一种从野生条斑钳蝎中分离纯化透明质酸酶的方法及应用

技术特征：
1.一种从野生条斑钳蝎中分离纯化透明质酸酶的方法，其特征在于按下列步骤进行：a、用高频弱电流刺激法刺激蝎子尾节，采用小型按摩仪采毒，将连续感应电刺激档调频到128赫兹，电压为3-7伏，用两个镊子分别与两个电极相连接，一个镊子夹住蝎子的一个触肢，另一个镊子夹在蝎子尾节毒囊腺体处，使整个系统产生带电通路，对蝎子产生电刺激，以排出毒液，若无反应，在电极与镊子接触的部位滴上几滴生理盐水，使蝎子毒囊腺体肌肉收缩，促其排毒，得到粗毒液；b、将步骤a得到的粗毒液，放入含冰水50 ml的离心管收集尾刺所排出的粗毒液；c、将步骤b中提取的粗毒液，用真空冷冻干燥机冻干，温度为-80℃，压力为10 pa，时间为24 h，得到总的粗毒素干粉；d、将步骤c中的粗毒素干粉，溶于20 mm，ph 4.5-7 醋酸铵、磷酸或三羟甲基氨基甲烷盐酸盐缓冲溶液，震荡10 min，在温度4℃静止1 h，离心，温度4℃，时间10 min，转速为8000 rpm/min，取上清液；e、将步骤d中的上清液，用20 mm醋酸铵、磷酸或三羟甲基氨基甲烷盐酸盐缓冲液平衡的阳离子交换柱，上样量为80mg，流速为0.4-2ml/min，用洗脱液为含0%-70%的氯化钠的20mm醋酸铵缓冲液溶液进行梯度洗脱，按离子强度分为四个蛋白组分，分别为一个酸性或中性蛋白部位和三个碱性蛋白部位；f. 将步骤e中的四个蛋白部位，在温度4℃环境下用冷蒸水透析，每4h换1次透析溶液，共替换8次，得到四个蛋白部位的脱盐溶液；g、将步骤f中的四个蛋白组分分别用真空冷冻干燥机冻干，温度为-80℃，压力为15 pa，时间为24h，得到四个蛋白部位干燥粉末；h、将步骤g中的干燥粉末通过sds聚丙酰胺电泳与标准品比对判断透明质酸酶所在部位为50%氯化钠洗脱组分；i、将步骤h中的50%氯化钠洗脱组分溶于5ml超纯水中，用超纯水平衡分子筛凝胶柱，上样量为20-100mg,流速为0.4ml/min，以超纯水进行洗脱，得到分子量分别为55kd，40kd和20kd的三种蛋白类物质水溶液；j、将步骤i中的三种蛋白类物质水溶液分别用真空冷冻干燥机冻干，温度为-80℃，压力为10 pa，时间为24h，得到三种蛋白类物质粉末；k、将步骤j中的三种粉末样品通过sds聚丙酰胺电泳与标准品比对最终确认分子量为55kd的蛋白样品为高纯度透明质酸酶。2.根据权利要求1所述方法获得的条斑钳蝎毒素中的透明质酸酶在制备抗氧化中的药物的用途。

技术总结
本发明公开了一种从野生条斑钳蝎中分离纯化透明质酸酶的方法及应用，该方法由条斑钳蝎毒素为研究对象，通过电刺激法收集蝎素；利用冷冻干燥机进行干燥至白色粉末，在-20℃冰箱储存备用；以透明质酸酶活力为导向，分别利用阳离子交换凝胶色谱，分子筛纯化；再利用制备性凝胶高效液相制备得到高纯度、高活力的透明质酸酶的方法。通过检测和评价结果表明：从条斑钳蝎中得到的透明质酸酶分子量为55KD，产率为1.5%，经高效液相检测其纯度达到90%以上，效价达到2300U/mg，通过红外检测，在1610cm-1


技术研发人员：阿布力米提
受保护的技术使用者：中国科学院新疆理化技术研究所
技术研发日：2022.03.03
技术公布日：2022/5/17