一种益生菌菌粉的制备方法与流程

1.本发明涉及益生菌生产技术领域，尤其涉及一种益生菌菌粉的制备方法。


背景技术：

2.益生菌主要涉及食品、保健品、日化用品、饲料等产品的应用。益生菌是一类对宿主有益的活性微生物，益生菌主要组成为大多数乳酸菌、少部分芽孢杆菌及酵母，在一定摄入量的前提下对宿主可产生提高免疫力、调节肠道、平衡体脂等众多有益功效。
3.目前益生菌在制备过程中，因发酵剂发酵活力不高导致发酵过程启动慢，导致益生菌制备时间长、稳定性差。


技术实现要素：

4.本发明的目的在于提供一种益生菌菌粉的制备方法。
5.为达此目的，本发明采用以下技术方案：一种益生菌菌粉的制备方法，包括以下步骤：
6.1)菌株活化及扩培
7.将菌株置于mrs培养基中进行接种，厌氧扩培；
8.2)厌氧发酵
9.将扩培后的益生菌接种于发酵培养基中，控制ph在6.0-6.5，发酵时间8-10小时，od600达6.0-12.0后降温；
10.3)菌体收集及乳化
11.将发酵液在离心机中离心后倾倒上清液，收集到的菌体与已灭菌的保护液按比例混合均匀后乳化，得到乳化液；
12.4)冻干干燥、粉碎后包装，
13.其中，发酵培养基包括以下组分：30-40重量份脱脂乳粉、0.4-0.8重量份酵母粉、1-3重量份葡糖糖、0.5-1重量份麦芽糊精、0.1-0.3重量份氯化钠、0.01-0.03重量份柠檬酸钠。
14.作为一种具体的实施方式，步骤3)中所采用的离心机为蝶式离心机，离心的速度为4000-4500rpm，离心的时间为10～20mi n。
15.作为一种具体的实施方式，所述步骤3)中的保护液的原料按照重量份数计包括：15％海藻糖、5％蔗糖、1％明胶、1％甘露醇、1％吐温80、6％脱脂奶粉、3％甘油，余量为水。
16.作为一种具体的实施方式，步骤1)中菌株活化的具体步骤为：将菌株按照以mrs液体培养基体积的3～5％接种量接种到mrs液体培养基中，然后置于在恒温培养箱中，在温度37℃的条件下活化培养16～24h，按照相同的方式活化培养三代，得到一种活菌数为109cfu/ml以上的浓缩菌液，并用mrs琼脂培养基准确计数浓缩菌液的活菌数。
17.作为一种具体的实施方式，所述mrs液体培养基是按照下述制备方法制备得到的：将8g蛋白胨、5g酵母膏、10g牛肉膏、2g柠檬酸钠、1ml吐温80、3g乙酸钠、2g磷酸氢二钾、0.3g
硫酸镁、0.02g硫酸锰与20g葡萄糖溶于1000ml蒸馏水中，得到的溶液使用无机酸或无机碱溶液调节至ph值6-6.5，接着在温度121℃下灭菌15min，得到所述的mrs液体培养基。
18.由于上述技术方案的运用，本发明与现有技术相比具有下列优点：本发明的益生菌菌粉的制备方法，其在发酵过程中添加了脱脂奶粉，有效提高了发酵性能，通过在发酵后经蝶式离心机高速分离，大大提高了发酵速度。
具体实施方式
19.下面结合具体实施例来对本发明的技术方案作进一步的阐述。
20.实施例1
21.本例中提供一种益生菌菌粉的制备方法，包括以下步骤：
22.1)菌株活化及扩培
23.将菌株置于mrs培养基中进行接种，厌氧扩培；
24.具体接种过程为：将菌株按照以mrs液体培养基体积的3％接种量接种到mrs液体培养基中，然后置于在恒温培养箱中，在温度37℃的条件下活化培养16～24h，按照相同的方式活化培养三代，得到一种活菌数为109cfu/ml以上的浓缩菌液，并用mrs琼脂培养基准确计数浓缩菌液的活菌数；
25.2)厌氧发酵
26.将扩培后的益生菌接种于发酵培养基中，控制ph在6.0-6.5，发酵时间8-10小时，od600达6.0-12.0后降温；
27.3)菌体收集及乳化
28.将发酵液在离心机中离心后倾倒上清液，收集到的菌体与已灭菌的保护液按比例混合均匀后乳化，得到乳化液，其中，离心的速度为4000rpm，离心的时间为20min；
29.4)冻干干燥、粉碎后包装，
30.其中，发酵培养基包括以下组分：30重量份脱脂乳粉、0.6重量份酵母粉、2重量份葡糖糖、1重量份麦芽糊精、0.3重量份氯化钠、0.02重量份柠檬酸钠；
31.其中，所述的mrs液体培养基是按照下述制备方法制备得到的：将8g蛋白胨、5g酵母膏、10g牛肉膏、2g柠檬酸钠、1ml吐温80、3g乙酸钠、2g磷酸氢二钾、0.3g硫酸镁、0.02g硫酸锰与20g葡萄糖溶于1000ml蒸馏水中，得到的溶液使用无机酸或无机碱溶液调节至ph值6-6.5，接着在温度121℃下灭菌15min，得到所述的mrs液体培养基。
32.步骤3)中的保护液的原料按照重量份数计包括：15％海藻糖、5％蔗糖、1％明胶、1％甘露醇、1％吐温80、6％脱脂奶粉、3％甘油，余量为水。
33.实施例2
34.本例中提供一种益生菌菌粉的制备方法，包括以下步骤：
35.1)菌株活化及扩培
36.将菌株置于mrs培养基中进行接种，厌氧扩培；
37.具体接种过程为：将菌株按照以mrs液体培养基体积的2％接种量接种到mrs液体培养基中，然后置于在恒温培养箱中，在温度37℃的条件下活化培养16～24h，按照相同的方式活化培养三代，得到一种活菌数为109cfu/ml以上的浓缩菌液，并用mrs琼脂培养基准确计数浓缩菌液的活菌数；
38.2)厌氧发酵
39.将扩培后的益生菌接种于发酵培养基中，控制ph在6.0-6.5，发酵时间8-10小时，od600达10后降温；
40.3)菌体收集及乳化
41.将发酵液在离心机中离心后倾倒上清液，收集到的菌体与已灭菌的保护液按比例混合均匀后乳化，得到乳化液，其中，离心的速度为4500rpm，离心的时间为10min；
42.4)冻干干燥、粉碎后包装，
43.其中，发酵培养基包括以下组分：40重量份脱脂乳粉、0.4重量份酵母粉、3重量份葡糖糖、0.5重量份麦芽糊精、0.1重量份氯化钠、0.03重量份柠檬酸钠；
44.所述的mrs液体培养基和步骤3)中的保护液的配方同实施例1。
45.对实施例1与实施例2中步骤2)的发酵结果做测试，结果见表1。
46.表1
[0047] 发酵残糖％发酵周期h发酵液活菌数cfu/ml实施例10.1％9h5.0
×
109实施例20.1％8h5.2
×
109
[0048]
从表1中我们可以看出，采用本发明的制备方法，其发酵过程中残糖量低，发酵周期短，发酵液的活菌数较好。
[0049]
以上内容仅为本发明的较佳实施例，对于本领域的普通技术人员，依据本发明的思想，在具体实施方式及应用范围上均会有改变之处，本说明书内容不应理解为对本发明的限制。


技术特征：
1.一种益生菌菌粉的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1）菌株活化及扩培将菌株置于mrs培养基中进行接种，厌氧扩培；2）厌氧发酵将扩培后的益生菌接种于发酵培养基中，控制ph在6.0-6.5，发酵时间8-10小时，od600达6.0-12.0后降温；3）菌体收集及乳化将发酵液在离心机中离心后倾倒上清液，收集到的菌体与已灭菌的保护液按比例混合均匀后乳化，得到乳化液；4）冻干干燥、粉碎后包装，其中，发酵培养基包括以下组分：30-40重量份脱脂乳粉、0.4-0.8重量份酵母粉、1-3重量份葡糖糖、0.5-1重量份麦芽糊精、0.1-0.3重量份氯化钠、0.01-0.03重量份柠檬酸钠。2.根据权利要求1所述的益生菌菌粉的制备方法，其特征在于，步骤3）中所采用的离心机为蝶式离心机，离心的速度为4000-4500rpm，离心的时间为10～20min。3.根据权利要求1所述的益生菌菌粉的制备方法，其特征在于，所述步骤3）中的保护液的原料按照重量份数计包括：15%海藻糖、5%蔗糖、1%明胶、1%甘露醇、1%吐温80、6%脱脂奶粉、3%甘油，余量为水。4.根据权利要求1所述的益生菌菌粉的制备方法，其特征在于，步骤1）中菌株活化的具体步骤为：将菌株按照以mrs液体培养基体积的3～5％接种量接种到mrs液体培养基中，然后置于在恒温培养箱中，在温度37℃的条件下活化培养16～24h，按照相同的方式活化培养三代，得到一种活菌数为10
9 cfu/ml以上的浓缩菌液，并用mrs琼脂培养基准确计数浓缩菌液的活菌数。5.根据权利要求1或4所述的益生菌菌粉的制备方法，其特征在于，所述mrs液体培养基是按照下述制备方法制备得到的：将8g蛋白胨、5g酵母膏、10g牛肉膏、2g柠檬酸钠、1ml吐温80、3g乙酸钠、2g磷酸氢二钾、0.3g硫酸镁、0.02g硫酸锰与20g葡萄糖溶于1000ml蒸馏水中，得到的溶液使用无机酸或无机碱溶液调节至ph值6-6.5，接着在温度121℃下灭菌15min，得到所述的mrs液体培养基。

技术总结
本发明公开了一种益生菌菌粉的制备方法，包括以下步骤1）菌株活化及扩培：将菌株置于MRS培养基中进行接种，厌氧扩培；2）厌氧发酵：将扩培后的益生菌接种于发酵培养基中，控制pH在6.0-6.5，发酵时间8-10小时，OD600达6.0-12.0后降温；3）菌体收集及乳化：将发酵液在离心机中离心后倾倒上清液，收集到的菌体与已灭菌的保护液按比例混合均匀后乳化，得到乳化液；4）冻干干燥、粉碎后包装，其中，发酵培养基包括以下组分：30-40重量份脱脂乳粉、0.4-0.8重量份酵母粉、1-3重量份葡糖糖、0.5-1重量份麦芽糊精、0.1-0.3重量份氯化钠、0.01-0.03重量份柠檬酸钠。该制备方法简单，发酵周期短，残糖量低。糖量低。


技术研发人员：方曙光 陶纯长 李秀利 占英英 朱建国 盖忠辉 郝沛妍 严涛 郭晓娟
受保护的技术使用者：上海益维尔康生物科技有限公司
技术研发日：2022.01.16
技术公布日：2022/4/12