脱氨酶介导的DNA中N4-甲基胞嘧啶的单碱基分辨率定位分析方法与流程

技术特征：
1.一种脱氨酶介导的dna中n
4-甲基胞嘧啶的单碱基分辨率定位分析方法，其特征在于：包括如下步骤：(1)对待检dna进行变性处理；(2)经变性处理的dna用胞嘧啶脱氨酶进行脱氨处理；(3)脱氨后的dna样品进行pcr扩增；(4)将pcr扩增产物测序，待检dna中的n
4-甲基胞嘧啶在测序中被读为胞嘧啶，正常的胞嘧啶和5-甲基胞嘧啶在测序中被读为胸腺嘧啶。2.根据权利要求1中所述的脱氨酶介导的dna中n
4-甲基胞嘧啶的单碱基分辨率定位分析方法，其特征在于：步骤(1)中，dna变性处理的方法为：在0～60％dmso存在下，将dna在90～98℃高温下孵育2～30分钟。3.根据权利要求1中所述的脱氨酶介导的dna中n
4-甲基胞嘧啶的单碱基分辨率定位分析方法，其特征在于：步骤(2)中，所述的胞嘧啶脱氨酶为氨基酸序列如seq id no.1所示的a3a蛋白。4.根据权利要求3中所述的脱氨酶介导的dna中n
4-甲基胞嘧啶的单碱基分辨率定位分析方法，其特征在于：步骤(2)中，dna进行脱氨处理的方法为：dna在含2-(n-吗啉)乙磺酸10～30mm、triton x-100 0.05～0.5％、ph 5.5～7.5、a3a蛋白1～10μm的反应体系中，于30～45℃反应0.5～4小时。5.根据权利要求1中所述的脱氨酶介导的dna中n
4-甲基胞嘧啶的单碱基分辨率定位分析方法，其特征在于：步骤(4)中，若pcr扩增得到的是特定序列的dna片段，扩增产物可以直接进行sanger测序；若pcr扩增形成dna文库，则将扩增产物进行高通量测序。

技术总结
本发明公开了一种脱氨酶介导的DNA中N


技术研发人员：袁必锋 熊军 冯钰锜
受保护的技术使用者：武汉大学
技术研发日：2021.11.25
技术公布日：2022/3/4