用于减少聚集的缓冲剂组合物的制作方法

用于减少聚集的缓冲剂组合物
1.相关申请的交叉引用
2.本技术要求2019年7月26日提交的美国临时专利申请序号62/879,310的优先权，在此通过引用将其整体并入本文。
技术领域
3.本公开涉及组合物、试剂盒和方法，包括例如缓冲剂组合物(buffer compositions)、包含其的测定试剂盒、其用途和阴道障碍或/和其相关性传播疾病的诊断测试方法。在一些实施方案中，该组合物、试剂盒和方法实现了来自生物样品的稳健的高性能诊断测试，特别是在存在干扰物质的情况下。一些实施方式涉及利用本文公开的组合物、试剂盒和方法对来自临床阴道拭子的外阴阴道念珠菌病(vulvovaginal candidiasis)相关念珠菌(candida)物种、引起滴虫病的阴道毛滴虫(trichomonas vaginalis)和/或细菌性阴道病相关细菌进行的基于核酸的检测和鉴定，所述拭子取样自显示阴道炎和/或阴道病临床症状的女性。在一些实施方式中，性传播疾病，包括衣原体(病)(chlamydia)、淋病、滴虫病，通过利用本文公开的基于核酸的组合物、试剂盒和方法来诊断。


背景技术：

4.念珠菌是酵母菌属，并且是全世界真菌感染的最常见原因。许多念珠菌物种被发现是无害的共生菌，是宿主正常菌群的一部分，并且可以是包括人类在内的宿主的内共生体。然而，在宿主失衡或免疫受损的情况下，已知念珠菌会入侵并引起疾病。已知一些念珠菌物种，如克氏念珠菌(c.krusei)和光滑念珠菌(c.glabrata)，与外阴阴道念珠菌病(vvc)相关。阴道毛滴虫(t.vaginalis)是一种厌氧的、有鞭毛的原生动物寄生虫，其是滴虫病的致病体。细菌性阴道病(bv)是由阴道内细菌正常平衡的改变所引起的阴道感染。
5.性传播的感染(sti)，如衣原体(病)(ct)、淋病(gc)和滴虫病(tv)，构成了巨大且渐增的公共健康负担。尽管这些感染中的大多数是无症状的，但如果不加以解决，其可具有严重的后果，包括盆腔炎性疾病(pid)、异位妊娠、不孕症、早产或低出生体重婴儿以及男性和女性sti传播或感染(包括hiv)风险增加。
6.基于阴道障碍和/或性传播疾病准确诊断的靶向治疗对于改善患者生活质量和实现更好的临床结果是必要的。测定平台和方法，涉及用于核酸提取的功能化颗粒的流体操作，已被开发用于vvc、滴虫病、bv、ct、gc和tv的诊断测试和治疗干预。一些这样的测定对于被测试的生物样品中存在的甚至痕量的干扰物质是敏感的。特别是，临床阴道拭子样品可被凝胶(如患者使用的非处方个人护理乳膏和取样前检查程序中引入的临床用润滑剂污染。许多干扰凝胶含有聚电解质，如卡波姆(carbomers)(聚丙烯酸)，其能够与核酸提取测定中部署的功能化颗粒相互作用。如果转移到测定盒中，干扰凝胶可导致功能化颗粒在流体通道中聚集，堵塞流体通道，和/或抑制靶标核酸的聚合酶链反应(pcr)。因此，在存在干扰物质的情况下，许多基于核酸的测定不仅会产生更多的报告错误(假阳性和假阴性)，而且产生增加的不可报告的结果(例如，由于内部控制失败而导致的未解析结果、由于噪音过
度而导致的不确定结果等)。例如，颗粒聚集导致功能化损失，并且可从而降低测定灵敏度和增加未解析结果的比率。通道堵塞可增加不确定结果的比率；以及pcr抑制可增加假阴性比率。


技术实现要素：

7.测定中采用的标准缓冲剂(如上面讨论的那些)一般以唯一目的被设计：在收集后保存生物样品以供后续诊断分析。鉴于临床样品中常存在的干扰物质相关的各种不利事件，迫切需要开发新的缓冲剂组合物(及其相关方法)，为芯片上样品处理和随后的阴道障碍检测(例如，外阴阴道念珠菌病、滴虫病、细菌性阴道病等)提供更大的干扰稳健性，同时保持临床效率。在前段中讨论的微流体测定的情况下，特别需要防止颗粒聚集、通道堵塞和pcr抑制的发生和/或减轻其后果。进一步需要能够与各种临床工作流程相容的新型缓冲剂组合物，导致更迅速的诊断、更有效的治疗和更好的患者结果。
8.本公开的实施方式涉及用于基于核酸检测和鉴定阴道障碍和/或性传播疾病的组合物、试剂盒和方法——特别是来自含有干扰物质的阴道样品。一些公开的实施方式涉及用于防止或减少表面功能化颗粒(例如，用于核酸提取和/或纯化的微流体pcr装置中部署的那些)聚集的缓冲剂组合物、试剂盒和方法。一些实施方式可以提高来自阴道病原生物体的核酸的扩增和/或检测效率。本领域技术人员将理解，本文所述的组合物、试剂盒和方法的应用不限于具体样品或具体阴道障碍。
9.本文公开了缓冲剂组合物。在一些实施方式中，缓冲剂组合物包含：酸和碱共轭对(aconjugate pair of an aicd and a base)；螯合剂或还原剂；非离子表面活性剂；一价或二价盐，选自钠盐、钾盐、钙盐、镁盐及其组合；和任选地杀生物防腐剂(biocidal preservative)，其包含一种或多种异噻唑酮。在一些实施方式中，共轭对包含乙酸及其盐。在一些实施方式中，共轭对包含约50mm至约150mm乙酸。在一些实施方式中，共轭对包含约90mm至约110mm乙酸。在一些实施方式中，共轭对包含约350mm至450mm乙酸钠。在一些实施方式中，共轭对可以以约400mm至约600mm范围内的浓度存在。在一些实施方式中，共轭对包含乙酸和乙酸钠，或tris-hcl。在一些实施方式中，乙酸以不超过200mm的浓度存在，并且乙酸钠可以以不低于300mm的浓度存在。在一些实施方式中，缓冲剂组合物的ph可为约4.0至约6.0，或约1.0至约3.0。在一些实施方式中，缓冲剂组合物的ph可以为约5.0。在一些实施方式中，缓冲剂组合物的ph可为约或约2.4。在一些实施方式中，螯合剂可以包括edta。在一些实施方式中，还原剂包括tcep。在一些实施方式中，螯合剂或还原剂可以以约1mm至约20mm范围内的浓度存在。在一些实施方式中，螯合剂是浓度为约10mm的edta。在一些实施方式中，还原剂是浓度为约15mm的tcep。在一些实施方式中，非离子表面活性剂可选自乙氧基化非离子表面活性剂、丙氧基化非离子表面活性剂、共-乙氧基化-丙氧基化非离子表面活性剂及其组合。在一些实施方式中，非离子表面活性剂可选自乙氧基化单脂肪酸脱水山梨糖醇酯(ethoxylated sorbitan esters of mono-fatty acids)、乙氧基化辛基酚、乙氧基化c1至c20仲醇、共-乙氧基化-丙氧基化种子油醇及其组合。在一些实施方式中，非离子表面活性剂可选自每个表面活性剂含有平均1至50个亚乙基氧单元(ethylene oxide units)的乙氧基化单脂肪酸脱水山梨糖醇酯、每个表面活性剂含有平均1至20个亚乙基氧单元的乙氧基化辛基酚、每个表面活性剂含有平均1至20个亚乙基氧单元的乙氧基化c1至c20仲
醇、每个表面活性剂含有平均1至20个亚丙基氧单元(propylene oxide units)和1至30个亚乙基氧单元的共-乙氧基化-丙氧基化种子油醇、及其组合。在一些实施方式中，非离子表面活性剂可包含一种或多种乙氧基化单脂肪酸脱水山梨糖醇酯。在一些实施方式中，一种或多种乙氧基化单脂肪酸脱水山梨糖醇酯可包含平均1至50个亚乙基氧单元。在一些实施方式中，非离子表面活性剂可包含一种或多种乙氧基化c1至c20仲醇。在一些实施方式中，一种或多种乙氧基化c1至c20仲醇可包含平均1至20个亚乙基氧单元。在一些实施方式中，非离子表面活性剂可包含一种或多种乙氧基化辛基酚。在一些实施方式中，一种或多种乙氧基化辛基酚可包含平均1至20个亚乙基氧单元。在一些实施方式中，非离子表面活性剂可包含一种或多种共-乙氧基化-丙氧基化种子油醇。在一些实施方式中，一种或多种共-乙氧基化-丙氧基化种子油醇可包含平均1至20个亚丙基氧单元和1至30个亚乙基氧单元。在一些实施方式中，非离子表面活性剂是tergitol
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或triton
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表面活性剂。在一些实施方式中，非离子表面活性剂是tergitol
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15-s-9或triton
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x-100。在一些实施方式中，非离子表面活性剂可以以缓冲剂组合物重量的约0.5％至1.5％范围内的浓度存在。在一些实施方式中，非离子表面活性剂以缓冲剂组合物重量的约1.0％范围内的浓度存在。在一些实施方式中，二价盐可以是钙盐。在一些实施方式中，二价盐可以是cacl2。在一些实施方式中，一价或二价盐可以以约100mm至约300mm范围内的浓度存在。在一些实施方式中，一价或二价盐可以以约200mm的浓度存在。在一些实施方式中，杀生物防腐剂可以以缓冲剂组合物重量的约0.03％范围内的浓度存在。在一些实施方式中，杀生物防腐剂可包含按重量计约1％至约5％的一种或多种异噻唑酮。在一些实施方式中，杀生物防腐剂可包含按重量计约2％至约4％的一种或多种异噻唑酮。在一些实施方式中，杀生物防腐剂可包含按重量计约1％至约3％的一种或多种异噻唑酮。在一些实施方式中，所述一种或多种异噻唑酮包括氯甲基异噻唑啉酮和甲基异噻唑啉酮。在一些实施方式中，氯甲基异噻唑啉酮和甲基异噻唑啉酮的重量比为约1:1至约5:1。在一些实施方式中，所述一种或多种异噻唑酮包含重量比为约3:1的5-氯-2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮和2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮。在一些实施方式中，杀生物防腐剂包含无盐专有二醇(salt-free proprietary glycol)和烷基羧酸酯稳定剂中的一种或多种。在一些实施方式中，缓冲剂组合物不含杀生物防腐剂。在一些实施方式中，缓冲剂组合物是实例缓冲剂i，或实例缓冲剂ii，或实例缓冲剂iii。
10.本公开还提供了试剂盒。在一些实施方式中，该试剂盒包含如上文所述和/或本文别处所述的缓冲剂组合物。在一些实施方式中，试剂盒包括容纳缓冲剂组合物的无菌容器。在一些实施方式中，该试剂盒包括诊断阴道感染或炎症相关的状况的手册。在一些实施方式中，所述状况是阴道炎、或阴道病、或性传播疾病、或其组合。在一些实施方式中，所述状况是外阴阴道念珠菌病(vvc)、滴虫病或细菌性阴道病(bv)或其组合。在一些实施方式中，所述状况是性传播疾病，例如衣原体(病)(ct)、淋病(gc)、滴虫病(tv)或其组合。
11.本公开提供了防止或减少表面功能化颗粒聚集的方法，包括使样品与如上文所述和/或本文别处所述的缓冲剂组合物接触。在一些实施方式中，样品包含多个表面功能化颗粒；并且与不存在缓冲剂组合物时的聚集水平相比，在存在缓冲剂组合物的情况下所述多个表面功能化颗粒的聚集水平降低。在一些实施方式中，与不存在缓冲剂组合物时的聚集水平相比，在存在缓冲剂组合物的情况下所述多个表面功能化颗粒的聚集水平可以降低至少1％。在一些实施方式中，与不存在缓冲剂组合物时的聚集水平相比，在存在缓冲剂组合
物的情况下所述多个表面功能化颗粒的聚集水平降低至少5％。在一些实施方式中，与不存在缓冲剂组合物时的聚集水平相比，在存在缓冲剂组合物的情况下所述多个表面功能化颗粒的聚集水平降低至少10％。在一些实施方式中，样品是临床样品。在一些实施方式中，样品是阴道样品。在一些实施方式中，样品是临床阴道拭子。在一些实施方式中，样品是从阴道收集的。在一些实施方式中，样品是从显示阴道炎、阴道病、性传播疾病(例如，衣原体(病)(ct)、淋病(gc)、滴虫病(tv))或其组合的临床症状的对象收集的。在一些实施方式中，样品是从显示阴道炎或阴道病或两者的临床症状的对象收集的。在一些实施方式中，样品是从显示衣原体(病)(ct)、淋病(gc)、滴虫病(tv)或其组合的临床症状的对象收集的。在一些实施方式中，样品可以包含多种核酸。在一些实施方式中，所述多种核酸来自一种或多种外阴阴道念珠菌病(vvc)相关念珠菌物种、引起滴虫病的阴道毛滴虫、一种或多种细菌性阴道病(bv)相关细菌或其组合。在一些实施方式中，一种或多种vvc相关念珠菌物种可包括光滑念珠菌(candida glabrata)、白色念珠菌(candida albicans)、热带念珠菌(candida tropicalis)、都柏林念珠菌(c.dubliniensis)、近平滑念珠菌(c.parapsilosis)、克氏念珠菌或其组合。在一些实施方式中，一种或多种bv相关细菌可以包括卷曲乳杆菌(lactobacillus crispatus)、詹氏乳杆菌(lactobacillus jensenii)、阴道加德纳菌(gardnerella vaginalis)、阴道异位菌(atopobium vaginae)、巨球型菌(megasphaera)1型、巨球型菌bvab2或其组合。在一些实施方式中，该方法可以进一步包括扩增和/或检测所述多种核酸，其中与不存在缓冲剂组合物时的效率相比，在存在缓冲剂组合物的情况下所述多种核酸的扩增和/或检测效率提高。在一些实施方式中，与不存在缓冲剂组合物时的效率相比，在存在缓冲剂组合物的情况下所述多种核酸的扩增和/或检测效率提高至少1％。在一些实施方式中，与不存在缓冲剂组合物时的效率相比，在存在缓冲剂组合物的情况下所述多种核酸的扩增和/或检测效率提高至少5％。在一些实施方式中，表面功能化颗粒可包含小于1mm的平均直径。在一些实施方式中，表面功能化颗粒被配置用于核酸提取、纯化、扩增、检测或其组合。在一些实施方式中，聚集是由样品中的干扰物质引起的。在一些实施方式中，聚集可以发生在微流体通道中。在一些实施方式中，干扰物质选自润滑剂、凝胶、乳膏及其组合。在一些实施方式中，干扰物质可以包括包含一种或多种卡波姆的凝胶。在一些实施方式中，干扰物质可包含不包含任何卡波姆的凝胶。
12.本文所述的替代或另外的实施方式提供了缓冲剂组合物，其包含前文描述或本文别处任何描述的特征中的一个或多个。
13.本文所述的替代或另外的实施方式提供了试剂盒，其包含前文描述或本文别处任何描述的特征中的一个或多个。
14.本文所述的替代或另外的实施方式提供了防止或减少表面功能化颗粒聚集的方法，其包括前文描述或本文别处任何描述的特征中的一个或多个。
附图说明
15.图1显示了实施例2至9中所研究的按地理区域划分的263名临床阴道拭子样品捐献者的组成的饼图。
16.图2至4示例了通过利用本文公开的缓冲剂组合物的实施方式(参见下表1)实现的在bd max
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pcr盒中减少颗粒聚集和防止微流体堵塞的实施方式。
17.图2a-2b显示了bd max
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pcr盒的实施方式的照片，其中每一个都已用于不含干扰凝胶的临床阴道拭子样品的诊断测试中。
18.图3a-3b显示了bd max
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pcr盒的照片的实施方式，其中每一个都已用于含有以10μl存在的基于卡波姆系干扰凝胶mckesson的临床阴道拭子样品的诊断测试。图4a-4b显示了用于测试以10μl存在的另外的干扰凝胶e-z brand(medline industries,inc.)的bd max
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pcr盒的照片的另外的实施方式(图4a-4b)。
19.图5-6示例了在以下两种代表性干扰凝胶存在下与比较缓冲剂相比实例缓冲剂ii提供的改善的测定性能的实施方式：e-z润滑冻胶(medline industries,inc.)(图5a-5f)和非卡波姆系(图6a-6f)。用于检测细菌性阴道病(bv)的测定的实施方式在bd max
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系统上利用比较缓冲剂或实例缓冲剂进行。利用比较缓冲剂按照常规工作流程(图5a、5d、6a、6d)，利用比较缓冲剂按照优化的工作流程(图5b、5e、6b、6e)，和利用实例缓冲剂按照优化的工作流程(图5c、5f、6c、6f)，生成三组散点图。
具体实施方式
20.本文使用的章节标题仅用于组织目的，并且不被解释为以任何方式限制所描述的主题。本技术中引用的所有文献和类似材料，包括但不限于专利、专利申请、文章、书籍、论文和互联网网页，无论这种文献和类似材料的格式如何，均通过引用明确并入其整体用于任何目的。如果一个或多个并入的文献和类似材料定义或使用某个术语的方式与该术语在本技术中的使用相矛盾，则以本技术为准。尽管结合各种实施方式描述了本教导，但并不意图本教导限于这种实施方式。相反，本教导包括各种替代形式、变型和等同形式，如本领域技术人员将理解。
21.本文提供了用于基于核酸检测阴道障碍例如外阴阴道念珠菌病(vvc)、滴虫病和/或细菌性阴道病(bv)的缓冲剂组合物、试剂盒和方法。例如，提供在测定期间可以防止或减少表面功能化颗粒的聚集的缓冲剂组合物，例如，部署在用于核酸提取的微流体pcr盒中的那些，以在存在干扰物质的情况下从临床阴道拭子样品中检测病原生物体。在一些实施方式中，缓冲剂组合物可以提高或维持基于核酸的检测的效率——例如，对于vvc相关念珠菌物种、引起滴虫病的阴道毛滴虫和/或bv相关细菌。
22.如本文所用，“核酸”鉴于本公开具有其普通常规含义，并且指代包含核苷或核苷类似物的聚合化合物，该核苷或核苷类似物具有含氮杂环碱基或碱基类似物，通过核酸骨架连接(例如，磷酸二酯键)连接在一起以形成多核苷酸。核酸的非限制性实例包括rna、dna及其类似物。核酸骨架可以包括多种连接，例如在单个寡核苷酸中下列中的一种或多种：糖-磷酸二酯连接、肽-核酸键、硫代磷酸酯或甲基膦酸酯键或这种连接的混合物。核酸中的糖部分是核糖或脱氧核糖，或具有已知取代的类似化合物。常规的含氮碱基(例如，a、g、c、t、u)、已知的碱基类似物(例如，肌苷)、嘌呤或嘧啶碱基衍生物和“无碱基”残基(即，一个或多个骨架位置没有含氮碱基)被包括在术语核酸内。即，核酸可以仅包括在rna和dna中发现的常规糖、碱基和连接，或者包括常规组分和取代(例如，通过甲氧基骨架连接的常规碱基和类似物，或通过rna或dna骨架连接的常规碱基和一种或多种碱基类似物)。
23.如本文所用，“共轭对”鉴于本公开具有其普通常规含义，并且指代相差一个质子(h

)的酸(ha)和碱(a-)。例如，磷酸二氢钾(kh2po4)和磷酸氢二钾(k2hpo4)是一个共轭对。作
为另一实例，乙酸和乙酸钠(ch3coona)也是一个共轭对。
24.如本文所用，术语“灵敏度”鉴于本公开具有其普通且常规的含义，并且当提及测试方法的性能时，是真阳性除以真阳性与假阴性之和。本领域技术人员将理解，在提及测试方法的性能时，术语“召回率”、“命中率”和“真阳性率(tpr)”与“灵敏度”是相同的。
25.如本文所用，术语“特异性”鉴于本公开具有其普通常规含义，并且当提及测试方法的性能时，是真阴性除以真阴性与假阳性之和。本领域技术人员将理解，在提及测试方法的性能时，术语“选择性”和“真阴性率(tpr)”与“特异性”是相同的。
26.如本文所用，术语“准确度”鉴于本公开具有其普通常规含义，并且当提及测试方法的性能时，是真阳性与真阴性之和除以真阳性、假阳性、真阴性和假阴性之和。
27.如本文所用，“ca至c
b”(其中“a”和“b”为整数)指代化合物中的碳原子数。
28.缓冲剂组合物
29.本文公开的一些实施方式提供了缓冲剂组合物。在一些实施方式中，缓冲剂组合物包含酸和碱共轭对、螯合剂、非离子表面活性剂、一价或二价盐和任选地杀生物防腐剂。在一些实施方式中，缓冲剂组合物包含本文公开的任何含量或含量范围的酸和碱共轭对、螯合剂、非离子表面活性剂、一价或二价盐，以及任选地杀生物防腐剂，包括以下(情况)。
30.在一些实施方式中，共轭对中的所述碱是所述酸的盐。在一些实施方式中，酸包括乙酸。在一些实施方式中，碱包括乙酸的盐。在一些实施方式中，共轭对包含乙酸及其盐。在一些实施方式中，碱包括乙酸钠。在一些实施方式中，共轭对包含乙酸和乙酸钠。在一些实施方式中，缓冲剂包含tris-hcl。在一些实施方式中，酸(例如，乙酸)的浓度为以下浓度、或约以下的浓度、或不大于以下的浓度、或不大于约以下的浓度、或不小于以下的浓度、不小于约以下的浓度：5mm、10mm、15mm、20mm、25mm、30mm、35mm、40mm、45mm、50mm、55mm、60mm、65mm、70mm、75mm、80mm、85mm、90mm、95mm、100mm、105mm、110mm、115mm、120mm、125mm、130mm、135mm、140mm、145mm、150mm、155mm、160mm、165mm、170mm、175mm、180mm、185mm、190mm、195mm、200mm、205mm、210mm、215mm、220mm、225mm、230mm、235mm、240mm、245mm、250mm、255mm、260mm、265mm、270mm、275mm、280mm、285mm、290mm、295mm、300mm、305mm、310mm、315mm、320mm、325mm、330mm、335mm、340mm、345mm、350mm、355mm、360mm、365mm、370mm、375mm、380mm、385mm、390mm、395mm、400mm、405mm、410mm、415mm、420mm、425mm、430mm、435mm、440mm、445mm、450mm、455mm、460mm、465mm、470mm、475mm、480mm、485mm、490mm、495mm、或500mm、或这些值中任意两个之间的范围。在一些实施方式中，酸(例如，乙酸)的浓度为5mm至100mm、5mm至250mm、200至400mm、250mm至500mm、300mm至500mm或400mm至500mm。在一些实施方式中，碱(例如，乙酸钠)的浓度为以下浓度、或约以下的浓度、或不大于以下的浓度、或不大于约以下的浓度、或不小于以下的浓度、不小于约以下的浓度：5mm、10mm、15mm、20mm、25mm、30mm、35mm、40mm、45mm、50mm、55mm、60mm、65mm、70mm、75mm、80mm、85mm、90mm、95mm、100mm、105mm、110mm、115mm、120mm、125mm、130mm、135mm、140mm、145mm、150mm、155mm、160mm、165mm、170mm、175mm、180mm、185mm、190mm、195mm、200mm、205mm、210mm、215mm、220mm、225mm、230mm、235mm、240mm、245mm、250mm、255mm、260mm、265mm、270mm、275mm、280mm、285mm、290mm、295mm、300mm、305mm、310mm、315mm、320mm、325mm、330mm、335mm、340mm、345mm、350mm、355mm、360mm、365mm、370mm、375mm、380mm、385mm、390mm、395mm、400mm、405mm、410mm、415mm、420mm、425mm、430mm、435mm、440mm、445mm、450mm、
455mm、460mm、465mm、470mm、475mm、480mm、485mm、490mm、495mm、或500mm、或这些值中任意两个之间的范围。在一些实施方式中，碱(例如，乙酸钠)的浓度为5mm至100mm、5mm至250mm、200至400mm、250mm至500mm、300mm至500mm或400mm至500mm。在一些实施方式中，共轭对包含约350mm至450mm乙酸钠。在一些实施方式中，共轭对包含约50mm至约150mm乙酸。在一些实施方式中，共轭对包含约90mm至约110mm乙酸。在一些实施方式中，共轭对以以下浓度、或约以下的浓度、或不大于以下的浓度、或不大于约以下的浓度、或不小于以下的浓度、不小于约以下的浓度存在：5mm、10mm、15mm、20mm、25mm、30mm、35mm、40mm、45mm、50mm、55mm、60mm、65mm、70mm、75mm、80mm、85mm、90mm、95mm、100mm、105mm、110mm、115mm、120mm、125mm、130mm、135mm、140mm、145mm、150mm、155mm、160mm、165mm、170mm、175mm、180mm、185mm、190mm、195mm、200mm、205mm、210mm、215mm、220mm、225mm、230mm、235mm、240mm、245mm、250mm、255mm、260mm、265mm、270mm、275mm、280mm、285mm、290mm、295mm、300mm、305mm、310mm、315mm、320mm、325mm、330mm、335mm、340mm、345mm、350mm、355mm、360mm、365mm、370mm、375mm、380mm、385mm、390mm、395mm、400mm、405mm、410mm、415mm、420mm、425mm、430mm、435mm、440mm、445mm、450mm、455mm、460mm、465mm、470mm、475mm、480mm、485mm、490mm、495mm、500mm、505mm、510mm、515mm、520mm、525mm、530mm、535mm、540mm、545mm、550mm、555mm、560mm、565mm、570mm、575mm、580mm、585mm、590mm、595mm、600mm、605mm、610mm、615mm、620mm、625mm、630mm、635mm、640mm、645mm、650mm、655mm、660mm、665mm、670mm、675mm、680mm、685mm、690mm、695mm、700mm、705mm、710mm、715mm、720mm、725mm、730mm、735mm、740mm、745mm、750mm、755mm、760mm、765mm、770mm、775mm、780mm、785mm、790mm、795mm、800mm、805mm、810mm、815mm、820mm、825mm、830mm、835mm、840mm、845mm、850mm、855mm、860mm、865mm、870mm、875mm、880mm、885mm、890mm、895mm、或900mm、或这些值中任意两个之间的范围。在一些实施方式中，共轭对(例如，乙酸和乙酸钠或tris-hcl)的浓度为5mm至100mm、5mm至250mm、200至400mm、250mm至500mm、300mm至500mm、400mm至500mm、5mm至1m、300mm至700mm、500mm至900mm、750mm至1m或800mm至1m。在一些实施方式中，共轭对以约400mm至约600mm范围内的浓度存在。在一些实施方式中，共轭对包含乙酸和乙酸钠。在一些实施方式中，乙酸以不大于200mm的浓度存在，并且乙酸钠以不小于300mm的浓度存在。在一些实施方式中，共轭物是浓度10mm的tris-hcl。
31.在一些实施方式中，缓冲剂组合物的ph是以下、或约以下、或不大于以下、或不大于约以下、或不小于以下、或不小于约以下：1.0、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、或8.0、或这些值任一个之间的范围。在一些实施方式中，缓冲剂组合物的ph为约4.0至约6.0。在一些实施方式中，缓冲剂组合物的ph约为5.0。
32.在一些实施方式中，螯合剂包括但不限于乙二胺四乙酸(edta)、乙二胺、氨基酸如谷氨酸和组氨酸、有机二酸如草酸、丙二酸、琥珀酸等以及前述的药学上的可接受的盐。在一些实施方式中，螯合剂包含edta。在一些实施方式中，螯合剂(例如edta)的浓度是以下、或约以下、或不大于以下、或不大于约以下、或不小于以下、或不小于约以下：0.2mm、0.5mm、0.8mm、0.9mm、1mm、2mm、3mm、4mm、5mm、6mm、7mm、8mm、9mm、10mm、11mm、12mm、13mm、14mm、
15mm、16mm、17mm、18mm、19mm、或20mm、或这些值中任意两个之间的范围。在一些实施方式中，螯合剂以约1mm至约20mm、0.2mm至2mm、1mm至7mm、16mm至20mm、10mm至20mm或4mm至8mm范围内的浓度存在。在一些实施方式中，螯合剂(例如，edta)的浓度为约10mm。
33.在一些实施方式中，非离子表面活性剂选自乙氧基化非离子表面活性剂、丙氧基化非离子表面活性剂、共-乙氧基化-丙氧基化非离子表面活性剂及其组合。在一些实施方式中，非离子表面活性剂选自乙氧基化单脂肪酸脱水山梨糖醇酯、乙氧基化辛基酚、乙氧基化c1至c20仲醇、共-乙氧基化-丙氧基化种子油醇及其组合。在一些实施方式中，非离子表面活性剂选自：每个表面活性剂含有平均1至50个亚乙基氧单元的乙氧基化单脂肪酸脱水山梨糖醇酯、每个表面活性剂含有平均1至20个亚乙基氧单元的乙氧基化辛基苯酚、每个表面活性剂含有平均1至20个亚乙基氧单元的乙氧基化c1至c20仲醇、每个表面活性剂含有平均1至20个亚丙基氧单元和1至30个亚乙基氧单元的共-乙氧基化-丙氧基化种子油醇及其组合。在一些实施方式中，非离子表面活性剂包含一种或多种乙氧基化单脂肪酸脱水山梨糖醇酯。在一些实施方式中，一种或多种乙氧基化单脂肪酸脱水山梨糖醇酯含有平均1到50个亚乙基氧单元。在一些实施方式中，非离子表面活性剂包括吐温表面活性剂。在一些实施方式中，非离子表面活性剂包括吐温20表面活性剂、吐温40表面活性剂、吐温60表面活性剂、吐温80表面活性剂或其组合。在一些实施方式中，表面活性剂是ecosurf
tm
表面活性剂(dow chemical co.)，例如ecosurf
tm
sa-4、sa-7、sa-9或sa-15表面活性剂。在一些实施方式中，非离子表面活性剂包含一种或多种乙氧基化c1至c20仲醇。在一些实施方式中，一种或多种乙氧基化c1至c20仲醇包含平均1至20个亚乙基氧单元。在一些实施方式中，非离子表面活性剂包括tergitol
tm
表面活性剂(signma-aldrich)，例如tergitol
tm
15-s-9表面活性剂。在一些实施方式中，非离子表面活性剂包含一种或多种乙氧基化辛基酚。一种或多种乙氧基化辛基酚中的一些含有平均1至20个亚乙基氧单元。在一些实施方式中，非离子表面活性剂包括triton表面活性剂，例如triton x-100表面活性剂。在一些实施方式中，非离子表面活性剂包含一种或多种共-乙氧基化-丙氧基化种子油醇。所述一种或多种共-乙氧基化-丙氧基化种子油醇中的一些包含平均1至20个亚丙基氧单元和1至30个亚乙基氧单元。在一些实施方式中，非离子表面活性剂包括ecosurf
tm
表面活性剂。非离子表面活性剂在缓冲剂组合物中以以下浓度、或约以下浓度、或不大于以下的浓度、或不大于约以下的浓度、或不小于以下的浓度、或不小于约以下的浓度存在：缓冲剂组合物的按重量计0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％、1.0％、1.1％、1.2％、1.3％、1.4％、1.5％、1.6％、1.7％、1.8％、1.9％、2.0％、2.1％、2.2％、2.3％、2.4％、2.5％、2.6％、2.7％、2.8％、2.9％、或3.0％、或这些值中任意两个之间的范围。在一些实施方式中，非离子表面活性剂以约0.5％至1.5％、0.1％至3.0％、0.8％至1.9％、1.0％至2.0％、2.5％至3％或0.7％至2.6％的浓度存在。在一些实施方式中，非离子表面活性剂以缓冲剂组合物按重量计约1.0％范围内的浓度存在。
34.在一些实施方式中，一价或二价盐选自钠盐、钾盐、钙盐、镁盐或其组合。在一些实施方式中，二价盐是钙盐。在一些实施方式中，二价盐是cacl2。在一些实施方式中，一价或二价盐以以下浓度、或约以下浓度、或不大于以下的浓度、或不大于约以下的浓度、或不小于以下的浓度、或不小于约以下的浓度存在：5mm、10mm、15mm、20mm、25mm、30mm、35mm、40mm、45mm、50mm、55mm、60mm、65mm、70mm、75mm、80mm、85mm、90mm、95mm、100mm、105mm、110mm、
115mm、120mm、125mm、130mm、135mm、140mm、145mm、150mm、155mm、160mm、165mm、170mm、175mm、180mm、185mm、190mm、195mm、200mm、205mm、210mm、215mm、220mm、225mm、230mm、235mm、240mm、245mm、250mm、255mm、260mm、265mm、270mm、275mm、280mm、285mm、290mm、295mm、300mm、305mm、310mm、315mm、320mm、325mm、330mm、335mm、340mm、345mm、350mm、355mm、360mm、365mm、370mm、375mm、380mm、385mm、390mm、395mm、400mm、405mm、410mm、415mm、420mm、425mm、430mm、435mm、440mm、445mm、450mm、455mm、460mm、465mm、470mm、475mm、480mm、485mm、490mm、495mm、或500mm、或这些值中任意两个之间的范围。在一些实施方式中，一价或二价盐(例如cacl2)的浓度为5mm至100mm、5mm至250mm、200至400mm、250mm至500mm、300mm至500mm或400mm至500mm。在一些实施方式中，一价或二价盐以约100mm至约300mm范围内的浓度存在。在一些实施方式中，一价或二价盐以约200mm的浓度存在。
35.在一些实施方式中，缓冲剂组合物任选地包括杀生物防腐剂。在一些实施方式中，杀生物防腐剂包含一种或多种异噻唑酮。在一些实施方式中，所述杀生物防腐剂以以下浓度、或约以下浓度、或不大于以下的浓度、或不大于约以下的浓度、或不小于以下的浓度、或不小于约以下的浓度存在：缓冲剂组合物的按重量计0.01％、0.015％、0.02％、0.025％、0.03％、0.035％、0.04％、0.045％、0.05％、0.06％、0.07％、0.08％、0.09％或0.1％、或这些值中任意两个之间的范围。在一些实施方式中，杀生物防腐剂以缓冲剂组合物的按重量计约0.01％至0.1％、0.01％至0.03％、0.025％至0.045％、0.05％至0.1％、0.07％至0.01％或0.04％至0.08％的浓度存在。在一些实施方式中，杀生物防腐剂以缓冲剂组合物的按重量计约0.03％的浓度存在。在一些实施方式中，杀生物防腐剂是proclin
tm
300。在一些实施方式中，杀生物防腐剂proclin
tm
300以缓冲剂组合物的按重量计约0.03％的浓度存在。在一些实施方式中，杀生物防腐剂包含以下，或包含约以下，或包含不大于以下，或包含不大于约以下，或包含不小于以下，或包含约不小于以下的一种或多种异噻唑酮：按重量计0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％、1.0％、1.1％、1.2％、1.3％、1.4％、1.5％、1.6％、1.7％、1.8％、1.9％、2.0％、2.1％、2.2％、2.3％、2.4％、2.5％、2.6％、2.7％、2.8％、2.9％、3.0％、3.1％、3.2％、3.3％、3.4％、3.5％、3.6％、3.7％、3.8％、3.9％、4.0％、4.1％、4.2％、4.3％、4.4％、4.5％、4.6％、4.7％、4.8％、4.9％、5.0％、5.1％、5.2％、5.3％、5.4％、5.5％、5.6％、5.7％、5.8％、5.9％、或6.0％，或在这些值中任意两个之间的范围。在一些实施方式中，杀生物防腐剂以缓冲剂组合物的按重量计约0.1％至6.0％、0.1％至3.0％、1.0％至4.0％、3％至6％、5％至6％或2％至5％的浓度存在。在一些实施方式中，杀生物防腐剂包含按重量计约1％至约5％的一种或多种异噻唑酮。在一些实施方式中，杀生物防腐剂包含按重量计约2％至约4％的一种或多种异噻唑酮。在一些实施方式中，杀生物防腐剂包含按重量计约1％至约3％的一种或多种异噻唑酮。在一些实施方式中，所述一种或多种异噻唑酮包括氯甲基异噻唑啉酮和甲基异噻唑啉酮。在一些实施方式中，氯甲基异噻唑啉酮和甲基异噻唑啉酮处于以下重量比、或约以下重量比、或不大于以下的重量比、或不大于约以下的重量比、或不小于以下的重量比、或不小于约以下的重量比：1:1、1.5:1、2:1、2.5:1 3:1、3:5:1、4:1、4.5:1、5:1、5.5:1、6:1、6.5:1、7:1、7.5:1、8:1、8.5:1、9:1、9.5:1、或10:1、或这些值中任意两个之间的范围。在一些实施方式中，氯甲基异噻唑啉酮和甲基异噻唑啉酮的重量比为约1:1至约5:1。在一些实施方式中，所述一种或多种异噻唑酮包含重量比为约3:1的5-氯-2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮和2-甲
基-4-异噻唑啉-3-酮。在一些实施方式中，杀生物防腐剂包含无盐专有二醇和烷基羧酸酯稳定剂中的一种或多种。在一些实施方式中，缓冲剂组合物用于在测试之前保存样品。在一些实施方式中，缓冲剂组合物不含杀生物防腐剂。
36.在一些实施方式中，缓冲剂组合物包括还原剂。在一些实施方式中，还原剂选自二硫苏糖醇(dtt)、β-巯基乙醇和tcep(三(2-羧基乙基)膦)。在一些实施方式中，还原剂是tcep(三(2-羧基乙基)膦)。在一些实施方式中，还原剂(例如tcep)的浓度是、或是约、或不大于、或不大于约、或不小于、或不小于约：0.2mm、0.5mm、0.8mm、0.9mm、1mm、2mm、3mm、4mm、5mm、6mm、7mm、8mm、9mm、10mm、11mm、12mm、13mm、14mm、15mm、16mm、17mm、18mm、19mm、20mm、25mm、30mm、40mm、或50mm、或这些值中任意两个之间的范围。在一些实施方式中，还原剂以1mm至50mm、1mm至30mm、10mm至20mm范围内的浓度存在。在一些实施方式中，螯合剂(例如，tcep)的浓度为约15mm。
37.示例性缓冲剂组合物
38.以下是非限制性的示例性缓冲剂组合物。在一些实施方式中，缓冲剂包含缓冲剂#1、#2或#3的组分：
[0039][0040]
在上述缓冲剂#1-3的一些实施方式中，酸-碱对选自乙酸/乙酸钠和tris-hcl，螯合剂选自乙二胺四乙酸(edta)、乙二胺、氨基酸如谷氨酸和组氨酸、有机二酸如草酸、丙二酸、琥珀酸等，表面活性剂选自乙氧基化非离子表面活性剂、丙氧基化非离子表面活性剂、共-乙氧基化-丙氧基化非离子表面活性剂及其组合，一价或二价盐选自钠盐、钾盐、钙盐、镁盐或其组合，并且杀生物防腐剂包括一种或更多异噻唑酮。在上述缓冲剂#1-3的一些实施方式中，酸-碱对是乙酸/乙酸钠，螯合剂是edta，表面活性剂是tergitol
tm
15-s-9、triton x-100
tm
、tween
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表面活性剂或ecosurf
tm
表面活性剂，二价盐是cacl2，并且杀生物防腐剂是氯甲基异噻唑啉酮和甲基异噻唑啉酮的组合。在上述缓冲剂#1-3的一些实施方式中，酸-碱对是乙酸/乙酸钠，螯合剂是edta，表面活性剂是tergitol
tm
15-s-9或triton x-100
tm
，二价盐是cacl2，杀菌防腐剂是氯甲基异噻唑啉酮和甲基异噻唑啉酮的组合。在上述缓冲剂#1-3的一些实施方式中，酸-碱对是乙酸/乙酸钠，螯合剂是edta，表面活性剂是tergitol
tm
15-s-9或triton x-100
tm
，二价盐是cacl2，并且杀菌防腐剂是proclin
tm
300。在上述缓冲剂#1-3的一些实施方式中，酸-碱对是乙酸/乙酸钠，螯合剂是edta，表面活性剂是tergitol
tm
15-s-9或triton x-100
tm
，二价盐是cacl2，并且杀菌防腐剂是proclin
tm
300。在上述缓冲剂#1-3的一些实施方式中，酸-碱对是乙酸/乙酸钠，螯合剂是edta，表面活性剂是tergitol
tm
15-s-9，二价盐是cacl2，并且杀生物防腐剂是proclin
tm
300。在上述缓冲剂#1-3的一些实施方式中，
酸-碱对是乙酸/乙酸钠，螯合剂是edta，表面活性剂是triton x-100
tm
，二价盐是cacl2，并且杀生物防腐剂是proclin
tm
300。在缓冲剂#1-3的一些实施方式中，包括上述和本文中的那些，缓冲剂组合物不含杀生物防腐剂。
[0041]
在一些实施方式中，缓冲剂包含缓冲剂#4、#5或#6的组分：
[0042][0043]
在上述缓冲剂#4-6的一些实施方式中，酸-碱对选自乙酸/乙酸钠和tris-hcl，表面活性剂选自乙氧基化非离子表面活性剂、丙氧基化非离子表面活性剂、共-乙氧基化-丙氧基化非离子表面活性剂及其组合，还原剂选自β-巯基乙醇和tcep(三(2-羧基乙基)膦)，并且一价或二价盐选自钠盐、钾盐、钙盐、镁盐或其组合。在上述缓冲剂#4-6的一些实施方式中，酸-碱对是乙酸tris-hcl，表面活性剂是tergitol
tm
15-s-9、triton x-100
tm
、tween
tm
表面活性剂或ecosurf
tm
表面活性剂，还原剂选自β-巯基乙醇和tcep，一价或二价盐为钙盐。在上述缓冲剂#4-6的一些实施方式中，酸-碱对是tris-hcl，表面活性剂是tergitol
tm
15-s-9或triton x-100
tm
，还原剂是tcep(三(2-羧乙基)膦)，并且一价或二价盐is cacl2。在上述缓冲剂#4-6的一些实施方式中，酸-碱对是tris-hcl，表面活性剂是triton x-100
tm
，还原剂是tcep，并且一价或二价盐是cacl2。在一些实施方式中，缓冲剂组合物包含10mm tris-hcl缓冲剂、15mm tcep、1％triton-x100、cacl
2 50-150mm、ph 2.4
±
0.2。在缓冲剂#4-6的一些实施方式中，包括上述和本文的那些，缓冲剂含有本文公开的杀生物防腐剂。在一些实施方式中，杀生物防腐剂是proclin
tm
300。在一些实施方式中，杀生物防腐剂是0.03％含量的proclin
tm
300。在缓冲剂#4-6的一些实施方式中，包括上述和本文的那些，缓冲剂组合物不包含杀生物防腐剂。
[0044]
在一些实施方式中，缓冲剂是实例缓冲剂i或实例缓冲剂ii：
[0045][0046]
在一些实施方式中，缓冲剂是实例缓冲剂iii：
[0047][0048]
试剂盒
[0049]
本文公开的一些实施方式提供了试剂盒。在一些实施方式中，试剂盒包含如上文所述或本文别处所述的缓冲剂组合物。在一些实施方式中，试剂盒包括容纳缓冲剂组合物的无菌容器。在一些实施方式中，该试剂盒还包括微流体盒。在一些实施方式中，微流体盒被配置以促进核酸的处理和检测。在一些实施方式中，微流体盒是一次性的。在一些实施方式中，该试剂盒包括用于诊断阴道感染或炎症相关的状况的手册。在一些实施方式中，所述状况是阴道炎或阴道病或其组合。在一些实施方式中，所述状况是外阴阴道念珠菌病(vvc)、滴虫病或细菌性阴道病(bv)或其组合。在一些实施方式中，所述状况是性传播疾病，例如衣原体(病)(ct)、淋病(gc)、滴虫病(tv)或其组合。
[0050]
方法
[0051]
本文公开的一些实施方式提供了防止或减少表面功能化颗粒的聚集的方法，包括使样品与如上文“缓冲剂组合物”部分中所述或本文别处所述的缓冲剂组合物接触。在一些实施方式中，样品包含多个表面功能化颗粒；并且与不存在缓冲剂组合物时的聚集水平相比，在存在缓冲剂组合物的情况下所述多个表面功能化颗粒的聚集水平降低。
[0052]
在一些实施方式中，与不存在缓冲剂组合物时的聚集水平相比，在存在缓冲剂组合物的情况下，所述多个表面功能化颗粒的聚集水平降低，或降低约，或降低至少，或降低至少约，或降低至多，或降低至多约：0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％.80％、85％、90％、95％、或100％、或这些值中任意两个之间的范围。在一些实施方式中，与不存在缓冲剂组合物时的聚集水平相比，在存在缓冲剂组合物的情况下，所述多个表面功能化颗粒的聚集水平降低至少1％。在一些实施方式中，与不存在缓冲剂组合物时的聚集水平相比，在存在缓冲剂组合物的情况下，所述多个表面功能化颗粒的聚集水平降低至少5％。在一些实施方式中，与不存在缓冲剂组合物时的聚集水平相比，在存在缓冲剂组合物的情况下，所述多个表面功能化颗粒的聚集水平降低至少10％。在一些实施方式中，与不存在缓冲剂组合物时的聚集水平相比，在存在缓冲剂组合物的情况下，所述多个表面功能化颗粒的聚集水平降低1-5％、1-10％、1-20％、1-30％、1-40％、1-50％、1-60％、1-70％、1-80％、1-90％、5-10％、5-20％、5-30％、5-40％、5-50％、5-60％、5-70％、5-80％、5-90％、10-20％、10-30％、10-40％、10-50％、10-60％、10-70％、10-80％、或10-90％。在一些实施方式中，颗粒聚集水平通过利用数字图像处理来测量，其中颗粒聚集物的尺寸通过测量图像(一个或多个)上其直径或二维面积来确定。
[0053]
在一些实施方式中，样品是临床样品。在一些实施方式中，样品是阴道样品。在一
些实施方式中，样品是临床阴道拭子。在一些实施方式中，样品是从阴道收集的。在一些实施方式中，样品是从显示阴道炎或阴道病或两者的临床症状的对象收集的。在一些实施方式中，样品包含多种核酸。在一些实施方式中，样品包含来自一种或多种外阴阴道念珠菌病(vvc)相关念珠菌(candida)物种、引起滴虫病的阴道毛滴虫、一种或多种细菌性阴道病(bv)相关细菌或其组合的多种核酸。在一些实施方式中，一种或多种vvc相关念珠菌物种包括光滑念珠菌、白色念珠菌、热带念珠菌、都柏林念珠菌、近平滑念珠菌、克氏念珠菌或其组合。在一些实施方式中，一种或多种bv相关细菌包括卷曲乳杆菌、詹氏乳杆菌、阴道加德纳菌、阴道异位菌、巨球型菌1型、巨球型菌bvab2或其组合。
[0054]
在一些实施方式中，该方法进一步包括扩增和/或检测所述多种核酸，其中与不存在缓冲剂组合物时的效率相比，在存在缓冲剂组合物的情况下所述多种核酸的和/或检测效率提高。在一些实施方式中，所述多种核酸的扩增和/或检测效率，提高，或提高约，或提高至少，或提高至少约，或提高至多，或最多提高约：1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、或95％、或这些值中任意两个之间的范围——与不存在缓冲剂组合物时的效率相比。在一些实施方式中，与不存在缓冲剂组合物时的效率相比，在存在缓冲剂组合物的情况下所述多种核酸的扩增和/或检测效率提高至少1％。在一些实施方式中，与不存在缓冲剂组合物时的效率相比，在存在缓冲剂组合物的情况下所述多种核酸的扩增和/或检测效率提高至少5％。在一些实施方式中，与不存在缓冲剂组合物时的效率相比，在存在缓冲剂组合物的情况下所述多种核酸的扩增和/或检测效率提高1-10％、1-20％、1-30％、1-40％、1-50％、1-60％、1-70％、1-80％、或1-90％、5-10％、5-20％、5-30％、5-40％、5-50％、5-60％、5-70％、5-80％、5-90％、10-20％、10-30％、10-40％、10-50％、10-60％、10-70％、10-80％、或10-90％。
[0055]
在一些实施方式中，表面功能化颗粒包括小于1mm的平均直径。在一些实施方式中，表面功能化颗粒被配置用于核酸提取、纯化、扩增、检测或其组合。在一些实施方式中，聚集是由样品中的干扰物质诱导的。在一些实施方式中，聚集发生在微流体通道中。
[0056]
在一些实施方式中，干扰物质选自润滑剂、凝胶、乳膏及其组合。在一些实施方式中，干扰物质包括含有一种或多种卡波姆的凝胶。在一些实施方式中，干扰物质包括不包含任何卡波姆的凝胶。
[0057]
本文还公开了在存在干扰物质(一种或多种)的情况下维持或提高样品诊断测试性能的方法。在一些实施方式中，该方法包括将样品转移到如上文“缓冲剂组合物”部分所述或本文别处所述的缓冲剂组合物中。在一些实施方式中，该方法进一步包括，在转移步骤之前，在拭子上从对象收集样品。在一些实施方式中，该方法进一步包括，在转移步骤之后，扩增和检测生物样品中的一种或多种核酸，或者扩增和检测从生物样品提取的一种或多种核酸。
[0058]
在一些实施方式中，所述性能包括灵敏度、特异性、召回率、准确性、迅速性、稳健性或其组合。
[0059]
在一些实施方式中，该方法使不可报告结果的发生率降低，或降低约，或降低至少，或降低至少约，或降低至多，或降低至多约：1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、
85％、90％、或95％、或这些值中任意两个值之间的范围。在一些实施方式中，该方法使不可报告结果的发生率降低至少5％、至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％或至少90％。在一些实施方式中，不可报告结果包括不确定的结果、未解析的结果、不完整的结果或其组合。
[0060]
在一些实施方式中，该方法维持，或维持约，或维持至少，或维持至少约，或维持至多，或维持至多约：1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、或95％准确率，或这些值中任意两个值之间的范围。在一些实施方式中，该方法维持至少90％、至少95％、至少98％或至少99％准确率。在一些实施方式中，准确率通过阳性结果的一致率(agreement rate)、阴性结果的一致率、总体一致率或其组合来测量。
[0061]
实施例
[0062]
以下实施例被提供以显示本技术可适用的具体情形和设置，并且不意图限制本发明和在本公开所包括的权利要求的范围。
[0063]
实施例1
[0064]
对阴道样品进行的诊断测定
[0065]
本部分在此描述的研究示例了通过利用本技术公开的缓冲剂组合物检测可含有干扰物质的临床阴道拭子样品中的阴道障碍例如外阴阴道念珠菌病(vvc)、滴虫病和细菌性阴道病(bv)而实现的诊断测定的稳健性能。例如，该测定在bd max
tm
系统上实施了全自动体外诊断测试，以定性检测念珠菌物种(例如，光滑念珠菌和克氏念珠菌)、阴道毛滴虫和/或bv相关细菌。这些测定合并了基于微流体的样品处理和基于核酸的检测方法。更具体地，该诊断测定利用流体操作的磁性颗粒进行核酸提取，利用实时聚合酶链式反应(pcr)进行目标dna扩增，并利用荧光杂交探针进行目标生物体鉴定。
[0066]
如以下实施例2-9和11中讨论的诊断测定是利用实例缓冲剂i或ii进行的。相比之下，诊断测定还利用比较缓冲剂进行。比较缓冲剂、实例缓冲剂i和实例缓冲剂ii的组成总结在下表1中。表1的比较缓冲剂代表用于阴道障碍或性传播疾病的生物样品制备和诊断检测的普遍“黄金标准”缓冲剂组合物。
[0067]
表1.缓冲剂组成
[0068][0069]
发现在比较缓冲剂中使用磷酸二氢钾(kh2po4)/磷酸氢二钾(k2hpo4)作为酸-碱对，与在实例缓冲剂中使用乙酸/乙酸钠(ch3coona)相比，伴有更多颗粒聚集和更频繁的微流体堵塞。发现在实例缓冲剂中包含表面活性剂(例如，tergitol
tm
15-s-9或triton x-100)和盐(例如，cacl2)通过减少磁性颗粒与常存在于干扰凝胶中的聚电解质(例如，卡波姆)的
相互作用而改善测定性能的稳健性。发现在所有三种缓冲剂组合物中存在乙二胺四乙酸(edta)作为螯合剂对于样品稳定化是必需的。proclin
tm
300防腐剂(sigma aldrich,st.louis,mo.)作为杀生物剂被添加到所有三种缓冲剂组合物中，用于样品保存目的。
[0070]
从总共263名有阴道炎或/和阴道病临床症状的女性收集阴道拭子，并在bd max
tm
系统上进行测试。图1按地理区域总结了这些样品捐赠者的组成：94名捐赠者(36％)来自biocollection oakland、69名捐赠者(26％)来自ppgc houston，以及100名捐赠者(38％)来自biocollection miami。
[0071]
此实施例示例了诊断测定的实验方面，其结果将在下面的实施例2至9中讨论。具体地，此实例示例了本技术在此公开的示例性缓冲剂组合物。
[0072]
实施例2
[0073]
测试可重复性
[0074]
表2总结了相同样品(“相同拭子”)的两场测试(“第一场”和“第二场”)中获得的测定结果之间的一致率。比较缓冲剂用于表2(a)的测定，并且实例缓冲剂i用于表2(b)的测定)。表2(a)-2(b)各自列出了念珠菌物种、光滑念珠菌、克氏念珠菌、阴道毛滴虫和bv(从上至下)的阳性结果、阴性结果和总体(overall)(从左至右)的一致率。
[0075]
表2.诊断测定的基线可重复性
[0076][0077]
当进行各种病原标记的诊断检测时，比较缓冲剂和实例缓冲剂i均实现了“相同拭子”的两场不同测试(“第一场”和“第二场”)之间至少90.0％的一致性。
[0078]
因此，此实施例提供了诊断测定和相关方法的可重复性的代表性基线。
[0079]
实施例3
[0080]
测试可重现性
[0081]
表3总结了分别在从相同对象(或样品捐献者)收集的两个样品(“拭子1”和“拭子2”)中的一个样品的测试(“第一场”)中获得的测定结果之间的一致率。比较缓冲剂用于表3(a)的测定，并且实例缓冲剂i用于表3(b)的测定。表3(a)-3(b)各自列出了念珠菌物种、光滑念珠菌、克氏念珠菌、阴道毛滴虫和bv(从上到下)的阳性结果、阴性结果和总体(从左至右)的一致率。
[0082]
当测试各种病原标记时，比较缓冲剂和实例缓冲剂i均实现了从相同对象获得的两个不同样品(“拭子1”和“拭子2”)之间至少90.0％的一致性。
[0083]
表3.用于病原检测的pcr测定的基线可重现性
[0084][0085]
因此，此实施例证明了诊断测定和相关方法的可重现性的代表性基线。
[0086]
实施例4
[0087]
缓冲剂对可报告结果的基线影响
[0088]
表4示例了以下五组代表性生物标记的报告测定结果中的缓冲剂依赖性差异：念珠菌物种(表4(a))、光滑念珠菌(表4(b))、克氏念珠菌(表4(c))、阴道毛滴虫(表4(d))和细菌性阴道病(bv)(表4(e))。
[0089]
例如，如表4(a)所示，当在测定中使用实例缓冲剂时，pcr分析报告念珠菌物种的45个阳性和178个阴性结果；而当使用比较缓冲剂时，pcr分析报告阴性念珠菌物种的46个阳性和177个结果。在表4(a)中报告的223个结果中，在比较缓冲剂中被报告为阴性的三个样品(右上)在实例缓冲剂中被鉴定为病原阳性；并且在比较缓冲剂中被报告为阳性的四个样品(左下)在实例缓冲剂中被鉴定为病原阴性。
[0090]
表4.利用实例缓冲剂和比较缓冲剂报告的结果的差异
[0091][0092]
例如，如表4(b)所示，当在测定中使用实例缓冲剂时，pcr分析报告光滑念珠菌的11个阳性和212个阴性结果。而当使用比较缓冲剂时，pcr分析报告光滑念珠菌的13个阳性和210个阴性结果。在表4(b)中报告的223个结果中，在比较缓冲剂中被报告为阳性的两个样品(左下)在实例缓冲剂中被鉴定为病原阴性。
[0093][0094]
例如，如表4(c)所示，当在测定中使用实例缓冲剂时，pcr分析报告克氏念珠菌的0
个阳性和223个阴性结果，而当使用比较缓冲剂时，pcr分析报告克氏念珠菌的0个阳性和223个阴性结果。
[0095]
例如，如表4(d)所示，当在测定中使用实例缓冲剂时，pcr分析报告阴道毛滴虫的36个阳性和187个阴性结果；而当使用比较缓冲剂时，pcr分析报告阴道毛滴虫的36个阳性和187个阴性结果。在表4(d)中报告的223个结果中，在比较缓冲剂中被报告为阴性的一个样品(右上)在实例缓冲剂中被鉴定为病原阳性；并且在比较缓冲剂中被报告为阳性的一个样品(左下)在实例缓冲剂中被鉴定为病原阴性。
[0096]
例如，如表4(e)所示，当在测定中使用实例缓冲剂时，pcr分析报告bv的129个阳性和104个阴性结果；而当使用比较缓冲剂时，pcr分析报告光滑念珠菌的129个阳性和104个阴性结果。在表4(e)中的233个可报告结果中，在比较缓冲剂中被报告为阴性的7个样品(右上)在实例缓冲剂中被鉴定为病原阳性；并且在比较缓冲剂中被报告为阳性的七个样品(左下)在实例缓冲剂中被鉴定为病原阴性。
[0097]
表5总结了如表4所示实例缓冲剂和比较缓冲剂之间测定结果的一致率(总体上大于84％)。具体地，测试了念珠菌物种、光滑念珠菌、克氏念珠菌、阴道毛滴虫和bv(从上至下)的阳性结果、阴性结果和总体(从左至右)的一致率。
[0098]
此实施例示例了用于评价检测缓冲剂对诊断测定和相关方法的可报告结果的影响的代表性基线。
[0099]
表5.使用实例缓冲剂和比较缓冲剂获得的测定结果之间的一致性(％)
[0100][0101]
实施例5
[0102]
缓冲剂对不可报告结果的基线影响
[0103]
表6-7示例了在比较缓冲剂(表6(a)-6(d)、7(a)-7(f))和实例缓冲剂i(表6(e)-6(h)、7(g)-7(l))分别用于阴道障碍的测定测试时的不可报告率。表6中考察的样品不含干扰凝胶，而表7中考察的样品含有各种干扰凝胶，包括mckesson润滑胶(表7(a)、7(g))、ez润滑胶(表7(b)、7(h))、润滑剂(表7(c)、7(i))、(克霉唑(clotrimazole)抗真菌乳膏)(表7(d)、7(j))和(苯佐卡因(benzocaine)/间苯二酚止痒乳膏)(表7(e)、7(k))。对表6-7中考察的各拭子样品测定阴道炎和阴道病，并将表6-7中列出的不可报告率进一步细分为未解析结果率和不确定结果率。
[0104]
对于没有干扰凝胶的拭子样品的测定测试，表6(a)和6(e)比较了分别通过使用比较缓冲剂和实例缓冲剂i而进行的一个样品的第一测试(“拭子1，第1场”)，；表6(b)和6(f)比较了通过使用这两种缓冲剂而进行的一个样品的第二测试(“拭子1，第2场”)；表6(c)和6(g)比较了第二个样品的第一测试(“拭子2，第1场”)；并且表6(d)和6(h)比较了分别从表6(a)-6(c)和6(e)-6(g)的测试获得的总体结果。
[0105]
表6.比较缓冲剂和实例缓冲剂之间无干扰物质的样品的不可报告率保持相当性
[0106][0107]
表7.实例缓冲剂降低样品含有干扰物质(润滑剂)时的不可报告率
[0108][0109]
表7.实例缓冲剂降低样品含有干扰物质(润滑剂)时的不可报告率(续)
[0110][0111]
如表6所示，当测定不被凝胶干扰时，实例缓冲剂i和比较缓冲剂产生相当的不可报告率。
[0112]
因此，使用实例缓冲剂i被证明可以在无干扰凝胶的情况下维持样品的可报告结果的水平。
[0113]
如表7所示，当拭子样品含有干扰物质时，实例缓冲剂i显著降低不可报告率。例如，对于被mckesson润滑胶污染的拭子样品，使用实例缓冲剂i使每个样品的未解析、不确定和总不可报告率从34.8％、34.8％和69.6％(表7(a))降低至8.7％、0.0％和8.7％(表7(g))。作为另一个实例，对于被ez润滑胶污染的拭子样品，使用实例缓冲剂i使每个样品的未解析、不确定和总不可报告率从23.1％、53.8％和76.9％降低(表7(b))至0.0％、0.0％和0.0％(表7(h))。
[0114]
总体而言，每个样品的未解析、不确定、总不可报告率从47.1％、21.8％和68.9％(表7(f))降至12.6％、0.0％和12.6％(表7(1))。
[0115]
因此，此实施例示例，使用实例缓冲剂可通过提高抵抗各种干扰物质存在的测试稳健性而显著改善测定性能，同时仍维持可报告率处于不存在干扰物质时的水平。
[0116]
实施例6
[0117]
比较缓冲对干扰的稳健性
[0118]
使用比较缓冲剂对119个临床拭子样品进行了诊断分析。在这119个样品中，只有37个(约31.1％)产生了可报告结果。对于这119个样品中的每一个，在不存在干扰凝胶的情
况下运行测试(“第1场”)，并在存在干扰凝胶的情况下运行另一测试(“第2场”)。
[0119]
表8示例了干扰凝胶的存在对检测念珠菌物种(表8(a))、光滑念珠菌(表8(b))、克氏念珠菌(表8(c))、阴道毛滴虫(表8(d))和细菌性阴道病(bv)(表8(e))的可报告测定结果的影响。
[0120]
例如，如表8(e)所示，在存在干扰凝胶的情况下，诊断测定报告bv的34个阳性和37个阴性结果；而在没有干扰凝胶的情况下，诊断测定报告bv的38个阳性和33个阴性结果。在表8(d)中报告的结果中，在存在干扰凝胶的情况下报告为阳性的两个样品(右上)在没有干扰凝胶的情况下被鉴定为阴性；并且在存在干扰凝胶的情况下报告为阴性的6个样品(左下)在没有干扰凝胶的情况下被鉴定为阳性。
[0121]
表8.使用比较缓冲剂的报告测定结果
[0122][0123]
表9总结了存在和不存在干扰凝胶的测试之间如表8所示测定结果的一致率(总体上大于84％)。具体地，测试念珠菌物种、光滑念珠菌、克氏念珠菌、阴道毛滴虫和bv(从上至下)的阳性结果、阴性结果和总体(从左至右)的一致率。
[0124]
表9.通过阳性、阴性和总体结果之间的一致性(％)而测量的抵抗样品中的干扰物质的测定稳健性
[0125][0126]
此实施例示例了在使用比较缓冲剂时有限的测定性能，特别是低可报告率。
[0127]
实施例7
[0128]
实施例缓冲剂对干扰的稳健性
[0129]
使用实例缓冲剂i对119个临床拭子样品进行诊断测定。在这119个样品中，104个(约87.4％)产生了可报告结果，与实施例6中约31.1％形成对比。因此，与实施例6中使用比较缓冲剂相比，使用实例缓冲剂i显著增加了诊断测定的可报告率。对于这119个样品中的每一个，在不存在干扰凝胶的情况下运行测试(“第1场”)，并且在存在干扰凝胶的情况下运行另一测试(“第2场”)。
[0130]
与实施例6的表8类似，表10示例了当利用实施例缓冲剂i时干扰凝胶的存在对检测念珠菌物种(表10(a))、光滑念珠菌(表10(b))、克氏念珠菌(表10(c))、阴道毛滴虫(表10(d))和细菌性阴道病(bv)(表10(e))的可报告测定结果的影响。
[0131]
例如，如表10(d)所示，在存在干扰凝胶的情况下，诊断测试报告了bv的54个阳性和50个阴性结果；而在没有干扰凝胶的情况下，诊断测定报告了bv的55个阳性和49个阴性结果。在表10(d)中的这些报告结果中，在存在干扰凝胶的情况下报告为阳性的一个样品(右上)在不存在干扰凝胶时被鉴定为阴性；并且在存在干扰凝胶的情况下报告为阴性两个样品(左下)在不存在干扰凝胶的情况下被确定为阳性。
[0132]
表10.使用实例缓冲剂i的报告检测结果
[0133][0134]
表11.通过阳性、阴性和总体结果之间的一致性(％)而测量的抵抗样品中的干扰物质的测定稳健性
[0135][0136]
表11总结了存在和不存在干扰凝胶的测试之间如表10所示测定结果的一致性率(总体上大于87％)。具体地，测试了念珠菌物种、光滑念珠菌、克氏念珠菌、阴道毛滴虫和bv(从上至下)的阳性结果、阴性结果和总体(从左至右)的一致率。
[0137]
表11所示的一致率至少与表9所示的一致率至少部分相当。因此，使用实例缓冲剂i(表10-11)被证明维持与使用比较缓冲剂(表8-9)相同的准确度水平。
[0138]
因此，此实施例示例了使用实例缓冲剂增加可报告率，而不影响诊断测定在噪声
条件下的可重现性。
[0139]
实施例8
[0140]
实例缓冲剂防止/减少微流体堵塞
[0141]
图2a-2b显示了bd max
tm
pcr盒的照片，各盒都已用于不含干扰凝胶的临床阴道拭子样品的诊断测试。实例缓冲剂i用于图2a的测试，并且比较缓冲剂用于图2b的测试。如图2a中的红色箭头所示，当使用比较缓冲剂进行诊断测定时，部署在盒中用于核酸提取的磁性颗粒形成聚集体。颗粒聚集导致微流体堵塞，如图2a所示。图2a中颗粒聚集和微流体堵塞的示例性区域标记为“a
i”、“a
ii”和“a
iii”，并在底部放大。相比之下，在图2b中没有观察到这种颗粒聚集或微流体堵塞，并且图2b的示例性区域被标记为“b
i”、“b
ii”和“b
iii”并在底部放大。
[0142]
图3a-3b显示了bd max
tm
pcr盒的照片，各盒都已用于包含基于卡波姆的干扰凝胶mckesson的临床阴道拭子样品的诊断测试。图4a-4b显示了另外的实施方式：用于测试以10μl存在的另外的干扰凝胶e-z品牌(medline industries,inc.)的bd max
tm
pcr盒的照片的(图4a-4b)。
[0143]
如图3a和4a中的红色箭头所示，当使用比较缓冲剂进行诊断测定时，部署在盒中用于核酸提取的磁性颗粒形成聚集体。颗粒聚集然后导致微流体堵塞，如图3a和4a所示。图3a中的颗粒聚集和微流体堵塞的示例性区域标记为“a
i”、“a
ii”和“a
iii”，并在底部放大。图4a中的颗粒聚集和微流体堵塞的示例性区域标记为“a
i”、“a
ii”和“a
iii”，并在底部放大。相比之下，在图3b中没有观察到这种颗粒聚集或微流体堵塞，例如在标记为“b
i”、“b
ii”和“b
iii”并在底部放大的区域。在图4b中也没有观察到任何颗粒聚集或微流体堵塞，例如，在标记为“b
i”和“b
ii”并在底部放大的区域。
[0144]
因此，此实施例示例了利用本技术中公开的缓冲剂组合物防止或减少bd max
tm
pcr盒中在诊断测定过程中的颗粒聚集和微流体堵塞。
[0145]
实施例9
[0146]
实施例缓冲剂改善/维持诊断准确性
[0147]
使用实例缓冲剂ii和比较缓冲剂在bd max
tm
系统上进行用于检测和诊断含有干扰凝胶的样品中的代表性阴道状况的测定。图5中的阴道病测试结果得自含有干扰性e-z润滑胶(medline industries,inc.)的阴道拭子样品；并且图6中的阴道炎测试结果得自含有干扰性润滑剂(无卡波姆的凝胶)的阴道拭子样品。
[0148]
由按照常规工作流程(图5a、5d、6a和6d)利用比较缓冲剂、按照优化工作流程利用比较缓冲剂(图5b、5e、6b和6e)、以及按照优化工作流程利用实例缓冲剂(图5c、5f、6c和6f)分别获得的pcr数据生成散点图。图5-6中的y轴(“cy5.5 ep”)代表终点荧光，其测量pcr扩增曲线末端的花青染料5.5(cy5.5)的荧光强度。图5a-5c和6a-6c中的x轴(“cy5.5 ct评分”)表示在校正信号漂移后扩增产物变得有置信地可检测时的阈值pcr循环数。图5d-5f和6d-6f中的x轴(“cy5.5 sdpa”)代表“二阶导数峰值横坐标”，其被用作评估测定可重现性的标准。如图5和6所示，实例缓冲剂ii实现在ct评分和sdpa方面测试结果分布窄于比较缓冲剂。
[0149]
因此，此实施例示例，使用实例缓冲剂可以显著改善测定性能，特别是对于存在干扰凝胶的样品——通过至少改善在噪声条件下诊断测试的可重现性。
[0150]
实施例10
[0151]
实施例缓冲剂iii降低样品含有干扰物质(润滑剂)时的不可报告率
[0152]
利用第三种实例缓冲剂进行另外的研究，类似于实施例2至9上述的研究。实施例缓冲剂iii包含以下：
[0153][0154]
如实例缓冲剂i和ii所报告，在存在干扰物质(e-z胶，medline industries,inc.)的情况下，与常规缓冲剂相比，使用实例缓冲剂iii减少不确定和未解析的测试数量。
[0155]
实施例11
[0156]
实例缓冲剂i与比较缓冲剂的比较
[0157]
bd max
tm
vaginal panel和bd max
tm
ct/gc/tv
[0158]
以下实施例描述了研究结果，该研究考察缓冲剂i对bd max
tm
vaginal panel测定和bd max
tm
ct/gc/tv测定中的不可报告率(nrr)、一致性百分比和检测的影响。将缓冲剂i与实施例1、表1中描述的比较缓冲剂进行比较。
[0159]
实验室和临床程序：从捐献者对象收集样品。对于每个捐赠者，采用四种收集方法：
[0160]
1)自行收集的，阴道的，无润滑剂
[0161]
2)临床医生收集的，阴道的，无润滑剂
[0162]
3)临床医生收集的，阴道的，用窥器 润滑剂(3种不同品牌)
[0163]
4)临床医生收集的，宫颈内的，用窥器 润滑剂(3种不同品牌)
[0164]
润滑剂以临床医生认为合适的量用于窥器上，并使用了三种不同品牌的润滑剂：外科润滑剂，无菌抑菌(pharmaceuticals,inc.,york pa)、mckesson润滑胶(mckesson medical-surgical inc.,richmond va))、aplicare润滑胶(aplicare,inc.,meriden ct)。按照制造商说明书，将样品在bd max
tm
vaginal panel测定和bd max
tm
ct/gc/tv测定上运行。研究结果如下显示。
[0165]
表12显示，当在bd max
tm
vaginal panel(-7.9)上运行时，实例缓冲剂i非常有效降低含有润滑剂的阴道样品中的nrr(未解析(unr)和不确定(ind)结果)，尽管在临床医生不使用润滑剂收集的阴道样品中用实施例i缓冲剂观察到nrr(5.5)的少量增加。对于自行收集的阴道样品或临床医生使用润滑剂采集的宫颈内样品，未观察到nrr的显著变化。
[0166]
表12.用于bd maxtm vaginal panel的实例缓冲液i(乙酸盐)与比较缓冲液(磷酸盐)的比较
[0167][0168]
与bd max
tm
vaginal panel一样，在bd max
tm
ct/gc/tv测定(-13.1)上运行时，实施例i缓冲剂有效降低含有润滑剂的阴道样品的nrr，但与bd max
tm
vaginal panel不同，未观察到临床医生不使用润滑剂收集的阴道样品的unr增加(表13)。对于自行收集的阴道样品或临床医生使用润滑剂收集的宫颈内样品，未观察到nrr显著变化。
[0169]
表13.用于bd max
tm
ct/gc/tv的实例缓冲剂i(乙酸盐)与比较缓冲剂(磷酸盐)的比较
[0170][0171]
对于bd max
tm
vaginal panel测定，实施例i缓冲剂导致与使用比较缓冲剂用于所有目标的测试结果良好一致。对于光滑念珠菌，观察到阳性一致性略低，但这是由于阳性结果数量非常少(表14)。
[0172]
表14.用于bd max
tm
vaginal panel目标的实例缓冲剂i和比较缓冲剂之间的测试结果一致性
[0173][0174]
图注：ppa％＝阳性测试结果一致性百分比(使用实例缓冲剂i的阳性结果数/使用比较缓冲剂的阳性结果数)；npa％＝阴性测试结果一致性百分比(使用实例缓冲剂i的阴性结果数/使用比较缓冲剂的阴性结果数)；细菌性阴道病＝乳杆菌(lactobacillus)物种(卷曲乳杆菌和詹森乳杆菌)、阴道加德纳菌、阴道异位菌、细菌性阴道病相关细菌2(bvab-2)、巨球型菌-1。
[0175]
对于bd max
tm
ct/gc/tv测定，实施例i缓冲剂导致与使用比较缓冲剂的测试结果良好一致(表15)。
[0176]
表15.用于bdmax
tm
ct/gc/tv目标的实例缓冲剂i与比较缓冲剂之间的测试结果一致性
[0177][0178]
图注：ppa％＝阳性测试结果一致性百分比(使用实例缓冲剂i的阳性结果数/使用比较缓冲剂的阳性结果数)；npa％＝阴性测试结果一致性百分比(使用实例缓冲剂i的阴性结果数/使用比较缓冲剂的阴性结果数)。
[0179]
基于对pcr指标(endpoint、sdpa、ct.评分)的分析，实例缓冲剂i倾向于对bd max
tm
vaginal panel测定中几个目标的扩增具有略微负面的影响，同时倾向于略微改善bd max
tm
ct/gc/tv测定中的tv扩增。
[0180]
尽管本文已经公开了各种方面和实施方式，但其他方面和实施方式对于本领域技术人员来说将是显而易见的。本文公开的各种方面和实施方式是出于示例目的而不是限制性，真正的范围和精神由所附权利要求指示。
[0181]
本领域技术人员将理解，对于本文公开的这个和其他过程和方法，在过程和方法中执行的功能可以以不同的顺序实施。此外，所概述的步骤和操作仅作为实例提供，并且一些步骤和操作可以是任选的，可以组合到更少的步骤和操作中，或者扩展成另外的步骤和操作，而不偏离所公开实施方式的本质。
[0182]
关于本文中基本上任何复数和/或单数术语的使用，本领域技术人员可以在适于上下文和/或应用时从复数转换成单数和/或从单数转换成复数。为了清楚起见，各种单数/复数排列可在本文中被明确阐述。
[0183]
本领域技术人员将理解，一般而言，本文并且尤其所附权利要求(例如，所附权利要求的主体)中使用的总体上意图作为“开放性”术语(例如，术语“包括”应被解释为“包括但不限于”，术语“具有”应被解释为“至少具有”，术语“包括”应被解释为“包括但不限于”等)。本领域技术人员将进一步理解，如果属意特定数量的引述的权利要求限定，则这种意图将在权利要求中明确地被限定，并且在没有这种限定时没有这种意图存在。例如，作为理解辅助，所附权利要求可能包含引述性短语“至少一个”和“一个或多个”的使用来介绍引述权利要求限定。然而，这种短语的使用不应被解释为暗示通过不定冠词“a”或“an”引述权利要求限定将包含这种引述的权利要求限定的任何特定权利要求限制为包含仅一个这种限
定的实施方式，即使当同一权利要求包括引述性短语“一个或多个”或“至少一个”和不定冠词如“a”或“an”(例如，“a”和/或“an”应被解释为“至少一个”或“一个或多个”)；用于引述权利要求限定的定冠词的使用也是如此。此外，即使明确地限定了所引述权利要求限定的具体数目，本领域技术人员将认识到，这种限定应当被解释为表示至少所限定的数目(例如，“两个限定”的光秃限定，在没有其他修饰的情况下，意为至少两个限定，或两个或多个限定)。此外，在使用惯用类似语“a、b、c等中的至少一个”的其下，总体上，这种结构意图是本领域技术人员理解该惯用语的意义(例如，“具有a、b和c中的至少一个的系统”将包括但不限于具有以下的系统：a单独，b单独，c单独，a和b一起，a和c一起，b和c一起，和/或a、b和c一起，等等)。在使用惯用类似语“a、b或c等中的至少一个”的那些情况下，一般而言，这种结构意图是本领域技术人员理解该惯用语的意义(例如，“具有a、b或c中的至少一个的系统”将包括但不限于具有以下的系统：a单独，b单独，c单独，a和b一起，a和c一起，b和c一起，和/或a、b和c一起，等等)。本领域技术人员将进一步理解，实际上，呈现两个或多个可选术语的任何分离的词语和/或短语，无论是在说明书、权利要求或附图中，都应被理解为考虑包括这些术语中的一者、术语中的任一者、或术语两者的可能性。例如，短语“a或b”将被理解为包括“a”或“b”或“a和b”的可能性。
[0184]
此外，在以马库什组描述本公开的特征或方面的情况下，本领域技术人员将认识到，本公开因此也以马库什组的任何个体成员或成员亚组被描述。
[0185]
如本领域技术人员将理解，出于任何和所有目的，例如就提供书面描述而言，本文公开的所有范围还涵盖其任何和所有可能的子范围及子范围组合。任何列出的范围可以很容易地被识别为充分描述并能够实现将相同的范围分解为至少相等的一半、三分之一、四分之一、五分之一、十分之一等。作为非限制性实施例，本文讨论的各范围可以容易地被分解为下三分之一、中三分之一和上三分之一等。如本领域技术人员也将理解，诸如“上至”、“至少”等的所有语言包括所列举的数值并且指代可以后续如上所述分解子范围的范围。
[0186]
每当本文提供数值范围时，该范围意在包括起始值、终止值、每个个体值或其间的数值范围，除非另有明确说明。例如，“从0.2到0.5”表示0.2、0.3、0.4、0.5；其间的范围，如0.2-0.3、0.3-0.4、0.2-0.4；其间的增量，如0.25、0.35、0.225、0.335、0.49；其间的增量范围，如0.26-0.39；等等。作为另一个实例，具有1-3个单元的组指代具有1个、2个或3个单元的组。类似地，具有1-5个单元的组指代具有1、2、3、4或5个单元的组，等等。
[0187]
由前述将理解，本公开的各种实施方式已在本文中出于示例的目的进行了描述，并且可以在不背离本公开的范围和精神的情况下进行各种修改。因此，本文所公开的各种实施方式并非意图限制，真实范围和精神由所附权利要求指示。