一种甘薯原生质体的制备方法

技术特征：
1.一种甘薯原生质体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将甘薯材料浸泡在甘露醇溶液中进行暗培养；得到暗培养材料；2)将所述步骤1)得到的暗培养材料与酶解液混合、酶解，得到原生质体；所述酶解液以水为溶剂，包括以下组分：质量百分含量为1.0～3.0％的纤维素酶rs、质量百分含量为1.5％的离析酶r10、质量百分含量为0.5～1.5％的半纤维素酶、质量百分含量为0.1％的牛血清白蛋白、摩尔浓度为80mm的吗啉乙磺酸、摩尔浓度为0.4～0.6m的甘露醇、摩尔浓度为100mm的氯化钾、摩尔浓度为20mm的氯化钙、摩尔浓度为20mm的氯化镁，ph值为5.5。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤2)酶解液中还包括质量百分含量为1％的蜗牛酶。3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤1)甘薯材料包括甘薯的根尖、叶片、叶柄、茎尖分生组织和愈伤组织中一种或多种。4.根据权利要求1或3所述的制备方法，其特征在于，所述甘薯材料的长度和宽度分别为0.5～1mm。5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤1)甘露醇溶液的摩尔浓度为0.6m，所述暗培养的时间为30min。6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤2)暗培养材料的质量与酶解液的体积比为1g:10ml。7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤2)酶解的条件包括：温度为28℃，振荡速度为80rpm，酶解时间为2～4h。8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，当甘薯材料为叶片时，所述酶解时间为3h；当所述甘薯材料为叶柄时，所述酶解时间为2h；当所述甘薯材料为茎尖分生组织时，所述酶解时间为4h；当所述甘薯材料为愈伤组织时，所述酶解时间为2h；当所述甘薯材料为根尖时，所述酶解时间为3.5h。9.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤2)酶解后，得到酶解物后还包括：将所述酶解物过滤，将得到的滤液离心，得到的沉淀进行洗涤，得到原生质体。10.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于，所述离心的条件包括：离心力为250g，离心时间为10min；所述洗涤使用的洗涤缓冲液为摩尔浓度为0.4m的甘露醇溶液。

技术总结
本发明提供了一种甘薯原生质体的制备方法，属于植物细胞生物学技术领域。包括：将甘薯材料浸泡在甘露醇溶液中进行暗培养；得到暗培养材料；将得到的暗培养材料与酶解液混合、酶解，得到原生质体；所述酶解液组分：纤维素酶RS、离析酶R10、半纤维素酶、牛血清白蛋白、吗啉乙磺酸等。采用本发明提供的方法能够获得产量高和活力强的甘薯原生质体。高和活力强的甘薯原生质体。高和活力强的甘薯原生质体。


技术研发人员：黄立飞 梁雪莲 赵楠 谢淑燕 邹宏达 陈景益
受保护的技术使用者：仲恺农业工程学院
技术研发日：2022.07.01
技术公布日：2022/8/22