禽流感病毒三聚体亚单位疫苗及其应用

技术特征：
1.流感病毒抗原，其中：(1)所述流感病毒抗原从5’端到3’端的方向依次包括：流感病毒a/california/07/2009 h1n1 ha蛋白三聚体形成区lah k403-n474，其氨基酸序列为seq id no：1；以及流感病毒h7n9 ha1区，所述流感病毒h7n9 ha1区与a/shanghai/2/2013h7n9 ha1区d18-s340的氨基酸序列同源性大于90％，例如大于90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或等于100％，且存在差异的位点在流感病毒h7n9 ha1区的loop区，所述流感病毒h7n9 ha1区例如选自：a/shanghai/2/2013h7n9 ha1区d18-s340，其氨基酸序列为seq id no：2，或a/anhui/1/2013h7n9 ha1区d18-s340，其氨基酸序列为seq id no：3，或a/guangdong/17sf003/2016h7n9 ha1区d18-s340，其氨基酸序列为seq id no：4，或a/hong_kong/125/2017h7n9 ha1区d18-s340，其氨基酸序列为seq id no：5；或(2)所述流感病毒抗原从5’端到3’端的方向依次包括：流感病毒a/california/07/2009h1n1 ha蛋白三聚体形成区lah k403-n474，其氨基酸序列为seq id no：1，以及流感病毒h5n1 ha1区，所述流感病毒h5n1 ha1区与a/indonesia/5/2005h5n1 ha1区d18-e341的氨基酸序列同源性大于90％，例如大于90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或等于100％，且存在差异的位点在流感病毒h5n1 ha1区的loop区，所述流感病毒h5n1 ha1区例如选自：a/indonesia/5/2005h5n1 ha1区d18-e341，其氨基酸序列为seq id no：6，或a/hong kong/156/97h5n1 ha1区d18-e341，其氨基酸序列为seq id no：7；优选地，其中所述流感病毒抗原是三聚体蛋白。2.如权利要求1所述的流感病毒抗原，其进一步包括在5’端的分泌信号肽(例如氨基酸序列为seq id no：8的流感病毒a/california/07/2009h1n1 ha蛋白信号肽，氨基酸序列为seq id no：9的gp67信号肽，或其他流感病毒h7n9 ha1或流感病毒h5n1 ha1的信号肽)以及在3’端的纯化标签(例如，6
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his标签)和终止密码子(例如：taa、tag或tga)。3.如权利要求1或2所述的流感病毒抗原，其包含如(1)或(2)所示氨基酸序列：(1)如seq id no：10、seq id no：11、seq id no：12、seq id no：13、seq id no：14或seq id no：15所示的流感病毒抗原的氨基酸序列；(2)(1)中的氨基酸序列经取代、缺失或添加一个氨基酸或更多个氨基酸且不改变(1)的抗原性的由(1)衍生的多肽或其类似物，且自身能够形成三聚体。4.分离的多核苷酸，其编码权利要求1-3中任一项所述的流感病毒抗原，优选地所述分离的多核苷酸包含如seq id no：19、seq id no：20、seq id no：21、seq id no：22、seq id no：23或seq id no：24所示的序列。5.重组载体或者表达盒，其包含权利要求4所述的分离的多核苷酸。6.转基因细胞系或者重组菌，其包含权利要求5所述的重组载体或者表达盒。7.如权利要求6所述的转基因细胞系，其源自昆虫细胞，例如昆虫细胞sf9或hi5。8.如权利要求1-3中任一项所述的流感病毒抗原在制备抗流感病毒药物，例如疫苗的用途。
9.如权利要求8所述的用途，其中将所述流感病毒抗原与佐剂合用。10.试剂盒，其含有如权利要求1-3中任一项所述的流感病毒抗原、如权利要求4所述的分离的多核苷酸，或者如权利要求5所述重组载体或者表达盒，如权利要求6所述的转基因细胞系或者重组菌，优选地，所述试剂盒进一步包含佐剂。

技术总结
本发明公开了基于三聚化HA的亚单位禽流感病毒疫苗。本发明使用昆虫细胞体外表达流感病毒H1N1 HA蛋白三聚体形成区域LAH在N端、H7N9 HA1或H5N1 HA1蛋白在C端的融合三聚体蛋白H7N9 HA1c-trimer、H5N1 HA1c-trimer，且与各自HA1单体蛋白相比，三聚体蛋白的免疫效果更好，能够使小鼠产生更高滴度的针对流感病毒HA1的特异性抗体。本发明的三聚体形式HA1克服了HA1单体免疫原性不足的缺点，提高了小鼠产生的针对流感病毒HA1的特异性抗体水平；这种设计可以用于提高流感病毒HA1免疫原性，使其作为一种更为有效地疫苗使用。作为一种更为有效地疫苗使用。


技术研发人员：严景华 史瑞 黄庆瑞
受保护的技术使用者：中国科学院微生物研究所
技术研发日：2021.12.30
技术公布日：2022/4/29