肽化合物的制造方法与流程

1.本发明涉及肽化合物的制造方法。


背景技术：

2.用于形成酰胺键的缩合试剂在医药、农药等的生理活性物质的制造等中被广泛使用。特别是在肽化合物的制造中，由于需要形成多个酰胺键，因此强烈期望能以高收率得到目标物的缩合试剂(非专利文献1)。
3.在肽化合物的制造中，作为可在工业上利用的缩合试剂，已知有(1-氰基-2-乙氧基-2-氧代亚乙基氨基氧基)二甲基氨基-吗啉代-碳鎓六氟磷酸盐(comu)、氯甲酸异丁酯、特戊酰氯等(专利文献1、2，非专利文献2、3)。另一方面，已知comu、氯甲酸异丁酯具有由自分解导致的发热性(非专利文献4)。
4.现有技术文献
5.专利文献
6.专利文献1：国际公开第2017/129796号
7.专利文献2：国际公开第2012/004554号
8.非专利文献1：化学评论(
ケミカルレビューズ
)2011年，第111卷，6657-6602页
9.非专利文献2：保加利亚科学院的报告(
ブルガリア
科学
アカデミーのレポート
)2004年，第57卷，53-57页
10.非专利文献3：生物有机化学杂志(
ジャーナルオブバイオオーガニックケミストリー
)2009年，第35卷，150-156页
11.非专利文献4：有机工艺研究与开发(
オーガニックプロセスリサーチアンドディベロップメント
)2018年，第22卷，1262-1275页


技术实现要素：

12.发明所要解决的课题
13.本技术的发明人进行确认的结果发现，将特戊酰氯用作缩合试剂而使c-保护氨基酸或c-保护肽的n末端、与n-保护氨基酸或n-保护肽的c末端反应的情况下，生成来源于缩合试剂的新戊酰基导入至c-保护氨基酸或c-保护肽的n末端而得到的副产物，作为目标的肽化合物的收率降低。在重复形成酰胺键的肽化合物的制造中，上述副产物作为杂质蓄积。因此，设想上述方法作为工业上的制造方法而言在效率、经济性方面存在课题。
14.本发明提供使用不存在由自分解导致的发热的安全的缩合试剂而以高收率制造肽化合物的方法。
15.用于解决课题的手段
16.本技术的发明人进行了深入研究，结果发现，通过使用具有特定结构的羧酸卤化物，能够解决上述课题，从而完成了本发明。即，本发明的特征如下。
17.1.18.肽的制造方法，其包括下述工序(1)及(2)，
19.工序(1)：
20.将n-保护氨基酸或n-保护肽、与式(i)表示的羧酸卤化物混合，
21.[化学式1]
[0022][0023]
(式中，x表示卤原子，
[0024]
r1、r2及r3彼此独立地表示可具有取代基的脂肪族烃基，r1、r2及r3中的碳原子的总数为3至40)；及
[0025]
工序(2)：
[0026]
将工序(1)中得到的产物、与c-保护氨基酸或c-保护肽混合。
[0027]
[2]
[0028]
如[1]所述的肽的制造方法，其还包括1次以上的下述工序(3)至(5)的重复，
[0029]
工序(3)：
[0030]
将工序(2)或(5)中得到的肽的n末端的保护基除去；
[0031]
工序(4)：
[0032]
将n-保护氨基酸或n-保护肽与式(i)表示的羧酸卤化物混合；及
[0033]
工序(5)：
[0034]
将工序(4)中得到的产物、与工序(3)中得到的产物混合。
[0035]
[3]
[0036]
如[1]或[2]所述的肽的制造方法，其中，r1、r2及r3中的2个以上彼此独立地为包含1个以上的叔碳原子或季碳原子的脂肪族烃基。
[0037]
[4]
[0038]
如[1]或[2]所述的肽的制造方法，其中，r1为甲基，r2及r3彼此独立地为包含1个以上的叔碳原子或季碳原子的脂肪族烃基。
[0039]
[5]
[0040]
如[4]所述的肽的制造方法，其中，r2及r3彼此独立地为包含1个以上的叔碳原子或季碳原子的c
3-10
烷基。
[0041]
[6]
[0042]
如[1]所述的肽的制造方法，其中，羧酸卤化物为式(ii)表示的化合物。
[0043]
[化学式2]
[0044][0045]
(式中，x表示卤原子)
[0046]
[7]
[0047]
如[1]至[6]中任一项所述的肽的制造方法，其中，x为氯原子或溴原子。
[0048]
[8]
[0049]
如[1]至[6]中任一项所述的肽的制造方法，其中，x为氯原子。
[0050]
[9]
[0051]
如[1]至[8]中任一项所述的肽的制造方法，其中，n-保护氨基酸中的氨基酸为甘氨酸以外的α-氨基酸。
[0052]
[10]
[0053]
如[9]所述的肽的制造方法，其中，n-保护氨基酸中的氨基酸为甘氨酸以外的α-氨基酸，其氨基酸侧链的反应性官能团被保护。
[0054]
[11]
[0055]
如[9]或[10]所述的肽的制造方法，其中，甘氨酸以外的α-氨基酸为缬氨酸、苯丙氨酸、苏氨酸、亮氨酸、色氨酸、丝氨酸、半胱氨酸、天冬氨酸或酪氨酸。
[0056]
[12]
[0057]
如[1]至[11]中任一项所述的肽的制造方法，其中，c-保护氨基酸中的氨基酸或c-保护肽的n末端残基中的氨基酸为n-取代氨基酸以外的α-氨基酸。
[0058]
[13]
[0059]
如[1]至[12]中任一项所述的肽的制造方法，其中，工序(2)为将工序(1)中得到的产物、与c-保护肽混合的工序。
[0060]
[14]
[0061]
如[1]至[13]中任一项所述的肽的制造方法，其中，n-保护氨基酸或n-保护肽的n末端保护基为氨基甲酸酯系保护基。
[0062]
[15]
[0063]
如[14]所述的肽的制造方法，其中，氨基甲酸酯系保护基为9-芴基甲氧基羰基或苄氧基羰基。
[0064]
发明效果
[0065]
通过本发明，能够使用可在工业上应用的试剂而以高收率得到作为目标的肽。
具体实施方式
[0066]
以下，对本发明进行详细说明。
[0067]
本说明书中的“n
‑”
是指正，“s
‑”
是指仲(secondary)，“t
‑”
及“tert
‑”
是指叔(tertiary)，“me”是指甲基，“et”是指乙基，“bu”是指丁基，“bn”是指苄基，“boc”是指叔丁
氧基羰基，“cbz”是指苄氧基羰基，“fmoc”是指9-芴基甲氧基羰基，“trt”是指三苯甲基，“nmp”是指n-甲基吡咯烷酮。
[0068]
所谓“卤原子”，是指氟原子、氯原子、溴原子或碘原子。
[0069]
所谓“烷基”，是指直链或支链状的、饱和脂肪族烃的1价基团。所谓“c
1-6
烷基”，是指碳原子数为1至6个的直链或支链状的烷基，作为具体例，可举出甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、3-戊基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、正己基、3,3-二甲基丁烷-2-基等。
[0070]
所谓“c
1-40
烷基”，是指碳原子数为1至40个的直链或支链状的烷基，作为具体例，可举出甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、正己基、辛基、癸基、十二烷基、十六烷基、十八烷基、二十二烷基、三十烷基、四十烷基、3,7,11,15-四甲基十六烷基(以下，有时也称为2,3-二氢叶绿基。)等。
[0071]
所谓“c
3-10
烷基”，是指碳原子数为3至10个的直链或支链状的烷基，作为具体例，可举出正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、正己基、辛基、癸基、2,3-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、2,2,4-三甲基戊基、2,2,4-三甲基己基、2,2,3,4-四甲基己基、4-乙基-2,2-二甲基己基等。
[0072]
所谓“环烷基”，是指环状的饱和脂肪族烃的1价基团。所谓“c
3-6
环烷基”，是指碳原子数为3至6个的环烷基，作为具体例，可举出环丙基、环丁基、环戊基、环己基等。
[0073]
所谓“链烯基”，是指具有双键的直链或支链状的不饱和脂肪族烃的1价基团。所谓“c
2-6
链烯基”，是指碳原子数为2至6个的链烯基，作为具体例，可举出乙烯基、1-丙烯基、烯丙基、异丙烯基、2-丁烯基、3-丁烯基等。
[0074]
所谓“炔基”，是指具有三键的直链或支链状的不饱和脂肪族烃的1价基团。所谓“c
2-6
炔基”，是指碳原子数为2至6个的炔基，作为具体例，可举出乙炔基、1-丙炔基等。
[0075]
所谓“芳烷基”，是指具有芳香族烃作为取代基的烷基。所谓“c
7-14
芳烷基”，是指碳原子数为7至14个的芳烷基，作为具体例，可举出苄基、1-苯基乙基、2-苯基乙基、1-苯基丙基、萘基甲基、1-萘基乙基、1-萘基丙基等。
[0076]
所谓“c
6-14
芳基”，是指碳原子数为6至14个的芳香族烃基，作为其具体例，可举出苯基、1-萘基、2-萘基、1-蒽基、2-蒽基、9-蒽基、联苯基等。
[0077]
所谓“c
6-14
卤代芳基”，是指被1个以上的卤原子取代的碳原子数为6至14个的芳香族烃基，作为其具体例，可举出4-氯苯基、2,4-二氯苯基、5-氟-1-萘基、6-溴-2-萘基、6,7-二碘-1-蒽基、10-溴-9-蒽基、4
’‑
氯-(1,1
’‑
联苯)-2-基等。
[0078]
所谓“c
6-14
芳基氧基”，是指碳原子数为6至14个的芳基氧基，作为具体例，可举出苯氧基、1-萘基氧基、2-萘基氧基、1-蒽基氧基、2-蒽基氧基、9-蒽基氧基、联苯基氧基等。
[0079]
所谓“5-10元杂环基”，是指构成环的原子的数目为5至10个、并且构成环的原子中含有独立地选自由氮原子、氧原子及硫原子组成的组中的1至4个杂原子的单环系或稠环系的杂环基。该杂环基可以为饱和、部分不饱和、不饱和中的任何，作为具体例，可举出吡咯烷基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、哌啶基、四氢吡喃基、四氢噻喃基、吡咯基、呋喃基、噻吩基、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、氮杂环庚烷基、氧杂环庚烷基、硫杂环庚烷基、氮杂基、氧杂环庚烯基、硫杂环庚烯基、咪唑基、吡唑基、噁唑基、噻唑基、咪唑啉基、吡嗪基、吗啉基、噻嗪基、吲哚基、异吲哚基、苯并咪唑基、嘌呤基、喹啉基、异喹啉基、喹喔啉基、肉啉基、蝶啶基、苯并吡
喃基、异苯并吡喃基等。
[0080]
所谓“c
1-6
烷氧基”，是指碳原子数为1至6个的直链或支链状的烷氧基，作为具体例，可举出甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基、正戊基氧基、正己基氧基等。
[0081]
所谓“c
1-40
烷氧基”，是指碳原子数为1至40个的直链或支链状的烷氧基，作为具体例，可举出甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基、正戊基氧基、正己基氧基、辛基氧基、癸基氧基、十二烷基氧基、十六烷基氧基、十八烷基氧基、二十二烷基氧基、三十烷基氧基、四十烷基氧基、3,7,11,15-四甲基十六烷基氧基(以下，有时也称为2,3-二氢叶绿基氧基。)等。
[0082]
所谓“c
3-6
环烷氧基”，是指碳原子数为3至6个的环烷基氧基，作为具体例，可举出环丙氧基、环丁氧基、环戊基氧基、环己基氧基等。
[0083]
所谓“单c
1-6
烷基氨基”，是指1个前述“c
1-6
烷基”键合于氨基而成的基团，作为具体例，可举出单甲基氨基、单乙基氨基、单正丙基氨基、单异丙基氨基、单正丁基氨基、单异丁基氨基、单叔丁基氨基、单正戊基氨基、单正己基氨基等。
[0084]
所谓“二c
1-6
烷基氨基”，是指相同或不同的2个前述“c
1-6
烷基”键合于氨基而成的基团，作为具体例，可举出二甲基氨基、二乙基氨基、二正丙基氨基、二异丙基氨基、二正丁基氨基、二异丁基氨基、二叔丁基氨基、二正戊基氨基、二正己基氨基、n-乙基-n-甲基氨基、n-甲基-n-正丙基氨基、n-异丙基-n-甲基氨基、n-正丁基-n-甲基氨基、n-异丁基-n-甲基氨基、n-叔丁基-n-甲基氨基、n-甲基-n-正戊基氨基、n-正己基-n-甲基氨基、n-乙基-n-正丙基氨基、n-乙基-n-异丙基氨基、n-正丁基-n-乙基氨基、n-乙基-n-异丁基氨基、n-叔丁基-n-乙基氨基、n-乙基-n-正戊基氨基、n-乙基-n-正己基氨基等。
[0085]
所谓“c
1-6
烷氧基羰基”，是指碳原子数为1至6个的直链或支链状的烷氧基羰基，作为具体例，可举出甲氧基羰基、乙氧基羰基、正丙氧基羰基、异丙氧基羰基、正丁氧基羰基、异丁氧基羰基、叔丁氧基羰基、正戊基氧基羰基、正己基氧基羰基等。
[0086]
所谓“三c
1-6
烷基甲硅烷基”，是指相同或不同的3个前述“c
1-6
烷基”键合于甲硅烷基而成的基团，作为具体例，可举出三甲基甲硅烷基(tms)基团、三乙基甲硅烷基、三异丙基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基、二叔丁基异丁基甲硅烷基等。
[0087]
所谓“三c
1-6
烷基甲硅烷基氧基”，是指相同或不同的3个前述“c
1-6
烷基”键合于甲硅烷基氧基而成的基团，作为具体例，可举出三甲基甲硅烷基氧基、三乙基甲硅烷基氧基、三异丙基甲硅烷基氧基、叔丁基二甲基甲硅烷基氧基、二叔丁基异丁基甲硅烷基氧基等。
[0088]
所谓“双环烷基”，是指包含2个桥头碳、并且具有2个环的饱和脂肪族烃的一价基团，作为具体例，可举出八氢茚-3-基、八氢萘-4-基、双环[2.2.1]庚烷-1-基或双环[2.2.1]庚烷-2-基等。另外，所谓“c
5-10
双环烷基”，是指碳原子数为5至10个的双环烷基，所谓“c
5-7
双环烷基”，是指碳原子数为5至7个的双环烷基。
[0089]
所谓“三环烷基”，是指包含至少3个桥头碳、并且具有3个环的饱和脂肪族烃的一价基团，作为具体例，可举出三环[3.3.1.1
3,7
]癸烷-1-基(金刚烷-1-基)基团或三环[3.3.1.1
3,7
]癸烷-2-基(金刚烷-2-基)基团等。另外，所谓“c
5-15
三环烷基”，是指碳原子数为5至15个的三环烷基，所谓“c
7-15
三环烷基”，是指碳原子数为7至15个的三环烷基。
[0090]
所谓“脂肪族烃基”，是直链、支链状或环状的、饱和或不饱和的脂肪族烃基，可举
出烷基、环烷基、链烯基、炔基、芳烷基等，作为具体例，可举出c
1-40
烷基、c
3-6
环烷基、c
2-6
链烯基、c
2-6
炔基、c
7-14
芳烷基等。
[0091]
所谓“包含1个以上的叔碳原子或季碳原子的脂肪族烃基”，是指构成脂肪族烃基的碳原子中的1个以上为叔碳原子或季碳原子的基团，作为具体例，可举出2-甲基丁烷-2-基、3-甲基丁烷-2-基、3,3-二甲基丁烷-2-基、叔丁基、3-戊基、2,2,4-三甲基戊烷-3-基、2,4,4-三甲基戊基、2,4-二甲基戊烷-3-基、4-乙基-2,2-二甲基己烷-3-基、3-庚基、2,2,4,8,10,10-六甲基十一烷-5-基、3-甲基环丁基、2-甲基环戊基、4-异丙基环己基等。
[0092]
所谓“包含1个以上的叔碳原子或季碳原子的c
3-10
烷基”，是指构成c
3-10
烷基的碳原子中的1个以上为叔碳原子或季碳原子的基团，作为具体例，可举出异丁基、叔丁基、异戊基、新戊基、2,2-二甲基丁基、2,3-二甲基丁基、2,2,4-三甲基戊基、2,4,4-三甲基戊基、2,2,4-三甲基己基、2,2,3,4-四甲基己基、2,2,4,4-四甲基戊基、4-乙基-2,2-二甲基己基等。
[0093]
所谓“氨基酸侧链的反应性官能团”，是指存在于氨基酸侧链、能与其他基团反应而形成共价键的基团，作为具体例，可举出羟基、羧基、氨基、酰胺基、硫醇基等。作为在侧链含有这些官能团的氨基酸，可举出精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、谷氨酰胺、半胱氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、色氨酸、组氨酸等。
[0094]
另外，所谓“氨基酸侧链的反应性官能团被保护”，是指在上述的反应性官能团上导入了肽化学等中通常使用的保护基。
[0095]
所谓“可具有取代基”，是指未取代、或者被化学上允许的任意数目的任意取代基取代。
[0096]
所谓“具有取代基”，是指被化学上允许的任意数目的任意取代基取代。
[0097]
上述的“任意取代基”只要是不对本发明作为对象的反应造成不良影响的取代基即可，不特别限定种类。
[0098]
作为“可具有取代基的脂肪族烃基”中的“取代基”，例如，可举出c
6-14
芳基、c
6-14
芳基氧基、5-10元杂环基、羟基、c
1-40
烷氧基、c
3-6
环烷氧基、乙酰氧基、苯甲酰基氧基、氨基、单c
1-6
烷基氨基、n-乙酰基氨基、二c
1-6
烷基氨基、卤原子、c
1-6
烷氧基羰基、苯氧基羰基、n-甲基氨基甲酰基、n-苯基氨基甲酰基、三c
1-6
烷基甲硅烷基、三c
1-6
烷基甲硅烷基氧基、氰基、硝基、羧基等。
[0099]
所谓“n-保护氨基酸”及“n-保护肽”，是指存在于氨基酸主链的氨基或肽n末端的氨基被保护、存在于氨基酸主链的羧基或肽c末端的羧基未保护的、氨基酸或肽。
[0100]
所谓“c-保护氨基酸”及“c-保护肽”，是指存在于氨基酸主链的羧基或肽c末端的羧基被保护、存在于氨基酸主链的氨基或肽n末端的氨基未保护的、氨基酸或肽。
[0101]
本发明中使用的氨基酸也包括n-取代氨基酸。
[0102]
所谓“n-取代氨基酸”，是指在存在于氨基酸主链的氨基上导入一个取代基而得到的氨基酸，作为具体例，可举出n-c
1-6
烷基氨基酸、n-c
2-6
链烯基氨基酸、n-c
2-6
炔基氨基酸、n-c
6-14
芳基氨基酸、n-c
1-6
烷氧基氨基酸(该c
1-6
烷基、c
2-6
链烯基、c
2-6
炔基、c
6-14
芳基及c
1-6
烷氧基可以具有取代基，这样的取代基的例子与上述“可具有取代基的脂肪族烃基”中的“取代基”的例子相同)等。
[0103]
上述n-c
1-6
烷基氨基酸优选为在氨基上导入一个可具有c
6-14
芳基、c
1-6
烷氧基、c
1-6
烷氧基羰基、二c
1-6
烷基氨基、5-10元杂环基或三c
1-6
烷基甲硅烷基的c
1-6
烷基而得到的氨基
酸，更优选为在氨基上导入一个可具有c
6-14
芳基、c
1-6
烷氧基、或c
1-6
烷氧基羰基的c
1-6
烷基而得到的氨基酸，进一步优选为在氨基上导入一个甲基、乙基、正丙基、正丁基或苄基而得到的氨基酸。
[0104]
本发明中使用的“来源于氨基酸的基团”是指从存在于氨基酸的主链的伯氨基或仲氨基的氮原子上除去氢原子、并且从存在于主链的羧基除去羟基而得到的2价基团。
[0105]
本发明中使用的“来源于肽的基团”是指从构成n末端的氨基酸的伯氨基或仲氨基的氮原子上除去氢原子、并且从构成c末端的氨基酸的羧基除去羟基而得到的2价基团。
[0106]
α-氨基酸的立体结构没有特别限定，但优选为l体。
[0107]
本说明书中使用的全部技术用语及科学用语具有与本发明所属的技术领域的技术人员通常理解的含义相同的含义。与本说明书中记载的方法及材料同样或同等的任意的方法及材料可以在本发明的实施或试验中使用，但以下记载优选的方法及材料。本说明书中提及的全部刊物及专利作为参照而并入本说明书中，目的是记载及公开例如与所记载的发明相关而可使用的刊物中记载的构建物及方法论。
[0108]
(本发明的肽的制造法的具体说明)
[0109]
以下，本发明的肽制造法可以通过将作为各工序(1)至(5)而记载的单元工序全部实施或适当地组合来进行。
[0110]
需要说明的是，本具体说明基于以下内容进行说明。
[0111]
(a)工序(1)至(5)的记载中的r1、r2及r3与上述含义相同。
[0112]
(b)反应的具体条件只要可达成本发明的肽的制造即可，没有特别限制。各反应中的优选条件适当进行详述。
[0113]
(c)各反应可以根据需要而在溶剂中进行，优选在溶剂中进行。各反应中记载的溶剂可以单独使用，也可以混合使用2种以上。
[0114]
工序(1)
[0115]
本工序为将n-保护氨基酸或n-保护肽与羧酸卤化物混合的工序。本工序为利用羧酸卤化物将n-保护氨基酸或n-保护肽的c末端活化的工序。本发明的一个方式中，是将式(iii)p
1-a
1-oh(式中，p1为n末端保护基，a1表示来源于氨基酸的基团或来源于肽的基团。)表示的n-保护氨基酸或n-保护肽与羧酸卤化物混合的工序。
[0116]
羧酸卤化物由下述式(i)表示。
[0117]
[化学式3]
[0118][0119]
(式中，x表示卤原子，r1、r2及r3彼此独立地表示可具有取代基的脂肪族烃基，r1、r2及r3中的碳原子的总数为3至40。)
[0120]
式(i)表示的羧酸卤化物优选为r1、r2及r3中的2个以上彼此独立地为包含1个以上的叔碳原子或季碳原子的脂肪族烃基的羧酸卤化物，更优选为r1为甲基、并且r2及r3彼此独立地为包含1个以上的叔碳原子或季碳原子的脂肪族烃基的羧酸卤化物，进一步优选为r1为甲基、并且r2及r3彼此独立地为包含1个以上的叔碳原子或季碳原子的c
3-10
烷基的羧酸卤
化物，特别优选为下述式(ii)所示的化合物。
[0121]
[化学式4]
[0122][0123]
式(i)及式(ii)的x所表示的卤原子只要是卤原子即可，没有特别限制，但优选为氯原子或溴原子，更优选为氯原子。
[0124]
相对于n-保护氨基酸或n-保护肽而言，羧酸卤化物的使用量优选为0.2当量至50当量，更优选为0.5当量至20当量，进一步优选为0.8当量至5当量。
[0125]
式(iii)的p1所表示的n末端保护基没有特别限制，作为其具体例，为氨基甲酸酯系保护基(9-芴基甲氧基羰基、叔丁氧基羰基、苄氧基羰基、烯丙基氧基羰基、2,2,2-三氯乙氧基羰基、2-(对联苯基)异丙基氧基羰基等)、酰胺系保护基(乙酰基、三氟乙酰基等)、酰亚胺系保护基(邻苯二甲酰基等)、磺酰胺系保护基(对甲苯磺酰基、2-硝基苯磺酰基等)、苄基等，优选为9-芴基甲氧基羰基、叔丁氧基羰基或苄氧基羰基，更优选为9-芴基甲氧基羰基或苄氧基羰基。
[0126]
式(iii)所表示的n-保护氨基酸中的氨基酸、及n-保护肽的c末端残基中的氨基酸没有特别限制，优选为α-氨基酸、β-氨基酸、γ-氨基酸或δ-氨基酸，更优选为α-氨基酸或β-氨基酸，进一步优选为α-氨基酸，更进一步优选为甘氨酸以外的α-氨基酸，特别优选为缬氨酸、苯丙氨酸、苏氨酸、亮氨酸、色氨酸、丝氨酸、半胱氨酸、天冬氨酸或酪氨酸。需要说明的是，在这些氨基酸中存在2个以上氨基的情况(例如，精氨酸、赖氨酸等)、存在2个以上羧基的情况(例如，谷氨酸、天冬氨酸等)、或存在反应性官能团的情况(例如，半胱氨酸、丝氨酸等)下，不参与肽的形成的存在于氨基酸侧链的反应性官能团可以被保护。
[0127]
式(iii)中，a1为来源于肽的基团的情况下，该基团中包含的氨基酸残基的数目没有特别限制，但优选为2至40，更优选为2至20。
[0128]
本工序可以根据需要而添加碱来实施。
[0129]
本工序中使用的碱没有特别限制，作为其例子，可举出脂肪族胺(例如，三乙基胺、n,n-二异丙基乙基胺、n-甲基吗啉)、芳香族胺(例如，吡啶、咪唑、n,n-二甲基-4-氨基吡啶)、脒(例如，二氮杂双环十一碳烯)、碱金属盐(例如，碳酸氢钠、碳酸钾)等。优选为脂肪族胺，更优选为n,n-二异丙基乙基胺、三乙基胺或n-甲基吗啉。
[0130]
本工序中使用的碱的使用量相对于羧酸卤化物而言优选为0.2当量至50当量，更优选为0.5当量至20当量，进一步优选为0.8当量至5当量。
[0131]
本工序中使用的溶剂只要不妨碍活化反应即可，没有特别限定，作为其例子，可举出含卤素烃溶剂(例如，二氯甲烷、氯仿)、芳香族烃溶剂(例如，甲苯、二甲苯)、醚溶剂(例如，四氢呋喃、1,4-二氧杂环己烷、环戊基甲基醚、甲基叔丁基醚)、酰胺溶剂(例如，n,n-二甲基甲酰胺、n,n-二甲基乙酰胺)、腈溶剂(例如，乙腈)、酮溶剂(例如，丙酮、甲基乙基酮)、脂肪族烃溶剂(例如己烷、庚烷、环己烷)、酯溶剂(例如，乙酸乙酯)等。优选为腈溶剂、酰胺溶剂或醚溶剂，更优选为乙腈、四氢呋喃或n,n-二甲基乙酰胺。
[0132]
相对于羧酸卤化物而言，溶剂的使用量优选为100质量倍以下，更优选为1质量倍至50质量倍，进一步优选为3质量倍至20质量倍。
[0133]
本工序可以根据需要而使用油浴、冷却浴对温度进行控制，温度没有特别限制，但优选为-40℃至混合物的回流温度，更优选为-20℃至50℃，进一步优选为-10℃至30℃。
[0134]
通过本工序，形成了c末端被活化的n-保护氨基酸或n-保护肽。因此，通过本工序得到的产物是指c末端被活化的n-保护氨基酸或n-保护肽、或者包含它们中任一者的混合物。这样得到的c末端被活化的n-保护氨基酸或n-保护肽可以不经过纯化工序，而以反应液的形式直接与c-保护肽混合，或者以(粗)纯化物的形式分离后与c-保护肽混合。
[0135]
工序(2)
[0136]
本工序为将工序(1)中得到的产物、与c-保护氨基酸或c-保护肽混合的工序。本工序为将工序(1)中得到的c末端被活化的n-保护氨基酸或n-保护肽、与c-保护氨基酸或c-保护肽混合的工序。本发明的一个方式中，是将工序(1)中得到的c末端被活化的n-保护氨基酸或n-保护肽、与式(iv)h-a
2-op2(a2表示来源于氨基酸的基团或来源于肽的基团，p2为c末端保护基。)表示的c-保护氨基酸或c-保护肽混合的工序。
[0137]
式(iv)所表示的c-保护氨基酸中的氨基酸、及c-保护肽的n末端残基中的氨基酸没有特别限制，但优选为α-氨基酸、β-氨基酸、γ-氨基酸或δ-氨基酸，更优选为α-氨基酸或β-氨基酸，进一步优选为α-氨基酸，更进一步优选为苯丙氨酸、甘氨酸、缬氨酸、脯氨酸、亮氨酸或鸟氨酸。需要说明的是，在这些氨基酸中存在2个以上氨基的情况(例如，精氨酸、赖氨酸等)、存在2个以上羧基的情况(例如，谷氨酸、天冬氨酸等)、或存在反应性官能团的情况(例如，半胱氨酸、丝氨酸等)下，不参与肽的形成的氨基酸侧链的反应性官能团可以被保护。
[0138]
式(iv)中，a2为来源于肽的基团的情况下，该基团中包含的氨基酸残基的数目没有特别限制，但优选为2至40，更优选为2至20。
[0139]
式(iv)的p2所表示的c末端保护基只要是在氨基酸或肽的合成中通常使用的保护基，就没有特别限制，例如可举出甲基、乙基、叔丁基、苄基、烯丙基、甲硅烷基等。
[0140]
式(iv)中，p2可以是来源于固相担载体的基团，方式没有特别限制，直接键合或介由连接体而键合。固相担载体没有特别限制，例如可举出硝基纤维素、琼脂糖珠、修饰纤维素纤维、聚丙烯、聚乙二醇、聚苯乙烯或聚丙烯酰胺等合成树脂。作为连接体，没有特别限制，例如可举出2-氯三苯甲基(2-cltrt)、4-(羟基甲基)苯甲酸、3,4-二氢-2h-吡喃-2-基甲醇、4-(羟基甲基)苯氧基乙酸、3-羟基呫吨-9-酮、n-甲氧基-3-氨基丙酸、3-甲氧基-2-硝基吡啶等。
[0141]
本工序中使用的溶剂没有特别限定，作为其例子，可举出含卤素烃溶剂(例如，二氯甲烷、氯仿)、芳香族烃溶剂(例如，甲苯、二甲苯)、醚溶剂(例如，四氢呋喃、1,4-二氧杂环己烷、环戊基甲基醚、甲基叔丁基醚)、酰胺溶剂(例如，n,n-二甲基甲酰胺)、腈溶剂(例如，乙腈)等。优选为腈溶剂、酰胺溶剂或醚溶剂，更优选为乙腈、四氢呋喃或n,n-二甲基乙酰胺。
[0142]
相对于c-保护氨基酸或c-保护肽而言，溶剂的使用量优选为100质量倍以下，更优选为1质量倍至50质量倍，进一步优选为3质量倍至20质量倍。
[0143]
对于得到的混合物而言，根据需要，使用油浴、冷却浴对温度进行控制。混合物的
温度没有特别限制，但优选为-40℃至反应混合物的回流温度，更优选为-20℃至50℃，进一步优选为-10℃至30℃。
[0144]
本工序中使用的c-保护氨基酸或c-保护肽形成了盐的情况下，可以通过添加有机胺而转化为游离体。
[0145]
在将c-保护氨基酸或c-保护肽的盐转化为游离体时使用的有机胺没有特别限制，作为其例子，可举出脂肪族胺(例如，二环己基胺、哌啶、三乙基胺、n,n-二异丙基乙基胺、n-甲基吗啉)、芳香族胺(例如，吡啶、咪唑、n,n-二甲基-4-氨基吡啶)等。优选为脂肪族胺，更优选为三乙基胺或n,n-二异丙基乙基胺。
[0146]
关于在将c-保护氨基酸或c-保护肽的盐转化为游离体时使用的有机胺的使用量，相对于c-保护氨基酸或c-保护肽而言，优选为0.01当量至50当量，更优选为0.1当量至20当量，进一步优选为0.2当量至5当量。
[0147]
另外，本发明的肽的制造方法中，可以针对工序(2)中得到的肽，将下述工序(3)至(5)重复所期望的次数，由此进一步延长肽链。
[0148]
工序(3)，将工序(2)或(5)中得到的肽的n末端的保护基除去。
[0149]
工序(4)，将n-保护氨基酸或n-保护肽与式(i)表示的羧酸卤化物混合。
[0150]
工序(5)，将工序(4)中得到的产物、与工序(3)中得到的产物混合。
[0151]
工序(4)及(5)可以通过与上述工序(1)及(2)同样的操作、或通常的肽合成反应来实施。
[0152]
工序(4)中使用的“n-保护氨基酸或n-保护肽”可以与工序(1)中使用的物质相同或不同。同样地，工序(4)中使用的“式(i)表示的羧酸卤化物”可以与工序(1)中使用的羧酸卤化物相同或不同。
[0153]
本发明的肽制造法中，在不对后续工序的反应造成影响的范围内，可以适当地省略工序(1)至(5)中得到的肽的纯化。
[0154]
工序(3)
[0155]
本工序为从工序(2)或工序(5)中得到的肽中除去n末端保护基的工序。
[0156]
本工序中使用的脱保护条件可根据n末端保护基的种类而适当地选择，例如，在9-芴基甲氧基羰基的情况下，通过利用仲胺或叔胺(例如，吡咯烷、哌啶、吗啉、三乙基胺)进行处理而实施，在叔丁氧基羰基的情况下，通过利用酸(例如，三氟乙酸、盐酸、路易斯酸)进行处理而实施，在苄氧基羰基、烯丙基氧基羰基的情况下，通过在中性条件下、例如金属催化剂的存在下进行氢化而实施。
[0157]
各反应中，在反应基质具有羟基、巯基、氨基、羧基或羰基的情况(特别是在氨基酸或肽的侧链具有官能团的情况)下，可以在这些基团上导入肽化学等中通常使用的那样的保护基，可以通过在反应后根据需要将保护基除去从而得到目标化合物。
[0158]
保护及脱保护可以通过使用通常已知的保护基进行保护
·
脱保护反应(例如，参见有机合成中的保护基第4版(protective groups in organic synthesis,fourth edition)，t.w.greene著，john wiley&sons inc.(2006年)等)来实施。
[0159]
实施例
[0160]
以下示出作为参考例、比较例及实施例的合成例，对本发明进行更详细的说明，但本发明不限于这些实施例。
[0161]
本说明书中，用缩写来标示氨基酸等的情况下，各标示基于由iupac-iub生物化学命名委员会(commission on biochemical nomenclature)规定的缩写或该领域中的惯用缩写。
[0162]
本说明书中，有时将2-(4,4-二甲基戊烷-2-基)-5,7,7-三甲基辛酰基表述为ista，将新戊酰基表述为piv。
[0163]
需要说明的是，合成例中，“(v/v)”是指(体积/体积)，“m”是指mol/l。
[0164]
关于ista-cl、ista-br的安全性评价，使用mettler toled公司制差示扫描量热测定装置，利用下述所示的＜测定条件＞进行测定。
[0165]
＜测定条件＞
[0166]
升温区域：30-300℃
[0167]
升温速度：10℃/min
[0168]
使用的皿：swiss institute公司制au皿m20
[0169]
关于高效液相色谱/质谱，在没有特别记载的情况下，使用waters公司制acquity uplc h-class/qda、waters公司制acquity uplc h-class/sqd2、或shimadzu公司制lc-20ad/triple tof5600中的任一者进行测定。
[0170]
高效液相色谱/质谱的记载中，esi 为电喷雾离子化法的正模式，m h是指质子加成物。
[0171]
以下，在没有特别记载的情况下，各产物及副产物的定量收率通过使用了高效液相色谱的分析＜分析条件1＞来算出。
[0172]
＜分析条件1＞
[0173]
高效液相色谱：shimadzu制lc-20
[0174]
柱：agilent制poroshell 120ec-c18(2.7μm，3.0
×
100mm)
[0175]
柱温箱温度：40℃
[0176]
洗脱液：0.025vol％三氟乙酸，乙腈：0.025vol％三氟乙酸水溶液
[0177]
95：5(0-12分钟)，95：5(12分钟-18分钟)，10：90(18.1分钟-23分钟)(v/v)
[0178]
洗脱液速度：0.7ml/分钟
[0179]
检测波长：210nm
[0180]
在没有特别记载的情况下，基于硅胶柱色谱的纯化使用了山善制hi-flash柱、biotage制snap ultra silica cartridge、merck制硅胶60或fuji silysia chemical ltd.制psq60b中的任一者。
[0181]
在以下的参考例、实施例中，有时收率或定量收率超过100％。这些均是由于测定误差、原料或产物的纯度的影响、或基于其他技术常识的重要因素而超过100％。在以下的实施例中，对于收率超过100％的情况的原因，没有分别提及，但本领域技术人员能够充分理解这些实施例的科学妥当性。
[0182]
在以下的参考例、合成例中，有时示出目标物和副产物的定量收率，这些是反应的结果所产生的。另外，示出定量收率时，在没有关于副产物的收率的特别记载的情况下，是指没有产生副产物。
[0183]
参考例1：ista-cl的基于差示扫描量热测定的安全性评价
[0184]
将ista-cl(16.8mg)装入au皿，进行密封，实施热量测定。未确认到发热峰。由此，
明确了ista-cl没有由自分解导致的发热性。需要说明的是，comu、氯甲酸异丁酯的发热量分别为773.17j/g、467.31j/g(非专利文献4)。
[0185]
参考例2：ista-br的基于差示扫描量热测定的安全性评价
[0186]
将ista-br(14.9mg)装入au皿，进行密封，实施热量测定。未确认到发热峰。由此，明确了ista-br没有由自分解导致的发热性。
[0187]
参考例3：ista-br的合成
[0188]
[化学式5]
[0189][0190]
使2-(4,4-二甲基戊烷-2-基)-5,7,7-三甲基辛酸(4.0g，14.06mmol)、n,n-二甲基甲酰胺(0.031g，0.422mmol)与二甲苯(4.0ml)混合，于0℃加入亚硫酰溴(4.8g，21.15mmol)，升温至室温，进行1小时搅拌。对得到的反应液进行减压蒸馏，以透明液体的形式得到2-(4,4-二甲基戊烷-2-基)-5,7,7-三甲基辛酰溴(4.31g，收率为88％)。
[0191]
参考例4：fmoc-val-phe-oet的合成
[0192]
[化学式6]
[0193][0194]
使fmoc-val-oh(0.177g，0.522mmol)、n,n-二异丙基乙基胺(0.073g，0.566mmol)与乙腈(1.8ml)混合，于0℃加入特戊酰氯(0.058g，0.479mmol)，进行1小时搅拌。向该溶液中加入另行使hcl
·
h-phe-oet(0.1g，0.435mmol)、n,n-二异丙基乙基胺(0.068g，0.522mmol)、乙腈(1.0ml)混合而得到的溶液，进行1小时搅拌。将得到的反应液用四氢呋喃(3.0g)、乙酸乙酯(3.0g)稀释后，加入饱和氯化铵水溶液(1.0g)、水(1.0g)，进行分液。将水层再次用乙酸乙酯(2.0g)进行分液后，得到的有机层的fmoc-val-phe-oet(目标物)的定量收率为79％，piv-phe-oet(副产物)的定量收率为21％。
[0195]
piv-phe-oet mass(esi )m/z；278.0(m h)
[0196]
参考例5：cbz-val-phe-oet的合成
[0197]
[化学式7]
[0198]
[0199]
使cbz-val-oh(0.131g，0.522mmol)、n,n-二异丙基乙基胺(0.073g，0.566mmol)与乙腈(1.3ml)混合，于0℃加入特戊酰氯(0.058g，0.479mmol)，进行1小时搅拌。向该溶液中加入另行使hcl
·
h-phe-oet(0.1g，0.435mmol)、n,n-二异丙基乙基胺(0.068g，0.522mmol)、乙腈(1.0ml)混合而得到的溶液，进行1小时搅拌。将得到的反应液用乙酸乙酯(3.0g)稀释后，加入饱和氯化铵水溶液(1.0g)、水(1.0g)，进行分液。将水层再次用乙酸乙酯(2.0g)进行分液后，得到的有机层的cbz-val-phe-oet(目标物)的定量收率为77％，piv-phe-oet(副产物)的定量收率为22％。
[0200]
参考例6：boc-val-phe-oet的合成
[0201]
[化学式8]
[0202][0203]
使boc-val-oh(0.114g，0.522mmol)、n,n-二异丙基乙基胺(0.073g，0.566mmol)与乙腈(1.1ml)混合，于0℃加入特戊酰氯(0.058g，0.479mmol)，进行1小时搅拌。向该溶液中加入另行使hcl
·
h-phe-oet(0.1g，0.435mmol)、n,n-二异丙基乙基胺(0.068g，0.522mmol)、乙腈(1.0ml)混合而得到的溶液，进行1小时搅拌。将得到的反应液用乙酸乙酯(3.0g)稀释后，加入饱和氯化铵水溶液(1.0g)、水(1.0g)，进行分液。将水层再次用乙酸乙酯(2.0g)进行分液后，得到的有机层的boc-val-phe-oet(目标物)的定量收率为79％，piv-phe-oet(副产物)的定量收率为18％。
[0204]
参考例7：fmoc-trp(boc)-ala-obn的合成
[0205]
[化学式9]
[0206][0207]
使fmoc-trp(boc)-oh(0.293g，0.556mmol)、n,n-二异丙基乙基胺(0.078g，0.602mmol)与乙腈(2.9ml)混合，于0℃加入特戊酰氯(0.061g，0.509mmol)，进行2小时搅拌。向该溶液中加入另行使hcl
·
h-ala-obn(0.1g，0.463mmol)、n,n-二异丙基乙基胺(0.072g，0.556mmol)、乙腈(1.0ml)混合而得到的溶液，进行1小时搅拌。将得到的反应液用乙酸乙酯(3.0g)稀释后，加入饱和氯化铵水溶液(1.0g)、水(1.0g)，进行分液。将水层再次用乙酸乙酯(2.0g)进行分液后，得到的有机层的fmoc-trp(boc)-ala-obn(目标物)的定量收率为84％，piv-ala-obn(副产物)的定量收率为10％。
[0208]
piv-ala-obn mass(esi )m/z；264.9(m h)
[0209]
参考例8：fmoc-val-phe-phe-oet的合成
[0210]
[化学式10]
[0211][0212]
使fmoc-val-oh(0.118g，0.348mmol)、n,n-二异丙基乙基胺(0.048g，0.377mmol)与乙腈(1.2ml)混合，于0℃加入特戊酰氯(0.039g，0.32mmol)，进行1小时搅拌。向该溶液中加入另行使hcl
·
h-phe-phe-oet(0.1g，0.29mmol)、n,n-二异丙基乙基胺(0.045g，0.348mmol)、乙腈(1.0ml)混合而得到的溶液，进行1小时搅拌。将得到的反应液用四氢呋喃(3.0g)、乙酸乙酯(3.0g)稀释后，加入饱和氯化铵水溶液(1.0g)、水(1.0g)，进行分液。将水层再次用乙酸乙酯(3.0g)进行分液后，得到的有机层的fmoc-val-phe-phe-oet(目标物)的定量收率为85％，piv-phe-phe-oet(副产物)为18％。
[0213]
piv-phe-phe-oet mass(esi )m/z；425.2(m h)
[0214]
参考例9：fmoc-trp(boc)-ala-phe-oet的合成
[0215]
[化学式11]
[0216][0217]
使fmoc-trp(boc)-oh(0.209g，0.40mmol)、n,n-二异丙基乙基胺(0.055g，0.43mmol)与乙腈(2.1ml)混合，于0℃加入特戊酰氯(0.044g，0.36mmol)，进行1小时搅拌。向该溶液中加入另行使hcl
·
h-ala-phe-oet(0.1g，0.33mmol)、n,n-二异丙基乙基胺(0.051g，0.40mmol)、乙腈(1.0ml)混合而得到的溶液，进行1小时搅拌。将得到的反应液用四氢呋喃(3.0g)、乙酸乙酯(3.0g)稀释后，加入饱和氯化铵水溶液(1.0g)、水(1.0g)，进行分液。将水层再次用乙酸乙酯(3.0g)进行分液后，得到的有机层的fmoc-trp(boc)-ala-phe-oet(目标物)的定量收率为69％，piv-ala-phe-oet(副产物)的定量收率为26％。
[0218]
piv-ala-phe-oet mass(esi )m/z；349.1(m h)
[0219]
合成例1：fmoc-val-phe-oet的合成
[0220]
[化学式12]
[0221][0222]
使fmoc-val-oh(0.177g，0.522mmol)、n,n-二异丙基乙基胺(0.073g，0.566mmol)与乙腈(1.8ml)混合，于0℃加入2-(4,4-二甲基戊烷-2-基)-5,7,7-三甲基辛酰氯(ista-cl)的50质量％甲苯溶液(0.29g，0.479mmol)，进行2小时搅拌。向该溶液中加入另行使
hcl
·
h-phe-oet(0.1g，0.435mmol)、n,n-二异丙基乙基胺(0.068g，0.522mmol)、乙腈(1.0ml)混合而得到的溶液，进行1小时搅拌。将得到的反应液用四氢呋喃(3.0g)、乙酸乙酯(3.0g)稀释后，加入饱和氯化铵水溶液(1.0g)、水(1.0g)，进行分液。将水层再次用乙酸乙酯(2.0g)进行分液后，得到的有机层的fmoc-val-phe-oet(目标物)的定量收率为95％，ista-phe-oet(副产物)的定量收率为1％。
[0223]
fmoc-val-phe-oet mass(esi )m/z；515.7(m h)
[0224]
ista-phe-oet mass(esi )m/z；461.1(m h)
[0225]
合成例2：fmoc-val-phe-oet的合成
[0226]
[化学式13]
[0227][0228]
使fmoc-val-oh(0.207g，0.610mmol)、n,n-二异丙基乙基胺(0.084g，0.650mmol)与乙腈(1ml)混合，于0℃加入使2-(4,4-二甲基戊烷-2-基)-5,7,7-三甲基辛酰溴(ista-br)(0.197g，0.566)与甲苯(0.197g)混合而得到的溶液，进行1小时搅拌。向该反应液中加入另行使hcl
·
h-phe-oet(0.1g，0.435mmol)、n,n-二异丙基乙基胺(0.068g，0.526mmol)、乙腈(1.0ml)混合而得到的溶液，进行1小时搅拌。将得到的反应液用四氢呋喃(3.0g)、乙酸乙酯(6.0g)稀释后，加入10质量％硫酸氢钾水溶液(1.0g)、水(2.0g)，进行分液。将水层再次用乙酸乙酯(3.0g)进行分液后，得到的有机层的fmoc-val-phe-oet(目标物)的定量收率为94％，ista-phe-oet(副产物)的定量收率为1％。
[0229]
fmoc-val-phe-oet mass(esi )m/z；515.7(m h)
[0230]
ista-phe-oet mass(esi )m/z；461.1(m h)
[0231]
合成例3：cbz-val-phe-oet的合成
[0232]
[化学式14]
[0233][0234]
使cbz-val-oh(0.131g，0.522mmol)、n,n-二异丙基乙基胺(0.073g，0.566mmol)与乙腈(1.3ml)混合，于0℃加入ista-cl的50质量％甲苯溶液(0.29g，0.479mmol)，进行2小时搅拌。向该溶液中加入另行使hcl
·
h-phe-oet(0.1g，0.435mmol)、n,n-二异丙基乙基胺(0.068g，0.522mmol)、乙腈(1.0ml)混合而得到的溶液，进行1小时搅拌。将得到的反应液用乙酸乙酯(3.0g)稀释后，加入饱和氯化铵水溶液(1.0g)、水(1.0g)，进行分液。将水层再次用乙酸乙酯(2.0g)进行分液后，得到的有机层的cbz-val-phe-oet(目标物)的定量收率为
95％，ista-phe-oet(副产物)的定量收率为1％。
[0235]
cbz-val-phe-oet mass(esi )m/z；427.6(m h)
[0236]
合成例4：boc-val-phe-oet的合成
[0237]
[化学式15]
[0238][0239]
使boc-val-oh(0.114g，0.522mmol)、n,n-二异丙基乙基胺(0.073g，0.566mmol)与乙腈(1.1ml)混合，于0℃加入ista-cl的50质量％甲苯溶液(0.29g，0.479mmol)，进行2小时搅拌。向该溶液中加入另行使hcl
·
h-phe-oet(0.1g，0.435mmol)、n,n-二异丙基乙基胺(0.068g，0.522mmol)、乙腈(1.0ml)混合而得到的溶液，进行1小时搅拌。将得到的反应液用乙酸乙酯(3.0g)稀释后，加入饱和氯化铵水溶液(1.0g)、水(1.0g)，进行分液。将水层再次用乙酸乙酯(2.0g)进行分液后，得到的有机层的boc-val-phe-oet(目标物)的定量收率为96％，ista-phe-oet(副产物)的定量收率为1％。
[0240]
boc-val-phe-oet mass(esi )m/z；393.5(m h)
[0241]
合成例5：fmoc-phe-phe-oet的合成
[0242]
[化学式16]
[0243][0244]
使fmoc-phe-oh(0.202g，0.522mmol)、n,n-二异丙基乙基胺(0.073g，0.566mmol)与乙腈(2.0ml)混合，于0℃加入ista-cl的50质量％甲苯溶液(0.29g，0.479mmol)，进行2小时搅拌。向该溶液中加入另行使hcl
·
h-phe-oet(0.1g，0.435mmol)、n,n-二异丙基乙基胺(0.068g，0.522mmol)、乙腈(1.0ml)混合而得到的溶液，进行1小时搅拌。将得到的反应液用四氢呋喃(3.0g)、乙酸乙酯(3.0g)稀释后，加入饱和氯化铵水溶液(1.0g)、水(1.0g)，进行分液。将水层再次用乙酸乙酯(2.0g)进行分液后，得到的有机层的fmoc-phe-phe-oet(目标物)的定量收率为101％。
[0245]
fmoc-phe-phe-oet mass(esi )m/z；563.6(m h)
[0246]
合成例6：cbz-phe-phe-oet的合成
[0247]
[化学式17]
[0248][0249]
使cbz-phe-oh(0.156g，0.522mmol)、n,n-二异丙基乙基胺(0.073g，0.566mmol)与乙腈(1.6ml)混合，于0℃加入ista-cl的50质量％甲苯溶液(0.29g，0.479mmol)，进行2小时搅拌。向该溶液中加入另行使hcl
·
h-phe-oet(0.1g，0.435mmol)、n,n-二异丙基乙基胺(0.068g，0.522mmol)、乙腈(1.0ml)混合而得到的溶液，进行1小时搅拌。将得到的反应液用乙酸乙酯(3.0g)稀释后，加入饱和氯化铵水溶液(1.0g)、水(1.0g)，进行分液。将水层再次用乙酸乙酯(2.0g)进行分液后，得到的有机层的cbz-phe-phe-oet(目标物)的定量收率为99％。
[0250]
cbz-phe-phe-oet mass(esi )m/z；563.6(m h)
[0251]
合成例7：fmoc-phe-mephe-ome的合成
[0252]
[化学式18]
[0253][0254]
使fmoc-phe-oh(0.202g，0.522mmol)、n,n-二异丙基乙基胺(0.073g，0.566mmol)与乙腈(2.0ml)混合，于0℃加入ista-cl的50质量％甲苯溶液(0.29g，0.479mmol)，进行2小时搅拌。向该溶液中加入另行使hcl
·
h-mephe-ome(0.1g，0.435mmol)、n,n-二异丙基乙基胺(0.068g，0.522mmol)、乙腈(1.0ml)混合而得到的溶液，进行1小时搅拌。将得到的反应液用乙酸乙酯(3.0g)稀释后，加入饱和氯化铵水溶液(1.0g)、水(1.0g)，进行分液。将水层再次用乙酸乙酯(2.0g)进行分液后，得到的有机层的fmoc-phe-mephe-ome(目标物)的定量收率为91％。
[0255]
fmoc-phe-mephe-ome mass(esi )m/z；563.7(m h)
[0256]
合成例8：fmoc-leu-gly-obn的合成
[0257]
[化学式19]
[0258]
[0259]
使fmoc-leu-oh(0.210g，0.60mmol)、n,n-二异丙基乙基胺(0.083g，0.65mmol)与乙腈(2.1ml)混合，于0℃加入ista-cl的50质量％甲苯溶液(0.330g，0.55mmol)，进行2小时搅拌。向该溶液中加入另行使hcl
·
h-gly-obn(0.1g，0.50mmol)、n,n-二异丙基乙基胺(0.077g，0.60mmol)、乙腈(1.0ml)混合而得到的溶液，进行1小时搅拌。将得到的反应液用乙酸乙酯(3.0g)稀释后，加入饱和氯化铵水溶液(1.0g)、水(1.0g)，进行分液。将水层再次用乙酸乙酯(2.0g)进行分液后，得到的有机层的fmoc-leu-gly-obn(目标物)的定量收率为98％，piv-gly-obn(副产物)的定量收率为1％。
[0260]
fmoc-leu-gly-obn mass(esi )m/z；501.6(m h)
[0261]
ista-gly-obn mass(esi )m/z；432.7(m h)
[0262]
合成例9：fmoc-trp(boc)-gly-obn的合成
[0263]
[化学式20]
[0264][0265]
使fmoc-trp(boc)-oh(0.313g，0.60mmol)、n,n-二异丙基乙基胺(0.083g，0.65mmol)与乙腈(3.1ml)混合，于0℃加入ista-cl的50质量％甲苯溶液(0.330g，0.55mmol)，进行3小时搅拌。向该溶液中加入另行使hcl
·
h-gly-obn(0.1g，0.50mmol)、n,n-二异丙基乙基胺(0.077g，0.60mmol)、乙腈(1.0ml)混合而得到的溶液，进行1小时搅拌。将得到的反应液用乙酸乙酯(3.0g)稀释后，加入饱和氯化铵水溶液(1.0g)、水(1.0g)，进行分液。将水层再次用乙酸乙酯(2.0g)进行分液后，得到的有机层的fmoc-trp(boc)-gly-obn(目标物)的定量收率为93％，ista-gly-obn(副产物)的定量收率为2％。
[0266]
fmoc-trp-gly-obn mass(esi )m/z；574.3(m h) (以脱boc体的形式检测)
[0267]
合成例10：fmoc-leu-ala-obn的合成
[0268]
[化学式21]
[0269][0270]
使fmoc-leu-oh(0.197g，0.556mmol)、n,n-二异丙基乙基胺(0.078g，0.602mmol)与乙腈(2.0ml)混合，于0℃加入ista-cl的50质量％甲苯溶液(0.309g，0.509mmol)，进行2小时搅拌。向该溶液中加入另行使hcl
·
h-ala-obn(0.1g，0.463mmol)、n,n-二异丙基乙基胺(0.072g，0.556mmol)、乙腈(1.0ml)混合而得到的溶液，进行1小时搅拌。将得到的反应液用乙酸乙酯(3.0g)稀释后，加入饱和氯化铵水溶液(1.0g)、水(1.0g)，进行分液。将水层再次用乙酸乙酯(2.0g)进行分液后，得到的有机层的fmoc-leu-ala-obn(目标物)的定量收率为98％。
[0271]
fmoc-leu-ala-obn mass(esi )m/z；515.7(m h)
[0272]
合成例11：fmoc-trp(boc)-ala-obn的合成
[0273]
[化学式22]
[0274][0275]
使fmoc-trp(boc)-oh(0.293g，0.556mmol)、n,n-二异丙基乙基胺(0.078g，0.602mmol)与乙腈(2.9ml)混合，于0℃加入ista-cl的50质量％甲苯溶液(0.309g，0.509mmol)，进行3小时搅拌。向该溶液中加入另行使hcl
·
h-ala-obn(0.1g，0.463mmol)、n,n-二异丙基乙基胺(0.072g，0.556mmol)、乙腈(1.0ml)混合而得到的溶液，进行1小时搅拌。将得到的反应液用乙酸乙酯(3.0g)稀释后，加入饱和氯化铵水溶液(1.0g)、水(1.0g)，进行分液。将水层再次用乙酸乙酯(2.0g)进行分液后，得到的有机层的fmoc-trp(boc)-ala-obn(目标物)的定量收率为96％，ista-ala-obn(副产物)的定量收率为1％。
[0276]
fmoc-trp(boc)-ala-obn mass(esi )m/z；688.4(m h)
[0277]
ista-ala-obn mass(esi )m/z；446.3(m h)
[0278]
合成例12：fmoc-ser(tbu)-ala-obn的合成
[0279]
[化学式23]
[0280][0281]
使fmoc-ser(tbu)-oh(0.213g，0.556mmol)、n,n-二异丙基乙基胺(0.078g，0.602mmol)与乙腈(2.1ml)混合，于0℃加入ista-cl的50质量％甲苯溶液(0.309g，0.509mmol)，进行2小时搅拌。向该溶液中加入另行使hcl
·
h-ala-obn(0.1g，0.463mmol)、n,n-二异丙基乙基胺(0.072g，0.556mmol)、乙腈(1.0ml)混合而得到的溶液，进行1小时搅拌。将得到的反应液用乙酸乙酯(3.0g)稀释后，加入饱和氯化铵水溶液(1.0g)、水(1.0g)，进行分液。将水层再次用乙酸乙酯(2.0g)进行分液后，得到的有机层的fmoc-ser(tbu)-ala-obn(目标物)的定量收率为97％。
[0282]
fmoc-ser(tbu)-ala-obn mass(esi )m/z；545.3(m h)
[0283]
合成例13：fmoc-cys(trt)-ala-obn的合成
[0284]
[化学式24]
[0285][0286]
使fmoc-cys(trt)-oh(0.326g，0.556mmol)、n,n-二异丙基乙基胺(0.078g，0.602mmol)与乙腈(3.3ml)混合，于0℃加入ista-cl的50质量％甲苯溶液(0.309g，0.509mmol)，进行2小时搅拌。向该溶液中加入另行使hcl
·
h-ala-obn(0.1g，0.463mmol)、n,n-二异丙基乙基胺(0.072g，0.556mmol)、乙腈(1.0ml)混合而得到的溶液，进行1小时搅拌。将得到的反应液用乙酸乙酯(3.0g)稀释后，加入饱和氯化铵水溶液(1.0g)、水(1.0g)，进行分液。将水层再次用乙酸乙酯(2.0g)进行分液后，得到的有机层的fmoc-cys(trt)-ala-obn(目标物)的定量收率为96％。
[0287]
合成例14：fmoc-thr(tbu)-ala-obn的合成
[0288]
[化学式25]
[0289][0290]
使fmoc-thr(tbu)-oh(0.221g，0.556mmol)、n,n-二异丙基乙基胺(0.078g，0.602mmol)与乙腈(2.2ml)混合，于0℃加入ista-cl的50质量％甲苯溶液(0.309g，0.509mmol)，进行2小时搅拌。向该溶液中加入另行使hcl
·
h-ala-obn(0.1g，0.463mmol)、n,n-二异丙基乙基胺(0.072g，0.556mmol)、乙腈(1.0ml)混合而得到的溶液，进行1小时搅拌。将得到的反应液用乙酸乙酯(3.0g)稀释后，加入饱和氯化铵水溶液(1.0g)、水(1.0g)，进行分液。将水层再次用乙酸乙酯(2.0g)进行分液后，得到的有机层的fmoc-thr(tbu)-ala-obn(目标物)的定量收率为92％。
[0291]
fmoc-thr(tbu)-ala-obn mass(esi )m/z；559.4(m h)
[0292]
合成例15：fmoc-asp(tbu)-phe-oet的合成
[0293]
[化学式26]
[0294][0295]
使fmoc-asp(tbu)-oh(0.215g，0.522mmol)、n,n-二异丙基乙基胺(0.073g，0.566mmol)与乙腈(2.2ml)混合，于0℃加入ista-cl的50质量％甲苯溶液(0.29g，
0.479mmol)，进行3小时搅拌。向该溶液中加入另行使hcl
·
h-phe-oet(0.1g，0.435mmol)、n,n-二异丙基乙基胺(0.068g，0.522mmol)、乙腈(1.0ml)混合而得到的溶液，进行1小时搅拌。将得到的反应液用乙酸乙酯(3.0g)稀释后，加入饱和氯化铵水溶液(1.0g)、水(1.0g)，进行分液。将水层再次用乙酸乙酯(2.0g)进行分液后，得到的有机层的fmoc-asp(tbu)-phe-oet(目标物)的定量收率为99％，ista-phe-oet(副产物)的定量收率为1％。
[0296]
fmoc-asp(tbu)-phe-oet mass(esi )m/z；587.7(m h)
[0297]
合成例16：boc-gly-pro-obn的合成
[0298]
[化学式27]
[0299][0300]
使boc-gly-oh(0.086g，0.50mmol)、n,n-二异丙基乙基胺(0.070g，0.538mmol)与乙腈(0.9ml)混合，于0℃加入ista-cl的50质量％甲苯溶液(0.27g，0.456mmol)，进行2小时搅拌。向该溶液中加入另行使hcl
·
h-pro-obn(0.1g，0.414mmol)、n,n-二异丙基乙基胺(0.053g，0.50mmol)、乙腈(1.0ml)混合而得到的溶液，进行1小时搅拌。将得到的反应液用乙酸乙酯(3.0g)稀释后，加入饱和氯化铵水溶液(1.0g)、水(1.0g)，进行分液。将水层再次用乙酸乙酯(2.0g)进行分液后，得到的有机层的boc-gly-pro-obn(目标物)的定量收率为91％。
[0301]
boc-gly-pro-obn mass(esi )m/z；363.1(m h)
[0302]
合成例17：boc-asp(tbu)-leu-ome的合成
[0303]
[化学式28]
[0304][0305]
使boc-asp(tbu)-oh(0.191g，0.66mmol)、n,n-二异丙基乙基胺(0.092g，0.715mmol)与乙腈(2.0ml)混合，于0℃加入ista-cl的50质量％甲苯溶液(0.367g，0.61mmol)，进行2小时搅拌。向该溶液中加入另行使hcl
·
h-leu-ome(0.1g，0.55mmol)、n,n-二异丙基乙基胺(0.085g，0.66mmol)、乙腈(1.0ml)混合而得到的溶液，进行1小时搅拌。将得到的反应液用乙酸乙酯(3.0g)稀释后，加入饱和氯化铵水溶液(1.0g)、水(1.0g)，进行分液。将水层再次用乙酸乙酯(2.0g)进行分液后，得到的有机层的boc-asp(tbu)-leu-ome(目标物)的定量收率为99％。
[0306]
boc-asp(tbu)-leu-ome mass(esi )m/z；417.1(m h)
[0307]
合成例18：boc-tyr(tbu)-orn(boc)-ome的合成
[0308]
[化学式29]
[0309][0310]
使boc-tyr(tbu)-oh(0.142g，0.42mmol)、n,n-二异丙基乙基胺(0.059g，0.46mmol)与乙腈(1.4ml)混合，于0℃加入ista-cl的50质量％甲苯溶液(0.233g，0.39mmol)，进行2小时搅拌。向该溶液中加入另行使hcl
·
h-orn(boc)-ome(0.1g，0.35mmol)、n,n-二异丙基乙基胺(0.054g，0.42mmol)、乙腈(1.0ml)混合而得到的溶液，进行1小时搅拌。将得到的反应液用乙酸乙酯(3.0g)稀释后，加入饱和氯化铵水溶液(1.0g)、水(1.0g)，进行分液。将水层再次用乙酸乙酯(2.0g)进行分液后，得到的有机层的boc-tyr(tbu)-orn(boc)-ome(目标物)的定量收率为99％。
[0311]
boc-tyr(tbu)-orn(boc)-ome mass(esi )m/z；566.4(m h)
[0312]
合成例19：fmoc-val-phe-phe-oet的合成
[0313]
[化学式30]
[0314][0315]
使fmoc-val-oh(0.118g，0.348mmol)、n,n-二异丙基乙基胺(0.048g，0.377mmol)与乙腈(1.2ml)混合，于0℃加入ista-cl的50质量％甲苯溶液(0.193g，0.32mmol)，进行3小时搅拌。向该溶液中加入另行使hcl
·
h-phe-phe-oet(0.1g，0.29mmol)、n,n-二异丙基乙基胺(0.045g，0.348mmol)、乙腈(1.0ml)混合而得到的溶液，进行1小时搅拌。将得到的反应液用四氢呋喃(3.0g)、乙酸乙酯(3.0g)稀释后，加入饱和氯化铵水溶液(1.0g)、水(1.0g)，进行分液。将水层再次用乙酸乙酯(3.0g)进行分液后，得到的有机层的fmoc-val-phe-phe-oet(目标物)的定量收率为96％，ista-phe-phe-oet(副产物)为1％。
[0316]
fmoc-val-phe-phe-oet mass(esi )m/z；662.4(m h)
[0317]
ista-phe-phe-oet mass(esi )m/z；607.4(m h)
[0318]
合成例20：fmoc-asp(tbu)-phe-phe-oet的合成
[0319]
[化学式31]
[0320][0321]
使fmoc-asp(tbu)-oh(0.143g，0.348mmol)、n,n-二异丙基乙基胺(0.048g，0.377mmol)与乙腈(1.4ml)混合，于0℃加入ista-cl的50质量％甲苯溶液(0.193g，0.32mmol)，进行3小时搅拌。向该溶液中加入另行使hcl
·
h-phe-phe-oet(0.1g，0.29mmol)、n,n-二异丙基乙基胺(0.045g，0.348mmol)、乙腈(1.0ml)混合而得到的溶液，进行1小时搅拌。将得到的反应液用四氢呋喃(3.0g)、乙酸乙酯(3.0g)稀释后，加入饱和氯化铵水溶液(1.0g)、水(1.0g)，进行分液。将水层再次用乙酸乙酯(3.0g)进行分液后，得到的有机层的fmoc-asp(tbu)-phe-phe-oet(目标物)的定量收率为94％。
[0322]
fmoc-asp(tbu)-phe-phe-oet mass(esi )m/z；734.4(m h)
[0323]
合成例21：fmoc-trp(boc)-ala-phe-oet的合成
[0324]
[化学式32]
[0325][0326]
使fmoc-trp(boc)-oh(0.209g，0.40mmol)、n,n-二异丙基乙基胺(0.055g，0.43mmol)与乙腈(2.1ml)混合，于0℃加入ista-cl的50质量％甲苯溶液(0.220g，0.36mmol)，进行3小时搅拌。向该溶液中加入另行使hcl
·
h-ala-phe-oet(0.1g，0.33mmol)、n,n-二异丙基乙基胺(0.051g，0.40mmol)、乙腈(1.0ml)混合而得到的溶液，进行1小时搅拌。将得到的反应液用四氢呋喃(3.0g)、乙酸乙酯(3.0g)稀释后，加入饱和氯化铵水溶液(1.0g)、水(1.0g)，进行分液。将水层再次用乙酸乙酯(3.0g)进行分液后，得到的有机层的fmoc-trp(boc)-ala-phe-oet(目标物)的定量收率为97％，ista-ala-phe-oet(副产物)的定量收率为1％。
[0327]
fmoc-trp(boc)-ala-phe-oet mass(esi )m/z；773.4(m h)
[0328]
ista-ala-phe-oet mass(esi )m/z；531.3(m h)
[0329]
合成例22：boc-val-phe-oet的合成
[0330]
[化学式33]
[0331]
[0332]
使boc-val-oh(0.340g，1.56mmol)、n,n-二异丙基乙基胺(0.219g，1.69mmol)与乙腈(3.4ml)混合，于0℃加入ista-cl的50质量％甲苯溶液(0.870g，1.43mmol)，进行3小时搅拌。向该溶液中加入另行使hcl
·
h-phe-oet(0.3g，1.3mmol)、n,n-二异丙基乙基胺(0.203g，1.32mmol)、乙腈(3.0ml)混合而得到的溶液，进行1小时搅拌。将得到的反应液用乙酸乙酯(6.0g)稀释后，加入饱和氯化铵水溶液(3.0g)、水(2.0g)，进行分液。将水层再次用乙酸乙酯(3.0g)进行分液后，对得到的有机层进行浓缩，利用硅胶柱色谱进行纯化，以白色固体的形式得到boc-val-phe-oet(0.49g，收率为95％)。
[0333]
boc-val-phe-oet mass(esi )m/z；393.2(m h)
[0334]
合成例23：cbz-val-val-phe-oet的合成
[0335]
[化学式34]
[0336][0337]
使boc-val-phe-oet(0.20g，0.51mmol)与4m-hcl/1,4-二氧杂环己烷(1.0ml)混合，于25℃进行2小时搅拌。对得到的反应液进行浓缩，将得到的白色固体hcl
·
h-val-phe-oet用于后续工序。
[0338]
使cbz-val-oh(0.154g，0.612mmol)、n,n-二异丙基乙基胺(0.086g，0.663mmol)与乙腈(3.0ml)混合，于0℃加入ista-cl的50质量％甲苯溶液(0.340g，0.561mmol)，进行3小时搅拌。向该溶液中加入另行使hcl
·
h-val-phe-oet(0.51mmol)、n,n-二异丙基乙基胺(0.079g，0.612mmol)、乙腈(2.0ml)混合而得到的溶液，进行1小时搅拌。将得到的反应液用乙腈(4.0g)、乙酸乙酯(8.0g)稀释后，加入饱和氯化铵水溶液(2.0g)、水(2.0g)，进行分液。将水层再次用乙酸乙酯(5.0g)进行分液后，用硫酸钠使其干燥，对得到的有机层进行浓缩，得到白色固体。向得到的白色固体中加入乙酸乙酯(4.0g)，滤取所析出的固体，以白色固体的形式得到cbz-val-val-phe-oet(0.26g，收率为97％)。
[0339]
cbz-val-val-phe-oet mass(esi )m/z；526.7(m h)
[0340]
合成例24：fmoc-val-val-val-phe-oet的合成
[0341]
[化学式35]
[0342][0343]
使cbz-val-val-phe-oet(0.10g，0.19mmol)溶解于2,2,2-三氟乙醇(4ml)，加入10质量％pd-c(20mg)后，在氢气气氛下，于25℃进行1小时搅拌。对反应液进行过滤、浓缩，将得到的h-val-val-phe-oet用于后续工序。
[0344]
使fmoc-val-oh(0.077g，0.228mmol)、n,n-二异丙基乙基胺(0.032g，0.247mmol)与乙腈(0.77ml)混合，于0℃加入ista-cl的50质量％甲苯溶液(0.127g，0.21mmol)，进行3小时搅拌。向该溶液中加入使前面的工序中所得的h-val-val-phe-oet(0.19mmol)、乙腈(1.0ml)、nmp(0.2ml)混合而得到的溶液，进行1小时搅拌。向得到的反应液中加入二异丙基醚(10ml)，滤取所析出的固体，以白色固体的形式得到fmoc-val-val-val-phe-oet(0.14g，收率为103％)。
[0345]
fmoc-val-val-val-phe-oet mass(esi )m/z；713.4(m h)
[0346]
合成例25：fmoc-phe-phe-oh的合成
[0347]
(1)向h-phe-2-cltrt树脂(109.9mg，0.1mmol，merck公司制，树脂为聚苯乙烯)中加入nmp(1.0ml)，进行15分钟搅拌后，将溶剂除去。
[0348]
(2)将fmoc-phe-oh(155.0mg，0.4mmol)、n,n-二异丙基乙基胺(0.07ml，0.4mmol)溶解于nmp(0.8ml)中后，于室温加入ista-cl的50质量％甲苯溶液(0.24ml，0.4mmol)，进行3小时搅拌。
[0349]
(3)向上述(2)中得到的溶液中加入上述(1)中得到的固体，进行1小时搅拌。将反应溶剂除去后，依次利用nmp、甲醇对得到的固体进行清洗后，使其干燥，得到fmoc-phe-phe-2-cltrt树脂。
[0350]
(4)向上述(3)中得到的全部量的fmoc-phe-phe-2-cltrt树脂中加入乙酸/2,2,2-三氟乙醇/二氯甲烷(体积比为1/2/7)(2ml)，进行2小时搅拌。通过过滤将已脱离的树脂除去后，对反应液进行减压浓缩，向残余物中加入二异丙基醚，通过过滤来收集所析出的固体，以白色固体的形式得到fmoc-phe-phe-oh(51.4mg，产率为96.1％)。
[0351]
fmoc-phe-phe-oh mass(esi )m/z；535.3(m h)
[0352]
产业上的可利用性
[0353]
通过本发明，能够提供肽的高效的制造方法。