一种提高狂犬病病毒耐热稳定性和免疫效果的融合基因、重组狂犬病病毒及其应用

技术特征：
1.一种提高狂犬病病毒耐热稳定性和免疫效果的融合基因，其特征在于，包括矿化基因w6和g基因；所述矿化基因w6的核苷酸序列如seq id no：1所示；所述g基因的核苷酸序列如seq id no：2所示。2.根据权利要求1所述融合基因，其特征在于，所述融合基因包括w6g和gw6；所述w6g的核苷酸序列如seq id no：3所示；所述gw6的核苷酸序列如seq id no：4所示。3.一种携带矿化基因重组狂犬病病毒，其特征在于，所述重组狂犬病病毒包含权利要求1或2所述融合基因；所述融合基因插入在骨架狂犬病病毒基因组的n和p基因之间。4.根据权利要求3所述重组狂犬病病毒，其特征在于，所述融合基因通过bsiwⅰ和nheⅰ酶切位点插到骨架狂犬病病毒基因组的n和p之间。5.根据权利要求3所述重组狂犬病病毒，其特征在于，所述重组狂犬病病毒的骨架毒株为狂犬病病毒sad-b19株。6.根据权利要求5所述重组狂犬病病毒，其特征在于，所述重组狂犬病病毒包括rbnsp-rv-gw6和rbnsp-rv-w6g。7.权利要求3～6任意一项所述重组狂犬病病毒的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将权利要求1或2所述融合基因插入骨架狂犬病病毒全长cdna质粒的n基因和p基因之间，得到重组质粒；2)将所述重组质粒经反向遗传操作系统拯救，得到重组狂犬病病毒。8.根据权利要求7所述构建方法，其特征在于，在所述拯救后还进行体外矿化处理；所述体外矿化处理的方法包括用矿化a液处理重组狂犬病病毒后，再加入矿化b液处理；所述矿化a液的处理时间为50～70min，温度为3～5℃；所述矿化a液为含na2hpo40.36g/l、nah2po40.30g/l，ph值为8的水溶液；所述矿化b液的处理时间为50～70min，温度为3～5℃；所述矿化b液为ph值为8的3.33g/l cacl2水溶液。9.权利要求3～6任意一项所述重组狂犬病病毒或权利要求7或8所述构建方法获得的重组狂犬病病毒在制备防控狂犬病疫苗中的应用。10.根据权利要求9所述应用，其特征在于，所述防控狂犬病疫苗的运输温度不超过38℃。

技术总结
本发明提供了一种提高狂犬病病毒耐热稳定性和免疫效果的融合基因、重组狂犬病病毒及其应用，属于病毒技术领域。以狂犬病病毒SAD B19株为骨架，在基因组N与P基因之间插入矿化基因W6和G基因形成的融合基因，构建得到重组全长质粒pBNSP-RV-GW6和pBNSP-RV-W6G，并利用狂犬病的反向遗传操作系统拯救出含矿化基因和双G基因的重组狂犬病病毒。所述重组狂犬病病毒在细胞上稳定增殖，具有耐热稳定特性，免疫小鼠可以诱导产生较高的狂犬病病毒特异性抗体，能抵抗致死剂量狂犬病毒的攻击，同时具有耐热稳定和高效免疫效果，可以直接作为疫苗应用，具有较高的应用前景。具有较高的应用前景。具有较高的应用前景。


技术研发人员：殷相平 殷娟斌 王相伟 毛箬青 任善会 孙跃峰
受保护的技术使用者：中国农业科学院兰州兽医研究所
技术研发日：2022.04.18
技术公布日：2022/7/29