取代的稠合杂芳双环化合物作为激酶抑制剂及其应用的制作方法

1.本发明属于药物化学领域。本发明特别涉及取代的稠合杂芳双环化合物，及其作为治疗上有效的激酶抑制剂和抗癌药物的应用。


背景技术：

2.共济失调毛细血管扩张突变基因rad3相关激酶(atr)是对dna损伤的细胞应答的蛋白激酶。atr激活后可通过多种信号调控细胞生命过程，包括细胞周期阻断、抑制复制起点、启动复制叉以及修复dna双链等(enriquez-rios v等，2017)。atr激酶与atm(运动失调性毛细血管扩张症突变)激酶和许多其他蛋白质一起起作用以调节对dna损伤的细胞应答，通常称作dna损伤应答(ddr)。当细胞通过ddr识别到dna损伤后，会立即激活dna修复程序，激活细胞周期检验点，阻碍细胞周期的正常进行，从而为dna修复提供时间。没有ddr，则细胞对内源性细胞损伤或用于治疗癌症的化疗和放疗造成的dna损伤更为敏感，且更易于死亡。
3.健康细胞可以依赖于用于dna修复的不同蛋白质包括ddr中的atm、atr激酶等。在正常情况中，这些蛋白质可以通过调节下游的调节因子等来进行dna的修复。然而许多癌细胞在dna修复通路中存在缺陷，显示出其对包括atr在内的剩余的完好dna修复蛋白的极大依赖性。atr是对受损dna复制应答的ddr的关键成员，它对于维持基因组的稳定性和完整性，促使细胞存活至关重要。当细胞内dna损伤产生时，atr被募集至dna损伤部位，多种蛋白继而参与调控atr的激活，atr激活后调控一些重要的细胞过程。许多癌细胞缺乏关键肿瘤抑制基因，这可以使得癌细胞比正常细胞更加依赖atr通路调控细胞dna损伤修复促进细胞存活，使atr成为有希望的癌症治疗靶点。
4.atr抑制剂可以单独使用或与dna损伤剂联合用药用于癌症治疗；因为它们切断了dna复制机制，而该复制机制对于细胞存活在许多癌细胞中比在健康正常细胞中更为重要。实际上，已经证实atr抑制剂作为单一活性剂在癌细胞中有效，且可作为放疗和化疗的有效增敏剂。同时，atr抑制剂还可以与其它跟ddr有关的靶向药联用，例如parp抑制剂。
5.已有多种atr激酶抑制剂公开，例如，wo2011154737公开了作为atr激酶抑制剂的吗啉代嘧啶化合物；wo2016020320公开了作为atr激酶抑制剂的2-(吗啉-4-基)-1,7-萘啶化合物。wo2018153968公开了一种atr激酶抑制剂用于治疗过度增殖性疾病的疗法。wo2020049017公开了作为atr激酶抑制剂的5-吗啉-4-基-吡唑并[4,3-b]吡啶衍生物。wo2020087170公开了作为atr激酶抑制剂的吗啉代五元杂环并吡啶化合物。


技术实现要素：

[0006]
本发明提供结构如式i、ii、iiia、iiib和iv所示的取代的稠合杂芳双环化合物，这类化合物可作为激酶抑制剂。
[0007]
本发明还提供了包含有效量的式i、ii、iiia、iiib或iv化合物的药用组合物，用来治疗癌症。
[0008]
在一具体实施例中，所述药用组合物还可含有一种或多种可药用载体或稀释剂，用来治疗癌症。
[0009]
在一具体实施例中，所述药用组合物还可含有至少一种已知的抗癌药物或所述抗癌药物的可药用盐，用来治疗癌症。
[0010]
本发明也涉及到结构式i、ii、iiia、iiib和iv的新颖化合物的制备方法。
具体实施方式
[0011]
应理解的是，本文所述的各实施方案的特征可任意组合，形成本文的技术方案；本文对各基团的定义适用于本文所述任一实施方案，例如，本文对烷基的取代基的定义适用于本文所述任一实施方案，除非该实施方案已清楚定义了烷基的取代基。
[0012]
具体来说，本发明提供下式i所示的化合物、其立体异构体、互变异构体、n-氧化物、水合物、同位素取代的衍生物、溶剂化物或盐，或其混合物，或其前药：或其前药：其中，a1和a
4-a6各自独立为cr5或n；a2和a3各自独立为c或n；优选地，a2和a3中一个为c时，另一个为n或c；更优选地，a2和a3中一个为n时，另一个为c；r1为任选取代的芳基、任选取代的杂环基、任选取代的环烷基、任选取代的杂芳基、其中，*表示所述基团与化合物剩余部分的连接位置；r2为卤素、c
1-c6烷基、c
1-c6烷氧基、c
3-c6环烷基、c
2-c6烯基、c
2-c6炔基、碳环基、杂环基、芳基、杂芳基、
–
nr8r9、
–
(co)r8、
–
(co)or8、
–
(co)nr8r9、
–
(so)r6、
–
(so2)r6、
–
sr6、
–
(so2)nr8r9、
–
nr8(so2)r6、
–
((so)＝nr7)r
10
、
–
n＝(so)r6r
10
、
–
sir7r
10r11
、
–
(po)(or8)2、
–
(po)(or8)r
10
或
–
(po)(r
10
)2，其中，所述c
1-c6烷基、c
1-c6烷氧基、c
3-c6环烷基、c
2-c6烯基、c
2-c6炔基、碳环基、杂环基、芳基和杂芳基各自可被任选取代；其中，在
–
n＝(so)r6r
10
基团中的r6和r
10
一起形成5元至8元杂环烷基；r3和r4各自独立为氢或c
1-c6烷基；r5为氢、卤素、c
1-c6烷基、c
1-c6烷氧基、c
2-c6烯基、c
2-c6炔基、氨基、硝基、氰基、酰氨基、酰氧基、羟基、巯基、烷硫基、叠氮基或羧基；其中，所述c
1-c6烷基、c
2-c6烷氧基、c
2-c6烯基、c
2-c6炔基、氨基、酰氨基、酰氧基、羟基、巯基、烷硫基和羧基各自可被任选取代；r6为任选取代的烷基或任选取代的烷基芳基(优选是苯基)；r7为氢、任选取代的烷基、
–
(co)or8或
–
(co)nr8r9；
r8和r9各自独立为氢、任选取代的c
1-c
10
烷基、任选取代的环烷基、任选取代的芳基或任选取代的杂芳基；或者r8和r9与所连接的n和c一起形成任选取代的4元至7元环氨基团，所述环氨基团任选含有一个或多个另外的选自o、n和s的杂原子；r
10
为c
1-c4烷基，或者在
–
n＝(so)r6r
10
基团的情况下，r6和r
10
一起与所连接的s形成5元至8元杂环烷基；和r
11
为氢或c
1-c4烷基。
[0013]
在一个或多个实施方案中，式i化合物中，a1为n或ch。优选地，a1为n。
[0014]
在式i化合物的前述一个或多个实施方案中，a1、a2、a3、a4、a5和a6至少有2个或3个为n。
[0015]
在式i化合物的前述一个或多个实施方案中，a2和a3中一个为n，另一个为c。优选地，在一些实施方案中，式i化合物中，a2为n，a3为c。
[0016]
在式i化合物的前述一个或多个实施方案中，a5为n或ch。优选地，a5为n。
[0017]
在式i化合物的前述一个或多个实施方案中，至少a1、a2和a5为n。
[0018]
在式i化合物的前述一个或多个实施方案中，r5为氢。
[0019]
在式i化合物的前述一个或多个实施方案中，含有a2和a3的五元并六元杂芳基选自以下基团：优选为：
更优选为：其中，*1、*2和*3分别表示所述基团与式i化合的吗啉基、r1和r2的连接位置。
[0020]
在式i化合物的前述一个或多个实施方案中，r2为c
3-c6环烷基、碳环基、杂环基、芳基、杂芳基、
–
nr8r9、
–
nr8(so2)r6或
–
n＝(so)r6r
10
，其中所述c
3-c6环烷基、碳环基、杂环基、芳基和杂芳基各自可被任选取代；其中，r8和r9各自独立为氢、c
1-c6烷基、c
3-c6环烷基、或任选取代的苯基；r
10
为c
1-c4烷基，或者在
–
n＝(so)r6r
10
基团中r6和r
10
与所连接的s一起形成5元至8元杂环烷基；优选地，r2为任选取代的c
3-c6环烷基、任选取代的芳基、任选取代的杂环基或任选取代的杂芳基；更优选地，杂芳基是含有至少一个氮原子的5或6元杂芳基，优选含有两个氮原子的5元杂芳基。优选地，r2为任选取代的环烷基、任选取代的苯基、任选取代的吡唑基、任选取代的吡咯基、任选取代的咪唑基、任选取代的三唑基、任选取代的呋喃基、任选取代的吗啉基、任选取代的二氢吡喃基、任选取代的四氢吡喃基、任选取代的吡啶基、任选取代的嘧啶基或任选取代的吡咯并吡啶基。优选地，r2上的取代基选自任选取代的c
1-c6烷基、氰基、羟基、羧基、氨基、卤素、任选取代的烷亚磺酰基和任选取代的烷磺酰基。优选地，c
1-c6烷基任选地被一个或多个选自卤素的取代基取代。r2上的取代基的数量可以是1-3个。
[0021]
在式i化合物的前述一个或多个实施方案中，r3为氢；r4为c
1-c4烷基，如甲基。优选地，r3为r构型。
[0022]
在式i化合物的前述一个或多个实施方案中，r1为任选取代的烷磺酰基、任选取代的芳基、任选取代的杂环基、任选取代的环烷基或任选取代的杂芳基。优选地，杂芳基是含有至少一个氮原子的5或6元杂芳基，优选含有两个氮原子的5元杂芳基。优选地，烷磺酰基、
杂环基、环烷基、芳基和杂芳基的取代基可选自c
1-c4烷基、卤素、羟基、c
1-c4烷氧基和氨基。优选地，r1上的取代基的数量可以为1-3个。更优选地，r1为c
1-c4烷基取代的磺酰基、任选被1或2个选自c
1-c4烷基、卤素、羟基、c
1-c4烷氧基和氨基的取代基取代的吡唑基、吡咯基或咪唑基。在一些实施例中，r1是无取代的吡唑基、吡咯基或咪唑基。
[0023]
在式i化合物的前述一个或多个实施方案中，式i化合物的同位素取代衍生物是一个或多个氢原子被一个或多个d原子取代的化合物。
[0024]
本发明优选化合物的其中一组表示为式ii化合物或其立体异构体、互变异构体、n-氧化物、水合物、同位素取代衍生物、溶剂化物或盐，或其混合物，或其前药：其中，a
1-a6、r1和r4如在式i中所述；cy为c
3-c6环烷基、碳环基、杂环基、芳基、杂芳基、
–
nr8r9、
–
nr8(so2)r6或
–
n＝(so)r6r
10
，其中，所述c
3-c6环烷基、碳环基、杂环基、芳基和杂芳基各自可被任选取代；其中，r8和r9各自独立为氢、任选取代的c
1-c
10
烷基、任选取代的环烷基、任选取代的芳基、或任选取代的杂芳基；或者r8和r9一起为任选取代的4元至7元环氨基团，所述环氨基团任选含有一个另外的选自o、n和s的杂原子；r
10
为c
1-c4烷基，或者在
–
n＝(so)r6r
10
基团中r6和r
10
一起形成5元至8元杂环烷基。
[0025]
在式ii化合物的前述一个或多个实施方案中，a1为n或ch。优选地，a1为n。
[0026]
在式ii化合物的前述一个或多个实施方案中，a2和a3中一个为n，另一个为c。优选地，在一些实施方案中，式ii化合物中，a2为n，a3为c。
[0027]
在式ii化合物的前述一个或多个实施方案中，a5为n或ch。优选地，a5为n。
[0028]
在式ii化合物的前述一个或多个实施方案中，r5为氢。
[0029]
在式ii化合物的前述一个或多个实施方案中，含有a2和a3的五元并六元杂芳基选自以下基团：
优选为：更优选为：其中，*1、*2和*3分别表示所述基团与式ii化合物的吗啉基、r1和r2的连接位置。
[0030]
在式ii化合物的前述一个或多个实施方案中，cy为c
3-c6环烷基、碳环基、杂环基、芳基、杂芳基、
–
nr8r9、
–
nr8(so2)r6或
–
n＝(so)r6r
10
，其中，所述c
3-c6环烷基、碳环基、杂环
基、芳基和杂芳基各自可被任选取代；其中，r8和r9各自独立为氢、可被任选取代的c
1-c6烷基、可被任选取代的c
3-c6环烷基或可被任选取代的苯基；r
10
为c
1-c4烷基，或者在
–
n＝(so)r6r
10
基团中的r6和r
10
与所连接的s一起形成5元至8元杂环烷基。优选地，cy为任选取代的c
3-c6环烷基、任选取代的芳基、任选取代的杂环基或任选取代的杂芳基。优选地，杂芳基是含有至少一个氮原子的5或6元杂芳基，优选含有两个氮原子的5元杂芳基。更优选地，cy为任选取代的环丙基、任选取代的苯基、任选取代的吡唑基、任选取代的吡咯基、任选取代的咪唑基、任选取代的三唑基、任选取代的呋喃基、任选取代的吡啶基、任选取代的嘧啶基、任选取代的吗啉基、任选取代的二氢吡喃基，任选取代的四氢吡喃基或任选取代的吡咯并吡啶基。优选地，cy上的取代基选自c
1-c6烷基、氰基、羟基、羧基、氨基、卤素、烷亚磺酰基和烷磺酰基。取代基的数量可以是1-3个。在一些实施方案中，cy为任选被1个或多个(优选1、2或3个)c
1-c6烷基取代的吡唑基；且优选地该吡唑基的一个或两个环n原子被取代；优选地，c
1-c6烷基可进一步被一个或多个(如1-5个)卤素取代，。在一些实施方案中，cy是任选被一个或两个选自无取代的c
1-c4烷基和被1-3个卤素取代的c
1-c4烷基的取代基取代的吡唑基。
[0031]
在式ii化合物的前述一个或多个实施方案中，r4为c
1-c4烷基，如甲基。优选地，r4为r构型。
[0032]
在式ii化合物的前述一个或多个实施方案中，r1为任选取代的烷磺酰基、任选取代的芳基、任选取代的杂环基、任选取代的环烷基或任选取代的杂芳基。优选地，杂芳基是含有至少一个氮原子的5或6元杂芳基，优选含有两个氮原子的5元杂芳基。优选地，烷磺酰基、芳基、杂环基、环烷基和杂芳基的取代基可选自c
1-c4烷基、卤素、羟基、c
1-c4烷氧基和氨基。优选地，取代基的数量可以为1-3个。更优选地，r1为c
1-c4烷基取代的磺酰基或任选被1或2个选自c
1-c4烷基、卤素、羟基、c
1-c4烷氧基和氨基取代的吡唑基、吡咯基或咪唑基。在一些实施方案中，r1为无取代的吡唑基、无取代的吡咯基或无取代的咪唑基。
[0033]
本发明优选化合物的其中一组表示为式iiia和iiib化合物或其立体异构体、互变异构体、n-氧化物、水合物、同位素取代衍生物、溶剂化物或盐，或其混合物，或其前药：其中，a1、a4、a5、a6、r1、r2和r4如在式i或式ii中所述。
[0034]
在式iiia和iiib化合物的前述一个或多个实施方案中，a1为n或ch。优选地，a1为n。
[0035]
在式iiia和iiib化合物的前述一个或多个实施方案中，a4为n或ch。优选地，a4为ch。
[0036]
在式iiia和iiib化合物的前述一个或多个实施方案中，a5为n或ch。优选地，a5为n。
[0037]
在式iiia和iiib化合物的前述一个或多个实施方案中，a6为n或ch。优选地，a6为ch。
[0038]
在式iiia和iiib化合物的前述一个或多个实施方案中，含有a1、a4、a5和a6的五元
并六元杂芳基选自以下基团：优选为：更优选为：其中，*1、*2和*3分别表示所述基团与式iiia和iiib化合物的吗啉基、r1和r2的连接位置。
[0039]
在式iiia和iiib化合物的前述一个或多个实施方案中，r1为任选取代的烷磺酰基、任选取代的芳基、任选取代的杂环基、任选取代的环烷基或任选取代的杂芳基。优选地，杂芳基是含有至少一个氮原子的5或6元杂芳基，优选含有两个氮原子的5元杂芳基。优选
地，杂环基、环烷基、芳基和杂芳基的取代基可选自c
1-c4烷基、卤素、羟基、c
1-c4烷氧基和氨基。优选地，取代基的数量可以为1-3个。更优选地，r1为c
1-c4烷基取代的磺酰基或任选被1或2个选自c
1-c4烷基、卤素、羟基、c
1-c4烷氧基和氨基取代的吡唑基、吡咯基和咪唑基。在一些实施方案中，r1为无取代的吡唑基、无取代的吡咯基或无取代的咪唑基。
[0040]
在式iiia和iiib化合物的前述一个或多个实施方案中，r2为c
3-c6环烷基、碳环基、杂环基、芳基、杂芳基、
–
nr8r9、
–
nr8(so2)r6或
–
n＝(so)r6r
10
，其中，所述c
3-c6环烷基、碳环基、杂环基、芳基和杂芳基各自可被任选取代；其中，r8和r9各自独立为氢、可被任选取代的c
1-c6烷基、可被任选取代的c
3-c6环烷基或可被任选取代的苯基；r
10
为c
1-c4烷基，或者在
–
n＝(so)r6r
10
基团中r6和r
10
与所连接的s一起形成5元至8元杂环烷基。优选地，杂芳基是含有至少一个氮原子的5或6元杂芳基，优选含有两个氮原子的5元杂芳基。优选地，r2为任选取代的c
3-c6环烷基、任选取代的芳基、任选取代的杂环基或任选取代的杂芳基。更优选地，r2为任选取代的环丙基、任选取代的苯基、任选取代的吡唑基、任选取代的吡咯基、任选取代的咪唑基、任选取代的三唑基、任选取代的呋喃基、任选取代的吡啶基、任选取代的嘧啶基、任选取代的吗啉基、任选取代的二氢吡喃基，任选取代的四氢吡喃基或任选取代的吡咯并吡啶基。优选地，r2上的取代基选自c
1-c6烷基、氰基、羟基、羧基、氨基、卤素、任选取代的烷亚磺酰基和任选取代的烷磺酰基。取代基的数量可以是1-3个。在一些实施方案中，r2为任选被c
1-c6烷基取代的吡唑基，优选地该吡唑基的一个或两个环n原子被取代。更优选地，c
1-c6烷基可进一步被一个或多个(如1-5个)卤素取代。在一些实施方案中，r2是任选被一个或两个选自无取代的c
1-c4烷基和被1-3个卤素取代的c
1-c4烷基取代基取代的吡唑基。
[0041]
在式iiia和iiib化合物的前述一个或多个实施方案中，r4为c
1-c4烷基，如甲基。
[0042]
本发明优选化合物的其中一组表示为式iv化合物或其立体异构体、互变异构体、n-氧化物、水合物、同位素取代衍生物、溶剂化物或盐，或其混合物，或其前药：其中，a4、a5、a6、r1、r2和r4如在式i、ii、iiia或iiib中所述；
[0043]
在式iv化合物的前述一个或多个实施方案中，a4为n或ch。优选地，a4为ch。
[0044]
在式iv化合物的前述一个或多个实施方案中，a5为n或ch。优选地，a5为n。
[0045]
在式iv化合物的前述一个或多个实施方案中，a6为n或ch。优选地，a6为ch。
[0046]
在式iv化合物的前述一个或多个实施方案中，含有a4、a5和a6的五元并六元杂芳基选自以下基团：
优选为：其中，*1、*2和*3分别表示所述基团与式iv化合物的吗啉基、r1和r2的连接位置。
[0047]
在式iv化合物的前述一个或多个实施方案中，r1为任选取代的烷磺酰基、任选取代的芳基、任选取代的杂环基、任选取代的环烷基或任选取代的杂芳基。优选地，杂芳基是含有至少一个氮原子的5或6元杂芳基，优选含有两个氮原子的5元杂芳基。优选地，烷磺酰基、杂环基、芳基和杂芳基的取代基可选自c
1-c4烷基、卤素、羟基、c
1-c4烷氧基和氨基。优选地，取代基的数量可以为1-3个。更优选地，r1为c
1-c4烷基取代的磺酰基或任选被1或2个选自c
1-c4烷基、卤素、羟基、c
1-c4烷氧基和氨基取代的吡唑基、吡咯基或咪唑基。在一些实施方案中，r1为无取代吡唑基、无取代吡咯基或无取代咪唑基。
[0048]
在式iv化合物的前述一个或多个实施方案中，r2为c
3-c6环烷基、碳环基、杂环基、芳基、杂芳基、
–
nr8r9、
–
nr8(so2)r6或
–
n＝(so)r6r
10
，其中，所述c
3-c6环烷基、碳环基、杂环基、芳基和杂芳基各自可被任选取代；其中，r8和r9各自独立为氢、任选取代的c
1-c6烷基、任选取代的c
3-c6环烷基或任选取代的苯基；r
10
为c
1-c4烷基，或者在
–
n＝(so)r6r
10
基团中的r6和r
10
与所连接的s一起形成5元至8元杂环烷基。优选地，杂芳基是含有至少一个氮原子的5或6元杂芳基，优选含有两个氮原子的5元杂芳基。优选地，r2为任选取代的c
3-c6环烷基、任选取代的芳基、任选取代的杂环基或任选取代的杂环基。更优选地，r2为任选取代的环丙基、任选取代的苯基、任选取代的吡唑基、任选取代的吡咯基、任选取代的咪唑基、任选取代的三唑基、任选取代的呋喃基、任选取代的吡啶基、任选取代的嘧啶基、任选取代的吗啉基、任选取代的二氢吡喃基，任选取代的四氢吡喃基或任选取代的吡咯并吡啶基。优选地，r2上的取代基选自任选取代的c
1-c6烷基、氰基、羟基、羧基、氨基、卤素、任选取代的烷亚磺酰基和任选取代的烷磺酰基。取代基的数量可以是1-3个。在一些实施方案中，r2为任选被c
1-c6烷基取代的吡唑基，优选地该吡唑基的一个或两个环n原子被取代。更优选地，c
1-c6烷基可进一步被一个或多个(如1-5个)卤素取代。在一些实施方案中，r2是任选被一个或两个选自无取代c
1-c4烷基和被1-3个卤素取代的c
1-c4烷基的取代基取代的吡唑基。
[0049]
在式iv化合物的前述一个或多个实施方案中，r4为c
1-c4烷基，如甲基。
[0050]
在式i、ii、iii和iv化合物的前述一个或多个实施方案中，五元并六元杂芳基选自以下基团：
优选为：r1选自烷磺酰基，被1-3个选自c
1-c4烷基、卤素、羟基、c
1-c4烷氧基和氨基的取代基取代的杂芳基(优选吡唑基、吡咯基和咪唑基)，被1-3个选自c
1-c4烷基、卤素、羟基、c
1-c4烷氧基和氨基的取代基取代的芳基，被1-3个选自c
1-c4烷基、卤素、羟基、c
1-c4烷氧基和氨基的取代基取代的杂环基和被1-3个选自c
1-c4烷基、卤素、羟基、c
1-c4烷氧基和氨基的取代基取代的环烷基；优选地，r1为被1-3个选自c
1-c4烷基、卤素、羟基、c
1-c4烷氧基和氨基的取代基取代的杂芳基(优选吡唑基、吡咯基和咪唑基)或烷磺酰基。r2或cy选自任选取代的c
3-c6环烷基、任选取代的芳基、任选取代的杂环基或任选取代的杂芳基；更优选地，r2或cy选自任选取代的环丙基、任选取代的苯基、任选取代的吡唑基、任选取代的吡咯基、任选取代的咪唑基、任选取代的三唑基、任选取代的呋喃基、任选取代的吗啉基、任选取代的二氢吡喃基、任选取代的四氢吡喃基、任选取代的吡啶基、任选取代的嘧啶基或任选取代的吡咯并吡啶基；优选地，r2或cy的取代基选自c
1-c6烷基、氰基、烷亚磺酰基、卤素、羟基、羧基、氨基和烷磺酰基，优选取代基为1-3个；更优选地，r2或cy为任选被无取代的c
1-c6烷基或被1-3个卤素取代的c
1-c6烷基取代的吡唑基，优选吡唑基的一个或两个环n原子被取代。r3或为h；和r4为c
1-c4烷基，优选甲基。
[0051]
在式i化合物的前述一个或多个实施方案中，a1为n，a2为n，a3为c，a4为cr5，a5为cr5，a6为n；r1是任选被1-2个c
1-c4烷基取代的杂芳基(优选吡唑基、吡咯基和咪唑基)，例如任选被c
1-c3烷基取代的吡唑基；r2是任选被一个或两个c
1-c4烷基取代的杂芳基(优选吡唑基、吡啶基、吡咯并吡啶基和咪唑基)，任选地被1-2个选自c
1-c4烷基磺酰基和卤素取代的芳基(优选苯基)，或任选被一个或两个c
1-c4烷基取代的杂环基(优选吗啉基)，如2,6-二(c
1-c4烷基)-吗啉基；r3和r4其中一个为h，另一个为c
1-c4烷基；每个r5各自为h或c
1-c4烷基，优选
为h。
[0052]
在式i化合物的前述一个或多个实施方案中，a1为n，a2为n，a3为c，a4为cr5，a5为n，a6为cr5；r1是任选被1-2个c
1-c4烷基取代的杂芳基(优选吡唑基、吡咯基和咪唑基，更优选吡唑基)，例如任选被c
1-c3烷基取代的吡唑基；r2是任选被一个或两个选自卤素、c
1-c4烷磺酰基、c
1-c4烷亚磺酰基、任选被1-3个卤素取代的c
1-c4烷基的取代基取代的杂芳基(优选吡唑基、吡咯基、吡啶基、吡咯并吡啶基、嘧啶基、三唑基和咪唑基)；任选被1-2个选自c
1-c4烷基、氰基、c
1-c4烷基磺酰基和卤素的取代基取代的芳基(优选苯基)；或任选被一个或两个c
1-c4烷基取代的杂环基(优选吗啉基、二氢吡喃基和四氢吡喃基)；r3和r4各自独立选自h和c
1-c4烷基；每个r5各自为h或c
1-c4烷基，优选为h。
[0053]
在式i化合物的前述一个或多个实施方案中，a1为n，a2为n，a3为c，a4为cr5，a5为n，a6为cr5；r1是任选被c
1-c3烷基取代的吡唑基；r2是任选被一个或两个选自无取代的c
1-c4烷基和被1-3个卤素取代的c
1-c4烷基取代基取代的吡唑基；r3和r4各自独立选自h和c
1-c4烷基；每个r5各自为h或c
1-c4烷基，优选为h。在更优选的实施例中，r2是任选被一个或两个选自无取代的c
1-c4烷基和被1-3个卤素取代的c
1-c4烷基的取代基取代的吡唑基，吡唑基的氮原子至多一个被取代基取代，优选吡唑基的一个氮原子被取代。在更优或可选的实施例中，r3和r4其中一个为h，另一个为甲基。
[0054]
在式i化合物的前述一个或多个实施方案中，a1和a
4-a6各自独立为n或cr5；a2和a3各自独立为c或n；r1是任选被c
1-c3烷基取代的吡唑基；r2是任选被一个或两个选自无取代的c
1-c4烷基和被1-3个卤素取代的c
1-c4烷基的取代基取代的吡唑基；r3和r4各自独立选自h和c
1-c4烷基；每个r5各自独立为h或c
1-c4烷基，优选为h。
[0055]
在前述一个或多个实施方案中，式i优选的化合物实施例包括但不限于：(r)-3-甲基-4-(8-(1-甲基-1h-吡唑-5-基)-3-(1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)吗啉(实施例1)；(r)-3-甲基-4-(8-(1-甲基-1h-吡唑-5-基)-3-(1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)吗啉(实施例2)；(r)-3-甲基-4-(8-(1-乙基-1h-吡唑-5-基)-3-(1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)吗啉(实施例3)；(r)-3-甲基-4-(8-(1-异丙基-1h-吡唑-5-基)-3-(1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)吗啉(实施例4)；(r)-3-甲基-4-(8-(1-甲基-1h-咪唑-5-基)-3-(1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)吗啉(实施例5)；(r)-3-甲基-4-(8-(6-甲基吡啶-3-基)-3-(1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)吗啉(实施例6)；(r)-3-甲基-4-(8-(4-(甲磺酰基)苯基)-3-(1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)吗啉(实施例7)；(r)-3-甲基-4-(8-(2-氟苯基)-3-(1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)吗啉(实施例8)；(r)-3-甲基-4-(8-吗啉基-3-(1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)吗啉(实施例9)；
(2s,6r)-2,6-二甲基-4-(6-((r)-3-甲基吗啉基)-3-(1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-8-基)吗啉(实施例10)；4-(4-(1-甲基-1h-吡唑-5-基)-7-(1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,5-b]哒嗪-2-基)吗啉(实施例11)；4-(8-(1-甲基-1h-吡唑-5-基)-3-(1h-吡唑-5-基)-[1,2,4]三氮唑并[4,3-b]哒嗪-6-基)吗啉(实施例12)；(r)-3-甲基-4-(4-(1-甲基-1h-吡唑-5-基)-7-(1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,5-b]哒嗪-2-基)吗啉(实施例13)；(r)-3-甲基-4-(3-(1h-吡唑-5-基)-8-(1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)吗啉(实施例14)；(r)-3-甲基-4-(8-(1-甲基-1h-吡唑-5-基)-3-(1h-吡唑-5-基)-[1,2,4]三氮唑并[4,3-b]哒嗪-6-基)吗啉(实施例15)；(r)-3-甲基-4-(7-(1-甲基-1h-吡唑-5-基)-3-(1h-吡唑-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)吗啉(实施例16)；(r)-3-甲基-4-(5-(甲磺酰基)-1-(1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)吡咯并[1,2-c]嘧啶-3-基)吗啉(实施例17)；(r)-3-甲基-4-(1-(甲磺酰基)-5-(1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)咪唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)吗啉(实施例18)；(r)-3-甲基-4-(6-(甲磺酰基)-1-(1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)吡咯并[1,2-a]吡嗪-3-基)吗啉(实施例19)；(r)-3-甲基-4-(3-(甲磺酰基)-8-(1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-[1,2,4]三氮唑并[4,3-a]吡嗪-6-基)吗啉(实施例20)；(r)-3-甲基-4-(4-(1-甲基-1h-吡唑-5-基)-7-(1h-吡咯-3-基)咪唑并[1,5-b]哒嗪-2-基)吗啉(实施例21)；(r)-3-甲基-4-(4-(1-甲基-1h-吡唑-5-基)-7-(1h-吡咯-2-基)咪唑并[1,5-b]哒嗪-2-基)吗啉(实施例22)；(r)-4-(7-(1h-咪唑-4-基)-4-(1-甲基-1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,5-b]哒嗪-2-基)-3-甲基吗啉(实施例23)；(r)-3-甲基-4-(4-(6-甲基吡啶-3-基)-7-(1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,5-b]哒嗪-2-基)吗啉(实施例24)；(r)-4-(4-(2-氟苯基)-7-(1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,5-b]哒嗪-2-基)-3-甲基吗啉(实施例25)；(r)-4-(4-(1-异丙基-1h-吡唑-5-基)-7-(1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,5-b]哒嗪-2-基)-3-甲基吗啉(实施例26)；(r)-4-(4,7-二(1h-吡唑-5-基)咪唑[1,5-b]哒嗪-2-基)-3-甲基吗啉(实施例27)；(r)-3-甲基-4-(4-(1-甲基-1h-吡唑-5-基)-8-(1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,5-a]嘧啶-2-基)吗啉(实施例28)；(r)-3-甲基-4-(4-(1-甲基-1h-吡唑-5-基)-7-(1h-吡唑-3-基)咪唑并[5,1-f]
[1,2,4]三嗪-2-基)吗啉(实施例29)；(r)-3-甲基-4-(8-(1-甲基-1h-吡唑-5-基)-3-(1h-吡唑-5-基)-[1,2,4]三唑并[3,4-f][1,2,4]三嗪-6-基)吗啉(实施例30)；(r)-3-甲基-4-(4-(1-甲基-1h-吡唑-5-基)-8-(1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-2-基)吗啉(实施例31)；(r)-4-(4-环丙基-7-(1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,5-b]哒嗪-2-基)-3-甲基吗啉(实施例32)；(s)-3-甲基-4-(4-(1-甲基-1h-吡唑-5-基)-7-(1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,5-b]哒嗪-2-基)吗啉(实施例33)；(3r,5r)-3,5-二甲基-4-(4-(1-甲基-1h-吡唑-5-基)-7-(1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,5-b]哒嗪-2-基)吗啉(实施例34)；(r)-3-甲基-4-(4-(4-(甲基磺酰基)苯基)-7-(1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,5-b]哒嗪-2-基)吗啉(实施例35)；(r)-4-(4-(2,5-二甲基-1h-吡咯-1-基)-7-(1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,5-b]哒嗪-2-基)-3-甲基吗啉(实施例36)；(r)-4-(4-(1-乙基-1h-吡唑-5-基)-7-(1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,5-b]哒嗪-2-基)-3-甲基吗啉(实施例37)；(r)-3-甲基-4-(4-(3-甲基-1h-吡唑-4-基)-7-(1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,5-b]哒嗪-2-基)吗啉(实施例38)；(r)-3-甲基-4-(7-(3-甲基-1h-吡唑-5-基)-4-(6-甲基吡啶-3-基)咪唑并[1,5-b]哒嗪-2-基)吗啉(实施例39)；(r)-4-(7-(1h-吡唑-5-基)-4-(o-甲苯基)咪唑并[1,5-b]哒嗪-2-基)-3-甲基吗啉(实施例40)；(r)-4-(4-(1,4-二甲基-1h-吡唑-5-基)-7-(1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,5-b]哒嗪-2-基)-3-甲基吗啉(实施例41)；(r)-3-甲基-4-(4-(2-甲基吡啶-3-基)-7-(1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,5-b]哒嗪-2-基)吗啉(实施例42)；(r)-4-(4-(3-氟吡啶-4-基)-7-(1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,5-b]哒嗪-2-基)-3-甲基吗啉(实施例43)；(r)-3-甲基-4-(4-(4-甲基-6-(甲基磺酰基)吡啶-3-基)-7-(1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,5-b]哒嗪-2-基)吗啉(实施例44)；(r)-3-甲基-4-(4-(4-甲基嘧啶-5-基)-7-(1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,5-b]哒嗪-2-基)吗啉(实施例45)；(r)-3-甲基-4-(4-吗啉基-7-(1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,5-b]哒嗪-2-基)吗啉(实施例46)；(r)-4-(7-(1h-吡唑-5-基)-4-(2-(三氟甲基)吡啶-3-基)咪唑并[1,5-b]哒嗪-2-基)-3-甲基吗啉(实施例47)；(r)-3-甲基-4-(4-(2-甲基-6-(甲基磺酰基)吡啶-3-基)-7-(1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,5-b]哒嗪-2-基)吗啉(实施例48)；
(r)-3-甲基-4-(4-(2-甲基-4-(甲基磺酰基)苯基)-7-(1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,5-b]哒嗪-2-基)吗啉(实施例49)；(3r)-3-甲基-4-(4-(2-甲基-6-(甲基亚磺酰基)吡啶-3-基)-7-(1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,5-b]哒嗪-2-基)吗啉(实施例50)；(r)-3-甲基-4-(4-(3-甲基吡啶-4-基)-7-(1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,5-b]哒嗪-2-基)吗啉(实施例51)；(r)-3-(2-(3-甲基吗啉基)-7-(1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,5-b]哒嗪-4-基)苯甲腈(实施例52)；(r)-4-(4-(3,6-二氢-2h-吡喃-4-基)-7-(1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,5-b]哒嗪-2-基)-3-甲基吗啉(实施例53)；(r)-4-(7-(1h-吡唑-5-基)-4-(四氢-2h-吡喃-4-基)咪唑并[1,5-b]哒嗪-2-基)-3-甲基吗啉(实施例54)；(r)-4-(7-(1h-吡唑-5-基)-4-(1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)咪唑并[1,5-b]哒嗪-2-基)-3-甲基吗啉(实施例55)；(r)-4-(4-(1,5-二甲基-1h-吡唑-4-基)-7-(1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,5-b]哒嗪-2-基)-3-甲基吗啉(实施例56)；(r)-3-甲基-4-(4-(1-甲基-1h-咪唑-5-基)-7-(1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,5-b]哒嗪-2-基)吗啉(实施例57)；(r)-4-(4-(1,3-二甲基-1h-吡唑-4-基)-7-(1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,5-b]哒嗪-2-基)-3-甲基吗啉(实施例58)；(r)-4-(4-(1,5-二甲基-1h-1,2,3-三氮唑-4-基)-7-(1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,5-b]哒嗪-2-基)-3-甲基吗啉(实施例59)；(r)-4-(4-(1-(2-氟乙基)-1h-吡唑-5-基)-7-(1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,5-b]哒嗪-2-基)-3-甲基吗啉(实施例60)；(r)-4-(4-(1-(2-氟乙基)-1h-吡唑-3-基)-7-(1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,5-b]哒嗪-2-基)-3-甲基吗啉(实施例61)；(r)-4-(4-(1-(二氟甲基)-1h-吡唑-5-基)-7-(1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,5-b]哒嗪-2-基)-3-甲基吗啉(实施例62)；(r)-4-(4-(1-(二氟甲基)-1h-吡唑-3-基)-7-(1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,5-b]哒嗪-2-基)-3-甲基吗啉(实施例63)；或其立体异构体、互变异构体、n-氧化物、水合物、溶剂化物或盐，或其混合物。
[0056]
本文中，a
1-a6的选择应使得所形成的环满足键价理论。
[0057]
本文所用“氢(h)”包括其同位素d和t。
[0058]
本文所用“烷基”是指烷基本身或是直链或支链高达十个碳原子的基团。有用的烷基包括直链或支链c
1-c
10
烷基，优选c
1-c6烷基。在某些实施方案中，烷基为c
1-c4烷基。典型的c
1-c
10
烷基包括可被任选取代的甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、仲丁基、叔丁基、3-戊基、己基和辛基。
[0059]
本文所用“烯基”是指直链或支链含有2-10个碳原子，除非碳链长度被另外限制，其中至少是链中的两个碳原子之间含有一个双键的基团；优选c
2-c6烯基。典型的链烯基包
括乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、2-甲基-1-丙烯基、1-丁烯基和2-丁烯基。
[0060]
本文所用“炔基”是指直链或支链含有2-10个碳原子，除非碳链长度被另外限制，其中至少是链中的两个碳原子之间含有一个三键的基团；优选c
2-c6炔基。典型的炔基包括乙炔基、1-丙炔基、1-甲基-2-丙炔基、2-丙炔基、1-丁炔基和2-丁炔基。
[0061]
有用的烷氧基包括被上述c
1-c
10
烷基、优选c
1-c6烷基或c
1-c4烷基取代的氧基，例如甲氧基、乙氧基等。烷氧基中的烷基可被任选取代。烷氧基的取代基包括但不限于卤素、吗啉基、氨基，所述氨基包括烷氨基和二烷氨基以及羧基(包括其酯基)。
[0062]
有用的烷硫基包括被上述c
1-c
10
烷基、优选c
1-c6烷基取代的硫基，烷硫基中的烷基可被任选取代。同时还包括这类烷硫基的亚砜和砜。
[0063]
有用的氨基和可被任意取代的氨基包括
–
nh2、
–
nhr8和
–
nr8r9，其中r8和r9各自独立为氢、可被任选取代的c
1-c
10
烷基、可被任选取代的环烷基、可被任选取代的芳基、或可被任选取代的杂芳基；或者r8和r9一起与它们所连接的n形成可被任选取代的4元至7元环氨基团，所述环氨基团任选含有一个或多个(如2、3个)另外的选自o、n和s的杂原子。
[0064]
本文所用“芳基”是指芳基本身或是作为其它基团的一部分，含有6到14个碳原子的单环、双环或三环芳族基团。芳基可被一个或多个本文所述的取代基取代。
[0065]
有用的芳基包括c
6-c
14
芳基，优选的是c
6-c
10
芳基。典型的c
6-c
14
芳基包括苯基、萘基、菲基、蒽基、茚基、薁基、联苯、亚联苯基和茀基。
[0066]
本文所用“碳环”包括环烷基和部分饱和的碳环基团。有用的环烷基是c
3-c8环烷基。典型的环烷基包括环丙级、环丁基、环戊基、环己基和环庚基。碳环基团可被一个或多个本文所述的取代基取代。
[0067]
有用的部分饱和的碳环基团包括环烯基，如c
3-c8环烯基，例如环戊烯基、环庚烯基和环辛烯基。
[0068]
有用的卤素或卤素基团包括氟、氯、溴和碘。
[0069]
有用的酰基氨基(酰氨基)是连接在氨基氮上的任何c
1-c6酰基(烷酰基)，例如乙酰氨基、乙酰氨基、丙酰氨基、丁酰氨基、戊酰氨基和已酰氨基，以及芳基取代的c
1-c6酰基氨基，例如苯甲酰氨基。有用的酰基包括c
1-c6酰基，如乙酰基。酰基可任选被选自芳基和卤素的基团取代，其中芳基可被任选取代。当被卤素取代时，卤素取代基的数量可在1-5个的范围内。被取代的酰基的例子包括氯乙酰基和五氟苯甲酰基等。
[0070]
有用的酰氧基是连接在氧(
–o–
)上的任何c
1-c6酰基(烷酰基)，例如甲酰氧基、乙酰氧基、丙酰氧基、丁酰氧基、戊酰氧基和己酰氧基。
[0071]
本文所用杂环(杂环基)是指饱和或部分饱和的3-7元单环，或7-10元双环体系，它是由碳原子和从o、n、s中任选1-4个杂原子组成的，其中杂原子氮和硫都可以被任意氧化，氮也可以任意季铵化，并且包括双环体系中上述定义的任意杂环与苯环的融合。如果产生的化合物是稳定的话，那么杂环的碳原子或氮原子可被取代。杂环基可被一个或多个本文所述的取代基取代。
[0072]
有用的饱和或部分饱和杂环基团包括四氢呋喃基、吡喃基、哌啶基、哌嗪基、1,4-二氮杂环庚烷基、吡咯烷基、咪唑烷基、咪唑啉基、二氢吲哚基、异二氢吲哚基、奎宁环基、吗啉基、异色满基、色满基、吡唑烷基、吡唑啉基、四氢异喹啉基、tetronoyl和tetramoyl，这些基团可被本文所述的一个或多个取代基取代。
[0073]
本文所用“杂芳环”是指含有5
–
14个环原子，并且有6个，10个或14个π电子在环体系上共用。而且所含环原子是碳原子和从氧、氮、硫中任选的1
–
3个杂原子。杂芳基可被一个或多个本文所述的取代基取代。
[0074]
有用的杂芳基包括噻吩基(苯硫基)、苯并[d]异噻唑-3-基、苯并[b]噻吩基、萘并[2,3-b]噻吩基、噻蒽基、呋喃基、吡喃基、异苯并呋喃基、色烯基、夹氧蒽基、噻吩恶基(phenoxanthiinyl)、吡咯基、咪唑基、吡唑基、吡啶基(包括但不限制于2-吡啶基、3-吡啶基和4-吡啶基)、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、吲嗪基、异吲哚基、3h-吲哚基、吲哚基、吲唑基、嘌呤基、4h-喹嗪基、异喹啉基、喹啉基、酞嗪基、萘啶基、喹唑啉基、噌啉基、蝶啶基、咔唑基、β-咔啉基、菲啶基、吖啶基、萘嵌间二氮(杂)苯基、菲咯啉基、吩嗪基、异噻唑基、吩噻嗪基、异恶唑基、呋咱基、吩恶嗪基、1,4-二氢喹喔啉-2,3-二酮、7-氨基异香豆素、吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、四氢化五员[c]吡唑-3-基、苯并异恶唑基如1,2-苯并异恶唑-3-基、苯并咪唑基、2-羟吲哚基、噻重氮基、2-氧代苯并咪唑基、咪唑并哒嗪基、咪唑并吡啶基、三氮唑并哒嗪基、吡唑并嘧啶基、吡咯并嘧啶基、吡咯并吡啶基、吡咯并吡嗪基或三氮唑并吡嗪基。当杂芳基在环中含有氮原子时，这样的氮原子可以呈n-氧化物形式，例如吡啶基n-氧化物、吡嗪基n-氧化物和嘧啶基n-氧化物。
[0075]
本文中，除非另有说明，当被取代时，本文任一实施方案所述的c
1-c
10
烷基、环烷基、杂环烷基、烷氧基、杂环烷氧基、烯基、杂环烯基、炔基、氨基、酰氨基、酰氧基、羧基、羟基、巯基、烷硫基、磺酰基、亚磺酰基、硅烷基、膦羧基、膦酰基、碳环基、杂环基、芳基或杂芳基可被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自以下基团的取代基取代：卤素、羟基、羧基、氨基、硝基、氰基、c
1-c6酰氨基、c
1-c6酰氧基、c
1-c6烷氧基、芳氧基、烷硫基、c
1-c6烷基、c
1-c6酰基、c
6-c
10
芳基、c
3-c8环烷基、c
2-c6链烯基、c
2-c6炔基、杂环基或杂芳基、亚甲基二氧基、脲基、巯基、叠氮基、羰基、烷磺酰基、氨磺酰基、二烷基氨磺酰基和烷基亚磺酰基等。其中取代基本身也可被任选取代。更优选地的取代基包括但不限于卤素、羟基、羧基、氨基、c
1-c6酰氨基、c
1-c6酰氧基、c
1-c6烷氧基、c
1-c6烷基、c
1-c6酰基和烷磺酰基。
[0076]
应理解的是，本文各实施方案中，当取代基为杂环基、芳基或杂芳基时，该杂环基、芳基或杂芳基取代基的数量通常为1个。
[0077]
一些本发明化合物可能作为立体异构体，包括旋光异构体存在。本发明包括所有立体异构体和这样的立体异构体的外消旋混合物，以及可以根据本领域技术人员众所周知的方法分离出来的单独的对映体。
[0078]
可药用盐的例子包括无机和有机酸盐，例如盐酸盐、氢溴酸盐、磷酸盐、硫酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、酒石酸盐、马来酸盐、富马酸盐、扁桃酸盐和草酸盐；以及与碱例如钠羟基、三(羟基甲基)氨基甲烷(tris，氨丁三醇)和n-甲基葡糖胺形成的无机和有机碱盐。
[0079]
本发明化合物的前药的实施例包括含有羧酸的化合物的简单酯(例如依据本领域已知方法通过与c
1-c4醇缩合而获得的酯)；含有羟基的化合物的酯(例如依据本领域已知方法通过与c
1-c4羧酸、c
3-c6二酸或其酸酐例如琥珀酸酐和富马酸酐缩合而获得的酯)；含有氨基的化合物的亚胺(例如依据本领域已知方法通过与c
1-c4醛或酮缩合而获得的亚胺)；含有氨基的化合物的氨基甲酸酯，例如leu等人(j.med.chem.42:3623-3628(1999))和greenwald等人(j.med.chem.42:3657-3667(1999))描述的那些酯；含有醇的化合物的醛缩醇或酮缩醇(例如依据本领域已知方法通过与氯甲基甲基醚或氯甲基乙基醚缩合而获得的
b]哒嗪。6-氯-8-(2-甲基吡唑-3-基)-3-(1-四氢吡喃-2-基吡唑-3-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪和吗啉在环丁砜中氮气保护下加热反应，得到产物4-(8-(2-甲基吡唑-3-基)-3-(1-四氢吡喃-2-基吡唑-3-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-6-基)吗啉。4-(8-(2-甲基吡唑-3-基)-3-(1-四氢吡喃-2-基吡唑-3-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-6-基)吗啉与hcl/meoh在甲醇中室温反应，得到目标化合物4-(8-(2-甲基吡唑-3-基)-3-(1h-吡唑-5-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-6-基)吗啉。反应方案6
[0091]
其它相关化合物可用类似方法制得。例如，用(r)-3-甲基吗啉替代吗啉可制得目标化合物(r)-3-甲基-4-(8-(1-甲基-1h-吡唑-5-基)-3-(1h-吡唑-5-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-6-基)吗啉。
[0092]
本发明化合物可如反应方案7中的反应实施例所示制得。5,7-二氯吡唑并[1,5-a]嘧啶、pd(dppf)cl2和k3po4在二氧六环中加热反应，得到产物5-氯-7-(1-甲基-1h-吡唑-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶。5-氯-7-(1-甲基-1h-吡唑-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶、叔丁醇钠、1,1'-联萘-2,2'-双二苯膦(binap)和三(二亚苄基丙酮)二钯在甲苯中加热反应，得到产物(r)-3-甲基-4-(7-(1-甲基-1h-吡唑-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)吗啉。(r)-3-甲基-4-(7-(1-甲基-1h-吡唑-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)吗啉、n-碘代琥珀酰亚胺(nis)和三氟乙酸(tfa)在chcl3中室温反应，得到产物(r)-4-(3-碘-7-(1-甲基-1h-吡唑-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)-3-甲基吗啉。(r)-4-(3-碘-7-(1-甲基-1h-吡唑-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)-3-甲基吗啉、1-(四氢-2h-吡喃-2-基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-1h-吡唑、三水合磷酸钾和pd(dppf)cl2在混合溶剂二氧六环和水中加热反应，得到产物(3r)-3-甲基-4-(7-(1-甲基-1h-吡唑-5-基)-3-(1-(四氢-2h-吡喃-2-基)-1h-吡唑-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)吗啉。(3r)-3-甲基-4-(7-(1-甲基-1h-吡唑-5-基)-3-(1-(四氢-2h-吡喃-2-基)-1h-吡唑-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)吗啉和氯化氢二氧六环溶液在水中室温反应，得到目标化合物(r)-3-甲基-4-(7-(1-甲基-1h-吡唑-5-基)-3-(1h-吡唑-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)吗啉。反应方案7
[0093]
本发明的一个重要方面是发现了式i化合物(包括本文所述的式ii、iiia、iiib和iv化合物)或其立体异构体、互变异构体、n-氧化物、水合物、同位素取代衍生物、溶剂化物或其可药用盐、或其混合物、或其前药是激酶抑制剂，特别是atr激酶抑制剂。因此，式i化合物(包括本文所述的式ii、iiia、iiib和iv化合物)可用于治疗atr激酶介导的相关疾病，例如癌症；或用于制备治疗atr激酶介导的相关疾病如癌症的药物。
[0094]
本发明还包括治疗或预防激酶介导的疾病，特别是atr激酶介导的相关疾病的方法，所述方法包括给予需要的对象(尤其是哺乳动物，更具体是人)有效量的式i化合物(包括本文所述的式ii、iiia、iiib和iv化合物)或其立体异构体、互变异构体、n-氧化物、水合物、溶剂化物或盐，或其混合物，或其前药或含有有效量的式i化合物(包括本文所述的式ii、iiia、iiib和iv化合物)或其立体异构体、互变异构体、n-氧化物、水合物、溶剂化物或盐，或其混合物，或其前药的药物组合物。本发明中，所述激酶介导的疾病包括癌症，尤其是atr激酶介导的癌症。可由本发明的方法或药物组合物治疗或预防的atr激酶介导的疾病包括但不限于肝癌、黑素瘤、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、急性淋巴白血病、慢性淋巴白血病、多发性骨髓瘤、成神经细胞瘤、乳腺癌、卵巢癌、肺癌、维尔姆斯瘤、子宫颈癌、睾丸癌、软组织肉瘤、原发性巨球蛋白血症、膀胱癌、慢性粒细胞白血病、原发性脑癌、恶性黑素瘤、小细胞肺癌、胃癌、结肠癌、恶性胰腺胰岛瘤、恶性类癌性癌症、绒毛膜癌、蕈樣肉芽腫、头颈癌、骨原性肉瘤、胰腺癌、急性粒细胞白血病、毛细胞白血病、横纹肌肉瘤、卡波西肉瘤、泌尿生殖系统肿瘤病、甲状腺癌、食管癌、恶性高钙血症、子宫颈增生症、肾细胞癌、子宫内膜癌、真性红细胞增多症、特发性血小板增多症、肾上腺皮质癌、皮肤癌和前列腺癌。
[0095]
本发明也包括用于治疗或预防因过度或异常细胞增殖而引起的其他疾病，包括增殖或过度增殖性疾病，例如骨髓增殖性疾病，尤其是atr激酶介导的过度或异常细胞增殖而引起的增殖或过度增殖性疾病。因此，本发明也包括使用式i化合物(包括本文所述的式ii、iiia、iiib和iv化合物)或其立体异构体、互变异构体、n-氧化物、水合物、溶剂化物或盐，或其混合物，或其前药制备因过度或异常细胞增殖而引起的其他疾病，尤其是atr激酶介导的过度或异常细胞增殖而引起的增殖或过度增殖性疾病。
[0096]
在实施本发明治疗方法时，给有一种或多种这些症状的病人施用有效量的药物制剂。所述药物制剂含有有效治疗浓度的式i、ii、iiia、iiib和iv化合物，或其立体异构体、互变异构体、n-氧化物、水合物、溶剂化物或盐，或其混合物，或其前药，被配制成用于口服、静脉注射、局部或外用给药的形式，用于治疗癌症和其他疾病。给药量是有效地改善或消除一
个或多个病症的药量。对于特定疾病的治疗，有效量是足以改善或以某些方式减轻与疾病有关的症状的药量。这样的药量可作为单一剂量施用，或者可依据有效的治疗方案给药。给药量也许可治愈疾病，但是给药通常是为了改善疾病的症状。一般需要反复给药来实现所需的症状改善。
[0097]
在另一个实施方案中提供了一种药用组合物，其中含有atr激酶抑制剂的式i、ii、iiia、iiib和iv化合物或其立体异构体、互变异构体、n-氧化物、水合物、溶剂化物或盐，或其混合物，或其前药与可药用载体。
[0098]
本发明另一个实施方案涉及能有效地治疗癌症的药用组合物，其中包含激酶抑制剂的式i、ii、iiia、iiib和iv化合物，或其立体异构体、互变异构体、n-氧化物、水合物、溶剂化物或盐，或其混合物，或其前药，与至少一种已知的抗癌药物或抗癌药物的可药用盐联合共用。特别是和其他与dna损伤和修复机理有关的抗癌药物的联合共用，包括parp抑制剂奥拉帕尼、niraparib、rucaparib、talazoparib和senaparib；hdac抑制剂伏立诺他、罗咪地辛、帕比司他和贝利司他；等等。以及和其他与细胞分裂检测点有关的抗癌药物的联合共用，包括chk1/2抑制剂，cdk4/6抑制剂如帕博西尼，atm抑制剂、wee1抑制刘、dna-pk抑制剂，等等。其他可用于抗癌联合治疗的已知抗癌药物包括但不限于烷化剂例如白消安、马法兰、苯丁酸氮芥、环磷酰胺、异环磷酰胺、替莫唑胺、苯达莫司汀、顺铂、丝裂霉素c、博莱霉素和卡铂；拓扑异构酶i抑制剂例如喜树碱、伊立替康和托泊替康；拓扑异构酶ⅱ抑制剂例如阿霉素、表阿霉素、阿克拉霉素、米托蒽醌、甲基羟基玫瑰树碱和铭托泊普；rna/dna抗代谢物例如5-氮杂胞苷、吉西他滨、5-氟尿嘧啶和甲氨蝶呤；dna抗代谢物例如5-氟-2
′‑
去氧尿苷、氟达拉滨，奈拉滨、阿糖胞苷、普拉曲沙、培美曲塞、羟基脲和硫代鸟嘌呤；抗有丝分裂剂例如秋水仙碱、长春碱、长春新碱、长春瑞滨、紫杉醇，伊沙匹隆、卡巴他赛和多西他赛；抗体例如单抗，帕尼单抗、耐措妥珠单抗、纳武单抗、派姆单抗、雷莫芦单抗、贝伐珠单抗、帕妥珠单抗、曲妥珠单抗、西妥昔单抗、奥滨尤妥珠单抗、奥法木单抗、利妥昔单抗、阿仑单抗、替伊莫单抗、托西莫单抗、本妥昔单抗、达雷木单抗、埃罗妥珠单抗、t-dm1、ofatumumab、dinutuximab、blinatumomab、易普利姆玛、阿瓦斯丁、赫赛汀和美罗华；激酶抑制剂例如伊马替尼、吉非替尼、厄洛替尼、奥斯替尼、阿法替尼、赛立替尼、艾乐替尼、克唑替尼、埃罗替尼、拉帕替尼、索拉非尼、瑞格非尼、维罗非尼、达拉非尼、阿柏西普、舒尼替尼、尼罗替尼、达沙替尼、博舒替尼、普拉替尼、依鲁替尼、卡博替尼、乐伐替尼、凡德他尼、曲美替尼、卡比替尼、阿昔替尼、替西罗莫司、idelalisib、帕唑帕尼、特癌适和依维莫司。其他可用于抗癌组合治疗的已知抗癌药物包括他莫昔芬、来曲唑、氟维司群、米托胍腙、奥曲肽、视黄酸、砒霜、唑来膦酸、硼替佐米、卡非佐米、ixazomib、维莫德吉、索尼德吉、狄诺塞麦、萨力多胺、来那度胺、venetoclax、aldesleukin(重组人白介素-2)和sipueucel-t(前列腺癌治疗疫苗)。
[0099]
在实施本发明的方法时，本发明化合物与至少一种已知的抗癌药物可作为单一的药用组合物一起给药。另外，本发明化合物也可与至少一种已知抗癌药分开给药。在一个实施方案，本发明化合物和至少一种已知的抗癌药差不多同时给药，即所有的药物同时施用或陆续施用，只要化合物在血液中同时达到治疗浓度即可。在另外一个实施方案，本发明的化合物和至少一种已知的抗癌药根据各自的剂量方案给药，只要化合物在血液中达到治疗浓度即可。
[0100]
本发明的另一个实施方案，是一种由所述化合物组成的能有效的抑制肿瘤的，作
为激酶抑制剂的生物耦合物。这个能抑制肿瘤的生物耦合物由所述化合物与至少一种已知的有医疗作用的抗体，如赫赛汀或美罗华，或生长因子，如egf或fgf，或细胞激素，如白细胞介素2或4，或任意能与细胞表面结合的分子组成。该抗体与其他分子能把所述化合物递送到其靶点，使之成为有效的抗癌药物。此生物耦合物也可以提高有医疗作用的抗体，如赫赛汀或美罗华的抗癌效果。
[0101]
本发明的另一实施例涉及一种能有效的抑制肿瘤的药用组合物，包含式i(包括本文所述的式ii、iiia、iiib和iv化合物)所示的激酶抑制剂，或其立体异构体、互变异构体、n-氧化物、水合物、同位素取代衍生物、溶剂化物或盐、或其混合物、或其前药，与放射疗法联合治疗。在此实施例，本发明化合物与放射治疗可在相同时间或不同时间给药。
[0102]
本发明的另一实施例涉及一种能有效的用于癌症手术后治疗的药用组合物，包含式i、ii、iiia、iiib或iv所示的激酶抑制剂，或其立体异构体、互变异构体、n-氧化物、水合物、同位素取代衍生物、溶剂化物或盐、或其混合物、或其前药。本发明还涉及用手术切除肿瘤，然后用本发明的药用组合物治疗该哺乳动物的癌症的治疗方法。
[0103]
本发明的药用组合物包括所有本发明化合物的含有量能有效地实现其预期目标的药品制剂。虽然每个人的需求各不相同，本领域技术人员可确定药品制剂中每个部分的最佳剂量。一般情况下，所述化合物，或其可用药盐，对哺乳动物每天口服给药，药量按照约0.0025到50毫克/公斤体重。但最好是每公斤口服给药约0.01到10毫克/公斤。如果也施用一个已知的抗癌药物，其剂量应可有效地实现其预期的目的。这些已知的抗癌药物的最佳剂量是本领域技术人员所熟知的。
[0104]
单位口服剂量可以包括约0.01到50毫克，最好是约0.1到10毫克的本发明化合物。单位剂量可给予一次或多次，每天为一片或多片，每片含有约0.1到50毫克，合宜地约0.25到10毫克的本发明化合物或其溶剂化物。
[0105]
在外用制剂中，本发明化合物的浓度可以是每克载体约0.01到100毫克。
[0106]
本发明化合物可作为未加工药品给药。本发明化合物也可以作为含有可药用载体(包括辅料和助剂)的一个合适的药物制剂的一部分给药。这些可药用载体有利于把化合物加工成可药用的药物制剂。优选的药物制剂，特别是那些口服的和优选的给药方式类型，如片剂，锭剂和胶囊，以及适合于注射或口服的溶液，包含约0.01％到99％，最好从约0.25％到75％的活性化合物以及辅料。
[0107]
本发明的范围也包括本发明化合物的无毒性可药用盐。酸加成盐由混合一个无毒性可药用酸溶液和本发明的化合物溶液而形成。所述酸例如盐酸，富马酸，马来酸，琥珀酸，乙酸，柠檬酸，酒石酸，碳酸，磷酸，草酸等。碱加成盐由混合一个无毒性可药用碱溶液和本发明的化合物溶液而形成。所述碱例如氢氧化钠，氢氧化钾，氢胆碱，碳酸钠，三羟甲基氨基甲烷，n-甲基-葡萄糖胺等。
[0108]
本发明的药物制剂可以给予任何哺乳动物，只要他们能获得本发明化合物的治疗效果。在这些哺乳动物中最为重要的是人类和兽医动物，虽然本发明不打算如此受限。
[0109]
本发明的药物制剂可通过任何途径给药以达到其预期目的。例如，可以通过肠外，皮下，静脉，肌肉，腹腔内，透皮，口腔，鞘内，颅内，鼻腔或外用途径给药。作为替代或并行地，可以通过口服给药。药的剂量将根据病人的年龄，健康与体重，并行治疗的种类，治疗的频率，以及所需治疗效益来决定。
[0110]
本发明的药物制剂可用已知的方式制造。例如，由传统的混合，制粒，制锭，溶解，或冷冻干燥过程制造。制造口服制剂时，可结合固体辅料和活性化合物，选择性研磨混合物。如果需要或必要时加入适量助剂后，加工颗粒混合物，获得片剂或锭剂芯。
[0111]
合适的辅料特别是填料，例如糖类如乳糖或蔗糖，甘露醇或山梨醇；纤维素制剂和/或钙磷酸盐，例如磷酸三钙或磷酸氢钙；以及粘结剂，例如淀粉糊，包括玉米淀粉，小麦淀粉，大米淀粉，马铃薯淀粉，明胶，黄芪胶，甲基纤维素，羟丙基甲基纤维素，羧甲基纤维素钠，和/或聚乙烯吡咯烷酮。如果需要，可增加崩解剂，比如上面提到的淀粉，以及羧甲基淀粉，交联聚乙烯吡咯烷酮，琼脂，或褐藻酸或其盐，如海藻酸钠。辅助剂特别是流动调节剂和润滑剂，例如，硅石，滑石，硬脂酸或其盐，如硬脂酸镁或硬脂酸钙，和/或聚乙二醇。如果需要，可以给锭剂核芯提供可以抵抗胃液的合适包衣。为此，可以应用浓缩糖类溶液。这个溶液可以含有阿拉伯树胶，滑石，聚乙烯吡咯烷酮，聚乙二醇和/或二氧化钛，漆溶液和合适的有机溶剂或溶剂混合物。为了制备耐胃液的包衣，可使用适当的纤维素溶液，例如醋酸纤维素邻苯二甲酸或羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸。可向药片或锭剂核芯的包衣加入染料或色素。例如，用于识别或为了表征活性成分剂量的组合。
[0112]
其他可口服的药物制剂包括明胶制成的压接式胶囊，以及用明胶和甘油或山梨醇等增塑剂制成的密封软胶囊。该压接式胶囊可含有颗粒形式的活性化合物，与填料例如乳糖；粘结剂例如淀粉；和/或润滑剂例如滑石粉或硬脂酸镁，以及稳定剂混合而成。在软胶囊，活性化合物最好是溶解或悬浮在适当的液体例如油脂或液体石蜡中，其中可加入稳定剂。
[0113]
合适于肠外给药的制剂包括活性化合物的水溶液，如水溶性盐的溶液和碱性溶液。此外，可施用适当的活性化合物的油性注射悬浮液。合适的亲脂性溶剂或载体包括油脂例如香油，合成脂肪酸酯例如油酸乙酯或甘油三酯或聚乙二醇400，或氢化蓖麻油，或环糊精。水性注射悬浮液可含有增加悬浮液黏度的物质，例如羧甲基纤维素钠，山梨醇，和/或葡聚糖。也可以含有悬浮稳定剂。
[0114]
按照本发明的一个方面，本发明的化合物采用外用和肠外配方，并用于治疗皮肤癌。
[0115]
本发明的外用制剂可通过优选合适的载体来制成油剂，霜剂，乳液剂，药膏等。合适的载体包括植物或矿物油，白矿油(白软石蜡)，支链脂肪或油脂，动物脂肪和高分子醇(大于c
12
)。优选的载体是活性成分能溶解在其中的那些载体。也可包括乳化剂，稳定剂，保湿剂和抗氧化剂，以及如果需要的话，给予颜色或香味的试剂。此外，这些外用制剂可包含透皮渗透增强剂。这种增强剂的例子可参见美国专利号3,989,816和4,444,762。
[0116]
霜剂优选用矿物油，自乳化蜂蜡和水的混合物配制，与溶解于少量油例如杏仁油的活性成分混合而成。一个典型的霜剂例子包括约40份水，20份蜂蜡，40份矿物油和1份杏仁油。
[0117]
药膏可以这样配制，将含有活性成分的植物油例如杏仁油和温热的软石蜡混合，然后使该混合物冷却。一个典型的药膏例子包括约30％重量的杏仁油和70％重量的白软石蜡。
[0118]
本发明也涉及应用本发明的化合物制备治疗对抑制激酶(特别是atr激酶)活性有效果的临床病症的药物。这些药物可包括上述药用组合物。
[0119]
下列实施例是举例说明，而不是限制本发明的方法和制剂。其他对于本领域技术人员来说是显而易见的，和在临床治疗中通常会遇到的对各种条件和参数的适当修改和改进，都在本发明的精神和范围内。实施例一般性说明所用试剂均是商品品质，溶剂均按照标准方法干燥纯化。使用电喷雾的单四级杆质谱仪(平台ⅱ，安捷伦6110)分析质谱样品。使用br
ü
cker ascend 400核磁仪在400mhz记录1h nmr光谱，化学位移记录为以tms作为内标(0.00ppm)从低场始以ppm为单位，耦合常数j值以hz为单位。实施例1(r)-3-甲基-4-(8-(1-甲基-1h-吡唑-5-基)-3-(1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)吗啉a)8-溴-6-氯-3-碘咪唑并[1,2-a]吡啶的制备：室温下，向8-溴-6-氯咪唑并[1,2-a]吡啶(4.0g,17.28mmol)的氯仿(50ml)溶液中加入n-碘代丁二酰亚胺(3.94g,17.28mmol)和三氟乙酸(2.68ml,34.6mmol)，该反应液在室温搅拌2hrs。反应用饱和碳酸氢钠水溶液(80ml)淬灭。反应液用二氯甲烷(50ml
×
3)萃取，萃取液用食盐水(50ml
×
2)洗涤，硫酸钠干燥过滤浓缩得到粗产物，经柱层析分离纯化(硅胶，二氯甲烷:乙酸乙酯＝1:0-7:3)得到目标产物(5.5g,89％收率,黄色固体)。lc-ms(esi):m/z(m h)

356.62。b)8-溴-6-氯-3-(1-甲基-1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶的制备：将四三苯基膦钯(1.28g,1.11mmol)加入到8-溴-6-氯-3-碘咪唑并[1,2-a]吡啶(3g,8.4mmol)，1-(四氢-2h-吡喃-2-基)-1h-吡唑-5-硼酸频哪醇酯(2.57g,9.24mmol)和三水合磷酸钾(4.41g,16.8mmol)混合的二氧六环(50ml)和水(5ml)溶液中。反应液在氮气保护和80℃下搅拌18hr。加入水(100ml)，用二氯甲烷(50ml
×
3)萃取，萃取液用食盐水(50ml
×
2)洗涤，硫酸钠干燥过滤浓缩得到粗产物，经柱层析分离纯化(硅胶，二氯甲烷:乙酸乙酯＝4:0-7:3)得到目标产物(1.05g,40.1％收率,黄色固体)。lc-ms(esi):m/z(m h)

380.8。c)6-氯-8-(1-甲基-1h-吡唑-5-基)-3-(1-(四氢-2h-吡喃-2-基)-1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶的制备：将[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(0.38g,0.52mmol)加入到8-溴-6-氯-3-(1-甲基-1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶(1g,2.62mmol)，1-甲基-1h-吡唑-5-硼酸频哪醇酯(0.71g,3.40mmol)和三水合磷酸钾(1.4g,5.24mmol)混合的二氧六环(30ml)和水(3ml)溶液中。反应液在氮气保护和100℃下搅拌16hrs。加入水(50ml)，用二氯甲烷(50ml
×
3)萃取，萃取液用硫酸钠干燥过滤浓缩得到粗产物，经柱层析分离纯化(硅胶，二氯甲烷:乙酸乙酯＝4:1-0:1)得到目标产物(0.8g,80.0％收率,黄色固体)。lc-ms
(esi):m/z(m h)

383.0。d)(3r)-3-甲基-4-(8-(1-甲基-1h-吡唑-5-基)-3-(1-四氢-2h-吡喃-2-基)-1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)吗啉的制备：在氮气保护下，向(r)-3-甲基吗啉(405.81mg,4.01mmol)，叔丁醇钠(257.05mg，2.67mmol)，甲烷磺酸(2-二叔丁基膦基-2,4,6-三异丙基-1,1-联苯基)(2-氨基-1,1-联苯-2-基)钯(ii)(53.12mg,66.87mmol)的叔戊醇(8.00ml)溶液中慢慢加入6-氯-8-(1-甲基-1h-吡唑-5-基)-3-(1-(四氢-2h-吡喃-2-基)-1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶(400mg,668.68mmol)，置换氮气后，该反应液在110℃下搅拌0.5hr，lcms显示反应结束。反应液过滤后减压浓缩除去有机溶剂得到粗产物。经柱层析分离纯化(硅胶，乙酸乙酯:甲醇＝10:1)得到目标产物(200mg粗品，黄色油状物)。lc-ms(esi):m/z(m h)

448.2。e)(r)-3-甲基-4-(8-(1-甲基-1h-吡唑-5-基)-3-(1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)吗啉的制备：在室温下，将(3r)-3-甲基-4-(8-(1-甲基-1h-吡唑-5-基)-3-(1-四氢-2h-吡喃-2-基)-1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)吗啉(200mg粗品)溶到甲醇(2ml)中，然后滴加4m盐酸二氧六环溶液(5ml)，反应液在10℃下搅拌0.5h。lcms监测原料消耗完全，有产物生成。将反应液减压浓缩除掉有机溶剂，得到粗产物。经制备色谱分离纯化(碳18硅胶柱,150
×
25毫米,5微米，13-38％乙腈/0.05％氨水为流动相)得到目标产物(9mg,5.6％收率,白色固体)。lc-ms(esi):m/z(m h)

364.2。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ13.15(s,1h),9.03(d,j＝1.8hz,1h),8.00(s,1h),7.92(s,2h),7.54(s,1h),7.40(d,j＝2.0hz,1h),6.81(d,j＝2.0hz,1h),6.61(d,j＝1.6hz,1h),3.95-3.88(m,1h),3.85(s,3h),3.80-3.70(m,2h),3.68-3.60(m,2h),3.22-2.95(m,2h),0.99(d,j＝6.8hz,3h)。实施例2(r)-3-甲基-4-(8-(1-甲基-1h-吡唑-5-基)-3-(1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)吗啉a)8-溴-6-氯-3-碘咪唑并[1,2-b]哒嗪的制备：室温下向6-氯-8-溴咪唑并[1,2-b]哒嗪(5g,21.5mmol)的氯仿(90ml)溶液中加入n-碘代丁二酰亚胺(7.25g,32.25mmol)和三氟乙酸(3.35ml,43mmol)，该反应液在室温下搅拌2hrs。反应用饱和碳酸氢钠水溶液(100ml)淬灭。反应液用二氯甲烷(50ml
×
3)萃取，萃取液用食盐水(50ml
×
2)洗涤，硫酸钠干燥过滤浓缩得到粗产物，经柱层析分离纯化(硅胶,二氯甲烷:乙酸乙酯＝1:0-49:1)得到目标产物(5.2g,67.7％收率,黄色固体)。lc-ms(esi):m/z(m h)

357.57。b)8-溴-6-氯-3-(1-四氢-2h-吡喃-2-基)-1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪的制备：将四三苯基膦钯(1.67g,1.45mmol)加入到8-溴-6-氯-3-碘咪唑并[1,2-b]哒嗪(4g,14.51mmol)，1-(四氢-2h-吡喃-2-基)-1h-吡唑-5-硼酸频哪醇酯(4.03g,14.51mmol)和三水合磷酸钾(5.94g,22.32mmol)混合的二氧六环(50ml)和水(5ml)溶液中。反应液在氮气保护和90℃下搅拌16hrs。加入水(50ml)，用二氯甲烷(50ml
×
3)萃取，萃取液用食盐水(50ml
×
2)洗涤，硫酸钠干燥过滤浓缩得到粗产物，经柱层析分离纯化(硅胶,二氯甲烷:乙酸乙酯＝1:0-4:1)得到目标产物(0.93g,16.7％收率,黄色固体)。lc-ms(esi):m/z(m h)

381.80。c)6-氯-8-(1-甲基-1h-吡唑-5-基)-3-(1-四氢-2h-吡喃-2-基)-1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪的制备：将[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(0.36g,0.47mmol)加入到8-溴-6-氯-3-(1-四氢-2h-吡喃-2-基)-1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪(0.93g,
2.43mmol)，1-甲基-1h-吡唑-5-硼酸频哪醇酯(0.66g,3.16mmol)和三水合磷酸钾(1.29g,4.86mmol)混合的二氧六环(20ml)和水(2ml)溶液中。反应液在氮气保护和100℃下搅拌16hrs。加入水(30ml)，用二氯甲烷(50ml
×
3)萃取，萃取液用硫酸钠干燥，过滤浓缩得到粗产物，经柱层析分离纯化(硅胶,石油醚:乙酸乙酯＝10:1-1:1)得到目标产物(0.5g,53.8％收率,黄色固体)。lc-ms(esi):m/z(m h)

383.80。d)(3r)-3-甲基-4-(8-(1-甲基-1h-吡唑-5-基)-3-(1-四氢-2h-吡喃-2-基)-1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)吗啉的制备：在室温下，将6-氯-8-(1-甲基-1h-吡唑-5-基)-3-(1-四氢-2h-吡喃-2-基)-1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪(500mg,1.3mmol)和(r)-3-甲基吗啉(657.48mg,6.5mmol)加入甲苯(10ml)中溶解，然后加入叔丁醇钠(249.86mg,2.6mmol)和三(二亚苄基丙酮)二钯(119.04mg,0.3mmol)和2,2'-双-(二苯膦基)-1,1'-联萘(161.89mg,0.26mmol)，在氮气保护下，反应液在回流下搅拌16hrs。将反应液用甲苯(50ml)稀释后过滤，滤液减压浓缩得到粗产物。经柱层析分离纯化(硅胶,石油醚:乙酸乙酯＝5:1-0:1)得到目标产物(0.12g,20.6％收率,黄色固体)。lc-ms(esi):m/z(m h)

449.15。e)(r)-3-甲基-4-(8-(1-甲基-1h-吡唑-5-基)-3-(1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)吗啉的制备：在室温下，将浓盐酸(1ml)加入到(3r)-3-甲基-4-(8-(1-甲基-1h-吡唑-5-基)-3-(1-四氢-2h-吡喃-2-基)-1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)吗啉(120mg,0.27mmol)的乙醇(10ml)溶液中，反应液在室温搅拌2hrs。将反应液浓缩，残渣用甲醇(2ml)溶解，加入1滴氨水，经过制备液相色谱(c18柱,0-100％乙腈/水为流动相)分离纯化得到目标化合物(5.5mg,5.6％收率,黄色固体)。应用类似于所描述的实施例2的合成方法制得下述实施例3-8的化合物，起始原料为6-氯-8-溴咪唑并[1,2-b]哒嗪、n-碘代丁二酰亚胺、1-(四氢-2h-吡喃-2-基)-1h-吡唑-5-硼酸频哪醇酯、所对应的芳基或杂芳基硼酸频哪醇酯和(r)-3-甲基吗啉。
buona(464.64mg,4.83mmol)，pd(dba)2(278.00mg,483.48umol)和联萘二苯磷(binap,301.05mg,483.48μmol)在甲苯(30ml)中的混合物用用氮气置换3次，该混合物在氮气气氛下在100℃下搅拌18小时。反应混合物用ea(50ml)稀释，用饱和食盐水(40ml
×
3)洗，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到粗产物，粗产物经闪光硅胶层析法(20g sepasilica flash column,洗脱梯度为0～20％ea/pe，@50ml/min)纯化得到目标产物(0.18g,黄色固体,收率16.42％)。lc-ms(esi):m/z(m h)

454.2。d)(r)-3-甲基-4-(8-吗啉基-3-(1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)吗啉的制备：向(3r)-3-甲基-4-(8-吗啉-3-(1-(四氢-2h-吡喃-2-基)-1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)吗啉(0.16g,352.78umol)的甲醇(4.5ml)溶液中加入hcl甲醇溶液(4m,4.41ml)。所得混合物在25℃下搅拌12小时。反应混合物减压浓缩得到残留物，该残留物溶解于甲醇(20ml)中用饱和碳酸氢钠水溶液调整ph至7，减压浓缩得到粗产物，经制备高效液相色谱柱(柱:waters xbridge 150*25mm*5um；流动相:[水(10mm nh4hco3)-acn]；b％:17％-47％,10min)纯化得到目标化合物(25mg,类白色固体,收率19.03％,纯度99.19％)。lc-ms(esi):m/z(m h)

370.1。1h nmr(400mhz,cd3od):δ7.85(s,1h),7.74(d,j＝2.4hz,1h),7.12(d,j＝2.0hz,1h),6.22(s,1h),4.27(m,1h),4.03(dd,j＝3.2,11.6hz,1h),3.92-3.90(m,4h),3.82-3.64(m,9h),3.38-3.35(m,1h),1.29(d,j＝2.0hz,3h)。sfc:ee％,100％。实施例10(2s,6r)-2,6-二甲基-4-(6-((r)-3-甲基吗啉基)-3-(1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-8-基)吗啉本实施例化合物可应用类似于所描述的实施例9的合成方法制得。lc-ms(esi):m/z(m h)

398.4。1h nmr(400mhz,cd3od):δ7.82(s,1h),7.80-7.59(m,1h),7.21-7.01(m,1h),6.13(s,1h),4.60(s,1h),4.49-4.39(m,2h),4.27-4.24(m,1h),4.02(dd,j＝3.2,11.6hz,1h),3.94-3.85(m,2h),3.83-3.74(m,3h),3.70-3.64(m,1h),3.36(dd,j＝4.0,12.8hz,1h),2.63-2.55(m,2h),1.30-1.25(m,9h)。实施例114-(4-(1-甲基-1h-吡唑-5-基)-7-(1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,5-b]哒嗪-2-基)吗啉
本实施例化合物应用类似于所描述的实施例13的合成方法制得。黄色固体。lc-ms(esi):m/z(m h)

351.30。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ7.73(s,1h),7.65(d,j＝1.7hz,1h),7.44(s,1h),7.14(d,j＝1.3hz,1h),7.01(s,1h),6.81(d,j＝1.6hz,1h),3.97(s,3h),3.83-3.74(m,4h),3.63-3.57(m,4h)。实施例124-(8-(1-甲基-1h-吡唑-5-基)-3-(1h-吡唑-5-基)-[1,2,4]三氮唑并[4,3-b]哒嗪-6-基)吗啉a)6-氯-3-(1-四氢吡喃-2-基吡唑-3-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-8-胺的制备：将1-四氢吡喃-2-基吡唑-3-甲醛(10.16g,56.40mmol)和6-氯-3-肼基哒嗪-4-胺(9g,56.40mmol)溶于dcm(120ml)，在10-20℃搅拌1小时。然后于0℃向反应液加入phi(oac)2(30.88g,95.88mmol)，并在10-20℃搅拌12小时。反应液用饱和食盐水(800ml)稀释，用dcm(400ml
×
3)萃取。合并有机相并用饱和食盐水(400ml)洗涤，无水na2so4干燥，过滤、减压浓缩得粗品。粗品通过快速硅胶色谱纯化(x g sepasilica flash column,洗脱梯度为0～100％,pe:ea＝1:3)得到目标产物(8.7g,黄色固体,收率16.08％)。lc-ms(esi):m/z(m h)

319.9。b)8-溴-6-氯-3-(1-四氢吡喃-2-基吡唑-3-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪的制备：向6-氯-3-(1-四氢吡喃-2-基吡唑-3-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-8-胺(0.9g,2.81mmol)的ch3cn(15ml)溶液加入hbr(69.01mg,281.47μmol,46.32μl,纯度33％),t-buono(493.43mg,4.79mmol,569.12μl)，并在0℃搅拌0.5小时。然后加入cubr(605.65mg,4.22mmol,128.59μl)。反应液在10-20℃搅拌12小时。反应液用水(80ml)稀释，用etoac(150ml
×
3)萃取。合并有机相并用饱和食盐水(150ml)洗涤，无水na2so4干燥，过滤、减压浓缩得粗品。粗品通过硅胶色谱纯化(sio2,pe/etoac＝5/1-1/1)得到目标产物(380mg,黑色固体,收率7.04％)。lc-ms(esi):m/z(m h)

382.8。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ7.82(d,j＝2.4hz,1h),7.44(s,1h),7.44(d,j＝3.2hz,1h),5.63-5.60(m,1h),4.12-4.09(m,1h),3.78-3.72(m,1h),2.21-2.10(m,3h),1.76-1.61(m,3h)。c)6-氯-8-(2-甲基吡唑-3-基)-3-(1-四氢吡喃-2-基吡唑-3-基)-[1,2,4]三唑并
1,2-二氢哒嗪-3,6-二酮(15.0g,粗品,20.94mmol)溶于三氯氧磷(pocl3,150ml)中，加热至100℃后搅拌反应16小时。除去三氯氧磷得到粗产物，经硅胶柱层析(etoac/pe,10to30％)纯化后得到目标产物(2.63g,白色固体，两步收率55％)。lc-ms(esi):m/z(m h)

229.15。1h nmr(400mhz,cdcl3):δ7.61(d,j＝1.3hz,1h),7.51(s,1h),6.49(d,j＝1.3hz,1h),3.83(s,3h)。c)(r)-4-(6-氯-5-(1-甲基-1h-吡唑-5-基)哒嗪-3-基)-3-甲基吗啉的制备：向3,6-二氯-4-(1-甲基-1h-吡唑-5-基)哒嗪(2.63g,11.53mmol)在n-甲基吡咯烷酮(nmp,50ml)的溶液中加入(r)-3-甲基吗啉(1.58g,11.53mmol),cubr(3.63g,25.37mmol)和n,n-二异丙基乙胺(diea,2.15g,15.5mmol)。所得混合物在150℃下搅拌16小时。用水(50ml)淬灭反应，用二氯甲烷(dcm,100ml)稀释。有机相用水(100ml)洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗产物，经硅胶柱层析(etoac/pe,5-20％)纯化后得到目标产物(1.65g,浅红色固体,收率49％)。lc-ms(esi):m/z(m h)

294.25。1h nmr(400mhz,cdcl3):δ7.60(s,1h),6.79(s,1h),6.40(s,1h),4.36
–
4.27(m,1h),4.06(dd,j＝11.4,3.3hz,1h),3.97(dd,j＝13.3,2.0hz,1h),3.86
–
3.82(m,1h),3.80(s,3h),3.65(td,j＝12.0,3.0hz,1h),3.36(td,j＝12.5,3.7hz,1h),1.33(d,j＝6.7hz,3h)。d)(r)-4-(1-甲基-1h-吡唑-5-基)-6-(3-甲基吗啉基)哒嗪-3-甲腈的制备：向(r)-4-(6-氯-5-(1-甲基-1h-吡唑-5-基)哒嗪-3-基)-3-甲基吗啉(0.5g,1.7mmol)和dmf(10ml)溶液中加入zn(cn)2(0.4g 3.4mmol)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(dppf,0.2g,0.36mmol)、pd2(dba)3(160mg,0.17mmol)和3滴水。所得的混合物在150℃下搅拌6小时。减压浓缩除去溶剂得到粗产物，经硅胶柱层析(etoac/pe,10to 40％)纯化后得到目标产物(0.4g,浅红色油状物,收率82％)。lc-ms(esi):m/z(m h)

285.30。1h nmr(400mhz,cdcl3):δ7.59(d,j＝1.8hz,1h),6.66(s,1h),6.53(d,j＝1.8hz,1h),4.54
–
4.43(m,1h),4.23
–
4.13(m,1h),4.08(dd,j＝14.8,5.7hz,1h),3.89(s,3h),3.84(brs,1h),3.78(dd,j＝12.0,2.8hz,1h),3.64(td,j＝12.4,2.8hz,1h),3.49
–
3.38(m,1h),1.38(d,j＝6.8hz,3h)。e)(r)-(4-(1-甲基-1h-吡唑-5-基)-6-(3-甲基吗啉基)哒嗪-3-基)甲胺的制备：向(r)-4-(1-甲基-1h-吡唑-5-基)-6-(3-甲基吗啉基)哒嗪-3-甲腈(0.22g,0.77mmol)在meoh(7ml)的溶液中加入兰尼镍(～0.3g)。所得混合物在氢气下在室温下搅拌16小时。反应结束后，所得混合物用硅藻土过滤，滤液浓缩后得到粗产物，经制备高效液相色谱柱(c18,ch3cn/h2o,5～30％,加入0.1％tfa)纯化后得到目标产物(0.1g,无色油状物,收率45％)。lc-ms(esi):m/z(m h)

289.30。1h nmr(400mhz,cd3od):δ7.61(s,1h),7.32(s,1h),6.51(s,1h),4.47
–
4.38(m,1h),4.14(s,2h),4.00(dt,j＝16.5,9.0hz,2h),3.85
–
3.72(m,4h),3.63(dd,j＝16.4,7.3hz,1h),3.33(brs,2h),1.28(d,j＝6.4hz,3h)。f)n-((4-(1-甲基-1h-吡唑-5-基)-6-((r)-3-甲基吗啉基)-2,3-二氢哒嗪-3-基)甲基)-1h-吡唑-5-甲酰胺的制备：向(r)-(4-(1-甲基-1h-吡唑-5-基)-6-(3-甲基吗啉基)哒嗪-3-基)甲胺(0.1g,0.35mmol)在dmf(5ml)的溶液中加入1h-吡唑-5-甲酸(0.05g,0.35mmol)、2-(7-氮杂苯并三氮唑)-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸酯(hatu,200mg,0.75mmol)和diea(0.12g,0.87mmol)。所得混合物在室温下搅拌过夜。减压蒸馏除去溶剂得到粗产物，经制备薄层色谱板(dcm:meoh＝20:1)纯化得到目标产物(0.085g,白色固体,收率64％)。lc-ms(esi):m/z(m h)

383.35。1h nmr(400mhz,cdcl3):δ10.40(s,1h),8.73(s,
1h),7.62
–
7.52(m,2h),6.82
–
6.72(m,2h),6.45(s,1h),4.58(d,j＝5.5hz,2h),4.36
–
4.25(m,1h),4.02(ddd,j＝22.3,12.2,2.6hz,1h),3.79(s,3h),3.64(ddd,j＝15.7,12.1,5.0hz,2h),3.40
–
3.30(m,1h),3.16
–
3.05(m,2h),1.31(d,j＝6.9hz,3h)。g)(r)-3-甲基-4-(4-(1-甲基-1h-吡唑-5-基)-7-(1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,5-b]哒嗪-2-基)吗啉的制备：n-((4-(1-甲基-1h-吡唑-5-基)-6-((r)-3-甲基吗啉基)-2,3-二氢哒嗪-3-基)甲基)-1h-吡唑-5-甲酰胺(0.085g,0.22mmol)在pocl3(5ml)的溶液在150℃下搅拌3小时。减压蒸馏除去溶剂得到粗产物，经制备高效液相色谱柱(c18,ch3cn/h2o,15～45％,加入0.1％tfa)纯化后得到目标化合物(0.02g,黄色固体,收率25％)。lc-ms(esi):m/z(m h)

365.25。1h nmr(400mhz,cd3od)δ7.93(s,1h),7.84(s,1h),7.67(d,j＝1.8hz,1h),7.40(d,j＝1.0hz,1h),7.27(s,1h),6.80(d,j＝1.7hz,1h),4.46(d,j＝6.3hz,1h),4.11
–
4.02(m,2h),4.00(s,3h),3.87
–
3.80(m,2h),3.68(td,j＝11.6,3.0hz,1h),3.56
–
3.44(m,1h),1.41(d,j＝6.8hz,3h)。实施例14(r)-3-甲基-4-(3-(1h-吡唑-5-基)-8-(1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)吗啉本实施例化合物应用类似于所描述的实施例2的合成方法制得。实施例15(r)-3-甲基-4-(8-(1-甲基-1h-吡唑-5-基)-3-(1h-吡唑-5-基)-[1,2,4]三氮唑并[4,3-b]哒嗪-6-基)吗啉本实施例化合物应用类似于所描述的实施例12的合成方法制得。类白色固体。lc-ms(esi):m/z(m h)

366.1。1h nmr(400mhz,cd3od):δ7.88(br,s,1h),7.66(d,j＝1.6hz,1h),7.41(s,1h),7.28(s,1h),6.88(d,j＝1.6hz,1h),4.42(d,j＝6.4hz,1h),4.08-4.05(m,1h),4.03(s,3h),4.00-3.97(m,1h),3.85(s,2h),3.72-3.72(m,1h),3.46-3.41(m,1h),1.39(d,j＝6.8hz,3h)。实施例16
(r)-3-甲基-4-(7-(1-甲基-1h-吡唑-5-基)-3-(1h-吡唑-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)吗啉a)5-氯-7-(1-甲基-1h-吡唑-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶的制备：在室温下，向5,7-二氯吡唑[1,5-a]嘧啶(5g,26.59mmol)的二氧六环(100ml)溶液中加入[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯和磷酸三钾(14.16g,53.19mmol)的水(10ml)溶液。置换氮气后，反应液混合物在80℃下搅拌16小时。lcms显示反应结束。将反应液冷却至室温后，加入水(100ml)。用乙酸乙酯(100ml
×
2)萃取，萃取液用食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥过滤浓缩得到粗产物，经柱层析分离纯化(硅胶，pe/etoac＝50/1-3/1)得到目标产物(3.35g,黄色固体,收率53.91％)。lc-ms(esi):m/z(m h) 234.30。b)(r)-3-甲基-4-(7-(1-甲基-1h-吡唑-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)吗啉的制备：室温下将5-氯-7-(1-甲基-1h-吡唑-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶(500mg,2.14mmol)、叔丁醇钠(514.11mg,5.35mmol)、(
±
)-2,2'-双(二苯基膦)-1,1'-联萘(binap,133.24mg,213.99mmol)和三(二亚苄基丙酮)二钯(195.95mg,213.99mmol)溶于甲苯(30ml)。氮气保护下反应液回流搅拌16小时。反应液冷却至室温并用etoac(100ml
×
3)萃取。有机相并用饱和食盐水洗涤，无水na2so4干燥，过滤、浓缩得粗品。粗品通过硅胶色谱纯化(sio2,pe/etoac＝20/1-3/1)得到目标产物(69mg,黄色固体,收率10.8％)。1h nmr(400mhz,cdcl3):δ7.92(d,j＝2.1hz,1h),7.62(d,j＝1.9hz,1h),6.64(d,j＝1.9hz,1h),6.33(s,1h),6.22(d,j＝2.2hz,1h),4.34(d,j＝6.3hz,1h),4.06(s,2h),3.89(s,3h),3.81(s,2h),3.65-3.58(m,1h),3.39-3.32(m,1h),1.36(d,j＝6.8hz,3h)。c)(r)-4-(3-碘-7-(1-甲基-1h-吡唑-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)-3-甲基吗啉的制备：室温下向(r)-3-甲基-4-(7-(1-甲基-1h-吡唑-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)吗啉(59mg,197.76μmol)的chcl3(5ml)溶液加入n-碘代琥珀酰亚胺(nis,40mg,177.98μmol)和三氟乙酸(tfa,22,55mg,197.76μmol)。反应液室温搅拌2小时，用饱和碳酸氢钠(5ml)淬灭。混合液浓缩得粗品，粗品通过硅胶色谱纯化(sio2,pe/etoac＝20/1-3/1)得到目标产物(59mg,黄色固体,收率70.3％)。lc-ms(esi):(m h)

:425.4。1h nmr(400mhz,cdcl3):δ7.90(s,1h),7.62(d,j＝1.9hz,1h),6.62(d,j＝2.0hz,1h),6.33(s,1h),4.38(s,1h),4.22(d,j＝13.4hz,1h),4.07(dd,j＝11.5,3.8hz,1h),3.86(s,3h),3.83(s,2h),3.62(td,j＝11.9,3.0hz,1h),3.42-3.34(m,1h),1.25(d,j＝3.7hz,3h)。d)(3r)-3-甲基-4-(7-(1-甲基-1h-吡唑-5-基)-3-(1-(四氢-2h-吡喃-2-基)-1h-吡唑-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)吗啉的制备：将(r)-4-(3-碘-7-(1-甲基-1h-吡唑-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)-3-甲基吗啉(33mg,77.79μmol)、1-(四氢-2h-吡喃-2-基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-1h-吡唑(64.91mg,233.36μmol)、三水合磷酸钾(41.43mg,155.57μmol)和pd(dppf)cl2(5.69mg,7.78μmol)溶于二氧六环(8ml)和
水(1.5ml)。反应液在82℃下搅拌2小时。反应完全后，反应液浓缩得粗品，粗品通过硅胶色谱纯化(sio2,pe/etoac＝20/1-3/1)得到目标产物(30mg,黄色固体,收率86.0％)。lc-ms(esi):m/z(m h)

:449.47。e)(r)-3-甲基-4-(7-(1-甲基-1h-吡唑-5-基)-3-(1h-吡唑-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)吗啉的制备：室温下将(3r)-3-甲基-4-(7-(1-甲基-1h-吡唑-5-基)-3-(1-(四氢-2h-吡喃-2-基)-1h-吡唑-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)吗啉、4m氯化氢二氧六环溶液(1ml)和水(1ml)的混合液搅拌2小时，然后减压浓缩。通过滴加氨水调节ph值至8。混合液通过制备高效液相色谱纯化(c18柱，0-100％乙腈/水作为流动相)得到目标化合物(6.5mg,黄色固体,收率26.67％)。lc-ms(esi):m/z(m h)

365.1。1h nmr(400mhz,cd3od):δ8.28(s,1h),7.64(d,j＝2.0hz,1h),7.63(br d,j＝1.2hz,1h),6.90-6.83(m,1h),6.80(s,1h),6.76(d,j＝2.0hz,1h),4.65-4.57(m,1h),4.25(d,j＝12.8hz,1h),4.05(dd,j＝3.6,11.6hz,1h),3.86(s,4h),3.81-3.75(m,1h),3.64(dt,j＝2.8,12.0hz,1h),3.42(dt,j＝3.6,12.8hz,1h),1.39(d,j＝6.8hz,3h)。实施例17(r)-3-甲基-4-(5-(甲磺酰基)-1-(1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)吡咯并[1,2-c]嘧啶-3-基)吗啉实施例18(r)-3-甲基-4-(1-(甲磺酰基)-5-(1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)咪唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)吗啉实施例19(r)-3-甲基-4-(6-(甲磺酰基)-1-(1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)吡咯并[1,2-a]吡嗪-3-基)吗啉
实施例20(r)-3-甲基-4-(3-(甲磺酰基)-8-(1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-[1,2,4]三氮唑并[4,3-a]吡嗪-6-基)吗啉应用类似于所描述的实施例13的合成方法制得下述实施例21-25的化合物。
实施例26(r)-4-(4-(1-异丙基-1h-吡唑-5-基)-7-(1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,5-b]哒嗪-2-基)-3-甲基吗啉a)3,6-二氯-4-(2,5-二甲基-1h-吡咯-1-基)哒嗪的制备：将3,6-二氯哒嗪-4-胺、2,5-二酮己烷和tsoh
·
h2o溶于甲苯，在迪安-斯塔克装置中140℃下搅拌16小时。反应液冷却至室温并倒出甲苯层。剩余物通过硅胶柱色谱纯化(etoac/pe,10-20％)得到目标产物
(10.2g,棕色固体,收率:35％).1h nmr(400mhz,cdcl3):δ7.47(s,1h),5.96(s,2h),1.99(s,6h)。b)(r)-4-(6-氯-5-(2,5-二甲基-1h-吡咯-1-基)哒嗪-3-基)-3-甲基吗啉的制备：向3,6-二氯-4-(2,5-二甲基-1h-吡咯-1-基)哒嗪(10.2g,42.3mmol)的nmp(100ml)溶液加入(r)-3-甲基吗啉(5.1g,50.8mmol)和diea(16.4g,126.9mmol)。反应液在190℃下搅拌6小时。反应完全后，向反应液中加水(200ml)并用etoac萃取(100ml
×
3)。合并有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，然后浓缩。粗品通过硅胶柱色谱纯化(etoac/pe,10-30％)得到目标产物(9.25g,棕色固体,收率:71％).lc-ms(esi):m/z(m h)

307.10.1h nmr(400mhz,cdcl3):δ6.77(d,j＝4.6hz,1h),5.94(d,j＝4.6hz,2h),4.16(d,j＝7.6hz,1h),4.02(dd,j＝17.8,13.0hz,2h),3.80(d,j＝4.5hz,2h),3.62(d,j＝12.1hz,1h),3.35(d,j＝12.7hz,1h),1.99(s,6h),1.28(d,j＝6.2hz,3h)。c)(r)-4-(2,5-二甲基-1h-吡咯-1-基)-6-(3-甲基吗啉)哒嗪-3-腈的制备：将(r)-4-(6-氯-5-(2,5-二甲基-1h-吡咯-1-基)哒嗪-3-基)-3-甲基吗啉(9.25g,30.2mmol)、zn(cn)2(7.09g136.0mmol)、1,1'-双(二苯基膦)二茂铁(dppf,7.54g,13.6mmol)和pd2(dba)3(0.85g,0.93mmol)溶于dmf(100ml)和水(2ml)。反应液在150℃下搅拌6小时。反应完全后，向反应液中加水(200ml)并用etoac萃取(200ml
×
3)。合并有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，然后浓缩。粗品通过硅胶柱色谱纯化(etoac/pe,20-50％)得到目标产物(8.4g,棕色固体,收率:93％).1h nmr(400mhz,cdcl3):δ6.58(s,1h),5.97(s,2h),4.35(s,1h),4.20(d,j＝13.8hz,1h),4.13-4.05(m,1h),3.89-3.75(m,2h),3.70-3.61(m,1h),3.51-3.37(m,1h),2.07(d,j＝5.0hz,6h),1.36(d,j＝6.8hz,3h)。d)(r)-(4-(2,5-二甲基-1h-吡咯-1-基)-6-(3-甲基吗啉)哒嗪-3-基)甲胺的制备：向(r)-4-(2,5-二甲基-1h-吡咯-1-基)-6-(3-甲基吗啉)哒嗪-3-腈(8.4g,28.3mmol)的甲醇(100ml)溶液加入兰尼镍(～40g,w/w)。反应体系脱气并用h2置换三次，反应液室温搅拌16小时。反应完全后，反应液通过硅藻土过滤并用甲醇(90ml
×
10)洗涤滤饼。合并滤液浓缩得到目标产物(5.6g,黑色固体).1h nmr(400mhz,meod):δ7.43(s,1h),5.95(s,2h),4.36(s,1h),4.03(d,j＝12.2hz,2h),3.74-3.83(m,3h),3.60(d,j＝11.6hz,1h),3.35(s,2h),1.96(s,6h),1.27(d,j＝7.0hz,3h)。e)(r)-n-((4-(2,5-二甲基-1h-吡咯-1-基)-6-(3-甲基吗啉)哒嗪-3-基)甲基)-1h-吡唑-5-甲酰胺的制备：将(r)-(4-(2,5-二甲基-1h-吡咯-1-基)-6-(3-甲基吗啉)哒嗪-3-基)甲胺(5.6g,18.6mmol)、1h-吡唑-5-羧酸(2.5g,22.3mmol)、hatu(4.3g,11.2mmol)和diea(7.2g,55.8mmol)溶于dcm(60ml)。反应液室温搅拌过夜。反应完全后，向反应液中加水(100ml)并用dcm萃取(100ml
×
3)。合并有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，然后浓缩。粗品通过硅胶柱色谱纯化(meoh/dcm,1-3％)得到目标产物(4.3g,黄色固体,收率:38％).lc-ms(esi):m/z(m h)

396.20.1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ8.34(s,1h),7.81(s,1h),7.29(s,1h),6.61(s,1h),5.89(s,2h),4.38(s,1h),4.14-4.00(m,3h),3.99-3.92(m,1h),3.75-3.66(m,2h),3.55-3.48(m,1h),3.20-3.15(m,2h),1.94(s,6h),1.16(d,j＝6.6hz,3h)。f)(r)-4-(4-(2,5-二甲基-1h-吡咯-1-基)-7-(1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,5-b]哒嗪-2-基)-3-甲基吗啉的制备：将(r)-n-((4-(2,5-二甲基-1h-吡咯-1-基)-6-(3-甲基吗
啉)哒嗪-3-基)甲基)-1h-吡唑-5-甲酰胺(4.3g,10.9mmol)溶于pocl3(40ml)并在120℃下搅拌4小时。反应完全后，除去溶剂。向剩余物中加水(5ml)并用氨水(25％w/w)调节ph至8，然后用dcm萃取(40ml
×
2)。合并有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，然后浓缩。粗品通过硅胶柱色谱纯化(etoac/pe,20-100％)得到目标产物(2.7g,黄色固体,收率:66％).lc-ms(esi):m/z(m h)

378.11.1h nmr(400mhz,cdcl3):δ7.71(s,1h),7.29(s,1h),7.24(s,1h),7.11(s,1h),6.37(s,1h),5.98(s,2h),4.16-4.03(m,2h),3.95-3.75(m,3h),3.72-3.66(m,1h),3.52-3.41(m,1h),2.11(s,6h),1.37(d,j＝6.7hz,3h)。g)(r)-2-(3-甲基吗啉)-7-(1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,5-b]哒嗪-4-醇的制备：将(r)-4-(4-(2,5-二甲基-1h-吡咯-1-基)-7-(1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,5-b]哒嗪-2-基)-3-甲基吗啉(2.7g,7.16mmol)溶于tfa/h2o(20ml/2.0ml)，并85℃下搅拌16小时。反应完全后，除去溶剂。粗品通过硅胶柱色谱纯化(meoh/dcm,1-10％)得到目标产物(1.5g,黄色固体,收率:71％).lc-ms(esi):m/z(m h)

301.40.1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ13.33(s,1h),7.63(s,1h),7.46(s,1h),7.03(s,1h),5.93(s,1h),4.06(s,1h),3.92(d,j＝11.3hz,1h),3.67(s,3h),3.48(s,1h),3.18-3.12(m,1h),1.15(s,3h)。h)(r)-2-(3-甲基吗啉)-7-(1-((三氟甲基)磺酰基)-1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,5-b]哒嗪-4-基三氟甲磺酸酯的制备：在氮气保护下0℃将(r)-2-(3-甲基吗啉)-7-(1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,5-b]哒嗪-4-醇(1.5g,5mmol)和tea(1.5g,15.0mmol)溶于干燥的dcm(40ml)，并搅拌10分钟。然后0℃下缓慢滴加tf2o(4.2g,15.0mmol)并搅拌30分钟，然后恢复至室温搅拌1.5小时。反应液采用水洗涤、饱和食盐水洗涤、无水硫酸钠干燥，然后浓缩。粗品通过硅胶柱色谱纯化(dcm/pe,10-30％)得到目标产物(1.2g,黄色固体,收率:38％).lc-ms(esi):m/z(m h)

565.05.1h nmr(400mhz,cdcl3):δ8.16(s,1h),7.65(s,1h),7.42(s,1h),6.54(s,1h),4.16-4.03(m,2h),3.83(m,3h),3.73-3.62(m,1h),3.44(d,j＝13.4hz,1h),1.38(d,j＝6.8hz,3h)。i)(r)-4-(4-(1-异丙基-1h-吡唑-5-基)-7-(1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,5-b]哒嗪-2-基)-3-甲基吗啉的制备：将(r)-2-(3-甲基吗啉)-7-(1-((三氟甲基)磺酰基)-1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,5-b]哒嗪-4-基三氟甲磺酸酯(0.3g,0.53mmol)、1-异丙基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-yl)-1h-吡唑(150.2mg,0.64mmol)、k2co3(219.4mg,1.59mmol)和pd(dppf)cl2(77.6mg,0.11mmol)溶于二氧六环(2ml)。反应体系脱气并用氩气置换三次，并在90℃搅拌16小时。反应完全后，反应液冷却至室温并滴加2n lioh(1ml)。室温搅拌0.5小时后，混合液过滤，浓缩滤液。粗品通过制备薄层色谱纯化两次(meoh/dcm＝10:1)得到目标化合物(17mg,黄色固体,收率:8％).lc-ms(esi):m/z(m h)

393.15.1h nmr(400mhz,meod):δ7.73(s,1h),7.68(s,1h),7.26(s,1h),7.19(s,1h),6.77(s,1h),6.59(s,1h),4.61(dd,j＝12.9,6.2hz,1h),4.33(d,j＝7.3hz,1h),4.07-3.99(m,1h),3.91(d,j＝13.3hz,1h),3.86-3.75(m,2h),3.67(t,j＝11.9hz,1h),3.41(t,j＝12.8hz,1h),1.46(d,j＝6.5hz,6h),1.35(d,j＝6.7hz,3h)。实施例27(r)-4-(4,7-二(1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,5-b]哒嗪-2-基)-3-甲基吗啉
本实施例化合物应用类似于所描述的实施例26的合成方法制得。实施例27的化合物为黄色固体。lc-ms(esi):m/z(m h)

351.35.1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ13.43(s,1h),8.00(s,1h),7.95(s,1h),7.69(s,1h),7.22(t,j＝3.2hz,2h),7.12(s,1h),4.43(s,1h),4.01(d,j＝11.3hz,1h),3.92(d,j＝13.3hz,1h),3.78(t,j＝10.1hz,2h),3.61-3.58(m,1h),3.29-3.26(m,1h),1.24(d,j＝6.8hz,3h)。实施例28(r)-3-甲基-4-(4-(1-甲基-1h-吡唑-5-基)-8-(1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,5-a]嘧啶-2-基)吗啉实施例29(r)-3-甲基-4-(4-(1-甲基-1h-吡唑-5-基)-7-(1h-吡唑-3-基)咪唑并[5,1-f][1,2,4]三嗪-2-基)吗啉实施例30(r)-3-甲基-4-(8-(1-甲基-1h-吡唑-5-基)-3-(1h-吡唑-5-基)-[1,2,4]三唑并[3,4-f][1,2,4]三嗪-6-基)吗啉
实施例31(r)-3-甲基-4-(4-(1-甲基-1h-吡唑-5-基)-8-(1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-2-基)吗啉实施例32(r)-4-(4-环丙基-7-(1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,5-b]哒嗪-2-基)-3-甲基吗啉a)(r)-4-(5-氯-6-甲基哒嗪-3-基)-3-甲基吗啉的制备：将4,6-二氯-3-甲基哒嗪(3.0g,18.4mmol)、(r)-3-甲基吗啉(2.8g,27.6mmol)和diea(4.8g,36.8mmol)溶于nmp(30ml)在150℃搅拌8小时。反应完全后，向反应液中加水(50ml)并用etoac萃取(40ml
×
3)。合并有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤然后减压浓缩。粗品通过硅胶柱色谱纯化(etoac/pe,10％-30％)得到目标产物(0.55g,黄色固体,收率:13％).lc-ms(esi):m/z(m h)

228.45.1h nmr(400mhz,cdcl3):δ6.81(s,1h),4.29-4.15(m,1h),4.04-3.95(m,1h),3.87-3.73(m,3h),3.60(t,j＝11.8hz,1h),3.27(m,1h),2.58(s,3h),1.24(d,j＝6.8hz,4h)。b)(r)-4-氯-6-(3-甲基吗啉)哒嗪-3-甲醛的制备：将(r)-4-(5-氯-6-甲基哒嗪-3-基)-3-甲基吗啉(510mg,2.24mmol)和seo2(298mg,2.68mmol)溶于1,4-二氧六环(10ml)在95℃搅拌16小时。冷却至室温后，减压浓缩反应液。粗品通过硅胶柱色谱纯化(etoac/pe,10％-30％)得到目标产物(370mg,黄色固体,收率:68％).1h nmr(400mhz,cdcl3):δ10.18(s,1h),6.78(s,1h),4.51(s,1h),4.17(d,j＝13.2hz,1h),4.08(d,j＝10.8hz,1h),3.87-3.76(m,2h),3.64(t,j＝11.8hz,1h),3.54-3.33(m,1h),1.38(d,j＝6.4hz,3h)。c)(r)-1-(4-氯-6-(3-甲基吗啉)哒嗪-3-基)-n-(2,4-二甲氧基苄基)甲胺的制备：将(r)-4-氯-6-(3-甲基吗啉)哒嗪-3-甲醛(470mg,1.94mmol)、(2,4-二甲氧基苯基)甲胺(390mg,2.33mmol)溶于dce(8ml)并加入acoh(349mg,5.82mmol)。反应液在室温搅拌1小时。然后加入nabh(oac)3(822mg,3.88mmol,2.0equiv)并在室温搅拌过夜。向反应液加入冰水(10ml)淬灭并用etoac萃取(15ml
×
3)。合并有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤然后减压浓缩。粗品通过硅胶柱色谱纯化(dcm/meoh＝100/1-50/1)得到目标产物(420mg,黄色固体,收率:55％).lc-ms(esi):m/z(m h)

393.30。d)(r)-(4-氯-6-(3-甲基吗啉)哒嗪-3-基)甲胺的制备：将(r)-1-(4-氯-6-(3-甲
基吗啉)哒嗪-3-基)-n-(2,4-二甲氧基苄基)甲胺(420mg,1.07mmol)溶于tfa(3ml)并在80℃搅拌3小时。除去溶剂后，剩余物加入dcm(5ml)和氨水(～25％w/w,0.5ml)。所得溶液室温搅拌5分钟然后浓缩。粗品通过硅胶柱色谱纯化(dcm/meoh＝100/1-15/1)得到目标产物(210mg,黄色固体,收率:81％).lc-ms(esi):m/z(m h)

243.15。e)n-((4-氯-6-((r)-3-甲基吗啉代)-2,3-二氢哒嗪-3-基)甲基)-1h-吡唑-5-甲酰胺的制备：将(r)-(4-氯-6-(3-甲基吗啉)哒嗪-3-基)甲胺(190mg,0.78mmol)、1h-吡唑-5-羧酸(88mg,0.78mmol)、hatu(593mg,1.56mmol)和diea(202mg,1.56mmol)溶于dmf(4ml)。反应液室温搅拌过夜。反应液加水(10ml)淬灭并用etoac萃取(15ml
×
3)。合并有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤然后减压浓缩。粗品通过硅胶柱色谱纯化(dcm/meoh＝100/1-10/1)得到目标产物(181mg,黄色固体,收率:69％).lc-ms(esi):m/z(m h)

337.20。f)(r)-4-(4-氯-7-(1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,5-b]哒嗪-2-基)-3-甲基吗啉的制备：将n-((4-氯-6-((r)-3-甲基吗啉代)-2,3-二氢哒嗪-3-基)甲基)-1h-吡唑-5-甲酰胺(181mg,0.54mmol)溶于pocl3(3ml)并在120℃搅拌3小时。除去溶剂后，剩余物加入dcm(15ml)稀释并用饱和nahco3溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤然后减压浓缩。粗品通过快速硅胶柱色谱纯化(dcm/meoh＝100/1-10/1)得到目标产物(88mg,黄色固体,收率:51％,).lc-ms(esi):m/z(m h)

319.20.1h nmr(400mhz,cdcl3):δ7.72(s,1h),7.64(s,1h),7.09(s,1h),6.57(s,1h),4.16-4.00(m,2h),3.86-3.78(m,2h),3.78-3.60(m,2h),3.48-3.36(m,1h),1.36(d,j＝6.4hz,3h)。g)(r)-4-(4-环丙基-7-(1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,5-b]哒嗪-2-基)-3-甲基吗啉的制备：n2保护下将(r)-4-(4-氯-7-(1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,5-b]哒嗪-2-基)-3-甲基吗啉(70mg,0.22mmol)、环丙基硼酸(11,38mg,0.44mmol)、k3po4·
3h2o(176mg,0.22mmol)、pd(oac)2(5mg,0.02mmol)和三环己基膦(11mg,0.04mmol)溶于1,4-二氧六环(1ml)和甲苯(1ml)。反应体系脱气并用n2置换三次。反应液在100℃搅拌16小时。反应完全后，反应液过滤、减压浓缩滤液。粗品通过制备薄层色谱纯化(dcm/meoh＝10/1)得到目标化合物(15mg,淡黄色固体,收率:21％).lc-ms(esi):m/z(m h)

325.25.1h nmr(400mhz,cdcl3):δ7.70(s,1h),7.61(s,1h),7.08(s,1h),6.07(s,1h),4.16-4.05(m,2h),3.87-3.81(m,2h),3.75-3.63(m,2h),3.46-3.36(m,1h),2.15-2.07(m,1h),1.33(d,j＝5.6hz,3h),1.20-1.15(m,2h),1.03-0.97(m,2h)。应用类似于所描述的实施例13、26或32的合成方法制得下述实施例33-63的化合物。
实施例64应用atr酶活性实验测定(r)-3-甲基-4-(8-(1-甲基-1h-吡唑-5-基)-3-(1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)吗啉与其相似物对atr酶活性的抑制效应atr酶活性的检测是采用cisbio的htrf试剂，在384孔板(greiner，#784075)中进行。将待测化合物用反应缓冲液(25mm hepes(ph8.0),10mm mncl2,1％甘油,0.01％brij-35,5mm dtt和0.1％bsa)梯度稀释成4倍终浓度，取2.5μl加入到对应板孔中，再依次加入2.5μl的80nm的p53底物(eurofins，#14-952)和2.5μl的2ng/μl的atr/atrip酶(eurofins，
14-953)溶液，最后加入2.5μl的40μm的atp溶液，1000rpm转速离心1分钟，在室温避光反应30分钟。之后加入5μl的edta终止液(250mm)终止反应。在每孔中最后加入5μl检测混合物(anti-phospho-p53(ser15)-k(cisbio,#61p08kae,0.084ng/μl)和anti-gst-d2(cisbio,#61gstdla,5.00ng/μl))后，在envision 2104仪器上检测665nm和615nm的荧光值。计算相对荧光比值：ratio
665nm
/
615nm-ratio
背景
，并计算抑制率％＝(1
–
(待测化合物孔的相对荧光比值
–
阳性对照孔的相对荧光比值)/(空白对照孔的相对荧光比值
–
阳性对照孔的相对荧光比值))
×
100，使用软件graphpad prism6.0分析数据，以曲线方程：y＝bottom (top-bottom)/(1 10^((logic
50-x)*hillslope))进行拟合，计算ic
50
值。表1汇总了化合物的atr激酶活性的抑制效应(ic
50
)。表2汇总了化合物在50nm对atr激酶活性的抑制效应(inh％)。表1example12561321ic
50
(nm)》1000093858.937946.78example222324252632ic
50
(nm)2.06》100027615example373940414243ic
50
(nm)7322212example454647484950ic
50
(nm)512111616example52bay-1895344
ꢀꢀꢀꢀ
ic
50
(nm)942*
ꢀꢀꢀꢀ
*：此ic
50
值是通过与实施例13的化合物比较而获得。表2example113335363844inh％632771639058因此，经atr酶活性实验测定，(r)-3-甲基-4-(4-(1-甲基-1h-吡唑-5-基)-7-(1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,5-b]哒嗪-2-基)吗啉(实施例13)及其同类化合物对atr激酶活性有好的抑制效应。实施例65应用mtt检测法测定(r)-3-甲基-4-(8-(1-甲基-1h-吡唑-5-基)-3-(1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)吗啉与其相似物对人前列腺癌细胞du145增长的抑制作用将复苏的人前列腺癌细胞du145培养传代至生长状态良好，当融合度达90％左右时，用于实验。用胰酶消化细胞，800rpm转速离心5min，弃上清，用新鲜培基(dmem培养基 10％fbs 非必需氨基酸)重悬，并计数，以每孔2000个细胞的密度接种至96孔细胞培养板中，置于37℃5％co2培养箱培养过夜。受试物(包括待测化合物和参考化合物bay-1895344)母液用dmso按1:3和1:10比例分别进行连续系列稀释8个浓度，每个浓度取5μl加入到120μl培基(25倍稀释)，振荡混匀。取培养过夜的细胞，除去培养基，每孔加入195μl新鲜培养基，再分别加入5μl稀释好的含相应浓度化合物的培基(化合物终浓度见表3，dmso终浓度为1
‰
)，随后将培养板置于37℃5％co2培养箱培养4天。除去原液，每孔加100μl含mtt(0.5mg/
ml)的新鲜无血清dmem培基后，继续培养。4h后除去原液，每孔加入100μl dmso，避光震荡10min，置于多功能读数仪读取552/690nm波长的吸光值。用软件graph pad prism 6.0分析数据，化合物对细胞增殖的抑制活性以细胞存活率对化合物浓度对数为坐标绘图。细胞存活率％＝(od
化合物-od
背景
)/(od
dmso-od
背景
)
×
100。ic
50
值以s形剂量反应曲线方程拟合，曲线方程为：y＝100/(1 10^(logc-logic
50
))，c是化合物浓度。表2汇总了化合物对人前列腺癌细胞du145增长的抑制作用数据(ic
50
)。表3实施例234678910ic
50
(nm)121710971093913.71196110816312298实施例1316bay-1895344
ꢀꢀꢀꢀꢀ
ic
50
(nm)130.9137433.92*
ꢀꢀꢀꢀꢀ
*：此ic
50
值是通过与实施例13的化合物比较而获得。因此，经mtt检测法测定，(r)-3-甲基-4-(8-(1-甲基-1h-吡唑-5-基)-3-(1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)吗啉(实施例2)对du145细胞增长有抑制作用。(r)-3-甲基-4-(4-(1-甲基-1h-吡唑-5-基)-7-(1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,5-b]哒嗪-2-基)吗啉(实施例13)对du145细胞增长有好的抑制作用。实施例66应用mtt检测法测定(r)-3-甲基-4-(8-(1-甲基-1h-吡唑-5-基)-3-(1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)吗啉与其相似物对人肺癌细胞nci-h460增长的抑制作用将复苏的人肺癌细胞nci-h460培养传代至生长状态良好，当融合度达90％左右时，用于实验。用胰酶消化细胞，800rpm转速离心5min，弃上清，用新鲜培基(1640培养基 10％fbs)重悬，并计数，以每孔2000/4000个细胞的密度接种至96孔细胞培养板中，置于37℃5％co2培养箱培养过夜。受试物(包括待测化合物和参考化合物bay-1895344)母液用dmso按1:3和1:10比例分别进行连续系列稀释至8个浓度，每个浓度取5μl加入到120μl培基(25倍稀释)，振荡混匀。取培养过夜的细胞，除去培养基，每孔加入195μl新鲜培养基，再分别加入5μl稀释好的含相应浓度化合物的培基(dmso终浓度为1
‰
)，随后将培养板置于37℃5％co2培养箱培养4天。除去原液，每孔加100μl含mtt(0.5mg/ml)的新鲜无血清dmem培基后，继续培养。4h后除去原液，每孔加入100μl dmso，避光震荡10min，置于多功能读数仪读取552/690nm波长的吸光值。细胞存活率(％)＝(od
化合物-od
背景
)/(od
dmso-od
背景
)
×
100。用软件graph pad prism 6.0分析数据，化合物对细胞增殖的抑制活性以细胞存活率对化合物浓度对数为坐标绘图。ic
50
值以s形剂量反应曲线方程拟合，曲线方程为：y＝100/(1 10^(logc-logic
50
))，c是化合物浓度。表3汇总了化合物对人肺癌细胞nci-h460增长的抑制作用数据(ic
50
)。表4
*：此ic
50
值是通过与实施例13的化合物比较而获得。因此，经mtt检测法测定，(r)-3-甲基-4-(8-(1-甲基-1h-吡唑-5-基)-3-(1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)吗啉(实施例2)对nci-h460细胞增长有抑制作用。(r)-3-甲基-4-(4-(1-甲基-1h-吡唑-5-基)-7-(1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,5-b]哒嗪-2-基)吗啉(实施例13)对nci-h460细胞增长有好的抑制作用。实施例67应用mtt检测法测定(r)-3-甲基-4-(8-(1-甲基-1h-吡唑-5-基)-3-(1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)吗啉与其相似物对人结肠癌细胞lovo增长的抑制作用将复苏的人结肠癌细胞lovo培养传代至生长状态良好，当融合度达90％左右时，用于实验。用胰酶消化细胞，800rpm转速离心5min，弃上清，用新鲜培基(1640培养基 10％fbs)重悬，并计数，以每孔2000/4000个细胞的密度接种至96孔细胞培养板中，置于37℃5％co2培养箱培养过夜。受试物(包括待测化合物和参考化合物bay-1895344)母液用dmso按1:3和1:10比例分别进行连续系列稀释至8个浓度，每个浓度取5μl加入到120μl培基(25倍稀释)，振荡混匀。取培养过夜的细胞，除去培养基，每孔加入195μl新鲜培养基，再分别加入5μl稀释好的含相应浓度化合物的培基(dmso终浓度为1
‰
)，随后将培养板置于37℃5％co2培养箱培养4天。除去原液，每孔加100μl含mtt(0.5mg/ml)的新鲜无血清dmem培基后，继续培养。4h后除去原液，每孔加入100μl dmso，避光震荡10min，置于多功能读数仪读取552/690nm波长的吸光值。细胞存活率(％)＝(od
化合物-od
背景
)/(od
dmso-od
背景
)
×
100。用软件graph pad prism 6.0分析数据，化合物对细胞增殖的抑制活性以细胞存活率对化合物浓度对数为坐标绘图。ic
50
值以s形剂量反应曲线方程拟合，曲线方程为：y＝100/(1 10^(logc-logic
50
))，c是化合物浓度。表5汇总了化合物对人结肠癌细胞lovo增长的抑制作用数据(ic
50
)。表5example511121315212223ic
50
(nm)557.2167.7322653.5597.3155.1854.31528
example2425262732333435ic
50
(nm)34.3961.9268.20124.087.31230.3953.375.39example3637383940414243ic
50
(nm)114.045.02127.930.7421.8349.5244.6923.12example4445464748495051ic
50
(nm)138.284.1572.8020.73133.432.9459.8776.66example525561bay-1895344
ꢀꢀꢀꢀ
ic
50
(nm)41.8751.02175.326.02
ꢀꢀꢀꢀ
*：此ic
50
值为与实施例13化合物做对比实验所得。因此，经mtt检测法测定，(r)-3-甲基-4-(8-(1-甲基-1h-吡唑-5-基)-3-(1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)吗啉(实施例2)对lovo细胞增长有抑制作用。(r)-3-甲基-4-(4-(1-甲基-1h-吡唑-5-基)-7-(1h-吡唑-5-基)咪唑并[1,5-b]哒嗪-2-基)吗啉(实施例13)对lovo细胞增长有好的抑制作用。
[0120]
虽然已经充分地描述了本发明，但是本领域技术人员应当理解，可在不影响本发明范围或其任何实施方案的情况下，在广泛且等同的条件、制剂和其它参数范围内进行相同实施。本文所引用的所有专利、专利申请和出版物都全文引入本文以供参考。