一种灭活病毒保存液及其配制方法与流程

技术特征：
1.一种灭活病毒保存液，其特征在于，材料包括：异硫氰酸胍180～220g/l；柠檬酸钠1.5～4g/l；十二烷基肌氨酸钠1～2.5g/l；hac-naac缓冲液50～70ml/l；二茂铁－谷胱甘肽8～31mg/l；酸碱指示剂29～60mg/l；柠檬酸钠的终浓度为9mm～39mm；蛋白酶k的终浓度为40～850μg/m；乙二胺四乙酸的终浓度为4mm～55mm。2.根据权利要求1所述的一种灭活病毒保存液及其配制方法，其特征在于，所述hac-naac缓冲液的ph为3～5。3.根据权利要求1所述的一种灭活病毒保存液及其配制方法，其特征在于，二茂铁－谷胱甘肽的制备方法为：s1、将二茂铁甲酸溶于水和丙酮的体积比为3:8的混合溶剂中，冷却至4℃后依次滴加三乙胺的丙酮溶液和氯甲酸乙酯的丙酮溶液，搅拌30min后再滴加叠氮化钠水溶液，搅拌反应90min后萃取有机相并干燥后得到叠氮羰基二茂铁；其中二茂铁甲酸、三乙胺、氯甲酸乙酯和叠氮化钠的添加量之比为0.8g:0.3ml:0.3ml:0.3g；s2、将叠氮羰基二茂铁加入叔丁醇中，叠氮羰基二茂铁与叔丁醇的质量体积比为18mg:1ml；70℃回流反应2h，将反应液蒸干后得到叔丁基氧－氨基二茂铁；s3、将叔丁基氧－氨基二茂铁溶于乙酸乙酯中，3℃下通干燥的hcl气体60min，然后在室温下反应60min，将反应液蒸干后得到氨基修饰的二茂铁；s4、将二碳酸二叔丁酯的二氧己环溶液与饱和碳酸氢钠溶液混合，然后加入还原型谷胱甘肽，二碳酸二叔丁酯、碳酸氢钠与还原型谷胱甘肽的质量比为1:1:1，搅拌反应12h后分离油相并干燥得到氨基保护的还原型谷胱甘肽；s5、将氨基保护的还原型谷胱甘肽加入二氯甲烷中溶解，降温至4℃下加入三乙胺，再加入hbtu，保温反应90min后加入氨基修饰的二茂铁，氨基保护的还原型谷胱甘肽、三乙胺、hbtu和氨基修饰的二茂铁的添加量之比为300mg:0.6ml:250mg:200mg；继续保温反应2h，再升温至30℃反应14h，反应结束后依次用饱和碳酸氢钠溶液、盐酸和水洗涤，分离油相并干燥后得到叔丁基氧－二茂铁－谷胱甘肽；s6、将叔丁基氧－二茂铁－谷胱甘肽溶于乙酸乙酯中，2℃下通干燥的hcl气体60min，然后在室温下反应60min，将反应液蒸干后得到所述二茂铁－谷胱甘肽。4.一种如权利要求1所述的灭活病毒保存液配制方法，其特征在于，包括以下步骤：s1、将的柠檬酸钠溶液加入上述异硫氰酸胍和二茂铁－谷胱甘肽的混合溶液中混匀，再加入十二烷基肌氨酸钠溶液混匀，搅匀时间为30～120min；s2、向s1中搅拌均匀的溶液添加一定量的浓硫酸，将溶液的ph调至4.5～5.8；s3、将所述s2中混合后的溶液用灭菌水定容；s4、用滤膜过滤除菌，分装保存得到所述灭活型病毒样本保存液；s5、将s4中得到的灭活型病毒样本保存液放入灭菌箱内进行最后的灭菌，灭菌温度110
～130℃，灭菌时间30～50min。5.根据权利要求4所述的一种灭活病毒保存液及其配制方法，其特征在于，所述s4中滤膜的孔径为0.15μm～0.35μm，所述灭菌水为无酶无菌水。6.根据权利要求4所述的一种灭活病毒保存液及其配制方法，其特征在于，病毒样本核酸保存液室温保存病毒样本核酸稳定的时限为5～8天。

技术总结
本发明公开了一种灭活病毒保存液及其配制方法，属于3333技术领域，包括：异硫氰酸胍180～220g/L；柠檬酸钠1.5～4g/L；十二烷基肌氨酸钠1～2.5g/L；HAc-NaAc缓冲液50～70mL/L；二茂铁－谷胱甘肽8～31mg/L；酸碱指示剂29～60mg/L；柠檬酸钠的终浓度为9mM～39mM；蛋白酶K的终浓度为40～850μg/m；乙二胺四乙酸的终浓度为4mM～55mM，将上述各配置溶液按比例混合并搅拌均匀后用浓硫酸调pH至4.5～5.8，再用灭菌水定容，最后用滤膜过滤除菌，分装保存得到所述灭活型病毒样本保存液。由此，能够在常温下进行储存，并且能够在大规模的采集中节省大量的时间，并且运输和检测也能够防止工作人员受到感染，而且保存的时间较长。而且保存的时间较长。而且保存的时间较长。


技术研发人员：梅姜平 张永飞
受保护的技术使用者：无锡海伦生物科技有限公司
技术研发日：2022.03.21
技术公布日：2022/7/9