一种用于饲料添加剂的脂质体及其制备方法与流程

1.本发明涉及畜禽饲料技术领域，特别涉及一种用于饲料添加剂的脂质体及其制备方法。


背景技术：

2.饲料添加剂是指在饲料生产加工、使用过程中添加的少量或微量物质，在饲料中用量很少但作用显著。饲料添加剂是现代饲料工业必然使用的原料，对强化基础饲料营养价值，提高动物生产性能，保证动物健康，节省饲料成本，改善畜产品品质等方面有明显的效果。
3.随着禽流感等的发生，给动物养殖业主带来了巨大的损失。饲养业主为降低风险，经常违规大剂量使用抗生素；又为提高产量，大剂量的使用激素。长期或大量使用抗生素，导致畜禽肉、奶等食用产品中有大量抗生素残留，引发食用人群的中毒或过敏的情况时有发生，残留的激素又会导致食用者骨质疏松，免疫功能低下，儿童的过早成熟等副作用。
4.天然产物含有多种营养成分和生物活性物质，兼有营养和药物（抗微生物、抗寄生虫、抗炎和镇痛等）的双重作用，既可提高生产性能和防病作用，又有低残留、无污染、不易产生耐药性等特点。然而天然植物提取物一般均为难溶于水的液态物质，如果不经处理直接将天然植物提取物作为饲料添加剂添加到饲料中，不但不利于饲料的贮藏、运输，也会极大地降低其生物利用度，限制药效的发挥，同时提取物的稳定性差，在氧气、光照和热量的作用下，活性成分极易分解或变质，严重影响产品的质量和药效。


技术实现要素：

5.基于此，本发明提供一种用于饲料添加剂的脂质体及其制备方法，将肉桂药材、鱼腥草药材和苍术药材进行提取，得到挥发油组合物，再将挥发油组合物与益生菌包封在脂质体内，提高了挥发油、益生菌的稳定性和生物利用度，便于储藏和运输，同时作为饲料添加剂发挥挥发油和益生菌的药效。
6.本发明采用的技术方案是：一种用于饲料添加剂的脂质体及其制备方法，包括由卵磷脂和胆固醇形成的脂质体，以及脂质体中包封的挥发油组合物、益生菌；其中，所述挥发油组合物具有肉桂挥发油、鱼腥草挥发油、苍术挥发油。
7.在本技术公开的用于饲料添加剂的脂质体中，所述益生菌为酵母菌、芽孢杆菌、双歧杆菌、鼠李糖乳杆菌和嗜酸乳杆菌的混合物。
8.在本技术公开的用于饲料添加剂的脂质体中，所述卵磷脂：胆固醇的质量比为3~5:1。
9.在本技术公开的用于饲料添加剂的脂质体中，所述脂质体：挥发油组合物：益生菌的质量比为10~20:4:1。
10.在本技术公开的用于饲料添加剂的脂质体中，所述肉桂挥发油：鱼腥草挥发油：苍
术挥发油的质量比为2~3:1~2:1。
11.前述用于饲料添加剂的脂质体的制备方法，包括以下步骤：s1.挥发油的提取分别将肉桂药材、鱼腥草药材以及苍术药材，干燥，粉碎，进行水蒸气蒸馏，得到肉桂挥发油、鱼腥草挥发油和苍术挥发油；s2.脂质体的制备s21.称取益生菌，将其溶于pbs缓冲溶液，得到混合溶液1，40~50℃保温，备用；s22.称取肉桂挥发油、鱼腥草挥发油、苍术挥发油、卵磷脂、胆固醇、乳化剂，溶于适量的氯仿-乙醇混合液中，得到混合溶液2；s23. 将混合溶液2放入到水浴中加热，减压旋转蒸发，去除混合溶液2中的溶剂，并干燥，得到一层均匀脂膜；s24.将混合溶液1加入脂膜中，于60~80w超声混合20~40min，得混悬液；将混悬液高压乳匀，过滤，得脂质体；s25. 在脂质体中加入冻干保护剂，于-70~-100℃冷冻后进行冷冻干燥，得到脂质体冻干粉。
12.在本技术公开的制备方法中，所述步骤s1具体为：将干燥后的肉桂药材、鱼腥草药材以及苍术药材用粉碎机粉碎，得到药材粉末；称取药材粉末，加入5~10倍蒸馏水，于35~40℃、300~400w条件下超声20~30min；将超声处理后的溶液于100~120℃下进行蒸馏提取3~5 h，收集蒸馏冷凝液中的油状物质，并加入适量无水硫酸钠脱水，过微孔滤膜，即得肉桂挥发油、鱼腥草挥发油和苍术挥发油。
13.在本技术公开的制备方法中，所述步骤s23具体为：将混合溶液2放入到水浴中，于40~50℃减压旋转蒸发20~40min，去除混合溶液2中的溶剂，再用真空干燥箱进行干燥，得到一层均匀脂膜。
14.在本技术公开的制备方法中，所述步骤s22中的乳化剂为胆酸钠。
15.在本技术公开的制备方法中，所述步骤s25中的冻干保护剂为海藻糖、甘露醇、蔗糖、乳糖中的一种或多种。
16.肉桂挥发油是从肉桂干燥树皮中提取的挥发性成分，具有浓郁的芳香气味，其主要化学成分以芳香醛类、芳香酯类、脂肪酸和菇类化合物为主，其中以肉桂醛含量最高。肉桂醛具有抗菌、抗氧化、抗病毒等功效。肉桂醛对多种细菌和真菌具有明显的抑制和杀灭作用，可以直接灭杀病毒，也可抑制病毒的复制。肉桂醛具有促进动物生长，提高饲料利用率和调控肠道菌群的功能，且可以增加饲料的香味，引诱动物进食。
17.鱼腥草是三白草科植物，属于多年生草本植物，既是药品，又是食品。鱼腥草挥发油为其主要功效物质，具有抗菌消毒、清热镇痛、增强机体免疫力和利尿作用，不但可以作为家畜的饲料，同时在家畜疾病防治中也起到重要作用，具有良好的应用效果。
18.苍术为菊科苍术属植物，有研究表明，苍术挥发油具有广谱抗菌、抗病毒、抗炎、调整胃肠运动功能、促进骨骼钙化等作用。在饲料中添加苍术挥发油,对预防家禽传染性支气管炎、喉炎等均有良好效果。
19.益生菌是对动物有益的细菌，投入机体后通过改善宿主肠道菌群生态平衡而发挥有益作用，具有预防或改善腹泻，预防生殖系统感染，增强机体免疫力，促进肠道消化系统
健康，帮助吸收营养成分等功效。益生菌在储存和肠道消化的过程当中，会导致活性降低，所以通过脂质体包埋，可以帮助抵御胃酸、胆汁、消化酶的侵害。
20.发明的有益效果是：将肉桂药材、鱼腥草药材和苍术药材通过超声波辅助蒸馏进行提取，得到肉桂挥发油、鱼腥草挥发油和苍术挥发油。再以卵磷脂、胆固醇为壁材，将挥发油与益生菌包封，形成脂质体，提高了挥发油、益生菌的稳定性和生物利用度，便于储藏和运输，同时作为饲料添加剂发挥挥发油和益生菌的药效。将制备得到的脂质体用作饲料添加剂加入鸡饲料中，能明显降低鸡的腹泻率。
附图说明
21.图1是本发明中脂质体存放过程中的细菌总数变化图。
具体实施方式
22.在下文中，仅简单地描述了某些示例性实施例。正如本领域技术人员可认识到的那样，在不脱离本发明的精神或范围的情况下，可通过各种不同方式修改所描述的实施例。
23.实施例中涉及的药品及试剂，若无特殊说明，均为普通市售产品。
24.下面对本发明的实施例进行详细说明。
25.实施例1一种用于饲料添加剂的脂质体，包括由卵磷脂和胆固醇形成的脂质体，以及脂质体中包封的挥发油组合物、益生菌；其中，挥发油组合物具有肉桂挥发油、鱼腥草挥发油、苍术挥发油。肉桂挥发油、鱼腥草挥发油和苍术挥发油均具有抗菌、抗病毒等功效，可以促进动物生长，提高饲料利用率和调控肠道菌群的功能。
26.益生菌为酵母菌、芽孢杆菌、双歧杆菌、鼠李糖乳杆菌和嗜酸乳杆菌的混合物。益生菌是对动物有益的细菌，投入机体后通过改善宿主肠道菌群生态平衡而发挥有益作用，具有预防或改善腹泻，预防生殖系统感染，增强机体免疫力，促进肠道消化系统健康，帮助吸收营养成分等功效。
27.将挥发油组合物、益生菌包封在脂质体内，提高了挥发油、益生菌的稳定性和生物利用度，便于储藏和运输，同时作为饲料添加剂发挥挥发油和益生菌的药效。
28.在一个具体的实施方式中，卵磷脂：胆固醇的质量比为3:1。
29.在一个具体的实施方式中，脂质体：挥发油组合物：益生菌的质量比为10:4:1。
30.在一个具体的实施方式中，肉桂挥发油：鱼腥草挥发油：苍术挥发油的质量比为2:1:1。
31.前述用于饲料添加剂的脂质体的制备方法，包括以下步骤：s1.挥发油的提取分别将干燥后的肉桂药材、鱼腥草药材以及苍术药材用粉碎机粉碎，得到药材粉末；称取药材粉末，加入5倍蒸馏水，于35℃、300w条件下超声20min；将超声处理后的溶液于100℃下进行蒸馏提取3h，收集蒸馏冷凝液中的油状物质，并加入适量无水硫酸钠脱水，过微孔滤膜，即得肉桂挥发油、鱼腥草挥发油和苍术挥发油。通过超声波辅助提取挥发油，可
以提高挥发油的提取效率。
32.s2.脂质体的制备s21.称取益生菌，将其溶于pbs缓冲溶液（磷酸缓冲液），得到混合溶液1，40℃保温，备用。
33.s22.称取肉桂挥发油、鱼腥草挥发油、苍术挥发油、卵磷脂、胆固醇、胆酸钠，溶于适量的氯仿-乙醇混合液中，得到混合溶液2。
34.s23.将混合溶液2放入到水浴中，于40℃减压旋转蒸发20min，去除混合溶液2中的溶剂，再用真空干燥箱进行干燥，得到一层均匀脂膜。
35.s24.将混合溶液1加入脂膜中，于60w超声混合20min，得混悬液；将混悬液高压乳匀，过滤，得脂质体。
36.s25. 在脂质体中加入冻干保护剂，于-70℃冷冻后进行冷冻干燥，得到脂质体冻干粉。冻干保护剂为海藻糖、甘露醇、蔗糖、乳糖中的一种或多种。
37.本实施例的脂质体通过hplc法计算包封率为44.3%。
38.实施例2一种用于饲料添加剂的脂质体，包括由卵磷脂和胆固醇形成的脂质体，以及脂质体中包封的挥发油组合物、益生菌；其中，挥发油组合物具有肉桂挥发油、鱼腥草挥发油、苍术挥发油。肉桂挥发油、鱼腥草挥发油和苍术挥发油均具有抗菌、抗病毒等功效，可以促进动物生长，提高饲料利用率和调控肠道菌群的功能。
39.益生菌为酵母菌、芽孢杆菌、双歧杆菌、鼠李糖乳杆菌和嗜酸乳杆菌的混合物。益生菌是对动物有益的细菌，投入机体后通过改善宿主肠道菌群生态平衡而发挥有益作用，具有预防或改善腹泻，预防生殖系统感染，增强机体免疫力，促进肠道消化系统健康，帮助吸收营养成分等功效。
40.将挥发油组合物、益生菌包封在脂质体内，提高了挥发油、益生菌的稳定性和生物利用度，便于储藏和运输，同时作为饲料添加剂发挥挥发油和益生菌的药效。
41.在一个具体的实施方式中，卵磷脂：胆固醇的质量比为4:1。
42.在一个具体的实施方式中，脂质体：挥发油组合物：益生菌的质量比为15:4:1。
43.在一个具体的实施方式中，肉桂挥发油：鱼腥草挥发油：苍术挥发油的质量比为2.5:1.5:1。
44.前述用于饲料添加剂的脂质体的制备方法，包括以下步骤：s1.挥发油的提取分别将干燥后的肉桂药材、鱼腥草药材以及苍术药材用粉碎机粉碎，得到药材粉末；称取药材粉末，加入7倍蒸馏水，于37℃、350w条件下超声25min；将超声处理后的溶液于110℃下进行蒸馏提取4h，收集蒸馏冷凝液中的油状物质，并加入适量无水硫酸钠脱水，过微孔滤膜，即得肉桂挥发油、鱼腥草挥发油和苍术挥发油。通过超声波辅助提取挥发油，可以提高挥发油的提取效率。
45.s2.脂质体的制备s21.称取益生菌，将其溶于pbs缓冲溶液（磷酸缓冲液），得到混合溶液1，45℃保温，备用。
46.s22.称取肉桂挥发油、鱼腥草挥发油、苍术挥发油、卵磷脂、胆固醇、胆酸钠，溶于适量的氯仿-乙醇混合液中，得到混合溶液2。
47.s23.将混合溶液2放入到水浴中，于45℃减压旋转蒸发30min，去除混合溶液2中的溶剂，再用真空干燥箱进行干燥，得到一层均匀脂膜。
48.s24.将混合溶液1加入脂膜中，于70w超声混合30min，得混悬液；将混悬液高压乳匀，过滤，得脂质体。
49.s25.在脂质体中加入冻干保护剂，于-85℃冷冻后进行冷冻干燥，得到脂质体冻干粉。冻干保护剂为海藻糖、甘露醇、蔗糖、乳糖中的一种或多种。
50.本实施例的脂质体通过hplc法计算包封率为41.7%。
51.实施例3一种用于饲料添加剂的脂质体，包括由卵磷脂和胆固醇形成的脂质体，以及脂质体中包封的挥发油组合物、益生菌；其中，挥发油组合物具有肉桂挥发油、鱼腥草挥发油、苍术挥发油。肉桂挥发油、鱼腥草挥发油和苍术挥发油均具有抗菌、抗病毒等功效，可以促进动物生长，提高饲料利用率和调控肠道菌群的功能。
52.益生菌为酵母菌、芽孢杆菌、双歧杆菌、鼠李糖乳杆菌和嗜酸乳杆菌的混合物。益生菌是对动物有益的细菌，投入机体后通过改善宿主肠道菌群生态平衡而发挥有益作用，具有预防或改善腹泻，预防生殖系统感染，增强机体免疫力，促进肠道消化系统健康，帮助吸收营养成分等功效。
53.将挥发油组合物、益生菌包封在脂质体内，提高了挥发油、益生菌的稳定性和生物利用度，便于储藏和运输，同时作为饲料添加剂发挥挥发油和益生菌的药效。
54.在一个具体的实施方式中，卵磷脂：胆固醇的质量比为5:1。
55.在一个具体的实施方式中，脂质体：挥发油组合物：益生菌的质量比为20:4:1。
56.在一个具体的实施方式中，肉桂挥发油：鱼腥草挥发油：苍术挥发油的质量比为3:2:1。
57.前述用于饲料添加剂的脂质体的制备方法，包括以下步骤：s1.挥发油的提取分别将干燥后的肉桂药材、鱼腥草药材以及苍术药材用粉碎机粉碎，得到药材粉末；称取药材粉末，加入10倍蒸馏水，于40℃、400w条件下超声30min；将超声处理后的溶液于120℃下进行蒸馏提取5 h，收集蒸馏冷凝液中的油状物质，并加入适量无水硫酸钠脱水，过微孔滤膜，即得肉桂挥发油、鱼腥草挥发油和苍术挥发油。通过超声波辅助提取挥发油，可以提高挥发油的提取效率。
58.s2.脂质体的制备s21.称取益生菌，将其溶于pbs缓冲溶液（磷酸缓冲液），得到混合溶液1， 50℃保温，备用。
59.s22.称取肉桂挥发油、鱼腥草挥发油、苍术挥发油、卵磷脂、胆固醇、胆酸钠，溶于适量的氯仿-乙醇混合液中，得到混合溶液2。
60.s23.将混合溶液2放入到水浴中，于50℃减压旋转蒸发40min，去除混合溶液2中的溶剂，再用真空干燥箱进行干燥，得到一层均匀脂膜。
61.s24.将混合溶液1加入脂膜中，于80w超声混合40min，得混悬液；将混悬液高压乳匀，过滤，得脂质体。
62.s25. 在脂质体中加入冻干保护剂，于-100℃冷冻后进行冷冻干燥，得到脂质体冻干粉。冻干保护剂为海藻糖、甘露醇、蔗糖、乳糖中的一种或多种。
63.本实施例的脂质体通过hplc法计算包封率为46.1%。
64.实施例4本发明制备的脂质体作为饲料添加剂的霉变实验分别取本发明实施例1、实施例2、实施例3所制得的脂质体10g，与2kg饲料混合后，置于相对湿度为75％，温度为30
±
1℃的恒温保湿箱中，以未被脂质体包封的挥发油组合物为对照组，定期观察菌落生长情况，并测定霉菌总数。
65.其结果见图1，与对照组相比，实施例1、实施例2、实施例3对霉菌生长的抑制效果更佳，并显著降低霉菌总数。说明挥发油组合物的稳定性较差，活性成分极易分解或变质，其抗菌作用随着时间的增长减弱，而挥发油经脂质体包封后，不易变质，其抑菌持久力得到了提升，便于储存的同时，降低了饲料添加剂的霉变率。
66.实施例5将制备的脂质体作为饲料添加剂与动物饲料均匀混合后用于饲喂动物，均可以通过被动物摄入体内而实现改善腹泻的功效，使用时，以脂质体的添加量占动物饲料总质量的0.1％为准。
67.在鸡饲料中分别加入实施例1、实施例2、实施例3所制备的脂质体，以未添加的为对照组，每组10只雏鸡，3个重复，饲养14天，进行实验，记录雏鸡的体重变化与腹泻率。结果数据如表1所示，与对照组相比，添加实施例1、实施例2和实施例3所制备得到的脂质体，可以降低雏鸡的腹泻率，其中，实施例2效果最显著。
68.