三尖杉碱衍生物及其制备方法和应用与流程

1.本发明涉及医药技术领域，尤其涉及一种三尖杉碱衍生物及其制备方法和应用。


背景技术：

2.慢性粒细胞白血病（chronic myeloid leukemia, cml）是一种恶性骨髓增生性疾病，临床表现为粒细胞（包括嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞）等恶性增殖并在血液中积累及伴发的骨髓增生，致使病人出现贫血、血小板减少等症状。cml约占成人白血病的20%，是威胁人类生命健康的重大疾病之一。根据globocan 2012年的研究数据，全球2012年共有351965例新增白血病病例和265461例死亡病例，而在中国，2010年因白血病所致死亡病人估计可达58000例。费城染色体（philadelphia, ph）的出现是cml临床诊断的重要标志，它来源于人类第22号染色体与第9号染色体长臂间发生相互移位，这一错位导致原本位于第9号染色体的abl基因被杂合到第22号染色体bcr基因下游，从而产生融合基因bcr-abl，该融合基因编码产生的bcr-abl蛋白激酶的出现是cml的主要致病机制，目前，bcr-abl抑制剂已成为临床用于治疗cml的主要药物之一。第一代bcr-abl抑制剂伊马替尼作为首个针对bcr-abl激酶设计合成的小分子靶向抑制剂，于2001年通过fda批准上市，其强效的抑制活性、良好的选择性在临床治疗中获得了巨大的成功并成为治疗cml的一线药物。但是，随着伊马替尼的大规模使用，获得性耐药问题逐渐显现出来，尤其是对于加速期和急变期的病人，耐药发病率分别高达40%-50%和80%。bcr-abl激酶的获得性点突变是导致耐药的主要原因，目前已有超过100种类型的点突变被陆续发现。为了克服伊马替尼耐药，第二代bcr-abl抑制剂包括达沙替尼、尼罗替尼、波舒替尼、拉多替尼等相继被批准上市。尽管第二代抑制剂对多种点突变有效，但对少数突变仍束手无策。特别是bcr-ablt315i突变，作为bcr-abl蛋白的“守门”氨基酸苏氨酸突变为异亮氨酸，约占所有临床获得性突变的15%-20%，目前bcr-abl
t315i
突变引起的耐药问题仍然是cml治疗中的重大挑战。2012年第三代bcr-abl抑制剂普纳替尼通过fda批准上市，尽管其对bcr-ablwt激酶以及包括t315i突变在内的多种突变均具有很好的抑制作用，但是对y253f/h、e255k/v等突变表现不佳，同时其在临床使用中存在诱发致命性血液凝集和血管严重狭窄的风险，因此被fda于2013年10月暂停销售。虽然随后该药物在增加黑框警示后重新上市（12月20号），但上述问题仍然有待新型bcr-abl抑制剂或其他作用机制药物的开发予以解决。
3.2012年10月，高三尖杉酯碱（homoharringtonine, 商品名：omacetaxine mepsuccinate）通过美国fda批准上市，用于治疗对两种或两种以上bcr-abl抑制剂耐药的慢性粒细胞性白血病病人。高三尖杉酯碱对多种bcr-abl突变，包括t315i突变，都表现出良好的抑制活性。高三尖杉酯碱是首个上市的用于治疗cml的蛋白质抑制剂，它能够结合于核糖体60s大亚基的a位点，竞争性抑制乙酰化的转运rna与a位点的结合，从而抑制下游一系列致癌蛋白的表达，其对小鼠淋巴细胞性白血病细胞p388的抑制活性ic
50
值达17 nm。同时，高三尖杉酯碱也是首个用于治疗cml的天然产物，它来源于三尖杉科三尖杉属（cephalotaxus）植物，目前已从该属中分离鉴定了约50余个生物碱类化合物，其中，许多与
高三尖杉酯碱具有相同母核的cephalotaxine-type生物碱都具有良好的抗cml活性，例如，harringtonine, isoharringtonine, deoxyharringtonine对小鼠淋巴细胞性白血病细胞p388的抑制活性ic
50
值分别为32 nm, 18 nm, 7.5 nm。尽管高三尖杉酯碱对cml以及bcr-abl
t315i
突变的cml均表现出很好的治疗效果，但依然存在着诸多问题。高三尖杉酯碱具有较为严重的骨髓抑制的毒副作用，导致其在临床二期试验中将给药方式由静脉注射改为皮下注射。相对于口服给药的bcr-abl抑制剂，皮下注射的给药方式也给患者带来了诸多不便。此外，市售高三尖杉酯碱为半合成药物，母核三尖杉碱片断是从植物中提取分离得到，而侧链部分由化学合成所得，由于侧链片断较为复杂，其合成也较为繁琐，目前侧链合成的总产率最高仅为24.5%。因此，迫切需要寻找新型的具有高效、低毒、体内代谢稳定的三尖杉碱类化合物，为治疗cml，特别是携带有bcr-abl
t315i
等突变的cml提供更多的候选化合物。


技术实现要素：

4.有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种三尖杉碱衍生物及其制备方法和应用，具有较高的抗肿瘤活性。
5.本发明提供了一种三尖杉碱衍生物，具有式ⅰ所示结构或其药学上可接受的盐或立体异构体：式ⅰ；其中，r1为o；r2、r3、r4独立的选自h、c1~c3烷氧基、卤素、三氟甲基、三氟甲氧基、苄基、苄氧基、c1~c3酰氧基、羟基、氨基中的一种或多种。
6.本技术所涉及的化合物及其药学可接受的盐的代谢产物，以及可以在体内转变为本技术所涉及的化合物及其药学可接受的盐的结构的前药，也包含在本技术的权利要求中。
7.本发明优选的，所述r2、r3、r4独立的选自h、甲氧基、f、cl、br、苄氧基、羟基中的一种或多种。
8.本发明优选的，所述三尖杉碱衍生物为3-(2
′‑
苄基-4
′‑
甲氧基-4
′‑
氧代丁酰基)三尖杉碱、3-(2
′‑
邻甲氧基苄基-4
′‑
甲氧基-4
′‑
氧代丁酰基)三尖杉碱、3-(2
′‑
间氟苄基-4
′‑
甲氧基-4
′‑
氧代丁酰基)三尖杉碱、3-(2
′‑
间苄氧基苄基-4
′‑
甲氧基-4
′‑
氧代丁酰基)三尖杉碱、3-(2
′‑
对苄氧基苄基-4
′‑
甲氧基-4
′‑
氧代丁酰基)三尖杉碱、3-(2
′‑
间羟基苄基-4
′‑
甲氧基-4
′‑
氧代丁酰基)三尖杉碱或3-(2
′‑
对羟基苄基-4
′‑
甲氧基-4
′‑
氧代丁酰基)三尖杉碱。
9.本发明优选的，所述三尖杉碱衍生物，具有以下任一结构：
本发明对上述三尖杉碱衍生物的制备方法并无特殊限定，可以按照本领域技术人员熟知的方法制备。例如本领域技术人员可以根据现有技术和所具备的常识，由苯丙酮酸或者丁二酸二乙酯为起始原料通过几步反应合成。
10.优选的，本发明提供了上述三尖杉碱衍生物的制备方法，包括以下步骤：s1）将苯丙酮酸或苯基具有取代基的苯丙酮酸衍生物，和苄醇进行反应，制备得到2-氧代-3-苯基丙酸苄酯或其衍生物；s2）将2-氧代-3-苯基丙酸苄酯或其衍生物和(三苯基膦烯基)乙酸甲酯反应，得到1-苄基4-甲基2-苄基马来酸酯和（e）-2-亚苄基琥珀酸1-苄基4-甲基酯或其衍生物；s3）将1-苄基4-甲基2-苄基马来酸酯和（e）-2-亚苄基琥珀酸1-苄基4-甲基酯用还原剂进行还原，得到2-苄基-4-甲氧基-4-氧代丁酸或其衍生物；s4）将2-苄基-4-甲氧基-4-氧代丁酸或其衍生物和三尖杉碱进行反应，得到式ⅰ所示的三尖杉碱衍生物。
11.以苯丙酮酸为例，上述制备方法的反应路线如下：
本发明优选的，所述还原剂选自钯碳、ru[(s)-dtbm-segphos](oac)2或ru[(r)-dtbm-segphos](oac)2。
[0012]
优选的，本发明提供了上述三尖杉碱衍生物的另一种制备方法，包括以下步骤：a）将丁二酸二甲酯，和苯甲醛或苯基具有取代基的苯甲醛衍生物进行反应，产物经酸化、酯化，制备得到2-亚苄基丁二酸 1-甲酯或其衍生物；b）将2-亚苄基丁二酸 1-甲酯或其衍生物进行还原，得到2-苄基-4-甲氧基-4-氧代丁酸或其衍生物；c）将2-苄基-4-甲氧基-4-氧代丁酸或其衍生物和三尖杉碱进行反应，得到式ⅰ所示的三尖杉碱衍生物。
[0013]
以苯甲醛为例，上述制备方法的反应路线如下：本发明提供了一种药物组合物，包括上述三尖杉碱衍生物和辅剂。
[0014]
本发明提供的上述三尖杉碱衍生物或上述药物组合物可以用于治疗人或其它哺乳动物肿瘤等过渡增殖性疾病或症状。
[0015]
本发明提供了上述三尖杉碱衍生物或上述药物组合物在制备抗肿瘤药物中的应用。
[0016]
本发明优选的，所述肿瘤为白血病、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、胰腺癌、乳腺癌、前列腺癌、肝癌、皮肤癌、上皮细胞癌、胃肠间质瘤、组织细胞性淋巴癌、鼻咽癌、头颈部肿瘤、结肠癌、直肠癌、胶质瘤等过渡增殖性疾病中的任意一种或多种。
[0017]
本发明优选的，所述非小细胞肺癌为肺腺癌、肺鳞癌中的一种或多种。
[0018]
本发明提供的上述式i化合物可以与已知的治疗或改进相似病状的其它药物联用。联合给药时，原来药物的给药方式和剂量保持不变，而同时或随后服用式i化合物。当式
i化合物与其它一种或几种药物同时服用时，优选使用同时含有一种或几种已知药物和式i化合物的药用组合物。药物联用也包括在重叠的时间段服用式i化合物与其它一种或几种已知药物。当式i化合物与其它一种或几种药物进行药物联用时，式i化合物或已知药物的剂量可能比它们单独用药时的剂量较低。
[0019]
可以与式i化合物进行药物联用的药物或活性成分包括但不局限为：雌激素受体调节剂、雄激素受体调节剂、视网膜样受体调节剂、细胞毒素/细胞抑制剂、抗增殖剂、蛋白转移酶抑制剂、hmg-coa还原酶抑制剂、hiv蛋白激酶抑制剂、逆转录酶抑制剂、血管生成抑制剂、细胞增殖及生存信号抑制剂、干扰细胞周期关卡的药物和细胞凋亡诱导剂、细胞毒类药物、酪氨酸蛋白抑制剂、egfr 抑制剂、vegfr抑制剂、丝氨酸/苏氨酸蛋白抑制剂、bcr-abl抑制剂、 c-kit抑制剂、met抑制剂、raf抑制剂、mek抑制剂、mmp抑制剂、拓扑异构酶抑制剂、组氨酸去乙酰化酶抑制剂、蛋白酶体抑制剂、cdk抑制剂、bcl-2家族蛋白抑制剂、mdm2家族蛋白抑制剂、iap家族蛋白抑制剂、stat家族蛋白抑制剂、pi3k抑制剂、akt抑制剂、整联蛋白阻滞剂、干扰素-α、白介素-12、cox-2抑制剂、p53、p53激活剂、vegf抗体、egf抗体等。
[0020]
在一个实施方案中，可以与式i化合物进行药物联用的药物或活性成分包括但不局限为：阿地白介素、阿仑膦酸、干扰素、阿曲诺英、别嘌醇、别嘌醇钠、帕洛诺司琼盐酸盐、六甲蜜胺、氨基格鲁米特、氨磷汀、氨柔比星、安丫啶、阿纳托唑、多拉司琼、aranesp 、arglabin 、三氧化二砷、阿诺新、5
ꢀ‑
氮胞苷、硫唑嘌呤、卡介苗或tice 卡介苗、贝他定、醋酸倍他米松、倍他米松磷酸钠制剂、贝沙罗汀、硫酸博来霉素、溴尿甘、bortezomib 、白消安、降钙素、阿来佐单抗注射剂、卡培他滨、卡铂、康士得、cefesone 、西莫白介素、柔红霉素、苯丁酸氮芥、顺铂、克拉屈滨、克拉屈滨、氯屈磷酸、环磷酰胺、阿糖胞昔、达卡巴嗪、放线菌素d 、柔红霉素脂质体、地塞米松、磷酸地塞米松、戊酸雌二醇、地尼白介素2 、狄波美、地洛瑞林、地拉佐生、己烯雌酚、大扶康、多西他奇、去氧氟尿苷、阿霉素、屈大麻酚、钦-166-壳聚糖复合物、eligard 、拉布立酶、盐酸表柔比星、阿瑞吡坦、表阿霉素、阿法依伯汀、红细胞生成素、依铂、左旋咪唑片、雌二醇制剂、 17-β-雌二醇、雌莫司汀磷酸钠、炔雌醇、氨磷汀、羟磷酸、凡毕复、依托泊甙、法倔唑、他莫昔芬制剂、非格司亭、非那司提、非雷司替、氟尿苷、氟康唑、氟达拉滨、 5-氟脱氧尿嘧啶核苷一磷酸盐、 5-氟尿嘧啶、氟甲睾酮、氟他胺、福麦斯坦、 1-β-d-阿糖呋喃糖胞噻啶-5
ꢀ’‑
硬脂酰磷酸酯、福莫司汀、氟维司群、丙种球蛋白、吉西他滨、吉妥单抗、甲磺酸伊马替尼、卡氮芥糯米纸胶囊剂、戈舍瑞林、盐酸格拉尼西隆、组氨瑞林、和美新、氢化可的松、赤型-羟基壬基腺嘌呤、羟基脲、替坦异贝莫单抗、伊达比星、异环磷酰胺、干扰素α 、干扰素-α2 、干扰素α
‑ꢀ
2a 、干扰素α-2b 、干扰素α-nl 、干扰素α-n3 、干扰素β、干扰素 γ-la 、白细胞介素-2 、内含子 a 、易瑞沙、依立替康、凯特瑞、硫酸香菇多糖、来曲唑、甲酰四氢叶酸、亮丙瑞林、亮丙瑞林醋酸盐、左旋四咪唑、左旋亚叶酸钙盐、左甲状腺素钠、左甲状腺素钠制剂、洛莫司汀、氯尼达明、屈大麻酚、氮芥、甲钴胺、甲羟孕酮醋酸酯、醋酸甲地孕酮、美法仑、酯化雌激素、 6-琉基嘌呤、美司钠、氨甲蝶呤、氨基乙酰丙酸甲酯、米替福新、美满霉素、丝裂霉素 c 、米托坦、米托葱醌、曲洛司坦、柠檬酸阿霉素脂质体、奈达铂、聚乙二醇化非格司亭、奥普瑞白介素、 neupogen 、尼鲁米特、三苯氧胺、 nsc-631570 、重组人白细胞介素 1-β 、奥曲肽、盐酸奥丹西隆、去氢氢化可的松口服溶液剂、奥沙利铂、紫杉醇、泼尼松磷酸钠制剂、培门冬酶、派罗欣、喷司他丁、溶链菌制剂、盐酸
匹鲁卡品、毗柔比星、普卡霉素、卟吩姆钠、泼尼莫司汀、司替泼尼松龙、泼尼松、倍美力、丙卡巴脐、重组人类红细胞生成素、雷替曲塞、利比、依替膦酸铼-186 、美罗华、力度伸-a 、罗莫肽、盐酸毛果芸香碱片剂、奥曲肽、沙莫司亭、司莫司汀、西佐喃、索布佐生、唬钠甲强龙、帕福斯酸、干细胞治疗、链佐星、氯化锶-89 、左旋甲状腺素钠、他莫昔芬、坦舒洛辛、他索那明、tastolactone 、泰索帝、替西硫津、替莫唑胺、替尼泊苷、丙酸睾酮、甲睾酮、硫鸟嘌呤、噻替哌、促甲状腺激素、替鲁膦酸、拓扑替康、托瑞米芬、托西莫单抗、曲妥珠单抗、曲奥舒凡、维 a 酸、甲氨喋呤片剂、三甲基密胺、三甲曲沙、乙酸曲普瑞林、双羟萘酸曲普瑞林、优福定、尿苷、戊柔比星、维司力农、长春碱、长春新碱、长春酰胺、长春瑞滨、维鲁利秦、右旋丙亚胺、净司他丁斯酯、枢复宁、紫杉醇蛋白质稳定制剂、 acolbifene 、干扰素 r-lb 、 affinitak 、氨基喋呤、阿佐昔芬、 asoprisnil 、阿他美坦、阿曲生坦、 bay 43-9006 、阿瓦斯丁、 cci-779 、 cdc-501 、西乐葆、西妥昔单抗、克立那托、环丙孕酮醋酸酯、地西他滨、 dn-101 、阿霉素-mtc 、 dslim 、度他雄胺、 edotecarin 、依氟鸟氨酸、依喜替康、芬维a 胺、组胺二盐酸盐、组氨瑞林水凝胶植入物、钬-166 dotmp 、伊班膦酸、干扰素γ、内含子-peg 、 ixabepilone 、匙孔形血蓝蛋白、 l-651582 、兰乐肽、拉索昔芬、 libra 、 lonafamib 、米泼昔芬、米诺屈酸酯、 ms-209 、脂质体 mtp-pe 、 mx-6 、那法瑞林、奈莫柔比星、新伐司他、诺拉曲特、奥利默森、 onco-tcs、osidem 、紫杉醇聚谷氨酸酯、帛米酸钠、 pn-401 、 qs-21 、夸西洋、 r
ꢀ‑ꢀ
1549 、雷洛昔芬、豹蛙酶、 13-顺维 a 酸、沙铂、西奥骨化醇、 t
‑ꢀ
138067 、 tarceva 、二十二碳六烯酸紫杉醇、胸腺素αl 、嘎唑呋林、 tipifarnib 、替拉扎明、tlk-286 、托瑞米芬、反式mid-lo7r 、伐司朴达、伐普肽、 vatalanib 、维替泊芬、长春氟宁、 z-100和唑来麟酸或它们的组合。
[0021]
与现有技术相比，本发明提供了一种三尖杉碱衍生物，具有式ⅰ所示结构或其药学上可接受的盐或立体异构体。本发明提供的三尖杉碱衍生物可以有效抑制多种肿瘤细胞的生长，尤其是能够抑制ba/f3-bcr/abl-t315i突变细胞，是一类新颖的能够克服bcr-abl
t315i
耐药突变的蛋白质合成抑制剂，可用于制备抗肿瘤药物，具有广阔的市场应用前景。
具体实施方式
[0022]
为了进一步说明本发明，下面结合实施例对本发明提供的三尖杉碱衍生物及其制备方法和应用进行详细描述。
[0023]
实施例1 3-(2
′‑
苄基-4
′‑
甲氧基-4
′‑
氧代丁酰基)三尖杉碱（cy0076）的制备步骤a：2-氧代-3-苯基丙酸苄酯（化合物1）的制备
1）将苯丙酮酸（1.64 g, 10 mmol）溶于20 ml干燥二氯甲烷中，搅拌下加入二氯亚砜（1.2 ml, 14 mmol）和n,n-二甲基甲酰胺1滴，低温下反应30 min。缓慢滴入苄基醇（973mg, 9 mmol），反应1h后，加入大量冰水后有淡黄色固体析出，减压抽滤，滤饼用水充分洗涤后真空干燥2 h。产物直接投入下步反应。
[0024]
2）向上述反应体系中加入20 ml干燥二氯甲烷溶解，缓慢加入苄醇（1.08 g, 10 mmol），吡啶（791 mg, 10 mmol），室温下搅拌2 h。反应结束后加入大量冰水混合物淬灭，用二氯甲烷多次萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗涤一遍，无水na2so4干燥，过滤旋干，柱层析得固体1.8 g（yield: 74%）。1h nmr (400 mhz, dmso-d6) δ 7.47-7.25 (m, 10 h), 5.31 (s, 2h), 5.29 (s, 2h). ms (esi), m/z: 255[m h]

。
[0025]
步骤b：1-苄基4-甲基2-苄基马来酸酯（化合物2）和（e）-2-亚苄基琥珀酸1-苄基4-甲基酯（化合物3）的制备将2-氧代-3-苯基丙酸苄酯（化合物1）（1 g, 4 mmol）溶于8 ml 甲苯中，加入(三苯基膦烯基)乙酸甲酯（1.3 g, 4 mmol），加热至90 ℃反应过夜。反应结束后减压除去溶剂，柱层析分离的白色固体2（464mg,yield:38%）和3（371mg,yield:30%）。化合物2：1h nmr (400 mhz, dmso-d6) δ7.40-7.26 (m, 10h), 6.27 (s, 1h), 5.25 (s, 2h), 5.19 (s, 2h), 3.73 (s, 3h). ms (esi), m/z: 311[m h]

。化合物3：1h nmr (400 mhz, cdcl3) δ7.35-7.21 (m, 10h), 6.93 (s, 1h), 5.18 (s, 2h), 4.26 (s, 2h), 3.81 (s, 3h). ms (esi), m/z: 311[m h]

。
[0026]
步骤c：2-苄基-4-甲氧基-4-氧代丁酸（化合物4）的制备将1-苄基4-甲基2-苄基马来酸酯（化合物2）（463 mg, 1.5 mmol）和（e）-2-亚苄基琥珀酸1-苄基4-甲基酯（化合物3）（371 mg, 1.2 mmol）溶于6 ml乙酸乙酯中，用氩气置换反应体系，加入pd/c，氩气置换后，用氢气置换反应体系，室温下搅拌反应2 h。反应结束后，用硅藻土过滤，乙酸乙酯冲洗滤饼，合并滤液，减压除去溶剂得淡黄色油状物（553 mg, yield: 92%）。1h nmr (400 mhz, cdcl3) δ 7.33-7.19 (m, 5h), 3.66 (s, 3h), 3.21-3.13 (m, 2h), 2.82-2.76 (m, 1h), 2.70-2.63 (m, 1h), 2.45-2.40 (m, 1h). ms (esi), m/z: 223[m h]

。
[0027]
步骤d：3-(2
′‑
苄基-4
′‑
甲氧基-4
′‑
氧代丁酰基)三尖杉碱的制备
将2-苄基-4-甲氧基-4-氧代丁酸（化合物4）（89 mg, 0.4 mmol），n, n'-二环己基碳二亚胺（124 mg, 0.4 mmol），4-二甲氨基吡啶（98 mg, 0.8 mmol）溶于1 ml无水四氢呋喃，向反应体系中加入三尖杉碱（126 mg, 0.4 mmol），室温下搅拌过夜。反应结束后，减压抽滤，合并滤液，柱层析分离得淡黄色油状物70 mg（yield: 34%）。ms (esi), m/z: 520[m h]

。
[0028]1h nmr (400 mhz, cdcl3) δ 7.32-7.17 (m, 5h),δ 6.58 (s, 1h), 6.56(s, 1h),5.88 (s, 2h), 5.83 (s, 1h), 5.02(s, 1h), 3.62 (d, 1h), 3.60 (s, 3h), 3.50 (s, 3h), 3.34 (m, 1h), 3.18-3.12 (m, 1h), 2.88 (m, 2h),2.63-2.69(m, 5h),2.35 (m, 2h),1.75(m, 2h),1.65 (m, 2h).实施例2 3-(2
′‑
苄基-4
′‑
甲氧基-4
′‑
氧代丁酰基)三尖杉碱（cy0076）的制备步骤e-f：2-亚苄基丁二酸 1-甲酯（化合物7）的制备步骤e将丁二酸二甲酯(2.57g，17.6mmol)在meoh(15ml)中的溶液小心加入甲醇钠(0.84g，15.5mmol)和甲醇(15ml)的回流混合物中。将混合物回流1小时，然后在30分钟内加入苯甲醛(14.1毫摩尔)并在回流温度下再搅拌5小时。反应完成后，真空除去甲醇，产物用于下步反应。
[0029]
步骤f 将步骤e获得的产物溶解在15% naoh溶液(10ml)中并继续回流4小时。冷却后，反应混合物用 etoac (2
ꢀ×ꢀ
10 ml) 洗涤。接下来，水相用 2 m hcl 酸化至 ph 《 2，用 etoac (3
ꢀ×ꢀ
10 ml) 萃取，有机层用无水 na2so
4 干燥并浓缩。
[0030]
步骤g将步骤f所得产物溶解在meoh(15ml)中，加入amberlyst-15h (0.5g)并将
反应混合物回流16小时。混合物经硅藻土过滤并真空浓缩。将残余物在硅胶上进行柱层析（pe: etoac = 9:1 至 7:3），得到化合物7 （产率36%）。1h nmr (400 mhz, cdcl3) δ 8.03 (s, 1h), 7.46
ꢀ–ꢀ
7.34 (m, 5h), 3.76 (s, 3h), 3.57 (s, 2h).步骤h：2-苄基-4-甲氧基-4-氧代丁酸（化合物4）的制备将2-亚苄基丁二酸-1-甲酯（化合物7）（220 mg, 1 mmol）溶于5 ml无水脱气的甲醇中，用氩气置换反应体系，加入pd/c，氩气置换后，用氢气置换反应体系，室温下搅拌反应2 h。反应结束后，用硅藻土过滤，乙酸乙酯冲洗滤饼，合并滤液，减压除去溶剂得化合物4（221 mg, yield: 99%）。1h nmr (400 mhz, cdcl3) δ 9.05 (s, 1h), 7.22
ꢀ–ꢀ
7.18 (m, 2h), 7.15
ꢀ–ꢀ
7.08 (m, 3h), 3.54 (s, 3h), 3.10
ꢀ–ꢀ
3.02 (m, 2h), 2.72
ꢀ–ꢀ
2.65 (m, 1h), 2.56 (dd, j = 17.2, 9.2 hz, 1h), 2.32 (dd, j = 17.2, 4.8 hz, 1h). 13
c nmr (101 mhz, cdcl3) δ 179.96, 172.44, 137.95, 129.09, 128.65, 126.83, 51.90, 42.92, 37.39, 34.49.步骤i：3-(2
′‑
苄基-4
′‑
甲氧基-4
′‑
氧代丁酰基)三尖杉碱的制备 （cy0076）将2-苄基-4-甲氧基-4-氧代丁酸（化合物4） (0.36 mmol) 和三乙胺 (1.35 mmol) 溶于2ml ch2cl2，通过注射器向上述溶液中加入 2,4,6-三氯苯甲酰氯 (80 μl, 0.51 mmol) )。在室温搅拌1小时。向反应体系中加入1ml三尖杉碱(95mg，0.3mmol)和n，n-二甲氨基吡啶(dmap，7.3mg，0.06mmol) ch2cl2溶液。然后将反应混合物在室温搅拌4小时。反应完成后(通过tlc监测)，混合物用ch2cl2稀释，有机层依次用饱和nahco
3 水溶液和盐水洗涤。合并的有机层用无水na2so
4 干燥，过滤，真空浓缩，并加载到填充有5％三乙胺/pe的硅胶柱上。用3:2 pe: etoac洗脱柱子，得到产物3-(2
′‑
苄基-4
′‑
甲氧基-4
′‑
氧代丁酰基)三尖杉碱（cy0076）109 mg （产率70%）。
[0031]
产物经核磁共振表征。
[0032]
实施例3 3-(2
′
r-苄基-4
′‑
甲氧基-4
′‑
氧代丁酰基)三尖杉碱（cy0076-2）的制备
同实施例2中方法合成，步骤h中以ru[(s)-dtbm-segphos](oac)
2 (1.7 mg, 0.002 mmol)代替pd/c。（产率: 60%）。
[0033]1h nmr (400 mhz, cdcl3) δ7.32-7.17 (m, 5h),δ 6.58 (s, 1h), 6.56(s, 1h),5.88 (s, 2h), 5.83 (s, 1h),5.02(s, 1h),3.62 (d,1h),3.60 (s,3h),3.50 (s,3h),3.36 (m, 1h),3.18-3.12 (m, 1h), 2.88 (m, 2h),2.63-2.69(m, 5h),2.35 (m, 2h),1.75(m, 2h),1.65 (m, 2h).实施例4 3-(2
′
s-苄基-4
′‑
甲氧基-4
′‑
氧代丁酰基)三尖杉碱（cy0076-1）的制备同实施例2中方法合成，步骤h中以ru[(r)-dtbm-segphos](oac)
2 (1.7 mg, 0.002 mmol)代替pd/c。（产率: 82%）。1h nmr (400 mhz, cdcl3) δ 7.21 (t, 2h), 7.15 (m, 1h), 6.96 (d, 2h), 6.59 (s, 1h), 6.57 (s, 1h), 5.89 (d, 1h), 5.81 (d, 1h), 5.75 (d, 1h), 5.04 (s, 1h), 3.78 (d, 1h), 3.70 (s, 3h), 3.53 (s, 3h), 3.25 (m, 1h), 3.07 (m, 1h), 2.93(m, 1h), 2.79 (m, 1h), 2.59 (m, 2h), 2.37(m, 2h), 2.24 (dd, 1h), 2.03(m, 3h), 1.89(m,1h), 1.74 (m, 2h).实施例5 3-(2
′‑
邻甲氧基苄基-4
′‑
甲氧基-4
′‑
氧代丁酰基)三尖杉碱(hla268)的制备合成方法参照实施例2（产率: 68%）。1h nmr (400 mhz, cdcl3) δ7.21-7.17 (m, 1h), 6.98 (m, 4h), 6.58 (s, 1h), 6.56(s, 1h), 5.87 (s, 3h), 5.02(s, 1h), 3.70 (s, 3h), 3.62 (d, 1h), 3.60 (s, 3h), 3.50 (s, 3h), 3.34 (m, 1h), 3.18-3.12 (m, 1h), 2.87 (m, 2h), 2.64-2.70 (m, 5h), 2.37 (m, 2h), 1.78(m, 2h), 1.66 (m, 2h).
实施例6 3-(2
′
r-邻甲氧基苄基-4
′‑
甲氧基-4
′‑
氧代丁酰基)三尖杉碱(hla270)的制备合成方法参照实施例3（产率: 64%）。1h nmr (400 mhz, cdcl3) δ7.21-7.17 (m, 1h), 6.98 (m, 4h), 6.59 (s, 1h), 6.55(s, 1h),5.88 (s, 3h), 5.05(s, 1h),3.72 (s, 3h),3.62 (d, 1h), 3.60 (s, 3h), 3.52 (s, 3h), 3.36 (m, 1h), 3.18-3.12 (m, 1h), 2.88 (m, 2h), 2.64-2.70 (m, 5h), 2.35 (m, 2h), 1.76 (m, 2h), 1.64(m, 2h).实施例7 3-(2
′
s-邻甲氧基苄基-4
′‑
甲氧基-4
′‑
氧代丁酰基)三尖杉碱(hla293)的制备合成方法参照实施例4（产率: 83%）。1h nmr (400 mhz, cdcl3)δ7.21-7.17 (m, 1h), 6.98 (m, 4h), 6.59 (s, 1h), 6.55(s, 1h), 5.88 (s, 3h), 5.05(s, 1h), 3.72 (s, 3h), 3.62 (d,1h), 3.60 (s, 3h), 3.52 (s, 3h), 3.36 (m, 1h), 3.18-3.12 (m, 1h), 2.88 (m, 2h), 2.64-2.70 (m, 5h), 2.35 (m, 2h), 1.76 (m, 2h), 1.64 (m, 2h).
实施例8 3-(2
′‑
间氟苄基-4
′‑
甲氧基-4
′‑
氧代丁酰基)三尖杉碱(hla309-3)的制备合成方法参照实施例2（产率: 68%）。1h nmr (400 mhz, cdcl3)δ 7.34-7.30 (m, 1h),δ 7.02 (m, 3h), 6.59 (s, 1h), 6.55 (s, 1h), 5.88 (s,3h), 5.05(s,1h), 3.62(d, 1h), 3.60 (s, 3h), 3.50 (s, 3h), 3.34 (m, 1h), 3.18-3.12 (m, 1h), 2.87-2.93(m, 2h), 2.62-2.68(m, 5h), 2.36 (m, 2h), 1.76(m, 2h), 1.62(m, 2h).实施例9 3-(2
′
r-间氟苄基-4
′‑
甲氧基-4
′‑
氧代丁酰基)三尖杉碱(hla309-2)的制备合成方法参照实施例3（产率: 62%）。1h nmr (400 mhz, cdcl3) δ 7.32 (m, 1h), 7.04 (m, 3h), 6.59 (s, 1h), 6.56 (s, 1h), 5.87 (s, 3h), 5.02 (s, 1h), 3.64 (d, 1h), 3.61 (s, 3h), 3.52 (s,, 3h), 3.35 (m, 1h), 3.18-3.12 (m, 1h), 2.89 (m, 2h), 2.62-2.68 (m, 5h), 2.38 (m, 2h), 1.72(m, 2h), 1.64 (m, 2h).
实施例10 3-(2
′
s-间氟苄基-4
′‑
甲氧基-4
′‑
氧代丁酰基)三尖杉碱(hla309-1)的制备合成方法参照实施例4（产率: 60%）。1h nmr (400 mhz, cdcl3) δ7.32 (m, 1h), 7.04 (m, 3h), 6.59 (s, 1h), 6.56 (s, 1h), 5.87 (s, 3h), 5.02(s, 1h), 3.64 (d, 1h), 3.61 (s, 3h), 3.52 (s, 3h), 3.35 (m, 1h), 3.18-3.12 (m, 1h), 2.89 (m, 2h), 2.62-2.68 (m, 5h), 2.38 (m, 2h), 1.72 (m, 2h), 1.64 (m, 2h).实施例11 3-(2
′
s-间苄氧基苄基-4
′‑
甲氧基-4
′‑
氧代丁酰基)三尖杉碱(hla767)的制备合成方法参照实施例4（产率: 76%）。1h nmr (400 mhz, cdcl3) δ 7.40-7.48 (m, 4h), 7.32-7.22 (m, 2h), 7.04 (m, 3h), 6.59 (s, 1h), 6.56 (s, 1h), 5.87 (s, 3h), 5.14 (s, 2h), 5.02 (s, 1h), 3.62 (d, 1h), 3.60 (s, 3h), 3.50 (s, 3h), 3.34 (m, 1h), 3.18-3.12 (m, 1h), 2.87 (m, 2h), 2.64-2.70 (m, 5h), 2.37 (m, 2h), 1.75(m, 2h), 1.65(m, 2h).
实施例12 3-(2
′‑
对苄氧基苄基-4
′‑
甲氧基-4
′‑
氧代丁酰基)三尖杉碱(hla758)的制备合成方法参照实施例4（产率: 99%）。1h nmr (400 mhz, cdcl3) δ 7.40-7.48 (m, 4h), δ 7.32 (m, 1h), 7.13(m, 1h), 7.01 (m, 3h), 6.58(s, 1h), 6.52 (s, 1h), 5.88 (s, 3h), 5.16 (s, 2h), 5.03 (s, 1h), 3.62 (d, 1h), 3.60 (s, 3h), 3.50 (s, 3h), 3.34 (m, 1h), 3.18-3.12 (m, 1h), 2.87-2.93 (m, 2h), 2.64-2.70(m, 5h), 2.36 (m, 2h),1.75 (m, 2h), 1.65(m, 2h).实施例13 3-(2s
′‑
间羟基苄基-4
′‑
甲氧基-4
′‑
氧代丁酰基)三尖杉碱(hla768)的制备以实施例11产物3-(2
′
s-间苄氧基苄基-4
′‑
甲氧基-4
′‑
氧代丁酰基)三尖杉碱 （50 mg）为反应原料，溶于1ml甲醇中，加入pd/c，反应体系在1个大气压的氢气中室温下搅拌过夜，过滤除去pd/c并浓缩滤液。经硅胶柱层析(pe: etoac = 4: 1)得到相应的脱苄基产物3-(2s
′‑
间羟基苄基-4
′‑
甲氧基-4
′‑
氧代丁酰基)三尖杉碱，产率 76%。1h nmr (400 mhz, cdcl3) δ 9.20(s, 1h), 7.10-7.00 (m, 2h), 6.84-6.80 (m, 2h), 6.58(s, 1h), 6.52(s,1h), 5.88(s, 3h), 5.03(s, 1h), 3.62 (d, 1h), 3.60 (s, 3h), 3.50 (s, 3h), 3.34 (m, 1h), 3.18-3.12 (m, 1h), 2.87-2.93 (m, 2h), 2.64-2.70(m, 5h), 2.36 (m, 2h), 1.75(m, 2h), 1.65(m, 2h).
实施例14 3-(2
′
s-对羟基苄基-4
′‑
甲氧基-4
′‑
氧代丁酰基)三尖杉碱(hla760)的制备以实施例12产物3-(2
′
s-对苄氧基苄基-4
′‑
甲氧基-4
′‑
氧代丁酰基)三尖杉碱 （50 mg）为反应原料，溶于1ml甲醇中，加入pd/c，反应体系在1个大气压的氢气中室温下搅拌过夜，过滤除去pd/c并浓缩滤液。经硅胶柱层析(pe: etoac = 4: 1)得到相应的脱苄基产物3-(2s
′‑
对羟基苄基-4
′‑
甲氧基-4
′‑
氧代丁酰基)三尖杉碱，产率 99%。1h nmr (400 mhz, cdcl3) δ 9.02(s, 1h), 7.02-7.00 (m, 2h), 6.84-6.80 (m, 2h), 6.58(s, 1h), 6.52(s,1h), 5.88(s, 3h), 5.03(s, 1h), 3.62 (d,1h), 3.60 (s, 3h), 3.50 (s, 3h), 3.33 (m, 1h), 3.16-3.10 (m, 1h), 2.88-2.94 (m, 2h), 2.66-2.72 (m, 5h), 2.34 (m, 2h), 1.75(m, 2h), 1.65(m, 2h).实施例15 3-n-(2
’‑
苄基-4
’‑
甲氧基-4
’‑
氧代丁酰基)三尖杉碱（命名为cy5120068）的制备
步骤e：三乙基乙烷-1,1,2-三羧酸酯（化合物5）的制备将丙二酸二乙酯（728 mg, 4.5 mmol）溶于无水乙醇中，0 ℃下滴加新制2m乙醇钠的乙醇溶液2.5 ml，0 ℃下搅拌40 min后，缓慢滴加溴乙酸乙酯（759 mg, 4.5 mmol），缓慢升至室温反应3-4 h。有灰白色固体析出，反应液直接投入下步反应。
[0034]
步骤f：3-苯基丙烷-1,2,2-三羧酸三乙酯（化合物6）的制备将上步三乙基乙烷-1,1,2-三羧酸酯（化合物5）溶液在0 ℃下缓慢滴加新制2 m乙醇钠的乙醇溶液2.5 ml，0 ℃下搅拌40 min后，将苄溴（770 mg, 4.5 mmol）缓慢滴加至反应体系，缓慢升至室温反应3-4 h。待反应结束后，加水猝灭，减压旋去乙醇，用乙酸乙酯多次萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗涤一遍，无水na2so4干燥，过滤旋干，柱层析得白色固体1.2 g（yield: 81%）。1h nmr (400 mhz, cdcl
3-d6) δ 7.26-7.20 (m, 3h), 7.08-7.06 (m, 2h), 4.22-4.11 (m, 6h), 3.37 (s, 2h), 2.83 (s, 2h), 1.26-1.22 (m, 9h). ms (esi), m/z: 337[m h]

。
[0035]
步骤g：2-苄基琥珀酸二乙酯（化合物7）的制备
3-苯基丙烷-1,2,2-三羧酸三乙酯（化合物6）（3.33 g, 10 mmol）溶于20 ml dmso中，加入氯化锂（1.1 g, 25 mmol），水（360 mg, 20 mmol），加热至160 ℃反应过夜。反应结束后加入大量水猝灭，用乙酸乙酯多次萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗涤一遍，无水na2so4干燥，过滤旋干，柱层析得固体2.3 g（yield: 87%）。1h nmr (400 mhz, cdcl
3-d6) δ 7.28-7.14 (m, 5h), 4.12-4.05 (m 4h), 3.13-2.99 (m, 2h), 2.75 (dd, j = 13.2 hz, 8.0 hz, 1h), 2.64 (dd, j = 16.8 hz, 9.2 hz, 1h), 2.38 (dd, j = 16.8 hz, 5.2 hz, 1h), 1.22-1.15 (m, 6h). ms (esi), m/z: 265[m h]

。
[0036]
步骤h：2-苄基琥珀酸（化合物8）的制备将2-苄基琥珀酸二乙酯（化合物7）（89 mg, 0.34 mmol）溶于2 ml四氢呋喃:水（3:1）中，加入氢氧化钠（27 mg, 0.67 mmol），室温下搅拌3 h，减压蒸发除去四氢呋喃，用乙酸乙酯多次萃取，合并有机相得白色固体68 mg（yield: 96%）。1h nmr (400 mhz, dmso-d6) δ 12.22 (s, 2h), 7.31-7.17 (m, 5h), 3.33-2.86 (m, 2h), 2.77-2.70 (m, 1h), 2.45-2.39 (m, 1h), 2.27-2.22 (m, 1h)。
[0037]
步骤i：2-苄基-4-甲氧基-4-氧代丁酸（化合物9）的制备将2-苄基琥珀酸（化合物8）（937 mg, 4.5 mmol）溶于9 ml甲醇中，加入amberlyst-15h

，加热回流反应5 h。反应结束后，用硅藻土过滤，合并滤液柱层析分离得淡黄色油状物253 mg（yield: 25%）。1h nmr (400 mhz, cdcl
3-d6) δ 7.32-7.17 (m, 5h), 3.65 (s, 3h), 3.18-3.12 (m, 2h), 2.82-2.76 (m, 1h), 2.66 (dd, j = 17.2 hz, 9.2 hz, 1h), 2.42 (dd, j = 16.8 hz, 4.4 hz, 1h)。
[0038]
步骤j：3-叠氮三尖杉碱（化合物10）的制备将三尖杉碱（1.5 g, 4.67 mmol）溶于10 ml无水四氢呋喃中，-15 ℃时，在氩气保护下缓慢滴加叠氮膦酸二苯酯（3.3 g, 11.9 mmol），1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯（1.8 g, 11.9 mmol），缓慢升温至室温反应过夜。反应结束后，减压蒸发溶剂，经柱层析分离得淡黄色固体863 mg（yields:53%）。ms (esi), m/z: 341[m h]

。
[0039]
步骤k：3-氨基三尖杉碱（化合物11）的制备
将3-叠氮三尖杉碱（化合物10）（540 mg, 1.59 mmol）溶于4 ml四氢呋喃:水（3:1）中，加入三苯基膦（458 mg, 1.75 mmol），室温下搅拌反应过夜。反应结束后，减压旋去四氢呋喃，用乙酸乙酯多次萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗涤一遍，无水na2so4干燥，过滤旋干，柱层析得固体250 mg（yield: 50%）。1h nmr (400 mhz, cdcl
3-d6) δ 6.68 (s, 1h), 6.64 (s, 1h), 5.88 (s, 2h), 4.74 (s, 1h), 3.86 (d, j = 4.0 hz, 1h), 3.69 (s, 3h), 3.06-3.01 (m, 1h), 2.90-2.84 (m, 3h), 2.53-2.45 (m, 3h), 1.92-1.87 (m, 4h), 1.74-1.69 (m, 2h). ms (esi), m/z: 315[m h]

。
[0040]
步骤l：3-(2
’‑
苄基-4
’‑
甲氧基-4
’‑
氧代丁酰基)三尖杉胺碱（命名为cy5120068）的制备将3-氨基三尖杉碱（化合物11）（100 mg, 0.32 mmol），2-苄基-4-甲氧基-4-氧代丁酸（化合物9）（106 mg, 0.48 mmol），o-(7-氮杂苯并三氮唑基)-n, n, n', n'-四甲基脲鎓六氟磷酸盐（181.4 mg, 0.48 mmol），三乙胺（64.4 mg, 0.64 mmol），n, n-二异丙基乙胺（2 mg, 5%）溶于2 ml干燥二氯甲烷中，室温下搅拌过夜。反应结束后，加水猝灭，用乙酸乙酯多次萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗涤一遍，无水na2so4干燥，过滤旋干，柱层析得固体65 g（yield: 39%）。ms (esi), m/z: 519[m h]

。
[0041]1h nmr (400 mhz, cdcl3) δ 8.24(brs, 1h), 7.32-7.28 (m, 4h), 7.18-7.14 (m, 1h), 6.58(s, 1h), 6.51 (s, 1h), 5.86 (s, 3h), 5.04 (s, 1h), 3.62 (d, 1h), 3.60 (s, 3h), 3.50 (s, 3h), 3.44 (m, 1h), 3.18-3.12 (m, 1h), 2.80-2.84 (m, 2h), 2.60-2.69(m, 5h), 2.34 (m, 2h), 1.75(m, 2h),1.65 (m, 2h).实施例16 3-(4
’‑
甲氧基-2
’‑
(3
’’‑
甲氧基苄基)-4
’‑
氧代丁酰基)三尖杉胺碱（命名为cy5120024）的制备
合成方法如实施例15。
[0042]
ms (esi), m/z: 549[m h]

。
[0043]1h nmr (400 mhz, cdcl3) δ 7.21-7.17 (m, 1h), 6.98 (m, 4h), 6.59 (s, 1h), 6.55(s, 1h),5.88 (s, 3h), 5.72(brs, 1h), 5.05(s, 1h), 3.70 (s, 3h), 3.62 (d, 1h), 3.63 (s, 3h), 3.52 (s, 3h), 3.36 (m, 1h), 3.18-3.12 (m, 1h), 2.88 (m, 2h), 2.64-2.70(m, 5h), 2.35 (m, 2h), 1.76 (m, 2h), 1.64(m, 2h).实施例17 3-(4
’‑
甲氧基-2
’‑
(2
’’‑
氯苄基)-4
’‑
氧代丁酰基)三尖杉胺碱（命名为cy5120069）的制备合成方法如实施例2。
[0044]
ms (esi), m/z: 553[m h]

。
[0045]1h nmr (400 mhz, cdcl3) δ 7.66-7.62 (m, 1h), 7.18-7.14 (m, 3h), 6.59 (s, 1h), 6.55(s, 1h), 5.87 (s, 3h), 5.54 (brs, 1h), 5.02(s, 1h), 3.62 (d, 1h), 3.66 (s, 3h), 3.54 (s, 3h), 3.37 (m, 1h), 3.18-3.12 (m, 1h), 2.86 (m, 2h), 2.64-2.70 (m, 5h), 2.36 (m, 2h), 1.74(m, 2h), 1.65 (m, 2h).实施例18 三尖杉碱类化合物的体外细胞活性测试三尖杉碱类化合物的细胞生长抑制活性使用cck-8试剂盒中描述的方法进行评估。将细胞 (3000-10000个/孔) 接种于96孔细胞培养板上24小时后，100 μl不同浓度的化合物溶液加入到各培养孔中，孵育72小时，10 μl cck-8溶液加入到各培养孔中，再孵育2-3小时，用酶标仪测定450nm 和 650nm的吸光值。在excell表格中处理原始数据，得到各处理孔的细胞存活率。然后使用存活率数据在graphpad prism 软件上使用非线性回归模型计算ic
50
值。结果发现，部分三尖杉碱类化合物可显著抑制ba/f3-bcr/abl-t315i, k562, a549, u937的增殖，其半数抑制浓度（ic
50
，表1）与药物浓度成正相关。所用化合物分别为实
施例1-7所制备的化合物。
[0046]
表1 化合物对不同肿瘤细胞的ic
50
（μm）表1的数据表明，本发明制备的三尖杉碱类化合物较化合物cy5120068、cy5120024、cy5120069具有更高的抗肿瘤活性。
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以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也落入本发明权利要求的保护范围内。