉，用0.8％结晶紫染色20min，清水洗涤残余结晶紫溶液后烘
干，酶联荧斑点分析仪(ctl)进行噬斑数统计，根据实验结果绘制剂量反应曲线，计算出待测样品的ec
50
。
[0075]
抗denv药效评价：治疗指数(ti)为药物对细胞的半数抑制浓度cc
50
和对病毒的半数效应浓度ec
50
的比值，代表药物的安全性，此数值越大越安全。
[0076]
以临床治疗药物利巴韦林(ribavirin)作为阳性对照，将上述方法合成的化合物进行了药物细胞毒性和抗denv病毒活性实验，表1中大部分化合物在50μm有效抑制denv的复制，表2中所列15个化合物治疗指数高于阳性对照ribavirin，其中活性最好的3个化合物式
ⅰ‑
4、式
ⅰ‑
7和式
ⅰ‑
8治疗指数比ribavirin高15-25倍，可作为抗denv的先导化合物加以利用。
[0077]
表2
[0078]
编号cc
50
(μm)ec
50
(μm)ti式i-1》2007.39
±
0.04》27.06式i-2》20012.50
±
0.09》16式i-3》20017.67
±
0.12》11.32式i-4》2002.94
±
0.10》68.02式i-5》20033.03
±
0.26》6.06式i-6》20023.24
±
0.11》8.06式i-7》2002.23
±
0.46》89.69式i-8》2001.86
±
0.06》107.53式i-9》20025.0
±
0.18》8式i-13》20017.88
±
0.27》11.19式i-14》20019.86
±
0.37》10.07式i-16》20025.0
±
0.23》8式i-17》20040.0
±
0.08》5式i-21》20017.63
±
0.16》11.34式i-23》20013.37
±
0.25》14.96ribavirin》20045.73
±
0.34》4.37
[0079] 申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的n
′‑
(2-(苯并[1,3]二氧戊烷-5-基)酰基) 芳酰肼类化合物及其制备方法和用途，但本发明并不局限于上述实施例，即不意味着本发明必须依赖上述实施例才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围内。