CHO细胞衍生的蛋白分泌因子和包含它的表达载体的制作方法

技术特征：
1.一种蛋白分泌因子，其由seq id no：1、seq id no：2或seq id no：3的氨基酸序列组成。2.根据权利要求1所述的蛋白分泌因子，其中所述蛋白是内源蛋白或外源蛋白。3.一种表达盒，其中编码由seq id no：1、seq id no：2、seq id no：3、seq id no：4或seq id no：5的氨基酸序列组成的蛋白分泌因子的核酸序列和编码靶蛋白的基因被可操作连接。4.根据权利要求3所述的表达盒，其中所述靶蛋白选自抗体、抗体片段(fab或scfv)、融合蛋白、蛋白质支架、人生长激素、血清蛋白、免疫球蛋白、细胞因子、α-、β-或γ-干扰素、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(gm-csf)、血小板衍生生长因子(pdgf)、磷脂酶活化蛋白(plap)、胰岛素、肿瘤坏死因子(tnf)、生长因子、激素、降钙素、降钙素基因相关肽(cgrp)、脑啡肽、生长调节素、促红细胞生成素、下丘脑释放因子、生长分化因子、细胞黏附蛋白、催乳素、绒毛膜促性腺激素、组织纤溶酶原激活物、生长激素释放肽(ghpr)、胸腺体液因子(thf)、天冬酰胺酶、精氨酸酶、精氨酸脱氨酶、腺苷脱氨酶、过氧化物歧化酶、内毒素酶、过氧化氢酶、糜蛋白酶、脂肪酶、尿酸酶、腺苷二磷酸酶、酪氨酸酶、胆红素氧化酶、葡萄糖氧化酶、葡萄糖苷酶、半乳糖苷酶、葡萄糖脑苷脂酶和葡萄糖醛酸酶。5.根据权利要求3所述的表达盒，其中所述编码由seq id no：1、seq id no：2、seq id no：3、seq id no：4或seq id no：5的氨基酸序列组成的蛋白分泌因子的核酸序列由seq id no：11、seq id no：12、seq id no：13、seq id no：14或seq id no：15的核酸序列组成。6.根据权利要求3所述的表达盒，其中所述表达盒还包含编码由seq id no：6、seq id no：7、seq id no：8、seq id no：9和seq id no：10的氨基酸序列组成的蛋白分泌因子中的任一者的核酸序列。7.根据权利要求3所述的表达盒，其中所述表达盒表达其中未添加额外氨基酸、当在细胞中表达时已从其中移除编码所述分泌因子的核酸序列的原样的靶蛋白。8.一种用于分泌靶蛋白的表达载体，所述表达载体包含表达盒，其中编码由seq id no：1、seq id no：2、seq id no：3、seq id no：4或seq id no：5的氨基酸序列组成的蛋白分泌因子的核酸序列和编码靶蛋白的基因被可操作连接。9.根据权利要求8所述的表达载体，其中所述靶蛋白选自抗体、抗体片段(fab或scfv)、融合蛋白、蛋白质支架、人生长激素、血清蛋白、免疫球蛋白、细胞因子、α-、β-或γ-干扰素、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(gm-csf)、血小板衍生生长因子(pdgf)、磷脂酶活化蛋白(plap)、胰岛素、肿瘤坏死因子(tnf)、生长因子、激素、降钙素、降钙素基因相关肽(cgrp)、脑啡肽、生长调节素、促红细胞生成素、下丘脑释放因子、生长分化因子、细胞黏附蛋白、催乳素、绒毛膜促性腺激素、组织纤溶酶原激活物、生长激素释放肽(ghpr)、胸腺体液因子(thf)、天冬酰胺酶、精氨酸酶、精氨酸脱氨酶、腺苷脱氨酶、过氧化物歧化酶、内毒素酶、过氧化氢酶、糜蛋白酶、脂肪酶、尿酸酶、腺苷二磷酸酶、酪氨酸酶、胆红素氧化酶、葡萄糖氧化酶、葡萄糖苷酶、半乳糖苷酶、葡萄糖脑苷脂酶和葡萄糖醛酸酶。10.根据权利要求8所述的表达载体，其中所述编码由seq id no：1、seq id no：2、seq id no：3、seq id no：4或seq id no：5的氨基酸序列组成的蛋白分泌因子的核酸序列由seq id no：11、seq id no：12、seq id no：13、seq id no：14或seq id no：15的核酸序列组成。11.根据权利要求8所述的表达载体，其中所述表达载体还包含编码由seq id no：6、
seq id no：7、seq id no：8、seq id no：9和seq id no：10的氨基酸序列组成的蛋白分泌因子中的任一者的核酸序列。12.根据权利要求8所述的表达载体，其中所述表达载体表达其中未添加额外氨基酸、当在细胞中表达时已从其中移除编码所述分泌因子的核酸序列的原样的靶蛋白。13.一种转化细胞，其中根据权利要求8至12中的任一项所述的表达载体被引入到宿主细胞中。14.根据权利要求13所述的转化细胞，其中所述宿主细胞是中华仓鼠卵巢细胞(cho细胞)。15.一种生产靶蛋白的方法，所述方法包括：i)培养包含用于分泌靶蛋白的表达载体的转化细胞，所述表达载体包括表达盒，其中编码由seq id no：1、seq id no：2、seq id no：3、seq id no：4或seq id no：5的氨基酸序列组成的蛋白分泌因子的核酸序列和编码靶蛋白的基因被可操作连接；和ii)从培养的细胞的培养基或培养上清液回收所述靶蛋白。16.根据权利要求15所述的方法，其还包括纯化回收的靶蛋白。17.根据权利要求15所述的方法，其中所述宿主细胞是中华仓鼠卵巢细胞(cho细胞)。18.根据权利要求15所述的方法，其中所述由seq id no：1、seq id no：2、seq id no：3、seq id no：4或seq id no：5的氨基酸序列组成的蛋白分泌因子在所述靶蛋白的n-端切割位点处被切割。19.根据权利要求15所述的方法，其中所述靶蛋白是其中未添加额外氨基酸、已从其中移除编码所述分泌因子的核酸序列的靶蛋白本身。

技术总结
本发明涉及：一种CHO细胞衍生的蛋白分泌因子，其中编码所述蛋白分泌因子的核酸序列和编码靶蛋白的基因被可操作连接的表达盒，包含所述表达盒的表达载体，其中引入有所述表达载体的转化细胞，以及使用所述转化细胞生产靶蛋白的方法。白的方法。白的方法。


技术研发人员：闵丙恩 金渊哲 朴永参 郑新
受保护的技术使用者：株式会社LG化学
技术研发日：2020.12.01
技术公布日：2022/7/15