一种毛蕊花糖苷的制备方法与流程

甲醇洗脱梯度体积比依次为9：1、 4：1、1：1，收集体积比为4：1的洗脱液进行浓缩。
15.优选的，上述毛蕊花糖苷的制备方法，所述步骤(4)中第一次开放型ods 柱层析中梯度洗脱使用的水-甲醇体积比依次为9：1、7：3、5：5、3：7、0：1，收集体积比为5：5的洗脱液浓缩后用于第二次开放型ods柱层析，所使水-甲醇洗脱梯度体积比依次为8：2、6：4、4：6、0：1，收集体积比为4：6的洗脱液进行浓缩。
16.优选的，上述毛蕊花糖苷的制备方法，所述步骤(5)使用的流动相为乙腈
‑ꢀ
水体积比为23：77，所收集的洗脱液流出时间为21-23mi n。
17.本发明的有益效果是：
18.上述毛蕊花糖苷的制备方法，以酒炙女贞子为提取原料药制备获得，女贞子在我国分布广泛，其酒炙品中毛蕊花糖苷含量进一步提升，相较目前较多从国家二级保护植物肉苁蓉中获取毛蕊花糖苷的方式，更加符合环保的理念；所述酒炙女贞子中毛蕊花糖苷的提取分离方法工艺简单，操作方便，得到的单体纯度高，与人工合成的方式相比降低了成本与操作难度。
附图说明
19.图1为毛蕊花糖苷核磁共振氢谱：1h-nmr(500mhz，cd3od)。
20.图2为毛蕊花糖苷碳谱：
13
c-nmr(125mhz，cd3od)。
具体实施方式
21.为了使本领域的技术人员更好的理解本发明的技术方案，下面结合附图及具体实施方式对本发明所述技术方案作进一步的详细说明。
22.实施例1
23.一种酒炙女贞子中毛蕊花糖苷的提取分离方法，其包括以下步骤：
24.(1)称取7kg酒炙女贞子进行粉碎，采用甲醇进行冷浸提取，甲醇加入体积为药材质量的10倍，提取三次，每次72小时，收集冷浸液，将药渣使用甲醇再次提取，甲醇加入体积为药渣质量的10倍，采用加热回流提取法提取两次，每次2小时。滤除药渣，合并提取液浓缩后得到提取物浸膏；
25.(2)将浸膏用水混悬，以混悬液体积与乙酸乙酯体积1：1加入乙酸乙酯萃取三次，减压回收乙酸乙酯后得到乙酸乙酯萃取物；
26.(3)将乙酸乙酯萃取物经硅胶柱层析进行分离，其中硅胶为200～300目，分别使用二氯甲烷-甲醇(100：1、50：1、40：1、30：1、15：1、9：1、4：1、 1：1、0：1，v：v)进行梯度洗脱，收集二氯甲烷-甲醇体积比为9：1的洗脱液经浓缩后再次进行硅胶柱层析，使用二氯甲烷-甲醇(9：1、4：1、1：1，v：v) 进行梯度洗脱，收集体积比为4：1的洗脱液进行浓缩；
27.(4)将浓缩后的洗脱液再经过开放型ods柱层析分离两次，其中填料粒度为50μm，使用甲醇-水(9：1、7：3、5：5、3：7、0：1，v：v)进行梯度洗脱，收集甲醇-水体积比为5：5的洗脱液经浓缩后再次使用开放型ods柱层析进行分离，使用甲醇-水(8：2、6：4、4：6、0：1，v：v)进行梯度洗脱，收集甲醇
‑ꢀ
水体积比为4：6的洗脱液进行浓缩；
28.(5)将步骤(4)中的所得物进行制备液相分离，以乙腈-水(23：77，v： v)作为流动相，流速7ml/min，收集21-23min的流出液，经旋转蒸发仪回收溶剂后得毛蕊花糖苷单体。
29.所得毛蕊花糖苷单体为黄色粉末，经测定，高分辨质谱在m/z 625.632 1处给出[m h]

(分子式c
29h37o15
，分子质量625.6321)峰。确定该化合物分子式为c
29h36o15
，分子量为624.6321。
[0030]
如图1、图2所示，1h-nmr(500mhz,cd3od)谱中，δ
h 6.71(1h,d,8.1, h-2)，δ
h 6.60(1h,d,8.0,h-5)，δ
h 6.50(1h,dd,8.0,2.1,h-6)和δ
h 7.05(1h,d,2.0,h-2”)，δ
h 6.71(1h,d,2.0,h-5”)，δ
h 7.52(1h, d,2.0,h-6”)为两个abx系统芳香族质子信号，δ
h 7.52(1h,d,15.8,h-7”) 和δ
h 6.21(1h,d,15.8,h-8”)为2个反式烯烃质子信号；δ
h 1.02(3h,d, 6.2,h-6”')为一个鼠李糖上的甲基信号，同时δ
h 5.11(1h,m,h-1”')，δ
h 4.31(1h,d,7.9,h-1')为β构型两个糖端基质子信号。
[0031]
13
c-nmr(125mhz,cd3od)显示29个碳信号，δ
c 168.3(c-8')为一个酯羰基碳信号；δ
c 104.2(c-1')，δ
c 103.0(c-1”')为糖上的两个端基碳信号；δ
c 18.5(c-6”')为一个甲基信号，推测该化合物中含有一个鼠李糖。
[0032]
表1所得毛蕊花糖苷1h-nmr(500mhz)和
13
c-nmr(125mhz)数据归属(cd3od)
[0033]
[0034][0035]
上述数据与文献(吴娟,周先礼,周小力,黄帅,王萃娟.藏角蒿花的化学成分研究[j].中草药,2012,43(01):55-59.)中数据基本一致，为毛蕊花糖苷，结构式如下：
[0036][0037]
结论
[0038]
综上，本发明采用从酒炙女贞子中提取分离毛蕊花糖苷的方法，依次采用冷浸提取、加热回流提取、乙酸乙酯萃取、硅胶柱层析、开放ods柱层析、高效液相制备色谱分离制备出纯度高的毛蕊花糖苷单体，该方法工艺简单，制备周期短, 能够在短时获得大量样品。
[0039]
以上所述实施例仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通工程技术人员对本发明的技术方案作出的各种变形和改进，均应落入本发明的权利要求书确定的保护范围内。


技术特征：
1.一种毛蕊花糖苷的制备方法，其特征在于：具体步骤如下：(1)将酒炙女贞子粉碎，先后使用甲醇进行冷浸提取、加热回流提取，滤除药渣后将提取液进行加热浓缩得到浸膏；(2)将浸膏用水混悬后使用乙酸乙酯进行反复萃取，减压回收乙酸乙酯后得到乙酸乙酯萃取物；(3)将乙酸乙酯萃取物经硅胶柱层析分离两次，均使用二氯甲烷-甲醇体系进行梯度洗脱，收集对应洗脱液进行浓缩；(4)将浓缩后的洗脱液再经过开放型ods柱层析分离两次，均使用甲醇-水体系进行梯度洗脱，收集对应洗脱液进行浓缩；(5)将步骤(4)中所得物进行液相分离，以乙腈和水作为流动相收集相应时间的洗脱液浓缩后即得毛蕊花糖苷。2.根据权利要求1所述的毛蕊花糖苷的制备方法，其特征在于：所述步骤(1)中冷浸提取、加热回流提取中所加甲醇体积为药材质量10倍，冷浸3次，每次72小时，加热回流提取2次，每次2小时。3.根据权利要求1所述的毛蕊花糖苷的制备方法，其特征在于：所述步骤(2)中乙酸乙酯萃取3次，乙酸乙酯与浸膏混悬液体积比为1：1。4.根据权利要求1所述的毛蕊花糖苷的制备方法，其特征在于：所述步骤(3)中第一次硅胶柱层析中梯度洗脱使用的二氯甲烷-甲醇体积比依次为100：1、50：1、40：1、30：1、15：1、9：1、4：1、1：1、0：1，收集二氯甲烷与甲醇体积比为9：1的洗脱液浓缩后用于第二次硅胶柱层析，所使二氯甲烷-甲醇洗脱梯度体积比依次为9：1、4：1、1：1，收集体积比为4：1的洗脱液进行浓缩。5.根据权利要求1所述的毛蕊花糖苷的制备方法，其特征在于：所述步骤(4)中第一次开放型ods柱层析中梯度洗脱使用的水-甲醇体积比依次为9：1、7：3、5：5、3：7、0：1，收集体积比为5：5的洗脱液浓缩后用于第二次开放型ods柱层析，所使水-甲醇洗脱梯度体积比依次为8：2、6：4、4：6、0：1，收集体积比为4：6的洗脱液进行浓缩。6.根据权利要求1所述的毛蕊花糖苷的制备方法，其特征在于：所述步骤(5)使用的流动相为乙腈-水体积比为23：77，所收集的洗脱液流出时间为21-23min。

技术总结
本发明提供了一种毛蕊花糖苷的制备方法，所述毛蕊花糖苷以酒炙女贞子为提取原料药分离制备，女贞子在我国分布广泛，其酒炙品中毛蕊花糖苷成分含量进一步提升，相较目前较多从国家二级保护植物肉苁蓉中获取毛蕊花糖苷的方式，更加符合环保的理念；所述酒炙女贞子中毛蕊花糖苷的提取分离方法工艺简单，操作方便，得到的单体纯度高，与人工合成的方式相比降低了成本与操作难度。降低了成本与操作难度。降低了成本与操作难度。


技术研发人员：姜苗苗 雷鹏 吕佳霖 王跃飞 张鹏 柴欣 崔英 杨静
受保护的技术使用者：天津中医药大学
技术研发日：2021.09.24
技术公布日：2022/1/18