一种条件控制的可剪接嵌合抗原受体分子及其应用的制作方法

技术特征：
1.一种条件控制的可剪接嵌合抗原受体分子，其包括抗原识别单元和信号转导单元，其中所述抗原识别单元包括抗原识别结构域、跨膜结构域、共刺激信号域、n端剪接域和降解子；所述信号转导单元包含条件信号响应结构域、c端剪接域和信号传导结构域。2.根据权利要求1所述的嵌合抗原受体分子，其中，所述抗原识别结构域所结合的抗原选自cd47、axl、egfr、cd7、cd24、fap、cd147、her2、ror1、ror2、cd133、epha2、cd171、cea、epcam、tag72、il-13rα、egfrviii、gd2、frα、psca、psma、gpc3、caix、claudin18.2、vegfr2、pd-l1、msln、muc1、c-met、b7-h3或trop2抗原中的一种或多种；优选地，所述抗原识别结构域所结合的抗原为cd47抗原；优选地，所述跨膜结构域选自cd3ζ、cd4、cd8、cd28或cd137/4-1bb跨膜结构域中的一种或多种；更优选地，所述跨膜结构域为cd28跨膜结构域；优选地，所述抗原识别单元中的共刺激结构域选自cd2、cd27、cd28、cd40、ox40、cd137/4-1bb、tlr1、tlr2、tlr3、tlr4、tlr5、tlr6、tlr7、tlr8、tlr9、tlr10、tlr11或dap10共刺激结构域中的一种或多种；更优选地，所述抗原识别单元中的共刺激结构域选自cd28或cd137/4-1bb共刺激结构域中的一种或多种；优选地，所述n端剪接域选自蛋白质内含子或spytag/spycatcher自组装子中的一种或多种；更优选地，所述n端剪接域为蛋白质内含子int
n
；优选地，所述降解子选自二氢叶酸还原酶(dhfr)、雌激素受体(er)、沙门氏菌iii型分泌系统效应蛋白(sope)、植物激素诱导蛋白降解子、不稳定域(ad)或光敏蛋白降解子中的一种或多种；更优选地，所述降解子选自雌激素受体或沙门氏菌iii型分泌系统效应蛋白中的一种或多种；最优选地，所述降解子为突变型雌激素受体(erm)。3.根据权利要求1或2所述的嵌合抗原受体分子，其中，所述条件信号响应结构域选自氧依赖降解结构域(odd)、温度敏感结构域、ph敏感结构域、光敏结构域或炎症因子响应结构域中的一种或多种；优选地，所述条件信号响应结构域为氧依赖降解结构域；优选地，所述c端剪接域选自蛋白质内含子或spytag/spycatcher自组装子中的一种或多种；更优选地，所述c端剪接域为蛋白质内含子int
c
；优选地，所述信号传导结构域选自cd3ξ、fcγriii、fcεri、fc受体信号传导结构域或携带免疫受体酪氨酸活化基序(itam)信号传导分子中的一种或多种；更优选地，所述信号传导结构域为cd3ξ信号传导结构域。4.根据权利要求3所述的嵌合抗原受体分子，其中，所述信号转导单元还包含共刺激信号结构域；优选地，所述信号转导单元中的共刺激信号结构域选自cd2、cd27、cd28、cd40、ox40、cd137/4-1bb、tlr1、tlr2、tlr3、tlr4、tlr5、tlr6、tlr7、tlr8、tlr9、tlr10、tlr11或dap10共刺激信号结构域中的一种或多种。5.根据权利要求1至4中任一项所述的嵌合抗原受体分子，其中，所述抗原识别单元的氨基酸序列如seq no：1或seq no：2所示；和/或所述信号转导单元的氨基酸序列如seq no：3所示。6.一种编码根据权利要求1至5中任一项所述的嵌合抗原受体分子的核酸分子；优选地，在所述核酸分子中，编码所述信号转导单元的核苷酸序列还包含编码条件信号响应元件的核苷酸序列；
优选地，所述条件信号响应元件选自缺氧反应元件(hre)、温度敏感元件、ph敏感元件、光敏元件或炎症因子响应元件中的一种或多种；更优选地，所述条件信号响应元件为缺氧反应元件(hre)；优选地，编码所述信号转导单元的核苷酸序列如seq no：4所示；优选地，所述核酸分子的核苷酸序列如seq no：5或6所示。7.一种载体，其包含根据权利要求6所述的核酸分子；优选地，所述载体选自质粒、逆转录病毒载体、慢病毒载体、腺病毒载体、腺相关病毒载体、痘苗病毒载体、单纯疱疹病毒载体、森林脑炎病毒载体、脊髓灰质炎病毒载体、新城疫病毒载体或转座子中的一种或多种；更优选地，所述载体为慢病毒载体。8.一种基因工程化的宿主细胞，其包含在其染色体中整合的外源性的根据权利要求6所述的核酸分子，或包含根据权利要求7所述的载体；优选地，所述宿主细胞选自分离获得的人源细胞或基因工程化的免疫细胞中的一种或多种；进一步优选地，所述分离获得的人源细胞选自胚胎干细胞、脐带血来源干细胞、诱导多能干细胞、造血干细胞、间充质干细胞、脂肪干细胞、t细胞、nk细胞、nkt细胞或巨噬细胞中的一种或多种；进一步优选地，所述基因工程化的免疫细胞选自基因工程化的t细胞、nk细胞、nkt细胞或巨噬细胞中的一种或多种；更优选地，所述基因工程化的免疫细胞为基因工程化的t细胞；更优选地，所述基因工程化的免疫细胞选自嵌合抗原受体t细胞(car-t细胞)、嵌合抗原受体nk细胞(car-nk细胞)、嵌合抗原受体nkt细胞(car-nkt细胞)、嵌合抗原受体巨噬细胞或t细胞受体t细胞(tcr-t细胞)中的一种或多种；最优选地，所述基因工程化的免疫细胞为嵌合抗原受体t细胞。9.一种根据权利要求8所述的基因工程化宿主细胞的制备方法，其包括将根据权利要求6所述的核酸分子和/或根据权利要求7所述的载体导入宿主细胞内；优选地，所述导入为转染或转导。10.根据权利要求1至5中任一项所述的嵌合抗原受体分子、根据权利要求6所述的核酸分子、根据权利要求7所述的载体或根据权利要求8所述的基因工程化的宿主细胞在制备细胞免疫治疗药物中的用途；优选地，所述细胞免疫治疗药物用于治疗乏氧性疾病；更优选地，所述乏氧性疾病为癌症；进一步优选地，所述癌症为实体瘤，例如神经母细胞瘤、肺癌、乳腺癌、食管癌、胃癌、肝癌、子宫颈癌、卵巢癌、肾癌、胰腺癌、鼻咽癌、小肠癌、大肠癌、结直肠癌、膀胱癌、骨癌、前列腺癌、甲状腺癌或脑癌中的一种或多种。

技术总结
本发明提供了一种条件控制的可剪接嵌合抗原受体分子及其应用，所述可剪接嵌合抗原受体分子包括抗原识别单元和信号转导单元，其中所述抗原识别单元包括抗原识别结构域、跨膜结构域、共刺激信号域、N端剪接域和降解子；所述信号转导单元包含条件信号响应结构域、C端剪接域和信号传导结构域。这样的条件控制的可剪接系统可在肿瘤微环境信号下实现两个单元的剪接和信号的传导。其中，抗原识别单元可自发/诱发降解，减少在正常组织中的滞留。信号传导单元可响应肿瘤微环境特定条件信号，具有正常组织环境下低表达，肿瘤微环境下高表达的特点。所述条件控制的可剪接系统可通过接入不同的功效基因来实现实体瘤治疗药物的制备及精准治疗。准治疗。准治疗。


技术研发人员：徐建青 张晓燕 廖启彬 丁相卿 王诗语
受保护的技术使用者：上海鑫湾生物科技有限公司
技术研发日：2021.10.29
技术公布日：2022/3/7