一种基于平衡补偿的重组流感病毒构建方法

技术特征：
1.一种重组流感病毒的构建方法，其特征在于，所述方法基于平衡补偿的原则，在插入外源基因的目标节段引入补偿性突变，所述补偿性突变能够重新实现重组病毒基因组多节段的微平衡，产生具备遗传稳定性的重组流感病毒；其包括如下步骤：a.质粒材料制备，在插入外源基因的目标节段引入补偿性突变；b.病毒拯救，将病毒拯救质粒共同转染到宿主细胞中，经共同培养后，从上清液中收获重组流感病毒，反向遗传学拯救带有突变的重组流感病毒。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述插入外源基因的目标节段选自如下任一种或至少两种的组合：ns、pb1、pb2、pa、na和np中的任一种；优选地，所述外源基因选自报告基因和/或编码免疫原性蛋白的基因；优选地，所述外源基因的大小为0.2kb
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10kb，进一步优选为0.3kb
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5kb，最优选为0.5kb
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2kb；优选地，所述报告基因包括gluc和/或fluc；优选地，所述补偿性突变包括如下任一种或至少两种的组合：启动子增强突变、3'-ncr中的c4到u4的突变、na的可变ncr中的u13到c13的突变和聚合酶突变。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述插入外源基因的目标节段为ns；所述外源基因为gluc；所述补偿性突变为启动子增强突变；所述启动子增强突变包括在ns-gluc片段的3'ncr上引入额外突变g3a/c8u。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述插入外源基因的目标节段为ns；所述外源基因为fluc；所述补偿性突变为启动子增强突变；所述启动子增强突变包括在ns-fluc片段的3'ncr上引入额外突变g3a/u5c/c8u。5.根据权利要求1-4任一项所述的方法制备得到的重组流感病毒。6.一种重组报告流感病毒，其特征在于，在流感病毒的目标节段中插入报告基因，并且在插入所述报告基因的所述目标节段中引入补偿性突变，所述补偿性突变能够重新实现重组报告流感病毒基因组多节段的微平衡，产生具备遗传稳定性的重组报告流感病毒；其中，所述目标节段选自如下任一种或至少两种的组合：ns、pb1、pb2、pa、na和np中的任一种；所述报告基因的大小为0.2kb
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10kb，进一步优选为0.3kb
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5kb，最优选为0.5kb
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2kb；所述补偿性突变包括如下任一种或至少两种的组合：启动子增强突变、3'-ncr中的c4到u4的突变、na的可变ncr中的u13到c13的突变和聚合酶突变。7.根据权利要求6所述的重组报告流感病毒，其特征在于，所述报告基因为gluc，所述重组报告流感病毒为pr8-ns38m-gluc，其平衡补偿后ns节段核苷酸序列如seq id no.1所示。8.根据权利要求6所述的重组报告流感病毒，其特征在于，所述报告基因为fluc，所述重组报告流感病毒为pr8-ns358m-fluc，其平衡补偿后ns节段核苷酸序列如seq id no.2所示。9.根据权利要求1-4任一项所述的重组流感病毒的构建方法、权利要求5所述的重组流
感病毒或权利要求6-8任一项所述的重组报告流感病毒在构建流感小鼠的活体成像模型中的应用。10.根据权利要求1-4任一项所述的重组流感病毒的构建方法、权利要求5所述的重组流感病毒或权利要求6-8任一项所述的重组报告流感病毒在开发其他高致病性病毒或细菌的减活流感病毒载体疫苗中的应用。

技术总结
本发明公开了一种基于平衡补偿的重组流感病毒构建方法。所述方法基于平衡补偿的原则，在插入外源基因的目标节段引入补偿性突变，所述补偿性突变能够重新实现重组病毒基因组多节段的微平衡，减少或消除病毒衰减机制，产生具备遗传稳定性的重组流感病毒。产生具备遗传稳定性的重组流感病毒。产生具备遗传稳定性的重组流感病毒。


技术研发人员：杜瑞坤 崔清华 荣立军 赵秀娟
受保护的技术使用者：山东中医药大学青岛中医药科学院
技术研发日：2022.03.03
技术公布日：2022/6/3