RNA病毒检测方法与流程

技术特征：
1.一种检测待检体中的rna病毒的方法，其包括如下工序：(1)将待检体悬浮于蒸馏水、生理盐水或缓冲液的工序；(2)提取工序(1)中生成的悬浮液的离心上清液的工序；(3)将工序(2)中提取出的离心上清液与包含1种以上的表面活性剂的待检体处理液混合的工序；(4)将工序(3)中得到的混合液与包含逆转录酶和dna聚合酶的一步法rt-pcr反应液混合，进行rt-pcr的工序；及(5)对所述rt-pcr产物进行检测的工序。2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述rna病毒选自由诺如病毒、轮状病毒、鼻病毒、冠状病毒、人类免疫缺陷病毒、丙型肝炎病毒、日本脑炎病毒和登革病毒组成的组。3.根据权利要求1所述的方法，其中，所述rna病毒为诺如病毒。4.根据权利要求3所述的方法，其中，所述诺如病毒基因型为基因组i(gi)或基因组ii(gii)。5.根据权利要求1～4中任一项所述的方法，其中，所述待检体源自选自由生物试样、生物来源试样、环境试样和环境来源试样组成的组中的试样。6.根据权利要求1～4中任一项所述的方法，其中，所述待检体源自选自由排泄物试样、排泄物来源试样、呕吐物和呕吐物来源试样组成的组中的试样。7.根据权利要求1～6中任一项所述的方法，其中，所述表面活性剂为阴离子表面活性剂。8.根据权利要求7所述的方法，其中，所述阴离子表面活性剂为选自由烷基硫酸盐、烷基醚硫酸盐、多库酯、磺酸盐含氟表面活性剂、烷基苯磺酸盐、烷基芳基醚磷酸盐、烷基醚磷酸盐、烷基羧酸盐、月桂酰肌氨酸钠、羧酸盐含氟表面活性剂、胆酸钠和脱氧胆酸钠组成的组中的1种以上的阴离子表面活性剂。9.根据权利要求7所述的方法，其中，所述阴离子表面活性剂为烷基硫酸盐。10.根据权利要求9所述的方法，其中，所述烷基硫酸盐为十二烷基硫酸钠或十二烷基硫酸铵。11.根据权利要求1～10中任一项所述的方法，其中，所述表面活性剂的浓度为0.02～0.5％(w/v)。12.根据权利要求1～11中任一项所述的方法，其中，所述待检体处理液包含氢氧化物。13.根据权利要求12所述的方法，其中，所述氢氧化物为氢氧化钠或氢氧化钾。14.根据权利要求12或13所述的方法，其中，所述氢氧化物的浓度为10～100mm。15.根据权利要求1～14中任一项所述的方法，其中，所述工序(3)中的待检体与待检体处理液的混合比以体积比计为1：3～6。16.根据权利要求1～15中任一项所述的方法，其中，所述逆转录酶选自由amv逆转录酶、mmlv逆转录酶、hiv逆转录酶和它们的突变体组成的组。17.根据权利要求1～16中任一项所述的方法，其中，所述dna聚合酶选自由taq dna聚合酶、tth dna聚合酶、kod dna聚合酶、pfu dna聚合酶和它们的突变体组成的组。18.根据权利要求1～17中任一项所述的方法，其中，所述工序(5)通过实时测定而进行。
19.根据权利要求1～18中任一项所述的方法，其中，所述工序(3)在1～60℃的温度下进行。20.根据权利要求1～19中任一项所述的方法，其中，所述工序(3)～(5)在同一容器内进行。21.根据权利要求1～20中任一项所述的方法，其中，所述工序(5)中，使用荧光滤光片测定rt-pcr产物的扩增曲线，判定待检体中rna病毒的存在为阳性或为阴性。22.一种rna病毒的检测试剂盒，其包含：含有1种以上的表面活性剂的待检体处理液、以及含有逆转录酶和dna聚合酶的一步法rt-pcr反应液。23.根据权利要求22所述的试剂盒，其中，所述rna病毒选自由诺如病毒、轮状病毒、鼻病毒、冠状病毒、人类免疫缺陷病毒、丙型肝炎病毒、日本脑炎病毒和登革病毒组成的组。24.根据权利要求22所述的试剂盒，其中，所述rna病毒为诺如病毒。25.根据权利要求24所述的试剂盒，其中，判断诺如病毒基因型为基因组i(gi)、或为基因组ii(gii)。26.根据权利要求22～25中任一项所述的试剂盒，其中，所述表面活性剂为阴离子表面活性剂。27.根据权利要求26所述的试剂盒，其中，所述阴离子表面活性剂为选自由烷基硫酸盐、烷基醚硫酸盐、多库酯、磺酸盐含氟表面活性剂、烷基苯磺酸盐、烷基芳基醚磷酸盐、烷基醚磷酸盐、烷基羧酸盐、月桂酰肌氨酸钠、羧酸盐含氟表面活性剂、胆酸钠和脱氧胆酸钠组成的组中的1种以上的阴离子表面活性剂。28.根据权利要求26所述的试剂盒，其中，所述阴离子表面活性剂为烷基硫酸盐。29.根据权利要求28所述的试剂盒，其中，所述烷基硫酸盐为十二烷基硫酸钠或十二烷基硫酸铵。30.根据权利要求22～29中任一项所述的试剂盒，其还包含试剂盒的操作步骤说明书。

技术总结
本发明涉及通过逆转录-聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction、RT-PCR)来检测RNA病毒的方法、及用于执行该方法的试剂盒。更具体而言，涉及：通过在氢氧化物的存在下将待检体与表面活性剂混合，进而添加RT-PCR反应液，由此检测RNA病毒的方法；以及，用于执行该方法的试剂盒。用于执行该方法的试剂盒。


技术研发人员：小林慎一郎 四方正光 高冈直子 二宫健二
受保护的技术使用者：株式会社岛津制作所
技术研发日：2020.07.08
技术公布日：2022/2/23