吡咯并嘧啶衍生物以及包含其作为活性成分的用于预防或治疗蛋白激酶相关的疾病的药物组合物的制作方法

1.本发明涉及一种吡咯并嘧啶衍生物和一种包含其作为活性成分的用于预防或治疗蛋白激酶相关的疾病的药物组合物。


背景技术：

2.蛋白激酶是一种酶，它催化将三磷酸腺苷(atp)的末端磷酸基团转移到蛋白质的特定残基(酪氨酸、丝氨酸、苏氨酸)上的反应，并且参与根据细胞外介质和环境变化调节细胞活化、生长和分化的信号。
3.不适当的高蛋白激酶活性直接或间接参与由异常细胞功能引起的各种疾病。例如，突变、过度表达或参与不适当的酶活性的激酶的适当调节机制的失效，或参与细胞因子或激酶的上游或下游信号转导的因子的过量产生或缺乏都可能导致疾病。因此，选择性抑制激酶活性可能是开发治疗疾病的新药的有益靶点。
4.脑癌是发生在脑组织和大脑脑膜的原发性脑癌和从颅骨或身体其他部位的癌症转移的继发性脑癌的总称。这种脑癌在很多方面都区别于其他器官中发生的其他癌症。首先，在肺癌、胃癌、乳腺癌等处发生的癌症仅限于每个器官的一种或两种类型的癌症，并且通常具有相同或相似的性质。然而，许多不同类型的癌症可以在大脑中发展。例如，多形性胶质母细胞瘤、恶性胶质瘤、淋巴瘤、母细胞瘤、转移瘤等可在脑中发展。
5.帕金森病是神经元慢性进行性退化的结果，但帕金森病的病因尚未完全确定。尽管主要原因尚不清楚，但帕金森病的特征是黑质(sn)中多巴胺能神经元的退化。黑质是下脑或脑干的一部分，有助于调节无意识运动。众所周知，由于这些神经元的丧失导致大脑中的多巴胺缺乏会引起可观察到的症状。在临床方面，帕金森病的主要症状表现为静止性震颤、肌强直、运动迟缓和姿势不稳。不仅是mao
‑
b抑制剂司来吉兰和comt抑制剂恩他卡朋，还有左旋多巴、多巴胺激动剂(例如，罗替戈汀、普拉克索、溴隐亭、罗匹尼罗、卡麦角林、培高利特、阿扑吗啡和麦角乙脲)、抗胆碱能药物、nmda拮抗剂和β
‑
受体阻滞剂用作缓解运动相关症状的药物。这些药物大多参与多巴胺和/或胆碱信号转导，通过这些药物影响帕金森病的典型运动功能障碍症状。
6.lrrk2(富亮氨酸重复激酶
‑
2)是属于富亮氨酸重复激酶家族的蛋白质，其序列为2,527个氨基酸，具有很高的种间相似性。其特征在于，它在一种蛋白质中同时包含gtp酶活性和丝氨酸
‑
苏氨酸激酶活性。在包括大脑在内的各种器官和组织中观察到表达的lrrk2，并且已知在细胞水平上存在于细胞质或细胞膜和线粒体外膜中。近年来，对lrrk2的确切体内功能的研究一直在积极进行。lrrk2具有5个功能重要的结构域，预计这些结构域参与通过自磷酸化进行的自我调节以及通过蛋白质相互作用和酶促作用进行的细胞功能调节。尤其是，已知分子伴侣机制、细胞骨架排列、蛋白质翻译机制、突触小泡内吞作用、丝裂原活化蛋白激酶信号级联反应和泛素/自噬蛋白降解途径受lrrk2调节。
7.帕金森病在大多数情况下是散发性的，但5
‑
10％的患者有该病的家族史。从使用
这些患者样本的研究中，已经鉴定了park 1
‑
16基因的位点，其中一些位点已被证实具有导致帕金森病的突变。已知通过突变引起帕金森病的帕金森病致病基因有帕金蛋白、pink1、dj
‑
1、α
‑
突触核蛋白、富亮氨酸重复激酶2(lrrk2)等。其中，lrrk2基因作为α
‑
突触核蛋白等同源染色体的显性基因于2004年首次被报道。与帕金森病的致病基因不同，由lrrk2突变引起的帕金森病患者的症状与散发性帕金森病患者的症状非常相似。lrrk2突变不仅存在于有家族史的帕金森病患者中，而且存在于1
‑
2％的散发性帕金森病患者中。因此，通过该基因的突变来确定帕金森病的发病机制，对于了解帕金森病的发病机制和开发治疗药物将非常有帮助。
8.此外，已知lrrk2参与与阿尔茨海默病相关的轻度认知障碍的转移、左旋多巴诱导的运动障碍、与神经元祖细胞分化相关的中枢神经系统疾病、癌症(例如脑癌、肾癌、乳腺癌、前列腺癌、血癌、肺癌)和急性骨髓性白血病、乳头状肾癌和甲状腺癌、多发性骨髓瘤、肌萎缩侧索硬化、类风湿性关节炎和强直性脊柱炎。因此，有效调节lrrk2活性的化合物或组分可提供对神经退行性疾病、中枢神经系统疾病、癌症、急性骨髓性白血病和多发性骨髓瘤、炎性疾病等的治疗作用。
9.[相关技术文献]
[0010]
[非专利文献]
[0011]
acs med.chem.lett.,2013,4(1),pp 85
‑
90


技术实现要素：

[0012]
[技术问题]
[0013]
本发明的目的在于提供一种吡咯并嘧啶衍生物。
[0014]
本发明的另一个目的在于提供一种用于预防或治疗蛋白激酶相关的疾病的药物组合物。
[0015]
本发明的另一个目的在于提供一种预防或治疗蛋白激酶相关的疾病的方法。
[0016]
本发明的又一个目的在于提供一种吡咯并嘧啶衍生物或其药学上可接受的盐在制备用于预防或治疗蛋白激酶相关的疾病的药物中的用途。
[0017]
[技术方案]
[0018]
为解决以上问题，
[0019]
根据本发明的一个方面，提供了由下式1表示的化合物或其异构体、其溶剂化物、其水合物或其药学上可接受的盐：
[0020]
[式1]
[0021][0022]
(其中，
[0023]
a表示碳原子或氮原子，
[0024]
r1是氢、或直链或支链的c1‑6烷氧基，并且r2是氢，或
[0025]
r1和r2与包含它们所键合的碳原子的苯环一起形成包含一个或多个选自由n、o和s组成的组的杂原子的8
‑
至10
‑
元双环，
[0026]
l1是磺酰基或羰基，或是不存在，
[0027]
当l1是磺酰基或羰基时，r3是直链或支链的c1‑6烷基、吗啉基、哌啶基、哌嗪基、吡咯烷基、氨基、2
‑
氧杂
‑5‑
氮杂双环[2.2.1]庚基、或氮杂环丁烷基，其中r3未被取代或被一个或多个选自由如下组成的组的非氢取代基取代：吗啉基、氧杂环丁烷基、2
‑
氧杂
‑5‑
氮杂双环[2.2.1]庚基、哌嗪基、哌啶基、c3‑9环烷基和直链或支链的c1‑6烷基，其中r3的非氢取代基未被取代或被选自由如下组成的组的取代基取代：羟基、c3‑9环烷基和直链或支链的c1‑6烷基，
[0028]
当l1是不存在时，r3是氮杂膦氧化物或磷酰基，其中r3未被取代或被一个或多个选自由如下组成的组的非氢取代基取代：氧杂环丁烷基、c3‑9环烷基、直链或支链的c1‑6烷基、乙烯基、四氢吡喃基和苄基，其中r3的非氢取代基未被取代或被c1‑6烷氧基取代，
[0029]
r4是氢或卤素，
[0030]
l2是
‑
nh
‑
或
‑
o
‑
，或是不存在，
[0031]
当l2是
‑
nh
‑
或
‑
o
‑
时，r5选自由如下组成的组：直链或支链的c1‑6烷基、c3‑9环烷基、含有一个或多个o(氧)原子作为杂原子的3
‑
至9
‑
元杂环烷基和烯丙基，其中r5未被取代或被一个或多个选自由如下组成的组的的非氢取代基取代：c3‑9环烷基、c1‑6烷基磺酰基、c1‑6烷氧基和c1‑6烷基，
[0032]
当l2是不存在时，r5是直链或支链的c1‑6烷基或c3‑9环烷基，并且
[0033]
r6是氢、氰基或c1‑6卤代烷基)。
[0034]
根据本发明的另一方面，提供了一种用于预防或治疗蛋白激酶相关的疾病的药物组合物，其包含式1的化合物或其异构体、其溶剂化物、其水合物或其药学上可接受的盐作为活性成分。
[0035]
根据本发明的另一方面，提供了一种预防或治疗蛋白激酶相关疾病的方法，其包括向有需要的受试者施用包含式1的化合物或其异构体、其溶剂化物、其水合物或其药学上可接受的盐作为活性成分的药物组合物。
[0036]
根据本发明的又一方面，提供了用于预防或治疗蛋白激酶相关的疾病的由式1表示的化合物或其立体异构体、其溶剂化物、其水合物或药学上可接受的盐。
[0037]
根据本发明的又一方面，提供了一种由式1表示的化合物或其立体异构体、溶剂化物、其水合物或其药学上可接受的盐在制备用于预防或治疗蛋白激酶相关疾病的药物中的用途。
[0038]
[有益效果]
[0039]
根据本发明的吡咯并嘧啶衍生物对包括lrrk2在内的多种蛋白激酶具有优异的抑制活性，并且对三阴性乳腺癌细胞的增殖有优异的抑制作用。因此，包含吡咯并嘧啶衍生物作为活性成分的药物组合物可用于治疗或预防蛋白激酶相关疾病，尤其是癌症、退行性脑病和炎症性疾病，并且特别地可用于治疗三阴性乳腺癌。
附图说明
[0040]
图1至图3是展示根据本发明的化合物抑制lrrk2磷酸化的实验结果的图像。
具体实施方式
[0041]
在下文中，将详细描述本发明。
[0042]
在本说明书中，术语“卤素”可以是f、cl、br或i。
[0043]
在本说明书中，术语“卤代烷基”可以指具有被一个或多个本文定义的卤原子取代的碳原子的直链或支链的烷基(烃)。卤代烷基的实施例包括甲基、乙基、丙基、异丙基、异丁基和正丁基，它们独立地被一个或多个卤原子取代，例如f、cl、br和i，但本发明不限于此。
[0044]
在本说明书中，术语“烷基”可以指由碳原子组成的直链或支链的无环饱和烃。代表性的
‑
(c1‑8烷基)包括
‑
甲基、
‑
乙基、
‑
n
‑
丙基、
‑
n
‑
丁基、
‑
n
‑
戊基、
‑
n
‑
己基、
‑
n
‑
庚基和
‑
n
‑
辛基；支链饱和烷基可包括
‑
异丙基、
‑
仲(仲)
‑
丁基、
‑
异丁基、
‑
叔(叔)
‑
丁基、
‑
异戊基、2
‑
甲基戊基、3
‑
甲基戊基、4
‑
甲基戊基、2，3
‑
二甲基丁基等。
‑
(c1‑8烷基)也可以被取代或未被取代。例如，c1‑8烷基可以被苯基取代以形成苄基。
[0045]
在本说明书中，术语“环烷基”可以指非芳香性的、饱和的或不饱和的碳环。代表性的环烷基包括环丙基、环丁基、环戊基、环戊二烯基、环己基、环己烯基、1,3
‑
环己二烯基、1,4
‑
环己二烯基、环庚基、1,3
‑
环庚二烯基、1,3,5
‑
环庚三烯基和环辛基，但本发明不限于此。环烷基可以被取代或未被取代。根据一个实施方案，该环烷基可以是c3‑8环烷基。
[0046]
在本说明书中，术语“杂环烷基”可以指饱和或部分未取代的环状取代基，其环原子总数为3至10个，并含有1至5个选自n、o和s的杂原子。除非另有说明，否则杂环烷基可以是单环、双环、螺环或多环的形式。此外，杂环烷基可包含与一种或多种元素桥连的环。杂环烷基可以通过一个或多个环碳或杂原子连接到分子的其余部分。杂环烷基的实施例包括吡咯烷、哌啶、n
‑
甲基哌啶、咪唑烷、吡唑烷、丁内酰胺、戊内酰胺、咪唑烷酮、乙内酰脲、二氧戊环、邻苯二甲酰亚胺、哌啶、嘧啶
‑
2,4(1h,3h)
‑
二酮、1,4
‑
二噁烷、吗啉、硫代吗啉、硫代吗啉
‑
s
‑
氧化物、硫代吗啉
‑
s,s
‑
氧化物、哌嗪、吡喃、吡啶酮、3
‑
吡咯啉、噻喃、吡喃酮、四氢呋喃、四氢噻吩、奎宁环、托烷、2
‑
氮杂螺[3.3]庚烷，(1r,5s)
‑3‑
氮杂双环[3.2.1]辛烷，(1s,4s)
‑2‑
氮杂双环[2.2.2]辛烷，(1r,4r)
‑2‑
氧杂
‑5‑
氮杂双环[2.2.2]辛烷等，但本发明不限于此。
[0047]
在本说明书中，术语“芳基”可以指通过从芳烃环去除一个氢原子而衍生的任何官能团或取代基。芳基可以是单环芳基或多环芳基。芳基可具有5个以上且30个以下、5个以上且20个以下、或5个以上且15个以下的成环碳原子。芳基的实施例可包括苯基、萘基、芴基、蒽基、菲基、联苯基、三联苯基、四联苯基、五联苯基、六联苯基、三亚苯基、芘基、苯并荧蒽基、苯并菲基等，但本发明不限于此。
[0048]
在本说明书中，术语“杂芳基”可以指包含选自o、n、p、si和s中的一种或多种作为杂原子的芳环基团。杂芳基可具有2个以上且30个以下、或2个以上且20个以下的成环碳原子。杂芳基可以是单环杂芳基或多环杂芳基。例如，多环杂芳基可以具有双环或三环结构。杂芳基的实施例可包括噻吩基、噻吩、呋喃基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、噻唑基、噁唑基、异噻唑基、噁二唑基、三唑基、吡啶基、联吡啶基、嘧啶基、三嗪基、三唑基、丙烯基、哒嗪基、吡嗪基、喹啉基、喹唑啉、喹喔啉基、苯噁唑基、酞嗪基、嘧啶基、吡啶并嘧啶基、吡啶并吡嗪基、
吡嗪并吡嗪基、异喹啉、吲哚、咔唑、咪唑并哒嗪基、咪唑并吡啶基、咪唑并嘧啶基、吡唑并嘧啶基、咪唑并吡嗪基或吡唑并吡啶基、n
‑
芳基咔唑、n
‑
杂芳基咔唑、n
‑
烷基咔唑基、苯并噁唑、苯并咪唑、苯并噻唑、苯并咔唑、苯并噻吩、二苯并噻吩基、噻吩并噻吩、苯并呋喃基、菲咯啉、异噁唑基、噁二唑基、噻二唑基、苯并噻唑基、四唑基、吩噻嗪基、二苯甲硅烷基、二苯并呋喃基等，但本发明不限于此。根据本发明的一个实施方案，所述杂芳基还可包括双环杂环芳基，其包括稠合至杂环烷基环的芳环或稠合至环烷基环的杂芳基。
[0049]
本发明提供由下式1表示的化合物或其异构体、其溶剂化物、其水合物或其药学上可接受的盐。
[0050]
[式1]
[0051][0052]
(其中，
[0053]
a表示碳原子或氮原子，
[0054]
r1是氢、或直链或支链的c1‑6烷氧基，并且r2是氢，或
[0055]
r1和r2与包含它们所键合的碳原子的苯环一起形成包含一个或多个选自由n、o和s组成的组的杂原子的8
‑
至10
‑
元双环，
[0056]
l1是磺酰基或羰基，或是不存在，
[0057]
当l1是磺酰基或羰基时，r3是直链或支链的c1‑6烷基、吗啉基、哌啶基、哌嗪基、吡咯烷基、氨基、2
‑
氧杂
‑5‑
氮杂双环[2.2.1]庚基、或氮杂环丁烷基，其中r3未被取代或被一个或多个选自由如下组成的组的非氢取代基取代：吗啉基、氧杂环丁烷基、2
‑
氧杂
‑5‑
氮杂双环[2.2.1]庚基、哌嗪基、哌啶基、c3‑9环烷基和直链或支链的c1‑6烷基，其中r3的非氢取代基未被取代或被选自由如下组成的组的取代基取代：羟基、c3‑9环烷基和直链或支链的c1‑6烷基，
[0058]
当l1是不存在时，r3是氮杂膦氧化物或磷酰基，其中r3未被取代或被一个或多个选自由如下组成的组的非氢取代基取代：氧杂环丁烷基、c3‑9环烷基、直链或支链的c1‑6烷基、乙烯基、四氢吡喃基和苄基，其中r3的非氢取代基未被取代或被c1‑6烷氧基取代，
[0059]
r4是氢或卤素，
[0060]
l2是
‑
nh
‑
或
‑
o
‑
，或是不存在，
[0061]
当l2是
‑
nh
‑
或
‑
o
‑
时，r5选自由如下组成的组：直链或支链的c1‑6烷基、c3‑9环烷基、含有一个或多个o(氧)原子作为杂原子的3
‑
至9
‑
元杂环烷基和烯丙基，其中r5未被取代或被一个或多个选自由如下组成的组的的非氢取代基取代：c3‑9环烷基、c1‑6烷基磺酰基、c1‑6烷氧基和c1‑6烷基，
[0062]
当l2是不存在时，r5是直链或支链的c1‑6烷基或c3‑9环烷基，并且
[0063]
r6是氢、氰基或c1‑6卤代烷基)。
[0064]
根据本发明的另一个实施方案，在式1表示的化合物中，
[0065]
a表示碳原子或氮原子，
[0066]
r1是氢或直链或支链的c1‑3烷氧基，r2是氢，
[0067]
l1是磺酰基或羰基，或是不存在，
[0068]
当l1是磺酰基或羰基时，r3是直链或支链的c1‑3烷基、吗啉基、哌啶基、哌嗪基、吡咯烷基、氨基、2
‑
氧杂
‑5‑
氮杂双环[2.2.1]庚基或氮杂环丁烷基，其中r3未被取代或被一个或多个选自由如下组成的组的非氢取代基取代：吗啉基、氧杂环丁烷基、2
‑
氧杂
‑5‑
氮杂双环[2.2.1]庚基、哌嗪基、哌啶基、c3‑6环烷基和直链或支链的c1‑3烷基，其中r3的非氢取代基未被取代或被选自由如下组成的组的取代基取代：羟基、c3‑6环烷基和直链或支链的c1‑3烷基，
[0069]
当l1不存在时，r3是氮杂膦氧化物或磷酰基，其中r3未被取代或被一个或多个选自由如下组成的组的非氢取代基取代：氧杂环丁烷基、c3‑6环烷基、直链或支链的c1‑3烷基、乙烯基、四氢吡喃基和苄基，其中r3的非氢取代基未被取代或被c1‑3烷氧基取代，
[0070]
r4是氢、f、cl或br，
[0071]
l2是
‑
nh
‑
或
‑
o
‑
，或是不存在，
[0072]
当l2是
‑
nh
‑
或
‑
o
‑
时，r5选自由如下组成的组：直链或支链的c1‑5烷基、c3‑8环烷基、含有一个或多个o(氧)原子作为杂原子的3
‑
至6
‑
元杂环烷基和烯丙基，其中r5未被取代或被一个或多个选自由如下组成的组的非氢取代基取代：c3‑6环烷基、c1‑3烷基磺酰基、c1
‑
3烷氧基和c1‑3烷基，
[0073]
当l2是不存在时，r5是直链或支链的c1‑3烷基或c3‑6环烷基，并且
[0074]
r6是氢、氰基或三氟甲基。
[0075]
根据本发明的另一实施方案，在式1表示的化合物中，
[0076]
a表示碳原子，
[0077]
r1和r2与包含它们键合的碳原子的苯环一起形成包含一个或多个o(氧)原子作为杂原子的9
‑
至10
‑
元双环，
[0078]
l1是磺酰基或羰基，
[0079]
r3是直链或支链的c1‑3烷基，或是吗啉基、哌啶基、哌嗪基、吡咯烷基、氨基、2
‑
氧杂
‑5‑
氮杂双环[2.2.1]庚基或氮杂环丁烷基，其中r3未被取代或被一个或多个选自由如下组成的组的非氢取代基取代：吗啉基、氧杂环丁烷基、2
‑
氧杂
‑5‑
氮杂双环[2.2.1]庚基、哌嗪基、哌啶基、c3‑6环烷基和直链或支链的c1‑3烷基，其中r3的非氢取代基未被取代或被选自由如下组成的组的取代基取代：羟基、c3
‑
6环烷基和直链或支链的c1
‑
3烷基，
[0080]
r4是氢、f、cl或br，
[0081]
l2是
‑
nh
‑
或
‑
o
‑
，或是不存在，
[0082]
当l2是
‑
nh
‑
或
‑
o
‑
时，r5选自由如下组成的组：直链或支链的c1‑5烷基、c3‑8环烷基、包含一个或多个o(氧)原子作为杂原子的3
‑
至6
‑
元杂环烷基和烯丙基，其中r5未被取代或被一个或多个选自由如下组成的组的非氢取代基取代：c3‑6环烷基、c1‑3烷基磺酰基、c1‑3烷氧基和c1‑3烷基，
[0083]
当l2不存在时，r5是直链或支链的c1‑3烷基或c3‑6环烷基，并且
[0084]
r6是氰基或三氟甲基。
[0085]
根据本发明的又一实施方案，
[0086]
r1和r2与包含它们所键合的碳原子的苯环一起可形成包含一个或多个o(氧)原子作为杂原子的9
‑
至10
‑
元双环。具体地，9
‑
至10
‑
元双环可以是二氢苯并二噁英、二氢苯并呋喃或苯并二氧杂环戊烷，并且更具体地可以是2,3
‑
二氢苯并[b][1,4]二噁英、苯并[d][1,3]二氧杂环戊烷或2,3
‑
二氢苯并呋喃。
[0087]
根据本发明的又一实施方案，在式1表示的化合物中，
[0088]
a表示碳原子，
[0089]
r1和r2与包含它们键合的碳原子的苯环一起形成包含一个或多个o(氧)原子作为杂原子的9
‑
至10
‑
元双环，并且所述9
‑
至10
‑
元双环是二氢苯并二噁英或二氢苯并呋喃，
[0090]
l1是磺酰基，
[0091]
r3是哌啶基，其中所述哌啶基未被取代或被吗啉基取代，
[0092]
r4是氢，
[0093]
l2是
‑
nh
‑
，或是不存在，
[0094]
r5是直链或支链的c1‑5烷基或c3‑8环烷基，并且
[0095]
r6是三氟甲基。
[0096]
根据本发明的又一实施方案，在式1表示的化合物中，
[0097]
a表示碳原子，
[0098]
r1是直链或支链的c1‑3烷氧基，r2是氢，
[0099]
l1是磺酰基，
[0100]
r3是直链或支链的c1‑3烷基、吗啉基或哌啶基，其中r3未被取代或被吗啉基或2
‑
氧杂
‑5‑
氮杂双环[2.2.1]庚基取代，
[0101]
r4是氢，
[0102]
l2是
‑
nh
‑
或
‑
o
‑
，或是不存在，
[0103]
当l2为
‑
nh
‑
时，r5选自由如下组成的组：直链或支链的c1‑5烷基、c3‑8环烷基、包含一个或多个o(氧)原子作为杂原子的3
‑
至6
‑
元杂环烷基和烯丙基，其中r5未被取代或被一个或多个选自由如下组成的组的非氢取代基取代：c3‑6环烷基、c1‑3烷基磺酰基、c1‑3烷氧基和c1‑3烷基，
[0104]
当l2是
‑
o
‑
时，r5被直链或支链的c1‑5烷基取代，
[0105]
当l2是不存在时，r5是直链或支链的c1‑3烷基或c3‑6环烷基，并且
[0106]
r6是氢、氰基或三氟甲基。
[0107]
根据本发明的又一实施方案，在式1表示的化合物中，
[0108]
a表示碳原子，
[0109]
r1是氢或直链或支链的c1‑3烷氧基，r2是氢，
[0110]
l1是不存在，
[0111]
r3选自氮杂膦氧化物和磷酰基，其中r3未被取代或被一个或多个选自由如下组成的组的非氢取代基取代：氧杂环丁烷基、c3‑6环烷基、直链或支链的c1‑3烷基、乙烯基、四氢吡喃基和苄基，其中r3的非氢取代基未被取代或被c1‑3烷氧基取代，
[0112]
r4是氢，
[0113]
l2是
‑
nh
‑
，或是不存在，
[0114]
当l2为
‑
nh
‑
时，r5选自由如下组成的组：直链或支链的c1‑5烷基、c3‑8环烷基、包含一
个或多个o(氧)原子作为杂原子的3
‑
至6
‑
元杂环烷基和烯丙基，其中r5未被取代或被一个或多个选自由如下组成的组的非氢取代基取代：c3‑6环烷基、c1‑3烷基磺酰基、c1‑3烷氧基和c1‑3烷基，
[0115]
当l2是不存在时，r5是直链或支链的c1‑3烷基或c3‑6环烷基，并且
[0116]
r6是氢、氰基或三氟甲基。
[0117]
根据本发明的又一实施方案，
[0118]
l1‑
r3可以是可以是
[0119][0120]
根据本发明的又一实施方案，在式1表示的化合物中，
[0121]
r5可以是甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、甲氧基乙基、乙氧基乙基、ch3och2ch(ch3)
‑
、ch3och2c(ch3)2‑
、环丙基甲基、二甲基氨基乙基、甲基磺酰基乙基、环丁基甲基或环戊基甲基。具体地，r5可以是甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、甲氧基乙基、环丙基甲基、甲基磺酰基乙基、环丁基甲基或环戊基甲基。
[0122]
本发明的由式1表示的化合物可以以药学上可接受的盐的形式使用，并且由药学上可接受的游离酸形成的酸加成盐用作盐是有用的。所述酸加成盐得自无机酸，如盐酸、硝酸、磷酸、硫酸、氢溴酸、氢碘酸、亚硝酸、亚磷酸等；无毒有机酸，如脂肪族单羧酸盐和二羧酸盐、苯基取代的链烷酸酯、羟基链烷酸酯和链烷二酸酯、芳族酸以及脂族和芳族磺酸；或有机酸，如三氟乙酸、乙酸、苯甲酸、柠檬酸、乳酸、马来酸、葡萄糖酸、甲磺酸、4
‑
甲苯磺酸、酒石酸和富马酸。这种药学无毒盐的类型包括硫酸盐、焦硫酸盐、硫酸氢盐、亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、硝酸盐、磷酸盐、磷酸一氢盐、磷酸二氢盐、甲基磷酸盐、焦磷酸盐氯化物、溴化物、碘化物、氟化物、醋酸盐、丙酸盐、癸酸盐、辛酸盐、丙烯酸盐、甲酸盐、异丁酸盐、癸酸盐、庚酸盐、丙酸盐、丙二酸盐、丙二酸盐、草酸、辛二酸盐、癸二酸盐、富马酸盐、马来酸盐、丁炔
‑
1,4
‑
二酸盐、己烷
‑
1,6
‑
二酸盐、苯甲酸盐、氯苯甲酸盐、苯甲酸甲盐、二硝基苯甲酸盐、羟基苯甲酸盐、甲氧基苯甲酸盐、邻苯二甲酸盐、对苯二甲酸盐、苯磺酸盐、甲苯磺酸盐、氯苯磺酸盐、苯乙酸盐、苯丙酸盐、苯丁酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、β
‑
羟基丁酸盐、乙醇酸盐、马来酸盐、酒石酸盐、甲磺酸盐、丙磺酸盐、萘
‑1‑
磺酸盐、萘
‑2‑
磺酸盐和扁桃酸盐等。
[0123]
本发明的酸加成盐可以使用常规方法制备。例如，本发明的酸加成盐可以通过将式1的衍生物溶解于有机溶剂例如甲醇、乙醇、丙酮、二氯甲烷、乙腈等中来制备，向其中加入有机酸或无机酸形成沉淀，过滤并干燥沉淀，或减压蒸馏溶剂和过量的酸，干燥馏出液，然后将馏出液在有机溶剂中结晶。
[0124]
此外，可使用碱制备药学上可接受的金属盐。碱金属或碱土金属盐例如通过将化合物溶解于过量的碱金属氢氧化物或碱土金属氢氧化物溶液中，过滤未溶解的化合物盐，将滤液蒸发干燥而得到。在这种情况下，金属盐在药学上适用于制备钠盐、钾盐或钙盐。此外，对应于金属盐的盐是通过使碱金属或碱土金属盐与合适的银盐(例如硝酸银)反应而获得的。
[0125]
根据本发明的由式1表示的化合物或其药学上可接受的盐的实施例可包括以下实施例中的[表1]中所列的实施例1至477的化合物或其药学上可接受的盐。
[0126]
此外，本发明包括所有类型的由式1表示的化合物或其药学上可接受的盐，以及可由其制备的溶剂化物、旋光异构体、水合物等。
[0127]
术语“水合物”是指本发明的化合物或其盐，其包含通过非共价分子间力结合的化学计量或非化学计量量的水。本发明的由式1表示的化合物的水合物可包含通过非共价分子间力结合的化学计量或非化学计量的水。水合物可含有1当量或更多当量，优选1当量至5当量的水。这种水合物可以通过使本发明的由式1表示的化合物或其异构体或其药学上可接受的盐从水或含水溶剂中结晶来制备。
[0128]
术语“溶剂化物”是指本发明的化合物或其盐，其包含通过非共价分子间力结合的化学计量或非化学计量量的溶剂。溶剂化物的优选溶剂可包括挥发性溶剂、无毒溶剂和/或适合施用于人类的溶剂。
[0129]
术语“异构体”是指具有相同化学式或分子式但在结构或三维方面不同的本发明化合物或其盐。这种异构体包括所有类型的结构异构体，例如互变异构体等；具有不对称碳中心的r或s异构体；立体异构体，例如几何异构体(反式或顺式)等；旋光异构体(对映异构体)等。此外，所有类型的这些异构体及其混合物均落入本发明的范围内。
[0130]
如下方案a所示，本发明又一方面提供了一种制备由式1表示的化合物的方法，包括：
[0131]
将由式4表示的化合物与由式3表示的化合物反应以制备由式2表示的化合物(步骤1)；并且
[0132]
将由式2表示的化合物反应以制备由式1表示的化合物(步骤2)。
[0133]
[方案a]
[0134][0135]
(其中，
[0136]
r1、r2、r3、r4、r5、r6、l1和l2如式1中所定义；
[0137]
sem是保护基；并且
[0138]
x是卤素)。
[0139]
在如方案a所示的式1的化合物的制备方法中，
[0140]
步骤1是将由式4所示化合物的伯胺与由式3所示化合物的卤素反应以制备其中形成胺键的由式2所示化合物的步骤。在这种情况下，胺与卤素反应形成胺键的条件没有限
制，可以使用本领域公知的方法。在本发明中，反应可以按照与实施例1相同的方式进行，但这仅仅是一个实施例，本发明不限于此。
[0141]
步骤2为将由式2所示化合物的胺保护基脱保护制备由式1表示的化合物的步骤。在这种情况下，去除胺保护基团的条件没有限制，可以使用本领域公知的方法。在本发明中，反应可以按照与实施例1相同的方式进行，但这仅仅是一个实施例，本发明不限于此。保护基团的实施例可包括2
‑
(三甲基硅烷基)乙氧基甲基、三甲基硅烷基(tms)基团、苄基、乙酰基等。
[0142]
本发明的又一方面提供了一种用于预防或治疗蛋白激酶相关疾病的药物组合物，其包括由式1表示的化合物或其异构体、其溶剂化物、其水合物或其药学上可接受的盐作为活性成分。
[0143]
本发明还提供了一种预防或治疗蛋白激酶相关疾病的方法，其包括：向有需要的受试者施用包含式1的化合物或其药学上可接受的盐作为活性成分的药物组合物。
[0144]
所述蛋白激酶可包括选自由如下组成的组的一种或多种：clk1、clk2、clk3、clk4、csnk1d、csnk1e、dyrk1a、dyrk1b、dyrk2、fak、gak、lrrk2、lrrk2(g2019s)、phkg1、phkg2、pkk2plk和ttk。具体地，所述蛋白激酶可包含选自由如下组成的组的一种或多种：lrrk2、lrrk2(g2019s)、dyrk1、clk1和ttk。
[0145]
蛋白激酶相关的疾病可包括选自由如下组成的组的一种或多种：癌症、退行性脑病和炎性疾病。
[0146]
退行性脑病可以包括选自由如下组成的组的一种或多种：阿尔茨海默病、帕金森病、葛雷克氏症、痴呆、亨廷顿病、多发性硬化、近端侧索硬化、脑卒中、中风和轻度认知障碍。
[0147]
炎性疾病可以包括选自由如下组成的组的一种或多种：皮炎、过敏、胃溃疡、十二指肠溃疡、肝炎、食道炎、胃炎、肠炎、胰腺炎、结肠炎、肾炎、全身水肿、局部水肿、关节炎、角膜炎、支气管炎、胸膜炎、腹膜炎、脊椎炎、炎性疼痛、尿道炎、膀胱炎、牙周炎和牙龈炎。
[0148]
癌症可以包括选自由如下组成的组的一种或多种：三阴性乳腺癌、脑癌、脑肿瘤、良性星形细胞瘤、恶性星形细胞瘤、垂体腺瘤、脑膜瘤、脑淋巴瘤、少突胶质细胞瘤、颅内癌、室管膜瘤、脑干肿瘤、头颈部肿瘤、喉癌、口咽癌、鼻腔/鼻窦癌、鼻咽癌、唾液腺癌、下咽癌、甲状腺癌、口腔癌、胸部肿瘤、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、胸腺癌、纵隔肿瘤、食管癌、乳腺癌、男性乳腺癌、腹部肿瘤、胃癌、肝癌、胆囊癌、胆道癌、胰腺癌、小肠癌、结肠癌、直肠癌、肛门癌、膀胱癌、肾癌、男性生殖器肿瘤、阴茎癌、前列腺癌、女性生殖器肿瘤、宫颈癌、子宫内膜癌、卵巢癌、子宫肉瘤、阴道癌、女性外生殖器细胞癌、女性尿道癌和皮肤癌。
[0149]
本发明的由式1表示的化合物具有抑制选自由如下组成的组的一种或多种蛋白激酶的作用：clk1、clk2、clk3、clk4、csnk1d、csnk1e、dyrk1a、dyrk1b、dyrk2、fak、gak、lrrk2、lrrk2(g2019s)、phkg1、phkg2、plk4、pyk2和ttk，具体地，一种或多种蛋白激酶选自由如下组成的组：lrrk2、lrrk2(g2019s)、dyrk1、clk1和ttk。因此，本发明的由式1表示的化合物可有用地用于用于预防或治疗蛋白激酶相关的疾病的药物组合物中。
[0150]
此外，本发明的由式1表示的化合物抑制三阴性乳腺癌细胞的增殖。因此，本发明的由式1表示的化合物可有效地用于治疗三阴性乳腺癌。
[0151]
此外，因为本发明的由式1表示的化合物有效地抑制致癌细胞中的lrrk2磷酸化，
所以本发明的由式1表示的化合物可有用地用于用于预防或治疗lrrk2相关的疾病的药物组合物。
[0152]
药物组合物可包含治疗有效量的本发明的化合物。此外，药物组合物还可包含药学上可接受的载体。
[0153]
临床施用时，由式1表示的化合物或其药学上可接受的盐可以以各种口服和肠胃外制剂的形式施用。当配制组合物时，可以使用常用的稀释剂或赋形剂例如填充剂、增量剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、表面活性剂等来制备组合物。一种口服固体制剂，包括片剂、丸剂、散剂、颗粒剂、胶囊剂等。这种固体制剂通过将至少一种或多种赋形剂例如淀粉、碳酸钙、蔗糖或乳糖、明胶等与一种或多种化合物混合来制备。此外，除了简单的赋形剂之外，还使用润滑剂如硬脂酸镁、滑石等。口服液剂包括混悬液、内服液、乳剂、糖浆剂等。在这种情况下，口服液体制剂除了通常使用的简单稀释剂如水和液体石蜡之外，还可以包含各种赋形剂，如润湿剂、甜味剂、芳香剂、防腐剂等。肠胃外施用制剂包括无菌水溶液、非水溶剂、混悬液和乳剂。丙二醇、聚乙二醇、植物油(如橄榄油)、可注射的酯(如油酸乙酯)等可用作非水溶剂和悬浮液。
[0154]
包含由式1表示的化合物或其药学上可接受的盐作为活性成分的药物组合物可以胃肠外施用，胃肠外施用的方式为皮下注射、静脉注射、肌肉注射或胸腔内注射。
[0155]
在这种情况下，为了制备成肠胃外施用的制剂，将式1表示的化合物或其药学上可接受的盐与稳定剂或缓冲剂在水中混合以制备溶液或悬浮液，然后将其制备成安瓿或小瓶的单位剂型。该组合物可以被灭菌和/或另外包含佐剂，例如防腐剂、稳定剂、润湿剂或乳化剂、用于调节渗透压的盐和/或缓冲剂，以及其他治疗上有用的材料。在这种情况下，可以使用常规方法例如混合、造粒或包衣来配制组合物。
[0156]
例如，用于口服施用的剂型包括片剂、丸剂、硬/软胶囊、液体、悬浮剂、乳化剂、糖浆剂、颗粒剂、酏剂、锭剂等。在这种情况下，除了活性成分之外，这些制剂还包含稀释剂(例如，乳糖、右旋糖、蔗糖、甘露醇、山梨糖醇、纤维素和/或甘氨酸)和润滑剂(例如，二氧化硅、滑石、硬脂酸及其镁盐或钙盐，和/或聚乙二醇)。片剂可含有粘合剂，例如硅酸镁铝、淀粉糊、明胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮，并且在需要时可以含有崩解剂(淀粉、琼脂、藻酸或其钠盐等)或沸腾混合物和/或吸收剂、着色剂、调味剂和甜味剂。
[0157]
根据本发明的又一方面，提供了用于预防或治疗蛋白激酶相关疾病的由式1表示的化合物或其立体异构体或其药学上可接受的盐。
[0158]
根据本发明的又一方面，提供了由式1表示的化合物或其立体异构体或其药学上可接受的盐在制备用于预防或治疗蛋白激酶相关的疾病的药物中的用途。
[0159]
蛋白激酶和与蛋白激酶相关的疾病如上所述，因此将省略其具体描述以避免冗余。
[0160]
在下文中，将参考如下所述的实施例和实验例详细描述本发明。
[0161]
然而，应当理解，下面描述的实施例和实验例是为了说明本发明的目的而给出的，并不旨在限制本发明的范围。
[0162]
<分析和纯化条件>
[0163]
本发明实施例中合成的化合物在以下hplc条件下进行纯化和结构分析。
[0164]
1.制备型hplc条件
[0165]
分析方法1：lc
‑
ms l：5
‑
95ab_r_220&254
[0166]
设备使用shimadzu lcms
‑
2020，程序使用labsolution版本5.82sp1。色谱柱使用chromolith@flash rp
‑
18e 25
‑
2mm，以及流动相使用a：0.0375％tfa水溶液(v/v)和b：0.01875％tfa乙腈溶液(v/v)。
[0167]
梯度：0.0min 5％b
→
0.80min 95％b
→
1.2min 95％b
→
1.21min 5％b
→
1.5min 5％b；流速：1.5ml/min；柱温：50℃；检测器：pda(220nm&254nm)
[0168]
分析方法2：lc
‑
ms i：5
‑
95ab_r_220&254
[0169]
设备使用shimadzu lcms
‑
2020，程序使用labsolution版本5.72。色谱柱使用kinetex@5um evo c18 30*2.1mm，以及流动相使用a：0.0375％tfa水溶液(v/v)和b：0.01875％tfa乙腈溶液(v/v)。
[0170]
梯度：0.0min 5％b
→
0.80min 95％b
→
1.2min 95％b
→
1.21min 5％b
→
1.5min 5％b；流速：1.5ml/min；柱温：50℃；检测器：pda(220nm&254nm)
[0171]
分析方法3：lc
‑
ms p：5
‑
95ab_r_220&254
[0172]
设备使用shimadzu lcms
‑
2020，程序使用labsolution版本5.89。色谱柱使用kinetex evo c18 2.1x30 mm,5μm，并且流动相使用a：0.0375％tfa水溶液(v/v)和b：0.01875％tfa乙腈溶液(v/v)。
[0173]
梯度：0.0min 5％b
→
0.80min 95％b
→
1.2min 95％b
→
1.21min 5％b
→
1.5min 5％b；流速：1.5ml/min；柱温：50℃；检测器：pda(220nm&254nm)
[0174]
分析方法4：lc
‑
ms b：5
‑
95ab_r_220&254.m
[0175]
设备使用agilent 1200/g6110a，程序使用agilent chemstation rev.b.04.03[54]。色谱柱使用kinetex@5um evo c18 30*2.1mm，并且流动相使用a：0.0375％tfa水溶液(v/v)和b：0.01875％tfa乙腈溶液(v/v)。
[0176]
梯度：0.01min 5％b
→
0.80min 95％b
→
1.2min 95％b
→
1.21min 5％b
→
1.5min 5％b；流速：1.5ml/min；柱温：50℃；检测器：dad(220&254nm)
[0177]
分析方法5：lc
‑
ms e：5
‑
95ab_r_220&254.m
[0178]
设备使用agilent 1100/g1956a，程序使用agilent chemstation rev.b.04.03[52]。色谱柱使用kinetex@5um evo c18 30*2.1mm，并且流动相使用a：0.0375％tfa水溶液(v/v)和b：0.01875％tfa乙腈溶液(v/v)。
[0179]
梯度：0.0min 5％b
→
0.80min 95％b
→
1.2min 95％b
→
1.21min 5％b
→
1.5min 5％b；流速：1.5ml/min；柱温：50℃；检测器：dad(220&254nm)
[0180]
分析方法6：lc
‑
ms d：5
‑
95ab_r_220&254.m
[0181]
设备使用agilent 1200/g1956a，程序使用agilent chemstation rev.b.04.03[54]。色谱柱使用kinetex evo c18 30*2.1mm,5um，并且流动相使用a：0.0375％tfa水溶液(v/v)和b：0.01875％tfa乙腈溶液(v/v)。
[0182]
梯度：0.0min 5％b
→
0.80min 95％b
→
1.2min 95％b
→
1.21min 5％b
→
1.5min 5％b；流速：1.5ml/min；柱温：50℃；检测器：dad(220&254nm)
[0183]
分析方法7：制备型hplc条件(acquity uplc h
‑
class核心系统)
[0184]
使用从waters购得的uplc系统(acquity uplc pda检测器)配备有从waters购得的mass qda检测器的设备。所用色谱柱为从waters购得的acquitybeh c18(1.7μ
m,2.1x 50mm)，并在30℃的柱温下运行。
[0185]
使用流动相a：含0.1％甲酸的水，和b：含0.1％甲酸的乙腈。
[0186]
梯度条件(10％到100％b持续3分钟，移动速度＝0.6ml/min)
[0187]
2.nmr读数
[0188]
nmr读数使用从bruker购得的avanceⅲ400或avanceⅲ400hd进行，数据以ppm(百万分之(δ))表示。
[0189]
本文使用的市售试剂无需进一步纯化即可使用。本发明中，室温是指20～25℃左右的温度。减压浓缩或蒸馏除去溶剂使用旋转蒸发器进行。
[0190]
<制备例1
‑
1>2
‑
氯
‑
n
‑
甲基
‑7‑
((2
‑
(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)
‑
7h
‑
吡咯并[2,3
‑
d]嘧啶
‑4‑
胺的制备
[0191]
标题化合物以如下方案1所示的方式制备。
[0192]
[方案1]
[0193][0194]
步骤1：将2,4
‑
二氯
‑
7h
‑
吡咯并[2,3
‑
d]嘧啶(1.0当量)在氮气下溶解于dmf(0.62m)中，然后在0℃下向其中缓慢加入nah(1.2当量)。反应混合物在15℃下反应1小时，并在0℃下进一步向其中加入(2
‑
(氯甲氧基)乙基)三甲基硅烷(1.3当量)，并在相同温度下搅拌1.5小时。向所得反应产物中加入蒸馏水，然后用mtbe(x 2)萃取有机物。用盐水洗涤收集的有机层后，用na2so4除去剩余的水，并减压浓缩。浓缩的混合物通过柱色谱法纯化(sio2；pe:ea)，得到黄色液体的目标化合物(产率：84％)。
[0195]
步骤2：将2,4
‑
二氯
‑7‑
((2
‑
(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)
‑
7h
‑
吡咯并[2,3
‑
d]嘧啶(1.0当量)、dipea(2.9当量)和环己胺(1.5当量)溶解于etoh(0.32m)中，然后将反应混合物在78℃下搅拌16小时。反应终止后，减压浓缩除去有机溶剂。将1n hcl水溶液(12.5当量)加入到所得反应产物中，然后用etoac(x3)萃取有机物。收集的有机层用饱和nahco3水溶液和盐水洗涤，然后用na2so4除去剩余的水。然后，将有机层减压浓缩，得到白色固体的目标化合物(产率：96％)。
[0196]
<制备例1
‑
2>2
‑
氯
‑
n
‑
乙基
‑7‑
((2
‑
(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)
‑
7h
‑
吡咯并[2,3
‑
d]嘧啶
‑4‑
胺的制备
[0197]
以与制备例1
‑
1类似的方式制备标题化合物(产率：88％)。
[0198][0199]
<制备例1
‑
3>2
‑
氯
‑
n
‑
丙基
‑7‑
((2
‑
(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)
‑
7h
‑
吡咯并[2,3
‑
d]嘧啶
‑4‑
胺的制备
[0200]
以与制备例1
‑
1类似的方式制备标题化合物(产率：86％)。
[0201][0202]
<制备例1
‑
4>2
‑
氯
‑
n
‑
异丁基
‑7‑
((2
‑
(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)
‑
7h
‑
吡咯并[2,3
‑
d]嘧啶
‑4‑
胺的制备
[0203]
以与制备例1
‑
1类似的方式制备标题化合物(产率：99％)。
[0204][0205]
<制备例1
‑
5>2
‑
氯
‑
n
‑
异丙基
‑7‑
((2
‑
(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)
‑
7h
‑
吡咯并[2,3
‑
d]嘧啶
‑4‑
胺的制备
[0206]
以与制备例1
‑
1类似的方式制备标题化合物(产率：98％)。
[0207][0208]
<制备例1
‑
6>(r)
‑
n
‑
(仲丁基)
‑2‑
氯
‑7‑
((2
‑
(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)
‑
7h
‑
吡咯并[2,3
‑
d]嘧啶
‑4‑
胺的制备
[0209]
以与制备例1
‑
1类似的方式制备标题化合物(产率：90％)。
[0210][0211]
<制备例1
‑
7>(s)
‑
n
‑
(仲丁基)
‑2‑
氯
‑7‑
((2
‑
(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)
‑
7h
‑
吡咯并[2,3
‑
d]嘧啶
‑4‑
胺的制备
[0212]
以与制备例1
‑
1类似的方式制备标题化合物(产率：67％)。
[0213]
[0214]
<制备例1
‑
8>2
‑
氯
‑
n
‑
(2
‑
甲氧基乙基)
‑7‑
((2
‑
(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)
‑
7h
‑
吡咯并[2,3
‑
d]嘧啶
‑4‑
胺的制备
[0215]
以与制备例1
‑
1类似的方式制备标题化合物(产率：88％)。
[0216][0217]
<制备例1
‑
9>2
‑
氯
‑
n
‑
环丙基
‑7‑
((2
‑
(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)
‑
7h
‑
吡咯并[2,3
‑
d]嘧啶
‑4‑
胺的制备
[0218]
以与制备例1
‑
1类似的方式制备标题化合物(产率：97％)。
[0219][0220]
<制备例1
‑
10>2
‑
氯
‑
n
‑
环丁基
‑7‑
((2
‑
(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)
‑
7h
‑
吡咯并[2,3
‑
d]嘧啶
‑4‑
胺的制备
[0221]
以与制备例1
‑
1类似的方式制备标题化合物(产率：96％)。
[0222][0223]
<制备例1
‑
11>2
‑
氯
‑
n
‑
环戊基
‑7‑
((2
‑
(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)
‑
7h
‑
吡咯并[2,3
‑
d]嘧啶
‑4‑
胺的制备
[0224]
以与制备例1
‑
1类似的方式制备标题化合物(产率：91％)。
[0225][0226]
<制备例1
‑
12>2
‑
氯
‑
n
‑
环己基
‑7‑
((2
‑
(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)
‑
7h
‑
吡咯并[2,3
‑
d]嘧啶
‑4‑
胺的制备
[0227]
以与制备例1
‑
1类似的方式制备标题化合物(产率：95％)。
[0228][0229]
<制备例1
‑
13>(r)
‑2‑
氯
‑
n
‑
(四氢呋喃
‑3‑
基)
‑7‑
((2
‑
(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)
‑
7h
‑
吡咯并[2,3
‑
d]嘧啶
‑4‑
胺的制备
[0230]
以与制备例1
‑
1类似的方式制备标题化合物(产率：78％)。
[0231][0232]
<制备例1
‑
14>(s)
‑2‑
氯
‑
n
‑
(四氢呋喃
‑3‑
基)
‑7‑
((2
‑
(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)
‑
7h
‑
吡咯并[2,3
‑
d]嘧啶
‑4‑
胺的制备
[0233]
以与制备例1
‑
1类似的方式制备标题化合物(产率：98％)。
[0234][0235]
<制备例1
‑
15>2
‑
氯
‑
n
‑
(四氢
‑
2h
‑
吡喃
‑4‑
基)
‑7‑
((2
‑
(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)
‑
7h
‑
吡咯并[2,3
‑
d]嘧啶
‑4‑
胺的制备
[0236]
以与制备例1
‑
1类似的方式制备标题化合物(产率：88％)。
[0237][0238]
<制备例1
‑
16>2
‑
氯
‑
n
‑
(环丙基甲基)
‑7‑
((2
‑
(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)
‑
7h
‑
吡咯并[2,3
‑
d]嘧啶
‑4‑
胺的制备
[0239]
以与制备例1
‑
1类似的方式制备标题化合物(产率：96％)。
[0240][0241]
<制备例1
‑
17>2
‑
氯
‑
n
‑
(1
‑
甲氧基
‑2‑
甲基丙
‑2‑
基)
‑7‑
((2
‑
(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)
‑
7h
‑
吡咯并[2,3
‑
d]嘧啶
‑4‑
胺的制备
[0242]
将2,4
‑
二氯
‑7‑
((2
‑
(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)
‑
7h
‑
吡咯并[2,3
‑
d]嘧啶(1.0当量)、dipea(2.5当量)和胺(1.2当量)溶解于nmp(0.25m)中，然后将反应混合物在80℃下搅拌12小时。反应终止后，向所得反应产物中加入1n hcl水溶液(12.5当量)，然后用etoac(x3)萃取有机物。用饱和nahco3水溶液和盐水洗涤收集的有机层，然后用na2so4除去剩余的水。然后，减压浓缩有机层得到目标化合物(产率：48％)。
[0243][0244]
<制备例1
‑
18>2
‑
氯
‑
n
‑
(环丁基甲基)
‑7‑
((2
‑
(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)
‑
7h
‑
吡咯并[2,3
‑
d]嘧啶
‑4‑
胺的制备
[0245]
以与制备例1
‑
1类似的方式制备标题化合物(产率：96％)。
[0246][0247]
<制备例1
‑
19>2
‑
氯
‑
n
‑
(环戊基甲基)
‑7‑
((2
‑
(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)
‑
7h
‑
吡咯并[2,3
‑
d]嘧啶
‑4‑
胺的制备
[0248]
以与制备例1
‑
1类似的方式制备标题化合物(产率：95％)。
[0249][0250]
<制备例1
‑
20>2
‑
氯
‑
n
‑
(2
‑
(甲基磺酰基)乙基)
‑7‑
((2
‑
(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)
‑
7h
‑
吡咯并[2,3
‑
d]嘧啶
‑4‑
胺的制备
[0251]
以与制备例1
‑
1类似的方式制备标题化合物(产率：83％)。
[0252][0253]
<制备例1
‑
21>n
‑
丁基
‑2‑
氯
‑7‑
((2
‑
(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)
‑
7h
‑
吡咯并[2,
3
‑
d]嘧啶
‑4‑
胺的制备
[0254]
以与制备例1
‑
1类似的方式制备标题化合物(产率：94％)。
[0255][0256]
<制备例1
‑
22>2
‑
氯
‑
n
‑
(氧杂环丁烷
‑3‑
基)
‑7‑
((2
‑
(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)
‑
7h
‑
吡咯并[2,3
‑
d]嘧啶
‑4‑
胺的制备
[0257]
以与制备例1
‑
1类似的方式制备标题化合物(产率：79％)。
[0258][0259]
<制备例2
‑
1>2
‑
氯
‑4‑
(甲氨基)
‑7‑
((2
‑
(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)
‑
7h
‑
吡咯并[2,3
‑
d]嘧啶
‑5‑
腈的制备
[0260]
标题化合物以如下方案2所示的方式制备。
[0261]
[方案二]
[0262][0263]
步骤1：将2,4
‑
二氯
‑
7h
‑
吡咯并[2,3
‑
d]嘧啶(1.0当量)在氮气下溶解于dcm(0.5m)中，然后在0℃下向其中缓慢加入nis(1.6当量)。反应混合物在室温下搅拌12小时。反应终止后，过滤形成的固体目标化合物。过滤后的目标化合物用蒸馏水洗涤，得到黄色固体的目标化合物。
[0264]
步骤2：将2,4
‑
二氯
‑5‑
碘
‑
7h
‑
吡咯并[2,3
‑
d]嘧啶(1.0当量)在氮气下溶解于dmf(0.5m)中，然后在0℃下向其中缓慢加入nah(1.3当量)。反应混合物在0℃反应30分钟，再加入(2
‑
(氯甲氧基)乙基)三甲基硅烷(1.1当量)，20℃搅拌1小时。向所得反应产物中加入蒸馏水，然后用ea(x 3)萃取有机物。用盐水洗涤收集的有机层后，用na2so4除去剩余的水，减压浓缩有机层。浓缩的混合物通过柱色谱法纯化(sio2，pe:ea)，得到白色固体的目标化合
物(产率：94％)。
[0265]
步骤3：将2,4
‑
二氯
‑5‑
碘
‑7‑
((2
‑
(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)
‑
7h
‑
吡咯并[2,3
‑
d]嘧啶(1.0当量)溶解于nmp(0.2m)中，然后在0℃下向其中缓慢加入cucn(2.0当量)。反应混合物在120℃搅拌6小时。将冷蒸馏水和ea加入到所得反应产物中，然后将所得混合物通过硅藻土过滤器过滤。将所得滤液分离为有机层和水层，然后用etoac(x 2)萃取水层。用盐水洗涤收集的有机层后，用na2so4除去剩余的水，减压浓缩有机层。浓缩的混合物通过柱色谱法纯化(sio2，pe:ea)，得到黄色固体的目标化合物(产率：94％)。
[0266]
步骤4：将2,4
‑
二氯
‑7‑
((2
‑
(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)
‑
7h
‑
吡咯并[2,3
‑
d]嘧啶
‑5‑
腈(1.0当量)、dipea(2.9当量)和甲胺(1.5当量)溶解于etoh(0.25m)中，然后将反应混合物在80℃下搅拌16小时。反应终止后，减压浓缩除去有机溶剂。将所得反应产物溶解于etoac中，然后用1n hcl水溶液和盐水洗涤。然后，用na2so4除去剩余的水，并将反应产物减压浓缩，得到黄色固体的目标化合物(产率：90％)。
[0267]
<制备例2
‑
2>2
‑
氯
‑4‑
(乙氨基)
‑7‑
((2
‑
(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)
‑
7h
‑
吡咯并[2,3
‑
d]嘧啶
‑5‑
腈的制备
[0268]
以与制备例2
‑
1类似的方式制备标题化合物(产率：73％)。
[0269][0270]
<制备例2
‑
3>2
‑
氯
‑4‑
(丙氨基)
‑7‑
((2
‑
(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)
‑
7h
‑
吡咯并[2,3
‑
d]嘧啶
‑5‑
腈的制备
[0271]
以与制备例2
‑
1类似的方式制备标题化合物(产率：98％)。
[0272][0273]
<制备例2
‑
4>2
‑
氯
‑4‑
(异丁基氨基)
‑7‑
((2
‑
(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)
‑
7h
‑
吡咯并[2,3
‑
d]嘧啶
‑5‑
腈的制备
[0274]
以与制备例2
‑
1类似的方式制备标题化合物(产率：98％)。
[0275][0276]
<制备例2
‑
5>2
‑
氯
‑4‑
(异丙基氨基)
‑7‑
((2
‑
(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)
‑
7h
‑
吡咯并[2,3
‑
d]嘧啶
‑5‑
腈的制备
[0277]
以与制备例2
‑
1类似的方式制备标题化合物(产率：98％)。
[0278][0279]
<制备例2
‑
6>(r)
‑4‑
(仲丁基)
‑2‑
氯
‑7‑
((2
‑
(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)
‑
7h
‑
吡咯并[2,3
‑
d]嘧啶
‑5‑
腈的制备
[0280]
以与制备例2
‑
1类似的方式制备标题化合物(产率：84％)。
[0281][0282]
<制备例2
‑
7>(s)
‑4‑
(仲丁基)
‑2‑
氯
‑7‑
((2
‑
(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)
‑
7h
‑
吡咯并[2,3
‑
d]嘧啶
‑5‑
腈的制备
[0283]
以与制备例2
‑
1类似的方式制备标题化合物(产率：85％)。
[0284][0285]
<制备例2
‑
8>2
‑
氯
‑4‑
((2
‑
甲氧基乙基)氨基)
‑7‑
((2
‑
(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)
‑
7h
‑
吡咯并[2,3
‑
d]嘧啶
‑5‑
腈的制备
[0286]
以与制备例2
‑
1类似的方式制备标题化合物(产率：96％)。
[0287][0288]
<制备例2
‑
9>2
‑
氯
‑4‑
(环丙氨基)
‑7‑
((2
‑
(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)
‑
7h
‑
吡咯并[2,3
‑
d]嘧啶
‑5‑
腈的制备
[0289]
以与制备例2
‑
1类似的方式制备标题化合物(产率：96％)。
[0290][0291]
<制备例2
‑
10>2
‑
氯
‑4‑
(环丁基氨基)
‑7‑
((2
‑
(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)
‑
7h
‑
吡咯并[2,3
‑
d]嘧啶
‑5‑
腈的制备
[0292]
以与制备例2
‑
1类似的方式制备标题化合物(产率：87％)。
[0293][0294]
<制备例2
‑
11>2
‑
氯
‑4‑
(环戊基氨基)
‑7‑
((2
‑
(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)
‑
7h
‑
吡咯并[2,3
‑
d]嘧啶
‑5‑
腈的制备
[0295]
以与制备例2
‑
1类似的方式制备标题化合物(产率：87％)。
[0296][0297]
<制备例2
‑
12>2
‑
氯
‑4‑
(环己基氨基)
‑7‑
((2
‑
(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)
‑
7h
‑
吡咯并[2,3
‑
d]嘧啶
‑5‑
腈的制备
[0298]
以与制备例2
‑
1类似的方式制备标题化合物(产率：90％)。
[0299][0300]
<制备例2
‑
13>(r)
‑2‑
氯
‑4‑
((四氢呋喃
‑3‑
基)氨基)
‑7‑
((2
‑
(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)
‑
7h
‑
吡咯并[2,3
‑
d]嘧啶
‑5‑
腈的制备
[0301]
以与制备例2
‑
1类似的方式制备标题化合物(产率：55％)。
[0302][0303]
<制备例2
‑
14>(s)
‑2‑
氯
‑4‑
((四氢呋喃
‑3‑
基)氨基)
‑7‑
((2
‑
(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)
‑
7h
‑
吡咯并[2,3
‑
d]嘧啶
‑5‑
腈的制备
[0304]
以与制备例2
‑
1类似的方式制备标题化合物(产率：61％)。
[0305][0306]
<制备例2
‑
15>2
‑
氯
‑4‑
((四氢
‑
2h
‑
吡喃
‑4‑
基)氨基)
‑7‑
((2
‑
(三甲基硅烷基)乙氧
基)甲基)
‑
7h
‑
吡咯并[2,3
‑
d]嘧啶
‑5‑
腈的制备
[0307]
以与制备例2
‑
1类似的方式制备标题化合物(产率：86％)。
[0308][0309]
<制备例2
‑
16>2
‑
氯
‑4‑
((环丙基甲基)氨基)
‑7‑
((2
‑
(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)
‑
7h
‑
吡咯并[2,3
‑
d]嘧啶
‑5‑
腈的制备
[0310]
以与制备例2
‑
1类似的方式制备标题化合物(产率：73％)。
[0311][0312]
<制备例2
‑
17>2
‑
氯
‑4‑
((1
‑
甲氧基
‑2‑
甲基丙
‑2‑
基)氨基)
‑7‑
((2
‑
(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)
‑
7h
‑
吡咯并[2,3
‑
d]嘧啶
‑5‑
腈的制备
[0313]
将2,4
‑
二氯
‑7‑
((2
‑
(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)
‑
7h
‑
吡咯并[2,3
‑
d]嘧啶
‑5‑
腈(1.0当量)、dipea(2.5当量)和胺(1.2等量)溶解于nmp(0.25m)中，然后将反应混合物在80℃下搅拌12小时。反应终止后，减压浓缩除去有机溶剂。将所得反应产物溶解于etoac中，然后用1n hcl水溶液和盐水洗涤。然后，用na2so4除去剩余的水，并将反应产物减压浓缩，得到黄色固体的目标化合物(产率：97％)。
[0314][0315]
<制备例2
‑
18>2
‑
氯
‑4‑
((环丁基甲基)氨基)
‑7‑
((2
‑
(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)
‑
7h
‑
吡咯并[2,3
‑
d]嘧啶
‑5‑
腈的制备
[0316]
以与制备例2
‑
1类似的方式制备标题化合物(产率：86％)。
[0317][0318]
<制备例2
‑
19>2
‑
氯
‑4‑
((环戊基甲基)氨基)
‑7‑
((2
‑
(三甲基硅烷基)乙氧基)甲
基)
‑
7h
‑
吡咯并[2,3
‑
d]嘧啶
‑5‑
腈的制备
[0319]
以与制备例2
‑
1类似的方式制备标题化合物(产率：78％)。
[0320][0321]
<制备例2
‑
20>2
‑
氯
‑4‑
((2
‑
(甲基磺酰基)乙基)氨基)
‑7‑
((2
‑
(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)
‑
7h
‑
吡咯并[2,3
‑
d]嘧啶
‑5‑
腈的制备
[0322]
以与制备例2
‑
1类似的方式制备标题化合物(产率：70％)。
[0323][0324]
<制备例2
‑
21>4
‑
(丁基氨基)
‑2‑
氯
‑7‑
((2
‑
(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)
‑
7h
‑
吡咯并[2,3
‑
d]嘧啶
‑5‑
腈的制备
[0325]
以与制备例2
‑
1类似的方式制备标题化合物(产率：51％)。
[0326][0327]
<制备例2
‑
22>2
‑
氯
‑4‑
(氧杂环丁烷
‑3‑
基氨基)
‑7‑
((2
‑
(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)
‑
7h
‑
吡咯并[2,3
‑
d]嘧啶
‑5‑
腈的制备
[0328]
以与制备例2
‑
1类似的方式制备标题化合物(产率：53％)。
[0329][0330]
<制备例3
‑
1>2
‑
氯
‑
n
‑
甲基
‑5‑
(三氟甲基)
‑7‑
((2
‑
(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)
‑
7h
‑
吡咯并[2,3
‑
d]嘧啶
‑4‑
胺的制备
[0331]
标题化合物以如下方案3所示的方式制备。
[0332]
[方案3]
[0333][0334]
步骤1：在接近真空的减压下将cui(5.0当量)和kf(5.0当量)在150℃的温度下保持2小时，同时除去水分。将所得反应产物冷却至室温，然后将tms
‑
cf3(5.0当量)在氮气下溶解于nmp(1.12m)中，并通过注射器缓慢加入反应产物中。反应混合物在室温下反应一个小时，将2,4
‑
二氯
‑5‑
碘
‑7‑
((2
‑
(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)
‑
7h
‑
吡咯并[2,3
‑
d]嘧啶(1.0当量)在氮气下进一步溶解于nmp(0.45m)中，然后通过注射器慢慢加入。将所得反应混合物在50℃下搅拌12小时。反应终止后，将反应产物冷却至室温。然后，将蒸馏水加入到反应产物中，然后用etoac(x3)萃取有机物。用盐水洗涤收集的有机层后，用na2so4除去剩余的水，减压浓缩有机层。浓缩的混合物通过柱色谱法纯化(sio2；pe:ea)，得到黄色液体的目标化合物(产率：62％)。
[0335]
步骤2：将2,4
‑
二氯
‑5‑
(三氟甲基)
‑7‑
((2
‑
(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)
‑
7h
‑
吡咯并[2,3
‑
d]嘧啶(1.0当量)、dipea(2.9当量)和环己胺(1.5当量)溶解于乙醇(0.25m)中，然后将反应混合物在80℃下搅拌16小时。反应终止后，减压浓缩除去有机溶剂。将所得反应产物溶解于etoac中，然后用1n hcl水溶液和盐水洗涤。然后，用na2so4除去剩余的水，并将反应产物减压浓缩，得到棕色固体的目标化合物(产率：98％)。
[0336]
<制备例3
‑
2>2
‑
氯
‑
n
‑
乙基
‑5‑
(三氟甲基)
‑7‑
((2
‑
(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)
‑
7h
‑
吡咯并[2,3
‑
d]嘧啶
‑4‑
胺的制备
[0337]
以与制备例3
‑
1类似的方式制备标题化合物(产率：99％)。
[0338][0339]
<制备例3
‑
3>2
‑
氯
‑
n
‑
丙基
‑5‑
(三氟甲基)
‑7‑
((2
‑
(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)
‑
7h
‑
吡咯并[2,3
‑
d]嘧啶
‑4‑
胺的制备
[0340]
以与制备例3
‑
1类似的方式制备标题化合物(产率：90％)。
[0341][0342]
<制备例3
‑
4>2
‑
氯
‑
n
‑
异丁基
‑5‑
(三氟甲基)
‑7‑
((2
‑
(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)
‑
7h
‑
吡咯并[2,3
‑
d]嘧啶
‑4‑
胺的制备
[0343]
以与制备例3
‑
1类似的方式制备标题化合物(产率：80％)。
[0344][0345]
<制备例3
‑
5>2
‑
氯
‑
n
‑
异丙基
‑5‑
(三氟甲基)
‑7‑
((2
‑
(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)
‑
7h
‑
吡咯并[2,3
‑
d]嘧啶
‑4‑
胺的制备
[0346]
以与制备例3
‑
1类似的方式制备标题化合物(产率：82％)。
[0347][0348]
<制备例3
‑
6>(r)
‑
n
‑
(仲丁基)
‑2‑
氯
‑5‑
(三氟甲基)
‑7‑
((2
‑
(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)
‑
7h
‑
吡咯并[2,3
‑
d]嘧啶
‑4‑
胺的制备
[0349]
以与制备例3
‑
1类似的方式制备标题化合物(产率：62％)。
[0350][0351]
<制备例3
‑
7>(s)
‑
n
‑
(仲丁基)
‑2‑
氯
‑5‑
(三氟甲基)
‑7‑
((2
‑
(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)
‑
7h
‑
吡咯并[2,3
‑
d]嘧啶
‑4‑
胺的制备
[0352]
以与制备例3
‑
1类似的方式制备标题化合物(产率：53％)。
[0353][0354]
<制备例3
‑
8>2
‑
氯
‑
n
‑
(2
‑
甲氧基乙基)
‑5‑
(三氟甲基)
‑7‑
((2
‑
(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)
‑
7h
‑
吡咯并[2,3
‑
d]嘧啶
‑4‑
胺的制备
[0355]
以与制备例3
‑
1类似的方式制备标题化合物(产率：75％)。
[0356]
[0357]
<制备例3
‑
9>2
‑
氯
‑
n
‑
环丙基
‑5‑
(三氟甲基)
‑7‑
((2
‑
(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)
‑
7h
‑
吡咯并[2,3
‑
d]嘧啶
‑4‑
胺的制备
[0358]
以与制备例3
‑
1类似的方式制备标题化合物(产率：68％)。
[0359][0360]
<制备例3
‑
10>2
‑
氯
‑
n
‑
环丁基
‑5‑
(三氟甲基)
‑7‑
((2
‑
(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)
‑
7h
‑
吡咯并[2,3
‑
d]嘧啶
‑4‑
胺的制备
[0361]
以与制备例3
‑
1类似的方式制备标题化合物(产率：74％)。
[0362][0363]
<制备例3
‑
11>2
‑
氯
‑
n
‑
环戊基
‑5‑
(三氟甲基)
‑7‑
((2
‑
(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)
‑
7h
‑
吡咯并[2,3
‑
d]嘧啶
‑4‑
胺的制备
[0364]
以与制备例3
‑
1类似的方式制备标题化合物(产率：74％)。
[0365][0366]
<制备例3
‑
12>2
‑
氯
‑
n
‑
环己基
‑5‑
(三氟甲基)
‑7‑
((2
‑
(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)
‑
7h
‑
吡咯并[2,3
‑
d]嘧啶
‑4‑
胺的制备
[0367]
以与制备例3
‑
1类似的方式制备标题化合物(产率：71％)。
[0368][0369]
<制备例3
‑
13>(r)
‑2‑
氯
‑
n
‑
(四氢呋喃
‑3‑
基)
‑5‑
(三氟甲基)
‑7‑
((2
‑
(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)
‑
7h
‑
吡咯并[2,3
‑
d]嘧啶
‑4‑
胺的制备
[0370]
以与制备例3
‑
1类似的方式制备标题化合物(产率：66％)。
[0371]
[0372]
<制备例3
‑
14>(s)
‑2‑
氯
‑
n
‑
(四氢呋喃
‑3‑
基)
‑5‑
(三氟甲基)
‑7‑
((2
‑
(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)
‑
7h
‑
吡咯并[2,3
‑
d]嘧啶
‑4‑
胺的制备
[0373]
以与制备例3
‑
1类似的方式制备标题化合物(产率：66％)。
[0374][0375]
<制备例3
‑
15>2
‑
氯
‑
n
‑
(四氢
‑
2h
‑
吡喃
‑4‑
基)
‑5‑
(三氟甲基)
‑7‑
((2
‑
(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)
‑
7h
‑
吡咯并[2,3
‑
d]嘧啶
‑4‑
胺的制备
[0376]
以与制备例3
‑
1类似的方式制备标题化合物(产率：78％)。
[0377][0378]
<制备例3
‑
16>2
‑
氯
‑
n
‑
(环丙基甲基)
‑5‑
(三氟甲基)
‑7‑
((2
‑
(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)
‑
7h
‑
吡咯并[2,3
‑
d]嘧啶
‑4‑
胺的制备
[0379]
以与制备例3
‑
1类似的方式制备标题化合物(产率：80％)。
[0380][0381]
<制备例3
‑
17>2
‑
氯
‑
n
‑
(1
‑
甲氧基
‑2‑
甲基丙
‑2‑
基)
‑5‑
(三氟甲基)
‑7‑
((2
‑
(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)
‑
7h
‑
吡咯并[2,3
‑
d]嘧啶
‑4‑
胺的制备
[0382]
将2,4
‑
二氯
‑5‑
(三氟甲基)
‑7‑
((2
‑
(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)
‑
7h
‑
吡咯并[2,3
‑
d]嘧啶(1.0当量)、dipea(2.5当量)和胺(1.2当量)溶解于nmp(0.25m)中，然后将反应混合物在80℃下搅拌12小时。反应终止后，减压浓缩除去有机溶剂。将所得反应产物溶解于etoac中，然后用1n hcl水溶液和盐水洗涤。然后用na2so4除去剩余的水，将反应产物减压浓缩得到目标化合物(产率：80％)。
[0383][0384]
<制备例3
‑
18>2
‑
氯
‑
n
‑
(环丁基甲基)
‑5‑
(三氟甲基)
‑7‑
((2
‑
(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)
‑
7h
‑
吡咯并[2,3
‑
d]嘧啶
‑4‑
胺的制备
[0385]
以与制备例3
‑
1类似的方式制备标题化合物(产率：77％)。
[0386][0387]
<制备例3
‑
19>2
‑
氯
‑
n
‑
(环戊基甲基)
‑5‑
(三氟甲基)
‑7‑
((2
‑
(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)
‑
7h
‑
吡咯并[2,3
‑
d]嘧啶
‑4‑
胺的制备
[0388]
以与制备例3
‑
1类似的方式制备标题化合物(产率：75％)。
[0389][0390]
<制备例3
‑
20>2
‑
氯
‑
n
‑
(2
‑
(甲基磺酰基)乙基)
‑5‑
(三氟甲基)
‑7‑
((2
‑
(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)
‑
7h
‑
吡咯并[2,3
‑
d]嘧啶
‑4‑
胺的制备
[0391]
以与制备例3
‑
1类似的方式制备标题化合物(产率：53％)。
[0392][0393]
<制备例3
‑
21>n
‑
丁基
‑2‑
氯
‑5‑
(三氟甲基)
‑7‑
((2
‑
(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)
‑
7h
‑
吡咯并[2,3
‑
d]嘧啶
‑4‑
胺的制备
[0394]
以与制备例3
‑
1类似的方式制备标题化合物(产率：67％)。
[0395][0396]
<制备例3
‑
22>2
‑
氯
‑
n
‑
(氧杂环丁烷
‑3‑
基)
‑5‑
(三氟甲基)
‑7‑
((2
‑
(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)
‑
7h
‑
吡咯并[2,3
‑
d]嘧啶
‑4‑
胺的制备
[0397]
以与制备例3
‑
1类似的方式制备标题化合物(产率：35％)。
[0398][0399]
<制备例4
‑
1>2
‑
氯
‑4‑
环丙基
‑7‑
((2
‑
(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)
‑
7h
‑
吡咯并[2,3
‑
b]嘧啶
‑5‑
腈的制备
[0400]
标题化合物以如下方案4所示的方式制备。
[0401]
[方案4]
[0402][0403]
步骤1：将2,4
‑
二氯
‑7‑
((2
‑
(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)
‑
7h
‑
吡咯并[2,3
‑
b]嘧啶
‑5‑
腈(1.0当量)、环丙基硼酸(1.5当量)和k3po4(3.0当量)溶解于1,4
‑
二噁烷(0.20m)中，然后超声处理一分钟以去除气体。在氮气下向其中加入pd(dppf)cl2(0.1当量)和ag2o(0.5当量)，90℃反应16小时。通过硅藻土过滤反应混合物，并用dcm洗涤数次。将所得滤液浓缩，然后通过mplc(etoac:hex)纯化，得到目标化合物(产率：65％)。
[0404]
<制备例5
‑
1>2
‑
氯
‑4‑
环丙基
‑5‑
(三氟甲基)
‑7‑
((2
‑
(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)
‑
7h
‑
吡咯并[2,3
‑
b]嘧啶的制备
[0405]
标题化合物以如下方案5所示的方式制备。
[0406]
[方案5]
[0407][0408]
步骤1：将2,4
‑
二氯
‑5‑
(三氟甲基)
‑7‑
((2
‑
(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)
‑
7h
‑
吡咯并[2,3
‑
b]嘧啶(1.0当量)，环丙基硼酸(1.5当量)和k3po4(3.0当量)溶解于1,4
‑
二噁烷(0.15m)中，然后超声一分钟以去除气体。在氮气下向其中加入pd(dppf)cl2(0.1当量)和ag2o(0.5当量)，90℃反应16小时。通过硅藻土过滤器过滤反应混合物，并用dcm洗涤数次。将所得滤液浓缩，然后通过mplc(etoac:hex)纯化，得到目标化合物(产率：52％)。
[0409]
<制备例6
‑
1>(5
‑
氨基
‑
2,3
‑
二氢
‑
1,4
‑
苯并二噁英
‑8‑
基)
‑
吗啉
‑
甲酮的制备
[0410]
标题化合物以如下方案6所示的方式制备。
[0411]
[方案6]
[0412][0413]
步骤1：将2,3
‑
二氢
‑
1,4
‑
苯并二噁英
‑5‑
羧酸(1当量)溶解于hoac(200ml)中，然后向其中滴加br2(2.32当量)。滴加naoac(3.6当量)，然后将所得混合物在45℃下搅拌4小时。反应终止后，向混合物中加入水，并使用hcl(30ml)将混合物的ph调节至ph 1。此后，将50％亚硫酸氢钠(30ml)加入混合物中。过滤反应固体，然后用水洗涤数次，得到固体化合物(产率：77％)。
[0414]1h nmr(cdcl3,400mhz):δ＝7.26(s,1h),4.35
‑
.4.30(m,4h)
[0415]
步骤2：将6,7
‑
二溴
‑
2,3
‑
二氢
‑
1,4
‑
苯并二噁英
‑5‑
羧酸(1当量)溶解于乙酸(500ml)中，然后在0℃下向其中滴加浓硫酸(6.4当量)。此后，将硝酸(1.75当量)缓慢滴加到混合物中。在这种情况下，温度保持在15℃或更低。反应混合物在40℃或12小时搅拌。反应终止后，向反应混合物中加入冰水，并将反应混合物搅拌1小时。过滤所得固体滤液，然后用水洗涤数次，得到最终化合物(产率：88％)。
[0416]1h nmr(cdcl3,400mhz):δ＝8.00(s,1h),4.44
‑
4.40(m,4h)
[0417]
步骤3：将6,7
‑
二溴
‑5‑
硝基
‑
2,3
‑
二氢
‑
1,4
‑
苯并二噁英
‑8‑
羧酸(1当量)和吗啉(1.3当量)溶解于dmf中，然后向其中加入hatu(1.5当量)和dipea(2.2当量)。此后，将混合物在20℃下搅拌12小时。反应终止后，反应混合物用水中和，然后用ea(x 2)萃取。然后，用na2so4除去剩余的水，然后浓缩滤液，得到黄色固体化合物(产率：84％)。
[0418]1h nmr(cdcl3,400mhz):δ＝4.42
‑
4.39(m,4h),4.00
‑
3.62(m,6h),3.30
‑
3.23(m,2h)；
[0419]
lcms(方法1)：lcms_3,rt＝0.85min,453(m 1)

[0420]
步骤4：将6,7
‑
二溴
‑5‑
硝基
‑
2,3
‑
二氢
‑
1,4
‑
苯并二噁英
‑8‑
基)
‑
吗啉基
‑
甲酮(30g，1当量)溶解于meoh中，然后向其中加入tea(3.2当量)和pd/c(6.8g，10％吸附在活性炭上的pd)。此后，将混合物在75℃下搅拌12小时。在这种情况下，氢气压力保持在50psi。反应终止后，将反应混合物通过硅藻土过滤，然后浓缩。所得滤液通过硅胶色谱法(dcm/meoh＝200/1,20/1)纯化，然后获得最终化合物(产率：130％)。
[0421]1h nmr(dmso
‑
d6,400mhz):δ＝6.52(d,j＝8.4hz,1h),6.25(d,j＝8.4hz,1h),4.99(s,2h),4.24(s,4h),3.55(s,6h),3.27
‑
3.07(m,2h)；
[0422]
lcms(方法2)：lcms_4,rt＝0.57min,265(m 1)

[0423]
<制备例7
‑
1>(5
‑
氨基
‑
2,3
‑
二氢
‑
1,4
‑
苯并噁英
‑8‑
基)
‑
(4
‑
吗啉哌啶
‑1‑
基)甲酮
的制备
[0424]
标题化合物以如下方案7所示的方式制备。
[0425]
[方案7]
[0426][0427]
步骤1：以与制备实施例6
‑
1的步骤3中类似的方式制备(6,7
‑
二溴
‑5‑
硝基
‑
2,3
‑
二氢
‑
1,4
‑
苯并二噁英
‑8‑
基)
‑
(4
‑
吗啉哌啶
‑1‑
基)甲酮(产率：粗品268％)。
[0428]1h nmr(cdcl3,400mhz):δ＝4.87
‑
4.65(m,1h),4.51
‑
4.27(m,4h),3.78(q,j＝4.2hz,4h),3.56
‑
3.51(m,1h),3.17
‑
3.04(m,1h),2.98
‑
2.85(m,1h),2.68
‑
2.45(m,5h),2.09
‑
2.00(m,1h),1.97
‑
1.85(m,1h),1.70
‑
1.57(m,1h),1.54
‑
1.42(m,1h)；
[0429]
lcms(方法1)：lcms_1,rt＝0.76min,536(m 1)

；
[0430]
步骤2：以与制备实施例6
‑
1的步骤4中类似的方式制备(5
‑
氨基
‑
2,3
‑
二氢
‑
1,4
‑
苯并噁英
‑8‑
基)
‑
(4
‑
吗啉哌啶
‑1‑
基)甲酮(产率：72％)。
[0431]1h nmr(dmso
‑
d6,400mhz):δ＝6.47(s,1h),6.24(d,j＝8.0hz,1h),4.94(s,2h),4.43(d,j＝1.6hz,1h),4.23(s,4h),3.33(s,6h),3.03
‑
2.61(m,3h),2.49
‑
2.30(m,3h),1.93
‑
1.64(m,2h),1.43
‑
1.23(m,2h)；
[0432]
lcms(方法2):lcms_2,rt＝0.82min,348(m 1)

[0433]
<制备例8
‑
1>2
‑
甲氧基
‑4‑
吗啉代磺酰基
‑
苯胺的制备
[0434]
标题化合物以如下方案8所示的方式制备。
[0435]
[方案8]
[0436][0437]
步骤1：将4
‑
氟
‑2‑
甲氧基
‑1‑
硝基
‑
苯(1当量)溶解于acn中，然后向其中缓慢滴加
苯基甲硫醇(1.1当量)和dipea(1当量)。将反应混合物在80℃搅拌48小时。反应终止后，浓缩反应混合物，并向其中加入mtbe。然后，能够得到黄色固体化合物(产率：14％)。
[0438]1h nmr(cdcl3,400mhz):hnmr_1,δ＝7.83(d,j＝8.4hz,1h),7.43
‑
7.27(m,5h),6.92
‑
6.84(m,2h),4.23(s,2h),3.86(s,3h)
[0439]
步骤2：在0℃下将4
‑
苄基硫基
‑2‑
甲氧基
‑1‑
硝基苯(1当量)溶于乙腈、乙酸和水中，滴加ncs(4.24当量)。混合物在相同温度下搅拌2小时。反应终止后，除去溶剂，然后用ea(x 2)萃取反应混合物。然后，用na2so4除去剩余的水，然后浓缩。浓缩物用石油醚结晶，然后过滤得到黄色固体化合物(产率：97％)。
[0440]1h nmr(cdcl3):δ＝8.08
‑
7.86(m,1h),7.74(d,j＝2.0hz,2h),4.09(s,3h)；
[0441]
步骤3：将3
‑
甲氧基
‑4‑
硝基
‑
苯磺酰氯(1当量)溶解于dcm中，在0℃下缓慢加入dmap(0.05当量)、tea(2当量)和吗啉(1.5当量)。反应混合物在20℃搅拌4小时。反应终止后，反应混合物用水中和，溶解于dcm中，然后用1n hcl水溶液、nahco3水溶液和盐水洗涤。然后，用na2so4除去剩余的水，并将反应混合物浓缩，得到黄色固体化合物(产率：93％)。
[0442]1h nmr(cdcl3,400mhz):δ＝7.94(d,j＝8.4hz,1h),7.46
‑
7.38(m,2h),4.04(s,3h),3.86
‑
3.56(m,4h),3.15
‑
2.85(m,4h)
[0443]
步骤4：将4
‑
(3
‑
甲氧基
‑4‑
硝基
‑
苯基)磺酰基吗啉(40g)溶解于thf(10ml)中，并向其中加入pd/c(5g，10％吸附在活性炭上的pd)。反应混合物用氢气吹扫3次，然后在20℃下搅拌16小时。反应终止后，将反应混合物通过硅藻土过滤，并将所得滤液浓缩。然后，通过加入mtbe使滤液结晶，然后过滤得到白色固体化合物(产率：74％)。
[0444]1h nmr(dmso
‑
d6,400mhz):δ＝7.08(dd,j＝2.0,8.4hz,1h),6.97(d,j＝2.0hz,1h),6.74(d,j＝8.4hz,1h),5.76(s,2h),3.83(s,3h),3.69
‑
3.52(m,4h),2.89
‑
2.71(m,4h)；
[0445]
lcms(方法1)：lcms_1，rt＝0.922分钟，273.1(m 1)

；
[0446]
<制备例9
‑
1>2
‑
甲氧基
‑4‑
((吗啉哌啶
‑1‑
基)磺酰基)苯胺的制备
[0447]
标题化合物以如下方案9所示的方式制备。
[0448]
[方案9]
[0449][0450]
步骤1：以与制备例7
‑
1的步骤3相似的方式制备4
‑
(1
‑
(3
‑
甲氧基
‑4‑
硝基
‑
苯基)磺酰基)哌啶
‑4‑
基)吗啉(产率：73％)。
[0451]1h nmr(dmso
‑
d6,400mhz):δ＝8.10(d,j＝8.4hz,1h),7.52
‑
7.43(m,2h),4.02(s,3h),3.69(d,j＝12.0hz,2h),3.56
‑
3.47(m,4h),2.44
‑
2.33(m,6h),2.24
‑
2.12(m,1h),1.81(d,j＝11.2hz,2h),1.41(m,2h).
[0452]
步骤2：以与制备例7
‑
1的步骤4类似的方式制备2
‑
甲氧基
‑4‑
((4
‑
吗啉哌啶
‑1‑
基)磺酰基)苯胺(产率：38％)。
[0453]1h nmr(dmso
‑
d6,400mhz):δ＝7.07(dd,j＝2.0,8.4hz,1h),6.97(d,j＝2.0hz,1h),6.72(d,j＝8.4hz,1h),5.66(s,2h),3.81(s,3h),3.63
‑
3.54(m,2h),3.54
‑
3.45(m,
4h),2.42
‑
2.31(m,4h),2.24
‑
2.13(m,2h),2.06(m,1h),1.83
‑
1.73(m,2h),1.46
‑
1.32(m,2h)；
[0454]
lcms(方法1)：lcms_1,rt＝0.97min,356.1(m 1)

[0455]
<制备例10
‑
1>4
‑
(4
‑
氨基
‑3‑
甲氧基苯基)
‑1‑
环丙基
‑
1,4
‑
氮杂膦烷4
‑
氧化物的制备
[0456]
标题化合物以如下方案10所示的方式制备。
[0457]
[方案10]
[0458][0459]
步骤1：将4
‑
溴
‑2‑
氟
‑1‑
硝基
‑
苯(1当量)溶解于meoh中，并向其中加入k2co3(1当量)。此后，反应混合物在65℃下反应2小时。反应终止后，浓缩溶剂，用水中和，溶于ea(x2)，然后用盐水洗涤。然后，用na2so4除去剩余的水，并浓缩得到黄色固体化合物(产率：99％)。
[0460]1h nmr(dmso
‑
d6,400mhz):δ＝7.85(d,j＝8.6hz,1h),7.61(d,j＝1.9hz,1h),7.33(dd,j＝2.0,8.6hz,1h),3.96(s,3h).
[0461]
步骤2：将1
‑
乙氧基膦酰氧基乙烷(0.3当量)和4
‑
溴
‑2‑
甲氧基
‑1‑
硝基
‑
苯(1当量)溶解于甲苯中，然后向其中加入tea(1.7当量)、koac(0.1当量)、dppf(0.04当量)和pd(oac)2(0.02当量)。将反应混合物在氮气下于100℃搅拌12小时。反应终止后，将滤液浓缩，硅胶层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝10:1～1:1)。固体化合物用石油醚重结晶，然后过滤得到黄色化合物(产率：53％)。
[0462]1h nmr(dmso
‑
d6,400mhz):δ＝8.01(dd,j＝4.5,8.1hz,1h),7.53(dd,j＝1.0,14.7hz,1h),7.44(ddd,j＝1.2,8.1,12.5hz,1h),4.13
‑
4.04(m,4h),4.00(s,3h),1.26(t,j＝7.0hz,6h)；
[0463]
lcms(方法1)：lcms_2，rt＝0.87分钟，290(m 1)

[0464]
步骤3：将4
‑
二乙氧基磷酰基
‑2‑
甲氧基
‑1‑
硝基
‑
苯(50g，167.69mmol)溶解于dmf(13.72ml)中，然后向其中缓慢加入socl2(60ml)。将反应混合物在80℃下搅拌2小时。反应终止后，浓缩溶剂，用(dcm/庚烷)重结晶，过滤得到黄色固体化合物(产率：粗品85％)。
[0465]1h nmr(dmso
‑
d6,400mhz):δ＝7.93(dd,j＝4.0,8.1hz,1h),7.59
‑
7.49(m,1h),7.39(ddd,j＝1.2,8.1,12.2hz,1h),4.00
‑
3.92(m,3h).
[0466]
步骤4：将4
‑
二氯磷酰基
‑2‑
甲氧基
‑1‑
硝基
‑
苯(40g，粗品)在
‑
78℃溶解于thf(500ml)中，然后向其中缓慢滴加溴(乙烯基)镁(1m在thf中，325.92ml)。反应混合物在
‑
78℃搅拌1小时。当反应终止时，反应混合物用nh4cl水溶液中和，溶解于ea(x 2)中，然后用
nahco3水溶液和盐水洗涤。然后，用na2so4除去剩余的水，并浓缩得到棕色油(产率：67％)。
[0467]1h nmr(dmso
‑
d6,400mhz):δ＝8.07
‑
7.96(m,1h),7.58(dd,j＝1.1,12.5hz,1h),7.45(ddd,j＝1.3,8.1,10.9hz,1h),6.87
‑
6.67(m,2h),6.35(dd,j＝1.9,12.6hz,1h),6.27
‑
6.14(m,3h),3.99(s,3h)；
[0468]
lcms(方法1)：lcms_4,rt＝0.76min,254(m 1)

[0469]
步骤5：将环丙胺(1.3当量)和4
‑
二乙烯基磷酰基
‑2‑
甲氧基
‑1‑
硝基
‑
苯(1当量)溶解于thf和h2o中，然后在80℃反应12小时。反应终止后，将溶剂浓缩，溶解于dcm(x 2)中，然后用nahco3水溶液和盐水洗涤。然后，用na2so4除去剩余的水并浓缩。滤液用硅胶色谱纯化(乙酸乙酯/meoh＝100:1～20/1)，得到化合物(收率：72％)
[0470]1h nmr(dmso
‑
d6,400mhz):δ＝7.99(dd,j＝2.7,8.1hz,1h),7.65(d,j＝11.9hz,1h),7.58
‑
7.50(m,1h),7.24(d,j＝8.3hz,1h),6.59
‑
6.47(m,2h),4.01(s,3h),3.77(d,j＝4.0hz,6h),3.56(s,2h),2.94
‑
2.70(m,4h),2.38
‑
2.30(m,2h),1.99
‑
1.86(m,2h)；
[0471]
lcms(方法2)：lcms_5,rt＝0.62min,421(m 1)

[0472]
步骤6：将1
‑
环丙基
‑4‑
(3
‑
甲氧基
‑4‑
硝基苯基)
‑
1,4
‑
氮杂膦烷4
‑
氧化物(1当量)和nh4cl溶解于meoh中，然后向其中加入zn。反应混合物在回流下搅拌12小时。反应终止后，将反应混合物通过硅藻土过滤，然后能够得到固体化合物(产率：93％)。
[0473]1h nmr(4dmso
‑
d6,400mhz):δ＝7.16
‑
6.99(m,2h),6.77
‑
6.64(m,1h),5.44
‑
5.21(m,2h),3.90
‑
3.73(m,3h),3.42
‑
3.24(m,2h),3.03
‑
2.85(m,4h),2.19
‑
2.00(m,2h),1.89
‑
1.67(m,3h),0.51
‑
0.43(m,2h),0.38
‑
0.31(m,2h)
[0474]
lcms(方法1)lcms_2,rt＝1.241min,281.1(m h)

[0475]
<实施例1>根据本发明的化合物的制备1
[0476]
根据本发明的吡咯并嘧啶衍生物化合物按照如下方案11所示的方式制备。
[0477]
[方案11]
[0478][0479]
步骤1：将制备例1
‑
11的化合物(1.0当量)、2
‑
甲氧基
‑4‑
(甲基磺酰基)苯胺(1.2当量)和k2co3(5.0当量)加入并溶解于sec
‑
buoh(0.1m)中，然后通过超声处理脱气一分钟。在氮气下将pd2(dba)3(0.1当量)和xphos(0.1当量)加入反应混合物中，然后在100℃下搅拌2小时。通过硅藻土过滤反应混合物，并用乙酸乙酯洗涤。将所得滤液浓缩，所得液体混合物无需任何进一步纯化即可用于下一步骤。
[0480]
步骤2：将n4‑
环戊基
‑
n2‑
(2
‑
甲氧基
‑4‑
(甲基磺酰基)苯基)
‑7‑
((2
‑
(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)
‑
7h
‑
吡咯并[2,3
‑
d]嘧啶
‑
2,4
‑
二胺(1.0当量)溶解于tfa(0.2m)中，然后在室温下反应1小时。反应终止后，除去溶剂。将浓缩的混合物再次溶解于etoh(0.2m)中，然后向其中加入nh4oh(0.1m)。然后，混合物在60℃反应1小时。反应后，减压浓缩除去溶剂。浓缩的混合物通过pre
‑
hplc纯化，得到目标化合物为固体(产率：13％)。
[0481]
实施例2至477的化合物以与实施例1类似的方式制备。实施例1至477的化合物的化学结构、化合物名称以及nmr、质量和hplc分析结果总结并列于下表1中。
[0482]
[表1]
[0483]
[0484]
[0485]
[0486]
[0487]
[0488]
[0489]
[0490]
[0491]
[0492]
[0493]
[0494]
[0495]
[0496]
[0497]
[0498]
[0499]
[0500]
[0501]
[0502]
[0503]
[0504]
[0505]
[0506]
[0507]
[0508]
[0509]
[0510]
[0511]
[0512]
[0513]
[0514]
[0515]
[0516]
[0517]
[0518]
[0519]
[0520]
[0521]
[0522]
[0523]
[0524]
[0525]
[0526]
[0527]
[0528]
[0529]
[0530]
[0531]
[0532]
[0533]
[0534]
[0535]
[0536]
[0537]
[0538]
[0539]
[0540]
[0541]
[0542]
[0543]
[0544]
[0545]
[0546]
[0547]
[0548]
[0549]
[0550]
[0551]
[0552]
[0553]
[0554]
[0555]
[0556]
[0557]
[0558]
[0559]
[0560]
[0561]
[0562]
[0563]
[0564]
[0565]
[0566]
[0567]
[0568]
[0569]
[0570]
[0571]
[0572]
[0573]
[0574]
[0575]
[0576]
[0577]
[0578]
[0579]
[0580]
[0581]
[0582]
[0583]
[0584]
[0585]
[0586]
[0587]
[0588]
[0589]
[0590]
[0591]
[0592]
[0593]
[0594]
[0595]
[0596]
[0597]
[0598]
[0599]
[0600]
[0601]
[0602]
[0603]
[0604]
[0605]
[0606]
[0607]
[0608]
[0609]
[0610]
[0611]
[0612]
[0613]
[0614]
[0615]
[0616]
[0617]
[0618]
[0619]
[0620]
[0621]
[0622]
[0623]
[0624]
[0625]
[0626]
[0627]
[0628]
[0629]
[0630]
[0631]
[0632]
[0633]
[0634]
[0635]
[0636]
[0637]
[0638]
[0639]
[0640]
[0641]
[0642]
[0643]
[0644]
[0645]
[0646]
[0647]
[0648]
[0649]
[0650]
[0651]
[0652]
[0653]
[0654]
[0655]
[0656]
[0657]
[0658]
[0659]
[0660]
[0661]
[0662]
[0663][0664]
<实验例1>根据本发明的化合物对酶的抑制活性的评估1
[0665]
为了评估根据本发明的化合物对lrrk2、lrrk2(g2019s)、dyrk1、clk1和ttk激酶的抑制活性，进行如下实验。
[0666]
1)lrrk2
[0667]
使用如下所述的方法使每个实施例化合物与纯化的人lrrk2(invitrogen#pr8604b)酶反应以评估抑制酶的能力。40mm tris
‑
hcl(ph 7.4)、20mm mgcl2、0.5mg/ml bsa和50μm dtt的组合物用作反应缓冲液，测试物质的所有反应均在反应缓冲液中进行。使用连续稀释方法将化合物从10mm dmso储备液开始稀释12倍，并在最终化合物浓度为50、10、2、0.4、0.08、0.016、0.0032、0.00064、0.000128、0.0000256、0.00000512和0.000001024μm时测量酶活性。在测试中，将纯化的atp(10μm)和酶底物(0.2μg)与人lrrk2(25ng)酶在25℃反应2小时，并使用体外adp
‑
glo
tm
激酶测定法(promega)测定酶活性。酶活反应液、adp
‑
glo反应液和酶能力检测液以2:2:1的比例反应，用发光测定酶活性的抑制程度。基于未用化合物处理的溶剂对照的酶活性的荧光，计算根据化合物的每种处理浓度对酶活性的抑制程度。在这种情况下，将抑制50％酶活性的化合物的每种浓度确定为ic
50
(nm)值，并使用prism(5.01版；graphpad)软件计算。结果列于下表2中。
[0668]
2)lrrk2 g2019s
[0669]
使用如下所述的方法使每个实施例化合物与纯化的人lrrk2 g2019s(l10
‑
12gg,signalchem)酶反应以评估抑制酶的能力。40mm tris
‑
hcl(ph 7.4)、20mm mgcl2、0.5mg/ml bsa和50μm dtt的组合物用作反应缓冲液，测试物质的所有反应均在反应缓冲液中进行。使用连续稀释方法将化合物从10mm dmso储备液开始稀释12倍，并在最终化合物浓度为50、10、2、0.4、0.08、0.016、0.0032、0.00064、0.000128、0.0000256、0.00000512和0.000001024μm时测量酶活性。在测试中，将纯化的atp(10μm)和酶底物(0.2μg)与人lrrk2g2019s(16ng)酶在25℃反应2小时，并使用体外adp
‑
glo
tm
激酶测定法(promega)测定酶活性。酶活反应液、adp
‑
glo反应液和酶能力检测液以2:2:1的比例反应，用发光测定酶活性的抑制程度。基于未用化合物处理的溶剂对照的酶活性的荧光，计算根据化合物的每种处理浓度对酶活性的抑制程度。在这种情况下，将抑制50％酶活性的化合物的每种浓度确定为ic
50
(nm)值，并使用prism(5.01版；graphpad)软件计算。结果列于下表2中。
[0670]
3)gst
‑
dyrk1a
[0671]
使用如下所述的方法使每个实施例化合物与纯化的人gst
‑
dyrk1a(全长，thermo scientifics)酶反应以评估抑制酶的能力。40mm tris
‑
hcl(ph 7.4)、20mm mgcl2、0.5mg/ml bsa和50μm dtt的组合物用作反应缓冲液，测试物质的所有反应均在反应缓冲液中进行。在测试中，将纯化的atp(10μm)和特定酶底物溶液与人gst
‑
dyrk1a(全长，10ng)酶在25℃反应1小时，并使用体外adp
‑
glo
tm
激酶测定法(promega)测定酶活性。酶活反应液、adp
‑
glo反应液和酶能力检测液以2:2:1的比例反应，用发光测定酶活性的抑制程度。基于未用化合物处理的溶剂对照的酶活性的荧光，计算根据化合物的每种处理浓度对酶活性的抑制程度。在这种情况下，将抑制50％酶活性的化合物的每种浓度确定为ic
50
(nm)值，并且化合物各自的ic
50
(nm)值由3组数据确定，并使用prism(5.01版；graphpad)软件计算。
[0672]
4)gst
‑
clk1
[0673]
使用如下所述的方法使每个实施例化合物与纯化的人gst
‑
clk1(129
‑
末端，signalchem)酶反应以评估抑制酶的能力。40mm tris
‑
hcl(ph 7.4)、20mm mgcl2、0.5mg/ml bsa和50μm dtt的组合物用作反应缓冲液，测试物质的所有反应均在反应缓冲液中进行。在测试中，将纯化的atp(10μm)和特定酶底物溶液与人gst
‑
clk1(129
‑
末端，3ng)酶在25℃反应1小时，并使用体外adp
‑
glo
tm
激酶测定法(promega)测定酶活性。酶活反应液、adp
‑
glo反应液和酶能力检测液以2:2:1的比例反应，用发光测定酶活性的抑制程度。基于未用化合物处理的溶剂对照的酶活性的荧光，计算根据化合物的每种处理浓度对酶活性的抑制程度。在这种情况下，将抑制50％酶活性的化合物的每种浓度确定为ic
50
(nm)值。化合物各自的ic
50
(nm)值由3组数据确定，并使用prism(5.01版；graphpad)软件计算。结果列于下表2中。
[0674]
5)ttk
[0675]
使用如下所述的方法使每个实施例化合物与纯化的人ttk(signalchem#t20
‑
10g)酶反应以评估抑制酶的能力。40mm tris
‑
hcl(ph 7.4)、20mm mgcl2、0.1mg/ml bsa(5x激酶缓冲液，signalchem#k03
‑
09)和50μm dtt(signalchem#d86
‑
09b)的组合物用作反应缓冲液，测试物质的所有反应均在反应缓冲液中进行。使用连续稀释方法将化合物从10mm dmso储备液开始稀释12倍，并在最终化合物浓度为1、0.333333、0.111111、0.037037、0.012346、0.004115、0.001372、0.000457、0.000152、0.000051和0.000017μm时测量酶活性。在测试
中，将纯化的atp(5μm，promega#v6930)和mbp酶底物(0.2μg，signalchem m42
‑
51n)与人ttk(7.5ng)酶在25℃反应4小时，并使用体外adp
‑
glo
tm
激酶测定法(promega#v6930)测定酶活性。酶活反应液、adp
‑
glo反应液和酶能力检测液以2:2:1的比例反应，用发光测定酶活性的抑制程度。基于未用化合物处理的溶剂对照的酶活性的荧光，计算根据化合物的每种处理浓度对酶活性的抑制程度。在这种情况下，将抑制50％酶活性的化合物的每种浓度确定为ic
50
(nm)值，并使用prism(8.2版；graphpad)软件计算。
[0676]
同时，使用激酶hotspot服务(reaction biology公司)测量一些化合物对酶的ic
50
值，并且在相同条件下在10μm的atp浓度下进行测试。从最大化合物浓度10mm开始，以3倍浓度梯度测量化合物的抑制活性，并且使用激酶hotspot服务(reaction biology公司)测量的值用星号(*)表示。
[0677]
所有实验方法均按照激酶hotspot客户协议(http://www.reactionbiology.com//kinase_assay_protocol)提供的方法进行。实验结果列于下表2中。
[0678]
在下表2中，以下名称用于评估对酶的抑制能力。
[0679]0‑
100nm＝a；101
‑
300nm＝b；和301
‑
1,000nm＝c
[0680]
[表2]
[0681]
[0682]
[0683]
[0684]
[0685]
[0686]
[0687]
[0688]
[0689]
[0690]
[0691]
[0692]
[0693][0694]
*表示的值是使用reaction biology测量的数据。
[0695]
如表2所示，可以看出本发明的实施例化合物具有抑制lrrk2、lrrk2(g2019s)、dyrk1、clk1和ttk激酶的作用。
[0696]
这表明本发明的实施例化合物对上述列举的酶具有抑制活性。这些结果表明，本发明的实施例化合物可有效用于预防或治疗与上述酶相关的疾病。
[0697]
因此，本发明的由式1表示的化合物可以有效地用于用于预防或治疗与lrrk2、lrrk2(g2019s)、dyrk1、clk1和ttk激酶相关的疾病的药物组合物中。
[0698]
<实验例2>mda
‑
mb
‑
231、mda
‑
mb
‑
468、shp
‑
77癌细胞的增殖抑制活性的评估
[0699]
为了评估本发明的化合物对癌细胞增殖的抑制活性，进行如下实验。
[0700]
为了评估对癌细胞增殖的抑制作用，将作为三阴性乳腺癌细胞系的mda
‑
mb
‑
231细胞系(korean cell line bank#30026)和mda
‑
mb
‑
468细胞系，以及作为小细胞肺癌细胞系的shp
‑
77(atcc#crl
‑
2195)各自在dmem(hyclone#sh30243)或rpmi培养基(hyclone#sh3027.01)中培养，以分析细胞生长率。更具体地说，将细胞系以每孔2,000个细胞/100μl的密度接种在96孔平底板(corning#3903)上，然后用11种浓度的实施例化合物处理，将其溶液稀释3倍，使化合物的终浓度为10.000000、3.333333、1.111111、0.370370、0.123457、0.041152、0.013717、0.004572、0.001524、0.000508和0.000169μm。72小时后，每种培养基用100μl cell titer
‑
glo(promega g7573)处理，然后在室温下培养10分钟。然后，使用酶标仪测量发光度。gi
50
值是使用prism(版本8.2graphpad)软件从测量的发光度计算的。
[0701]
在下表3中，以下名称用于评估细胞增殖抑制活性。
[0702]0‑
50nm＝a；51
‑
100nm＝b；101
‑
300nm＝c；301
‑
1,000nm＝d；
[0703]
[表3]
[0704]
[0705]
[0706]
[0707][0708]
如表3所示，可以看出根据本发明的实施例化合物抑制了三阴性乳腺癌细胞的增殖。
[0709]
因此，本发明的由式1表示的化合物可用于治疗三阴性乳腺癌。
[0710]
<实验例3>人源单核细胞的细胞因子分泌抑制活性的评估
[0711]
为了评估对单核细胞的细胞因子分泌的抑制作用，将作为人源单核细胞系的thp
‑
1细胞(atcc，#tib
‑
202)在补充有10％胎牛血清(hyclone，sh30084.03)、1％青霉素链霉素(welgene，ls202
‑
02)和50μm 2
‑
巯基乙醇(gibco，#21985023)的rpmi
‑
1640(hyclone，sh30027.01)培养基中培养。测试中，将细胞以每孔1.5～2
×
105个细胞/250μl的密度接种于48孔板(spl，#30048)中，37℃、5％co2培养箱中培养16小时。此后，用dmso稀释化合物，使得化合物的终浓度为0.5μm。然后，在用脂多糖(lps)(sigma，#l6529)处理一小时之前，用稀释的化合物处理细胞。用化合物处理后，用lps处理细胞，使终浓度为500ng/ml。然后，在培养24小时后收集细胞培养液，并使用相应的elisa试剂盒测量培养液中包含的细胞因子il
‑
6(r&d systems，#d6050)和tnf
‑
α(r&d systems，#dta00d)的水平。根据制造商的指南进行实验后，通过使用酶标仪测量450nm处的光密度来进行细胞分析。结果列于下表4中。
[0712]
[表4]
[0713]
[0714][0715]
<实验例4>tau磷酸化的抑制的评估
[0716]
使用claricell
tm kinase cell
‑
based assay服务(从carnabio usa公司购得)测定对tau磷酸化的抑制作用。瞬时表达人dyrk1a和tau的人胚胎肾(hek 293)细胞与该化合物接触，然后裂解以释放细胞蛋白质。在这种情况下，释放的tau被捕获在板上，并使用tau磷酸化特异性抗体通过elisa量化磷酸化的程度。结果列于下表5中。
[0717]
[表5]
[0718]
[0719]
[0720][0721]
<实验例5>lrrk2(富含亮氨酸重复激酶
‑
2)的磷酸化抑制的评估
[0722]
为了评估本发明的由式1表示的化合物对lrrk2磷酸化的抑制作用，进行如下实验。结果如图1、2和3所示。
[0723]
具体地，用该化合物处理作为成纤维细胞的nih3t3细胞系，并使用蛋白质印迹法确认细胞中lrrk2磷酸化被抑制。将nih3t3细胞系以6x 105个细胞/μl的密度接种在60mm培养皿中，并贴壁一天。然后加入化合物使化合物终浓度为100nm，培养液中dmso的含量为0.1％，然后在co2培养箱中37℃培养24小时。去除培养液，用pbs洗涤细胞两次。然后，用补充有磷酸酶抑制剂和蛋白酶抑制剂的1x ripa缓冲液裂解细胞并收集。收集的细胞在4℃、14,000rpm离心15分钟，并且将上清液进行bradford法定量蛋白质，然后用5x样品缓冲液取样。等量的蛋白质在sds page凝胶上电泳，然后转移到硝酸纤维素膜上。膜用5％脱脂牛奶封闭1小时，向其中加入一抗抗lrrk2(ab133474)和抗lrrk2(磷酸s935，(ab133450))和肌动蛋白，并且在冰箱中反应16小时。用1x tbs
‑
t缓冲液(0.05％tween20)洗膜，然后加入二抗，贴膜1小时。然后，洗膜，并与ecl底物反应，然后使用las500检测蛋白质。
[0724]
如图1至3所示，可以看出，根据本发明的实施例化合物显著抑制成纤维细胞(即nih3t3细胞系)中lrrk2的磷酸化。此外，可以看出，与未用根据本发明的化合物处理细胞时相比，检测到的p
‑
lrrk2的量显著变低。这表明根据本发明的化合物有效地抑制了lrrk2的磷酸化。
[0725]
因此，由于根据本发明的由式1表示的化合物有效抑制了致癌细胞中的lrrk2磷酸化，所以根据本发明的式1的化合物可以有效地用于治疗或预防lrrk2相关疾病的药物组合物中。
[0726]
<实验例6>根据本发明的化合物对各种激酶的抑制活性的评估
[0727]
为了评估根据本发明的化合物对更多酶的抑制活性，进行如下实验。
[0728]
具体地，通过委托discoverx公司测定选自本发明实施例化合物的实施例化合物238、361、411、157、161、228和158的酶(激酶)选择性，并使用scanmaxtm kinase分析面板进行了实验。在这种情况下，用于酶处理的药物在dmso中的浓度为1μm，并且以与以下表达式1中相同的方式定义百分比对照(％对照)。结果列于下表4。
[0729]
[表达式1]
[0730]
(实施例化合物
‑
阳性对照)/(阴性对照
‑
阳性对照)x 100
[0731]
其中阳性对照表示具有0％对照百分比的化合物，并且阴性对照表示具有100％对照百分比的dmso。对于本发明的酶选择性，当相应酶的对照百分比<35％(即小于35％)时，认为该化合物对每种酶具有抑制活性。
[0732]
[表6]
[0733]
[0734][0735]
如表6所示，可以看出本发明实施例化合物对clk1、clk2、clk3、clk4、csnk1d、csnk1e、dyrk1a、dyrk1b、dyrk2、fak、gak、lrrk2、lrrk2(g2019s)、kg、phkg1、phkg2、plk4、pyk2和ttk激酶具有抑制活性，因为本发明的实施例化合物对相应的酶的对照百分比小于35％。
[0736]
因此，本发明的由式1表示的化合物可以有效地用于治疗与蛋白激酶相关的疾病。