乳酸杆菌益生菌cgmcc no.1.13855在制备肝病治疗药物中的应用
技术领域
1.本发明涉及一种益生菌及其应用，属于微生物领域。
背景技术：
2.乳杆菌属于乳酸菌，因其发酵碳水化合物生成乳酸产物外形，呈短杆状而得名。乳杆菌在自然界中分布广泛，从植物、动物如猪、食品如啤酒、酸菜等均能分离出乳杆菌。乳杆菌属的成员均为革兰氏阳性菌，不产芽孢，对氧气的耐受性较低，大多厌氧，无动力，部分为微需氧，有动力。乳杆菌在严格发酵的条件下，可从碳水化合物中发酵产生乳酸作为主要的终产物，因而该属菌种对酸耐受性较好，部分菌种嗜酸。由于乳杆菌的这一特性，它们常被应用于食品发酵工业中，如制作奶酪、酸奶等。另外，乳杆菌被认为是非致病菌和食品级安全的菌属，许多菌株在食品微生物学和人类营养中起到重要作用，被作为益生菌使用。
3.由于肥胖症的流行,非酒精性脂肪性肝病（nafld）成为一个全球性的健康问题,也是慢性肝损害的主要原因,而肠道菌群紊乱可能是nafld 发病的原因之一。 除肠道菌群紊乱导致肠道黏膜屏障损害、肠上皮通透性改变以及肠源性内毒素血症增加外,肠道细菌的代谢产物也发挥着重要作用。 这使人们对益生菌补充剂作为 nafld 潜在的治疗方法产生了浓厚的兴趣，因为益生菌补充剂能够延缓甚至逆转肠道菌群失调，恢复正常的肠道菌群。益生菌在治疗 nafld 时耐受性和安全性均较好，以肠道菌群为靶点的益生菌疗法可能是未来治疗nafld的重要措施。
4.本发明的目的在于从只摄食植物的青海野生旱獭粪便中分离筛选乳杆菌新种在制备肝病治疗药物中的应用。
技术实现要素：
5.基于上述发明目的，本发明提供了一种乳酸杆菌益生菌菌株在制备肝病治疗药物中的应用，所述益生菌菌株保藏编号为cgmcc no.1.13855，保藏日期为2021年12月16日，菌株分类命名为徐建国氏乳杆菌（lactobacillus xujianguonis），保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，邮编100101。
6.在一个优选的实施方案中，所述菌株的16s rdna的序列如seq id no：1所示。
7.在一个更为优选的实施方案中，所述肝病是因脂代谢紊乱而引起的肝功能障碍。
8.在另一个更为优选的实施方案中，所述肝病是由炎性因子引起的肝炎和/或肝脏纤维化。
9.更为优选地，所述炎性因子为白介素1-β或血清单核细胞趋化蛋白-1。
10.在又一个更为优选的实施方案中，所述肝病为血清内毒素引起的肝脏损伤。
11.在一个优选的实施方案中，所述肝病治疗药物同时还作为降脂药物和糖尿病治疗药物。
12.在一个更为优选的实施方案中，所述糖尿病治疗药物为降低人血清中葡萄糖含量的药物、降低人血清胰岛素的药物或者降低人血清中与胰岛素抵抗作相关的炎性因子的药物。
13.在一个优选的实施方案中，所述乳酸杆菌益生菌株被制备为胶囊、冻干粉或者菌液制剂。
14.本发明是从野生旱獭粪便中分离纯化得到具有益生菌特性的乳酸杆菌，实验证明分离得到的乳酸菌对动物无害，且经动物实验确证具有保护肝脏功能的功效。cgmcc no.1.13855菌株能显著降低血清谷丙转氨酶、血清谷草转氨酶和肝脏丙二醛，升高肝脏超氧化物歧化酶和肝脏谷胱甘肽过氧化物酶的功能，和辛伐他丁有相似甚至更强的护肝功效。摄入乳酸菌的大鼠体征正常，摄入五周结束实验后取胃肠肝脾做病理未见异常。无菌组织做细菌检测未见乳酸菌异位定植。
附图说明
15.图1. cgmcc no.1.13855菌株基于16s rdna基因的系统进化树分析（最大似然法）；图2. cgmcc no.1.13855菌株对高脂模型大鼠的血清总胆固醇（tc）的影响；图3. cgmcc no.1.13855菌株对高脂模型大鼠的血清甘油三脂（tg）的影响；图4. cgmcc no.1.13855菌株对高脂模型大鼠的血清低密度脂蛋白（ldl）的影响；图5. cgmcc no.1.13855菌株对高脂模型大鼠的血清高密度度脂蛋白（hdl）的影响；图6. cgmcc 1.13855菌株对高脂模型大鼠的肝脏脂肪滴含量的影响（油红o染色）；图7. cgmcc 1.13855菌株对高脂模型大鼠的血清谷丙转氨酶（alt）的影响；图8. cgmcc 1.13855菌株对高脂模型大鼠的血清谷草转氨酶（ast）的影响；图9. cgmcc 1.13855菌株对高脂模型大鼠的肝脏丙二醛（mda）的影响；图10. cgmcc 1.13855菌株对高脂模型大鼠的肝脏超氧化物歧化酶（sod）的影响；图11. cgmcc 1.13855菌株对高脂模型大鼠的肝脏谷胱甘肽过氧化物酶（gsh-px）的影响；图12. cgmcc 1.13855菌株对高脂模型大鼠的血清白介素1-β(il-1β)的影响；图13. cgmcc 1.13855菌株对高脂模型大鼠的血清单核细胞趋化蛋白-1（mcp-1)的影响；图14. cgmcc 1.13855菌株对高脂模型大鼠的血清内毒素（et)的影响；图15. cgmcc 1.13855菌株对高脂模型大鼠空腹血糖的影响；图16 .cgmcc 1.13855菌株对高脂模型大鼠空腹血清胰岛素的影响；图17. cgmcc 1.13855菌株对高脂模型大鼠的血清肿瘤坏死因子-α（tnf-α）的影响；图18. cgmcc 1.13855菌株对高脂模型大鼠的血清白介素6 (il-6)的影响。
具体实施方式
16.下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实施例仅是范例性的，并不对本发明的保护范围构成任何限制。
17.实施例1 .乳酸菌的分离、筛选和鉴定1. 乳酸杆菌的分离1）从保菌管中取出标本100μl，加入到预装900μl无菌pbs的ep管中，依次对样本进行梯度稀释，旱獭粪便标本浓度稀释至10-6
倍； 2）取不同稀释度的样品100μl 涂布于mrs培养基上，放入培养箱中； 3）在37℃，0.5% co2环境中培养48h；4）取出培养皿，用无菌接种环挑取不同形态特征的菌落，转接至新的mrs 固体培养基中进行纯化，37℃厌氧培养48h，连续转接3 次，将纯化菌株在ph=3.5的液体mrs中培养，筛选耐酸生长优良的菌株可用于实验或冷冻保藏。
18.2. 菌种保藏本实验室用含25%甘油的mrs培养基作为保菌液进行菌种的冷冻保藏，方法如下：1）将容量为2ml的保菌管经121℃，15min高压灭菌处理后以备使用；2）乳酸杆菌在mrs固体培养基上连续转接3次后，向培养皿上加入1.5ml 的无菌保菌液；3）用l棒对培养皿进行刮涂，使菌落充分融入保菌液中；4）将菌液转移到保菌管中，混匀后-80℃保藏。
19.3. 菌落外观和菌体形态观察保藏编号为cgmcc no.1.13855的乳酸杆菌ht111-2属厌氧菌，在厌氧条件下生长良好，在哥伦比亚血培养基上形成圆形、边缘不规则、中间隆起、表面粗糙的淡黄色菌落，直径约 1-1.2 mm；在有氧条件下不生长。在光学显微镜下，经革兰氏染色，菌体呈淡紫色，可出现首尾相接的排列方式。菌体在透射电镜下呈杆状，无芽胞、无鞭毛、无菌毛、无动力，直径约 0.7-1
×
2.5-4.28
ꢀµ
m。
20.4. 细菌总dna 的提取将单个菌落接种于mrs培养基上，37℃厌氧过夜培养，按照细菌基因组dna提取试剂盒（tiangen）说明书操作，提取dna。
21.5. 菌株的生化鉴定方法本研究采用法国梅里埃公司生产的“biomerieux”细菌系统生化鉴定卡api 50ch 和 api zym 对菌株 ht111
‑ꢀ
2以及参考菌株进行碳水化合物酵解和酶促反应生化鉴定。
22.结果：根据生化鉴定，获得了一株生化特征为乳杆菌属的菌种，菌株保藏编号为cgmcc no.1.13855，保藏日期为2021年12月16日，菌株分类命名为徐建国氏乳杆菌（lactobacillus xujianguonis），保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，邮编100101。
23.6. 细菌通用引物16s rrna pcr 扩增细菌16s rrna 鉴定：提取细菌基因组dna，扩增乳酸杆菌通用引物16s rdna pcr产物测序，序列在ncbi上进行blast比对，进行初步鉴定。
24.本实验所用的细菌16s rrna pcr 扩增的引物以及pcr 反应的条件如下所述，实
验全部用50μl的pcr体系。通过对待测乳酸杆菌通用引物16s rrna pcr产物测序结果在ncbi上进行blast比对，鉴定。结果提示cgmcc no.1.13855菌株可能为乳杆菌属的一个疑似新种。
25.通用引物16s rrna pcr 扩增条件：引物序列：27f，5'-agagtttgatcmtggctcag-3'；1492r5'-tacggytaccttgttacgactt-3'；反应体系（50μl）：；扩增条件：。
26.7.系统进化分析根据菌株cgmcc no.1.13855 16s rdna genbank 31条模式菌株的16s rdna基因作为 参考序列，使用enterococcus.faecium atcc 19434的16s rdna基因序列作为外群，利用 mega 6.0软件，采用clustal_w进行多序列比对，基于最大似然法 maximumlikelihood(ml)构建系统进化树。基于16s rdna基因序列构建的系统进化树显 示，菌株cgmcc no.1.13855与邻近的乳杆菌聚类在一起，系统进化树上形成一个独立分 支，与l.amylolyticus dsm 11664和l.hamsteri dsm 5661的进化关系最相近，详见图1 (最大似然法)。通过二代测序获得菌株cgmcc no.1.13855的全基因组框架图序列，并 与参考菌株l.amylolyticus dsm 11664和l.hamsteri dsm 5661基因组在线基因组杂交， ddh值分别为20.6％和21.1％，与genbank数据库中收录的乳杆菌属内175个模式菌 株的基因组序列进行在线基因组杂交，结果显示ddh值范围为17.2％-42.5％，低于 70％，符合新种的判定标准。
27.综上，基因组及系统进化分析提示菌株cgmcc no.1.13855为乳杆菌属的新种。
28.实施例2 . 乳杆菌cgmcc no.1.13855对大鼠血清的血脂降低功能将32只约200克体重的雌性sd大鼠分别随机分四组，一组给与正常维持饲料，三组给予高脂饲料（胆固醇1%，猪油10%，0.2胆酸盐，10%蛋黄粉）。三组高脂饲料组，在喂食一周后，一组隔天经口给予109cfu cgmcc no.1.13855乳酸杆菌菌液，一组隔天给予生理盐水，一组在实验终止前三周隔天给予20mg/kg体重的辛伐他丁，共五周终止实验，检测血清的血
脂水平，来评价乳杆菌cgmcc no.1.13855对脂代谢紊乱模型的预防干预效果。
29.图2显示cgmcc no.1.13855
t
对高脂模型大鼠的血清总胆固醇（tc）的影响。cgmcc no.1.13855干预组（即ht111-2干预组）和辛伐他汀干预组的血清tc平均含量为1.79
±
0.18mmol/l和1.77
±
0.08mmol/l，均显著低于高脂模型组2.48
±
0.23mmol/l（p《0.001）；高脂模型组的血清tc平均含量为2.48
±
0.23mmol/l，显著高于正常对照组1.40
±
0.10mmol/l（p《0.001）。
30.图3显示cgmcc no.1.13855对高脂模型大鼠的血清甘油三脂（tg）的影响。cgmcc no.1.13855干预组（即ht111-2干预组）和辛伐他汀干预组的血清tg平均含量为2.55
±
0.17mmol/l和2.55
±
0.08mmol/l，均显著低于高脂模型组3.07
±
0.15mmol/l（p《0.001）；高脂模型组的血清tg平均含量为3.07
±
0.15mmol/l，显著高于正常对照组1.87
±
0.09mmol/l（p《0.001）。
31.图4显示cgmcc no.1.13855对高脂模型大鼠的血清低密度脂蛋白（ldl）的影响。cgmcc no.1.13855干预组（即ht111-2干预组）和辛伐他汀干预组的血清ldl平均含量为2.60
±
0.15mmol/l和2.17
±
0.32mmol/l，均显著低于高脂模型组3.15
±
0.24mmol/l（p《0.01和p《0.001）；高脂模型组的血清ldl平均含量为3.15
±
0.24mmol/l，显著高于正常对照组1.79
±
0.26mmol/l（p《0.001）。
32.图5显示cgmcc no.1.13855对高脂模型大鼠的血清高密度度脂蛋白（hdl）的影响。cgmcc no.1.13855干预组（即ht111-2干预组）和辛伐他汀干预组的血清hdl平均含量为2.10
±
0.22mmol/l和2.33
±
0.17mmol/l，均显著高于高脂模型组1.51
±
0.08mmol/l（p《0.01和p《0.001）；高脂模型组的血清hdl平均含量为1.51
±
0.08mmol/l，显著低于正常对照组3.10
±
0.41mmol/l（p《0.001）。
33.图6 显示cgmcc no.1.13855菌株对高脂模型大鼠的肝脏脂肪滴含量的影响（油红o染色）。正常对照组油红o染色显示胞浆内未见脂滴。高脂模型组油红o染色显示胞浆内大量脂滴。cgmcc no.1.13855干预组（即ht111-2干预组）和辛伐他汀干预组油红o染色显示胞浆内有脂滴，但是明显少于高脂模型组。
34.上述结果表明，cgmcc no.1.13855乳杆菌菌株具有显著降低血清总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白和升高高密度脂蛋白的作用，同时可以降低肝脏的脂肪含量，和辛伐他汀有相似的降低血脂功效。
35.摄入cgmcc no.1.13855乳杆菌的大鼠表现正常，摄入五周结束实验后取胃肠肝脾做病理未见异常。无菌组织做细菌检测未见乳酸菌异位定植。
36.实施例3 . 乳杆菌cgmcc no.1.13855对大鼠肝脏功能的保护作用将32只约200克体重的雌性sd大鼠分别随机分四组，一组给与正常维持饲料，三组给予高脂饲料（胆固醇1%，猪油10%，0.2胆酸盐，10%蛋黄粉）。三组高脂饲料组，在喂食一周后，一组隔天经口给予109cfu cgmcc no.1.13855乳酸杆菌菌液，一组隔天给予生理盐水，一组在实验终止前三周隔天给予20mg/kg体重的辛伐他丁，共五周终止实验，检测血清的谷草转氨酶、谷丙转氨酶和炎性因子水平，来评价乳杆菌cgmcc no.1.13855对脂代谢紊乱模型造成的肝脏功能损伤的预防干预效果。
37.图7显示cgmcc no.1.13855对高脂模型大鼠的血清谷丙转氨酶（alt）的影响。cgmcc no.1.13855干预组（即ht111-2干预组）和辛伐他汀干预组的血清alt平均含量为
1.05
±
0.09ng/ml和1.34
±
0.04ng/ml，均显著低于高脂模型组1.66
±
0.09ng/ml（p《0.001）；高脂模型组的血清alt平均含量为1.66
±
0.09ng/ml，显著高于正常对照组0.94
±
0.05ng/ml（p《0.001）。
38.图8显示cgmcc no.1.13855对高脂模型大鼠的血清谷草转氨酶（ast）的影响。cgmcc no.1.13855干预组（即ht111-2干预组）和辛伐他汀干预组的血清ast平均含量为1.67
±
0.26ng/ml和1.91
±
0.34ng/ml，均显著低于高脂模型组2.70
±
0.12ng/ml（p《0.001）；高脂模型组的血清ast平均含量为2.70
±
0.12ng/ml，显著高于正常对照组1.51
±
0.27ng/ml（p《0.001）。
39.图9显示cgmcc no.1.13855对高脂模型大鼠的肝脏丙二醛（mda）的影响。cgmcc no.1.13855干预组（即ht111-2干预组）和辛伐他汀干预组的肝脏mda平均含量为3.12
±
0.38nmol/ml和3.45
±
0.49nmol/ml，均显著低于高脂模型组4.54
±
0.20nmol/ml（p《0.01和p《0.001）；高脂模型组的肝脏mda平均含量为4.54
±
0.20nmol/ml，显著高于正常对照组2.63
±
0.49nmol/ml（p《0.001）。
40.图10显示cgmcc no.1.13855对高脂模型大鼠的肝脏超氧化物歧化酶（sod）的影响。cgmcc no.1.13855干预组 （即ht111-2干预组）和辛伐他汀干预组的肝脏sod平均含量为1.28
±
0.07ng/ml和1.18
±
0.14ng/ml，均显著高于高脂模型组0.90
±
0.05ng/ml（p《0.001）；高脂模型组的肝脏sod平均含量为0.90
±
0.05ng/ml，显著低于正常对照组1.32
±
0.06ng/ml（p《0.001）。
41.图11显示cgmcc no.1.13855对高脂模型大鼠的肝脏谷胱甘肽过氧化物酶（gsh-px）的影响。cgmcc no.1.13855干预组（即ht111-2干预组）和辛伐他汀干预组的肝脏gsh-px平均含量为7.71
±
1.08ng/ml和7.80
±
0.63ng/ml，均显著高于高脂模型组4.31
±
0.41ng/ml（p《0.001）；高脂模型组的肝脏gsh-px平均含量为4.31
±
0.41ng/ml，显著低于正常对照组8.90
±
0.48ng/ml（p《0.001）。
42.上述结果表明，cgmcc no.1.13855乳杆菌菌株具有显著降低血清谷丙转氨酶、血清谷草转氨酶和肝脏丙二醛的作用，同时升高了肝脏超氧化物歧化酶和肝脏谷胱甘肽过氧化物酶的作用，和辛伐他汀有相似的保护肝脏功能的功效。
43.实施例4 . 乳杆菌cgmcc no.1.13855对大鼠血清的肝脏炎症和肝脏纤维化相关炎性因子降低功能图12显示cgmcc no.1.13855对高脂模型大鼠的血清白介素1-β(il-1β)的影响。cgmcc no.1.13855干预组（即ht111-2干预组）和辛伐他汀干预组的血清il-1β平均含量为20.29
±
1.88pg/ml和17.98
±
1.16pg/ml，均显著低于高脂模型组28.40
±
1.96pg/ml（p《0.001）；高脂模型组的血清il-1β平均含量为28.40
±
1.96pg/ml，显著高于正常对照组20.06
±
3.81pg/ml（p《0.001）。
44.图13显示cgmcc no.1.13855对高脂模型大鼠的血清单核细胞趋化蛋白-1（mcp-1)的影响。cgmcc no.1.13855干预组（即ht111-2干预组）的血清mcp-1平均含量为536.98
±
104.31pg/ml，显著低于高脂模型组733.69
±
40.18pg/ml（p《0.001）；辛伐他汀干预组的血清mcp-1平均含量为628.89
±
52.98pg/ml，与高脂模型组733.69
±
40.18pg/ml无显著差异（p＞0.05）；高脂模型组的血清mcp-1平均含量为733.69
±
40.18pg/ml，显著高于正常对照组527.28
±
72.42pg/ml（p《0.001）。
45.上述结果表明，cgmcc no.1.13855乳杆菌菌株具有显著降低血清il-1β和mcp-1炎性因子的作用，比辛伐他汀有更强的降低血清炎性因子的功效。肝脏纤维化是各种原因导致的肝损伤持续发展的最终结局，mcp-l是组织损伤修复中重要的巨噬细胞趋化因子，其在肝脏损伤及修复中起着重要作用。il-1β是另一个致纤维化的重要炎症细胞，是前炎症反应的主要诱导剂，它可以通过协同其他炎性因子如tnf-α，并促进其他炎性因子的表达加强炎性反应程度。总之，mcp-l和il-1β是肝脏纤维化的重要炎症因子。cgmcc no.1.13855乳杆菌显著降低血清il-1β和mcp-1炎性因子的含量，从而减少肝脏炎症和肝脏纤维化的发生。
46.实施例5. 乳杆菌cgmcc no.1.13855对大鼠血清的内毒素降低功能图14显示cgmcc 1.13855对高脂模型大鼠的血清内毒素（et)的影响。cgmcc 1.13855干预组（即ht111-2干预组）的血清et平均含量为36.14
±
5.59pg/ml，显著低于高脂模型组53.95
±
6.28pg/ml（p《0.001）；辛伐他汀干预组的血清et平均含量为44.89
±
4.90pg/ml，与高脂模型组53.95
±
6.28pg/ml无显著差异（p＞0.05）；高脂模型组的血清et平均含量为53.95
±
6.28pg/ml，显著高于正常对照组25.25
±
6.26pg/ml（p《0.001）。
47.上述结果表明，cgmcc no.1.13855乳杆菌菌株具有显著降低血清内毒素（et)的作用，从而减少肝损伤程度，比辛伐他汀有更强的降低血清内毒素（et)的功效。
48.摄入cgmcc no.1.13855乳杆菌的大鼠表现正常，摄入五周结束实验后取胃肠肝脾做病理未见异常。无菌组织做细菌检测未见乳酸菌异位定植。
49.实施例6 .乳杆菌cgmcc no.1.13855的降糖功能体内评价将32只约200克体重的雌性sd大鼠分别随机分四组，一组给与正常维持饲料，三组给予高脂饲料（胆固醇1%，猪油10%，0.2胆酸盐，10%蛋黄粉）。三组高脂饲料组，在喂食一周后，一组隔天经口给予109cfu cgmcc no.1.13855乳酸杆菌菌液，一组隔天给予生理盐水，一组在实验终止前三周隔天给予20mg/kg体重的辛伐他丁，共五周终止实验，检测大鼠空腹血清的血糖和炎性因子水平，来评价乳杆菌cgmcc no.1.13855对代谢紊乱模型的预防干预效果。
50.1.乳杆菌cgmcc no.1.13855对大鼠空腹血糖和血胰岛素有降低功能图15显示cgmcc no.1.13855对高脂模型大鼠空腹血糖的影响。cgmcc no.1.13855干预组（即ht111-2干预组）和辛伐他汀干预组的血糖平均含量为3.30
±
0.78mmol/l和2.91
±
0.72mmol/l，均显著低于高脂模型组5.09
±
0.29mmol/l（p《0.001）；高脂模型组的血糖平均含量为5.09
±
0.29mmol/l，显著高于正常对照组2.67
±
0.41mmol/l（p《0.001）。
51.图16显示cgmcc no.1.13855对高脂模型大鼠空腹血清胰岛素的影响。cgmcc no.1.13855干预组（即ht111-2干预组）和辛伐他汀干预组的血清胰岛素平均含量为31.45
±
1.77mu/l和36.81
±
2.23mu/l，均显著低于高脂模型组44.84
±
2.23mu/l（p《0.001）；高脂模型组的血清胰岛素平均含量为44.84
±
2.23mu/l，显著高于正常对照组25.33
±
3.04mu/l（p《0.001）。
52.上述结果表明，cgmcc no.1.13855乳杆菌菌株具有显著降低血糖和血清胰岛素的作用，和辛伐他汀有相似的降低血糖功效。脂代谢紊乱如高甘油三酯和高游离脂肪酸血症等与胰岛素抵抗密切相关。胰岛素抵抗使胰岛素促进葡萄糖摄取和利用的效率下降，机体代偿性的分泌过多胰岛素产生高胰岛素血症，以维持血糖的稳定。胰岛素抵抗易导致代谢综合征和2型糖尿病。cgmcc no.1.13855乳杆菌菌株具有降血脂的作用，从而减轻胰岛素抵
抗，导致血糖和血清胰岛素的降低。
53.实施例7 .乳杆菌cgmcc no.1.13855对大鼠血清的胰岛素抵抗作用相关炎性因子降低功能图17显示cgmcc no.1.13855对高脂模型大鼠的血清肿瘤坏死因子-α（tnf-α）的影响。cgmcc no.1.13855干预组（即ht111-2干预组）和辛伐他汀干预组的血清tnf-α平均含量为112.54
±
20.53pg/ml和159.75
±
7.95pg/ml，均显著低于高脂脂模型组198.5
±
13.94pg/ml（p《0.001）；高脂模型组的血清tnf-α平均含量为198.5
±
13.94pg/ml，显著高于正常对照组105.44
±
25.22pg/ml（p《0.001）。
54.图18显示cgmcc no.1.13855对高脂模型大鼠的血清白介素6 (il-6)的影响。cgmcc no.1.13855干预组（即ht111-2干预组）和辛伐他汀干预组的血清il-6平均含量为115.43
±
9.20pg/ml和132.24
±
9.94pg/ml，均显著低于高脂模型组155.93
±
7.55pg/ml（p《0.001和p《0.01）；高脂模型组的血清il-6平均含量为155.93
±
7.55pg/ml，显著高于正常对照组114.42
±
8.90pg/ml（p《0.001）。
55.上述结果表明，cgmcc no.1.13855乳杆菌菌株具有显著降低血清肿瘤坏死因子-α和il-6炎性因子，比辛伐他汀有更强的降低血清炎性因子的功效。因为胰岛素抵抗的产生与血清炎性因子水平密切相关，血清炎性因子的长期过度分泌，可能是导致胰岛β细胞分泌胰岛素功能受损及产生胰岛素抵抗的主要因素。tnf-α和il-6作为最具代表性的细胞因子，在炎症和免疫反应中起核心调节作用。血清tnf-α和il-6水平的升高可以通过干扰胰岛素信号转导而诱发胰岛素抵抗。cgmcc no.1.13855乳杆菌菌株显著降低血清tnf-α和il-6炎性因子含量，从而降低胰岛素抵抗作用，引起血糖降低。
56.摄入cgmcc no.1.13855乳杆菌的大鼠表现正常，摄入五周结束实验后取胃肠肝脾做病理未见异常。无菌组织做细菌检测未见乳酸菌异位定植。
技术领域
1.本发明涉及一种益生菌及其应用，属于微生物领域。
背景技术：
2.乳杆菌属于乳酸菌，因其发酵碳水化合物生成乳酸产物外形，呈短杆状而得名。乳杆菌在自然界中分布广泛，从植物、动物如猪、食品如啤酒、酸菜等均能分离出乳杆菌。乳杆菌属的成员均为革兰氏阳性菌，不产芽孢，对氧气的耐受性较低，大多厌氧，无动力，部分为微需氧，有动力。乳杆菌在严格发酵的条件下，可从碳水化合物中发酵产生乳酸作为主要的终产物，因而该属菌种对酸耐受性较好，部分菌种嗜酸。由于乳杆菌的这一特性，它们常被应用于食品发酵工业中，如制作奶酪、酸奶等。另外，乳杆菌被认为是非致病菌和食品级安全的菌属，许多菌株在食品微生物学和人类营养中起到重要作用，被作为益生菌使用。
3.由于肥胖症的流行,非酒精性脂肪性肝病（nafld）成为一个全球性的健康问题,也是慢性肝损害的主要原因,而肠道菌群紊乱可能是nafld 发病的原因之一。 除肠道菌群紊乱导致肠道黏膜屏障损害、肠上皮通透性改变以及肠源性内毒素血症增加外,肠道细菌的代谢产物也发挥着重要作用。 这使人们对益生菌补充剂作为 nafld 潜在的治疗方法产生了浓厚的兴趣，因为益生菌补充剂能够延缓甚至逆转肠道菌群失调，恢复正常的肠道菌群。益生菌在治疗 nafld 时耐受性和安全性均较好，以肠道菌群为靶点的益生菌疗法可能是未来治疗nafld的重要措施。
4.本发明的目的在于从只摄食植物的青海野生旱獭粪便中分离筛选乳杆菌新种在制备肝病治疗药物中的应用。
技术实现要素：
5.基于上述发明目的，本发明提供了一种乳酸杆菌益生菌菌株在制备肝病治疗药物中的应用，所述益生菌菌株保藏编号为cgmcc no.1.13855，保藏日期为2021年12月16日，菌株分类命名为徐建国氏乳杆菌（lactobacillus xujianguonis），保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，邮编100101。
6.在一个优选的实施方案中，所述菌株的16s rdna的序列如seq id no：1所示。
7.在一个更为优选的实施方案中，所述肝病是因脂代谢紊乱而引起的肝功能障碍。
8.在另一个更为优选的实施方案中，所述肝病是由炎性因子引起的肝炎和/或肝脏纤维化。
9.更为优选地，所述炎性因子为白介素1-β或血清单核细胞趋化蛋白-1。
10.在又一个更为优选的实施方案中，所述肝病为血清内毒素引起的肝脏损伤。
11.在一个优选的实施方案中，所述肝病治疗药物同时还作为降脂药物和糖尿病治疗药物。
12.在一个更为优选的实施方案中，所述糖尿病治疗药物为降低人血清中葡萄糖含量的药物、降低人血清胰岛素的药物或者降低人血清中与胰岛素抵抗作相关的炎性因子的药物。
13.在一个优选的实施方案中，所述乳酸杆菌益生菌株被制备为胶囊、冻干粉或者菌液制剂。
14.本发明是从野生旱獭粪便中分离纯化得到具有益生菌特性的乳酸杆菌，实验证明分离得到的乳酸菌对动物无害，且经动物实验确证具有保护肝脏功能的功效。cgmcc no.1.13855菌株能显著降低血清谷丙转氨酶、血清谷草转氨酶和肝脏丙二醛，升高肝脏超氧化物歧化酶和肝脏谷胱甘肽过氧化物酶的功能，和辛伐他丁有相似甚至更强的护肝功效。摄入乳酸菌的大鼠体征正常，摄入五周结束实验后取胃肠肝脾做病理未见异常。无菌组织做细菌检测未见乳酸菌异位定植。
附图说明
15.图1. cgmcc no.1.13855菌株基于16s rdna基因的系统进化树分析（最大似然法）；图2. cgmcc no.1.13855菌株对高脂模型大鼠的血清总胆固醇（tc）的影响；图3. cgmcc no.1.13855菌株对高脂模型大鼠的血清甘油三脂（tg）的影响；图4. cgmcc no.1.13855菌株对高脂模型大鼠的血清低密度脂蛋白（ldl）的影响；图5. cgmcc no.1.13855菌株对高脂模型大鼠的血清高密度度脂蛋白（hdl）的影响；图6. cgmcc 1.13855菌株对高脂模型大鼠的肝脏脂肪滴含量的影响（油红o染色）；图7. cgmcc 1.13855菌株对高脂模型大鼠的血清谷丙转氨酶（alt）的影响；图8. cgmcc 1.13855菌株对高脂模型大鼠的血清谷草转氨酶（ast）的影响；图9. cgmcc 1.13855菌株对高脂模型大鼠的肝脏丙二醛（mda）的影响；图10. cgmcc 1.13855菌株对高脂模型大鼠的肝脏超氧化物歧化酶（sod）的影响；图11. cgmcc 1.13855菌株对高脂模型大鼠的肝脏谷胱甘肽过氧化物酶（gsh-px）的影响；图12. cgmcc 1.13855菌株对高脂模型大鼠的血清白介素1-β(il-1β)的影响；图13. cgmcc 1.13855菌株对高脂模型大鼠的血清单核细胞趋化蛋白-1（mcp-1)的影响；图14. cgmcc 1.13855菌株对高脂模型大鼠的血清内毒素（et)的影响；图15. cgmcc 1.13855菌株对高脂模型大鼠空腹血糖的影响；图16 .cgmcc 1.13855菌株对高脂模型大鼠空腹血清胰岛素的影响；图17. cgmcc 1.13855菌株对高脂模型大鼠的血清肿瘤坏死因子-α（tnf-α）的影响；图18. cgmcc 1.13855菌株对高脂模型大鼠的血清白介素6 (il-6)的影响。
具体实施方式
16.下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实施例仅是范例性的，并不对本发明的保护范围构成任何限制。
17.实施例1 .乳酸菌的分离、筛选和鉴定1. 乳酸杆菌的分离1）从保菌管中取出标本100μl，加入到预装900μl无菌pbs的ep管中，依次对样本进行梯度稀释，旱獭粪便标本浓度稀释至10-6
倍； 2）取不同稀释度的样品100μl 涂布于mrs培养基上，放入培养箱中； 3）在37℃，0.5% co2环境中培养48h；4）取出培养皿，用无菌接种环挑取不同形态特征的菌落，转接至新的mrs 固体培养基中进行纯化，37℃厌氧培养48h，连续转接3 次，将纯化菌株在ph=3.5的液体mrs中培养，筛选耐酸生长优良的菌株可用于实验或冷冻保藏。
18.2. 菌种保藏本实验室用含25%甘油的mrs培养基作为保菌液进行菌种的冷冻保藏，方法如下：1）将容量为2ml的保菌管经121℃，15min高压灭菌处理后以备使用；2）乳酸杆菌在mrs固体培养基上连续转接3次后，向培养皿上加入1.5ml 的无菌保菌液；3）用l棒对培养皿进行刮涂，使菌落充分融入保菌液中；4）将菌液转移到保菌管中，混匀后-80℃保藏。
19.3. 菌落外观和菌体形态观察保藏编号为cgmcc no.1.13855的乳酸杆菌ht111-2属厌氧菌，在厌氧条件下生长良好，在哥伦比亚血培养基上形成圆形、边缘不规则、中间隆起、表面粗糙的淡黄色菌落，直径约 1-1.2 mm；在有氧条件下不生长。在光学显微镜下，经革兰氏染色，菌体呈淡紫色，可出现首尾相接的排列方式。菌体在透射电镜下呈杆状，无芽胞、无鞭毛、无菌毛、无动力，直径约 0.7-1
×
2.5-4.28
ꢀµ
m。
20.4. 细菌总dna 的提取将单个菌落接种于mrs培养基上，37℃厌氧过夜培养，按照细菌基因组dna提取试剂盒（tiangen）说明书操作，提取dna。
21.5. 菌株的生化鉴定方法本研究采用法国梅里埃公司生产的“biomerieux”细菌系统生化鉴定卡api 50ch 和 api zym 对菌株 ht111
‑ꢀ
2以及参考菌株进行碳水化合物酵解和酶促反应生化鉴定。
22.结果：根据生化鉴定，获得了一株生化特征为乳杆菌属的菌种，菌株保藏编号为cgmcc no.1.13855，保藏日期为2021年12月16日，菌株分类命名为徐建国氏乳杆菌（lactobacillus xujianguonis），保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，邮编100101。
23.6. 细菌通用引物16s rrna pcr 扩增细菌16s rrna 鉴定：提取细菌基因组dna，扩增乳酸杆菌通用引物16s rdna pcr产物测序，序列在ncbi上进行blast比对，进行初步鉴定。
24.本实验所用的细菌16s rrna pcr 扩增的引物以及pcr 反应的条件如下所述，实
验全部用50μl的pcr体系。通过对待测乳酸杆菌通用引物16s rrna pcr产物测序结果在ncbi上进行blast比对，鉴定。结果提示cgmcc no.1.13855菌株可能为乳杆菌属的一个疑似新种。
25.通用引物16s rrna pcr 扩增条件：引物序列：27f，5'-agagtttgatcmtggctcag-3'；1492r5'-tacggytaccttgttacgactt-3'；反应体系（50μl）：；扩增条件：。
26.7.系统进化分析根据菌株cgmcc no.1.13855 16s rdna genbank 31条模式菌株的16s rdna基因作为 参考序列，使用enterococcus.faecium atcc 19434的16s rdna基因序列作为外群，利用 mega 6.0软件，采用clustal_w进行多序列比对，基于最大似然法 maximumlikelihood(ml)构建系统进化树。基于16s rdna基因序列构建的系统进化树显 示，菌株cgmcc no.1.13855与邻近的乳杆菌聚类在一起，系统进化树上形成一个独立分 支，与l.amylolyticus dsm 11664和l.hamsteri dsm 5661的进化关系最相近，详见图1 (最大似然法)。通过二代测序获得菌株cgmcc no.1.13855的全基因组框架图序列，并 与参考菌株l.amylolyticus dsm 11664和l.hamsteri dsm 5661基因组在线基因组杂交， ddh值分别为20.6％和21.1％，与genbank数据库中收录的乳杆菌属内175个模式菌 株的基因组序列进行在线基因组杂交，结果显示ddh值范围为17.2％-42.5％，低于 70％，符合新种的判定标准。
27.综上，基因组及系统进化分析提示菌株cgmcc no.1.13855为乳杆菌属的新种。
28.实施例2 . 乳杆菌cgmcc no.1.13855对大鼠血清的血脂降低功能将32只约200克体重的雌性sd大鼠分别随机分四组，一组给与正常维持饲料，三组给予高脂饲料（胆固醇1%，猪油10%，0.2胆酸盐，10%蛋黄粉）。三组高脂饲料组，在喂食一周后，一组隔天经口给予109cfu cgmcc no.1.13855乳酸杆菌菌液，一组隔天给予生理盐水，一组在实验终止前三周隔天给予20mg/kg体重的辛伐他丁，共五周终止实验，检测血清的血
脂水平，来评价乳杆菌cgmcc no.1.13855对脂代谢紊乱模型的预防干预效果。
29.图2显示cgmcc no.1.13855
t
对高脂模型大鼠的血清总胆固醇（tc）的影响。cgmcc no.1.13855干预组（即ht111-2干预组）和辛伐他汀干预组的血清tc平均含量为1.79
±
0.18mmol/l和1.77
±
0.08mmol/l，均显著低于高脂模型组2.48
±
0.23mmol/l（p《0.001）；高脂模型组的血清tc平均含量为2.48
±
0.23mmol/l，显著高于正常对照组1.40
±
0.10mmol/l（p《0.001）。
30.图3显示cgmcc no.1.13855对高脂模型大鼠的血清甘油三脂（tg）的影响。cgmcc no.1.13855干预组（即ht111-2干预组）和辛伐他汀干预组的血清tg平均含量为2.55
±
0.17mmol/l和2.55
±
0.08mmol/l，均显著低于高脂模型组3.07
±
0.15mmol/l（p《0.001）；高脂模型组的血清tg平均含量为3.07
±
0.15mmol/l，显著高于正常对照组1.87
±
0.09mmol/l（p《0.001）。
31.图4显示cgmcc no.1.13855对高脂模型大鼠的血清低密度脂蛋白（ldl）的影响。cgmcc no.1.13855干预组（即ht111-2干预组）和辛伐他汀干预组的血清ldl平均含量为2.60
±
0.15mmol/l和2.17
±
0.32mmol/l，均显著低于高脂模型组3.15
±
0.24mmol/l（p《0.01和p《0.001）；高脂模型组的血清ldl平均含量为3.15
±
0.24mmol/l，显著高于正常对照组1.79
±
0.26mmol/l（p《0.001）。
32.图5显示cgmcc no.1.13855对高脂模型大鼠的血清高密度度脂蛋白（hdl）的影响。cgmcc no.1.13855干预组（即ht111-2干预组）和辛伐他汀干预组的血清hdl平均含量为2.10
±
0.22mmol/l和2.33
±
0.17mmol/l，均显著高于高脂模型组1.51
±
0.08mmol/l（p《0.01和p《0.001）；高脂模型组的血清hdl平均含量为1.51
±
0.08mmol/l，显著低于正常对照组3.10
±
0.41mmol/l（p《0.001）。
33.图6 显示cgmcc no.1.13855菌株对高脂模型大鼠的肝脏脂肪滴含量的影响（油红o染色）。正常对照组油红o染色显示胞浆内未见脂滴。高脂模型组油红o染色显示胞浆内大量脂滴。cgmcc no.1.13855干预组（即ht111-2干预组）和辛伐他汀干预组油红o染色显示胞浆内有脂滴，但是明显少于高脂模型组。
34.上述结果表明，cgmcc no.1.13855乳杆菌菌株具有显著降低血清总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白和升高高密度脂蛋白的作用，同时可以降低肝脏的脂肪含量，和辛伐他汀有相似的降低血脂功效。
35.摄入cgmcc no.1.13855乳杆菌的大鼠表现正常，摄入五周结束实验后取胃肠肝脾做病理未见异常。无菌组织做细菌检测未见乳酸菌异位定植。
36.实施例3 . 乳杆菌cgmcc no.1.13855对大鼠肝脏功能的保护作用将32只约200克体重的雌性sd大鼠分别随机分四组，一组给与正常维持饲料，三组给予高脂饲料（胆固醇1%，猪油10%，0.2胆酸盐，10%蛋黄粉）。三组高脂饲料组，在喂食一周后，一组隔天经口给予109cfu cgmcc no.1.13855乳酸杆菌菌液，一组隔天给予生理盐水，一组在实验终止前三周隔天给予20mg/kg体重的辛伐他丁，共五周终止实验，检测血清的谷草转氨酶、谷丙转氨酶和炎性因子水平，来评价乳杆菌cgmcc no.1.13855对脂代谢紊乱模型造成的肝脏功能损伤的预防干预效果。
37.图7显示cgmcc no.1.13855对高脂模型大鼠的血清谷丙转氨酶（alt）的影响。cgmcc no.1.13855干预组（即ht111-2干预组）和辛伐他汀干预组的血清alt平均含量为
1.05
±
0.09ng/ml和1.34
±
0.04ng/ml，均显著低于高脂模型组1.66
±
0.09ng/ml（p《0.001）；高脂模型组的血清alt平均含量为1.66
±
0.09ng/ml，显著高于正常对照组0.94
±
0.05ng/ml（p《0.001）。
38.图8显示cgmcc no.1.13855对高脂模型大鼠的血清谷草转氨酶（ast）的影响。cgmcc no.1.13855干预组（即ht111-2干预组）和辛伐他汀干预组的血清ast平均含量为1.67
±
0.26ng/ml和1.91
±
0.34ng/ml，均显著低于高脂模型组2.70
±
0.12ng/ml（p《0.001）；高脂模型组的血清ast平均含量为2.70
±
0.12ng/ml，显著高于正常对照组1.51
±
0.27ng/ml（p《0.001）。
39.图9显示cgmcc no.1.13855对高脂模型大鼠的肝脏丙二醛（mda）的影响。cgmcc no.1.13855干预组（即ht111-2干预组）和辛伐他汀干预组的肝脏mda平均含量为3.12
±
0.38nmol/ml和3.45
±
0.49nmol/ml，均显著低于高脂模型组4.54
±
0.20nmol/ml（p《0.01和p《0.001）；高脂模型组的肝脏mda平均含量为4.54
±
0.20nmol/ml，显著高于正常对照组2.63
±
0.49nmol/ml（p《0.001）。
40.图10显示cgmcc no.1.13855对高脂模型大鼠的肝脏超氧化物歧化酶（sod）的影响。cgmcc no.1.13855干预组 （即ht111-2干预组）和辛伐他汀干预组的肝脏sod平均含量为1.28
±
0.07ng/ml和1.18
±
0.14ng/ml，均显著高于高脂模型组0.90
±
0.05ng/ml（p《0.001）；高脂模型组的肝脏sod平均含量为0.90
±
0.05ng/ml，显著低于正常对照组1.32
±
0.06ng/ml（p《0.001）。
41.图11显示cgmcc no.1.13855对高脂模型大鼠的肝脏谷胱甘肽过氧化物酶（gsh-px）的影响。cgmcc no.1.13855干预组（即ht111-2干预组）和辛伐他汀干预组的肝脏gsh-px平均含量为7.71
±
1.08ng/ml和7.80
±
0.63ng/ml，均显著高于高脂模型组4.31
±
0.41ng/ml（p《0.001）；高脂模型组的肝脏gsh-px平均含量为4.31
±
0.41ng/ml，显著低于正常对照组8.90
±
0.48ng/ml（p《0.001）。
42.上述结果表明，cgmcc no.1.13855乳杆菌菌株具有显著降低血清谷丙转氨酶、血清谷草转氨酶和肝脏丙二醛的作用，同时升高了肝脏超氧化物歧化酶和肝脏谷胱甘肽过氧化物酶的作用，和辛伐他汀有相似的保护肝脏功能的功效。
43.实施例4 . 乳杆菌cgmcc no.1.13855对大鼠血清的肝脏炎症和肝脏纤维化相关炎性因子降低功能图12显示cgmcc no.1.13855对高脂模型大鼠的血清白介素1-β(il-1β)的影响。cgmcc no.1.13855干预组（即ht111-2干预组）和辛伐他汀干预组的血清il-1β平均含量为20.29
±
1.88pg/ml和17.98
±
1.16pg/ml，均显著低于高脂模型组28.40
±
1.96pg/ml（p《0.001）；高脂模型组的血清il-1β平均含量为28.40
±
1.96pg/ml，显著高于正常对照组20.06
±
3.81pg/ml（p《0.001）。
44.图13显示cgmcc no.1.13855对高脂模型大鼠的血清单核细胞趋化蛋白-1（mcp-1)的影响。cgmcc no.1.13855干预组（即ht111-2干预组）的血清mcp-1平均含量为536.98
±
104.31pg/ml，显著低于高脂模型组733.69
±
40.18pg/ml（p《0.001）；辛伐他汀干预组的血清mcp-1平均含量为628.89
±
52.98pg/ml，与高脂模型组733.69
±
40.18pg/ml无显著差异（p＞0.05）；高脂模型组的血清mcp-1平均含量为733.69
±
40.18pg/ml，显著高于正常对照组527.28
±
72.42pg/ml（p《0.001）。
45.上述结果表明，cgmcc no.1.13855乳杆菌菌株具有显著降低血清il-1β和mcp-1炎性因子的作用，比辛伐他汀有更强的降低血清炎性因子的功效。肝脏纤维化是各种原因导致的肝损伤持续发展的最终结局，mcp-l是组织损伤修复中重要的巨噬细胞趋化因子，其在肝脏损伤及修复中起着重要作用。il-1β是另一个致纤维化的重要炎症细胞，是前炎症反应的主要诱导剂，它可以通过协同其他炎性因子如tnf-α，并促进其他炎性因子的表达加强炎性反应程度。总之，mcp-l和il-1β是肝脏纤维化的重要炎症因子。cgmcc no.1.13855乳杆菌显著降低血清il-1β和mcp-1炎性因子的含量，从而减少肝脏炎症和肝脏纤维化的发生。
46.实施例5. 乳杆菌cgmcc no.1.13855对大鼠血清的内毒素降低功能图14显示cgmcc 1.13855对高脂模型大鼠的血清内毒素（et)的影响。cgmcc 1.13855干预组（即ht111-2干预组）的血清et平均含量为36.14
±
5.59pg/ml，显著低于高脂模型组53.95
±
6.28pg/ml（p《0.001）；辛伐他汀干预组的血清et平均含量为44.89
±
4.90pg/ml，与高脂模型组53.95
±
6.28pg/ml无显著差异（p＞0.05）；高脂模型组的血清et平均含量为53.95
±
6.28pg/ml，显著高于正常对照组25.25
±
6.26pg/ml（p《0.001）。
47.上述结果表明，cgmcc no.1.13855乳杆菌菌株具有显著降低血清内毒素（et)的作用，从而减少肝损伤程度，比辛伐他汀有更强的降低血清内毒素（et)的功效。
48.摄入cgmcc no.1.13855乳杆菌的大鼠表现正常，摄入五周结束实验后取胃肠肝脾做病理未见异常。无菌组织做细菌检测未见乳酸菌异位定植。
49.实施例6 .乳杆菌cgmcc no.1.13855的降糖功能体内评价将32只约200克体重的雌性sd大鼠分别随机分四组，一组给与正常维持饲料，三组给予高脂饲料（胆固醇1%，猪油10%，0.2胆酸盐，10%蛋黄粉）。三组高脂饲料组，在喂食一周后，一组隔天经口给予109cfu cgmcc no.1.13855乳酸杆菌菌液，一组隔天给予生理盐水，一组在实验终止前三周隔天给予20mg/kg体重的辛伐他丁，共五周终止实验，检测大鼠空腹血清的血糖和炎性因子水平，来评价乳杆菌cgmcc no.1.13855对代谢紊乱模型的预防干预效果。
50.1.乳杆菌cgmcc no.1.13855对大鼠空腹血糖和血胰岛素有降低功能图15显示cgmcc no.1.13855对高脂模型大鼠空腹血糖的影响。cgmcc no.1.13855干预组（即ht111-2干预组）和辛伐他汀干预组的血糖平均含量为3.30
±
0.78mmol/l和2.91
±
0.72mmol/l，均显著低于高脂模型组5.09
±
0.29mmol/l（p《0.001）；高脂模型组的血糖平均含量为5.09
±
0.29mmol/l，显著高于正常对照组2.67
±
0.41mmol/l（p《0.001）。
51.图16显示cgmcc no.1.13855对高脂模型大鼠空腹血清胰岛素的影响。cgmcc no.1.13855干预组（即ht111-2干预组）和辛伐他汀干预组的血清胰岛素平均含量为31.45
±
1.77mu/l和36.81
±
2.23mu/l，均显著低于高脂模型组44.84
±
2.23mu/l（p《0.001）；高脂模型组的血清胰岛素平均含量为44.84
±
2.23mu/l，显著高于正常对照组25.33
±
3.04mu/l（p《0.001）。
52.上述结果表明，cgmcc no.1.13855乳杆菌菌株具有显著降低血糖和血清胰岛素的作用，和辛伐他汀有相似的降低血糖功效。脂代谢紊乱如高甘油三酯和高游离脂肪酸血症等与胰岛素抵抗密切相关。胰岛素抵抗使胰岛素促进葡萄糖摄取和利用的效率下降，机体代偿性的分泌过多胰岛素产生高胰岛素血症，以维持血糖的稳定。胰岛素抵抗易导致代谢综合征和2型糖尿病。cgmcc no.1.13855乳杆菌菌株具有降血脂的作用，从而减轻胰岛素抵
抗，导致血糖和血清胰岛素的降低。
53.实施例7 .乳杆菌cgmcc no.1.13855对大鼠血清的胰岛素抵抗作用相关炎性因子降低功能图17显示cgmcc no.1.13855对高脂模型大鼠的血清肿瘤坏死因子-α（tnf-α）的影响。cgmcc no.1.13855干预组（即ht111-2干预组）和辛伐他汀干预组的血清tnf-α平均含量为112.54
±
20.53pg/ml和159.75
±
7.95pg/ml，均显著低于高脂脂模型组198.5
±
13.94pg/ml（p《0.001）；高脂模型组的血清tnf-α平均含量为198.5
±
13.94pg/ml，显著高于正常对照组105.44
±
25.22pg/ml（p《0.001）。
54.图18显示cgmcc no.1.13855对高脂模型大鼠的血清白介素6 (il-6)的影响。cgmcc no.1.13855干预组（即ht111-2干预组）和辛伐他汀干预组的血清il-6平均含量为115.43
±
9.20pg/ml和132.24
±
9.94pg/ml，均显著低于高脂模型组155.93
±
7.55pg/ml（p《0.001和p《0.01）；高脂模型组的血清il-6平均含量为155.93
±
7.55pg/ml，显著高于正常对照组114.42
±
8.90pg/ml（p《0.001）。
55.上述结果表明，cgmcc no.1.13855乳杆菌菌株具有显著降低血清肿瘤坏死因子-α和il-6炎性因子，比辛伐他汀有更强的降低血清炎性因子的功效。因为胰岛素抵抗的产生与血清炎性因子水平密切相关，血清炎性因子的长期过度分泌，可能是导致胰岛β细胞分泌胰岛素功能受损及产生胰岛素抵抗的主要因素。tnf-α和il-6作为最具代表性的细胞因子，在炎症和免疫反应中起核心调节作用。血清tnf-α和il-6水平的升高可以通过干扰胰岛素信号转导而诱发胰岛素抵抗。cgmcc no.1.13855乳杆菌菌株显著降低血清tnf-α和il-6炎性因子含量，从而降低胰岛素抵抗作用，引起血糖降低。
56.摄入cgmcc no.1.13855乳杆菌的大鼠表现正常，摄入五周结束实验后取胃肠肝脾做病理未见异常。无菌组织做细菌检测未见乳酸菌异位定植。
再多了解一些
本文用于企业家、创业者技术爱好者查询，结果仅供参考。
