一种提高蛋白含量的猴头菇菌培养基组合物、液体发酵方法及蛋白制备方法与流程

1.本发明涉及生物技术领域，具体而言，涉及一种提高蛋白 含量的猴头菇菌培养基组合物、液体发酵方法及蛋白制备方法。


背景技术：

2.作为食用菌王国的珍品,猴头菇属于药食两用真菌,尤其是 其医药方面的药用价值，受到广大消费者的青睐，具有健脾养 胃、安神、抗癌的功效,对体虚乏力、消化不良、失眠、胃与十 二指肠溃疡、慢性胃炎、消化道肿瘤等症有特效。
[0003][0004]
猴头菇菌丝体具有生长速度快，发酵步骤简单、易于控制 等优点，从菌丝体中提取蛋白等生物活性物质可以缩短生产时 间、提高生产效率、降低成本。
[0005]
鉴于此，本发明提供一种生产猴头菇菌丝体发酵培养基组 合物及其发酵方法与蛋白制备方法。


技术实现要素：

[0006]
本发明的目的在于提供一种提高蛋白含量的猴头菇菌培养 基组合物、液体发酵方法及蛋白制备方法。
[0007]
为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：
[0008]
第一方面，本发明提供一种提高蛋白含量的猴头菇菌培养 基组合物，猴头菇菌培养基组合物包括党参药渣、黑豆粉、破 壁刀豆粉、菊花花粉、石膏、硫酸镁。
[0009]
进一步地，在本发明较佳的实施例中，按重量份数计，党 参药渣为5～15份、黑豆粉20～30份、破壁刀豆粉为6～16 份、菊花花粉为0.3～1份、石膏为0.6～1份、硫酸镁为0.3～1 份。
[0010]
进一步地，在本发明较佳的实施例中，按重量份数计，猴 头菇菌培养基组合物还包括秋水仙素。
[0011]
进一步地，在本发明较佳的实施例中，按重量份数计，党 参药渣为8～12份、黑豆粉23～27份、破壁刀豆粉为9～11份、菊 花花粉为0.3～1份、石膏为0.6～1份、硫酸镁为0.3～1份和秋水 仙素为0.0006～0.0010份。
[0012]
进一步地，在本发明较佳的实施例中，按重量份数计，党 参药渣为10份、黑豆粉25份、破壁刀豆粉为10份、菊花花粉为 0.7份、石膏为0.8份、硫酸镁为0.7份、秋水仙素为0.0008份。
[0013]
第二方面，本发明提供一种猴头菇菌丝体液体发酵方法， 其包括：
[0014]
猴头菇菌丝体液体发酵培养基中党参药渣5～15g/l、黑豆粉 20～30g/l、破壁刀豆粉为6～16g/l、菊花花粉为0.3～1g/l、石膏 为0.6～1g/l、硫酸镁为0.3～1g/l，加蒸馏水补充到规定量，ph6.2～6.8，121℃灭菌15～30min后冷却制得液体培养基，将猴头菇菌母
种 按常规接种后进行液体发酵，温度28～30℃，通风并搅拌，发酵时 间6～10d，将培养好的发酵液过滤或离心3500～8000rpm处理，收 集菌丝体，经过洗涤、干燥得到猴头菇菌丝体。
[0015]
进一步地，猴头菇菌丝体液体发酵培养基中所述党参药渣为 8～12g/l、黑豆粉23～27g/l、破壁刀豆粉为9～11g/l、菊花花粉为 0.3～1g/l、石膏为0.6～1g/l、硫酸镁为0.3～1g/l和秋水仙素为 0.0006～0.0010g/l，加蒸馏水补充到规定量，ph6.2～6.8，121℃灭 菌15～30min后冷却制得液体培养基，将猴头菇菌母种按常规接种后 进行液体发酵，温度29℃，通风并搅拌，发酵时间8d，将培养好的 发酵液离心4000rpm处理，收集菌丝体，经过洗涤、干燥得到猴头菇 菌丝体。
[0016]
进一步地，在本发明较佳的实施例中，猴头菇菌丝体液体发 酵培养基中所述党参药渣为10g/l、黑豆粉25g/l、破壁刀豆粉为 10g/l、菊花花粉为0.7g/l、石膏为0.8g/l、硫酸镁为0.7g/l和秋 水仙素为0.0008g/l，加蒸馏水补充到规定量，ph6.2～6.8，121℃ 灭菌15～30min后冷却制得液体培养基，将猴头菇菌母种按常规接种 后进行液体发酵，温度29℃，通风并搅拌，发酵时间8d，将培养好 的发酵液离心4000rpm处理，收集菌丝体，经过洗涤、干燥得到猴头 菇菌丝体。
[0017]
第三方面，本发明还提供猴头菇菌丝体蛋白制备方法，其包括： 常规方法粉碎后，菌丝体粉末与水以1﹕13～1﹕23的比例混合，调 节ph值为7～9，温度35～39℃，超声提取15～25min，4000rpm离 心取上清液；上清液经分子量1000道尔顿膜过滤，分子量1000道尔 顿以下部分备用，分子量1000道尔顿以上部分加水至原上清液体积 的10～20％，经过s8大孔树脂层析，解析液经过冷冻干燥得蛋白。
[0018]
进一步地，在本发明较佳的实施例中，常规方法粉碎后，菌丝 体粉末与水以1﹕18的比例混合，温度为37℃，超声提取20min。
[0019]
本发明中液体发酵所用猴头菇菌母种按常规方法制备。
[0020]
与现有技术相比，本发明的有益效果包括：
[0021]
猴头菇菌的菌丝体干重、蛋白量、蛋白纯度与现有技术相比， 均有显著提高。
具体实施方式
[0022]
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但 是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明， 而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者， 按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注 明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
[0023]
以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描 述：
[0024]
实施例1
[0025]
猴头菇菌丝体液体发酵培养基中党参药渣5g/l、黑豆粉30g/l、 破壁刀豆粉6g/l、菊花花粉为1g/l、石膏为0.8g/l、硫酸镁0.3g/l， 加蒸馏水补充到规定量，ph6.8，121℃灭菌30min后冷却。
[0026]
将猴头菇菌母种按常规接种后进行液体发酵，温度30℃，通风 并搅拌，发酵时间6d，将培养好的发酵液离心6000rpm处理，收集 菌丝体，经过洗涤、干燥得到猴头菇菌丝体。
[0027]
常规方法粉碎后，菌丝体粉末与水以1﹕13的比例混合，调节 ph值为9，温度35℃，
超声提取25min，4000rpm离心取上清液；上 清液经分子量1000道尔顿膜过滤，分子量1000道尔顿以下部分备用， 分子量1000道尔顿以上部分加水至原上清液体积的20％，经过s8大 孔树脂层析，解析液经过冷冻干燥得蛋白。
[0028]
实施例2
[0029]
猴头菇菌丝体液体发酵培养基中党参药渣15g/l、黑豆粉20g/l、 破壁刀豆粉为16g/l、菊花花粉为0.3g/l、石膏为0.8g/l、硫酸镁 为1g/l，加蒸馏水补充到规定量，ph6.2，121℃灭菌15min后冷却。
[0030]
将猴头菇菌母种按常规接种后进行液体发酵，温度28℃，通风 并搅拌，发酵时间10d，将培养好的发酵液用60kg的压力进行板框 压滤，收集菌丝体，经过洗涤、干燥得到猴头菇菌丝体。
[0031]
常规方法粉碎后，菌丝体粉末与水以1﹕23的比例混合，调节 ph值为7，温度39℃，超声提取15min，4000rpm离心取上清液；上 清液经分子量1000道尔顿膜过滤，分子量1000道尔顿以下部分备用， 分子量1000道尔顿以上部分加水至原上清液体积的10％，经过s8大 孔树脂层析，解析液经过冷冻干燥得蛋白。
[0032]
实施例3
[0033]
猴头菇菌丝体液体发酵培养基中党参药渣为8g/l、黑豆粉 27g/l、破壁刀豆粉为9g/l、菊花花粉为1g/l、石膏为0.8g/l、硫 酸镁为0.3g/l和秋水仙素为0.0006g/l，加蒸馏水补充到规定量， ph6.8，121℃灭菌20min后冷却。
[0034]
将猴头菇菌母种按常规接种后进行液体发酵，温度28℃，通风 并搅拌，发酵时间10d，将培养好的发酵液离心2800rpm处理，收集 菌丝体，经过洗涤、干燥得到猴头菇菌丝体。
[0035]
常规方法粉碎后，菌丝体粉末与水以1﹕13的比例混合，调节 ph值为9，温度35℃，超声提取25min，4000rpm离心取上清液；上 清液经分子量1000道尔顿膜过滤，分子量1000道尔顿以下部分备用， 分子量1000道尔顿以上部分加水至原上清液体积的20％，经过s8大 孔树脂层析，解析液经过冷冻干燥得蛋白。
[0036]
实施例4
[0037]
猴头菇菌丝体液体发酵培养基中党参药渣为12g/l、黑豆粉 23g/l、破壁刀豆粉为11g/l、菊花花粉为0.3g/l、石膏为0.8g/l、 硫酸镁为1g/l和秋水仙素为0.0010g/l，加蒸馏水补充到规定量， ph6.5，121℃灭菌20min后冷却。
[0038]
将猴头菇菌母种按常规接种后进行液体发酵，温度29℃，通风 并搅拌，发酵时间8d，将培养好的发酵液离心3000rpm处理，收集 菌丝体，经过洗涤、干燥得到猴头菇菌丝体。
[0039]
常规方法粉碎后，菌丝体粉末与水以1﹕23的比例混合，调节 ph值为7，温度39℃，超声提取15min，4000rpm离心取上清液；上 清液经分子量1000道尔顿膜过滤，分子量1000道尔顿以下部分备用， 分子量1000道尔顿以上部分加水至原上清液体积的10％，经过s8大 孔树脂层析，解析液经过冷冻干燥得蛋白。
[0040]
实施例5
[0041]
猴头菇菌丝体液体发酵培养基中党参药渣为10g/l、黑豆粉 25g/l、破壁刀豆粉为10g/l、菊花花粉为0.7g/l、石膏为0.8g/l、 硫酸镁为0.7g/l和秋水仙素为0.0008g/l，加蒸馏水补充到规定量， ph6.5，121℃灭菌25min后冷却。
[0042]
将猴头菇菌母种按常规接种后进行液体发酵，温度29℃，通风 并搅拌，发酵时间8d，将培养好的发酵液离心4000rpm处理，收集 菌丝体，经过洗涤、干燥得到猴头菇菌丝体。
[0043]
常规方法粉碎后，菌丝体粉末与水以1﹕18的比例混合，调节 ph值为8，温度37℃，超声提取20min，4000rpm离心取上清液；上 清液经分子量1000道尔顿膜过滤，分子量1000道尔顿以下部分备用， 分子量1000道尔顿以上部分加水至原上清液体积的15％，经过s8大 孔树脂层析，解析液经过冷冻干燥得蛋白。
[0044]
对比例1
[0045]
猴头菇菌丝体液体发酵培养基中葡萄糖为10g/l、党参药渣为 10g/l、黑豆粉25g/l、破壁刀豆粉为10g/l、菊花花粉为0.7g/l、 石膏为0.8g/l、硫酸镁为0.7g/l和秋水仙素为0.0008g/l，加蒸馏 水补充到规定量，ph6.5，121℃灭菌25min后冷却。
[0046]
将猴头菇菌母种按常规接种后进行液体发酵，温度29℃，通风 并搅拌，发酵时间8d，将培养好的发酵液离心4000rpm处理，收集 菌丝体，经过洗涤、干燥得到猴头菇菌丝体。
[0047]
常规方法粉碎后，菌丝体粉末与水以1﹕18的比例混合，调节 ph值为8，温度37℃，超声提取20min，4000rpm离心取上清液；上 清液经分子量1000道尔顿膜过滤，分子量1000道尔顿以下部分备用， 分子量1000道尔顿以上部分加水至原上清液体积的15％，经过s8大 孔树脂层析，解析液经过冷冻干燥得蛋白。
[0048]
对比例2
[0049]
猴头菇菌丝体液体发酵培养基中蛋白胨为10g/l、党参药渣为 10g/l、黑豆粉25g/l、破壁刀豆粉为10g/l、菊花花粉为0.7g/l、 石膏为0.8g/l、硫酸镁为0.7g/l和秋水仙素为0.0008g/l，加蒸馏 水补充到规定量，ph6.5，121℃灭菌25min后冷却。
[0050]
将猴头菇菌母种按常规接种后进行液体发酵，温度29℃，通风 并搅拌，发酵时间8d，将培养好的发酵液离心4000rpm处理，收集 菌丝体，经过洗涤、干燥得到猴头菇菌丝体。
[0051]
常规方法粉碎后，菌丝体粉末与水以1﹕18的比例混合，调节 ph值为8，温度37℃，超声提取20min，4000rpm离心取上清液；上 清液经分子量1000道尔顿膜过滤，分子量1000道尔顿以下部分备用， 分子量1000道尔顿以上部分加水至原上清液体积的15％，经过s8大 孔树脂层析，解析液经过冷冻干燥得蛋白。
[0052]
对比例3
[0053]
猴头菇菌丝体液体发酵培养基中党参药渣为10g/l、党参药渣为 10g/l、黑豆粉25g/l、破壁刀豆粉为10g/l、菊花花粉为0.7g/l、 石膏为0.8g/l、硫酸镁为0.7g/l和秋水仙素为0.0008g/l，加蒸馏 水补充到规定量，ph6.5，121℃灭菌25min后冷却。
[0054]
将猴头菇菌母种按常规接种后进行液体发酵，温度29℃，通风 并搅拌，发酵时间8d，将培养好的发酵液离心4000rpm处理，收集 菌丝体，经过洗涤、干燥得到、猴头菇菌丝体。
[0055]
常规方法粉碎后，菌丝体粉末与水以1﹕18的比例混合，调节 ph值为8，温度37℃，超声提取20min，4000rpm离心取上清液；上 清液经分子量1000道尔顿膜过滤，分子量1000道尔顿以下部分备用， 分子量1000道尔顿以上部分加水至原上清液体积的15％，经过s8大 孔树脂层析，解析液经过冷冻干燥得蛋白。
[0056]
对比例4
[0057]
猴头菇菌丝体液体发酵培养基中葡萄糖为10g/l、黑豆粉25g/l、 破壁刀豆粉为
10g/l、菊花花粉为0.7g/l、石膏为0.8g/l、硫酸镁 为0.7g/l和秋水仙素为0.0008g/l，加蒸馏水补充到规定量，ph6.5， 121℃灭菌25min后冷却。
[0058]
将猴头菇菌母种按常规接种后进行液体发酵，温度29℃，通风 并搅拌，发酵时间8d，将培养好的发酵液离心4000rpm处理，收集 菌丝体，经过洗涤、干燥得到猴头菇菌丝体。
[0059]
常规方法粉碎后，菌丝体粉末与水以1﹕18的比例混合，调节 ph值为8，温度37℃，超声提取20min，4000rpm离心取上清液；上 清液经分子量1000道尔顿膜过滤，分子量1000道尔顿以下部分备用， 分子量1000道尔顿以上部分加水至原上清液体积的15％，经过s8大 孔树脂层析，解析液经过冷冻干燥得蛋白。
[0060]
对比例5
[0061]
猴头菇菌丝体液体发酵培养基中蛋白胨为10g/l、党参药渣为 10g/l、黑豆粉25g/l、菊花花粉为0.7g/l、石膏为0.8g/l、硫酸镁 为0.7g/l和秋水仙素为0.0008g/l，加蒸馏水补充到规定量，ph6.5， 121℃灭菌25min后冷却。
[0062]
将猴头菇菌母种按常规接种后进行液体发酵，温度29℃，通风 并搅拌，发酵时间8d，将培养好的发酵液离心4000rpm处理，收集 菌丝体，经过洗涤、干燥得到猴头菇菌丝体。
[0063]
常规方法粉碎后，菌丝体粉末与水以1﹕18的比例混合，调节 ph值为8，温度37℃，超声提取20min，4000rpm离心取上清液；上 清液经分子量1000道尔顿膜过滤，分子量1000道尔顿以下部分备用， 分子量1000道尔顿以上部分加水至原上清液体积的15％，经过s8大 孔树脂层析，解析液经过冷冻干燥得蛋白。
[0064]
对比例6
[0065]
猴头菇菌丝体液体发酵培养基中党参药渣为10g/l、黑豆粉 25g/l、刀豆粉为10g/l、菊花花粉为0.7g/l、石膏为0.8g/l、硫酸 镁为0.7g/l和秋水仙素为0.0008g/l，加蒸馏水补充到规定量， ph6.5，121℃灭菌25min后冷却。
[0066]
将猴头菇菌母种按常规接种后进行液体发酵，温度29℃，通风 并搅拌，发酵时间8d，将培养好的发酵液离心4000rpm处理，收集 菌丝体，经过洗涤、干燥得到、猴头菇菌丝体。
[0067]
常规方法粉碎后，菌丝体粉末与水以1﹕18的比例混合，调节 ph值为8，温度37℃，超声提取20min，4000rpm离心取上清液；上 清液经分子量1000道尔顿膜过滤，分子量1000道尔顿以下部分备用， 分子量1000道尔顿以上部分加水至原上清液体积的15％，经过s8大 孔树脂层析，解析液经过冷冻干燥得蛋白。
[0068]
对比例7
[0069]
猴头菇菌丝体液体发酵培养基中党参药渣为12g/l、黑豆粉 30g/l、破壁刀豆粉为12g/l、菊花花粉为0.84g/l、石膏为0.96g/l、 硫酸镁为0.84g/l和秋水仙素为0.00096g/l，加蒸馏水补充到规定 量，ph6.5，121℃灭菌25min后冷却。
[0070]
将猴头菇菌母种按常规接种后进行液体发酵，温度29℃，通风 并搅拌，发酵时间8d，将培养好的发酵液离心4000rpm处理，收集 菌丝体，经过洗涤、干燥得到猴头菇菌丝体。
[0071]
常规方法粉碎后，菌丝体粉末与水以1﹕18的比例混合，调节 ph值为8，温度37℃，超声提取20min，4000rpm离心取上清液；上 清液经分子量1000道尔顿膜过滤，分子量1000道尔顿以下部分备用， 分子量1000道尔顿以上部分加水至原上清液体积的15％，经过s8大 孔树脂层析，解析液经过冷冻干燥得蛋白。
[0072]
本发明的有益效果如下表：
[0073] 菌丝体干重(g/l)菌丝体蛋白含量(mg/g)蛋白纯度(％)实施例116.119.687.8实施例215.320.888.9实施例318.223.590.5实施例419.523.091.8实施例520.625.993.5对比例111.315.580.3对比例211.814.877.1对比例39.715.079.5对比例411.515.281.4对比例511.616.977.8对比例610.815.676.9对比例713.616.683.1
[0074]
从上表可以看出，本发明实施例1～5中利用本发明提高蛋白含 量的猴头菇菌培养基组合物进行液体发酵得到的猴头菇菌丝体产 量、蛋白含量、蛋白纯度与对比例1～7相比，均有显著提高。
[0075]
本发明中未详细说明的环节均为本领域普通技术人员可自行选 择的公知常识。虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本 发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改 进，这对本领域普通技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本 发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的 范围。