用于皮肤的美学劣化的诊断方法与流程

1.本发明涉及皮肤的美学劣化(esthetic degradation)的诊断，尤其是与污染有关的皮肤的美学劣化的诊断。


背景技术：

2.许多因素会导致皮肤及其色泽(complexion)的瑕疵。皮肤色泽上的这些瑕疵是导致越来越频繁咨询美容护理中心或皮肤科医生办公室的原因。
3.在可能影响皮肤色泽的外在因素中，可提及的是暴露于阳光、暴露于温度和/或湿度的变化、暴露于污染物或香烟烟雾。在影响皮肤色泽的内在因素中，可提及的是压力、疲劳、荷尔蒙变化、表皮脱水、皮肤屏障功能的改变、老化或皮脂分泌过多。
4.这些不同的因素会糊化肤色，使其变得不均匀、暗沉、蜡质或发黄，并且导致，甚至有利于色素紊乱的存在。
5.然而，为了防止和/或治疗这些皮肤的美学劣化，有用的是了解其原因，特别是从上文中提到的因素中了解其原因。
6.某些城市环境经常出现污染高峰。个体在日常环境中，特别是在城市区，可能会受到不同空气污染物对角蛋白材料能皮，尤其是皮肤肤的多重侵害。
7.在已知的污染物中，首先可提及的是重金属、已成为大城市面临的主要挑战的废气，并且还有细颗粒或多环芳烃，例如苯并芘或苯并蒽。
8.这些污染物将显著地在皮肤上导致颗粒在表皮表面上的沉积，并且除其他后果外，还会引起肤色暗沉和/或色素紊乱。
9.将暴露于污染确定为导致皮肤的美学劣化的因素，可以更有效地防止和/或治疗这些劣化。
10.因此，非常需要用于皮肤美学劣化的诊断方法，特别是与污染有关的美学劣化的诊断方法。


技术实现要素：

11.本发明满足了这一需要。
12.本发明源于发明人出乎意料的发现：相对于没有暴露于慢性污染的个体，暴露于该污染的个体的皮肤样本(基于在他们毛发发样本中检测到高水平的污染物)显示出显著较高水平的某些细菌和这些细菌的某些代谢物。
13.因此，本发明涉及一种用于受试者的皮肤的美学劣化，特别是与污染有关的美学劣化的诊断方法，包括：步骤(a)，确定受试者的皮肤样本中至少一种标记物的水平，所述至少一种标记物选自由以下项组成的组：(i)细菌，所述细菌包括编码与序列seq id no:1、seq id no:2、seq id no:3、seq id no:4、seq id no:5、seq id no:6、seq id no:7、seq id no:8或seq id no:9至少90％一致的16s rrna序列的核酸，及(ii)这些细菌的代谢物，选自3-羟基-3-甲基戊二酸(3-hydroxy-3-methylglutarate)、3-甲基戊二酸/2-甲基戊二
酸(3-methylglutarate/2-methylglutarate)、4-胍基丁酸(4-guanidinobutanoate)、4-咪唑乙酸(4-imidazoleacetate)、5-氧代脯氨酸、乌头酸(aconitrate)、己二酸(adipate)、丙氨酸、α-酮戊二酸(alpha-cetoglutarate)、阿拉伯糖酸/木糖酸、壬二酸(azelate)、β-柠檬酰谷氨酸(beta-citrylglutamate)、胆碱、顺尿刊酸(cis-urocanate)、柠康酸/戊烯二酸(citraconate/glutaconate)、果糖、富马酸(fumarate)、γ-谷氨酰丙氨酸、γ-谷氨酰谷氨酰胺、γ-谷氨酰甘氨酸、γ-谷氨酰异亮氨酸、γ-谷氨酰亮氨酸、γ-谷氨酰丝氨酸、γ-谷氨酰苏氨酸、γ-谷氨酰色氨酸、γ-谷氨酰缬氨酸、戊二酸(glutarate)、甘油酸(glycerate)、甘油-3-磷酸(glycerol-3-phosphate)、甘氨酸、异戊酰甘氨酸、犬尿氨酸(kynurenate)、乳酸(lactate)、亚油酰乙醇酰胺、苹果酸(malate)、马来酸(maleate)、丙二酸(malonate)、麦芽糖、蛋氨酸亚砜、甲基琥珀酸(methylsuccinate)、n-乙酰精氨酸、n-乙酰丙氨酸、n-乙酰天冬氨酸、n-乙酰甘氨酸、n-乙酰组氨酸、n-乙酰苯丙氨酸、n-乙酰苏氨酸、n-乙酰缬氨酸、油酰胺、鸟氨酸、棕榈酰胺、庚二酸(pimelate)、脯氨酸、水杨酸(salicylate)、癸二酸(sebacate)、丝氨酸、辛二酸(suberate)、琥珀酸(succinate)、十一烷二酸(undecanedioate)和s-氨基-ω己内酰胺。
14.在具体的实施方式中，所述至少一种标记物选自由以下项组成的组：(i)痤疮丙酸杆菌(propionibacterim acnes)种的细菌、细球菌(micrococcaceae)科的细菌、短状杆菌(brachybacterium)属的细菌、短杆菌(brevibacterium)属的细菌、伯克氏菌(burkholderiales)目的细菌、parococcus属的细菌、红杆菌(rhodobacteraceae)科的细菌和梭形杆菌(fusobacterium)属的细菌，及(ii)这些细菌的代谢物，选自3-羟基-3-甲基戊二酸、3-甲基戊二酸/2-甲基戊二酸、4-胍基丁酸、4-咪唑乙酸、5-氧代脯氨酸、乌头酸、己二酸、丙氨酸、α-酮戊二酸、阿拉伯糖酸/木糖酸、壬二酸、β-柠檬酰谷氨酸、胆碱、顺尿刊酸、柠康酸/戊烯二酸、果糖、富马酸、γ-谷氨酰丙氨酸、γ-谷氨酰谷氨酰胺、γ-谷氨酰甘氨酸、γ-谷氨酰异亮氨酸、γ-谷氨酰亮氨酸、γ-谷氨酰丝氨酸、γ-谷氨酰苏氨酸、γ-谷氨酰色氨酸、γ-谷氨酰缬氨酸、戊二酸、甘油酸、甘油-3-磷酸、甘氨酸、异戊酰甘氨酸、犬尿氨酸、乳酸、亚油酰乙醇酰胺、苹果酸、马来酸、丙二酸、麦芽糖、蛋氨酸亚砜、甲基琥珀酸、n-乙酰精氨酸、n-乙酰丙氨酸、n-乙酰天冬氨酸、n-乙酰甘氨酸、n-乙酰组氨酸、n-乙酰苯丙氨酸、n-乙酰苏氨酸、n-乙酰缬氨酸、油酰胺、鸟氨酸、棕榈酰胺、庚二酸、脯氨酸、水杨酸、癸二酸、丝氨酸、辛二酸、琥珀酸、十一烷二酸和s-氨基-ω己内酰胺。
15.在另一具体的实施方式中，所述至少一种标记选自由以下项组成的组：(i)藤黄微球菌(micrococcus luteus)种的细菌和副球菌sp.(paracoccus sp.)种的细菌；及(ii)这些细菌的代谢产物，选自犬尿氨酸、4-咪唑乙酸、马来酸、鸟氨酸、4-胍基丁酸、顺尿刊酸、丙二酸、γ-谷氨酰亮氨酸、n-乙酰精氨酸和甘油-3-磷酸。
16.本发明的另一目的涉及一种用于评估受试者皮肤暴露于污染的方法，所述方法包括：步骤(a)，确定受试者皮肤样本中至少一种标记物的水平，所述至少一种标记物选自由以下项组成的组：(i)细菌，所述细菌包括编码与序列seq id no:1、seq id no:2、seq id no:3、seq id no:4、seq id no:5、seq id no:6、seq id no:7、seq id no:8或seq id no:9至少90％一致的16s rrna序列的核酸，及(ii)这些细菌的代谢物，选自3-羟基-3-甲基戊二酸、3-甲基戊二酸/2-甲基戊二酸、4-胍基丁酸、4-咪唑乙酸、5-氧代脯氨酸、乌头酸、己二酸、丙氨酸、α-酮戊二酸、阿拉伯糖酸/木糖酸、壬二酸、β-柠檬酰谷氨酸、胆碱、顺尿刊酸、柠
康酸/戊烯二酸、果糖、富马酸、γ-谷氨酰丙氨酸、γ-谷氨酰谷氨酰胺、γ-谷氨酰甘氨酸、γ-谷氨酰异亮氨酸、γ-谷氨酰亮氨酸、γ-谷氨酰丝氨酸、γ-谷氨酰苏氨酸、γ-谷氨酰色氨酸、γ-谷氨酰缬氨酸、戊二酸、甘油酸、甘油-3-磷酸、甘氨酸、异戊酰甘氨酸、犬尿胺酸、乳酸、亚油酰乙醇酰胺、苹果酸、马来酸、丙二酸、麦芽糖、蛋氨酸亚砜、甲基琥珀酸、n-乙酰精氨酸、n-乙酰丙氨酸、n-乙酰天冬氨酸、n-乙酰甘氨酸、n-乙酰组氨酸、n-乙酰苯丙氨酸、n-乙酰苏氨酸、n-乙酰缬氨酸、油酰胺、鸟氨酸、棕榈酰胺、庚二酸、脯氨酸、水杨酸、癸二酸、丝氨酸、辛二酸、琥珀酸、十一烷二酸和s-氨基-ω己内酰胺。
17.本发明的详细描述
18.标记物微生物
19.在本发明的上下文中使用的标记物可选自由细菌组成的组，所述细菌包括编码与序列seq id no:1、seq id no:2、seq id no:3、seq id no:4、seq id no:5、seq id no:6、seq id no:7、seq id no:8或seq id no:9至少90％一致的16s rrna序列的核酸。
[0020]“16s rrna”在此表示形成原核生物核糖体小亚基的核糖体rna。编码16s rrna的基因被称为“16s rdna”。它们的序列由于其结构而被高度使用，在所有细菌中都是很保守的。事实上，它是由一系列保守结构域、用于对该基因测序的通用引物的互补区和一组细菌特有的其他序列部分组成的，这些细菌特有的序列被称为特征序列(种、属、科、目)。
[0021]
因此，本发明上下文中使用的标记物可选自由这样的细菌组成的组：该细菌包括编码与序列seq id no:1、seq id no:2、seq id no:3、seq id no:4、seq id no:5、seq id no:6、seq id no:7、seq id no:8或seq id no:9至少90％一致的16s rrna序列。
[0022]
在本发明的上下文中，“一致性百分比”是使用全序列比对(即，两个序列在其整个序列上进行比较)来计算的。用于比较两个或更多个序列的一致性的方法是本领域技术人员熟知的。例如，可使用“needle”程序，其中该“needle”程序使用needleman-wunsch全序列比对算法(needleman and wunsch(1970)j.mol.biol.48:443-453)通过考虑它们的整个序列来找到两个序列之间的最佳比对(包括空位)。needle程序可得自于例如互联网站点ebi.ac.uk。根据本发明的一致性百分比优选通过在等于10.0的“gap open”参数、等于0.5的“gap extend”参数和dnafull矩阵下通过needle程序(全序列)emboss来计算。
[0023]
在具体的实施方式中，在本技术上下文中使用的标记物可选自由细菌组成的组，所述细菌包括编码与序列seq id no:1、seq id no:2、seq id no:3、seq id no:4、seq id no:5、seq id no:6、seq id no:7、seq id no:8或seq id no:9至少91％一致，尤其至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少98％、至少99％、至少99.5％、至少99.9％或至少100％一致的16s rrna序列的核酸。
[0024]
序列seq id no:1是痤疮丙酸杆菌(propionibacterim acnes)种的细菌的16s rdna的代表序列。
[0025]
序列seq id no:2是细球菌(micrococcaceae)科的细菌的16s rdna的代表序列。
[0026]
序列seq id no:3是短状杆菌(brachybacterium)属的细菌的16s rdna的代表序列。
[0027]
序列seq id no:4是短杆菌(brevibacterium)属的细菌的16s rdna的代表序列。
[0028]
序列seq id no:5是伯克氏菌(burkholderiales)目的细菌的16s rdna的代表序列。
[0029]
序列seq id no:6是parococcus属的细菌的16s rdna的代表序列。
[0030]
序列seq id no:7是红杆菌(rhodobacteraceae)科的细菌的16s rdna的代表序列。
[0031]
序列seq id no:8是梭形杆菌(fusobacterium)属的细菌的16s rdna的代表序列。
[0032]
序列seq id no:9是藤黄微球菌(micrococcus luteus)种的细菌的16s rdna的代表序列。
[0033]
因此，在具体的实施方式中，本发明上下文中使用的标记物是选自由以下项组成的组：痤疮丙酸杆菌(propionibacterim acnes)种的细菌、细球菌(micrococcaceae)科的细菌、短状杆菌(brachybacterium)属的细菌、短杆菌(brevibacterium)属的细菌、伯克氏菌(burkholderiales)目的细菌、parococcus属的细菌、红杆菌(rhodobacteraceae)科的细菌和梭形杆菌(fusobacterium)属的细菌。
[0034]“痤疮丙酸杆菌(propionibacterim acnes或cutibacterium acnes)种的细菌”在此是指厌氧的和腐生的、与痤疮有关的杆状的革兰氏阳性细菌，属于放线菌(actinomycetales)目、丙酸杆菌(propionibacteriaceae)科和丙酸菌(propionibacterium)属。
[0035]“细球菌(micrococcaceae)科的细菌”在此是指球形革兰氏阳性球菌和成簇的、过氧化氢酶 。细球菌科包括以下属：螨共生菌属(acaricomes)、节杆菌属(arthrobacter)、耳螨属(auridibacter)、柠檬球菌属(citricoccus)、肠放线菌属(enteroactinococcus)、库氏菌属(kocuria)、微球菌属(micrococcus)、雀巢菌属(nesterenkonia)、肾杆菌属(renibacterium)、罗氏菌属(rothia)、中华单胞菌属(sinomonas)、特氏菌属(tersicoccus)、雅尼氏菌属(yaniella)和致恒流氏菌属(zhihengliuella)。
[0036]
在具体的实施方式中，细球菌(micrococcaceae)科的细菌是微球菌(micrococcus)属的细菌。
[0037]“微球菌(micrococcus)属的细菌”在此是指直径为0.5至2微米的革兰氏阳性细菌，通常聚集为四分体或不规则簇，好氧，具有氧化代谢、具有过氧化氢酶和化学有机营养。
[0038]
微球菌(micrococcus)属包括以下种：藤黄微球菌(micrococcus luteus)、莱拉微球菌(micrococcus lylae)、变异微球菌(micrococcus varians)、玫瑰色微球菌(micrococcus roseus)、运动性微球菌(micrococcus agilis)、克氏微球菌(micrococcus kristinae)、西宫微球菌(micrococcus nishinomiyaensis)、栖息微球菌(micrococcus sedentarius)、喜盐微球菌(micrococcus halobius)、micrococcus antarticus、科氏微球菌(micrococcus cohnii)、植物内微球菌(micrococcus endophyticus)、黄色微球菌(micrococcus flavus)、四联微球菌(micrococcus lactis)、土微球菌(micrococcus terreus)和云南微球菌(micrococcus yunnanensis)。
[0039]
在具体的实施方式中，细球菌(micrococcaceae)科的细菌是藤黄微球菌(micrococcus luteus)种的细菌。
[0040]“短状杆菌(brachybacterium)属的细菌”在此是指皮肤杆菌(dermabacteraceae)科的非移动革兰氏阳性细菌，该典型的种是粪短杆菌(brachybacterium faecium)。
[0041]“短杆菌(brevibacterium)属的细菌”在此是指放线菌(actinomycetales)目和短杆菌(brevibacteriaceae)科的革兰氏阳性细菌。
[0042]“伯克氏菌(burkholderiales)目的细菌”在此是指革兰氏阴性变形杆菌。伯克氏菌目包括产碱菌(alcaligenaceae)科、伯克霍尔德氏菌(burkholderiaceae)科、comamonadadeae科、草酸杆菌(oxalobacteraceae)科和萨特氏菌(sutterellaceae)科。
[0043]“红杆菌(rhodobacteraceae)科的细菌”在此是指红杆菌(rhodobacterales)目的革兰氏阴性变形杆菌。
[0044]
红杆菌科包括以下属：海边小杆菌属(actibacterium)、急性球菌属(acuticoccus)、aestuariibius、河口球菌属(aestuariicoccus)、aestuariivita、agaricicola、ahrensia、albidovulum、albimonas、albirhodobacter、aliiroseovarius、aliisedimentitalea、alkalimicrobium、amaricoccus、amylibacter、antarctobacter、aquicoccus、aquimixticola、ascidiaceihabitans、boseongicola、brevirhabdus、catellibacterium、celeribacter、cereibacter、citreicella、citreimonas、cognatishimia、cognatiyoonia、confluentimicrobium、cribrihabitans、defluviimonas、dinoroseobacter、donghicola、epibacterium、falsirhodobacter、flavimaricola、frigidibacter、gaetbulicola、gemmobacter、haematobacter、halocynthiibacter、halodurantibacterium、halovulum、hasllibacter、hirschia、huaishuia、hwanghaeicola、生丝单胞菌属(hyphomonas)、jannaschia、jhaorihella、kandeliimicrobium、产酮古洛糖酸菌(ketogulonicigenium)、拉布伦茨氏菌属(labrenzia)、lacimonas、leisingera、lentibacter、limibaculum、limimaricola、litoreibacter、litorimicrobium、litorisediminicola、litorisediminivivens、litorivivens、loktanella、lutimaribacter、maliponia、mameliella、mangrovicoccus、maribius、海茎状菌属(maricaulis)、marimonas、marinibacterium、marinovum、maritimibacter、marivita、marivivens、methylarcula、monaibacterium、nautella、neptunicoccus、nereida、nesiotobacter、nioella、nitropelagi、oceanibulbus、oceanicaulis、oceanicella、海洋生菌属(oceanicola)、oceaniglobus、oceaniovalibus、十八杆菌属(octadecabacter)、pacificibacter、paenirhodobacter、palleronia、pannonibacter、副球菌属(paracoccus)、paradonghicola、paraphaeobacter、pararhodobacter、pelagibaca、pelagicola、pelagimonas、phaeobacter、planktomarina、planktotalea、plastorhodobacter、pleomorphobacterium、polymorphum、pontibaca、海岸海洋球菌属(ponticoccus)、pontivivens、primorskyibacter、profundibacterium、pseudaestuariivita、pseudodonghicola、pseudohalocynthiibacter、pseudomaribius、pseudooceanicola、pseudooctadecabacter、pseudopelagicola、pseudophaeobacter、假红杆菌属(pseudorhodobacter)、pseudoroseicyclus、pseudoroseovarius、pseudoruegeria、pseudoseohaeicola、pseudovibrio、psychromarinibacter、puniceibacterium、rhodobaca、rhodobaculum、rhodosalinus、小红卵菌属(rhodovulum)、roseibaca、roseibacterium、roseibacula、roseibium、roseicitreum、roseicyclus、roseinatronobacter、roseisalinus、roseivivax、玫瑰杆菌属(roseobacter)、roseovarius、rubellimicrobium、rubribacterium、rubricella、rubrimonas、鲁杰氏菌(ruegeria)、箭头菌属(sagittula)、salinihabitans、salinovum、salipiger、sedimentitalea、sediminimonas、seohaeicola、shimia、silicibacter、silicimonas、
sinorhodobacter、staleya、stappia、亚硫酸杆菌属(sulfitobacter)、tabrizicola、tateyamaria、thalassobacter、thalassobius、thalassococcus、thiobacimonas、thioclava、thiosphaera、tranquillimonas、tritonibacter、tropicibacter、tropicimonas、vadicella、wenxinia、xinfangfangia、xuhuaishuia、yangia、yoonia和youngimonas。
[0045]“副球菌(paracoccus)属的细菌”在此是指红杆菌科的革兰氏阴性细菌，其典型的种是脱氮微球菌(paracoccus dendrificans)。副球菌属包括以下种：paracoccus acridae、paracoccus aerius、paracoccus aestuarii、paracoccus aestuariivivens、paracoccus alcaliphilus、paracoccus alimentarius、paracoccus alkenifer、paracoccus aminophilus、paracoccus aminovorans、paracoccus angustae、paracoccus bengalensis、paracoccus caeni、paracoccus carotinifaciens、paracoccus cavernae、paracoccus chinensis、paracoccus communis、paracoccus contaminans、paracoccus denitrificans、paracoccus fistulariae、paracoccus fontiphilus、paracoccus haeundaensis、paracoccus halodenitrificans、paracoccus halophilus、paracoccus hibisci、paracoccus hibiscisoli、paracoccus homiensis、paracoccus huijuniae、paracoccus isoporae、paracoccus kocurii、paracoccus kondratievae、paracoccus koreensis、paracoccus laeviglucosivorans、paracoccus limosus、paracoccus litorisediminis、paracoccus lutimaris、paracoccus mangrovi、paracoccus marcusii、paracoccus marinus、paracoccus methylutens、paracoccus niistensis、paracoccus pacificus、paracoccus panacisoli、paracoccus pantotrophus、paracoccus rhizosphaerae、paracoccus saliphilus、paracoccus sanguinis、paracoccus sediminis、paracoccus seriniphilus、paracoccus solventivorans、paracoccus sordidisoli、paracoccus sphaerophysae、paracoccus stylophorae、paracoccus sulfuroxidans、paracoccus thiocyanatus、paracoccus tibetensis、paracoccus versutus、paracoccus yeei、paracoccus zeaxanthinifaciens和副球菌sp.菌株。
[0046]
在具体的实施方式中，paroccocus属的细菌是副球菌sp.(paracoccus sp)菌株。
[0047]“梭形杆菌(fusobacterium)属的细菌”在此是指梭形杆菌(fusobacteriaceae)科的厌氧的丝状革兰氏阴性细菌。梭形杆菌属包括以下种：坏死梭杆菌(fusobacterium necrophorum)、具核梭杆菌(fusobacterium nucleatum)、多形梭杆菌(fusobacterium polymorphum)和fusobacterium novum。
[0048]
在具体的实施方式中，本发明上下文中使用的标记物是选自由以下细菌的种组成的组：藤黄微球菌和副球菌sp.。
[0049]
标记物代谢物
[0050]
本发明上下文中使用的标记物可选自由代谢物，特别是通过上文中“标记物微生物”部分所限定的细菌产生的代谢物组成的组，选自3-羟基-3-甲基戊二酸、3-甲基戊二酸/2-甲基戊二酸、4-胍基丁酸、4-咪唑乙酸、5-氧代脯氨酸、乌头酸、己二酸、丙氨酸、α-酮戊二酸、阿拉伯糖酸/木糖酸、壬二酸、β-柠檬酰谷氨酸、胆碱、顺尿刊酸、柠康酸/戊烯二酸、果糖、富马酸、γ-谷氨酰丙氨酸、γ-谷氨酰谷氨酰胺、γ-谷氨酰甘氨酸、γ-谷氨酰异亮氨酸、γ-谷氨酰亮氨酸、γ-谷氨酰丝氨酸、γ-谷氨酰苏氨酸、γ-谷氨酰色氨酸、γ-谷氨酰
缬氨酸、戊二酸、甘油酸、甘油-3-磷酸、甘氨酸、异戊酰甘氨酸、犬尿氨酸、乳酸、亚油酰乙醇酰胺、苹果酸、马来酸、丙二酸、麦芽糖、蛋氨酸亚砜、甲基琥珀酸、n-乙酰精氨酸、n-乙酰丙氨酸、n-乙酰天冬氨酸、n-乙酰甘氨酸、n-乙酰组氨酸、n-乙酰苯丙氨酸、n-乙酰苏氨酸、n-乙酰缬氨酸、油酰胺、鸟氨酸、棕榈酰胺、庚二酸、脯氨酸、水杨酸、癸二酸、丝氨酸、辛二酸、琥珀酸、十一烷二酸和s-氨基-ω己内酰胺。
[0051]
在具体的实施方式中，代谢物选自犬尿氨酸、4-咪唑乙酸、马来酸、鸟氨酸、4-胍基丁酸、顺尿刊酸、丙二酸、γ-谷氨酰亮氨酸、n-乙酰精氨酸和甘油-3-磷酸。
[0052]
如本领域技术人员熟知的，这些代谢产物中的一种或多种可由上文中“标记物微生物组”部分所限定的一种或多种细菌产生。
[0053]
事实上，痤疮丙酸杆菌种的细菌产生脯氨酸、丙氨酸、甘氨酸、丝氨酸、胆碱、乳酸、苹果酸、马来酸、α-酮戊二酸和琥珀酸作为代谢物。
[0054]
细球菌科的细菌产生丙氨酸、丝氨酸、果糖和乳酸作为代谢物。
[0055]
短状杆菌属的细菌产生脯氨酸、甘氨酸、丝氨酸、果糖和麦芽糖作为代谢物。
[0056]
短杆菌属的细菌产生脯氨酸、丙氨酸、丝氨酸、鸟氨酸、胆碱、果糖、麦芽糖、富马酸、乳酸、苹果酸、戊二酸、α-酮戊二酸、琥珀酸、丙二酸、乌头酸、己二酸、水杨酸和癸二酸作为代谢物。
[0057]
伯克氏菌目的细菌产生脯氨酸、丙氨酸、甘氨酸、丝氨酸、乳酸、苹果酸和琥珀酸作为代谢物。
[0058]
副球菌属的细菌产生脯氨酸、丙氨酸、甘氨酸、丝氨酸、鸟氨酸、胆碱、果糖、麦芽糖、富马酸、乳酸、苹果酸、α-酮戊二酸、琥珀酸、马来酸、丙二酸、乌头酸和n-乙酰苯丙氨酸作为代谢物。
[0059]
红杆菌科的细菌产生丙氨酸、甘氨酸、谷氨酰胺、鸟氨酸和琥珀酸作为代谢物。
[0060]
梭形杆菌属的细菌产生脯氨酸、丙氨酸、甘氨酸、丝氨酸、鸟氨酸、胆碱、果糖、麦芽糖、富马酸、乳酸、苹果酸、戊二酸、α-酮戊二酸和琥珀酸作为代谢物。
[0061]
这些不同细菌产生的代谢物典型地记载于palazzi et al.(2018)environ.int.121:1341-1354、thierry et al.(2011)int.j.food microbiol.149:19-27、krulwich et al.(1976)j.bacteriol.127:179-183、mori et al.(1987)agricultural biol.chem.51:129-138、levy et al.(2017)current op.in microbiol.25:8-15、jin et al.(2014)mol.pharmacol.85:777-788、hug et al.(1999)j.photochem.photobiol.b 50:66-73和wolfe et al.(2016)curr.genet.62:335-341中。
[0062]
因此，在具体的实施方式中，乌头酸是由parococcus属的细菌和/或由短杆菌属的细菌产生的。
[0063]
在具体的实施方式中，己二酸是通由属短杆菌属的细菌产生的。
[0064]
在具体的实施方式中，丙氨酸是由痤疮丙酸杆菌种的细菌、细球菌科的细菌、短杆菌属的细菌、伯克氏菌目的细菌、副球菌属的细菌、红杆菌科的细菌和/或梭形杆菌属的细菌产生的。
[0065]
在具体的实施方式中，α-酮戊二酸是由痤疮丙酸杆菌种的细菌、短杆菌属的细菌、副球菌属的细菌和/或梭形杆菌属的细菌产生的。
[0066]
在具体的实施方式中，胆碱是由痤疮丙酸杆菌种的细菌、短杆菌属的细菌、副球菌
属的细菌和/或梭形杆菌属的细菌产生的。
[0067]
在具体的实施方式中，果糖是由痤疮丙酸杆菌种的细菌、细球菌科的细菌、短状杆菌属的细菌、短杆菌属的细菌、副球菌属的细菌和/或梭形杆菌属的细菌产生的。
[0068]
在具体的实施方式中，富马酸是由短杆菌属的细菌、副球菌属的细菌和/或梭形杆菌属的细菌产生的。
[0069]
在具体的实施方式中，γ-谷氨酰谷氨酰胺是由红杆菌科的细菌产生的。
[0070]
在具体的实施方式中，戊二酸是由短杆菌属的细菌和/或梭形杆菌属的细菌产生的。
[0071]
在具体的实施方式中，甘氨酸是由痤疮丙酸杆菌种的细菌、短状杆菌属的细菌、伯克氏菌目的细菌、副球菌属的细菌、红杆菌科的细菌和/或梭形杆菌属的细菌产生的。
[0072]
在具体的实施方式中，乳酸是由痤疮丙酸杆菌种的细菌、细球菌科的细菌、短杆菌属的细菌、伯克氏菌目的细菌、副球菌属的细菌和/或梭形杆菌属的细菌产生的。
[0073]
在具体的实施方式中，苹果酸是由痤疮丙酸杆菌种的细菌、短杆菌属的细菌、伯克氏菌目的细菌、副球菌属的细菌和/或梭形杆菌属的细菌产生的。
[0074]
在具体的实施方式中，马来酸是由痤疮丙酸杆菌种的细菌和/或副球菌属的细菌产生的。
[0075]
在具体的实施方式中，丙二酸是由短杆菌属的细菌和/或副球菌属的细菌产生的。
[0076]
在具体的实施方式中，麦芽糖是由短状杆菌属的细菌、短杆菌属的细菌、副球菌属的细菌和/或梭形杆菌属的细菌产生的。
[0077]
在具体的实施方式中，n-乙酰苯丙氨酸是由副球菌属的细菌产生的。
[0078]
在具体的实施方式中，鸟氨酸是由短杆菌属的细菌、副球菌属的细菌、红杆菌科的细菌和/或梭形杆菌属的细菌产生的。
[0079]
在具体的实施方式中，脯氨酸是由痤疮丙酸杆菌种的细菌、短状杆菌属的细菌、短杆菌属的细菌、伯克氏菌目的细菌、副球菌属的细菌和/或梭形杆菌属的细菌产生的。
[0080]
在具体的实施方式中，水杨酸是由短杆菌属产生的。
[0081]
在具体的实施方式中，癸二酸是由短杆菌属的细菌产生的。
[0082]
在具体的实施方式中，丝氨酸是由痤疮丙酸杆菌种的细菌、细球菌科的细菌、短状杆菌属的细菌、短杆菌属的细菌、伯克氏菌目的细菌、副球菌属的细菌和/或梭形杆菌属的细菌产生的。
[0083]
在具体的实施方式中，琥珀酸是由痤疮丙酸杆菌种的细菌、短杆菌属的细菌、伯克氏菌目的细菌、副球菌属的细菌、红杆菌科的细菌和/或梭形杆菌属的细菌产生的。
[0084]
诊断方法
[0085]
根据本发明的诊断方法是用于诊断皮肤的美学劣化，特别是与污染有关的美学劣化的方法。
[0086]
皮肤的美学劣化特别是选自美学的色素紊乱、缺少光泽和肤色不均匀。
[0087]“美学的色素紊乱”在此是指由色素的不足或缺失或者色素过多或分布不均匀造成的皮肤美学的瑕疵。美学的色素紊乱尤其包括皮肤颜色的不均匀、日光性雀斑样痣、黄褐斑和色素斑。
[0088]
在具体的实施方式中，皮肤的美学劣化选自色素斑和皮肤颜色的不均匀。
[0089]
皮肤尤其是指是面部的皮肤(特别是脸颊和或前额的皮肤)、颈线的皮肤、颈部的皮肤、手臂和前臂的皮肤。更优选地，皮肤是指面部的皮肤(特别是脸颊)和/或颈部的皮肤。
[0090]
在具体的实施方式中，皮肤的美学劣化与污染有关，特别是由于污染。
[0091]“污染”在此是指暴露于物质颗粒，特别是暴露于多环芳烃(pah)。
[0092]
在具体的实施方式中，污染是指暴露于物质颗粒，特别暴露于pah，导致受试者头发中的pah和pah代谢物的水平如下：
[0093]
2-oh-菲的水平是对照水平的至少1.8倍；
[0094]
3-oh-芴的水平是对照水平的至少1.6倍；
[0095]
3-oh-菲的水平是对照水平的至少1.7倍；
[0096]
b-b-荧蒽的水平是对照水平的至少1.8倍；
[0097]
苯并-g-h-i-苝的水平是对照水平的至少1.7倍；
[0098]
荧蒽的水平是对照水平的至少2倍，和/或
[0099]
芘的水平是对照水平的至少1.6倍；
[0100]
对照水平通常是指所述化合物在生活在污染少的城市，特别是一年中空气质量指数低于100的天数少于100天(特别是少于85天)的城市的受试者的头发样本中的水平。
[0101]
根据本发明的诊断方法包括：步骤(a)，确定受试者的皮肤样本确定至少一种标记物的水平，所述至少一种标记物选自由以下项组成的组：(i)上文“标记物微生物”部分中所限定的细菌，和(ii)上文中“标记物代谢物”部分所限定的代谢物。
[0102]
所述至少一种标记物的水平可通过任何合适的技术来确定。
[0103]
在具体的实施方式中，所述标记物是上文“标记物微生物”部分中所限定的细菌，并且所述至少一种标记物的水平是通过测量对应的16s rdna基因的水平来确定的。
[0104]
优选地，所述标记物是上文“标记物微生物”部分中所限定的细菌，并且所述至少一种标记物的水平是通过pcr扩增与测序16s rdna的v1-3区域来确定的。
[0105]
通常，提取皮肤样本中存在的基因组细菌dna，然后使用针对细菌16s rdna的v1-3区域的引物通过pcr对其进行扩增。对获得的16s rdna扩增子进行测序，从而能够识别对应的细菌。识别出的每种细菌16s rdna的水平通常用定量pcr平行测量。
[0106]
在另一具体的实施方式中，所述标记物是上文“标记物代谢物”部分所限定的代谢物，并且所述至少一种标记物的水平是通过液相色谱-质谱仪(liquid chromatography-mass spectrophotometer，lc/ms/ms)确定的。
[0107]
通常，提取皮肤样本并对其进行液相色谱-质谱法(lc/ms/ms)分析。通常基于保留指数、质量与文库中数据的对应性以及相对于标准的“正”和反ms/ms分数来识别存在的各种代谢物，并且代谢物的水平通常通过使用初级ms离子曲线下面积对lc/ms/ms获得的峰进行量化来测量。
[0108]
在具体的实施方式中，根据本发明的诊断方法进一步包括由以下项组成的步骤：
[0109]
(b)将在步骤(a)中确定的所述至少一种标记物的水平与对照进行比较，以及
[0110]
(c)基于步骤(b)的比较，确定受试者的皮肤是否表现出美学劣化，特别是表现出与污染有关的美学劣化。
[0111]
在具体的实施方式中，对照是参比值。
[0112]
在具体的实施方式中，参比值是由确定的人群(例如，年龄限定和/或限定皮肤类
型的人群)中所述标志物水平的平均值来确定的。
[0113]
在具体的实施方式中，参比值是受试者，特别是下文定义的生活在污染少的城市，特别是一年中空气质量指数低于100的天数少于100天，特别是少于85天的城市的受试者的人群中的所述标记物水平的平均值。
[0114]
在具体的实施方式中，受试者的皮肤在以下情况下被诊断为表现出美学劣化，特别是与污染有关的美学劣化：
[0115]-在受试者的皮肤样本中确定的痤疮丙酸杆菌种细菌的水平是对照水平的至少0.9倍；
[0116]-在受试者的皮肤样本中确定的细球菌科细菌的水平是对照水平的至少2.2倍；
[0117]-在受试者的皮肤样本中确定的短状杆菌属细菌的水平是对照水平高的至少1.7倍；
[0118]-在受试者的皮肤样本中确定的短杆菌属细菌的水平是对照水平的至少2.4倍；
[0119]-在受试者的皮肤样本中确定的伯克氏菌目细菌的水平是对照水平的至少1.8倍；
[0120]-在受试者的皮肤样本中确定的parococcus属的细菌的水平是对照水平的至少1.4倍；
[0121]-在受试者的皮肤样本中确定的红杆菌科细菌的水平是对照水平的至少1.4倍；和/或
[0122]-在受试者的皮肤样本中确定的梭形杆菌属细菌的水平是对照水平的至少0.7倍；
[0123]
对照水平通常是指所述标记物在生活在污染少的城市，特别是一年中空气质量指数低于100的天数少于100天(特别是少于85天)的城市的受试者的皮肤样本中的水平，并且
[0124]
标记物的水平通常通过测量对应的16s rdna基因的水平来确定，特别是通过pcr扩增结合测序16s rdna的v1-3区域来确定，通常如上文所述。
[0125]
在具体的实施方式中，受试者的皮肤在以下情况下被诊断为表现出美学劣化，特别是与污染有关的美学劣化：
[0126]-在受试者的皮肤样本中确定的藤黄微球菌种细菌的水平是对照水平的至少1.01倍，和/或
[0127]-在受试者的皮肤样本中确定的副球菌属细菌的水平是对照水平的至少1.4倍；
[0128]
对照水平通常是指所述标记物在生活在污染少的城市，特别是一年中空气质量指数低于100的天数少于100天(特别是少于85天)的城市的受试者的皮肤样本中的水平，并且
[0129]
标记物的水平通常通过测量对应的16s rdna基因的水平来确定，特别是通过pcr扩增结合测序16s rdna的v1-3区域来确定，通常如上文所述。
[0130]
在具体的实施方式中，受试者的皮肤在以下情况下被诊断为表现出美学劣化，特别是与污染有关的美学劣化：
[0131]-在受试者的皮肤样本中确定的3-羟基-3-甲基戊二酸水平是对照水平的至少1.3倍；
[0132]-在受试者的皮肤样本中确定的3-甲基戊二酸/2-甲基戊二酸水平是对照水平的至少1.3倍；
[0133]-在受试者的皮肤样本中确定的4-胍基丁酸水平是对照水平的至少1.4倍；
[0134]-在受试者的皮肤样本中确定的4-咪唑乙酸水平是对照水平的至少1.4倍；
[0135]-在受试者的皮肤样本中确定的5-氧代脯氨酸水平是对照水平的至少1.3倍；
[0136]-在受试者的皮肤样本中确定的乌头酸水平是对照水平的至少1.4倍；
[0137]-在受试者的皮肤样本中确定的己二酸水平是对照水平的至少1.2倍；
[0138]-在受试者的皮肤样本中确定的丙氨酸水平是对照水平的至少1.3倍；
[0139]-在受试者的皮肤样本中确定的α-酮戊二酸水平是对照水平的至少1.1倍；
[0140]-在受试者的皮肤样本中确定的阿拉伯糖酸/木糖酸水平是对照水平的至少1.4倍；
[0141]-在受试者的皮肤样本中确定的壬二酸水平是对照水平的至少1.2倍；
[0142]-在受试者的皮肤样本中确定的β-柠檬酰谷氨酸水平是对照水平的至少1.3倍；
[0143]-在受试者的皮肤样本中确定的胆碱水平是对照水平的至少1.2倍；
[0144]-在受试者的皮肤样本中确定的顺尿刊酸水平是对照水平的至少1.5倍；
[0145]-在受试者的皮肤样本中确定的柠康酸/戊烯二酸水平是对照水平的至少1.3倍；
[0146]-在受试者的皮肤样本中确定的果糖水平是对照水平的至少1.1倍；
[0147]-在受试者的皮肤样本中确定的富马酸水平是对照水平的至少1.2倍；
[0148]-在受试者的皮肤样本中确定的γ-谷氨酰丙氨酸水平是对照水平的至少1.3倍；
[0149]-在受试者的皮肤样本中确定的γ-谷氨酰谷氨酰胺水平是对照水平的至少1.2倍；
[0150]-在受试者的皮肤样本中确定的γ-谷氨酰甘氨酸水平是对照水平的至少1.4倍；
[0151]-在受试者的皮肤样本中确定的γ-谷氨酰异亮氨酸水平是对照水平的至少1.3倍；
[0152]-在受试者的皮肤样本中确定的γ-谷氨酰亮氨酸水平是对照水平的至少1.4倍；
[0153]-在受试者的皮肤样本中确定的γ-谷氨酰丝氨酸水平是对照水平的至少1.4倍；
[0154]-在受试者的皮肤样本中确定的γ-谷氨酰苏氨酸水平是对照水平的至少1.3倍；
[0155]-在受试者的皮肤样本中确定的γ-谷氨酰色氨酸水平是对照水平的至少1.4倍；
[0156]-在受试者的皮肤样本中确定的γ-谷氨酰缬氨酸水平是对照水平的至少1.4倍；
[0157]-在受试者的皮肤样本中确定的戊二酸水平是对照水平的至少1.1倍；
[0158]-在受试者的皮肤样本中确定的甘油酸水平是对照水平的至少1.1倍；
[0159]-在受试者的皮肤样本中确定的甘油-3-磷酸水平是对照水平的至少1.6倍；
[0160]-在受试者的皮肤样本中确定的甘氨酸水平是对照水平的至少1.3倍；
[0161]-在受试者的皮肤样本中确定的异戊酰甘氨酸水平是对照水平的至少1.3倍；
[0162]-在受试者的皮肤样本中确定的犬尿氨酸水平是对照水平的至少2.3倍；
[0163]-在受试者的皮肤样本中确定的乳酸水平是对照水平的至少1.2倍；
[0164]-在受试者的皮肤样本中确定的亚油酰乙醇酰胺水平是对照水平的至少1.3倍；
[0165]-在受试者的皮肤样本中确定的苹果酸水平是对照水平的至少1.2倍；
[0166]-在受试者的皮肤样本中确定的马来酸水平是对照水平的至少1.5倍；
[0167]-在受试者的皮肤样本中确定的丙二酸水平是对照水平的至少1.4倍；
[0168]-在受试者的皮肤样本中确定的麦芽糖水平是对照水平的至少1.6倍；
[0169]-在受试者的皮肤样本中确定的蛋氨酸亚砜水平是对照水平的至少1.2倍；
[0170]-在受试者的皮肤样本中确定的甲基琥珀酸水平是对照水平的至少1.3倍；
[0171]-在受试者的皮肤样本中确定的n-乙酰精氨酸水平是对照水平的至少1.6倍；
[0172]-在受试者的皮肤样本中确定的n-乙酰丙氨酸水平是对照水平的至少1.2倍；
[0173]-在受试者的皮肤样本中确定的n-乙酰天冬氨酸水平是对照水平的至少1.4倍；
[0174]-在受试者的皮肤样本中确定的n-乙酰甘氨酸水平是对照水平的至少1.3倍；
[0175]-在受试者的皮肤样本中确定的n-乙酰组氨酸水平是对照水平的至少1.2倍；
[0176]-在受试者的皮肤样本中确定的n-乙酰苯丙氨酸水平是对照水平的至少1.3倍；
[0177]-在受试者的皮肤样本中确定的n-乙酰苏氨酸是对照水平的至少1.1倍；
[0178]-在受试者的皮肤样本中确定的n-乙酰缬氨酸水平是对照水平的至少1.2倍；
[0179]-在受试者的皮肤样本中确定的油酰胺水平是对照水平的至少1.3倍；
[0180]-在受试者的皮肤样本中确定的鸟氨酸水平是对照水平的至少1.3倍；
[0181]-在受试者的皮肤样本中确定的棕榈酰胺水平是对照水平的至少1.4倍；
[0182]-在受试者的皮肤样本中确定的庚二酸水平是对照水平的至少1.2倍；
[0183]-在受试者的皮肤样本中确定的脯氨酸水平是对照水平的至少1.3倍；
[0184]-在受试者的皮肤样本中确定的水杨酸水平是对照水平的至少1.5倍；
[0185]-在受试者的皮肤样本中确定的癸二酸水平是对照水平的至少1.2倍；
[0186]-在受试者的皮肤样本中确定的丝氨酸水平是对照水平的至少1.3倍；
[0187]-在受试者的皮肤样本中确定的辛二酸水平是对照水平的至少1.2倍；
[0188]-在受试者的皮肤样本中确定的琥珀酸水平是对照水平的至少1.2倍；
[0189]-在受试者的皮肤样本中确定的十一烷二酸水平是对照水平的至少1.3倍，和/或
[0190]-在受试者的皮肤样本中确定的s-氨基-ω己内酰胺水平是对照水平的至少2.3倍；
[0191]
对照水平通常是指所述标记物在生活在污染少的城市，特别是一年中空气质量指数低于100的天数少于100天(特别是少于85天)的城市的受试者的皮肤样本中的水平，并且
[0192]
标记物的水平通常通过液相色谱-质谱法(lc/ms/ms)来确定，通常如上文所述。
[0193]
在具体的实施方式中，受试者的皮肤在以下情况下被诊断为表现出美学劣化，特别是与污染有关的美学劣化：
[0194]-在受试者的皮肤样本中确定的犬尿氨酸水平是对照水平的至少2.3倍；
[0195]-在受试者的皮肤样本中确定的4-咪唑乙酸水平是对照水平的至少1.4倍；
[0196]-在受试者的皮肤样本中确定的马来酸水平是对照水平的至少1.5倍；
[0197]-在受试者的皮肤样本中确定的鸟氨酸水平是对照水平的至少1.3倍；
[0198]-在受试者的皮肤样本中确定的4-胍基丁酸水平是对照水平的至少1.4倍；
[0199]-在受试者的皮肤样本中确定的顺尿康酸水平是对照水平的至少1.5倍；
[0200]-在受试者的皮肤样本中确定的丙二酸水平是对照水平的至少1.4倍；
[0201]-在受试者的皮肤样本中确定的γ-谷氨酰亮氨酸水平是对照水平的至少1.4倍；
[0202]-在受试者的皮肤样本中确定的n-乙酰精氨酸水平是对照水平的至少1.6倍，和/或
[0203]-在受试者的皮肤样本中确定的甘油-3-磷酸水平是对照水平的至少1.6倍；
[0204]
对照水平通常是指所述标记物在生活在污染少的城市，特别是一年中空气质量指数低于100的天数少于100天(特别是少于85天)的城市的受试者的皮肤样本中的水平，并且
[0205]
标记物的水平通常通过液相色谱-质谱法(lc/ms/ms)来确定，通常如上文所述。
[0206]
根据优选的实施方式，在根据本发明的诊断方法中使用的受试者的皮肤样本是从受试者的皮肤、优选从受试者的面部、特别是从受试者的脸颊和/或前额采集，优选地以非侵入性方式采集的。优选地，皮肤样本来自角质层。
[0207]
角质层是表皮的最外层，并且包括皮肤表面。它主要由死细胞组成。
[0208]
根据实施方式，根据本发明的诊断方法包括：从受试者采集皮肤样本的步骤。该步骤优选以非侵入性方式，且特别是不需要局部麻醉的方式进行。根据优选的实施方式，通过摩擦皮肤表面或使用诸如盘的粘性表面来进行采集样本的步骤。
[0209]
在具体的实施方式中，皮肤样本是使用盘来采集的。
[0210]“受试者”在此是指优选年龄在25至45岁的人。优选地，受试者是女性。优选地，受试者是亚洲人类型。
[0211]
本发明还涉及对受试者的表现出特别是与污染有关的美学劣化的皮肤进行美容治疗的方法，所述方法包括以下步骤：
[0212]
a)通过实施根据本发明的诊断方法诊断受试者表现出皮肤的美学劣化，特别是与污染有关的美学劣化。
[0213]
b)如果受试者被诊断为表现出皮肤的美学劣化，特别是与污染有关的美学劣化，则用能够减少和/或减缓皮肤的美学劣化的化妆品组合物治疗所述受试者的皮肤。
[0214]
用于评估皮肤暴露于污染的方法
[0215]
本发明还涉及用于评估受试者的皮肤暴露于污染的方法，包括：步骤(a)，确定受试者皮肤样本中至少一种标记物的水平，该至少一种标记物选自以下项组成的组：(i)上文“标记物微生物”部分所限定的细菌和(ii)上文“标记物代谢物”部分所限定的代谢物。
[0216]
该污染如上文“诊断方法”部分中所限定。
[0217]
步骤(a)的确定优选地如上文中用于诊断方法所描述的那样实施。
[0218]
皮肤样本如上文“诊断方法”部分中所限定。
[0219]
受试者如上文“诊断方法”部分中所限定。
[0220]
在具体的实施方式中，根据本发明的评估方法进一步包括由以下项组成的步骤：
[0221]
(b)将在步骤(a)中确定的所述至少一种标记物的水平与对照进行比较，以及
[0222]
(c)基于步骤(b)中的比较，确定受试者是否经历了皮肤暴露于污染。
[0223]
在特定的实施方式中，对照是参比值。
[0224]
在具体的实施方式中，参比值是由确定的人群(例如，年龄限定和/或限定皮肤类型的人群)中所述标志物水平的平均值来确定的。
[0225]
在具体的实施方式中，参比值是受试者，特别是下文定义的生活在污染少的城市，特别是一年中空气质量指数低于100的天数少于100，特别是少于85的城市的受试者的人群中的所述标记物水平的平均值。
[0226]
在具体的实施方式中，受试者在以下情况下被确定为已经经历了皮肤暴露于污染：
[0227]-在受试者的皮肤样本中确定的痤疮丙酸杆菌种细菌的水平是对照水平的至少0.9倍；
[0228]-在受试者的皮肤样本中确定的细球菌科细菌的水平是对照水平的至少2.2倍；
[0229]-在受试者的皮肤样本中确定的短状杆菌属细菌的水平是对照水平的至少1.7倍；
[0230]-在受试者的皮肤样本中确定的短杆菌属细菌的水平是对照水平的至少2.4倍；
[0231]-在受试者的皮肤样本中确定的伯克氏菌目细菌的水平是对照水平的至少1.8倍；
[0232]-在受试者的皮肤样本中确定的parococcus属细菌的水平是对照水平的至少1.4倍；
[0233]-在受试者的皮肤样本中确定的红杆菌科细菌的水平是对照水平的至少1.4倍；
[0234]-在受试者的皮肤样本中确定的梭形杆菌属细菌的水平是对照水平的至少0.7倍；
[0235]
对照水平通常是指所述标记物生活在污染少的城市，特别是一年中空气质量指数低于100的天数少于100天(特别是少于85天)的城市的受试者的皮肤样本中的水平，并且
[0236]
标记物的水平通常通过测量对应的16s rdna基因的水平来确定，特别是通过pcr扩增结合测序16s rdna的v1-3区域来确定，通常如上文所述。
[0237]
在具体的实施方式中，受试者在以下情况下被确定为已经经历了皮肤暴露于污染：
[0238]-在受试者的皮肤样本中确定的藤黄微球菌种细菌的水平是对照水平的至少1.01倍，和/或
[0239]-在受试者的皮肤样本中确定的副球菌属细菌的水平是对照水平的至少1.4倍；
[0240]
对照水平通常是指所述标记物在生活在污染少的城市，特别是一年中空气质量指数低于100的天数少于100天(特别是少于85天)的城市的受试者的皮肤样本中的水平，并且
[0241]
标记物的水平通常通过测量对应的16s rdna基因的水平来确定，特别是通过pcr扩增结合测序16s rdna的v1-3区域来确定，通常如上文所述。
[0242]
在具体的实施方式中，受试者在以下情况下被确定为已经经历了皮肤暴露于污染：
[0243]-在受试者的皮肤样本中确定的3-羟基-3-甲基戊二酸水平是对照水平的至少1.3倍；
[0244]-在受试者的皮肤样本中确定的3-甲基戊二酸/2-甲基戊二酸水平是对照水平的至少1.3倍；
[0245]-在受试者的皮肤样本中确定的4-胍基丁酸水平是对照水平的至少1.4倍；
[0246]-在受试者的皮肤样本中确定的4-咪唑乙酸水平是对照水平的至少1.4倍；
[0247]-在受试者的皮肤样本中确定的5-氧代脯氨酸水平是对照水平的至少1.3倍；
[0248]-在受试者的皮肤样本中确定的乌头酸水平是对照水平的至少1.4倍；
[0249]-在受试者的皮肤样本中确定的己二酸水平是对照水平的至少1.2倍；
[0250]-在受试者的皮肤样本中确定的丙氨酸水平是对照水平的至少1.3倍；
[0251]-在受试者的皮肤样本中确定的α-酮戊二酸水平是对照水平的至少1.1倍；
[0252]-在受试者的皮肤样本中确定的阿拉伯糖酸/木糖酸水平是对照水平的至少1.4倍；
[0253]-在受试者的皮肤样本中确定的壬二酸水平是对照水平的至少1.2倍；
[0254]-在受试者的皮肤样本中确定的β-柠檬酰谷氨酸水平是对照水平的至少1.3倍；
[0255]-在受试者的皮肤样本中确定的胆碱水平是对照水平的至少1.2倍；
[0256]-在受试者的皮肤样本中确定的顺尿刊酸水平是对照水平的至少1.5倍；
[0257]-在受试者的皮肤样本中确定的柠康酸/戊烯二酸水平是对照水平的至少1.3倍；
[0258]-在受试者的皮肤样本中确定的果糖水平是对照水平的至少1.1倍；
[0259]-在受试者的皮肤样本中确定的富马酸水平是对照水平的至少1.2倍；
[0260]-在受试者的皮肤样本中确定的γ-谷氨酰丙氨酸水平是对照水平的至少1.3倍；
[0261]-在受试者的皮肤样本中确定的γ-谷氨酰谷氨酰胺水平是对照水平的至少1.2倍；
[0262]-在受试者的皮肤样本中确定的γ-谷氨酰甘氨酸水平是对照水平的至少1.4倍；
[0263]-在受试者的皮肤样本中确定的γ-谷氨酰异亮氨酸水平是对照水平的至少1.3倍；
[0264]-在受试者的皮肤样本中确定的γ-谷氨酰亮氨酸水平是对照水平的至少1.4倍；
[0265]-在受试者的皮肤样本中确定的γ-谷氨酰丝氨酸水平是对照水平的至少1.4倍；
[0266]-在受试者的皮肤样本中确定的γ-谷氨酰苏氨酸水平是对照水平的至少1.3倍；
[0267]-在受试者的皮肤样本中确定的γ-谷氨酰色氨酸水平是对照水平的至少1.4倍；
[0268]-在受试者的皮肤样本中确定的γ-谷氨酰缬氨酸水平是对照水平的至少1.4倍；
[0269]-在受试者的皮肤样本中确定的戊二酸水平是对照水平的至少1.1倍；
[0270]-在受试者的皮肤样本中确定的甘油酸水平是对照水平的至少1.1倍；
[0271]-在受试者的皮肤样本中确定的甘油-3-磷酸水平是对照水平的至少1.6倍；
[0272]-在受试者的皮肤样本中确定的甘氨酸水平是对照水平的至少1.3倍；
[0273]-在受试者的皮肤样本中确定的异戊酰甘氨酸水平是对照水平的至少1.3倍；
[0274]-在受试者的皮肤样本中确定的犬尿氨酸水平是对照水平的至少2.3倍；
[0275]-在受试者的皮肤样本中确定的乳酸水平是对照水平的至少1.2倍；
[0276]-在受试者的皮肤样本中确定的亚油酰乙醇酰胺水平是对照水平的至少1.3倍；
[0277]-在受试者的皮肤样本中确定的苹果酸水平是对照水平的至少1.2倍；
[0278]-在受试者的皮肤样本中确定的马来酸水平是对照水平的至少1.5倍；
[0279]-在受试者的皮肤样本中确定的丙二酸水平是对照水平的至少1.4倍；
[0280]-在受试者的皮肤样本中确定的麦芽糖水平是对照水平的至少1.6倍；
[0281]-在受试者的皮肤样本中确定的蛋氨酸亚砜水平是对照水平的至少1.2倍；
[0282]-在受试者的皮肤样本中确定的甲基琥珀酸水平是对照水平的至少1.3倍；
[0283]-在受试者的皮肤样本中确定的n-乙酰精氨酸水平是对照水平的至少1.6倍；
[0284]-在受试者的皮肤样本中确定的n-乙酰丙氨酸水平是对照水平的至少1.2倍；
[0285]-在受试者的皮肤样本中确定的n-乙酰天冬氨酸水平是对照水平的至少1.4倍；
[0286]-在受试者的皮肤样本中确定的n-乙酰甘氨酸水平是对照水平的至少1.3倍；
[0287]-在受试者的皮肤样本中确定的n-乙酰组氨酸水平是对照水平的至少1.2倍；
[0288]-在受试者的皮肤样本中确定的n-乙酰苯丙氨酸水平是对照水平的至少1.3倍；
[0289]-在受试者的皮肤样本中确定的n-乙酰苏氨酸是对照水平的至少1.1倍；
[0290]-在受试者的皮肤样本中确定的n-乙酰缬氨酸水平是对照水平的至少1.2倍；
[0291]-在受试者的皮肤样本中确定的油酰胺水平是对照水平的至少1.3倍；
[0292]-在受试者的皮肤样本中确定的鸟氨酸水平是对照水平的至少1.3倍；
[0293]-在受试者的皮肤样本中确定的棕榈酰胺水平是对照水平的至少1.4倍；
[0294]-在受试者的皮肤样本中确定的庚二酸水平是对照水平的至少1.2倍；
[0295]-在受试者的皮肤样本中确定的脯氨酸水平是对照水平的至少1.3倍；
[0296]-在受试者的皮肤样本中确定的水杨酸水平是对照水平的至少1.5倍；
[0297]-在受试者的皮肤样本中确定的癸二酸水平是对照水平的至少1.2倍；
[0298]-在受试者的皮肤样本中确定的丝氨酸水平是对照水平的至少1.3倍；
[0299]-在受试者的皮肤样本中确定的辛二酸水平是对照水平的至少1.2倍；
[0300]-在受试者的皮肤样本中确定的琥珀酸水平是对照水平的至少1.2倍；
[0301]-在受试者的皮肤样本中确定的十一烷二酸水平是对照水平的至少1.3倍，和/或
[0302]-在受试者的皮肤样本中确定的s-氨基-ω己内酰胺水平是对照水平的至少2.3倍；
[0303]
对照水平通常是指所述标记物在生活在污染少的城市，特别是一年中空气质量指数低于100的天数少于100天(特别是少于85天)的城市的受试者的皮肤样本中的水平，并且
[0304]
标记物的水平通常通过液相色谱-质谱法(lc/ms/ms)来确定，通常如上文所述。
[0305]
在具体的实施方式中，受试者在以下情况下被确定为已经经历了皮肤暴露于污染：
[0306]-在受试者的皮肤样本中确定的犬尿氨酸水平是对照水平的至少2.3倍；
[0307]-在受试者的皮肤样本中确定的4-咪唑乙酸水平是对照水平的至少1.4倍；
[0308]-在受试者的皮肤样本中确定的马来酸水平是对照水平的至少1.5倍；
[0309]-在受试者的皮肤样本中确定的鸟氨酸水平是对照水平的至少1.3倍；
[0310]-在受试者的皮肤样本中确定的4-胍基丁酸水平是对照水平的至少1.4倍；
[0311]-在受试者的皮肤样本中确定的顺尿康酸水平是对照水平的至少1.5倍；
[0312]-在受试者的皮肤样本中确定的丙二酸水平是对照水平的至少1.4倍；
[0313]-在受试者的皮肤样本中确定的γ-谷氨酰亮氨酸水平是对照水平的至少1.4倍；
[0314]-在受试者的皮肤样本中确定的n-乙酰精氨酸水平是对照水平的至少1.6倍，和/或
[0315]-在受试者的皮肤样本中确定的甘油-3-磷酸水平是对照水平的至少1.6倍；
[0316]
对照水平通常是指所述标记物在生活在污染少的城市，特别是一年中空气质量指数低于100的天数少于100天(特别是少于85天)的城市的受试者的皮肤样本中的水平，并且
[0317]
标记物的水平通常通过液相色谱-质谱法(lc/ms/ms)来确定，通常如上文所述。
[0318]
通过下文的附图和实施例来更详细地描述本发明。
[0319]
序列描述
[0320]
[0321]
[0322]
附图说明
[0323]
图1：实施例中限定的gp1和gp2组中女性脸颊和前额处蔓延的黄斑的外观和严重程度(平均分数)。
[0324]
图2：每组中蔓延的黄斑的严重程度，临床分数为1至4(4为最严重)。
具体实施方式
[0325]
实施例
[0326]
下面的实施例示出了识别包括60种代谢物和8种微生物的特征(signatures)，其在暴露于慢性污染的个体(基于在她们的头发样本中检测到高水平的污染物)的皮肤样本中受到显著调节。
[0327]
方法和结果
[0328]“被污染”与“未被污染”组的识别
[0329]
在下文中称为第1组(gp1)和第2组(gp2)的两组个体来自于对pah(多环芳烃)数据块、代谢物和细菌微生物组的综合无监督多元分析。
[0330]
将来自暴露于高水平污染的42名女性(gp1)的皮肤样本与暴露于相对较低水平污染的45名女性(gp2)进行比较。两组女性健康状况良好，年龄25至45岁。第1组(gp1)中，30/42名女性在中国的受污染城市生活了至少15年。第2组(gp2)中有42/45名女性在污染较低的城市生活了至少15年。
[0331]
受污染的城市和未受污染的城市是基于一年内显著区别的空气质量指数(aqi)来选择的。
[0332]
在这里，污染被定义为暴露于物质颗粒，并通过分析这些女性的头发样本中的pah和pah代谢物来确定(palazzi et al.(2018)environment international 121:1341-1354)。
[0333]
pah和pah代谢物以pg/ml为单位进行量化，并在两组之间进行比较。进行v检验分析并计算倍数变化(f.c.)。统计分析在单独部分中进行描述。
[0334]
表：f.c.pah和pah代谢物，gp1与gp2
[0335][0336]
与gp2中的女性相比，gp1中的女性在面颊和前额上具有更高的临床症状“蔓延的黄斑或不均匀的肤色”(见图1)。在1到4的分数范围内，这种临床症状的严重程度在gp1中高于在gp2中的严重程度(见图2)。
[0337]
代谢物的分析
[0338]
对gp1和gp2的样本进行代谢物分析。所有样本使用非靶向方法进行分析。
[0339]
总之，提取样本并将其分成等份，用于液相色谱-质谱法(lc/ms/ms)和极性液相色谱平台的分析。使用合适的软件来使离子对应于标准的自定义库，该标准的自定义文库用于识别代谢物和通过峰面积积分来量化代谢物。
[0340]
因此，生化识别是基于3个标准：在所提出识别的窄保留窗口内的保留指数、与库精确对应的质量
±
10ppm，以及实验数据与真实标准之间的“正”和负ms/ms分数。ms/ms分数是基于实验光谱中存在的离子和库中存在的离子的比较。尽管基于这些因素之一，分子之间可能存在相似性，但使用三个数据点可以区分和区别生化分子。
[0341]
获取超过3300种市售纯化的标准化合物并记录在lims中，以在所有平台进行分析来确定它们的分析特性。为结构上未命名的生化分子创建额外的质谱条目，从而通过它们的再现(recurring)性质(色谱和质谱)来识别。这些化合物有可能通过未来获得对应的纯
化标准或通过常规结构分析来识别。使用初级ms离子曲线下面积来进行峰的量化。
[0342]
使用常规t检验来确定统计显著性。
[0343]
进行多个处理程序以确保为统计分析和数据解释提供高质量的数据集。对质量控制和处理过程进行设计以确保精确和连贯地识别真正的化学实体，并消除代表系统伪影、错误分配和背景噪音的那些。
[0344]
表：f.c.代谢物，gp1与gp2
[0345]
6770中所公开的修改使用powersoil 分离试剂盒(mo bio laboratories,carlsbad,ca,usa)来提取dnag。此外，在洗脱c6后，洗脱液再次通过同一过滤柱，以提高产量。平行提取不含dna的水的阴性对照。对每个dnag样本均使用靶向细菌16s rrna的v1-3区域的引物一式三份进行pcr，从而使获得的皮肤细菌群落的图像更为精确(meisel et al.(2016)j.invest.dermatol.136:947-956)。对于16s rrna的分析，在pcr 7500快速实时pcr系统(applied biosystems,foster city,ca,usa)上进行扩增子pcr和索引pcr，并且用dna/rna纯化珠(seqmatic,fremont,ca,usa)来纯化扩增子。通过seqmatic llc(fremont,ca,usa)进行在illumina平台上的文库制备和300bp细菌核酸的配对末端测序。
[0354]-处理rrna 16s基因的序列和生物信息学分析
[0355]
配对的细菌和真菌读数分别通过使用usearch中的
“‑
fastq_mergeairs”命令以.fastq格式进行合并。使用usearch中的
“‑
fastq_filter”命令过滤合并的读数以进行质量控制，其中最大预期错误率为0.01。合并的读数在45bp处被削减，消除较短的读数。使用uparse算法(edgar(2013)nature methods 10:996-998)对过滤后的读数以97％序列一致性进行otu分组，并且使用qiime(1.9版)中的“assign_taxonomy.py”命令针对silva数据库(128输出)为代表otus细菌的序列提供分类信息。超过阴性对照5％的分类系中存在的otu被认为是潜在污染物(leung et al.(2018)microbiome 6:26)，并从数据集中消除。此外，还消除嵌合体、叶绿体和线粒体otus。在质量控制和消除不良读数之后，总共保留了9656916细菌读数。
[0356]
表：f.c.细菌微生物组，gp1与gp2
[0357][0358]
统计分析
[0359]
在原始尺度中，根据原始表面计数对代谢物的测量值进行标准化，然后将每个代谢物按比例缩放以获得等于1的中位数，并将缺失值估算为最小值。对转换后的值进行统计分析。
[0360]
进行多块统计分析，以在统一模型中将代谢物、脸颊上采样的微生物组数据和pah数据关联起来。该分析使发明人能够识别个体的相关组，并根据临床分数的类型使用χ2检验或方差分析的方法用临床变量来表征这些组。
[0361]
更准确地说，进行稀疏广义典型相关分析(witten et al.(2008)biostatistics 10:515-534)以选择与块之间的协方差/相关结构显著相关的描述符。然后，基于选定的描述符，实施被称为maxvar-a(tenenhaus et al.(2017)psychometrika 82:737-777)的正则化pca共识，以构建共识空间。最后，共识空间上的分层分组使得能够揭示两个特征组gp1和
gp2。
[0362]
基于块描述符使用学生t检验进行组间比较。