一种快速筛选高产胞外多糖嗜热链球菌的方法

技术特征：
1.一种快速筛选高产胞外多糖嗜热链球菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)取嗜热链球菌样品稀释涂布于刚果红平板培养，确定菌落颜色，选择red值较低的菌株作为初筛菌株；(2)采用微孔板培养初筛菌株，离心弃去菌体，煮沸，得到对应不同初筛菌株的发酵液；(3)取发酵液与刚果红缓冲液在微孔板中反应，测定其吸光值，选取吸光值较高的初筛菌株作为复筛菌株，即目标菌株，完成高产胞外多糖嗜热链球菌的筛选。2.根据权利要求1所述的一种快速筛选高产胞外多糖嗜热链球菌的方法，其特征在于，步骤(1)中，所用刚果红平板通过在lm17培养基的基础上替换乳糖为等质量的蔗糖，并添加刚果红0.8g/l，琼脂20g/l得到。3.根据权利要求1所述的一种快速筛选高产胞外多糖嗜热链球菌的方法，其特征在于，步骤(1)中，嗜热链球菌样品在刚果红平板上的涂布密度为：30～300个菌落/49cm2。4.根据权利要求1所述的一种快速筛选高产胞外多糖嗜热链球菌的方法，其特征在于，步骤(1)中，确定菌落颜色并得到red值的过程为：对菌落拍照后，采用屏幕颜色拾取工具colors pro 4000识别菌落上若干位置点的red值，取平均值，即得到对应菌落的red值。5.根据权利要求1所述的一种快速筛选高产胞外多糖嗜热链球菌的方法，其特征在于，步骤(2)中，微孔板内采用lm17培养基替换乳糖为等质量的蔗糖培养初筛菌株。6.根据权利要求1所述的一种快速筛选高产胞外多糖嗜热链球菌的方法，其特征在于，步骤(2)中，煮沸时间控制为8～12min；步骤(2)中，所用微孔板为96深孔板。7.根据权利要求1所述的一种快速筛选高产胞外多糖嗜热链球菌的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述刚果红缓冲液的浓度为0.2～0.4mg/ml，所用缓冲液为ph＝7.2的pbs缓冲液。8.根据权利要求1所述的一种快速筛选高产胞外多糖嗜热链球菌的方法，其特征在于，步骤(3)中，发酵液与刚果红缓冲液的体积比为1:1。9.根据权利要求1所述的一种快速筛选高产胞外多糖嗜热链球菌的方法，其特征在于，步骤(3)中，反应时间为15～25min。10.根据权利要求1所述的一种快速筛选高产胞外多糖嗜热链球菌的方法，其特征在于，步骤(3)中，吸光值在480nm处测定。

技术总结
本发明涉及一种快速筛选高产胞外多糖嗜热链球菌的方法，包括以下步骤：(1)取嗜热链球菌样品稀释涂布于刚果红平板培养，确定菌落颜色，选择Red值较低的菌株作为初筛菌株；(2)采用微孔板培养初筛菌株，离心弃去菌体，煮沸，得到对应不同初筛菌株的发酵液；(3)取发酵液与刚果红缓冲液在微孔板中反应，测定其吸光值，选取吸光值较高的初筛菌株作为复筛菌株，即目标菌株，完成高产胞外多糖嗜热链球菌的筛选。与现有技术相比，本发明建立完整的高通量筛选流程，包含平板初筛和微孔板复筛，对筛选体系进行优化，在48h完成菌株培养与菌株筛选等。在48h完成菌株培养与菌株筛选等。在48h完成菌株培养与菌株筛选等。


技术研发人员：艾连中 熊智强 夏永军 王光强 宋馨 张汇
受保护的技术使用者：上海理工大学
技术研发日：2021.12.27
技术公布日：2022/5/17