GOLT1B在肾癌的预后中的应用的制作方法

golt1b在肾癌的预后中的应用
技术领域
1.本技术涉及肾癌诊断技术领域，尤其是涉及golt1b在肾癌的预后中的应用。


背景技术：

2.肾癌是泌尿系统最常见的恶性肿瘤之一，肾癌中最常见的是肾细胞癌，约占肾癌的90％。肾细胞癌依照病理组织学可分为肾透明细胞癌、肾乳头状细胞癌、肾嫌色细胞癌等。近些年来，肾细胞癌的发病率逐年上升，而且，肾癌不易进行早期诊断，当患者出现临床症状就诊时，约有30％的病人已发生了转移。另一方面，早期肾癌患者术后仍有很大一部分最终会出现复发转移，患者的5年生存率较低。然而目前临床上还没有理想的分子指标来评估预后的风险。因此，有必要寻找有效的预后生物标志物从而能够辅助临床实践选择、指导患者复查周期，实现对肿瘤进展早发现、早治疗。


技术实现要素：

3.本技术旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本技术提出一种具有良好的预后价值的肾癌标志物，定量检测这些标志物的试剂能够用于肾癌预后判断。
4.本技术的第一方面，提供定量检测golt1b的试剂在制备用于肾癌的预后的试剂盒中的应用。
5.根据本技术实施例的应用，至少具有如下有益效果：
6.本技术通过一系列生物信息学分析方法来筛选肾癌与正常肾组织中差异表达的基因或其蛋白质，首次提出golt1b基因或者golt1b蛋白作为肾癌的预后进行判断的生物标志物，弥补了现有肾癌相关指标的不足，具有良好的临床价值。
7.其中，golt1b(golgi transport 1b，gene id：51026)为高尔基体运输1b基因，该基因是一种蛋白质编码基因，与golt1b相关的疾病目前已知的包括宫颈腺鳞癌和锥杆营养不良。与该基因相关的基因本体(go)注释包括过时的信号转导活性(obsolete signal transducer activity)和脂肪酶活性，而该基因的一个重要旁系同源物是golt1a。肾癌的诊断是指对于受试者是否患有肾癌进行判断，而肾癌的预后是指对于受试者未来的可能病程和结局进行预测，包括但不限于肾癌的复发、转移、死亡等不同进程或结局的风险。
8.在本技术的一些实施方式中，试剂在基因水平或蛋白水平上定量检测标志物。在基因水平上定量检测核酸的试剂通过以下方法进行，具体包括但不限于聚合酶链反应(pcr)、等温扩增反应(如环介导等温扩增lamp、重组酶聚合酶扩增rpa等)、探针杂交技术、rna印迹等方法。在蛋白水平上定量检测golt1b蛋白的试剂通过以下方法进行，包括但不限于酶联免疫反应(elisa)、放射免疫反应(ira)、免疫组化染色、蛋白质印记、电泳、液相色谱-质谱/质谱(lc-ms/ms)等。
9.在本技术的一些实施方式中，在基因水平上定量检测标志物的试剂选自引物、探针和基因芯片。其中，引物是指能够特异性扩增golt1b基因的引物，探针是指能够特异性识别golt1b基因或者该基因转录本的探针，基因芯片是指在基底材料(具体包括但不限于聚
合物如尼龙膜、硝酸纤维素膜，以及玻璃等)上固定有前述的探针的阵列所形成的复合结构。
10.在本技术的一些实施方式中，在蛋白水平上定量检测标志物的试剂为抗体。其中，抗体是指能够特异性识别golt1b蛋白的抗体，具体包括单克隆抗体及多克隆抗体中的至少一种。
11.在本技术的一些实施方式中，肾癌为肾细胞癌，肾细胞癌进一步可以分为肾嫌色细胞癌(kich)、肾透明细胞癌(kirc)、肾乳头状细胞癌(kirp)。本技术实施例中发现，上述三种肾细胞癌的golt1b的表达情况与正常组织或癌旁组织的表达相比明显上升，因此可以通过对受试者golt1b的表达水平是否高于设定的阈值来判断肾癌的预后；如果低于阈值，则判断患有肾癌的预后较好；而高于阈值，则判断肾癌的预后较差。其中，设定的阈值可以是根据特定的肾癌患者数据库中golt1b的表达情况数据综合计算得到，或通过具体的临床实验样本检测后综合得出。
12.在本技术的一些实施方式中，预后判断包括预测受试者的生存期或生存率。其中，生存期是结合受试者的病情、身体情况等对其还能生存多久的一个判断。而生存率则是特定时间节点下存活的概率。一般而言，生存期可以分为总生存期、中位生存期、无进展生存期等。在本技术的实施例中，申请人发现，肾癌患者的golt1b表达情况与其生存期密切相关，因而可以根据golt1b的表达水平来预测受试者的生存期。
13.在本技术的一些实施方式中，生存期为总体生存期、无复发生存期、无进展生存期中的至少一种。总体生存期(overall survival，oa)是指从确认患有肾癌开始到因为任何原因引起死亡的时间。无复发生存期(recurrence-free survival，rfs)是指初次手术到最早出现复发证据的时间。无进展生存期(progression-free survival，pfs)是指由随机至第一次发生疾病进展或任何原因死亡的时间，其中，疾病进展是指肿瘤增长、肿瘤原发病灶转移、发现新病灶等。在本技术的实施例中，申请人发现受试者的golt1b的表达水平与受试者的总体生存率等存在显著相关性，因而可以通过golt1b的表达水平来预测受试者的生存期。
14.在本技术的一些实施方式中，生存率包括一年生存率、两年生存率、三年生存率、五年生存率、十年生存率中的至少一种。
15.本技术的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本技术的实践了解到。
附图说明
16.图1是本技术的实施例1中kich患者与正常人的golt1b的差异表达结果。
17.图2是本技术的实施例1中kirc患者与正常人的golt1b的差异表达结果。
18.图3是本技术的实施例1中kirp患者与正常人的golt1b的差异表达结果。
19.图4是本技术的实施例1中不同golt1b表达水平的kich患者的生存曲线。
20.图5是本技术的实施例1中不同golt1b表达水平的kirc患者的生存曲线。
21.图6是本技术的实施例1中不同golt1b表达水平的kirp患者的生存曲线。
22.图7是本技术的实施例1中单因素cox回归模型分析肾癌患者的总生存期的森林图。
具体实施方式
23.以下将结合实施例对本技术的构思及产生的技术效果进行清楚、完整地描述，以充分地理解本技术的目的、特征和效果。显然，所描述的实施例只是本技术的一部分实施例，而不是全部实施例，基于本技术的实施例，本领域的技术人员在不付出创造性劳动的前提下所获得的其他实施例，均属于本技术保护的范围。
24.下面详细描述本技术的实施例，描述的实施例是示例性的，仅用于解释本技术，而不能理解为对本技术的限制。
25.在本技术的描述中，若干的含义是一个以上，多个的含义是两个以上，大于、小于、超过等理解为不包括本数，以上、以下、以内等理解为包括本数。如果有描述到第一、第二只是用于区分技术特征为目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量或者隐含指明所指示的技术特征的先后关系。
26.本技术的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示意性实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本技术的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。
27.实施例1
28.在tcga库中搜索肾癌和正常肾组织中golt1b的差异表达数据并进行分析，结果如图1～3所示，其中图1～图3分别是kich、kirc、kirp患者与正常人对照结果，图中横坐标tumor为肾癌患者，normal为正常人组织或癌旁组织，纵坐标为transcripts per million(tpm)均一化( 0.001)和取对数后的值。从图中可以看出，相较于正常组织或癌旁组织，golt1b在kirc和kirp中表达显著上升。
29.进一步使用tcga数据库中rna-seq数据和患者生存时间信息对golt1b在肾癌患者的预后价值进行分析，生存曲线采用kaplan-meier法计算，logrank检验统计学意义。结果如图4～6所示，曲线的横坐标为天数，纵坐标为总体生存率，上方曲线为低表达，下方曲线为高表达，曲线下方为不同时间点的风险人数(number at risk)。从图中可以看出，三组结果均存在显著差异。golt1b的表达量越低，肾癌患者的总体生存率或总体生产时间也就越高。
30.从tcga数据库中确认肾癌患者(包括kich、kirc、kirp)的golt1b的差异表达数据以及其它临床信息，通过单因素回归模型分析了肾癌患者的年龄、性别、分期以及golt1b表达情况等不同变量与总生存期之间的关系，结果如图7所示，是总生存期的单因素cox回归分析的森林图，其中，pm_stage是指按照远端转移情况对肿瘤的分组，ptnm_stage是综合原发肿瘤范围和大小(t)以及淋巴结播散情况和远端转移情况对肿瘤进行的分期情况。从图中可以看出，golt1b的表达水平与总生存期显著相关(p值均小于0.0001)，因此可以作为独立的预后因素。
31.综合上述结果可以看出，golt1b能够作为肾癌患者的独立的诊断或预后因素，具有良好的诊断或预后判断的价值。可以理解的是，golt1b也可以与其它标志物进行联用以更进一步提高对肾癌的诊断或预后的准确性或灵敏度。
32.上面结合实施例对本技术作了详细说明，但是本技术不限于上述实施例，在所属
技术领域普通技术人员所具备的知识范围内，还可以在不脱离本技术宗旨的前提下作出各种变化。此外，在不冲突的情况下，本技术的实施例及实施例中的特征可以相互组合。