用于癌症治疗的新型白介素-2变体的制作方法

技术特征：
1.一种分离的白介素-2(il-2)变体多肽，其中所述il-2变体多肽包含seq id no:3中的氨基酸残基位置r38、t41、f42、f44、e62、p65、e68、y107或s125中的一个或更多个被另一个氨基酸取代的氨基酸序列，并且其中与由seq id no:3代表的多肽相比，所述il-2变体多肽不能够与il-2rα结合且不再优先活化treg细胞，但仍保留结合和活化il-2rβγ复合物的能力。2.一种分离的il-2变体多肽，其中所述il-2变体多肽包含seq id no:3中的氨基酸残基位置r38、t41、f42、f44、e62、p65、e68、y107或s125中的一个或更多个被另一个氨基酸取代的氨基酸序列，并且其中与由seq id no:3代表的多肽相比，所述il-2变体多肽展示出与il-2rα结合降低和较低的treg活性，但仍保留结合和活化il-2rβγ复合物的能力。3.一种分离的il-2变体多肽，其中所述il-2变体多肽包含seq id no:3中的氨基酸残基位置r38、t41、f42、f44、e62、p65、e68、y107或s125中的一个或更多个被另一个氨基酸取代的氨基酸序列，并且其中与由seq id no:3代表的多肽相比，所述il-2变体多肽展示出与il-2rα结合增强和增加的treg活性。4.一种分离的il-2变体多肽，其中所述il-2变体多肽包含seq id no:3中的氨基酸残基位置l19、d20、s125或q126中的一个或更多个被另一个氨基酸取代的氨基酸序列，并且其中与由seq id no:3代表的多肽相比，所述il-2变体多肽展示出活化il-2rβγ复合物的能力降低。5.一种分离的il-2变体多肽，其中所述il-2变体多肽包含seq id no:3中的一个氨基酸残基位置s125被另一个氨基酸取代的氨基酸序列，并且其中与由seq id no:3代表的多肽相比，所述il-2变体多肽展示出改进的蛋白表达和纯度。6.根据权利要求1至5中任一项所述的il-2变体多肽，其中所述氨基酸取代选自由以下组成的组：在seq id no:3的位置19处的l19d、l19h、l19n、l19p、l19q、l19r、l19s、l19y的取代，在位置38处的r38a、r38f、r38g的取代，在位置41处的t41a、t41g和t41v的取代，在位置42处的f42a的取代，在位置44处的f44g和f44v的取代，在位置62处的e62a、e62f、e62h和e62l的取代，在位置65处的p65a、p65e、p65g、p65h、p65k、p65n、p65q、p65r的取代，在位置68处的e68e、e68f、e68h、e68l和e68p的取代，在位置107处的y107g、y107h、y107l和y107v的取代，和在位置125处的s125i的取代，在位置126处的q126e的取代，以及在seq id no:3的n末端处的5个、6个、7个、8个、9个、10个或11个氨基酸的缺失突变体，或这些取代或缺失突变体的任何组合。7.根据权利要求1至6中任一项所述的il-2变体多肽，其中所述il-2变体多肽包含在seq id no:3的氨基酸残基位置p65和s125处的两个氨基酸取代。8.根据权利要求1至6中任一项所述的il-2变体多肽，其中所述il-2变体多肽包含在seq id no:3的氨基酸残基位置l19、p65和s125处的三个氨基酸取代。9.根据权利要求1至8中任一项所述的il-2变体多肽，其中所述il-2变体多肽包含选自由seq id no:31-66和seq id no:111-120中列出的氨基酸序列组成的组的氨基酸序列。10.一种分离的il-2变体多肽，所述分离的il-2变体多肽包含与seq id no:3至少约70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列，并且其中与由seq id no:3代表的多肽相比，所述il-2变体多肽不再优先活化treg，但仍保留活化il-2受体复合物的能力。
11.一种分离的融合蛋白，所述分离的融合蛋白包含1)根据权利要求1至10中任一项所述的il-2变体多肽和2)异源蛋白。12.根据权利要求11所述的分离的融合蛋白，其中所述il-2变体多肽在其n末端氨基酸处与所述异源蛋白的c末端氨基酸任选地通过肽接头以单体或二聚体形式融合。13.根据权利要求11所述的分离的融合蛋白，其中所述il-2变体多肽在其c末端氨基酸处与所述异源蛋白的n末端氨基酸任选地通过肽接头以单体或二聚体形式融合。14.根据权利要求11至13中任一项所述的分离的融合蛋白，其中所述异源蛋白增加所述il-2变体多肽的循环半衰期。15.根据权利要求11至13中任一项所述的分离的融合蛋白，其中所述异源蛋白增强所述il-2变体多肽的表达水平和总体纯度。16.根据权利要求11至13中任一项所述的分离的融合蛋白，其中所述异源蛋白用作标志物或标签或靶向部分。17.根据权利要求11至16中任一项所述的分离的融合蛋白，其中所述异源蛋白是选自由以下组成的组的fc结构域：人类igg1 fc结构域、人类igg2 fc结构域、人类igg3 fc结构域、人类igg4 fc结构域、iga fc结构域、igd fc结构域、ige fc结构域、igg fc结构域和igm fc结构域。18.根据权利要求17所述的分离的融合蛋白，其中所述fc结构域是具有沉默的效应子功能和/或具有半衰期延长功能的fc结构域。19.根据权利要求17至18中任一项所述的分离的融合蛋白，其中所述fc结构域是具有选自由seq id no:7-10和134-135中列出的氨基酸序列组成的组的氨基酸序列的fc结构域。20.根据权利要求11至16中任一项所述的分离的融合蛋白，其中所述融合蛋白包含选自由seq id no:67-107中列出的氨基酸序列组成的组的氨基酸序列。21.根据权利要求11至16中任一项所述的分离的融合蛋白，其中所述异源蛋白是靶向肿瘤相关抗原(taa)的呈以下形式的靶向部分：抗体、抗体重链或轻链、抗体片段、蛋白和肽。22.根据权利要求21所述的分离的融合蛋白，其中所述抗体或抗体片段选自由以下组成的组：pd-1拮抗性抗体；pd-l1拮抗性抗体；tigit拮抗性抗体；ctla-4拮抗性抗体；cd20拮抗性抗体；her-2/neu拮抗性抗体；egfr拮抗性抗体；fap拮抗性抗体；抗整联蛋白α4β7的抗炎抗体；tnfα拮抗性抗体和激动性cd40抗体。23.根据权利要求22所述的分离的融合蛋白，其中所述抗体是拮抗性成纤维细胞活化蛋白(fap)抗体或抗体片段。24.根据权利要求23所述的分离的融合蛋白，其中所述抗体是包含seq id no:136和137中列出的重链和轻链氨基酸序列的人源化拮抗性fap抗体。25.根据权利要求21所述的分离的融合蛋白，其中所述异源蛋白是针对免疫检查点调节剂的抗体或抗体片段。26.根据权利要求25所述的分离的融合蛋白，其中所述抗体是拮抗性程序性死亡-1(pd-1)抗体或抗体片段。27.根据权利要求26所述的分离的融合蛋白，其中所述抗体是选自包含以下的抗体的
拮抗性人源化pd-1抗体：seq id no:138和139中列出的重链和轻链氨基酸序列；seq id no:140和141中列出的重链和轻链氨基酸序列；seq id no:142和143中列出的重链和轻链氨基酸序列；seq id no:144和145中列出的重链和轻链氨基酸序列；和seq id no:146和147中列出的重链和轻链氨基酸序列。28.根据权利要求11-27中任一项所述的分离的融合蛋白，其中所述il-2变体多肽在其n末端氨基酸处与所述异源蛋白的c末端氨基酸任选地通过肽接头以二聚体或单体形式融合。29.根据权利要求28所述的分离的融合蛋白，其中所述il-2变体多肽通过肽接头以二聚体或单体形式与所述异源蛋白融合。30.根据权利要求29所述的融合蛋白，其中所述肽接头包含1个和40个之间的氨基酸。31.一种药物组合物，所述药物组合物包含与药学上可接受的载体混合的根据权利要求1至30中任一项所述的il-2变体多肽或分离的融合蛋白。32.一种治疗受试者的疾病或感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的根据权利要求31所述的药物组合物。33.根据权利要求32所述的方法，其中所述疾病是癌症。34.根据权利要求33所述的方法，其中所述方法还包括施用能够治疗受试者的癌症的第二治疗剂或疗法。35.一种分离的核酸分子，所述分离的核酸分子编码根据权利要求1至30中任一项所述的il-2变体多肽或融合蛋白。36.一种表达载体，所述表达载体包含权利要求35所述的核酸分子。37.一种宿主细胞，所述宿主细胞包含根据权利要求36所述的核酸分子。38.一种产生根据权利要求1至30中任一项所述的il-2变体多肽或融合蛋白的方法，所述方法包括在促进所述il-2变体多肽或融合蛋白表达的条件下培养根据权利要求37所述的宿主细胞，并回收所述il-2变体多肽或融合蛋白。39.一种分离的il-2变体多肽或融合蛋白，所述分离的il-2变体多肽或融合蛋白通过权利要求38所述的方法产生。

技术总结
本发明涉及除了若干被突变的氨基酸以外，与人类IL-2共有一级序列的多肽。一组IL-2变体包含大幅降低这些多肽刺激Treg细胞的能力并使得它们在肿瘤的治疗中更有效的突变。还包括这些突变变体单独使用，或与疫苗、或TAA靶向生物制品、或免疫检查点阻断剂组合使用，或用作双功能分子构建体中的构建模块，用于治疗其中不期望Treg活性的疾病诸如癌症或感染的治疗用途。在另一方面，本发明涉及包含所公开的多肽的药物组合物。最后，本发明涉及所公开的多肽和药物组合物的治疗用途，这是由于它们选择性调节免疫系统对疾病如自身免疫性紊乱和炎性紊乱、癌症和各种感染性疾病的作用。癌症和各种感染性疾病的作用。癌症和各种感染性疾病的作用。


技术研发人员：李跃升 芮凌云 徐静
受保护的技术使用者：科优基因公司
技术研发日：2020.06.13
技术公布日：2022/6/21