放射性标记的化合物

1.本发明涉及放射性标记的有机化合物。更特别地，本发明涉及放射性标记的单酰基甘油脂肪酶(magl)抑制剂，所述抑制剂可用于医学成像诸如正电子发射断层扫描(pet)、单光子发射计算机断层扫描(spect)和/或放射自显影。


背景技术：

2.已发现本文所述的放射性标记的化合物可用于单酰基甘油脂肪酶(magl)的分子成像。分子成像基于分子探针(例如放射性示踪剂)与生物靶标(例如受体、酶、离子通道、错误折叠蛋白质或能够结合或保留分子探针的任何其他细胞或细胞外成分)的选择性和特异性相互作用，其通过pet、核磁共振、近红外或其他方式可视化。pet作为一种核医学成像模式，非常适合生成三维图像，这些三维图像可提供有关给定器官中生物靶标的分布或此类器官或细胞的代谢活动或药物进入此类器官、与生物靶标结合和/或改变生物进程的能力的重要信息。由于pet是一种非侵入性成像技术，因此可用于研究疾病的病理生理机制以及药物对人类和动物体内的给定分子靶标或细胞进程的作用。借助针对给定分子靶标的特定pet放射性示踪剂，可通过显示并且量化疾病所引起的病理生理变化来促进诊断和对疾病进展的监测。此外，pet放射性示踪剂可通过支持患者分层和对药物的作用机制的理解来促进药物开发。
3.人脑是一个复杂的器官，由数以亿万计的互相联系的神经细胞组成。了解与疾病相关的异常是未来开发有效诊断和新型治疗方法的关键。对人体生化异常的研究正迅速成为药物发现和开发过程中必不可少的重要组成部分。近年来，人体医学成像已越来越多地用于评估病理、疾病过程和药物作用机制。这些成像方式包括pet、mri、ct、超声成像、eeg、spect等(british medical bulletin，2003，65，169-177)。因此，非侵入性成像方式(例如pet)是对于未来药物开发极为有用的工具。非侵入性核成像技术可用于获取有关各种活体受试者的生理与生化的基本信息和诊断信息。这些技术依赖于使用能够检测由施加于此类活体受试者的放射性示踪剂所发射的辐射的复杂的成像仪器。所获得的信息可被重建以提供平面和断层图像，揭示放射性示踪剂的分布随时间的变化。使用放射性示踪剂可生成包含受试者的结构、机能以及最重要的生理与生化信息的图像。其中很多信息无法通过其他方式获得。这些研究中使用的放射性示踪剂被设计为具有确定的体内行为，从而能够确定有关受试者的生理或生化的特定信息。目前，放射性示踪剂可用于获取有关心脏功能、心肌血流量、肺灌注、肝功能、脑血流量、脑局部葡萄糖和氧代谢、几种脑受体和酶的功能的有用信息以及阿尔茨海默病的β淀粉样蛋白斑块和τ沉积物的可视化(pet molecular imaging and its biological applications，michael e.phelps，springer主编，new york，2004；ametamy s.等人，chem.rev.，2008，108，1501-1516；nordberg a.等人，nat.rev.neurol.，2010，6，78-87)。
4.此外，pet成像在药物开发的早期阶段提供了对人体正常及异常神经化学的非侵入性定量测定，从而提高了治疗方法发现的效率和有效性。使用非侵入性技术了解人类疾
病机制与疾病诊断和管理以及新型治疗方法的未来发展密切相关。标记的化合物的示踪剂剂量能够对新药进行早期评估，例加通过生物分布研究或受体占有率研究来优化药物给药方案并且表征药物作用的下游反应。
5.pet中常用的放射性核素包括
11
c、
13
n、
15
o或
18
f。原则上，可通过将母体化合物原子中的一个替换为pet核素来标记所有药物，但是发现只有几种核素可用作人体体内的显像剂。
11
c、
13
n、
15
o和
18
f的放射性半衰期分别为20min、10min、2min和110min。这些短半衰期赋予它们用作示踪剂以使用pet探索体内生物过程的许多优势。使同一天内对同一受试者进行重复研究成为可能。
6.氚标记的化合物特别有价值，并且广泛用于涉及高分辨率放射自显影的研究。氚的物理(核)特性(最大β辐射能量低(18kev)且最大比活性高(29ci/mg氢原子))使氚成为确定化合物、药物和激素在例如生物标本中的精确定位的理想同位素。
7.本文所述的放射性标记的化合物为magl抑制剂。抑制magl的作用和/或活化是治疗或预防神经炎症、神经退行性疾病、疼痛、癌症和精神疾患的有前景的新型治疗策略。此外，抑制magl的作用和/或活化是提供神经保护和髓鞘再生的有前景的全新治疗策略。
8.几种用于magl选择性成像的pet示踪剂已见诸报道，但其中大多数示踪剂基于共价抑制剂结构。放射性示踪剂的共价和不可逆的结合与利用动力学模型量化信号的困难相关联，因此被视为放射性示踪剂的一种不需要的属性。此类示踪剂的实例包括[
11
c]sar12303(t.yamasaki等人，neuroimage 176(2018)313-320)、[
11
c]ma-pb-1(a.muneer等人，european journal of medicinal chemistry 136(2017)104-113)、1，1，1，3，3，3-六氟丙烷-2-基-3-(1-苄基-1h-吡唑-3-基)氮杂环丁烷-1-[
11
c]甲酸酯(w.mori等人，bioorganic&medicinal chemistry 27(2019)3568-3573)或abide的专利申请(wo2017/143283 a1)中所述的化合物。
[0009]
[
18
f]t-401代表一种靶向magl的非共价、可逆pet示踪剂的例外情况(y.hattori等人，j.med.chem.62(2019)，2362-2375)。
[0010]
总之，仍然需要替代的、非共价、可逆的pet示踪剂以验证治疗性magl抑制剂的靶标接合以及研究正常和疾病条件下的magl水平。


技术实现要素：

[0011]
在第一方面，本发明提供了一种包含一种或多种放射性同位素的放射性标记的化合物，其选自由以下项组成的组：
[0012]
(4ar，8as)-6-[3-[2-[2-氟-6-(三氟甲基)苯基]乙基]氮杂环丁烷-1-羰基]-4，4a，5，7，8，8a-六氢吡啶并[4，3-b][1，4]噁嗪-3-酮；
[0013]
(4ar，8as)-6-[6-[(2-氟-6-甲氧基-苯基)甲基]-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羰基]-4，4a，5，7，8，8a-六氢吡啶并[4，3-b][1，4]噁嗪-3-酮；
[0014]
(4ar，8as)-6-[3-[2-(2-氟-4-甲基-苯基)乙基]氮杂环丁烷-1-羰基]-4，4a，5，7，8，8a-六氢吡啶并[4，3-b][1，4]噁嗪-3-酮；
[0015]
(4ar，8as)-6-[3-[2-[4-甲氧基-2-(三氟甲基)苯基]乙基]氮杂环丁烷-1-羰基]-4，4a，5，7，8，8a-六氢吡啶并[4，3-b][1，4]噁嗪-3-酮；
[0016]
(4ar，8as)-6-[3-(4-环丁基苯基)氮杂环丁烷-1-羰基]-4，4a，5，7，8，8a-六氢吡
啶并[4，3-b][1，4]噁嗪-3-酮；
[0017]
(4ar，8as)-6-[6-[(2，6-二氟苯基)甲基]-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羰基]-4，4a，5，7，8，8a-六氢吡啶并[4，3-b][1，4]噁嗪-3-酮；
[0018]
(4ar，8as)-6-[6-[(2-甲氧基苯基)甲基]-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羰基]-4，4a，5，7，8，8a-六氢吡啶并[4，3-b][1，4]噁嗪-3-酮；
[0019]
(4ar，8as)-6-[3-[4-(环戊基氧基)苯基]氮杂环丁烷-1-羰基]-4，4a，5，7，8，8a-六氢吡啶并[4，3-b][1，4]噁嗪-3-酮；
[0020]
(4ar，8as)-6-[3-(4-异丁氧基苯基)氮杂环丁烷-1-羰基]-4，4a，5，7，8，8a-六氢吡啶并[4，3-b][1，4]噁嗪-3-酮；
[0021]
(4ar，8as)-6-[3-[(z)-2-氟-2-(3-氟-4-甲基-苯基)乙烯基]氮杂环丁烷-1-羰基]-4，4a，5，7，8，8a-六氢吡啶并[4，3-b][1，4]噁嗪-3-酮；和
[0022]
(4ar，8as)-6-[3-[(e)-2-氟-2-(3-氟-4-甲基-苯基)乙烯基]氮杂环丁烷-1-羰基]-4，4a，5，7，8，8a-六氢吡啶并[4，3-b][1，4]噁嗪-3-酮；
[0023]
或其药用盐。
[0024]
在另一方面，本发明提供了一种本文所述的放射性标记的化合物，其用于单酰基甘油脂肪酶(magl)占有率研究中。
[0025]
在另一方面，本发明提供了一种本文所述的放射性标记的化合物，其用于哺乳动物脑中单酰基甘油脂肪酶(magl)的诊断成像中。
[0026]
在另一方面，本发明提供了一种药物组合物，该药物组合物包含本文所述的放射性标记的化合物以及药用载体。
附图说明
[0027]
图1显示了矢状小鼠脑切片中[3h]1、[3h]2、[3h]3和[3h]4与magl的体外结合，证明了对magl的高选择性以及低非特异性结合。顶部行：wt动物。底部行：magl ko动物。
[0028]
图2显示了来自wistar大鼠的矢状脑切片中[
11
c]1(a)和[
11
c]5(b)与magl的体外结合。通过与高浓度的冷magl抑制剂共孵育来评估选择性和非特异性结合。
[0029]
图3显示了cd(sd)大鼠中通过离体放射自显影所评估的[3h]2的体内结合。
[0030]
图4显示了[
11
c]1在magl ko小鼠和对应的wt中的全脑时间活性曲线。
具体实施方式
[0031]
定义
[0032]
结合本发明的特定方面、实施方案或实施例描述的特征、整数、特性、化合物、化学部分或基团应理解为适用于本文所述的任何其他方面、实施方案或实施例，除非与其不相容。本说明书(包括任何所附权利要求、摘要和附图)中所公开的所有特征和/或由此公开的任何方法或过程的所有步骤可以任何组合进行组合，除了这些特征和/或步骤中的至少一些互相排斥的组合之外。本发明不限于任何前述实施方案的细节。本发明扩展到本说明书(包括任何所附权利要求、摘要和附图)中所公开的特征的任何新颖特征或任何新颖组合，或者扩展到由此公开的任何方法或过程的步骤的任何新颖步骤或任何新颖组合。
[0033]
术语“药用盐”是指保留游离碱或游离酸的生物效果和性质的那些盐，这些盐在生
物学或其他方面不是不合需要的。这些盐用无机酸诸如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等(特别是盐酸)和有机酸诸如乙酸、丙酸、乙醇酸、丙酮酸、草酸、马来酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲基磺酸、乙基磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸、n-乙酰基半胱氨酸等形成。此外，这些盐可通过将无机碱或有机碱加入游离酸中来制备。衍生自无机碱的盐包括但不限于钠、钾、锂、铵、钙、镁盐等。衍生自有机碱的盐包括但不限于以下各项的盐：伯胺、仲胺和叔胺、取代胺(包括天然存在的取代胺)、环胺和碱性离子交换树脂(诸如异丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺、乙醇胺、赖氨酸、精氨酸、n-乙基哌啶、哌啶、聚亚胺树脂等)。
[0034]
缩写“magl”是指单酰基甘油脂肪酶。术语“magl”和“单酰基甘油脂肪酶”在本文中可互换使用。
[0035]
术语“一个或多个”是指从一个取代基到化学上可能的最高取代数量，即，将一个原子替换为其相应的放射性同位素，直至所有原子均被替换。
[0036]
术语“哺乳动物”包括人类、非人灵长类动物(诸如黑猩猩和其他猿类和猴类物种)、农场动物(诸如牛、马、绵羊、山羊和猪)、家畜(诸如兔、犬和猫)、实验室动物(包括啮齿动物，诸如大鼠、小鼠和豚鼠)。在某些实施例中，哺乳动物是人。术语“哺乳动物”并不表示特定的年龄或性别。
[0037]
术语“药用赋形剂”和“治疗惰性赋形剂”可互换使用，并且表示药物组合物中不具治疗活性并且对接受施用的受试者无毒的任何药用成分，诸如配制药物产品时使用的崩解剂、粘结剂、填料、溶剂、缓冲剂、张度剂、稳定剂、抗氧化剂、表面活性剂、载体、稀释剂或润滑剂。
[0038]
成像同位素和成像
[0039]
核医学中的诊断技术使用从体内发射γ射线的放射性示踪剂。这些示踪剂通常是与化合物连接的短寿命同位素，其允许对特定的生理过程进行详细检查。它们可通过注射、吸入或口服给予。第一种是由伽马相机检测单个光子，该相机可从许多不同的角度观察器官。相机根据发射辐射的点建立图像；该图像由计算机增强，并且由医生在监视器上查看异常情况的迹象。
[0040]
正电子发射断层扫描(pet)是一种使用回旋加速器所产生的同位素的精确且复杂的技术。正电子发射放射性核素通常通过注射来引入，并且在靶组织中累积。当该放射性核素衰变时，将发射正电子，该正电子迅速与附近的电子结合，导致同时向相反方向发射两条可识别的伽马射线。这些由pet相机检测，并且非常精确地指示其来源。pet最重要的临床作用是在肿瘤学中，以氟-18氟脱氧葡萄糖([
18
f]fdg)作为示踪剂，因为它已被证明是检测和评估大多数癌症的最准确的非侵入性方法。它也很好地用于心脏和脑成像。
[0041]
许多医学诊断程序(包括pet和spect)利用放射性标记的化合物并且是本领域中众所周知的。pet和spect是非常灵敏的技术，并且需要少量放射性标记的化合物(称为示踪剂)。标记的化合物与对应的非放射性标记的化合物以类似的方式在体内转运、累积和转化。示踪剂或探针可使用对pet成像有用的放射性核素诸如
11
c、
13
n、
15
o、
18
f、
64
cu和
124
i进行放射性标记，或使用对spect成像有用的放射性核素诸如
99
tc、
77
br、
61
cu、
153
gd、
123
i、
125
i、
131
i和
32
p进行放射性标记。这些是本文所用的术语“放射性同位素”(也称为成像同位素)的非限制性实例。
[0042]
pet基于携带正电子发射同位素的分子显像示踪剂在患者组织中的分布来创建图像。pet方法有可能在所研究的组织或器官中检测到细胞水平上的错误。pet已被用于临床肿瘤学，诸如用于肿瘤和转移灶的成像，并且已被用于某些脑部疾病的诊断以及绘制脑部和心脏功能图。类似地，spect可用于在真正的3d表现可能很有用的情况下补充任何伽马成像研究，例如对肿瘤、感染(白细胞)、甲状腺或骨骼进行成像。
[0043]
关于放射性卤素，
125
i同位素可用于实验室检测，但由于
125
i的半衰期相对较长(60天)并且伽马发射能量低(30-65kev)，因此它们通常不用于诊断目的。同位素
123
i的半衰期为13小时并且伽马能量为159kev，因此通常用该同位素或
18
f(半衰期为2小时)标记将用于诊断目的的配体。可以使用的其他成像同位素包括
131
i、
77
br和
76
br。
[0044]
在另一个实施方案中，本发明的化合物含有碳的放射性同位索作为放射性标记。这是指包含一个或多个放射性碳原子的化合物，所述一个或多个放射性碳原子优选为
11
c，其比活性高于该原子的背景水平。众所周知，天然存在的元素以不同同位素的形式存在，其中一些同位素具有放射性。天然存在的元素的放射性是这些同位素的自然分布或丰度的结果，并且通常被称为背景水平。本发明的碳标记的化合物具有高于自然丰度的比活性，因此高于背景水平。本发明的碳标记的组合物可用于示踪、成像、放射治疗等。
[0045]
本领域技术人员熟悉检测标记的化合物以用于成像目的的各种方式。例如，可使用正电子发射断层扫描(pet)或单光子发射计算机断层扫描(spect)来检测放射性标记的化合物。引入化合物中的标记可取决于所需的检测方法。本领域技术人员熟悉正电子发射原子诸如
18
f的pet检测。本发明还涉及本文所述的具体化合物，其中
18
f原子被非放射性标记的氟原子取代。本领域技术人员熟悉光子发射原子诸如
123
i或
99
tc的spect检测。
[0046]
放射性诊断或检测剂应具有足够高的放射性和放射性浓度，以保证可靠的诊断和检测。所需的放射性水平可通过本文提供的用于制备化合物的方法来获得。
[0047]
通常，大脑体内显像剂的先决条件是能够穿过完整的血脑屏障。在成像方法的第一步，将标记的化合物以可检测的量引入组织中或患者体内。该化合物通常是药物组合物的一部分并且通过本领域技术人员所熟知的方法施用于组织或患者。通常，施用是经静脉内。
[0048]
在本发明的其他实施方案中，将标记的化合物以可检测的量引入患者体内，并且在经过足够的时间以使该化合物与magl缔合后，非侵入性地检测该标记的化合物。在本发明的另一个实施方案中，将标记的化合物引入患者体内，有足够的时间以使该化合物与magl缔合，然后从该患者身上移取组织样品，并且在该患者之外检测组织中的标记的化合物。在本发明的另一个实施方案中，从患者身上移取组织样品并且将标记的化合物引入该组织样品中。在经过足够的时间以使化合物与magl结合后，对该化合物进行检测。
[0049]
可检测量是由所选择的检测方法检出所必需的标记的化合物的量。要引入患者体内以便提供检测的标记的化合物的量可由本领域技术人员容易地确定。例如，可不断增加给予患者的标记的化合物的量，直至利用所选择的检测方法检测到该化合物。将标记引入化合物中以提供对该化合物的检测。
[0050]
通过将可检测量的标记的化合物引入患者体内，然后在施用后的不同时间检测该标记的化合物，可容易地确定所需的时间量。
[0051]
可通过总体或局部施用途径向患者施用标记的化合物。例如，可将标记的化合物
施用于患者，使得该化合物递送至全身。另选地，可将标记的化合物施用于特定的目的器官或组织。例如，希望定位并且定量分析大脑中的magl蛋白水平，以便诊断或跟踪患者的(例如)神经炎症的进展。
[0052]
通过将magl抑制剂中的一个或多个原子(例如，氢或碳原子)替换为成像同位素，可将一个或多个成像同位素掺入本文所公开的magl抑制剂中。可使用已知的技术进行成像同位素的掺入。例如，这些技术可基于合适前体的亲核或亲电
18
f氟化，例如以下文献中所综述：medicinal chemistry approaches to personalized medicine(lackey，roth主编)，第12章(wiley-vch，isbn 978-3-527-33394-3)。另外参见美国临时专利申请号2011/0182812，该临时专利申请全文以引用方式并入本文。此外，可采用几种方法以将
11
c(peter j.h.scott，angew.chem.int.ed.2009，48，6001-6004)或
18
f(sean preshlock等人，chem.rev.2016，116，719-766；frederic doll
ꢀé
(2008)fluorine-18chemistry for molecular imaging with positron emission tomography.收录于：fluorlne and health：molecular imaging，biomedical materials and pharmaceuticals(tressaud，a.和haufe，g.主编)，第3-66页，elsevier)掺入化合物中。
[0053]
放射性标记的化合物具有由本文给出的式所描述的结构，不同之处在于一个或多个原子被具有选定原子质量或质量数的原子替代。可掺入本发明的化合物中的放射性标记的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、氟、氯和碘的同位素，分别诸如3h、
11
c、
13
c、
14
c、
15
n、
18
o、
17
o、
31
p、
32
p、
35
s、
18
f、
36
cl和
125
i。用较重的同位素诸如氘(即，2h)取代可以提供由于代谢稳定性更高(例如，体内半衰期增加或所需剂量减少)而带来的某些治疗优势。用2h取代可特别用于防止形成不希望的放射性代谢物或阻止放射性脱氟。
[0054]
本发明的化合物
[0055]
在第一方面(a1)，本发明提供了一种包含一种或多种放射性同位素的放射性标记的化合物，其选自由以下项组成的组：
[0056]
(4ar，8as)-6-[3-[2-[2-氟-6-(三氟甲基)苯基]乙基]氮杂环丁烷-1-羰基]-4，4a，5，7，8，8a-六氢吡啶并[4，3-b][1，4]噁嗪-3-酮；
[0057]
(4ar，8as)-6-[6-[(2-氟-6-甲氧基-苯基)甲基]-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羰基]-4，4a，5，7，8，8a-六氢吡啶并[4，3-b][1，4]噁嗪-3-酮；
[0058]
(4ar，8as)-6-[3-[2-(2-氟-4-甲基-苯基)乙基]氮杂环丁烷-1-羰基]-4，4a，5，7，8，8a-六氢吡啶并[4，3-b][1，4]噁嗪-3-酮；
[0059]
(4ar，8as)-6-[3-[2-[4-甲氧基-2-(三氟甲基)苯基]乙基]氮杂环丁烷-1-羰基]-4，4a，5，7，8，8a-六氢吡啶并[4，3-b][1，4]噁嗪-3-酮；
[0060]
(4ar，8as)-6-[3-(4-环丁基苯基)氮杂环丁烷-1-羰基]-4，4a，5，7，8，8a-六氢吡啶并[4，3-b][1，4]噁嗪-3-酮；
[0061]
(4ar，8as)-6-[6-[(2，6-二氟苯基)甲基]-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羰基]-4，4a，5，7，8，8a-六氢吡啶并[4，3-b][1，4]噁嗪-3-酮；
[0062]
(4ar，8as)-6-[6-[(2-甲氧基苯基)甲基]-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羰基]-4，4a，5，7，8，8a-六氢吡啶并[4，3-b][1，4]噁嗪-3-酮；
[0063]
(4ar，8as)-6-[3-[4-(环戊基氧基)苯基]氮杂环丁烷-1-羰基]-4，4a，5，7，8，8a-六氢吡啶并[4，3-b][1，4]噁嗪-3-酮；
[0064]
(4ar，8as)-6-[3-(4-异丁氧基苯基)氮杂环丁烷-1-羰基]-4，4a，5，7，8，8a-六氢吡啶并[4，3-b][1，4]噁嗪-3-酮；
[0065]
(4ar，8as)-6-[3-[(z)-2-氟-2-(3-氟-4-甲基-苯基)乙烯基]氮杂环丁烷-1-羰基]-4，4a，5，7，8，8a-六氢吡啶并[4，3-b][1，4]噁嗪-3-酮；和
[0066]
(4ar，8as)-6-[3-[(e)-2-氟-2-(3-氟-4-甲基-苯基)乙烯基]氮杂环丁烷-1-羰基]-4，4a，5，7，8，8a-六氢吡啶并[4，3-b][1，4]噁嗪-3-酮；
[0067]
或其药用盐。
[0068]
本发明还提供了本发明的第一方面(a1)的以下列举的实施例(e)：
[0069]
e1.根据a1所述的包含一种或多种放射性同位素的放射性标记的化合物，该化合物选自由以下项组成的组：
[0070]
(4ar，8as)-6-[3-[2-[2-氟-6-(三氟甲基)苯基]乙基]氮杂环丁烷-1-羰基]-4，4a，5，7，8，8a-六氢吡啶并[4，3-b][1，4]噁嗪-3-酮；
[0071]
(4ar，8as)-6-[6-[(2-氟-6-甲氧基-苯基)甲基]-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羰基]-4，4a，5，7，8，8a-六氢吡啶并[4，3-b][1，4]噁嗪-3-酮；
[0072]
(4ar，8as)-6-[3-[2-(2-氟-4-甲基-苯基)乙基]氮杂环丁烷-1-羰基]-4，4a，5，7，8，8a-六氢吡啶并[4，3-b][1，4]噁嗪-3-酮；
[0073]
(4ar，8as)-6-[3-[2-[4-甲氧基-2-(三氟甲基)苯基]乙基]氮杂环丁烷-1-羰基]-4，4a，5，7，8，8a-六氢吡啶并[4，3-b][1，4]噁嗪-3-酮；
[0074]
(4ar，8as)-6-[3-(4-环丁基苯基)氮杂环丁烷-1-羰基]-4，4a，5，7，8，8a-六氢吡啶并[4，3-b][1，4]噁嗪-3-酮；和
[0075]
(4ar，8as)-6-[6-[(2，6-二氟苯基)甲基]-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羰基]-4，4a，5，7，8，8a-六氢吡啶并[4，3-b][1，4]噁嗪-3-酮；
[0076]
或其药用盐。
[0077]
e2.根据a1所述的包含一种或多种放射性同位素的放射性标记的化合物，该化合物选自由以下项组成的组：
[0078]
(4ar，8as)-6-[3-[2-[2-氟-6-(三氟甲基)苯基]乙基]氮杂环丁烷-1-羰基]-4，4a，5，7，8，8a-六氢吡啶并[4，3-b][1，4]噁嗪-3-酮；和
[0079]
(4ar，8as)-6-[6-[(2-氟-6-甲氧基-苯基)甲基]-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羰基]-4，4a，5，7，8，8a-六氢吡啶并[4，3-b][1，4]噁嗪-3-酮；
[0080]
或其药用盐。
[0081]
e3.根据a1和e1至e2中任一者所述的放射性标记的化合物，或其药用盐，其中所述一种或多种放射性同位素为用于正电子发射断层扫描(pet)、单光子发射计算机断层扫描(spect)和/或放射自显影的成像同位素。
[0082]
e4.根据a1和e1至e3中任一者所述的放射性标记的化合物，或其药用盐，其中所述一种或多种放射性同位素独立地选自由以下项组成的组：3h、
11
c、
14
c、
13
n、
15
o和
18
f。
[0083]
e5.根据a1和e1至e3中任一者所述的放射性标记的化合物，或其药用盐，其中所述一种或多种放射性同位素独立地选自由3h、
11
c和
18
f组成的组。
[0084]
e6.根据a1和e1至e3中任一者所述的放射性标记的化合物，或其药用盐，其中所述一种或多种放射性同位素独立地选自由
11
c和
18
f组成的组。
[0085]
e7.根据a1和e1至e6中任一者所述的放射性标记的化合物，或其药用盐，所述放射性标记的化合物或其药用盐包含1-4种放射性同位素，例如1、2、3或4种放射性同位素。
[0086]
e8.根据a1和e1至e6中任一者所述的放射性标记的化合物，或其药用盐，所述放射性标记的化合物或其药用盐包含1-3种放射性同位素，例如1、2或3种放射性同位素。
[0087]
e9.根据a1和e1至e6中任一者所述的放射性标记的化合物，或其药用盐，所述放射性标记的化合物或其药用盐包含1种放射性同位素。
[0088]
e10.根据a1和e1至e9中任一者所述的包含一种或多种放射性同位素的放射性标记的化合物，其选自由以下项组成的组：
[0089][0090]
或其药用盐。
[0091]
e11.根据a1和e1至e9中任一者所述的包含一种或多种放射性同位素的放射性标记的化合物，其选自由以下项组成的组：
[0092][0093]
或其药用盐。
[0094]
使用本发明的化合物
[0095]
本发明的放射性标记的化合物可用作例如非共价、可逆的pet示踪剂以验证治疗性magl抑制剂的靶标接合以及研究正常和疾病条件下的magl水平。
[0096]
因此，在一个方面，本发明提供了本文所公开的放射性标记的化合物用于医学成像诸如正电子发射断层扫描(pet)、单光子发射计算机断层扫描(spect)和/或放射自显影的用途。
[0097]
在另一方面，本发明提供了本文所公开的放射性标记的化合物，其用于医学成像诸如正电子发射断层扫描(pet)、单光子发射计算机断层扫描(spect)和/或放射自显影中。
[0098]
在另一方面，本发明提供了一种医学成像诸如正电子发射断层扫描(pet)、单光子发射计算机断层扫描(spect)和/或放射自显影的方法，该方法包含使单酰基甘油脂肪酶(magl)与本文所公开的放射性标记的化合物接触。
[0099]
在另一方面，本发明提供了本文所公开的放射性标记的化合物用于制备药物的用途，所述药物用于医学成像诸如正电子发射断层扫描(pet)、单光子发射计算机断层扫描(spect)和/或放射自显影。
[0100]
在另一方面，本发明提供了本文所公开的放射性标记的化合物，其用于单酰基甘油脂肪酶(magl)占有率研究中。
[0101]
在另一方面，本发明提供了本文所公开的放射性标记的化合物用于单酰基甘油脂肪酶(magl)占有率研究的用途。
[0102]
在另一方面，本发明提供了一种研究单酰基甘油脂肪酶(magl)占有率的方法，该方法包含使magl与本文所公开的放射性标记的化合物接触。
[0103]
在另一方面，本发明提供了本文所公开的放射性标记的化合物用于制备用于单酰基甘油脂肪酶(magl)占有率研究的药物的用途。
[0104]
在另一方面，本发明提供了本文所公开的放射性标记的化合物，其用于哺乳动物脑中单酰基甘油脂肪酶(magl)的诊断成像中。
[0105]
在另一方面，本发明提供了一种药物组合物，该药物组合物包含本文所公开的放射性标记的化合物以及药用赋形剂。
[0106]
在另一方面，本发明提供了一种对哺乳动物脑中的单酰基甘油脂肪酶(magl)进行诊断成像的方法，该方法包含：
[0107]
(a)向哺乳动物施用可检测量的本文所公开的放射性标记的化合物或本文所公开的药物组合物；以及
[0108]
(b)检测与magl缔合时候的所述放射性标记的化合物。
[0109]
在另一方面，本发明提供了本文所公开的放射性标记的化合物用于对哺乳动物脑中的单酰基甘油脂肪酶(magl)进行诊断成像的用途。
[0110]
在另一方面，本发明提供了本文所公开的放射性标记的化合物用于制备用于哺乳动物脑中单酰基甘油脂肪酶(magl)的诊断成像的药物的用途。
[0111]
实例
[0112]
通过参考以下实施例将更全面地理解本发明。然而，权利要求不应被解释为限于实施例的范围。
[0113]
以下缩写用于本文本：
[0114]
acoh＝乙酸，acn＝乙腈，bemp＝2-叔丁基亚氨基-2-二乙基氨基-1，3-二甲基全氢-1，3，2-二氮杂磷杂苯，boc＝叔丁氧羰基，cas rn＝化学文摘登记号，cbz＝苄氧羰基，cs2co3＝碳酸铯，co＝一氧化碳，cucl＝氯化亚铜(i)，cucn＝氰化亚铜(i)，cui＝碘化亚铜(i)，dmap＝4-二甲基氨基吡啶，dme＝二甲氧基乙烷，dmeda＝n，n
′‑
二甲基乙二胺，dmf＝n，n-二甲基甲酰胺，dipea＝n，n-二异丙基乙胺，dppf＝1，1-双(二苯基膦基)二茂铁，edc.hcl＝n-(3-二甲基氨基丙基)-n
′‑
乙基碳二亚胺盐酸盐，ei＝电子轰击，esi＝电喷雾电离，etoac＝乙酸乙酯，etoh＝乙醇，h＝小时，fa＝甲酸，h2o＝水，h2so4＝硫酸，hal＝卤素，hatu＝1-[双(二甲氨基)亚甲基]-1h-1，2，3-三唑并[4，5-b]吡啶鎓-3-氧化物六氟磷酸盐，hbtu＝o-苯并三唑-n，n，n
′
，n
′‑
四甲基-脲鎓六氟磷酸盐，hcl＝氯化氢，hobt＝1-羟基-1h-苯并三唑；hplc＝高效液相色谱，iprmgcl＝异丙基氯化镁，i2＝碘，ipa＝2-丙醇，(ir[df(cf3)ppy]2(dtbpy))pf6＝[4，4
′‑
双(1，1-二甲基乙基)-2，2
′‑
联吡啶-n1，n1
′
]双[3，5-二氟-2-[5-(三氟甲基)-2-吡啶基-n]苯基-c]六氟磷酸铱(iii)，isp＝离子喷雾正(模式)，isn＝离子喷雾负(模式)，k2co3＝碳酸钾，khco3＝碳酸氢钾，ki＝碘化钾，koh＝氢氧化钾，k3po4＝磷酸三钾，lialh4或lah＝氢化铝锂，lihmds＝双(三甲基甲硅烷基)酰胺锂，lioh＝氢氧化锂，mgso4＝硫酸镁，min＝分钟，ml＝毫升，mplc＝中压液相色谱，ms＝质谱，nah＝氢化钠，nahco3＝碳酸氢钠，nano2＝亚硝酸钠，naoh＝氢氧化钠，na2co3＝碳酸钠，na2so4＝硫酸钠，na2s2o3＝硫代硫酸钠，nbs＝n-溴代丁二酰亚胺，nbuli＝正丁基锂，net3＝三乙胺(tea)，nh4cl＝氯化铵，nicl
2 glyme＝氯化镍(ii)乙二醇二甲醚复合物，nmp＝n-甲基-2-吡咯烷酮，oac＝乙酰氧基，t3p＝丙基膦酸酐，p2o5＝五氧化二磷，pe＝石油醚，pg＝保护基，pd-c＝活性炭载钯，pdcl2(dppf)-ch2cl2＝1，1
′‑
双(二苯基膦基)二茂铁-二氯化钯(ii)二氯甲烷络合物，pd2(dba)3＝三(二亚苄基丙酮)二钯(0)，pd(oac)2＝乙酸钯(ii)，pd(oh)2＝氢氧化钯，pd(pph3)4＝四(三苯基膦)钯(0)，ptsa＝对甲苯磺酸，r＝任何基团，rt＝室温，sfc＝超临界流体色谱，s-phos＝2-二环己基膦基-2
′
，6
′‑
二甲氧基联苯，t3p＝丙基膦酸酐，tbai＝碘化四丁基铵，tbme＝甲基叔丁基醚，tea＝三乙胺，tfa＝三氟乙酸，thf＝四氢呋喃，tmeda＝n，n，n
′
，n
′‑
四甲基乙二胺，zncl2＝氯化锌，xantphos＝4，5-双(二苯基膦基)-9，9-二甲基氧杂蒽。
[0115]
用于3h的一般方法
[0116]
与氚气的反应在购自rc tritec ag(teufen，switzerland)的不锈钢歧管上进行。
间硝基苯磺酸[3h]甲酯购自rc tritec ag(teufen，switzerland)作为在甲苯中的溶液。使用hidex 300sl和ultimate gold混合物(perkinelmer inc.，waltham，ma，usa)完成液体闪烁计数。分析型hplc采用agilent 1200系列hplc系统，使用xbridge苯基、c8或c18柱(4.6mm
×
150mm，3.5μm)，注射活度：1μci。放射化学纯度使用配备内部固体闪烁体的β放射性hplc检测器ramona(raytest，straubenhardt，germany)进行测量。制备型hplc采用gilson plc 2050仪器(middleton，mi，usa)。摩尔活度通过质谱同位素峰强度分布进行测定，使用4000qtrap系统(ab sciex gmbh，zug，ch)，采用ctc pal的流动注射模式，以及agilent 1100microlc泵，无需任何分离。
[0117]
用于
11
c脲合成的一般程序
[0118]
使用液氮从不锈钢回路中的气体靶中捕获由
14
n(p，d)
11
c核反应所产生的[
11
c]co2。加温后，使氩气流中的[
11
c]co2通过p2o5干燥柱，然后鼓泡到包含在100μl无水dmf中的(4ar，8as)-4a，5，6，7，8，8a-六氢-4h-吡啶并[4，3-b][1，4]噁嗪-3-酮(bb1)(0.672mg，4.3μmol)和2-叔丁基亚氨基-2-二乙基氨基-1，3-二甲基全氢-1，3，2-二氮杂磷杂苯(bemp，cas nr 98015-45-3)(5μl，17.3μmol)中。2min后，将在无水acn中的0.2％pocl3(v/v)(100μl，2.15μmol)加入反应混合物中。1分钟后，将对应的在100μl脱气acn中的氮杂环丁烷(4.7μmol)加入反应混合物中，并在室温下进一步搅拌2min。将反应物用2ml h2o稀释，并且利用半制备型hplc(柱：ace5c18-300250
×
10.0mm；流动相：mecn/0.1％h3po4)进行纯化。收集所需产物，用8ml h2o稀释并且将其加载到预活化的c-18 light小柱上。将该小柱用5ml h2o洗涤后，将放射性用0.5ml乙醇洗脱，并且在无菌小瓶中用0.15m pbs(9.5ml)配制。在分析型hplc(柱：agilent zorbax xdb-c18 3.5μm，4.6
×
75mm；流动相：acn/0.1％h3po4)上进行包含和不含参比物质的注射，以确认最终产物的特性和放射化学纯度。摩尔活度基于先前建立的标准曲线进行计算。
[0119]
结构单元bb1的合成
[0120]
(4ar，8as)-4a，5，6，7，8，8a-六氢-4h-吡啶并[4，3-b][1，4]噁嗪-3-酮
[0121][0122]
利用制备型手性hplc(reprosilchiral nr柱)将外消旋-(4ar，8as)-六氢-2h-吡啶并[4，3-b][1，4]噁嗪-3(4h)-酮二盐酸盐的对映体(500mg，2.18mmol，chembridge corporation)分离，其中使用etoh(包含0.05％nh4oac)：正庚烷(30∶70)的等度混合物。
[0123]
第一个洗脱的对映体：( )-顺式-4a，5，6，7，8，8a-六氢-4h-吡啶并[4，3-b][1，4]噁嗪-3-酮(bb1)。黄色固体(0.150g；44.0％)。ms(esi)：m/z＝157.1[m h]

。
[0124]
第二个洗脱的对映体：(-)-顺式-4a，5，6，7，8，8a-六氢-4h-吡啶并[4，3-b][1，4]噁嗪-3-酮。黄色固体(0.152g；44.6％)。ms(esi)：m/z＝157.1[m h]

。
[0125]
结构单元bb2的合成
[0126]
(4ar，8as)-3-氧代六氢-2h-吡啶并[4，3-b][1，4]噁嗪-6(5h)-甲酸4-硝基苯酯
[0127][0128]
向(4ar，8as)-4a，5，6，7，8，8a-六氢-4h-吡啶并[4，3-b][1，4]噁嗪-3-酮(3.0g，19mmol)在dcm(36ml)中的悬浮液中加入dipea(2.48g，3.35ml，19.2mmol)，并且将混合物在冰浴中冷却。在10min内，向悬浮液中分批加入氯甲酸4-硝基苯酯(4.26g，21.1mmol)，并且将混合物在冰浴温度搅拌15min，然后在rt搅拌3.25h。将黄色溶液倒在na2co3溶液(30ml)和dcm(20ml)上，并且使各层分离。将水层用dcm(20ml)萃取两次。将有机层用水(2
×
20ml)洗涤，经mgso4干燥，并且蒸发，以得到粗产物，其为黄色泡沫状物。通过从etoac/dcm混合物中重结晶，将产物纯化。利用sfc(柱ib//20％meoh)进行纯化，从母液中分离出其他产物。合并产量4.78g(77％)，淡黄色固体。ms(esi)：m/z＝322.2[m h]

。
[0129]
实例1
[0130]
(4ar，8as)-6-[3-[2-[2-氟-6-(三氟甲基)苯基]乙基]氮杂环丁烷-1-羰基]-4，4a，5，7，8，8a-六氢吡啶并[4，3-b][1，4]噁嗪-3-酮
[0131][0132]
向(4ar，8as)-3-氧代六氢-2h-吡啶并[4，3-b][1，4]噁嗪-6(5h)-甲酸4-硝基苯酯(bb2)(42mg，131μmol)和dipea(42.3mg，57.1μl，327μmol)在acn(0.5ml)中的溶液中加入3-(2-氟-4-(三氟甲基)苯乙基)氮杂环丁烷4-甲基苯磺酸酯(60.3mg，144μmol)，并且将黄色溶液在rt搅拌过夜。向反应溶液中加入硅胶，并且将混合物蒸发。利用硅胶层析法纯化该化合物，其中使用mplc系统在4g层析柱上进行分离，并且使用正庚烷：etoac/乙醇3/1(70∶30至10∶90)的梯度进行洗脱。在制备型hplc(gemini nx柱)上使用acn：h2o(包含0.1％甲酸)(20∶80至98∶2)进行二次纯化，以得到标题化合物，其为无色泡沫物(0.038g，68％)。ms(esi)：m/z＝430.2[m h]

。
[0133]
中间体：
[0134]
a)(2-氟-6-(三氟甲基)苄基)膦酸二乙酯
[0135][0136]
将2-(溴甲基)-1-氟-3-(三氟甲基)苯(1.50g，5.84mmol)在亚磷酸三乙酯(2.42g，2.5ml，14.6mmol)中的溶液搅拌回流3h。将澄清的无色混合物直接施加至硅胶柱。利用硅胶层析法在40g层析柱上纯化该化合物(正庚烷：etoac 0-100％)。1.99g(定量)，无色油状物。ms(esi)：m/z＝315.1[m h]

。
[0137]
b)3-[(e)-2-[2-氟-6-(三氟甲基)苯基]乙烯基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯
[0138][0139]
在0℃向(2-氟-6-(三氟甲基)苄基)膦酸二乙酯(1.50g，4.77mmol)在thf(20ml)中的溶液中加入在矿物油中的55％nah(208mg，4.77mmol)。将混合物在0℃搅拌30min。向该混合物中加入3-甲酰基氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(cas nr 398489-26-4)(884mg，4.77mmol)，并且在rt继续搅拌4.5h。将反应混合物用etoac(2次)/h2o萃取，并且使各层分离。合并的有机层经mgso4干燥，过滤，吸收于硅胶上，并且蒸发。利用硅胶层析法纯化该化合物(正庚烷：etoac 0-100％)。900mg(55％)，无色油状物。ms(esi)：m/z＝290.2[m-c4h9 h]

。
[0140]
c)3-[2-[2-氟-6-(三氟甲基)苯基]乙基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯
[0141][0142]
将(e)-3-(2-氟-6-(三氟甲基)苯乙烯基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(2.80g，8.11mmol)与meoh(50ml)合并。加入pd/c 10％(280mg)，并且将反应混合物在氢气下搅拌过夜。滤出催化剂，将溶剂蒸发，将产物干燥，并且照此用于下一步。
[0143]
d)3-(2-氟-6-(三氟甲基)苯乙基)氮杂环丁烷4-甲基苯磺酸酯
[0144][0145]
向3-(2-氟-6-(三氟甲基)苯乙基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(800mg，2.3mmol)在etoac(5ml)中的混合物中加入4-甲苯磺酸一水合物(438mg，2.3mmol)，并且将混合物加热回流1h。使澄清的无色溶液冷却至rt。将溶剂蒸发。在4℃下冷却过夜后，形成固体。将晶体用et2o洗涤。将该材料的一半溶于acoet/dcm中，并且用戊烷/et2o进行处理。将白色晶体分离，并且在hv下干燥。400mg(41％)。ms(esi)：m/z＝248.1[m h]

。
[0146]
实例[3h]1
[0147]
[3h](4ar，8as)-6-[3-[2-[2-氟-6-(三氟甲基)苯基]乙基]氮杂环丁烷-1-羰基]-4，4a，5，7，8，8a-六氢吡啶并[4，3-b][1，4]噁嗪-3-酮
[0148][0149]
在4ml氚化烧瓶中，将(4ar，8as)-6-(3-((e)-2-氟-6-(三氟甲基)苯乙烯基)氮杂环丁烷-1-羰基)六氢-2h-吡啶并[4，3-b][1，4]噁嗪-3(4h)-酮(2.0mg，4.68μmol)与活性炭载钯(10％)(4.98mg，4.68μmol)在乙醇(1ml)中混合。将烧瓶连接至rc tritec氚歧管并且通过三次冻融循环脱气。引入氚气，将悬浮液在氚气气氛下于610mbar下剧烈搅拌4h。将溶
液用液氮冷却，并且将反应容器中过量的氚气重新吸收于用于废氚的铀捕集阱中。将溶剂冻干，并且使用meoh(3
×
0.5ml)通过冻干以去除不稳定的氚。将剩余的黑色残余物悬浮于乙醇(10ml)中，并且通过17mm titan hplc过滤器(0.45μm，ptfe)过滤，以得到9.32gbq(252mci)粗产物，其放射化学纯度为94％。利用制备型hplc(xbridge苯基柱，5μm，10mm
×
250mm)纯化该粗产物，其中使用[a]acn和[b]h2o作为洗脱液(梯度为：1-12min内，[a]：[b]从3∶7增加至7∶3；12-12.5min，增加至9∶1；15-18min，从9∶1降低至3∶7；运行时间20min；在215nm下检测，温箱温度55℃)，流速为10ml/min。将合并的纯hplc级分浓缩，将产物溶解并且储存于etoh(50ml)中。获得量为7.8gbq(210mci)的标题化合物，其放射化学纯度为99.5％并且摩尔活度为1.7tbq/mmol(44.9ci/mmol)，如通过质谱所测定。标记的化合物的特性通过ms以及将冷的参考标准品与放射性标记的材料共注射来确认。ms：m/z＝430.2[m(h) h]

(4％)，432.2[m(3h) h]

(35％)，434.2[m(3h2) h]

(60％)。
[0150]
中间体：
[0151]
a)3-[(e)-2-[2-氟-6-(三氟甲基)苯基]乙烯基]氮杂环丁烷
[0152][0153]
向3-[(e)-2-[2-氟-6-(三氟甲基)苯基]乙烯基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(900mg，2.61mmol)在dcm(373μl)中的溶液中加入tfa(2.38g，1.61ml，20.8mmol)，并且将反应混合物在r.t搅拌3h。将反应混合物用etoac(2x)/khco3萃取。合并的有机相经硫酸钠干燥，并且蒸干，以得到标题化合物(795mg，定量，纯度84％)，其为灰白色固体。ms(esi)：m/z＝474.1[m h]

。
[0154]
d)(4ar，8as)-6-(3-((e)-2-氟-6-(三氟甲基)苯乙烯基)氮杂环丁烷-1-羰基)六氢-2h-吡啶并[4，3-b][1，4]噁嗪-3(4h)-酮
[0155][0156]
将(4ar，8as)-4a，5，6，7，8，8a-六氢-4h-吡啶并[4，3-b][1，4]噁嗪-3-酮(bb1)(220mg，816μmol)和碳酸氢钠(274mg，3.26mmol)在dcm(13ml)中的溶液冷却至0℃。然后加入三光气(169mg，571μmol)，并且将混合物在rt搅拌过夜。将混合物在冰浴中冷却，并且向其中加入(e)-3-(2-氟-6-(三氟甲基)苯乙烯基)氮杂环丁烷(200mg，816μmol)和dipea(422mg，570μl，3.26mmol)。将悬浮液在rt搅拌2h。将反应混合物用etoac/h2o萃取，经na2so4干燥，并且在减压下去除溶剂。利用制备型hplc纯化产物，以得到标题化合物(354mg，98％，纯度97％)，其为白色泡沫状物。ms(esi)：m/z＝428.2[m h]

。
[0157]
实例[
11
c]1
[0158]
[
11
c](4ar，8as)-6-[3-[2-[2-氟-6-(三氟甲基)苯基]乙基]氮杂环丁烷-1-羰基]-4，4a，5，7，8，8a-六氢吡啶并[4，3-b][1，4]噁嗪-3-酮
[0159][0160]
应用上述一般程序，在第三步以3-(2-氟-6-(三氟甲基)苯乙基)氮杂环丁烷(甲酸盐，4.7μmol，1.16mg)作为前体。获得的产物具有高于99％的放射化学纯度以及66-126gbq/μmol的摩尔活度。
[0161]
实例2
[0162]
(4ar，8as)-6-[6-[(2-氟-6-甲氧基-苯基)甲基]-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羰基]-4，4a，5，7，8，8a-六氢吡啶并[4，3-b][1，4]噁嗪-3-酮
[0163][0164]
在hv下用热风枪将圆底烧瓶中吹干，用氩气回填，并且向其中装入双(三氯甲基)碳酸酯(39.9mg，134μmol)和碳酸氢钠(64.5mg，768μmol)。加入dcm(10ml)以得到悬浮液。在0℃将(4ar，8as)-4a，5，6，7，8，8a-六氢-4h-吡啶并[4，3-b][1，4]噁嗪-3-酮(0.03g，192μmol)加入悬浮液中。将混合物在0℃搅拌5min并且在rt搅拌20小时。加入6-(2-氟-6-甲氧基苄基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷2，2，2-三氟乙酸酯(67.1mg，192μmol)和dipea(99.3mg，134μl，768μmol)。将所得灰白色悬浮液在rt搅拌1h。将反应混合物倒入h2o(20ml)中并且用dcm(2
×
50ml)萃取。将有机层合并，用盐水洗涤，用na2so4干燥，然后在真空下进行浓缩。利用快速层析法(硅胶，20g，在dcm中的0％至10％meoh)纯化粗料。ms(esi)：m/z＝418.2[m h]

。
[0165]
中间体：
[0166]
a)(2-氟-6-甲氧基苄基)三苯基溴化鏻
[0167][0168]
在ar下，将pph3(1.20g，4.57mmol)溶于acn(10ml)中并且加入2-(溴甲基)-1-氟-3-甲氧基苯(1.00g，4.57mmol)。将混合物在80℃搅拌3h。使所得悬浮液冷却至rt。加入tbme(100ml)，并且将混合物在rt搅拌30min。滤出固体，并且用tbme洗涤，然后将其在高真空下干燥，以得到标题化合物(2.19g，100％)，其为白色固体。ms(esi)：m/z＝401.2m

。
[0169]
b)6-(2-氟-6-甲氧基苯亚甲基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯
[0170]
[0171]
在ar下，在-78℃将(2-氟-6-甲氧基苄基)三苯基溴化鏻(0.5g，1.04mmol)溶于干燥thf(5ml)中，并且加入lhmds(2.08ml，2.08mmol)。将反应混合物在-78℃搅拌2h。然后在rt下，加入6-氧代-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯(cas nr 1181816-12-5)(219mg，1.04mmol)，并且将混合物在85℃搅拌过夜。加入tbdme。滤出所得沉淀物(tppo)。将滤液浓缩，并且利用快速层析法(硅胶，20g，在庚烷中的0％至80％etoac)将其纯化。78mg(22％)，无色油状物。ms(esi)：m/z＝278.2[m-c4h8 h]

。
[0172]
c)6-(2-氟-6-甲氧基苄基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯
[0173][0174]
将6-(2-氟-6-甲氧基苯亚甲基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯(78.0mg，234μmol)与etoac(2ml)合并，以得到淡黄色溶液。对烧瓶进行吹扫，并且用ar回填(3次)。加入pd-c 10％(24.9mg，23.4μmol)，并且将反应混合物在h2下搅拌2h。将反应混合物通过硅藻土垫进行过滤，用etoac洗涤，并且在高真空下干燥。ms(esi)：m/z＝280.2[m-c4h8 h]

。
[0175]
d)6-(2-氟-6-甲氧基苄基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷2，2，2-三氟乙酸酯
[0176][0177]
向6-(2-氟-6-甲氧基苄基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯(76.2mg，227μmol)在dcm(2ml)中的溶液中加入2，2，2-三氟乙酸(130mg，86.9μl，1.14mmol)。将所得反应混合物在rt搅拌2h。将反应混合物在真空下浓缩，然后通过高真空浓缩，加入tol以共沸去除挥发物。81mg(定量)，无色油状物。ms(esi)：m/z＝236.2[m h]

。
[0178]
实例[3h]2
[0179]
[3h](4ar，8as)-6-[6-[(2-氟-6-甲氧基-苯基)甲基]-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羰基]-4，4a，5，7，8，8a-六氢吡啶并[4，3-b][1，4]噁嗪-3-酮
[0180][0181]
向间硝基苯磺酸[3h]甲酯(1.85gbq，50mci，0.61μmol)中加入酚前体(4ar，8as)-6-[6-[(2-氟-6-羟基-苯基)甲基]-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羰基]-4，4a，5，7，8，8a-六氢吡啶并[4，3-b][1，4]噁嗪-3-酮(0.54mg，1.34μmol)在thf(150μl)中的溶液。加入碳酸铯(1.1mg，3.36μmol)，并且将反应混合物在室温搅拌2h。然后加入h2o，并且在氩气流下去除溶剂。利用hplc(sunfire c18 obd，10
×
250mm，acn[a]/h2o[b]，梯度：1-12min，[a]：[b]从3∶7增加至9∶1；15-16min，从9∶1降低至3∶7，运行时间20min，流速8ml/min，230nm，温箱温度60℃)纯化粗产物)。将纯级分合并，并且将溶剂冻干。将纯的具有氚标记的化合物溶解，并且作为乙醇溶液(10ml)储存，其获得的量为296mbq(8mci)。利用放射性hplc测得的放射化
学纯度高于99.5％，并且利用质谱(ms)测得的比活性为3.0tbq/mmol(81ci/mmol)。标记的化合物的特性通过hplc(通过与无标记的参考标准品共注射)和ms来确认。ms：m/z＝418.2[m(h) h]

(4％)，420.2[m(3h) h]

(0％)，422.2[m(3h2) h]

(4％)，424.2[m(3h3) h]

(92％)。
[0182]
中间体：
[0183]
a)2-((2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)甲基)-3-氟苯酚
[0184][0185]
将6.(2-氟-6.甲氧基苄基).2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯(350mg，1.04mmol)与dcm(7ml)合并，以得到无色溶液。在0℃加入bbr3(523mg，197μl，2.09mmol)。将反应物在rt搅拌过夜。通过加入饱和nahco3水溶液以使反应混合物淬灭，并且用etoac/thf进行萃取。将有机层合并，用盐水洗涤，用na2so4干燥，然后在真空下进行浓缩。231mg(100％)，黄色固体。ms(esi)：m/z＝222.2[m h]

。
[0186]
a)(4ar，8as)-6-[6-[(2-氟-6-羟基-苯基)甲基]-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羰基]-4，4a，5，7，8，8a-六氢吡啶并[4，3-b][1，4]噁嗪-3-酮
[0187][0188]
将(4ar，8as)-4a，5，6，7，8，8a-六氢-4h-吡啶并[4，3-b][1，4]噁嗪-6-鎓-3-酮；(2s，3s)-2，3-4-[(甲氧基苯甲酰基)氧基]丁二酸；(2s，3s)-4-羟基-2，3-4-[(甲氧基苯甲酰基)氧基]-4-氧代丁酸酯；水合物(salt of bb1)(300 mg，431μmol)悬浮于acn(7ml)中，并且在rt搅拌下加入三乙胺(305mg，420μl，3.01mmol)。然后加入一份双(1，2，4-三唑-1-基)甲酮(70.7mg，431μmol)。将反应混合物在rt搅拌2h。在rt逐滴加入溶于acn(350μl)中的2-((2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)甲基)-3-氟苯酚(114mg，517μmol)。将反应混合物在50℃加热10min，并且在该温度搅拌3h。将反应混合物冷却至r.t，用2ml h2o淬灭，然后用4ml tbme进行萃取。将有机层依次用2ml 5％nahco3洗涤，然后用1ml 0.5m hcl洗涤。将有机层用盐水洗涤，经na2so4干燥，并且在真空下浓缩(黄色油状物，8.15g)。利用快速层析法(硅胶，20g，在dcm中的0％至10％meoh)纯化粗料，浓缩，溶于acn/h2o中并且冻干。134mg(94％)，白色固体。ms(esi)：m/z＝404.3[m h]

。
[0189]
实例3
[0190]
(4ar，8as)-6-[3-[2-(2-氟-4-甲基-苯基)乙基]氮杂环丁烷-1-羰基]-4，4a，5，7，8，8a-六氢吡啶并[4，3-b][1，4]噁嗪-3-酮
[0191][0192]
将3-[2-(2-氟-4-甲基-苯基)乙基]氮杂环丁烷；2，2，2-三氟乙酸(100mg，0.330mmol)、(4ar，8as)-3-氧代-4，4a，5，7，8，8a-六氢吡啶并[4，3-b][1，4]噁嗪-6-甲酸(4-硝基苯基)酯(bb2)(125mg，0.390mmol)和dipea(126mg，0.980mmol)在acn(6ml)中的混合物在80℃搅拌12h。将该混合物在减压条件下浓缩，利用制备型hplc(nh4hco3)纯化残余物，然后将其冻干，以得到(4ar，8as)-6-[3-[2-(2-氟-4-甲基-苯基)乙基]氮杂环丁烷-1-羰基]-4，4a，5，7，8，8a-六氢吡啶并[4，3-b][1，4]噁嗪-3-酮(50mg，41％)，其为白色固体。ms(esi)：m/z＝376.0[m h]

。
[0193]
中间体：
[0194]
a)3-[2-(2-氟-4-甲基-苯基)乙炔基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯
[0195][0196]
在25℃向3-乙炔基氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(cas nr 287193-01-5)(1.00g，5.52mmol)和4-溴-3-氟甲苯(cas nr 452-74-4)(1.25g，6.62mmol)在干燥thf(20ml)中的溶液中加入[pd(pph3)4](531mg，0.460mmol)、cui(88mg，0.46mmol)和tea(4.64g，46.0mmol)。将混合物用n2吹扫1min，然后将其在n2气氛下于60℃搅拌12h。将混合物倒入nh4cl(饱和，50ml)中，用etoac(3
×
30ml)萃取，并且将合并的有机层用无水na2so4干燥。将溶剂蒸发后，利用快速层析法在硅胶上纯化残余物(pe∶etoac＝20∶1至10∶1)，以获得3-[2-(2-氟-4-甲基-苯基)乙炔基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(650mg，41％)，其为无色油状物。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ＝7.33-7.28(m，1h)，6.94-6.85(m，2h)，4.26-4.19(m，2h)，4.05(dd，j＝6.4，8.1hz，2h)，3.66-3.49(m，1h)，2.36(s，3h)，1.46(s，9h)。
[0197]
b)3-[2-(2-氟-4-甲基-苯基)乙基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯
[0198][0199]
在25℃向3-[2-(2-氟-4-甲基-苯基)乙炔基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(500mg，1.73mmol)在etoac(10ml)中的溶液中加入pd/c 10％(250mg，1.73mmol)。将混合物在h2球囊(15psi)中于40℃搅拌6h。将反应混合物与前一批(0.2mmol规模)合并，将混合物通过硅藻土垫过滤，减压浓缩滤液，并且将残余物在真空下干燥。350mg，无色油状物。ms(esi)：m/z＝238.1[m-c4h8 h]

。
[0200]
c)3-[2-(2-氟-4-甲基-苯基)乙基]氮杂环丁烷；2，2，2-三氟乙酸
[0201]
[0202]
在25℃向3-[2-(2-氟-4-甲基-苯基)乙基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(350mg，1.19mmol)在干燥dcm(10ml)中的溶液中加入tfa(1.0ml，1.19mmol)。将混合物在25℃搅拌12h。将反应混合物在减压条件下浓缩，并且将残余物在真空下干燥，以获得3-[2-(2-氟-4-甲基-苯基)乙基]氮杂环丁烷；2，2，2-三氟乙酸(260mg，71％)，其为无色油状物。ms(esi)：m/z＝194.0[m h]

。
[0203]
实例[3h]3
[0204]
[3h](4ar，8as)-6-[3-[2-(2-氟-4-甲基-苯基)乙基]氮杂环丁烷-1-羰基]-4，4a，5，7，8，8a-六氢吡啶并[4，3-b][1，4]噁嗪-3-酮
[0205][0206]
在4ml氚化烧瓶中，将(4ar，8as)-6-[3-[(e)-2-(2-氟-4-甲基-苯基)乙烯基]氮杂环丁烷-1-羰基]-4，4a，5，7，8，8a-六氢吡啶并[4，3-b][1，4]噁嗪-3-酮(2.0mg，5.36μmol)和活性炭载钯(10％pd基)(6.27mg，5.89μmol)在乙醇(1ml)中混合。将烧瓶连接至rc tritec氚歧管并且通过三次冻融循环脱气。引入氚气，将悬浮液在氚气氛下于600mbar下剧烈搅拌3h。将溶液用液氮冷却，并且将反应容器中过量的氚气重新吸收于用于废氚的铀捕集阱中。将溶剂冻干，并且使用meoh(3
×
0.5ml)通过冻干以去除不稳定的氚。将剩余反应混合物用etoh稀释，并且从黑色钯残余物中过滤出来。利用制备型hplc(xbridge c8柱，5μm，10mm
×
250mm)纯化该粗产物，其中使用[a]h2o和[b]acn作为洗脱液(梯度为：6-20min内，[a]：[b]从9∶1降低至3∶7，运行时间23min)，流速为6ml/min。获得量为3.3gbq(89mci)的标题化合物，其放射化学纯度为99.1％并且摩尔活度为1.8tbq/mmol(49.5ci/mmol)，如通过质谱所测定。标记的化合物的特性通过ms以及将冷的参考标准品与放射性标记的材料共注射来确认。ms：m/z＝376.2[m(h) h]

(5％)，378.2[m(3h) h]

(24％)，380.2[m(3h2) h]

(65％)，382.2[m(3h3) h]

(6％)。
[0207]
中间体：
[0208]
a)1-(二乙氧基磷酰基甲基)-2-氟-4-甲基-苯
[0209][0210]
将1-(溴甲基)-2-氟-4-甲基苯(1g，4.92mmol)在亚磷酸三乙酯(2.05g，2.14ml，12.3mmol)中的溶液搅拌回流2.5h。将澄清的无色混合物直接施加至硅胶柱。利用硅胶层析法在40g层析柱上将该化合物纯化两次，其中使用mplc(isco)系统，用正庚烷：etoac(100∶0至0∶100)的梯度进行洗脱，以得到所需化合物，其为无色液体(1.09g，85％)。ms(esi)：m/z＝261.1[m h]

。
[0211]
b)(e)-3-(2-氟-4-甲基苯乙烯基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯
[0212][0213]
向1-(二乙氧基磷酰基甲基)-2-氟-4-甲基-苯(1.09g，4.19mmol)在thf(7ml)的冰冷溶液中加入在矿物油中的nah 55％(183mg，4.19mmol)，并且将混合物在该温度下搅拌30min。向浅棕色混合物中逐滴加入3-甲酰基氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(cas nr 398489-26-4)(776mg，4.19mmol)在thf(5ml)中的溶液。在rt继续搅拌过夜，然后在50℃搅拌3天。将反应混合物倒在饱和nh4cl水溶液和etoac上，并且使各层分离。将水层用etoac进行萃取(2次)。将有机层用mgso4干燥，过滤后用硅胶进行处理，并且将其蒸发。利用硅胶层析法在40g层析柱上纯化该化合物，其中使用mplc系统，用正庚烷：etoac(100∶0至0∶100)的梯度进行洗脱，以得到所需化合物，其为无色油状物(85mg；7％)。ms(esi)：m/z＝236.2[m-c4h9 h]

。
[0214]
c)(e)-3-(2-氟-4-甲基苯乙烯基)氮杂环丁烷4-甲基苯磺酸酯
[0215][0216]
将(e)-3-(2-氟-4-甲基苯乙烯基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(129mg，443μmol)和4-甲基苯磺酸水合物(88.4mg，465μmol)在etoac(1.5ml)中的溶液搅拌回流2h。将悬浮液冷却至4℃，然后过滤。将滤饼用etoac洗涤，以得到所需化合物，其为无色固体(140mg，87％)。ms(esi)：m/z＝192.2[m h]

。
[0217]
d)(4ar，8as)-6-[3-[(e)-2-(2-氟-4-甲基-苯基)乙烯基]氮杂环丁烷-1-羰基]-4，4a，5，7，8，8a-六氢吡啶并[4，3-b][1，4]噁嗪-3-酮
[0218][0219]
向(4ar，8as)-4a，5，6，7，8，8a-六氢-4h-吡啶并[4，3-b][1，4]噁嗪-6-鎓-3-酮；(2s，3s)-2，3-4-[(甲氧基苯甲酰基)氧基]丁二酸；(2s，3s)-4-羟基-2，3-4-[(甲氧基苯甲酰基)氧基]-4-氧代丁酸酯；水合物(bb1的盐)(259mg，371μmol)在mecn(1.5ml)中的悬浮液中加入tea(263mg，362μl，2.6mmol)，然后加入一份双(1，2，4-三唑-1-基)甲酮(61mg，371μmol)。将混合物在rt搅拌40min。向溶液中加入(e)-3-(2-氟-4-甲基苯乙烯基)氮杂环丁烷4-甲基苯磺酸酯(135mg，371μmol)，并且将混合物在50℃搅拌3h，然后在70℃搅拌过夜。冷却后，将反应混合物倒在水和etoac上并且使各层分离。将水层用etoac进行萃取。将有机层用水洗涤，经mgso4干燥，过滤，用硅胶进行处理，并且将其蒸发。利用硅胶层析法在4g层析柱上纯化该化合物，其中使用mplc系统，用正庚烷：etoac/etoh 3/1(100∶0至0∶100)的梯度进行洗脱，以得到所需化合物，其为无色泡沫物(108mg，78％)。ms(esi)：m/z＝374.2[m h]

。
[0220]
实例4
[0221]
(4ar，8as)-6-[3-[2-[4-甲氧基-2-(三氟甲基)苯基]乙基]氮杂环丁烷-1-羰基]-4，4a，5，7，8，8a-六氢吡啶并[4，3-b][1，4]噁嗪-3-酮
[0222][0223]
将3-[2-[4-甲氧基-2-(三氟甲基)苯基]乙基]氮杂环丁烷；2，2，2-三氟乙酸(150mg，0.400mmol)、(4ar，8as)-3-氧代六氢-2h-吡啶并[4，3-b][1，4]噁嗪-6(5h)-甲酸叔丁酯(bb2)(155mg，0.480mmol)和dipea(156mg，1.21mmol)在acn(12ml)中的混合物在80℃搅拌12h。将该混合物在减压条件下浓缩，利用制备型hplc(nh4hco3)纯化残余物，然后将其冻干，以得到(4ar，8as)-6-[3-[2-[4-甲氧基-2-(三氟甲基)苯基]乙基]氮杂环丁烷-1-羰基]-4，4a，5，7，8，8a-六氢吡啶并[4，3-b][1，4]噁嗪-3-酮(44mg，36％)，其为白色固体。ms(esi)：m/z＝442.3[m h]

。
[0224]
中间体：
[0225]
a)3-[2-[4-甲氧基-2-(三氟甲基)苯基]乙炔基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯
[0226][0227]
在25℃向3-乙炔基氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(cas nr 287193-01-5)(800mg，4.41mmol)和3-三氟甲基-4-溴苯甲醚(cas nr 400-72-6)(1.3g，5.3mmol)在干燥thf(30ml)中的溶液中加入[pd(pph3)4](509mg，0.440mmol)、cui(84mg，0.44mmol)和tea(4.46mg，44.1mmol)。将混合物用n2吹扫1min，然后将其在60℃搅拌12h。将该混合物倒入nh4cl(饱和水溶液，100ml)中，用etoac(3
×
50ml)萃取，并且将有机层合并，用无水na2so4干燥，并且在减压下浓缩。利用快速层析法在硅胶上纯化残余物(pe：etoac 20∶1至10∶1)，以获得3-[2-[4-甲氧基-2-(三氟甲基)苯基]乙炔基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(160mg，8.1％)，其为无色油状物。ms(esi)：m/z＝300.1[m-c4h8 h]

。
[0228]
b)3-[2-[4-甲氧基-2-(三氟甲基)苯基]乙基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯
[0229][0230]
在25℃向3-[2-[4-甲氧基-2-(三氟甲基)苯基]乙炔基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(230mg，0.650mmol)在etoac(10ml)中的溶液中加入pd/c 10％(150.0mg)，并且将混合物在h2球囊中于40℃搅拌12h。将反应混合物通过硅藻土垫过滤，将滤液在减压下浓缩，并且将残余物在真空下干燥，以得到标题化合物(180mg，77％)，其为无色油状物。ms(esi)：m/z＝304.1[m-c4h8 h]

。
[0231]
c)3-[2-[4-甲氧基-2-(三氟甲基)苯基]乙基]氮杂环丁烷；2，2，2-三氟乙酸
[0232][0233]
在25℃向3-[2-[4-甲氧基-2-(三氟甲基)苯基]乙基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯
(180mg，0.500mmol)在干燥dcm(10ml)中的溶液中加入tfa(1.0ml，1.19mmol)，并且将混合物在25℃搅拌12h。将反应混合物在减压条件下浓缩，并且将残余物在真空下干燥，以获得3-[2-[4-甲氧基-2-(三氟甲基)苯基]乙基]氮杂环丁烷；2，2，2-三氟乙酸(150mg，80％)，其为无色油状物。ms(esi)：m/z＝260.1[m h]

。
[0234]
实例[3h]4
[0235]
[3h](4ar，8as)-6-[3-[2-[4-甲氧基-2-(三氟甲基)苯基]乙基]氮杂环丁烷-1-羰基]-4，4a，5，7，8，8a-六氢吡啶并[4，3-b][1，4]噁嗪-3-酮
[0236][0237]
向间硝基苯磺酸[3h]甲酯(1.85gbq，50mci，0.61μmol)在dmf(100μl)中的溶液中加入溶于dmf(150μl)中的酚前体(4ar，8as)-6-[3-[2-[4-羟基-2-(三氟甲基)苯基]乙基]氮杂环丁烷-1-羰基]-4，4a，5，7，8，8a-六氢吡啶并[4，3-b][1，4]噁嗪-3-酮(0.57mg，1.33μmol)。加入碳酸铯(1mg，3.07μmol)，并且将反应混合物在室温搅拌2h，然后将其用h2o和tbme进行处理。分离有机层后，将水层用tbme再次萃取。将合并的有机层用1n naoh和h2o连续洗涤，然后将其用硫酸钠干燥。将有机溶剂蒸发后，利用hplc纯化粗产物(x-terra prep rp-18，10
×
150mm，acn/h2o(包含5％乙腈)，3ml/min，210nm)。利用固相萃取(sep-pak plus c18)将纯的氚标记的化合物分离，并且从小柱上作为乙醇溶液洗脱，以得到655mbq(17.7mci)目标化合物，其放射化学纯度为98.2％，并且比活性为3.03tbq/mmol(82ci/mmol)，如通过质谱(ms)所测得。标记的化合物的特性通过hplc(通过与无标记的参考标准品共注射)和ms来确认。ms：m/z＝442[m(h) h]

(4％)，444[m(3h) h]

(0％)，446[m(3h2) h]

(4％)，448[m(3h3) h]

(92％)。
[0238]
中间体：
[0239]
a)(4ar，8as)-6-[3-[2-[4-羟基-2-(三氟甲基)苯基]乙基]氮杂环丁烷-1-羰基]-4，4a，5，7，8，8a-六氢吡啶并[4，3-b][1，4]噁嗪-3-酮
[0240][0241]
将(4ar，8as)-6-[3-[4-甲氧基-2-(三氟甲基)苯乙基]氮杂环丁烷-1-羰基]六氢-2h-吡啶并[4，3-b][1，4]噁嗪-3(4h)-酮(20mg，45.3μmol)与dcm(0.5ml)合并。冷却至0℃后，加入bbr3(11.3mg，4.29μl，45.3μmol)。将反应混合物在r.t搅拌3h。通过加入饱和nahco3水溶液以使反应混合物淬灭，然后用etoac进行萃取，经na2so4干燥，并且将其蒸干。利用制备型hplc纯化粗化合物，以得到标题化合物(8mg，41％)，其为白色固体。ms(esi)：m/z＝428.2[m h]

。
[0242]
实例5
[0243]
(4ar，8as)-6-[3-(4-环丁基苯基)氮杂环丁烷-1-羰基]-4，4a，5，7，8，8a-六氢吡
啶并[4，3-b][1，4]噁嗪-3-酮
[0244][0245]
向配备搅拌棒的小瓶中加入[ir{df(cf3)ppy}2(dtbpy)]pf6(cas nr 870987-63-6)(1.42mg，1.27μmol)、溴环丁烷(17.1mg，127μmol)、(4ar，8as)-6-[3-(4-溴苯基)氮杂环丁烷-1-羰基]六氢-2h-吡啶并[4，3-b][1，4]噁嗪-3(4h)-酮(50mg，127μmol)、三(三甲基甲硅烷基)硅烷(31.5mg，39.1μl，127μmol)和无水碳酸钠(26.9mg，254μmol)。将小瓶密封，并且置于ar下，然后加入dme(1ml)。向单独的小瓶中加入二氯镍1，2-二甲氧基乙烷(2.79mg，12.7μmol)和4-叔丁基-2-(4-叔丁基-2-吡啶基)吡啶(3.4mg，12.7μmol)。将光催化剂小瓶密封，用ar吹扫并且加入dme(4ml)。将光催化剂小瓶超声处理5min，然后用注射器取其中的0.4ml(0.5mol％催化剂)注入反应容器中。将反应混合物用ar脱气。搅拌反应物，并且将其用420nm灯照射14.5h。通过暴露于空气中，以使反应物淬灭，将其过滤，并且用少量etoac洗涤。将滤液用硅胶进行处理，并且将其蒸发。利用硅胶层析法在12g层析柱上纯化该化合物，其中使用mplc(isco)系统，用正庚烷：etoac/etoh3/1(80∶20至10∶90)的梯度进行洗脱，以得到所需化合物，其为浅棕色胶状物(22mg；47％)。在制备型hplc(ymc-triart c18柱)上使用acn：h2o(0.1％甲酸)(35∶65至100∶0)的梯度进行进一步纯化，以得到所需化合物，其为无色固体(15mg，32％)。ms(esi)：m/z＝370.3[m h]

。
[0246]
中间体：
[0247]
a)(4ar，8as)-6-[3-(4-溴苯基)氮杂环丁烷-1-羰基]六氢-2h-吡啶并[4，3-b][1，4]噁嗪-3(4h)-酮
[0248][0249]
问3-(4-溴苯基)氮杂环丁烷盐酸盐(cas nr 90561-74-3)(83.0mg，334μmol)和(4ar，8as)-3-氧代六氢-2h-吡啶并[4，3-b][1，4]噁嗪-6(5h)-甲酸4-硝基苯酯(bb2)(107mg，334μmol)在acn(2ml)中的悬浮液中加入dipea(173mg，233μl，1.34mmol)，并且将混合物在rt搅拌过夜。将黄色溶液蒸发。在制备型hplc(gemini nx柱)上使用acn：h2o(0.1％tea)(20∶80至98∶2)的梯度纯化产物，以得到所需产物(193mg，81％)，其为无色胶状物。ms(esi)：m/z＝394.2[m h]

。
[0250]
实例[
11
c]5
[0251]
[
11
c](4ar，8as)-6-[3-(4-环丁基苯基)氮杂环丁烷-1-羰基]-4，4a，3，7，8，8a-六氢吡啶并[4，3-b][1，4]噁嗪-3-酮
[0252][0253]
应用上述一般程序，在第三步以(4-环丁基苯基)氮杂环丁烷4-甲基苯磺酸酯(4.7
μmol，0.88mg)作为前体。获得的产物具有高于99％的放射化学纯度以及64-96gbq/μmol的摩尔活度。
[0254]
中间体：
[0255]
a)3-(4-溴苯基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯
[0256][0257]
在rt向3-碘氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(cas nr 254454-54-1)(1.20g，4.24mmol)在2-丙醇(15ml)中的搅拌溶液中加入(4-溴苯基)硼酸(1.70g，8.48mmol)。在ar下，向混合物中加入在thf(4.24ml，8.48mmol)中的外消旋-(1r，2r)-2-氨基环己烷-1-醇(29.3mg，254μmol)、碘化镍(ii)(79.5mg，254μmol)和双(三甲基甲硅烷基)酰胺钠2m。将混合物在微波炉中于80℃加热30min。将反应混合物倒在水和etoac上。将水层用etoac萃取两次。将有机层用mgso4干燥，用硅胶进行处理，并且将其蒸发。利用硅胶层析法首先在40g层析柱上纯化该化合物，然后在80g层析柱上再纯化两次，其中使用mplc系统，用正庚烷：etoac(100∶0至50∶50)的梯度进行洗脱，以得到所需化合物(440mg，33％)，其为无色油状物。ms(esi)：m/z＝256.0[m-c4h8 h]

。
[0258]
b)3-(4-环丁基苯基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯
[0259][0260]
标题化合物的制备类似于(4ar，8as)-6-[3-(4-环丁基苯基)氮杂环丁烷-1-羰基]-4，4a，5，7，8，8a-六氢吡啶并[4，3-b][1，4]噁嗪-3-酮(实例5)，但使用溴环丁烷(381mg，2.82mmol)和3-(4-溴苯基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(440mg，1.41mmol)进行制备。125mg(30％)无色固体。ms(esi)：m/z＝232.1[m-c4h8 h]

。
[0261]
c)3-(4-环丁基苯基)氮杂环丁烷4-甲基苯磺酸酯
[0262][0263]
向3-(4-环丁基苯基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(390mg，1.36mmol)在etoac(6ml)中的混合物中加入一水合对甲苯磺酸(258mg，1.36mmol)，并且将混合物在密封管中搅拌回流1h。将反应混合物置于冰箱中在4℃下冷却至30min，然后通过过滤来收集固体。将滤饼用少量etoac洗涤，并且干燥，以得到所需化合物(377mg；73％)，其为无色固体。ms(esi)：m/z＝188.2[m h]

。
[0264]
实例6
[0265]
(4ar，8as)-6-[6-[(2，6-二氟苯基)甲基]-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羰基]-4，4a，5，7，8，8a-六氢吡啶并[4，3-b][1，4]噁嗪-3-酮
[0266][0267]
将双(三氯甲基)碳酸酯(39.9mg，134μmol)和碳酸氢钠(64.5mg，768μmol)在ar下合并。加入dcm(10ml)以得到悬浮液。在0℃将(4ar，8as)-六氢-2h-吡啶并[4，3-b][1，4]噁嗪-3(4h)-酮(bb1)(30mg，192μmol)加入悬浮液中。将混合物在0℃搅拌5min，然后在rt搅拌20h。加入6-(2，6-二氟苄基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷2，2，2-三氟乙酸酯(64.8mg，192μmol)和dipea(99.3mg，134μl，768μmol)。将所得灰白色悬浮液在rt搅拌1h。将反应混合物倒入h2o(20ml)中并且用dcm(2
×
50ml)萃取。将有机层合并，用盐水洗涤，用na2so4干燥，然后在真空下进行浓缩。利用快速层析法(硅胶，20g，在dcm中的0％至10％meoh)纯化粗料。52mg(65％)，白色泡沫状物。ms(esi)：m/z＝406.2[m h]

。
[0268]
中间体：
[0269]
a)6-(2，6-二氟苯亚甲基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯
[0270][0271]
在ar下，在-78℃将(2，6-二氟苄基)三苯基溴化鏻(cas nr 159783-80-9)(0.5g，1.07mmol)溶于干燥thf(5ml)中，并且加入lhmds(2.13ml，2.13mmol)。将反应混合物在-78℃搅拌2h。然后在rt下，加入6-氧代-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯(cas nr 1181816-12-5)(225mg，1.07mmol)，并且将混合物在85℃搅拌过夜。加入tbdme，并且滤出沉淀tppo。将滤液浓缩，并且利用快速层析法(硅胶，20g，在庚烷中的0％至80％etoac)将其纯化。114mg(33％)，白色固体。ms(esi)：m/z＝266.2[m-c4h8 h]

。
[0272]
b)6-(2，6-二氟苄基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯
[0273][0274]
将6-(2，6-二氟苯亚甲基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯(0.114g，355μmol)溶于etoac(2ml)中。吹扫烧瓶，并且用ar回填，加入pd/c 10％(37.8mg，35.5μmol)，并且将反应物在h2下搅拌2h。将反应混合物通过硅藻土垫进行过滤，用etoac洗涤，并且在hv下干燥。112mg(98％)，无色油状物。ms(esi)：m/z＝268.2[m-c4h8 h]

。
[0275]
c)6-(2，6-二氟苄基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷2，2，2-三氟乙酸酯
[0276][0277]
向6-(2，6-二氟苄基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯(112mg，346μmol)在dcm
12-5)(228mg，1.08mmol)，并且将混合物在85℃搅拌过夜。加入tbdme，并且滤出沉淀的tppo。将滤液浓缩，利用快速层析法(硅胶，20g，在庚烷中的0％至80％etoac)直接将其纯化。166mg(49％)，黄色固体。ms(esi)：m/z＝260.2[m-c4h8 h]

。
[0290]
b)6-(2-甲氧基苄基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯
[0291][0292]
将6-(2-甲氧基苯亚甲基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯(166mg，526μmol)溶于etoac(3ml)中。对烧瓶进行吹扫，并且用ar回填(3次)。加入pd/c 10％(56mg，52.6μmol)，并且将反应物在h2下搅拌2h。将混合物通过硅藻土垫进行过滤，用etoac洗涤，并且在hv下干燥。120mg(72％)，无色油状物。ms(esi)：m/z＝262.2[m-c4h8 h]

。
[0293]
c)6-(2-甲氧基苄基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷2，2，2-三氟乙酸酯
[0294][0295]
向6-(2-甲氧荃苄荃)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯(120mg，378μmol)在dcm(3ml)中的溶液中加入2，2，2-三氟乙酸(216mg，145μl，1.89mmol)。将所得反应混合物在rt搅拌2h。将反应混合物在hv下浓缩(用tol洗涤)。125mg(100％)，无色油状物。ms(esi)：m/z＝218.1[m h]

。
[0296]
实例[3h]7
[0297]
(4ar，8as)-6-[6-[(2-甲氧基苯基)甲基]-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羰基]-4，4a，5，7，8，8a-六氢吡啶并[4，3-b][1，4]噁嗪-3-酮ro7425945-000-001
[0298][0299]
向间硝基苯磺酸[3h]甲酯(1.85gbq，50mci，0.625μmol)在dmf(100μl)中的溶液中加入溶于dmf(150μl)中的酚前体(4ar，8as)-6-(6-(2-羟基苄基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羰基)六氢-2h-吡啶并[4，3-b][1，4]噁嗪-3(4h)-酮(0.48mg，l.25μmol)。加入碳酸铯(1mg，3.13μmol)，并且将反应混合物在r.t.搅拌2h，然后将其用h2o和tbme进行处理。分离有机层后，将水层用tbme再次萃取。将合并的有机层用1n naoh和水连续洗涤，然后将其用硫酸钠干燥。将有机溶剂蒸发后，利用hplc纯化粗产物(x-terra prep rp-18，10
×
150mm，acn/h2o(包含5％acn)，3ml/min，210nm)。利用固相萃取(sep-pak plus c18)将纯的氚标记的化合物分离，并且从小柱上作为乙醇溶液洗脱，以得到185mbq(5.0mci)目标化合物，其放射化学纯度为99.5％，并且比活性为3.06tbq/mmol(82.8ci/mmol)，如通过质谱(ms)所测得。标记的化合物的特性通过hplc(通过与无标记的参考标准品共注射)和ms来确认。ms：m/z＝400[m(h) h]

(3％)，402[m(3h) h]

(0％)，404[m(3h2) h]

(4％)，406[m(3h3) h]

(93％)。
[0300]
中间体：
[0301]
a)2-((2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)甲基)酚
[0302][0303]
将6-(2-甲氧基苄基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯(102mg，321μmol)溶于dcm(2ml)中。在0℃加入bbr3(161mg，60.8μl，643μmol)。将反应物在rt搅拌过夜，然后通过加入饱和nahco3水溶液以使其淬灭，并且用etoac/thf进行萃取。将有机层合并，用盐水洗涤，用na2so4干燥，然后在真空下进行浓缩。65mg(99％)，棕色油状物。ms(esi)：m/z＝204.2[m h]

。在下一步直接使用而不经进一步纯化。
[0304]
b)(4ar，8as)-6-[6-[(2-羟基苯基)甲基]-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羰基]-4，4a，5，7，8，8a-六氢吡啶并[4，3-b][1，4]噁嗪-3-酮
[0305][0306]
将(4ar，8as)-4a，5，6，7，8，8a-六氢-4h-吡啶并[4，3-b][1，4]噁嗪-6-鎓-3-酮；(2s，3s)-2，3-4-[(甲氧基苯甲酰基)氧基]丁二酸；(2s，3s)-4-羟基-2，3-4-[(甲氧基苯甲酰基)氧基]-4-氧代丁酸酯；水合物(bb1的盐)(175mg，251μmol)悬浮于acn(4ml)中，并且在rt加入tea(178mg，245μl，1.76mmol)。然后加入一份双(1，2，4-三唑-1-基)甲酮(41.2mg，251μmol)。将反应混合物在rt搅拌2h。在rt逐滴加入溶于acn(200μl)中的2-((2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)甲基)酚(61.3mg，301μmol)。将反应混合物在50℃加热10min，并且在该温度下搅拌3h。冷却至rt后，加入水(2ml)，并且将产物用tbme(4ml)进行萃取。将有机层用5％nahco3水溶液(2ml)洗涤，然后用0.5m hcl(1ml)和盐水洗涤。经na2so4干燥并且蒸发溶剂后，利用快速层析法纯化粗料(硅胶，20g，在dcm中的0％至10％meoh)，以得到标题化合物。48mg(47％，纯度95％)，白色固体。ms(esi)：m/z＝386.2[m h]

。
[0307]
实例8
[0308]
(4ar，8as)-6-[3-[4-(环戊基氧基)苯基]氮杂环丁烷-1-羰基]-4，4a，5，7，8，8a-六氢吡啶并[4，3-b][1，4]噁嗪-3-酮
[0309][0310]
将3-(4-(环戊基氧基)苯基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(150mg，473μmol)溶于1，1，1，3，3，3-六氟丙烷-2-醇(2ml)中，并且在微波中于150℃搅拌40分钟。然后将溶液完全蒸发。将粗制中间体悬浮于acn(1.5ml)中，并且加入(4ar，8as)-3-氧代六氢-2h-吡啶并[4，3-b][1，4]噁嗪-6(5h)-甲酸4-硝基苯酯(bb2)(152mg，473μmol)和dipea(244mg，330μl，
1.89mmol)，然后将混合物在rt搅拌过夜。将悬浮液完全蒸发。利用制备型hplc(ymc-triart柱)纯化产物，其中使用acn：h2o(0.1％tea)(20∶80至40∶60至55∶45至0∶100)的梯度，以得到所需化合物，其为无色固体(32mg；17％)。ms(esi)：m/z＝400.3[m h]

。
[0311]
中间体：
[0312]
a)3-(4-(环戊基氧基)苯基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯
[0313][0314]
标题化合物的制备类似于(4ar，8as)-6-[3-(4-环丁基苯基)氮杂环丁烷-1-羰基]-4，4a，5，7，8，8a-六氢吡啶并[4，3-b][1，4]噁嗪-3-酮(实例5)，但使用1-溴-4-(环戊基氧基)苯(cas nr 30752-30-8)(400mg，1.66mmol)和3-(4-溴苯基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(588mg，2.49mmol)。444mg(84％)，无色油状物。ms(esi)：m/z＝262.1[m h]

。
[0315]
实例9
[0316]
(4ar，8as)-6-[3-(4-异丁氧基苯基)氮杂环丁烷-1-羰基]-4，4a，5，7，8，8a-六氢吡啶并[4，3-b][1，4]噁嗪-3-酮
[0317][0318]
向(4ar，8as)-6-(3-(4-羟基苯基)氮杂环丁烷-1-羰基)六氢-2h-吡啶并[4，3-b][1，4]噁嗪-3(4h)-酮(0.056g，169μmol)和碳酸钾(28mg，203μmol)在dmf(0.7ml)中的悬浮液中加入1-碘-2-甲基丙烷(37.3mg，23.3μl，203μmol)，并且将混合物在rt搅拌过夜，然后在50℃搅拌3h。加入更多1-碘-2-甲基丙烷(37.3mg，23.3μl，203μmol)和碳酸钾(28mg，203μmol)，并且将其在50℃继续搅拌过夜。加入第三份1-碘-2-甲基丙烷(62.2mg，38.9μl，338μmol)，并且在50℃继续搅拌2h。过滤混合物，并且将滤饼用几滴dmf洗涤。利用制备型hplc(gemini nx柱)纯化产物，其中使用acn：h2o(0.1％hcooh)(20∶80至100∶0)的梯度，以得到所需化合物，其为无色固体(8mg；12％)。ms(esi)：m/z＝388.2[m h]

。
[0319]
中间体：
[0320]
a)3-(4-(叔丁氧基)苯基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯
[0321][0322]
标题化合物的制备类似于(4ar，8as)-6-[3-(4-环丁基苯基)氮杂环丁烷-1-羰基]-4，4a，5，7，8，8a-六氢吡啶并[4，3-b][1，4]噁嗪-3-酮(实例5)，但使用1-溴-4-(叔丁氧基)苯(cas nr 60876-70-2)(400mg，1.75mmol)和3-(4-溴苯基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(618mg，2.62mmol)进行制备。241mg(41％，纯度90％)，无色固体。ms(esi)：m/z＝250.2[m-c4h8 h]

。
[0323]
b)(4ar，8as)-6-(3-(4-羟基苯基)氮杂环丁烷-1-羰基)六氢-2h-吡啶并[4，3-b][1，4]噁嗪-3(4h)-酮
氟-4-甲基-苯基)乙烯基]氮杂环丁烷-1-羰基]-4，4a，5，7，8，8a-六氢吡啶并[4，3-b][1，4]噁嗪-3-酮，其为淡黄色油状物(18mg，37％)。利用hrms(esi)计算c
20h23
f2n3nao
3
[m na]

414.1600m/z，实测值414.1597m/z。
[0334]
利用半制备型hplc获得少量(e)-异构体和(z)-异构体。
[0335]
(4ar，8as)-6-[3-[(e)-2-氟-2-(3-氟-4-甲基-苯基)乙烯基]氮杂环丁烷-1-羰基]-4，4a，5，7，8，8a-六氢吡啶并[4，3-b][1，4]噁嗪-3-酮：白色粉末；1h nmr(400mhz，cdcl3)δ7.24(t，j＝7.9hz，1h)，7.07-6.96(m，2h)，6.80(s，1h，conh-)，5.65(dd，j＝19.9，9.7hz，1h)，4.42-4.17(m，4h)，4.04-3.80(m，4h)，3.61-3.49(m，2h)，3.48-3.40(m，1h)，3.16-3.05(m，2h)，2.33(s，3h)，2.01-1.93(m，1h)，1.89-1.77(m，1h)
[0336]
(4ar，8as)-6-[3-[(z)-2-氟-2-(3-氟-4-甲基-苯基)乙烯基]氮杂环丁烷-1-羰基]-4，4a，3，7，8，8a-六氢吡啶并[4，3-b][1，4]噁嗪-3-酮：无色油状物；1h nmr(400mhz，cdcl3)δ7.24-7.10(m，3h)，6.67(s，1h，conh-)，5.60(dd，j＝35.8，8.5hz，1h)，4.40-4.20(m，4h)，4.05-3.75(m，5h)，3.60-3.41(m，2h)，3.20-3.05(m，2h)，2.31(d，j＝2.0hz，3h)，2.01-1.94(m，1h)，1.90-1.79(m，1h)。利用hrms(esi)计算c
20h23
f2n3nao
3
[m na]

414.1600m/z，实测值414.1597m/z。
[0337]
中间体：
[0338]
a)二乙氧基磷酰基-(3-氟-4-甲基-苯基)甲醇
[0339][0340]
将3-氟-4-甲基苯甲醛(3.00g，21.72mmol)、亚磷酸二乙酯(6.00g，43.43mmol)与三乙胺(88mg，0.87mmol)的混合物在50℃搅拌过夜。将所得沉淀物通过过滤分离，随后用et2o进行洗涤，以得到标题化合物，其为白色粉末(4605mg，77％)。1h nmr(400mhz，cdcl3)δ7.24-7.14(m，3h)，5.00(d，j＝10.6hz，1h)，4.21-3.97(m，4h)，2.31-2.28(m，3h)，1.44-1.13(m，6h)。
31
p nmr(162mhz，cdcl3)δ20.81。利用hrms(esi)计算c
12h18
fnao4p

[m na]

299.0819m/z，实测值299.0818m/z。
[0341]
b)4-[二乙氧基磷酰基(氟)甲基]-2-氟-1-甲基-苯
[0342][0343]
在0℃下，使用注射器向二乙氧基磷酰基-(3-氟-4-甲基-苯基)甲醇(1.00g，3.62mmol)在dcm(20ml)中的溶液中缓慢加入溶于dcm(2ml)中的二乙基氨基三氟化硫(876mg，5.43mmol)。将混合物在氮气气氛下于室温搅拌6h。将饱和na2co3水溶液倒入反应物中，并且将该混合物用dcm萃取3次。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水mgso4干燥，并且在减压下浓缩。利用柱层析法纯化粗产物(硅胶，1∶2(v/v)乙酸乙酯/己烷)，以得到淡黄色油状物(513mg，51％)。1h nmr(400mhz，cdcl3)δ7.26-7.21(m，1h)，7.20-7.14(m，2h)，5.65(dd，
j＝44.7，7.8hz，1h)，4.25-4.04(m，4h)，2.33-2.28(m，3h)，1.40-1.26(m，6h)。利用hrms(esi)计算c
12h17
f2nao3p

[m na]

301.0776m/z，实测值301.0774m/z。
[0344]
c)3-(2-氟-2-(3-氟-4-甲基苯基)乙烯基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯
[0345][0346]
将4-[二乙氧基磷酰基(氟)甲基]-2-氟-1-甲基-苯(100mg，0.36mmol)溶于thf(10ml)中，并且使其冷却至-78℃。在氮气下加入二异丙基氨基锂(50mg，0.47mmol)，并且将反应物在-78℃搅拌30min。在-78℃逐滴加入1-boc-氮杂环丁烷-3-甲醛(87mg，0.47mmol)，然后将混合物缓慢加温至rt并且搅拌过夜。倒入h2o以淬灭反应，并且将水层用etoac进行萃取。合并的有机层经无水mgso4干燥，过滤，浓缩，并且利用快速柱层析法进行纯化(硅胶，1∶10(v/v)乙酸乙酯/己烷)，以得到黄色油状物(44.3mg，40％)。1h nmr(400mhz，cdcl3)δ7.26-7.13(m，2h)，7.04-6.98(m，1h)，5.71-5.54(m，1h)，4.23and 4.18(t，j＝8.5hz，2h)，3.85-3.73(m，2h)，3.52-3.39(m，1h)，2.36-2.27(m，3h)，1.48and 1.46(s，9h)。利用hrms(esi)计算c
17h21
f2nnao
2
[m na]

332.1433m/z，实测值332.1433m/z。
[0347]
d)3-(2-氟-2-(3-氟-4-甲基苯基)乙烯基)氮杂环丁烷
[0348][0349]
在rt将3-(2-氟-2-(3-氟-4-甲基苯基)乙烯基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(87mg，0.28mmol)溶于2ml dcm中，并且用tfa(386mg，3.39mmol)进行处理。在起始材料耗尽后，将反应物用饱和na2co3水溶液中和，用dcm萃取，经mgso4干燥，并且在真空下浓缩。将粗产物直接应用下一步而不经进一步纯化。
[0350]
实例[
11
c]10
[0351]
[
11
c](4ar，8as)-6-[3-[2-氟-2-(3-氟-4-甲基-苯基)乙烯基]氮杂环丁烷-1-羰基]-4，4a，5，7，8，8a-六氢吡啶并[4，3-b][1，4]噁嗪-3-酮
[0352][0353]
应用上述一般程序，在第三步以3-(2-氟-2-(3-氟-4-甲基苯基)乙烯基)氮杂环丁烷(4.7μmol，0.98mg)作为前体。获得的产物具有高于99％的放射化学纯度以及39-53gbq/μmol的摩尔活度。
[0354]
magl抑制活性
[0355]
通过在天然底物2-花生四烯酰甘油水解得到花生四烯酸后测定酶促活性，分析化合物对magl的抑制活性，然后可进行质谱分析。该测定在在后文缩写为“2-ag测定”。
[0356]
2-ag测定在384孔测定板(pp，greiner目录号784201)中进行，总体积为20μl。在聚丙烯板中，利用3倍稀释步骤在100％dmso(vwr chemicals 23500.297)中制备化合物稀释液，以使测定的最终浓度范围为12.5μm至0.8pm。将0.25μl化合物稀释液(100％dmso)加入9μl测定缓冲液(50mm tris(gibco，15567-027)、1mm edta(fluka，03690-100ml)和0.01％(v/v)tween)中。振摇后，将板在室温下孵育15min。加入10μl 2-花生四烯酰甘油的测定缓冲液溶液，以开始反应。该测定中的最终浓度为50pm magl和8μm 2-花生四烯酰甘油。振摇并在室温下孵育30min后，加入40μl含4μm d8-花生四烯酸的乙腈淬灭反应。利用在线spe系统(agilent rapidfire)与三重四极杆质谱仪(agilent 6460)联用系统跟踪花生四烯酸的含量。在乙腈/水液体位置中，使用c18 spe小柱(g9205a)。质谱仪在负电喷雾模式下操作，花生四烯酸的质量离子对为303.1
→
259.1，d8-花生四烯酸的质量离子对为311.1
→
267.0。基于[花生四烯酸/d8-花生四烯酸]的强度比计算化合物的活性。
[0357]
表1
[0358]
[0359]
[0360][0361]3h配体的体外放射自显影
[0362]
对来自magl wt和ko小鼠(c57bl6/6ntac-mgllem4993_02tac)的新鲜冷冻脑的矢状切片进行受体放射自显影。在-17℃的腔室温度和-15℃的对象温度下将来自脑标本的组织切片(10μm)置于低温恒温器(leica cm3050)中切割，然后解冻后固定在显微镜载玻片
4.002版(pmod technologies)计算全脑时间-活性曲线，并且以suv表示，其指示每cm3的衰减校正后的放射性除以每克体重的注射剂量。图4显示了[
11
c]1在magl ko小鼠和对应的wt中的全脑时间活性曲线。