腺相关病毒rAAV9的分离纯化方法与流程

技术特征：
1.腺相关病毒raav9的分离纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：将包含raav9的液相组合物，调节ph至中性，过滤；肝素亲和层析：采用带有肝素的层析介质对过滤后的液相组合物进行亲和层析，收集流穿液并浓缩；凝胶过滤层析：将浓缩后的流穿液进行凝胶过滤层析，收集洗脱液，即得。2.根据权利要求1所述的腺相关病毒raav9的分离纯化方法，其特征在于，肝素亲和层析的填料为高度交联6％的琼脂糖。3.根据权利要求1所述的腺相关病毒raav9的分离纯化方法，其特征在于，所述层析介质为汇研生物heparin focurose 6ff。4.根据权利要求1所述的腺相关病毒raav9的分离纯化方法，其特征在于，亲和层析所用的平衡液为8～12mm pb，ph 7.0。5.根据权利要求1所述的腺相关病毒raav9的分离纯化方法，其特征在于，亲和层析所用的洗脱液为8～12mm pb，2.0m nacl，ph 7.0。6.根据权利要求1所述的腺相关病毒raav9的离纯化方法，其特征在于，凝胶过滤层析所用的填料为高度交联的琼脂糖和葡聚糖，或高度交联4％的琼脂糖。7.根据权利要求1所述的腺相关病毒raav9的分离纯化方法，其特征在于，凝胶过滤层析所用的平衡液和缓冲液为15～25mm pb，0.1～0.2m nacl，ph7.0。8.根据权利要求1所述的腺相关病毒raav9的分离纯化方法，其特征在于，液相组合物采用0.45μm的水系混合膜过滤。9.根据权利要求1所述的腺相关病毒raav9的分离纯化方法，其特征在于，所述液相组合物为细胞裂解液或细胞培养上清液。

技术总结
本发明涉及病毒的分离纯化领域，具体涉及一种腺相关病毒rAAV9的分离纯化方法。该方法包括以下步骤：将包含rAAV9的液相组合物，调节pH至中性后过滤，之后采用肝素亲和层析和凝胶过滤层析两步层析法即可达到rAAV9的分离纯化目的，分离后的rAAV9纯度能够达到95％以上，回收率至少能够达到78％以上，当采用汇研生物Heparin Focurose 6FF作为第一步的纯化介质进行纯化时，其收率能达到96％以上。其收率能达到96％以上。


技术研发人员：肖胜杰 皮妮 曾凡星 吴阳
受保护的技术使用者：武汉汇研生物科技股份有限公司
技术研发日：2021.12.27
技术公布日：2022/4/12