一种高纯无农残人参皂苷Rb1单体化合物的制备方法与流程

一种高纯无农残人参皂苷rb1单体化合物的制备方法
技术领域
1.本发明属于医药制备技术领域，具体涉及一种高纯无农残人参皂苷rb1单体化合物的制备方法。


背景技术：

2.人参皂苷rb1，又名三七皂苷e1、绞股蓝皂苷iii。主要来源于五加科人参属人参、三七、西洋参、越南人参、竹节人参和葫芦科绞股蓝属绞股蓝等植物的根、茎、叶或花蕾中。
3.人参皂苷rb1由于具有很好的药理活性引起了人们的极大关注，在心血管系统、中枢神经系统、免疫调节和抗白血病等方面具有重要作用而被广泛开发作为药物。此外，人参皂苷由于人参皂苷rb1由天然中草药提取纯化而来，其中农药残留量和纯度则成为其品质的重要衡量标准，各国家和地区根据国情对最大农药残留限量进行了规定，如管理较为严格的美国食品药品监督管理局(food and drug administration，fda)对农残检测项目就高达500多项。
4.专利cn105168281b、cn109157867b公开了从人参皂苷提取物的农药残留脱除工艺，但存在可脱除农残种类少，工艺偏复杂、操作要求高等缺点，且想要到高纯无农残人参皂苷rb1单体化合物，须经过再次纯化，步骤繁杂，易造成有效成分损失。


技术实现要素：

5.有鉴于此，本发明期望提供一种高纯无农残人参皂苷rb1单体化合物的制备方法，农残分子与人参皂苷rb1之间分子量和亲疏水性的差异去除人参皂苷中农药残留，并同时纯化人参皂苷rb1，工艺简单，操作方便，能够一步实现农药残留的脱除和人参皂苷rb1单体化合物的纯化制备，农残脱除率高，产品回收率高。
6.为达到上述目的，本发明的技术方案是这样实现的：
7.一种高纯无农残人参皂苷rb1单体化合物的制备方法，包括以下步骤：
8.1)将三七、人参、西洋参或绞股蓝药材使用乙醇水溶液进行提取，滤过，得到样品溶液；
9.2)将样品溶液离心，取上清液膜过滤，滤液通过制备柱制备；
10.3)使用100％-10％乙醇水溶液作为洗脱剂，依次进行洗脱，所得洗脱液进行浓缩、干燥后，得到高纯无农残人参皂苷rb1单体化合物成品。
11.这里，本发明方法工艺简单，操作方便，无有毒试剂的使用，绿色安全。
12.进一步地，所述步骤1)中三七、人参、西洋参或绞股蓝药材使用65％的乙醇水溶液进行提取。
13.进一步地，所述步骤2)中制备柱包括亲水作用色谱填料，为未衍生化硅胶、氨基、氰基、二醇基、酰胺型、聚琥珀酰亚胺型、糖型或两性离子型填料中一种。
14.进一步地，所述亲水作用色谱填料为细颗粒的高效填料，粒径为5-30μm，装填于不锈钢柱管，采用高压制备液相模式操作。
15.进一步地，所述亲水作用色谱填料为粗填料，粒径大于30μm，使用中低压或开口式的层析柱进行操作。
16.进一步地，所述步骤2)中制备柱采用两性离子型亲水作用色谱填料。
17.这里，所用色谱填料再生方便，降低了生产成本，缩短了生产周期。
18.进一步地，所述步骤2)滤液中固体质量与制备柱中填料质量比例为1-3:10。
19.进一步地，所述步骤3)的洗脱为台阶梯度洗脱或线性梯度洗脱。
20.这里，采用亲水作用色谱填料，乙醇和水作为流动相，调节流动相的洗脱体积和比例，能够一步实现农残的去除和人参皂苷rb1的纯化制备。
21.进一步地，所述步骤3)中使用70％乙醇水溶液进行洗脱。
22.这里，乙醇洗脱后，农残脱除率高，rb1回收率高，所得rb1单体纯度达80％以上。
23.本发明有益效果如下：1)本发明方法通过采用亲水作用色谱填料，乙醇和水作为流动相，调节流动相的洗脱体积和比例，一步实现农残的去除和人参皂苷rb1的纯化制备，得到高纯度无农残的人参皂苷rb1单体化合物，农残脱除率高，rb1回收率高，所得rb1单体纯度达80％以上；2)本发明方法工艺简单，操作方便，无有毒试剂的使用，绿色安全，且所用色谱填料再生方便，降低了生产成本，缩短了生产周期。
附图说明
24.图1为本发明实施例1中三七药材和人参皂苷rb1成品中农残含量对比结果；
25.图2为本发明实施例2中绞股蓝药材和人参皂苷rb1成品中农残含量对比结果。
具体实施方式
26.为了能够更加详尽地了解本发明的特点与技术内容，下面结合附图对本发明的实现进行详细阐述，所附附图仅供参考说明之用，并非用来限定本发明。
27.实施例1三七药材和人参皂苷rb1成品中农残含量对比
28.1)取三七药材1000g，加入65％乙醇8l回流提取3h，滤过，药渣加65％乙醇6l回流提取2h，合并两次滤液；
29.2)滤液通过亲水色谱制备柱；
30.这里，亲水色谱制备柱为x3两性离子硅胶填料色谱柱，粒径40μm，填料量1500g，预先用95％乙醇水溶液平衡好。
31.3)先用6bv的95％乙醇水溶液洗脱杂质，再用3bv的70％乙醇水溶液洗脱rb1，洗脱液减压浓缩回收rb1，喷雾干燥，即得高纯无农残人参皂苷rb1成品。
32.这里，为便于计算，统一以填料重量对应的数值为1bv，1500g填料的1bv定义为1500ml，下同。
33.最后，采用高效液相色谱技术对人参皂苷rb1成品进行检测，紫外检测波长为203nm，色谱柱品牌为waters-acchrom，规格为tnature c18，4.6
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250mm，5μm。检测时，柱温30℃，以乙腈(a)和0.1％磷酸水溶液(b)为流动相进行梯度洗脱，洗脱条件为：0-30min，19％a；30-35min，19％-24％a；35-60min，24％-40％a；60-70min，40％-70％a；流速为1.3ml/min。经测定，本实施例人参皂苷rb1成品中rb1纯度为82.98％，回收率为96.77％。
34.此外，还将rb1成品送sgs第三方检测机构检测农残。
35.本实施例中，三七药材和人参皂苷rb1成品中农残含量对比结果及农残脱除率，如图1所示，所得人参皂苷rb1成品中无农残检出，农残脱除率均在98％以上。
36.实施例2绞股蓝药材和人参皂苷rb1成品中农残含量对比
37.1)取绞股蓝药材药材100g，加入65％乙醇8l回流提取3h，滤过，药渣加65％乙醇1l回流提取2h，合并两次滤液；
38.2)使用x3两性离子硅胶填料色谱柱，粒径40μm，填料量120g，填装于开口式spe柱管中，活化、平衡后待用。将500ml滤液样品倒入spe柱上方空管，控制约20ml/min的速度上样到spe柱上，上样完毕后，用720ml 95％的乙醇水溶液淋洗；
39.3)使用360ml 70％乙醇水溶液进行洗脱。收集洗脱液，减压浓缩除醇，冷冻干燥得人参皂苷rb1成品。
40.检测步骤参考实施例1，经测定，本实施例人参皂苷rb1成品中rb1纯度为80.38％，回收率为97.33％。
41.本实施例中，绞股蓝药材和人参皂苷rb1成品中农残含量对比结果及农残脱除率，如图2所示，所得人参皂苷rb1成品中无农残检出，农残脱除率均在91％以上，部分农药品种脱除率达99.99％。