一种抗精神病药物个体化检测方法与流程

ldb溶液加入后迅速上下振荡5次，涡旋振荡1分钟；
15.(3)将步骤2液体短暂低速离心(3000rpm)，56℃温浴3分钟；
16.(4)加入300μl无水乙醇，涡旋振荡30秒，获裂解产物，短暂低速离心(3000rpm)；
17.(5)将上述全部裂解产物转移至离心吸附柱(ca)中，置于核酸提取仪，采用转动增压的方式，ca的多孔亲水膜选择性吸附核酸，过滤出的杂质及滤液弃去；
18.(6)向ca中继续加入750μl wdb溶液，通过核酸提取仪转动增压对核酸洗涤，此步骤重复三次；
19.(7)向ca中加入200μl洗脱缓冲液(cdb)，通过核酸提取仪对核酸进行洗脱，收集洗脱液(含dna)至1ml离心管中。
20.进一步，步骤一中，所述离心吸附柱采用硅基质材料多孔亲水膜，可选择性吸附核酸。
21.进一步，步骤二中，基因检测步骤包括：
22.(1)分离待测样本的dna；
23.(2)以步骤(1)获取的dna为模板，在dntp、反应缓冲液、dna切割剂存在的情况下，在寡核苷酸分子的引导下进行单链化衍生。所述寡核苷酸分子分为第一引导序列和第二引导序列，同时加入两条序列各异的测序探针，分别被定义为第一测序探针和第二测序探针，在所述两条探针的5’端分别被标记了彼此不同的荧光分子，在其3’端分别被标记了淬灭基团；
24.(3)对步骤(2)的单链化衍生产物分别与第一测序探针和第二测序探针的杂交结果进行判读。
25.(4)采用微量荧光检测仪判读荧光强度，采用配套软件分析结果。
26.进一步，步骤四中，高效液相色谱法测定药物谷浓度步骤包括：
27.(1)色谱条件选择：色谱柱waters c18(5μm，4.6
×
250mm)；流动相：甲醇-水(55∶45)；流速：1.0ml/min；柱温：35℃；检测波长：235nm；进样量：20μl。
28.(2)制备对照品储备液，分别精密移取各药物对照品储备液适量，用甲醇稀释成为标准系列溶液。
29.(3)样品处理方法：取200μl血清样品，加入600μl甲醇，涡旋混匀，15000rpm离心5min。取上清液20μl进样。
30.(4)专属性试验：取空白血清处理后分析，考察内源性物质干扰。
31.(5)线性关系考察：取系列混合标准血清溶液各200μl，进行样本处理，以对照品峰面积(y)对浓度(x)进行线性回归，得回归方程与线性关系。
32.(6)精密度与准确性：取低、中、高三个浓度质控血清，进行样本处理，取上清20μl进样分析，每个样本连续进样3次，计算相对标准差(rsd)，评估精密度。
33.(7)相对回收率：取低、中、高三个浓度质控血清，进行样本处理，每个浓度平行制备3份，取上清20μl直接进样分析。代入回归方程计算，以所得检测数值除以质控血清理论数值，得相对回收率。
34.进一步，步骤五中，个体化给药步骤包括：根据患者基因型确定给药选择；测定药物谷浓度；判断药物谷浓度是否在安全范围；基于药物谷浓度结果调整给药剂量；多次调整使患者达到最佳剂量，进而实现个体化药物治疗。
附图说明
35.为了更清楚地说明本技术实施例的技术方案，下面将对本技术实施例中所需要使用的附图做简单的介绍。
36.图1是本发明实施的抗精神病药物个体化检测方法核酸提取流程图。
37.图2是本发明实施的抗精神病药物个体化检测方法基因检测流程图。
38.图3是本发明实施的抗精神病药物个体化检测方法高效液相色谱法测定药物谷浓度流程图。
39.图4是本发明实施的抗精神病药物个体化检测方法个体化给药步骤流程图。
40.图5是本发明实施的抗精神病药物个体化检测方法核酸提取的实现流程图。
具体实施方式
41.为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施方式仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
42.针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种抗精神病药物个体化检测方法，下面结合附图对本发明作详细的描述。
43.如图1所示，本发明实施的抗精神病药物个体化检测方法核酸提取步骤包括：
44.s101，收集血样，将血清弃去，取约0.5ml血凝块置入液化柱cx1中，12000rpm高速离心1分钟，将收集在1.5ml微型管中的滤液加入约2倍体积的细胞裂解液(cl)，振荡混匀后10000rpm高速离心1分钟，弃去上清液，向留下的细胞核沉淀加入200μl缓冲液(gs)，涡旋混匀；
45.s102，向备好的细胞核沉淀液加入30μl配置好的edb溶液，轻柔混匀，取300μl ldb溶液加入后迅速上下振荡5次，涡旋振荡1分钟；
46.s103，将液体短暂低速离心(3000转/分钟)，56℃温浴3分钟；
47.s104，加入300μl无水乙醇，涡旋振荡30秒，获裂解产物，短暂低速离心(3000rpm)；
48.s105，将上述全部裂解产物转移至离心吸附柱(ca)中，置于核酸提取仪，采用转动增压的方式，ca的多孔亲水膜选择性吸附核酸，过滤出的杂质及滤液弃去；
49.s106，向ca中继续加入750μlwdb溶液，通过核酸提取仪转动增压对核酸洗涤，此步骤重复三次；
50.s107，向ca中加入200μl洗脱缓冲液(cdb)，通过核酸提取仪对核酸进行洗脱，收集洗脱液(含dna)至1ml离心管中。
51.如图2所示，本发明实施的抗精神病药物个体化检测方法基因检测步骤包括：
52.s201，分离待测样本的dna；
53.s202，以获取的dna为模板，在dntp、反应缓冲液、dna切割剂存在的情况下，在寡核苷酸分子的引导下进行单链化衍生。所述寡核苷酸分子分为第一引导序列和第二引导序列，同时加入两条序列各异的测序探针，分别被定义为第一测序探针和第二测序探针，在所述两条探针的5’端分别被标记了彼此不同的荧光分子，在其3’端分别被标记了淬灭基团；
54.s203，对单链化衍生产物分别与第一测序探针和第二测序探针的杂交结果进行判读；
55.s204，采用微量荧光检测仪判读荧光强度，采用配套软件分析结果。
56.如图3所示，本发明实施的抗精神病药物个体化检测方法高效液相色谱法测定药物谷浓度步骤包括：
57.s301，色谱条件选择：色谱柱waters c18(5μm，4.6
×
250mm)；流动相：甲醇-水(55∶45)；流速：1.0ml/min；柱温：35℃；检测波长：235nm；进样量：20μl。
58.s302，制备对照品储备液，分别精密移取各药物对照品储备液适量，用甲醇稀释成为标准系列溶液。
59.s303，样品处理方法：取200μl血清样品，加入600μl甲醇，涡旋混匀，15000rpm离心5min。取上清液20μl进样。
60.s304，专属性试验：取空白血清处理后分析，考察内源性物质干扰。
61.s305，线性关系考察：取系列混合标准血清溶液各200μl，进行样本处理，以对照品峰面积(y)对浓度(x)进行线性回归，得回归方程与线性关系。
62.s306，精密度与准确性：取低、中、高三个浓度质控血清，进行样本处理，取上清20μl进样分析，每个样本连续进样3次，计算相对标准差(rsd)，评估精密度。
63.s307，相对回收率：取低、中、高三个浓度质控血清，进行样本处理，每个浓度平行制备3份，取上清20μl直接进样分析。代入回归方程计算，以所得检测数值除以质控血清理论数值，得相对回收率。
64.如图4所示，本发明实施的抗精神病药物个体化检测方法个体化给药步骤包括：
65.s401，根据患者基因型确定给药选择；
66.s402，测定药物谷浓度；
67.s403，判断药物谷浓度是否在安全范围；
68.s404，基于药物谷浓度结果调整给药剂量；
69.s405，多次调整使患者达到最佳剂量，进而实现个体化药物治疗。
70.以上所述，仅为本发明具体的实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，都应涵盖在本发明的保护范围之内。