一种多孔壳聚糖微球及其固定碱性蛋白酶的方法

技术特征：
1.一种多孔壳聚糖微球，其特征在于由以下步骤制成：（1）将壳聚糖粉末溶于乙酸-乙酸铵溶液中，再加入纳米二氧化硅粉末，制得改性壳聚糖复合凝胶；（2）将氢氧化钠或氢氧化钾与碳酸钠混合溶解，然后与无水乙醇混合，得到复合碱性成型剂；（3）将步骤（1）所得改性壳聚糖复合凝胶，缓慢加入到复合碱性成型剂中，搅拌成型、静置硬化后用纯净水洗至中性，冷冻干燥后制得多孔壳聚糖微球。2.如权利要求1所述的多孔壳聚糖微球的制备方法，其特征在于，步骤（1）所述改性壳聚糖复合凝胶的制备过程为：先向乙酸溶液中加入乙酸铵，使得乙酸铵浓度为0.01-0.1 mol/l，后将壳聚糖粉末溶于乙酸-乙酸铵溶液中制备壳聚糖凝胶，再向其加入与壳聚糖质量比为1:1~1:5的纳米二氧化硅粉末，搅拌得到改性壳聚糖复合凝胶。3.如权利要求1所述的多孔壳聚糖微球的制备方法，其特征在于，步骤（2）中所述复合碱性成型剂由氢氧化钠或氢氧化钾与碳酸钠混合溶解而成，其摩尔比为1.5-3.5，然后与无水乙醇以5:1
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2:1的体积比进行混合。4.一种碱性蛋白酶的固定方法，其特征在于包括以下步骤： (1) 将权利要求1所制备的多孔壳聚糖微球加入到ph为7.0-9.5的磷酸盐缓冲液中浸润，充分润湿溶胀后加入碱性蛋白酶溶液，在1~10℃下振荡混合得到混合液；(2) 向混合液中加入交联剂，使碱性蛋白酶负载于多孔壳聚糖微球上，用磷酸盐缓冲液洗涤后，除去多余的交联剂，得到以多孔壳聚糖微球为载体的固定化酶。5.如权利要求4所述的固定方法，其特征在于，所述多孔壳聚糖微球与碱性蛋白酶的质量比为100:1~20:1，所述交联剂在混合溶液中的体积比浓度为1%
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5%。6.如权利要求4所述的固定方法，其特征在于，所述磷酸盐缓冲液的ph为7.0
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9.5。7.如权利要求4所述的固定方法，其特征在于，所述交联剂为京尼平或戊二醛或edc/nhs。

技术总结
本发明公开了一种多孔壳聚糖微球及其固定碱性蛋白酶的方法，由以下步骤制成：（1）将壳聚糖粉末溶于乙酸-乙酸铵溶液中，再加入纳米二氧化硅粉末，制得改性壳聚糖复合凝胶；（2）将氢氧化钠或氢氧化钾与碳酸钠混合溶解，然后与无水乙醇混合，得到复合碱性成型剂；（3）将步骤（1）所得改性壳聚糖复合凝胶，缓慢加入到复合碱性成型剂中，搅拌成型、静置硬化后用纯净水洗至中性，冷冻干燥后制得多孔壳聚糖微球。本发明所制备的多孔壳聚糖微球，孔隙率与比表面积大、机械强度高，微球内部通道发达且相互贯通，易于酶的吸附、活化与交联，可显著提高碱性蛋白酶的固载率和稳定性，适用于工业推广应用。用。


技术研发人员：芮泽宝 王朋辉 曾晖
受保护的技术使用者：中山大学
技术研发日：2022.06.28
技术公布日：2022/8/26