短链异戊烯基转移酶活性检测方法

技术特征：
1.一种短链异戊烯基转移酶活性检测方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤1，对短链异戊烯基转移酶重组蛋白进行体外表达与纯化；步骤2，建立短链异戊烯基转移酶反应体系；步骤3，加入碱性磷酸酶对短链异戊烯基转移酶的产物进行水解；步骤4，利用有机溶剂将溶于水相的异戊烯基醇类化合物萃取并浓缩；步骤5，对产物进行gc-ms分析，实现对待测物的定性分析。2.根据权利要求1所述的短链异戊烯基转移酶活性检测方法，其特征在于：所述步骤1中，利用生物信息学工具对短链异戊烯基转移酶的氨基酸序列进行信号肽预测，将去除n-terminal信号肽的序列与pmal-c5x载体中的mbp的orf进行融合构建，将目的蛋白进行体外表达与纯化。3.根据权利要求1所述的短链异戊烯基转移酶活性检测方法，其特征在于：所述步骤2中，将短链异戊烯基转移酶与底物在反应缓冲液内共孵育。4.根据权利要求3所述的短链异戊烯基转移酶活性检测方法，其特征在于：所述步骤2中，在短链异戊烯基转移酶反应体系中加入相应的蛋白，混匀体系，反应在33℃水浴进行，孵育时间为3小时。5.根据权利要求3所述的短链异戊烯基转移酶活性检测方法，其特征在于：所述步骤4中，加入正十四烷作为内参，混匀体系，水解产物用甲基叔丁基醚进行萃取，萃取产物进行氮吹浓缩，转移至玻璃衬管中准备进样。6.根据权利要求1所述的短链异戊烯基转移酶活性检测方法，其特征在于：所述步骤5中，利用梯度升温程序，分离不同的异戊烯基醇类化合物，结合质谱检测，对待测物的特征离子碎片峰进行分析，实现对待测物的定性分析。

技术总结
本发明公开了一种短链异戊烯基转移酶活性检测方法，包括以下步骤：步骤1，对短链异戊烯基转移酶重组蛋白进行体外表达与纯化；步骤2，建立短链异戊烯基转移酶反应体系；步骤3，加入碱性磷酸酶对短链异戊烯基转移酶的产物进行水解；步骤4，利用有机溶剂将溶于水相的异戊烯基醇类化合物萃取并浓缩；步骤5，对产物进行GC-MS分析，实现对待测物的定性分析。本发明能够同时检测所有短链异戊烯基转移酶产物，可以在体外高效获取纯化的短链异戊烯基转移酶重组蛋白，实现了对相应产物的定性及定量分析。实现了对相应产物的定性及定量分析。实现了对相应产物的定性及定量分析。


技术研发人员：卢山 宋书言 吕德新 唐倩
受保护的技术使用者：南京大学深圳研究院
技术研发日：2022.06.27
技术公布日：2022/8/22