α-淀粉酶变体
1.序列表的引用
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技术领域
3.本发明涉及α-淀粉酶的变体、编码这些变体的多核苷酸和产生这些变体的方法。
背景技术：
4.α-淀粉酶(α-1,4-葡聚糖-4-葡聚糖水解酶，e.c.3.2.1.1)构成催化淀粉以及其他直链和支链1,4-糖苷寡糖和多糖的水解的一组酶。
5.α-淀粉酶在例如洗涤剂、烘焙、酿造、淀粉液化和糖化，如在制备高果糖糖浆或作为从淀粉产生乙醇的一部分中，具有悠久的产业应用历史。许多这些和其他的α-淀粉酶应用使用来源于微生物的α-淀粉酶，特别是细菌α-淀粉酶。
6.属于首先被使用的细菌α-淀粉酶是来自地衣芽孢杆菌(b.iicheniformis)的α-淀粉酶，也称作termamyl，该termamyl已经被充分表征并且这种酶的晶体结构已经被确定。碱性淀粉酶，如源自如披露于wo 95/26397中的芽孢杆菌属物种的α-淀粉酶，形成了用于洗涤剂的特定的α-淀粉酶组。这些已知的细菌淀粉酶中许多已经经修饰以改善它们在特定应用中的功能性。
7.因此，本发明的一个目的是提供具有α-淀粉酶活性并且与亲本多肽相比具有改善的特性(如比活性)的变体多肽。
8.本发明提供了具有α-淀粉酶活性并且与其亲本多肽相比具有改善的特性(如比活性)的变体多肽。
技术实现要素：
9.本发明涉及亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体，其中该变体在对应于以下位置的一个或多个位置处包含取代：3、5、7、8、16、18、25、26、29、30、35、37、40、41、43、46、50、57、60、68、71、73、74、78、81、84、86、87、90、91、93、97、98、103、105、110、111、113、114、116、117、119、120、121、125、126、128、129、131、132、133、135、137、138、139、140、141、142、143、145、146、147、149、159、161、162、165、167、169、171、176、177、179、180、181、185、186、187、195、196、197、204、206、208、211、216、218、219、225、228、230、231、235、242、243、247、250、251、252、253、254、255、257、259、260、261、262、263、265、272、273、274、279、280、281、283、284、287、292、294、296、298、299、300、303、305、307、310、311、313、314、315、319、320、321、322、323、324、334、337、339、340、342、344、345、346、347、350、359、360、361、362、363、364、368、372、375、380、382、383、384、385、387、388、391、393、395、396、397、398、401、402、403、405、406、407、410、415、416、418、421、422、423、433、434、435、438、439、446、447、449、450、452、455、457、458、460、461、462、465、466、467、469、471、473、475、476、477以及478，使用seq id no:1进行编号；并且其中所述变体与seq id no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16
或17的多肽具有至少60％、例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％但小于100％序列同一性，并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中该α-淀粉酶变体相对于所述亲本具有改善的特性。
10.本发明还涉及编码根据本发明的变体的多核苷酸、包含编码根据本发明的变体的多核苷酸的核酸构建体、包含编码根据本发明的变体的多核苷酸的表达载体、和包含编码根据本发明的变体的多核苷酸的宿主细胞。
11.本发明还涉及产生α-淀粉酶变体的方法，该方法包括：(a)在适合于该变体表达的条件下培养本发明的宿主细胞；和(b)回收该变体。
12.本发明进一步涉及获得亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体的方法，该方法包括以下步骤：a)在对应于以下位置的一个或多个位置处引入取代：3、5、7、8、16、18、25、26、29、30、35、37、40、41、43、46、50、57、60、68、71、73、74、78、81、84、86、87、90、91、93、97、98、103、105、110、111、113、114、116、117、119、120、121、125、126、128、129、131、132、133、135、137、138、139、140、141、142、143、145、146、147、149、159、161、162、165、167、169、171、176、177、179、180、181、185、186、187、195、196、197、204、206、208、211、216、218、219、225、228、230、231、235、242、243、247、250、251、252、253、254、255、257、259、260、261、262、263、265、272、273、274、279、280、281、283、284、287、292、294、296、298、299、300、303、305、307、310、311、313、314、315、319、320、321、322、323、324、334、337、339、340、342、344、345、346、347、350、359、360、361、362、363、364、368、372、375、380、382、383、384、385、387、388、391、393、395、396、397、398、401、402、403、405、406、407、410、415、416、418、421、422、423、433、434、435、438、439、446、447、449、450、452、455、457、458、460、461、462、465、466、467、469、471、473、475、476、477以及478，使用seq id no:1进行编号，b)在亲本α-淀粉酶的所述位置r181、g182、d183以及g184中的两个或更多个位置处引入缺失，使用seq id no:1进行编号；所述方法由此提供所述亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体，其中所述变体与seq id no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17的多肽的氨基酸序列具有至少60％、例如至少65％、例如至少70％、例如至少75％、例如至少80％、例如至少85％、例如至少90％、例如至少95％、例如至少97％、例如至少99％但小于100％的序列同一性，并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中该α-淀粉酶变体相对于所述亲本具有改善的特性。
13.定义
14.根据此详细描述，以下定义适用。注意，单数形式“一种/个(a/an)”以及“所述(the)”包括复数个指示物，除非上下文中另外明确指明。
15.本文提及“约”值或参数包括针对该值或参数本身的方面。例如，提及“约x”的描述包括方面“x”。
16.除非另外定义或由上下文明确指示，否则本文所用的全部技术与科学术语具有如本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
17.α-淀粉酶(α-1,4-葡聚糖-4-葡聚糖水解酶，e.c.3.2.1.1)构成催化淀粉以及其他直链和支链1,4-糖苷寡糖和多糖的水解的一组酶。在一方面，本发明的α-淀粉酶变体具有seq id no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17的多肽的至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少99％但小于100％的α-淀粉酶活性。
18.α-淀粉酶活性：如本文使用的术语“α-淀粉酶活性”是指其中根据实例所描述的程序确定活性的α-淀粉酶的活性。α-淀粉酶活性可以根据实例2所描述的使用微样片测定的方法进行确定。
19.氨基酸：如本文使用的术语“氨基酸”是指标准二十种遗传编码的氨基酸及其相应的处于“d”型(与天然“l”型进行对比)的立体异构体、ω-氨基酸、其他天然存在的氨基酸、非常规氨基酸(例如α,α-双取代的氨基酸、n-烷基氨基酸等)和化学衍生化的氨基酸。可以通过与功能性侧基团反应来实现一个或多个氨基酸的化学衍生物。此类衍生的分子包括例如，其中游离氨基基团已被衍生化以形成胺盐酸盐、对甲苯磺酰基基团、羧基苯氧基基团、叔丁氧基羰基基团、氯乙酰基基团或甲酰基基团的那些分子。游离羧基基团可被衍生化以形成盐、甲酯和乙酯或其他类型的酯和酰肼。游离羟基基团可被衍生化以形成o-酰基或o-烷基衍生物。作为化学衍生物还包括那些含有二十种标准氨基酸的天然存在的氨基酸衍生物的肽。例如：4-羟脯氨酸可以取代脯氨酸；5-羟赖氨酸可以取代赖氨酸；3-甲基组氨酸可以取代组氨酸；高丝氨酸可以取代丝氨酸并且鸟氨酸取代赖氨酸。只要维持必要的活性，衍生物也包括含有一个或多个添加或缺失的肽。其他包括的修饰是酰胺化、氨基末端酰化(例如乙酰化或巯基乙酸酰胺化)、末端羧基酰胺化(例如用氨或甲胺)、和类似的末端修饰。
20.当明确列举氨基酸，如“丙氨酸”或“ala”或“a”时，除非另有明确说明，否则所述术语是指l-丙氨酸和d-丙氨酸两者。其他非常规氨基酸也可以是本发明多肽的适合组分，只要所需功能特性由多肽保留即可。对于所示的肽，适当时，每个编码的氨基酸残基由单字母代号表示，对应于常规氨基酸的普通名称。在一个实施例中，本发明的多肽包含l-氨基酸或由其组成。
21.cdna：如本文使用的术语“cdna”是指可以通过从获得自真核或原核细胞的成熟的、剪接的mrna分子进行反转录而制备的dna分子。cdna缺乏可以存在于对应基因组dna中的内含子序列。初始的初级rna转录物是mrna的前体，其要通过一系列的步骤(包括剪接)进行加工，然后呈现为成熟的剪接的mrna。
22.编码序列：如本文使用的术语“编码序列”是指直接指明变体的氨基酸序列的多核苷酸。编码序列的边界通常由可读框确定，该可读框以起始密码子(例如atg、gtg、或ttg)开始并且以终止密码子(例如taa、tag、或tga)结束。编码序列可为基因组dna、cdna、合成dna、或其组合。
23.控制序列：如本文使用的术语“控制序列”是指对于表达编码本发明的变体的多核苷酸所必需的核酸序列。每个控制序列对于编码该变体的多核苷酸来说可以是天然的(即，来自相同基因)或外源的(即，来自不同基因)，或相对于彼此是天然的或外源的。此类控制序列包括但不限于：前导子序列、多腺苷酸化序列、前肽序列、启动子、信号肽序列以及转录终止子。最少，控制序列包括启动子、以及转录和翻译终止信号。出于引入促进控制序列与编码变体的多核苷酸的编码区域连接的特异性限制位点的目的，控制序列可以提供有接头。
24.对应于：如本文使用的术语“对应于”是指确定序列中的特定氨基酸(其中参考了特定氨基酸序列)的方式。例如出于本发明的目的，当参考特定氨基酸位置时，技术人员会能够将另一氨基酸序列与所述已经被参考的氨基酸序列进行比对，从而确定哪一个特定氨基酸可能是在所述另一氨基酸序列中是感兴趣的。已经在本文其他地方描述了另一氨基酸
序列与例如seq id no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17中阐述的序列或本文列出的任何其他序列的比对。可使用可替代的比对方法，并且这些方法为本领域技术人员所熟知。
25.餐具洗涤组合物：如本文使用的术语“餐具洗涤组合物”是指用于清洁硬表面的所有形式的组合物。本发明不限于任何特定类型的餐具洗涤组合物或任何特定的洗涤剂。因此，在一个实施例中，餐具洗涤组合物是液体餐具洗涤组合物、粉末餐具洗涤组合物，其中组合物可以任选地呈单位剂量的形式。
26.酶去垢力益处：本文使用的术语“酶去垢力益处”是指可将一种酶添加至洗涤剂中与不具有所述酶的同一洗涤剂相比的有利作用。可能由酶提供的重要去垢力益处是污渍去除伴随在洗涤和/或清洁之后无可见污垢或几乎无可见污垢、预防或减少在洗涤过程中释放的污垢再沉积(一种又称作抗再沉积的作用)、完全或部分地恢复纺织品的白度(一种又称作增白的作用)，其中这些纺织品最初是白色的，但是在反复使用和洗涤后获得淡灰或淡黄色外观。不直接与污垢的催化污渍去除或其再沉积的预防相关的纺织品护理益处对于酶去垢力益处而言也是重要的。此类纺织品护理益处的实例是防止或减少染料从一织物转移至另一织物或同一织物的另一部分(也被称作染料转移抑制或抗返染的效果)，从织物表面去除突出或断裂的纤维以减少起球倾向或去除已经存在的球或绒毛(也被称作抗起球的效果)，改善织物柔软性，使织物的颜色澄清以及去除陷在织物或服装的纤维中的微粒状污垢。酶法漂白是一种另外的酶去垢力益处，其中通常将催化活性用于催化漂白组分(如过氧化氢或其他过氧化物)的形成。
27.表达：如本文使用的术语“表达”是指涉及变体产生的任何步骤，包括但不限于，转录、转录后修饰、翻译、翻译后修饰以及分泌。
28.表达载体：如本文使用的术语“表达载体”是指线性或环状dna分子，该分子包含编码变体的多核苷酸并且可操作地连接至提供用于其表达的控制序列。
29.片段：如本文使用的术语“片段”是指在本文披露的任何一个亲本序列(如seq id no:seq id no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17)的成熟多肽的氨基和/或羧基末端缺少一个或多个(例如几个)氨基酸的多肽；其中该片段具有α-淀粉酶活性。在一方面，片段含有seq id no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17的至少200个连续的氨基酸残基，例如seq id no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17的至少300个连续的氨基酸残基、或至少350个连续的氨基酸残基、或至少400个连续的氨基酸残基、或至少450个连续的氨基酸残基。
30.硬表面清洁：如本文使用的术语“硬表面清洁”是指硬表面的清洁，其中硬表面可以包括地板、桌子、墙壁、屋顶等，连同硬物体(如汽车(汽车洗涤)和餐具(餐具洗涤))的表面。餐具洗涤包括但不限于，清洁盘子、杯子、玻璃杯、碗、刀叉餐具(如匙、刀、叉)、上菜用具、陶瓷、塑料、金属、瓷器、玻璃及丙烯酸酯
31.高严格：术语“高严格条件”意指对于长度为至少100个核苷酸的探针而言，遵循标准dna印迹程序，在42℃，于5x sspe、0.3％sds、200微克/ml剪切并变性的鲑鱼精子dna和50％甲酰胺中预杂交和杂交12至24小时。载体材料最终使用2x ssc、0.2％sds，在65℃下洗涤三次，每次15分钟。
32.宿主细胞：如本文使用的术语“宿主细胞”是指对于用包含本发明的多核苷酸的核
酸构建体或表达载体进行的转化、转染、转导等是易感的任何细胞类型。术语“宿主细胞”涵盖由于复制期间出现的突变而与亲本细胞不相同的任何亲本细胞子代。
33.改善的特性：术语“改善的特性”在本文中定义为与相对于亲本α-淀粉酶有所改善的变体相关的特征。这种改善的特性包括但不限于增加的淀粉分解活性，增加的催化效率，增加的催化速率，增加的化学稳定性，增加的氧化稳定性，增加的ph活性，增加的ph稳定性，增加的比活性，增加的底物结合，增加的底物切割，增加的底物特异性，增加的底物稳定性，增加的表面特性，增加的热活性，以及增加的热稳定性和增加的洗涤性能(如污垢性能，例如对含淀粉的污垢的性能)，污渍去除，抗灰化，稳定性(例如热稳定性，ph稳定性或在包括螯合剂在内的助洗剂存在下的稳定性，在粉末、液体或凝胶洗涤剂配制品或餐具洗涤组合物中的稳定性)，改变的温度依赖性性能以及活性曲线、ph活性、底物特异性、产物特异性和化学稳定性。改善的特性可以是本文定义和描述的那些中的任何一种，如增加的比活性。改善的特性是在标准a洗涤剂组合物中的增加的比活性。改善因子(if)为至少1.1、至少1.2、至少1.3。
34.改善的洗涤性能：术语“改善的洗涤性能”在本文中定义为显示本发明的淀粉酶的洗涤性能相对于seq id no:1或seq id no:2的亲本α-淀粉酶的洗涤性能的改变。该改变可以例如被视为增加的污渍去除。如果本发明淀粉酶变体相对于所述亲本多肽具有改善的特性并且所述改善的特性是在标准a洗涤剂组合物中的增加的比活性，洗涤性能则改善。改善因子(if)为至少1.1、至少1.2、至少1.3。
35.分离的：如本文使用的术语“分离的”是指处于自然界中不存在的形式或环境中的物质。分离的物质的非限制性实例包括(1)任何非天然存在的物质，(2)包括但不限于任何酶、变体、核酸、蛋白质、肽或辅因子的任何物质，该物质至少部分地从与其性质相关的一种或多种或所有天然存在的成分中去除；(3)相对于自然界中发现的物质通过人工修饰的任何物质；或(4)通过相对于与其天然相关的其他组分，增加该物质的量而修饰的任何物质(例如，编码该物质的基因的多个拷贝；比与编码该物质的基因天然相关联的启动子更强的启动子的使用)。分离的物质可以存在于发酵培养液样品中。
36.分离的多核苷酸：术语“分离的多核苷酸”意指通过人工修饰的多核苷酸。在一方面，如通过琼脂糖电泳所确定的，所述分离的多核苷酸是至少1％纯的，例如至少5％纯的、至少10％纯的、至少20％纯的、至少40％纯的、至少60％纯的、至少80％纯的、至少90％纯的、以及至少95％纯的。多核苷酸可以是基因组、cdna、rna、半合成、合成来源的，或其任何组合。
37.成熟多肽：如本文使用的术语“成熟多肽”是指在翻译和任何翻译后修饰如n末端加工、c末端截短、糖基化作用、磷酸化作用等之后处于其最终形式的多肽。本领域内公知，宿主细胞可以产生由相同多核苷酸表达的两种或更多种不同的成熟多肽(即，具有不同的c末端和/或n末端氨基酸)的混合物。
38.成熟多肽编码序列：如本文使用的术语“成熟多肽编码序列”是指编码具有α-淀粉酶活性的成熟多肽的多核苷酸。
39.修饰：在本发明的多肽的上下文中，术语“修饰”意指通过用不同的氨基酸取代、通过插入氨基酸、或通过缺失(优选地通过至少一个缺失)而改变在参考氨基酸序列(即seq id no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17)内的一个或多个氨基酸。术语“修
饰”、“改变”和“突变”可以互换地使用并且构成相同的含义和目的。
40.中严格：术语“中严格条件”意指对于长度为至少100个核苷酸的探针而言，遵循标准dna印迹程序，在42℃，于5x sspe、0.3％sds、200微克/ml剪切并变性的鲑鱼精子dna和35％甲酰胺中预杂交和杂交12至24小时。最后在55℃使用2x ssc、0.2％sds将运载体材料洗涤三次，每次15分钟。
41.突变体：术语“突变体”意指编码变体的多核苷酸。
42.核酸构建体：如本文使用的术语“核酸构建体”是指单链或双链的核酸分子，该核酸分子是从天然存在的基因中分离的，或以本来不存在于自然界中的方式被修饰成含有核酸的区段，或是合成的，该核酸分子包含一个或多个控制序列。
43.可操作地连接：如本文使用的术语“可操作地连接”是指如下构型，其中，控制序列相对于多核苷酸的编码序列安置在适当位置处，从而使得所述控制序列指导所述编码序列的表达。
44.亲本或亲本α-淀粉酶：如本文使用的术语“亲本”α-淀粉酶意指进行修饰以产生本发明的变体α-淀粉酶的α-淀粉酶。该术语还指本发明的变体与之进行比较的多肽。亲本可以是天然存在(野生型)多肽，或者它可以甚至是通过任何合适的手段制备的其变体。例如，亲本蛋白质可以是在氨基酸序列方面已经进行过修饰或改变的天然存在多肽的变体。因此，亲本α-淀粉酶可具有一个或多个(或一个或几个)氨基酸取代、缺失和/或插入。因此，亲本α-淀粉酶可为亲本α-淀粉酶的变体。亲本也可以是等位基因变体，其是由占据相同染色体基因应的基因的两种或两种以上可选形式中的任一所编码的多胁。如本文使用的术语“亲本”或“亲本α-淀粉酶”是指seq id no:seq id no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17的α-淀粉酶，或与seq id no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17的任一多肽具有至少60％序列同一性的任何α-淀粉酶。亲本淀粉酶也可以是包含seq id no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17的片段的多肽。
45.序列同一性：两个氨基酸序列之间或两个核苷酸序列之间的关联度通过参数“序列同一性”来描述。
46.出于本发明的目的，使用如在emboss包(emboss:the european molecular biology open software suite[emboss：欧洲分子生物学开放软件套件],rice等人,2000,trends genet.[遗传学趋势]16:276-277)(优选5.0.0版本或更新版本)的尼德尔(needle)程序中所实施的尼德曼-翁施(needleman-wunsch)算法(needleman和wunsch,1970,j.mol.biol.[分子生物学杂志]48:443-453)来确定两个氨基酸序列之间的序列同一性。使用的参数可以是空位开放罚分10、空位延伸罚分0.5、以及eblosum62(blosum62的emboss版本)取代矩阵。将标记为“最长同一性”的尼德尔的输出(使用非简化选项获得)用作同一性百分比并且计算如下：
[0047]
(相同的残基x 100)/(比对长度-比对中的空位总数)
[0048]
可替代地，所使用的参数可以是空位开放罚分10、空位延伸罚分0.5和ednafull(ncbi nuc4.4的emboss版本)取代矩阵。将标记为“最长同一性”的尼德尔的输出(使用非简化选项获得)用作同一性百分比并且计算如下：
[0049]
(相同的脱氧核糖核苷酸x 100)/(比对长度-比对中的空位总数)
[0050]
子序列：如本文使用的术语“子序列”是指从成熟多肽编码序列的5'端和/或3'端
缺失一个或多个(例如，几个)核苷酸的多核苷酸；其中该子序列编码具有α-淀粉酶活性的片段。
[0051]
纺织品：纺织品样品cs-27获得自测试材料bv中心，邮政信箱120，3133kt弗拉尔丁恩，荷兰。
[0052]
纺织品护理益处：被定义为不直接与污垢的催化污渍去除或其再沉积的预防相关的、如本文使用的术语“纺织品护理益处”对于酶去垢力益处而言也是重要的。此类纺织品护理益处的实例是防止或减少染料从一纺织品转移至另一纺织品或同一纺织品的另一部分(也被称作染料转移抑制或抗返染的效果)，从纺织品表面去除突出或断裂的纤维以减少起球倾向或去除已经存在的球或绒毛(也被称作抗起球的效果)，改善纺织品柔软性，使纺织品的颜色澄清以及去除陷在纺织品的纤维中的微粒状污垢。酶漂白是另一种酶洗涤益处，其中通常将催化活性用于催化漂白组分(如过氧化氢或其他过氧化物或其他漂白种类)的形成。
[0053]
野生型酶：术语“野生型”α-淀粉酶表示由天然存在的微生物(如在自然界中发现的细菌、酵母或丝状真菌)表达的α-淀粉酶。当亲本酶不是变体酶时，术语“野生型酶”和“亲本酶”可互换地使用。
[0054]
变体酶：如本文使用的，当涉及本发明的变体的使用时，术语“变体”或“多肽变体”或“多肽”或“α-淀粉酶变体”是指相对于seq id no:1或2的“亲本”α-淀粉酶的一个或多个(例如，几个)位置处包含改变(即，取代、插入、和/或缺失)的具有α-淀粉酶活性的多肽。取代意指用不同的氨基酸替代占据某一位置的氨基酸，缺失意指去除占据某一位置的氨基酸，并且插入意指在邻接并且紧随占据亲本或野生型α-淀粉酶的特定位置的氨基酸之后添加氨基酸。优选地小于50个修饰，更优选地小于30个修饰。本发明的变体具有seq id no:1-17的多肽的至少20％，例如至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％但小于100％的α-淀粉酶活性。
[0055]
术语“非常高严格条件”意指对于长度为至少100个核苷酸的探针而言，遵循标准dna印迹程序，在42℃，于5x sspe、0.3％sds、200微克/ml剪切并变性的鲑鱼精子dna和50％甲酰胺中预杂交和杂交12至24小时。最后在70℃使用2x ssc、0.2％sds将运载体材料洗涤三次，每次15分钟。
[0056]
术语“非常低严格条件”意指对于长度为至少100个核苷酸的探针而言，遵循标准dna印迹程序，在42℃，于5x sspe、0.3％sds、200微克/ml剪切并变性的鲑鱼精子dna和25％甲酰胺中预杂交和杂交12至24小时。最后在45℃使用2x ssc、0.2％sds将运载体材料洗涤三次，每次15分钟。
[0057]
如本文使用的术语“根据
……
进行编号”是指编号本发明多肽中每个氨基酸残基的方式。即技术人员会知道当，例如，根据seq id no:1对位置202进行编号时，他将知道通过任何其他多肽与seq id no:1的比对，他将能够确定其他多肽中的相应氨基酸残基。本文其他地方已描述了两个或更多个氨基酸序列的比对。
[0058]
变体命名惯例
[0059]
出于本发明的目的，使用在seq id no:1中披露的多肽来确定另一种α-淀粉酶多肽中的相应氨基酸残基。因此，所有提及的位置和具体取代均指seq id no:1中使用的编号。然而，本领域技术人员将认识到，也可以使用在本文披露的任何其他序列的序列来确定
另一种α-淀粉酶多肽中的相应氨基酸残基。将另一种α-淀粉酶的氨基酸序列与seq id no:1中披露的成熟多肽进行比对，并且基于该比对，使用如在emboss包(emboss：欧洲分子生物学开放软件包，rice等人,2000,trends genet.[遗传学趋势]16:276-277)(优选5.0.0版或更新版本)的needle程序中所实施的needleman-wunsch算法(needleman和wunsch,1970,j.mol.biol.[分子生物学杂志]48:443-453)确定与seq id no:1中披露的成熟多肽中的任何氨基酸残基相对应的氨基酸位置编号。所使用的参数是空位开放罚分10、空位延伸罚分0.5、和eblosum62(blosum62的emboss版)取代矩阵。
[0060]
可以通过使用若干计算机程序，使用其相应默认参数比对多个多肽序列来确定在另一种α-淀粉酶中的对应氨基酸残基的鉴定，这些计算机程序包括但不限于muscle(通过对数预期的多序列比较；版本3.5或更新版本；edgar,2004,nucleic acids research[核酸研究]32:1792-1797)，mafft(版本6.857或更新版本；katoh和kuma,2002,nucleic acids research[核酸研究]30:3059-3066；katoh等人,2005,nucleic acids research[核酸研究]33:511-518；katoh和toh,2007,bioinformatics[生物信息学]23:372-374；katoh等人,2009,methods in molecular biology[分子生物学方法]537:39-64；katoh和toh,2010,bioinformatics[生物信息学]26:1899-1900)以及采用clustalw(1.83或更新版本；thompson等人,1994,nucleic acids research[核酸研究]22:4673-4680)的emboss emma。
[0061]
当其他α-淀粉酶与seq id no:1的多肽相背离使得传统的基于序列的比较不能检测其相互关系时(lindahl和elofsson,2000,j.mol.biol.[分子生物学杂志]295:613-615)，可使用其他成对序列比较算法。在基于序列的搜索中较高的敏感度可使用搜索程序来获得，这些搜索程序利用多肽家族的概率表现(谱)来搜索数据库。例如，psi-blast程序通过迭代数据库搜索过程来产生多个谱，并且能够检测远距离同源物(atschul等人,1997,nucleic acids res.[核酸研究]25:3389-3402)。如果多肽的家族或超家族具有在蛋白结构数据库中的一个或多个代表，可以实现甚至更高的敏感度。程序诸如genthreader(jones,1999,j.mol.biol.[分子生物学杂志]287:797-815；mcguffin和jones,2003,bioinformatics[生物信息学]19:874-881)利用来自多种来源(psi-blast、二级结构预测、结构比对谱、以及溶剂化势)的信息作为预测查询序列的结构折叠的神经网络的输入。类似地，gough等人,2000,j.mol.biol.[分子生物学杂志]313:903-919的方法可用于将未知结构的序列与存在于scop数据库中的超家族模型进行比对。这些比对进而可以用于产生多肽的同源性模型，并且使用出于该目的而开发的多种工具可以评估此类模型的准确度。
[0062]
对于已知结构的蛋白质，有几种工具和资源可用于检索并产生结构比对。例如，蛋白质的scop超家族已经在结构上进行比对，并且那些比对是可访问且可下载的。可以使用多种算法如距离比对矩阵(holm和sander,1998,proteins[蛋白质]33:88-96)或组合延伸(shindyalov和bourne,1998,protein engineering[蛋白质工程]11:739-747)比对两种或更多种蛋白质结构，并且这些算法的实施可以另外用于查询具有目的结构的结构数据库，以便发现可能的结构同源物(例如，holm和park,2000,bioinformatics[生物信息学]16:566-567)。
[0063]
在描述本发明的α-淀粉酶变体中，调整以下所述的命名法以方便引用。采用了已接受的iupac单字母或三字母的氨基酸缩写。
[0064]
取代：对于氨基酸取代，使用以下命名法：原始氨基酸、位置、取代的氨基酸。因此，
将在位置226处的例如苏氨酸用丙氨酸取代表示为“thr226ala”或“t226a”。多个突变通过加号(“ ”)分开，例如“gly205arg ser411phe”或“g205r s411f”代表在位置205和位置411处的甘氨酸(g)和丝氨酸(s)分别被精氨酸(r)和苯丙氨酸(f)取代。
[0065]
缺失：对于氨基酸缺失，使用以下命名法：原始氨基酸、位置、
*
。因此，将在位置181处的甘氨酸的缺失指定为“ser181*”或“s181*”。多个缺失通过加号(“ ”)分开，例如，“ser181* thr182*”或“s181* t182*”。
[0066]
插入：对于氨基酸插入，使用以下命名法：原始氨基酸、位置、原始氨基酸、插入的氨基酸。因此，将在位置195处的例如甘氨酸之后插入赖氨酸表示为“gly195glylys”或“g195gk”。多个氨基酸的插入被表示为[原始氨基酸、位置、原始氨基酸、插入的氨基酸#1、插入的氨基酸#2；等]。例如，将在位置195处的甘氨酸之后插入赖氨酸和丙氨酸表示为“gly195glylysala”或“g195gka”。
[0067]
在此类情况下，通过将小写字母添加至在所插入的一个或多个氨基酸残基之前的氨基酸残基的位置编号而对所插入的一个或多个氨基酸残基进行编号。在以上实例中，该序列因此会是：
[0068]
亲本：变体：195195 195a 195bgg-k-a
[0069]
多种改变：包含多个改变的变体由加号(“ ”)分开，例如，“arg170tyr gly195glu”或“r170y g195e”代表在位置170处和位置195处的精氨酸和甘氨酸分别被酪氨酸和谷氨酸取代。
[0070]
不同改变：在可于一个位置处引入不同改变的情况下，不同的改变由逗号分开，例如，“arg170tyr,glu”代表用酪氨酸或谷氨酸取代在位置170处的精氨酸。因此，“tyr167gly,ala arg170gly,ala”表示以下变体：
[0071]“tyr167gly arg170gly”、“tyr167gly arg170ala”、“tyr167ala arg170gly”、和“tyr167ala arg170ala”。
具体实施方式
[0072]
本发明涉及α-淀粉酶变体，该变体在对应于以下位置的一个或多个位置处包含取代：3、5、7、8、16、18、25、26、29、30、35、37、40、41、43、46、50、57、60、68、71、73、74、78、81、84、86、87、90、91、93、97、98、103、105、110、111、113、114、116、117、119、120、121、125、126、128、129、131、132、133、135、137、138、139、140、141、142、143、145、146、147、149、159、161、162、165、167、169、171、176、177、179、180、181、185、186、187、195、196、197、204、206、208、211、216、218、219、225、228、230、231、235、242、243、247、250、251、252、253、254、255、257、259、260、261、262、263、265、272、273、274、279、280、281、283、284、287、292、294、296、298、299、300、303、305、307、310、311、313、314、315、319、320、321、322、323、324、334、337、339、340、342、344、345、346、347、350、359、360、361、362、363、364、368、372、375、380、382、383、384、385、387、388、391、393、395、396、397、398、401、402、403、405、406、407、410、415、416、418、421、422、423、433、434、435、438、439、446、447、449、450、452、455、457、458、460、461、462、465、466、467、469、471、473、475、476、477以及478，使用seq id no:1进行编号；并且其中所
述变体与seq id no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％但小于100％序列同一性，并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中该α-淀粉酶变体相对于所述亲本具有改善的特性。
[0073]
在一方面，本发明涉及α-淀粉酶变体，该变体在对应于以下位置的一个或多个位置处包含取代：3、5、7、8、16、18、25、26、29、30、35、37、40、41、43、46、50、57、60、68、71、73、74、78、81、84、86、87、90、91、93、97、98、103、105、110、111、113、114、116、117、119、120、121、125、126、128、129、131、132、133、135、137、138、139、140、141、142、143、145、146、147、149、159、161、162、165、167、169、171、176、177、179、180、181、185、186、187、195、196、197、204、206、208、211、216、218、219、225、228、230、231、235、242、243、247、250、251、252、253、254、255、257、259、260、261、262、263、265、272、273、274、279、280、281、283、284、287、292、294、296、298、299、300、303、305、307、310、311、313、314、315、319、320、321、322、323、324、334、337、339、340、342、344、345、346、347、350、359、360、361、362、363、364、368、372、375、380、382、383、384、385、387、388、391、393、395、396、397、398、401、402、403、405、406、407、410、415、416、418、421、422、423、433、434、435、438、439、446、447、449、450、452、455、457、458、460、461、462、465、466、467、469、471、473、475、476、477以及478，使用seq id no:1进行编号；并且其中所述变体与seq id no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％但小于100％序列同一性，并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中该α-淀粉酶变体相对于所述亲本具有改善的特性。
[0074]
本发明提供了具有α-淀粉酶活性的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体，该变体在对于以下位置的一个或多个(例如，几个)位置处包含取代：3、5、7、8、16、18、25、26、29、30、35、37、40、41、43、46、50、57、60、68、71、73、74、78、81、84、86、87、90、91、93、97、98、103、105、110、111、113、114、116、117、119、120、121、125、126、128、129、131、132、133、135、137、138、139、140、141、142、143、145、146、147、149、159、161、162、165、167、169、171、176、177、179、180、181、185、186、187、195、196、197、204、206、208、211、216、218、219、225、228、230、231、235、242、243、247、250、251、252、253、254、255、257、259、260、261、262、263、265、272、273、274、279、280、281、283、284、287、292、294、296、298、299、300、303、305、307、310、311、313、314、315、319、320、321、322、323、324、334、337、339、340、342、344、345、346、347、350、359、360、361、362、363、364、368、372、375、380、382、383、384、385、387、388、391、393、395、396、397、398、401、402、403、405、406、407、410、415、416、418、421、422、423、433、434、435、438、439、446、447、449、450、452、455、457、458、460、461、462、465、466、467、469、471、473、475、476、477以及478，使用seq id no:1进行编号，并且该变体具有α-淀粉酶活性并且其中该α-淀粉酶变体相对于所述亲本具有改善的特性。
[0075]
在一个实施例中，该变体与亲本α-淀粉酶的氨基酸序列具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％但小于100％的序列同一性。
[0076]
在另一个实施例中，该变体与seq id no:1具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少
95％，如至少96％、至少97％、至少98％或至少99％但小于100％的序列同一性。
[0077]
在另一个实施例中，该变体与seq id no:2具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，如至少96％、至少97％、至少98％或至少99％但小于100％的序列同一性。
[0078]
在另一个实施例中，该变体与seq id no:3具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，如至少96％、至少97％、至少98％或至少99％但小于100％的序列同一性。
[0079]
在另一个实施例中，该变体与seq id no:4具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，如至少96％、至少97％、至少98％或至少99％但小于100％的序列同一性。
[0080]
在另一个实施例中，该变体与seq id no:5具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，如至少96％、至少97％、至少98％或至少99％但小于100％的序列同一性。
[0081]
在另一个实施例中，该变体与seq id no:6具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，如至少96％、至少97％、至少98％或至少99％但小于100％的序列同一性。
[0082]
在另一个实施例中，该变体与seq id no:7具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，如至少96％、至少97％、至少98％或至少99％但小于100％的序列同一性。
[0083]
在另一个实施例中，该变体与seq id no:8具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，如至少96％、至少97％、至少98％或至少99％但小于100％的序列同一性。
[0084]
在另一个实施例中，该变体与seq id no:9具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，如至少96％、至少97％、至少98％或至少99％但小于100％的序列同一性。
[0085]
在另一个实施例中，该变体与seq id no:10具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，如至少96％、至少97％、至少98％或至少99％但小于100％的序列同一性。
[0086]
在另一个实施例中，该变体与seq id no:12具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，如至少96％、至少97％、至少98％或至少99％但小于100％的序列同一性。
[0087]
在另一个实施例中，该变体与seq id no:13具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，如至少96％、至少97％、至少98％或至少99％但小于100％的序列同一性。
[0088]
在另一个实施例中，该变体与seq id no:14具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，如至少96％、至少97％、至少98％或至少99％但小于100％的序列同一性。
[0089]
在另一个实施例中，该变体与seq id no:15具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少
95％，如至少96％、至少97％、至少98％或至少99％但小于100％的序列同一性。
[0090]
在另一个实施例中，该变体与seq id no:16具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，如至少96％、至少97％、至少98％或至少99％但小于100％的序列同一性。
[0091]
在另一个实施例中，该变体与seq id no:17具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，如至少96％、至少97％、至少98％或至少99％但小于100％的序列同一性。
[0092]
在一方面，在本发明的变体中的取代数目是1-20，例如1-10和1-5，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个取代。
[0093]
在另一方面，变体在对应于以下任一位置的两个或更多个位置处包含取代：3、5、7、8、16、18、25、26、29、30、35、37、40、41、43、46、50、57、60、68、71、73、74、78、81、84、86、87、90、91、93、97、98、103、105、110、111、113、114、116、117、119、120、121、125、126、128、129、131、132、133、135、137、138、139、140、141、142、143、145、146、147、149、159、161、162、165、167、169、171、176、177、179、180、181、185、186、187、195、196、197、204、206、208、211、216、218、219、225、228、230、231、235、242、243、247、250、251、252、253、254、255、257、259、260、261、262、263、265、272、273、274、279、280、281、283、284、287、292、294、296、298、299、300、303、305、307、310、311、313、314、315、319、320、321、322、323、324、334、337、339、340、342、344、345、346、347、350、359、360、361、362、363、364、368、372、375、380、382、383、384、385、387、388、391、393、395、396、397、398、401、402、403、405、406、407、410、415、416、418、421、422、423、433、434、435、438、439、446、447、449、450、452、455、457、458、460、461、462、465、466、467、469、471、473、475、476、477以及478，使用seq id no:1进行编号，并且进一步其中所述变体与seq id no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％但小于100％的序列同一性。
[0094]
在另一方面，变体在对应于以下任一位置的三个或更多个位置处包含取代：3、5、7、8、16、18、25、26、29、30、35、37、40、41、43、46、50、57、60、68、71、73、74、78、81、84、86、87、90、91、93、97、98、103、105、110、111、113、114、116、117、119、120、121、125、126、128、129、131、132、133、135、137、138、139、140、141、142、143、145、146、147、149、159、161、162、165、167、169、171、176、177、179、180、181、185、186、187、195、196、197、204、206、208、211、216、218、219、225、228、230、231、235、242、243、247、250、251、252、253、254、255、257、259、260、261、262、263、265、272、273、274、279、280、281、283、284、287、292、294、296、298、299、300、303、305、307、310、311、313、314、315、319、320、321、322、323、324、334、337、339、340、342、344、345、346、347、350、359、360、361、362、363、364、368、372、375、380、382、383、384、385、387、388、391、393、395、396、397、398、401、402、403、405、406、407、410、415、416、418、421、422、423、433、434、435、438、439、446、447、449、450、452、455、457、458、460、461、462、465、466、467、469、471、473、475、476、477以及478，使用seq id no:1进行编号，并且进一步其中所述变体与seq id no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％但小于100％的序列同一性。
[0095]
在另一方面，变体在对应于以下任一位置的四个或更多个位置处包含取代：3、5、7、8、16、18、25、26、29、30、35、37、40、41、43、46、50、57、60、68、71、73、74、78、81、84、86、87、90、91、93、97、98、103、105、110、111、113、114、116、117、119、120、121、125、126、128、129、131、132、133、135、137、138、139、140、141、142、143、145、146、147、149、159、161、162、165、167、169、171、176、177、179、180、181、185、186、187、195、196、197、204、206、208、211、216、218、219、225、228、230、231、235、242、243、247、250、251、252、253、254、255、257、259、260、261、262、263、265、272、273、274、279、280、281、283、284、287、292、294、296、298、299、300、303、305、307、310、311、313、314、315、319、320、321、322、323、324、334、337、339、340、342、344、345、346、347、350、359、360、361、362、363、364、368、372、375、380、382、383、384、385、387、388、391、393、395、396、397、398、401、402、403、405、406、407、410、415、416、418、421、422、423、433、434、435、438、439、446、447、449、450、452、455、457、458、460、461、462、465、466、467、469、471、473、475、476、477以及478，使用seq id no:1进行编号，并且进一步其中所述变体与seq id no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％但小于100％的序列同一性。
[0096]
在另一方面，变体在对应于以下任一位置的五个或更多个位置处包含取代：3、5、7、8、16、18、25、26、29、30、35、37、40、41、43、46、50、57、60、68、71、73、74、78、81、84、86、87、90、91、93、97、98、103、105、110、111、113、114、116、117、119、120、121、125、126、128、129、131、132、133、135、137、138、139、140、141、142、143、145、146、147、149、159、161、162、165、167、169、171、176、177、179、180、181、185、186、187、195、196、197、204、206、208、211、216、218、219、225、228、230、231、235、242、243、247、250、251、252、253、254、255、257、259、260、261、262、263、265、272、273、274、279、280、281、283、284、287、292、294、296、298、299、300、303、305、307、310、311、313、314、315、319、320、321、322、323、324、334、337、339、340、342、344、345、346、347、350、359、360、361、362、363、364、368、372、375、380、382、383、384、385、387、388、391、393、395、396、397、398、401、402、403、405、406、407、410、415、416、418、421、422、423、433、434、435、438、439、446、447、449、450、452、455、457、458、460、461、462、465、466、467、469、471、473、475、476、477以及478，使用seq id no:1进行编号，并且进一步其中所述变体与seq id no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％但小于100％的序列同一性。
[0097]
在另一方面，变体在对应于以下任一位置的六个或更多个位置处包含取代：3、5、7、8、16、18、25、26、29、30、35、37、40、41、43、46、50、57、60、68、71、73、74、78、81、84、86、87、90、91、93、97、98、103、105、110、111、113、114、116、117、119、120、121、125、126、128、129、131、132、133、135、137、138、139、140、141、142、143、145、146、147、149、159、161、162、165、167、169、171、176、177、179、180、181、185、186、187、195、196、197、204、206、208、211、216、218、219、225、228、230、231、235、242、243、247、250、251、252、253、254、255、257、259、260、261、262、263、265、272、273、274、279、280、281、283、284、287、292、294、296、298、299、300、303、305、307、310、311、313、314、315、319、320、321、322、323、324、334、337、339、340、342、344、345、346、347、350、359、360、361、362、363、364、368、372、375、380、382、383、384、385、
387、388、391、393、395、396、397、398、401、402、403、405、406、407、410、415、416、418、421、422、423、433、434、435、438、439、446、447、449、450、452、455、457、458、460、461、462、465、466、467、469、471、473、475、476、477以及478，使用seq id no:1进行编号，并且进一步其中所述变体与seq id no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％但小于100％的序列同一性。
[0098]
在另一方面，变体在对应于以下任一位置的七个或更多个位置处包含取代：3、5、7、8、16、18、25、26、29、30、35、37、40、41、43、46、50、57、60、68、71、73、74、78、81、84、86、87、90、91、93、97、98、103、105、110、111、113、114、116、117、119、120、121、125、126、128、129、131、132、133、135、137、138、139、140、141、142、143、145、146、147、149、159、161、162、165、167、169、171、176、177、179、180、181、185、186、187、195、196、197、204、206、208、211、216、218、219、225、228、230、231、235、242、243、247、250、251、252、253、254、255、257、259、260、261、262、263、265、272、273、274、279、280、281、283、284、287、292、294、296、298、299、300、303、305、307、310、311、313、314、315、319、320、321、322、323、324、334、337、339、340、342、344、345、346、347、350、359、360、361、362、363、364、368、372、375、380、382、383、384、385、387、388、391、393、395、396、397、398、401、402、403、405、406、407、410、415、416、418、421、422、423、433、434、435、438、439、446、447、449、450、452、455、457、458、460、461、462、465、466、467、469、471、473、475、476、477以及478，使用seq id no:1进行编号，并且进一步其中所述变体与seq id no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％但小于100％的序列同一性。
[0099]
在另一方面，变体在对应于以下任一位置的八个或更多个位置处包含取代：3、5、7、8、16、18、25、26、29、30、35、37、40、41、43、46、50、57、60、68、71、73、74、78、81、84、86、87、90、91、93、97、98、103、105、110、111、113、114、116、117、119、120、121、125、126、128、129、131、132、133、135、137、138、139、140、141、142、143、145、146、147、149、159、161、162、165、167、169、171、176、177、179、180、181、185、186、187、195、196、197、204、206、208、211、216、218、219、225、228、230、231、235、242、243、247、250、251、252、253、254、255、257、259、260、261、262、263、265、272、273、274、279、280、281、283、284、287、292、294、296、298、299、300、303、305、307、310、311、313、314、315、319、320、321、322、323、324、334、337、339、340、342、344、345、346、347、350、359、360、361、362、363、364、368、372、375、380、382、383、384、385、387、388、391、393、395、396、397、398、401、402、403、405、406、407、410、415、416、418、421、422、423、433、434、435、438、439、446、447、449、450、452、455、457、458、460、461、462、465、466、467、469、471、473、475、476、477以及478，使用seq id no:1进行编号，并且进一步其中所述变体与seq id no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％但小于100％的序列同一性。
[0100]
在另一方面，变体在对应于以下任一位置的九个或更多个位置处包含取代：3、5、7、8、16、18、25、26、29、30、35、37、40、41、43、46、50、57、60、68、71、73、74、78、81、84、86、87、90、91、93、97、98、103、105、110、111、113、114、116、117、119、120、121、125、126、128、129、
131、132、133、135、137、138、139、140、141、142、143、145、146、147、149、159、161、162、165、167、169、171、176、177、179、180、181、185、186、187、195、196、197、204、206、208、211、216、218、219、225、228、230、231、235、242、243、247、250、251、252、253、254、255、257、259、260、261、262、263、265、272、273、274、279、280、281、283、284、287、292、294、296、298、299、300、303、305、307、310、311、313、314、315、319、320、321、322、323、324、334、337、339、340、342、344、345、346、347、350、359、360、361、362、363、364、368、372、375、380、382、383、384、385、387、388、391、393、395、396、397、398、401、402、403、405、406、407、410、415、416、418、421、422、423、433、434、435、438、439、446、447、449、450、452、455、457、458、460、461、462、465、466、467、469、471、473、475、476、477以及478，使用seq id no:1进行编号，并且进一步其中所述变体与seq id no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％但小于100％的序列同一性。
[0101]
在另一方面，变体在对应于以下任一位置的十个或更多个位置处包含取代：3、5、7、8、16、18、25、26、29、30、35、37、40、41、43、46、50、57、60、68、71、73、74、78、81、84、86、87、90、91、93、97、98、103、105、110、111、113、114、116、117、119、120、121、125、126、128、129、131、132、133、135、137、138、139、140、141、142、143、145、146、147、149、159、161、162、165、167、169、171、176、177、179、180、181、185、186、187、195、196、197、204、206、208、211、216、218、219、225、228、230、231、235、242、243、247、250、251、252、253、254、255、257、259、260、261、262、263、265、272、273、274、279、280、281、283、284、287、292、294、296、298、299、300、303、305、307、310、311、313、314、315、319、320、321、322、323、324、334、337、339、340、342、344、345、346、347、350、359、360、361、362、363、364、368、372、375、380、382、383、384、385、387、388、391、393、395、396、397、398、401、402、403、405、406、407、410、415、416、418、421、422、423、433、434、435、438、439、446、447、449、450、452、455、457、458、460、461、462、465、466、467、469、471、473、475、476、477以及478，使用seq id no:1进行编号，并且进一步其中所述变体与seq id no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％但小于100％的序列同一性。
[0102]
在另一方面，变体在对应于以下位置的每个位置处包含取代：3、5、7、8、16、18、25、26、29、30、35、37、40、41、43、46、50、57、60、68、71、73、74、78、81、84、86、87、90、91、93、97、98、103、105、110、111、113、114、116、117、119、120、121、125、126、128、129、131、132、133、135、137、138、139、140、141、142、143、145、146、147、149、159、161、162、165、167、169、171、176、177、179、180、181、185、186、187、195、196、197、204、206、208、211、216、218、219、225、228、230、231、235、242、243、247、250、251、252、253、254、255、257、259、260、261、262、263、265、272、273、274、279、280、281、283、284、287、292、294、296、298、299、300、303、305、307、310、311、313、314、315、319、320、321、322、323、324、334、337、339、340、342、344、345、346、347、350、359、360、361、362、363、364、368、372、375、380、382、383、384、385、387、388、391、393、395、396、397、398、401、402、403、405、406、407、410、415、416、418、421、422、423、433、434、435、438、439、446、447、449、450、452、455、457、458、460、461、462、465、466、467、469、471、473、475、476、477以及478，使用seq id no:1进行编号，并且进一步其中所述变体与
seq id no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％但小于100％的序列同一性。
[0103]
在一方面，变体在对应于如下位置的位置处包含以下取代中的一个或多个：n3a、n3c、n3d、n3e、n3f、n3g、n3h、n3l、n3p、n3q、n3s、n3t、n3v、t5e、g7e、g7f、g7h、g7k、g7l、g7p、g7r、g7s、g7t、g7v、g7w、t8s、h16d、h16r、p18d、p18l、p18n、n25t、r26y、d29n、d30f、r35p、r37a、r37n、t40a、t40c、t40d、t40e、t40g、t40h、t40i、t40k、t40n、t40v、t40w、a41c、a41d、a41e、a41h、a41i、a41k、a41n、a41r、a41t、a41v、a41y、w43e、p46a、g50m、g50p、g50q、g57a、g57s、a60e、a60s、a60v、e68f、e68y、q71f、g73d、g73h、g73i、g73l、g73q、g73s、g73t、g73w、t74f、k78s、k78t、t81m、q84i、q84w、q84y、e86k、e86s、s87g、s87l、s87p、h90p、a91q、a91v、a91w、k93v、v97c、v97h、q98e、q98f、q98g、q98i、q98k、q98l、q98m、q98r、q98t、q98y、v103c、v103g、v103s、m105f、g110k、g110r、a111e、a111q、a113t、t114m、t114v、n116c、n116y、v117f、a119h、a119l、a119y、v120e、e121i、n125s、n126i、n128e、q129t、i131y、s132a、s132d、s132h、s132i、s132k、s132l、s132p、s132r、s132t、s132v、s132y、g133e、g133l、g133t、g133v、y135c、y135d、y135e、y135p、i137d、i137n、i137q、i137w、i137y、e138s、e138v、a139l、w140a、w140d、w140m、w140n、w140p、w140s、w140t、w140v、t141g、k142e、k142n、f143h、f143i、f143m、f145g、f145h、f145i、f145l、f145s、p146a、p146h、p146n、g147d、g149f、g149k、w159a、w159e、h161w、f162t、v165p、w167d、w167g、w167p、q169l、q169p、q169v、q169y、r171p、r176e、r176q、r176v、r176y、i177h、i177p、k179a、k179m、k179v、f180d、f180g、r181d、r181e、r181g、r181m、r181y、k185t、k185v、k185w、a186d、w187t、n195y、g196d、n197v、n197y、a204f、a204h、a204l、v206n、m208d、p211c、p211m、e216l、r218q、r219v、t225d、t225f、t225h、t225k、t225l、t225n、t225r、t225y、l228v、l230c、l230f、d231g、d231t、d231v、i235a、k242l、y243d、y243m、y243n、r247g、r247p、r247s、l250s、l250y、t251d、h252p、v253f、v253s、r254d、r254f、r254h、r254p、r254t、r254v、r254w、n255c、n255f、n255p、t257a、t257c、t257d、t257e、t257g、t257p、t257q、t257s、t257w、t257y、k259p、k259v、k259w、k259y、e260v、m261d、m261f、m261p、m261r、m261s、m261w、f262a、f262c、f262e、f262h、f262i、f262k、f262l、f262n、f262p、f262q、f262r、f262s、f262t、f262v、f262w、a263e、a263h、a263w、a265q、l272w、g273q、a274d、l279i、n280p、k281h、k281i、k281s、n283p、w284a、w284d、w284e、w284g、w284i、w284k、w284m、w284n、w284p、w284q、w284s、w284t、w284v、w284y、s287i、s287k、s287l、s287p、s287r、s287t、s287v、s287y、p292l、p292m、p292y、h294n、h294s、n296t、y298d、y298e、n299t、a300g、s303a、s303c、s303d、s303e、s303f、s303g、s303h、s303l、s303m、s303n、s303q、s303t、s303v、s303y、g305e、y307s、a310d、a310n、k311a、k311c、l313q、n314p、n314s、g315e、g315m、g315v、q319c、q319e、k320s、k320w、h321f、h321k、h321l、h321r、h321t、h321v、h321w、p322c、p322e、p322h、p322t、p322y、m323a、m323c、m323d、m323e、m323g、m323h、m323l、m323n、m323p、m323r、m323s、m323t、m323w、m323y、h324a、h324i、h324p、h324t、h324w、h324y、s334v、g337v、l340m、s342a、s342g、s342t、v344a、v344c、v344i、q345n、e346a、w347a、w347e、w347f、w347g、w347h、w347k、w347n、w347p、w347r、p350a、p350c、p350n、p350t、r359c、r359f、r359g、r359m、r359s、r359w、e360d、e360h、
e360p、e360t、e360w、q361d、q361h、q361i、q361k、q361l、q361m、q361n、q361p、q361r、q361s、q361t、q361v、q361w、q361y、g362m、y363a、y363e、y363f、y363g、y363i、y363l、y363q、y363r、y363s、y363t、y363v、y363w、p364c、y368c、y368q、y368r、y368t、y372c、y372g、y372n、y372t、p375q、p375t、p380f、m382i、k383c、k383l、k383p、k383t、a384d、a384n、k385n、k385v、d387c、d387p、d387r、d387w、p388i、e391m、r393k、r393m、n395c、n395d、n395k、n395v、n395w、f396e、f396g、f396t、a397v、y398e、q401h、h402s、d403a、d403e、d403t、f405c、f405n、f405s、f405t、d406v、h407c、h407q、h407t、i410h、i410m、i410r、i410w、r415c、r415l、r415m、r415y、e416d、e416f、e416l、e416n、n418a、n418p、n418v、h421a、h421g、h421l、h421p、h421q、h421y、p422d、p422g、p422i、p422n、p422q、p422s、n423g、n423h、n423i、n423l、n423m、n423p、n423q、n423v、n423w、n423y、g433a、g433n、g433s、p434i、p434l、g435c、g435l、g435m、g435t、g435v、k438a、k438i、k438q、k438s、k438v、w439a、w439d、w439i、w439k、w439l、w439n、w439s、w439t、w439v、w439y、k446a、k446f、a447d、a447y、q449t、v450d、v450n、h452l、t455c、t455m、t455v、n457d、n457e、n457i、n457l、n457v、k458d、k458l、g460m、g460v、t461f、t461i、t461q、t461v、v462c、n465a、n465c、n465e、n465g、n465h、n465l、n465p、n465t、a466f、a466i、a466y、d467i、w469a、w469e、w469h、w469l、w469n、w469q、w469r、w469s、w469y、n471a、n471d、n471m、n471w、s473n、n475a、n475c、n475d、n475e、n475f、n475g、n475h、n475i、n475l、n475m、n475p、n475q、n475s、n475t、n475v、n475w、g476f、g476l、g477a、g477h、g477q、g477s、g477w、s478a、s478f以及s478q，使用seq id no:1进行编号，并且进一步其中所述变体与seq id no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％但小于100％的序列同一性。
[0104]
在一方面，变体在对应于如下位置的位置处包含以下取代中的一个或多个：n3a、n3c、n3d、n3e、n3f、n3g、n3h、n3l、n3p、n3q、n3s、n3t、n3v、t5e、g7e、g7f、g7h、g7k、g7l、g7p、g7r、g7s、g7t、g7v、g7w、t8s、h16d、h16r、p18d、p18l、p18n、n25t、r26y、d29n、d30f、r35p、r37a、r37n、t40a、t40c、t40d、t40e、t40g、t40h、t40i、t40k、t40n、t40v、t40w、a41c、a41d、a41e、a41h、a41i、a41k、a41n、a41r、a41t、a41v、a41y、w43e、p46a、g50m、g50p、g50q、g57a、g57s、a60e、a60s、a60v、e68f、e68y、q71f、g73d、g73h、g73i、g73l、g73q、g73s、g73t、g73w、t74f、k78s、k78t、t81m、q84i、q84w、q84y、e86k、e86s、s87g、s87l、s87p、h90p、a91q、a91v、a91w、k93v、v97c、v97h、q98e、q98f、q98g、q98i、q98k、q98l、q98m、q98r、q98t、q98y、v103c、v103g、v103s、m105f、g110k、g110r、a111e、a111q、a113t、t114m、t114v、n116c、n116y、v117f、a119h、a119l、a119y、v120e、e121i、n125s、n126i、n128e、q129t、i131y、s132a、s132d、s132h、s132i、s132k、s132l、s132p、s132r、s132t、s132v、s132y、g133e、g133l、g133t、g133v、y135c、y135d、y135e、y135p、i137d、i137n、i137q、i137w、i137y、e138s、e138v、a139l、w140a、w140d、w140m、w140n、w140p、w140s、w140t、w140v、t141g、k142e、k142n、f143h、f143i、f143m、f145g、f145h、f145i、f145l、f145s、p146a、p146h、p146n、g147d、g149f、g149k、w159a、w159e、h161w、f162t、v165p、w167d、w167g、w167p、q169l、q169p、q169v、q169y、r171p、r176e、r176q、r176v、r176y、i177h、i177p、k179a、k179m、k179v、f180d、f180g、r181d、r181e、r181g、r181m、r181y、k185t、k185v、k185w、a186d、
w187t、n195y、g196d、n197v、n197y、a204f、a204h、a204l、v206n、m208d、p211c、p211m、e216l、r218q、r219v、t225d、t225f、t225h、t225k、t225l、t225n、t225r、t225y、l228v、l230c、l230f、d231g、d231t、d231v、i235a、k242l、y243d、y243m、y243n、r247g、r247p、r247s、l250s、l250y、t251d、h252p、v253f、v253s、r254d、r254f、r254h、r254p、r254t、r254v、r254w、n255c、n255f、n255p、t257a、t257c、t257d、t257e、t257g、t257p、t257q、t257s、t257w、t257y、k259p、k259v、k259w、k259y、e260v、m261d、m261f、m261p、m261r、m261s、m261w、f262a、f262c、f262e、f262h、f262i、f262k、f262l、f262n、f262p、f262q、f262r、f262s、f262t、f262v、f262w、a263e、a263h、a263w、a265q、l272w、g273q、a274d、l279i、n280p、k281h、k281i、k281s、n283p、w284a、w284d、w284e、w284g、w284i、w284k、w284m、w284n、w284p、w284q、w284s、w284t、w284v、w284y、s287i、s287k、s287l、s287p、s287r、s287t、s287v、s287y、p292l、p292m、p292y、h294n、h294s、n296t、y298d、y298e、n299t、a300g、s303a、s303c、s303d、s303e、s303f、s303g、s303h、s303l、s303m、s303n、s303q、s303t、s303v、s303y、g305e、y307s、a310d、a310n、k311a、k311c、l313q、n314p、n314s、g315e、g315m、g315v、q319c、q319e、k320s、k320w、h321f、h321k、h321l、h321r、h321t、h321v、h321w、p322c、p322e、p322h、p322t、p322y、m323a、m323c、m323d、m323e、m323g、m323h、m323l、m323n、m323p、m323r、m323s、m323t、m323w、m323y、h324a、h324i、h324p、h324t、h324w、h324y、s334v、g337v、l340m、s342a、s342g、s342t、v344a、v344c、v344i、q345n、e346a、w347a、w347e、w347f、w347g、w347h、w347k、w347n、w347p、w347r、p350a、p350c、p350n、p350t、r359c、r359f、r359g、r359m、r359s、r359w、e360d、e360h、e360p、e360t、e360w、q361d、q361h、q361i、q361k、q361l、q361m、q361n、q361p、q361r、q361s、q361t、q361v、q361w、q361y、g362m、y363a、y363e、y363f、y363g、y363i、y363l、y363q、y363r、y363s、y363t、y363v、y363w、p364c、y368c、y368q、y368r、y368t、y372c、y372g、y372n、y372t、p375q、p375t、p380f、m382i、k383c、k383l、k383p、k383t、a384d、a384n、k385n、k385v、d387c、d387p、d387r、d387w、p388i、e391m、r393k、r393m、n395c、n395d、n395k、n395v、n395w、f396e、f396g、f396t、a397v、y398e、q401h、h402s、d403a、d403e、d403t、f405c、f405n、f405s、f405t、d406v、h407c、h407q、h407t、i410h、i410m、i410r、i410w、r415c、r415l、r415m、r415y、e416d、e416f、e416l、e416n、n418a、n418p、n418v、h421a、h421g、h421l、h421p、h421q、h421y、p422d、p422g、p422i、p422n、p422q、p422s、n423g、n423h、n423i、n423l、n423m、n423p、n423q、n423v、n423w、n423y、g433a、g433n、g433s、p434i、p434l、g435c、g435l、g435m、g435t、g435v、k438a、k438i、k438q、k438s、k438v、w439a、w439d、w439i、w439k、w439l、w439n、w439s、w439t、w439v、w439y、k446a、k446f、a447d、a447y、q449t、v450d、v450n、h452l、t455c、t455m、t455v、n457d、n457e、n457i、n457l、n457v、k458d、k458l、g460m、g460v、t461f、t461i、t461q、t461v、v462c、n465a、n465c、n465e、n465g、n465h、n465l、n465p、n465t、a466f、a466i、a466y、d467i、w469a、w469e、w469h、w469l、w469n、w469q、w469r、w469s、w469y、n471a、n471d、n471m、n471w、s473n、n475a、n475c、n475d、n475e、n475f、n475g、n475h、n475i、n475l、n475m、n475p、n475q、n475s、n475t、n475v、n475w、g476f、g476l、g477a、g477h、g477q、g477s、g477w、s478a、s478f以及s478q，使用seq id no:1进行编号，并且其中所述变体与seq id no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17的多肽具有至少60％、至少
65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％但小于100％的序列同一性。
[0105]
在一方面，变体在对应于如下位置的位置处包含以下取代中的一个或多个：n3a、n3c、n3d、n3e、n3f、n3g、n3h、n3l、n3p、n3q、n3s、n3t、n3v、t5e、g7e、g7f、g7h、g7k、g7l、g7p、g7r、g7s、g7t、g7v、g7w、t8s、h16d、h16r、p18d、p18l、p18n、n25t、r26y、d29n、d30f、r35p、r37a、r37n、t40a、t40c、t40d、t40e、t40g、t40h、t40i、t40k、t40n、t40v、t40w、a41c、a41d、a41e、a41h、a41i、a41k、a41n、a41r、a41t、a41v、a41y、w43e、p46a、g50m、g50p、g50q、g57a、g57s、a60e、a60s、a60v、e68f、e68y、q71f、g73d、g73h、g73i、g73l、g73q、g73s、g73t、g73w、t74f、k78s、k78t、t81m、q84i、q84w、q84y、e86k、e86s、s87g、s87l、s87p、h90p、a91q、a91v、a91w、k93v、v97c、v97h、q98e、q98f、q98g、q98i、q98k、q98l、q98m、q98r、q98t、q98y、v103c、v103g、v103s、m105f、g110k、g110r、a111e、a111q、a113t、t114m、t114v、n116c、n116y、v117f、a119h、a119l、a119y、v120e、e121i、n125s、n126i、n128e、q129t、i131y、s132a、s132d、s132h、s132i、s132k、s132l、s132p、s132r、s132t、s132v、s132y、g133e、g133l、g133t、g133v、y135c、y135d、y135e、y135p、i137d、i137n、i137q、i137w、i137y、e138s、e138v、a139l、w140a、w140d、w140m、w140n、w140p、w140s、w140t、w140v、t141g、k142e、k142n、f143h、f143i、f143m、f145g、f145h、f145i、f145l、f145s、p146a、p146h、p146n、g147d、g149f、g149k、w159a、w159e、h161w、f162t、v165p、w167d、w167g、w167p、q169l、q169p、q169v、q169y、r171p、r176e、r176q、r176v、r176y、i177h、i177p、k179a、k179m、k179v、f180d、f180g、r181d、r181e、r181g、r181m、r181y、k185t、k185v、k185w、a186d、w187t、n195y、g196d、n197v、n197y、a204f、a204h、a204l、v206n、m208d、p211c、p211m、e216l、r218q、r219v、t225d、t225f、t225h、t225k、t225l、t225n、t225r、t225y、l228v、l230c、l230f、d231g、d231t、d231v、i235a、k242l、y243d、y243m、y243n、r247g、r247p、r247s、l250s、l250y、t251d、h252p、v253f、v253s、r254d、r254f、r254h、r254p、r254t、r254v、r254w、n255c、n255f、n255p、t257a、t257c、t257d、t257e、t257g、t257p、t257q、t257s、t257w、t257y、k259p、k259v、k259w、k259y、e260v、m261d、m261f、m261p、m261r、m261s、m261w、f262a、f262c、f262e、f262h、f262i、f262k、f262l、f262n、f262p、f262q、f262r、f262s、f262t、f262v、f262w、a263e、a263h、a263w、a265q、l272w、g273q、a274d、l279i、n280p、k281h、k281i、k281s、n283p、w284a、w284d、w284e、w284g、w284i、w284k、w284m、w284n、w284p、w284q、w284s、w284t、w284v、w284y、s287i、s287k、s287l、s287p、s287r、s287t、s287v、s287y、p292l、p292m、p292y、h294n、h294s、n296t、y298d、y298e、n299t、a300g、s303a、s303c、s303d、s303e、s303f、s303g、s303h、s303l、s303m、s303n、s303q、s303t、s303v、s303y、g305e、y307s、a310d、a310n、k311a、k311c、l313q、n314p、n314s、g315e、g315m、g315v、q319c、q319e、k320s、k320w、h321f、h321k、h321l、h321r、h321t、h321v、h321w、p322c、p322e、p322h、p322t、p322y、m323a、m323c、m323d、m323e、m323g、m323h、m323l、m323n、m323p、m323r、m323s、m323t、m323w、m323y、h324a、h324i、h324p、h324t、h324w、h324y、s334v、g337v、l340m、s342a、s342g、s342t、v344a、v344c、v344i、q345n、e346a、w347a、w347e、w347f、w347g、w347h、w347k、w347n、w347p、w347r、p350a、p350c、p350n、p350t、r359c、r359f、r359g、r359m、r359s、r359w、e360d、e360h、e360p、e360t、e360w、q361d、q361h、q361i、q361k、q361l、q361m、q361n、q361p、q361r、
q361s、q361t、q361v、q361w、q361y、g362m、y363a、y363e、y363f、y363g、y363i、y363l、y363q、y363r、y363s、y363t、y363v、y363w、p364c、y368c、y368q、y368r、y368t、y372c、y372g、y372n、y372t、p375q、p375t、p380f、m382i、k383c、k383l、k383p、k383t、a384d、a384n、k385n、k385v、d387c、d387p、d387r、d387w、p388i、e391m、r393k、r393m、n395c、n395d、n395k、n395v、n395w、f396e、f396g、f396t、a397v、y398e、q401h、h402s、d403a、d403e、d403t、f405c、f405n、f405s、f405t、d406v、h407c、h407q、h407t、i410h、i410m、i410r、i410w、r415c、r415l、r415m、r415y、e416d、e416f、e416l、e416n、n418a、n418p、n418v、h421a、h421g、h421l、h421p、h421q、h421y、p422d、p422g、p422i、p422n、p422q、p422s、n423g、n423h、n423i、n423l、n423m、n423p、n423q、n423v、n423w、n423y、g433a、g433n、g433s、p434i、p434l、g435c、g435l、g435m、g435t、g435v、k438a、k438i、k438q、k438s、k438v、w439a、w439d、w439i、w439k、w439l、w439n、w439s、w439t、w439v、w439y、k446a、k446f、a447d、a447y、q449t、v450d、v450n、h452l、t455c、t455m、t455v、n457d、n457e、n457i、n457l、n457v、k458d、k458l、g460m、g460v、t461f、t461i、t461q、t461v、v462c、n465a、n465c、n465e、n465g、n465h、n465l、n465p、n465t、a466f、a466i、a466y、d467i、w469a、w469e、w469h、w469l、w469n、w469q、w469r、w469s、w469y、n471a、n471d、n471m、n471w、s473n、n475a、n475c、n475d、n475e、n475f、n475g、n475h、n475i、n475l、n475m、n475p、n475q、n475s、n475t、n475v、n475w、g476f、g476l、g477a、g477h、g477q、g477s、g477w、s478a、s478f以及s478q，使用seq id no:1进行编号，并且其中所述变体与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％但小于100％的序列同一性。
[0106]
在一方面，变体在对应于如下位置的位置处包含以下取代中的一个或多个：n3a、n3c、n3d、n3e、n3f、n3g、n3h、n3l、n3p、n3q、n3s、n3t、n3v、t5e、g7e、g7f、g7h、g7k、g7l、g7p、g7r、g7s、g7t、g7v、g7w、t8s、h16d、h16r、p18d、p18l、p18n、n25t、r26y、d29n、d30f、r35p、r37a、r37n、t40a、t40c、t40d、t40e、t40g、t40h、t40i、t40k、t40n、t40v、t40w、a41c、a41d、a41e、a41h、a41i、a41k、a41n、a41r、a41t、a41v、a41y、w43e、p46a、g50m、g50p、g50q、g57a、g57s、a60e、a60s、a60v、e68f、e68y、q71f、g73d、g73h、g73i、g73l、g73q、g73s、g73t、g73w、t74f、k78s、k78t、t81m、q84i、q84w、q84y、e86k、e86s、s87g、s87l、s87p、h90p、a91q、a91v、a91w、k93v、v97c、v97h、q98e、q98f、q98g、q98i、q98k、q98l、q98m、q98r、q98t、q98y、v103c、v103g、v103s、m105f、g110k、g110r、a111e、a111q、a113t、t114m、t114v、n116c、n116y、v117f、a119h、a119l、a119y、v120e、e121i、n125s、n126i、n128e、q129t、i131y、s132a、s132d、s132h、s132i、s132k、s132l、s132p、s132r、s132t、s132v、s132y、g133e、g133l、g133t、g133v、y135c、y135d、y135e、y135p、i137d、i137n、i137q、i137w、i137y、e138s、e138v、a139l、w140a、w140d、w140m、w140n、w140p、w140s、w140t、w140v、t141g、k142e、k142n、f143h、f143i、f143m、f145g、f145h、f145i、f145l、f145s、p146a、p146h、p146n、g147d、g149f、g149k、w159a、w159e、h161w、f162t、v165p、w167d、w167g、w167p、q169l、q169p、q169v、q169y、r171p、r176e、r176q、r176v、r176y、i177h、i177p、k179a、k179m、k179v、f180d、f180g、r181d、r181e、r181g、r181m、r181y、k185t、k185v、k185w、a186d、w187t、n195y、g196d、n197v、n197y、a204f、a204h、a204l、v206n、m208d、p211c、p211m、e216l、r218q、r219v、t225d、t225f、t225h、t225k、t225l、t225n、t225r、t225y、l228v、
l230c、l230f、d231g、d231t、d231v、i235a、k242l、y243d、y243m、y243n、r247g、r247p、r247s、l250s、l250y、t251d、h252p、v253f、v253s、r254d、r254f、r254h、r254p、r254t、r254v、r254w、n255c、n255f、n255p、t257a、t257c、t257d、t257e、t257g、t257p、t257q、t257s、t257w、t257y、k259p、k259v、k259w、k259y、e260v、m261d、m261f、m261p、m261r、m261s、m261w、f262a、f262c、f262e、f262h、f262i、f262k、f262l、f262n、f262p、f262q、f262r、f262s、f262t、f262v、f262w、a263e、a263h、a263w、a265q、l272w、g273q、a274d、l279i、n280p、k281h、k281i、k281s、n283p、w284a、w284d、w284e、w284g、w284i、w284k、w284m、w284n、w284p、w284q、w284s、w284t、w284v、w284y、s287i、s287k、s287l、s287p、s287r、s287t、s287v、s287y、p292l、p292m、p292y、h294n、h294s、n296t、y298d、y298e、n299t、a300g、s303a、s303c、s303d、s303e、s303f、s303g、s303h、s303l、s303m、s303n、s303q、s303t、s303v、s303y、g305e、y307s、a310d、a310n、k311a、k311c、l313q、n314p、n314s、g315e、g315m、g315v、q319c、q319e、k320s、k320w、h321f、h321k、h321l、h321r、h321t、h321v、h321w、p322c、p322e、p322h、p322t、p322y、m323a、m323c、m323d、m323e、m323g、m323h、m323l、m323n、m323p、m323r、m323s、m323t、m323w、m323y、h324a、h324i、h324p、h324t、h324w、h324y、s334v、g337v、l340m、s342a、s342g、s342t、v344a、v344c、v344i、q345n、e346a、w347a、w347e、w347f、w347g、w347h、w347k、w347n、w347p、w347r、p350a、p350c、p350n、p350t、r359c、r359f、r359g、r359m、r359s、r359w、e360d、e360h、e360p、e360t、e360w、q361d、q361h、q361i、q361k、q361l、q361m、q361n、q361p、q361r、q361s、q361t、q361v、q361w、q361y、g362m、y363a、y363e、y363f、y363g、y363i、y363l、y363q、y363r、y363s、y363t、y363v、y363w、p364c、y368c、y368q、y368r、y368t、y372c、y372g、y372n、y372t、p375q、p375t、p380f、m382i、k383c、k383l、k383p、k383t、a384d、a384n、k385n、k385v、d387c、d387p、d387r、d387w、p388i、e391m、r393k、r393m、n395c、n395d、n395k、n395v、n395w、f396e、f396g、f396t、a397v、y398e、q401h、h402s、d403a、d403e、d403t、f405c、f405n、f405s、f405t、d406v、h407c、h407q、h407t、i410h、i410m、i410r、i410w、r415c、r415l、r415m、r415y、e416d、e416f、e416l、e416n、n418a、n418p、n418v、h421a、h421g、h421l、h421p、h421q、h421y、p422d、p422g、p422i、p422n、p422q、p422s、n423g、n423h、n423i、n423l、n423m、n423p、n423q、n423v、n423w、n423y、g433a、g433n、g433s、p434i、p434l、g435c、g435l、g435m、g435t、g435v、k438a、k438i、k438q、k438s、k438v、w439a、w439d、w439i、w439k、w439l、w439n、w439s、w439t、w439v、w439y、k446a、k446f、a447d、a447y、q449t、v450d、v450n、h452l、t455c、t455m、t455v、n457d、n457e、n457i、n457l、n457v、k458d、k458l、g460m、g460v、t461f、t461i、t461q、t461v、v462c、n465a、n465c、n465e、n465g、n465h、n465l、n465p、n465t、a466f、a466i、a466y、d467i、w469a、w469e、w469h、w469l、w469n、w469q、w469r、w469s、w469y、n471a、n471d、n471m、n471w、s473n、n475a、n475c、n475d、n475e、n475f、n475g、n475h、n475i、n475l、n475m、n475p、n475q、n475s、n475t、n475v、n475w、g476f、g476l、g477a、g477h、g477q、g477s、g477w、s478a、s478f以及s478q，使用seq id no:1进行编号，并且其中所述变体与seq id no:2的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％但小于100％的序列同一性。
[0107]
在一方面，变体在对应于如下位置的位置处包含以下取代中的一个或多个：n3a、
n3c、n3d、n3e、n3f、n3g、n3h、n3l、n3p、n3q、n3s、n3t、n3v、t5e、g7e、g7f、g7h、g7k、g7l、g7p、g7r、g7s、g7t、g7v、g7w、t8s、h16d、h16r、p18d、p18l、p18n、n25t、r26y、d29n、d30f、r35p、r37a、r37n、t40a、t40c、t40d、t40e、t40g、t40h、t40i、t40k、t40n、t40v、t40w、a41c、a41d、a41e、a41h、a41i、a41k、a41n、a41r、a41t、a41v、a41y、w43e、p46a、g50m、g50p、g50q、g57a、g57s、a60e、a60s、a60v、e68f、e68y、q71f、g73d、g73h、g73i、g73l、g73q、g73s、g73t、g73w、t74f、k78s、k78t、t81m、q84i、q84w、q84y、e86k、e86s、s87g、s87l、s87p、h90p、a91q、a91v、a91w、k93v、v97c、v97h、q98e、q98f、q98g、q98i、q98k、q98l、q98m、q98r、q98t、q98y、v103c、v103g、v103s、m105f、g110k、g110r、a111e、a111q、a113t、t114m、t114v、n116c、n116y、v117f、a119h、a119l、a119y、v120e、e121i、n125s、n126i、n128e、q129t、i131y、s132a、s132d、s132h、s132i、s132k、s132l、s132p、s132r、s132t、s132v、s132y、g133e、g133l、g133t、g133v、y135c、y135d、y135e、y135p、i137d、i137n、i137q、i137w、i137y、e138s、e138v、a139l、w140a、w140d、w140m、w140n、w140p、w140s、w140t、w140v、t141g、k142e、k142n、f143h、f143i、f143m、f145g、f145h、f145i、f145l、f145s、p146a、p146h、p146n、g147d、g149f、g149k、w159a、w159e、h161w、f162t、v165p、w167d、w167g、w167p、q169l、q169p、q169v、q169y、r171p、r176e、r176q、r176v、r176y、i177h、i177p、k179a、k179m、k179v、f180d、f180g、r181d、r181e、r181g、r181m、r181y、k185t、k185v、k185w、a186d、w187t、n195y、g196d、n197v、n197y、a204f、a204h、a204l、v206n、m208d、p211c、p211m、e216l、r218q、r219v、t225d、t225f、t225h、t225k、t225l、t225n、t225r、t225y、l228v、l230c、l230f、d231g、d231t、d231v、i235a、k242l、y243d、y243m、y243n、r247g、r247p、r247s、l250s、l250y、t251d、h252p、v253f、v253s、r254d、r254f、r254h、r254p、r254t、r254v、r254w、n255c、n255f、n255p、t257a、t257c、t257d、t257e、t257g、t257p、t257q、t257s、t257w、t257y、k259p、k259v、k259w、k259y、e260v、m261d、m261f、m261p、m261r、m261s、m261w、f262a、f262c、f262e、f262h、f262i、f262k、f262l、f262n、f262p、f262q、f262r、f262s、f262t、f262v、f262w、a263e、a263h、a263w、a265q、l272w、g273q、a274d、l279i、n280p、k281h、k281i、k281s、n283p、w284a、w284d、w284e、w284g、w284i、w284k、w284m、w284n、w284p、w284q、w284s、w284t、w284v、w284y、s287i、s287k、s287l、s287p、s287r、s287t、s287v、s287y、p292l、p292m、p292y、h294n、h294s、n296t、y298d、y298e、n299t、a300g、s303a、s303c、s303d、s303e、s303f、s303g、s303h、s303l、s303m、s303n、s303q、s303t、s303v、s303y、g305e、y307s、a310d、a310n、k311a、k311c、l313q、n314p、n314s、g315e、g315m、g315v、q319c、q319e、k320s、k320w、h321f、h321k、h321l、h321r、h321t、h321v、h321w、p322c、p322e、p322h、p322t、p322y、m323a、m323c、m323d、m323e、m323g、m323h、m323l、m323n、m323p、m323r、m323s、m323t、m323w、m323y、h324a、h324i、h324p、h324t、h324w、h324y、s334v、g337v、l340m、s342a、s342g、s342t、v344a、v344c、v344i、q345n、e346a、w347a、w347e、w347f、w347g、w347h、w347k、w347n、w347p、w347r、p350a、p350c、p350n、p350t、r359c、r359f、r359g、r359m、r359s、r359w、e360d、e360h、e360p、e360t、e360w、q361d、q361h、q361i、q361k、q361l、q361m、q361n、q361p、q361r、q361s、q361t、q361v、q361w、q361y、g362m、y363a、y363e、y363f、y363g、y363i、y363l、y363q、y363r、y363s、y363t、y363v、y363w、p364c、y368c、y368q、y368r、y368t、y372c、y372g、y372n、y372t、p375q、p375t、p380f、m382i、k383c、k383l、k383p、k383t、a384d、
a384n、k385n、k385v、d387c、d387p、d387r、d387w、p388i、e391m、r393k、r393m、n395c、n395d、n395k、n395v、n395w、f396e、f396g、f396t、a397v、y398e、q401h、h402s、d403a、d403e、d403t、f405c、f405n、f405s、f405t、d406v、h407c、h407q、h407t、i410h、i410m、i410r、i410w、r415c、r415l、r415m、r415y、e416d、e416f、e416l、e416n、n418a、n418p、n418v、h421a、h421g、h421l、h421p、h421q、h421y、p422d、p422g、p422i、p422n、p422q、p422s、n423g、n423h、n423i、n423l、n423m、n423p、n423q、n423v、n423w、n423y、g433a、g433n、g433s、p434i、p434l、g435c、g435l、g435m、g435t、g435v、k438a、k438i、k438q、k438s、k438v、w439a、w439d、w439i、w439k、w439l、w439n、w439s、w439t、w439v、w439y、k446a、k446f、a447d、a447y、q449t、v450d、v450n、h452l、t455c、t455m、t455v、n457d、n457e、n457i、n457l、n457v、k458d、k458l、g460m、g460v、t461f、t461i、t461q、t461v、v462c、n465a、n465c、n465e、n465g、n465h、n465l、n465p、n465t、a466f、a466i、a466y、d467i、w469a、w469e、w469h、w469l、w469n、w469q、w469r、w469s、w469y、n471a、n471d、n471m、n471w、s473n、n475a、n475c、n475d、n475e、n475f、n475g、n475h、n475i、n475l、n475m、n475p、n475q、n475s、n475t、n475v、n475w、g476f、g476l、g477a、g477h、g477q、g477s、g477w、s478a、s478f以及s478q，使用seq id no:1进行编号，并且其中所述变体与seq id no:3的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％但小于100％的序列同一性。
[0108]
在一方面，变体在对应于如下位置的位置处包含以下取代中的一个或多个：n3a、n3c、n3d、n3e、n3f、n3g、n3h、n3l、n3p、n3q、n3s、n3t、n3v、t5e、g7e、g7f、g7h、g7k、g7l、g7p、g7r、g7s、g7t、g7v、g7w、t8s、h16d、h16r、p18d、p18l、p18n、n25t、r26y、d29n、d30f、r35p、r37a、r37n、t40a、t40c、t40d、t40e、t40g、t40h、t40i、t40k、t40n、t40v、t40w、a41c、a41d、a41e、a41h、a41i、a41k、a41n、a41r、a41t、a41v、a41y、w43e、p46a、g50m、g50p、g50q、g57a、g57s、a60e、a60s、a60v、e68f、e68y、q71f、g73d、g73h、g73i、g73l、g73q、g73s、g73t、g73w、t74f、k78s、k78t、t81m、q84i、q84w、q84y、e86k、e86s、s87g、s87l、s87p、h90p、a91q、a91v、a91w、k93v、v97c、v97h、q98e、q98f、q98g、q98i、q98k、q98l、q98m、q98r、q98t、q98y、v103c、v103g、v103s、m105f、g110k、g110r、a111e、a111q、a113t、t114m、t114v、n116c、n116y、v117f、a119h、a119l、a119y、v120e、e121i、n125s、n126i、n128e、q129t、i131y、s132a、s132d、s132h、s132i、s132k、s132l、s132p、s132r、s132t、s132v、s132y、g133e、g133l、g133t、g133v、y135c、y135d、y135e、y135p、i137d、i137n、i137q、i137w、i137y、e138s、e138v、a139l、w140a、w140d、w140m、w140n、w140p、w140s、w140t、w140v、t141g、k142e、k142n、f143h、f143i、f143m、f145g、f145h、f145i、f145l、f145s、p146a、p146h、p146n、g147d、g149f、g149k、w159a、w159e、h161w、f162t、v165p、w167d、w167g、w167p、q169l、q169p、q169v、q169y、r171p、r176e、r176q、r176v、r176y、i177h、i177p、k179a、k179m、k179v、f180d、f180g、r181d、r181e、r181g、r181m、r181y、k185t、k185v、k185w、a186d、w187t、n195y、g196d、n197v、n197y、a204f、a204h、a204l、v206n、m208d、p211c、p211m、e216l、r218q、r219v、t225d、t225f、t225h、t225k、t225l、t225n、t225r、t225y、l228v、l230c、l230f、d231g、d231t、d231v、i235a、k242l、y243d、y243m、y243n、r247g、r247p、r247s、l250s、l250y、t251d、h252p、v253f、v253s、r254d、r254f、r254h、r254p、r254t、r254v、r254w、n255c、n255f、n255p、t257a、t257c、t257d、t257e、t257g、t257p、t257q、
t257s、t257w、t257y、k259p、k259v、k259w、k259y、e260v、m261d、m261f、m261p、m261r、m261s、m261w、f262a、f262c、f262e、f262h、f262i、f262k、f262l、f262n、f262p、f262q、f262r、f262s、f262t、f262v、f262w、a263e、a263h、a263w、a265q、l272w、g273q、a274d、l279i、n280p、k281h、k281i、k281s、n283p、w284a、w284d、w284e、w284g、w284i、w284k、w284m、w284n、w284p、w284q、w284s、w284t、w284v、w284y、s287i、s287k、s287l、s287p、s287r、s287t、s287v、s287y、p292l、p292m、p292y、h294n、h294s、n296t、y298d、y298e、n299t、a300g、s303a、s303c、s303d、s303e、s303f、s303g、s303h、s303l、s303m、s303n、s303q、s303t、s303v、s303y、g305e、y307s、a310d、a310n、k311a、k311c、l313q、n314p、n314s、g315e、g315m、g315v、q319c、q319e、k320s、k320w、h321f、h321k、h321l、h321r、h321t、h321v、h321w、p322c、p322e、p322h、p322t、p322y、m323a、m323c、m323d、m323e、m323g、m323h、m323l、m323n、m323p、m323r、m323s、m323t、m323w、m323y、h324a、h324i、h324p、h324t、h324w、h324y、s334v、g337v、l340m、s342a、s342g、s342t、v344a、v344c、v344i、q345n、e346a、w347a、w347e、w347f、w347g、w347h、w347k、w347n、w347p、w347r、p350a、p350c、p350n、p350t、r359c、r359f、r359g、r359m、r359s、r359w、e360d、e360h、e360p、e360t、e360w、q361d、q361h、q361i、q361k、q361l、q361m、q361n、q361p、q361r、q361s、q361t、q361v、q361w、q361y、g362m、y363a、y363e、y363f、y363g、y363i、y363l、y363q、y363r、y363s、y363t、y363v、y363w、p364c、y368c、y368q、y368r、y368t、y372c、y372g、y372n、y372t、p375q、p375t、p380f、m382i、k383c、k383l、k383p、k383t、a384d、a384n、k385n、k385v、d387c、d387p、d387r、d387w、p388i、e391m、r393k、r393m、n395c、n395d、n395k、n395v、n395w、f396e、f396g、f396t、a397v、y398e、q401h、h402s、d403a、d403e、d403t、f405c、f405n、f405s、f405t、d406v、h407c、h407q、h407t、i410h、i410m、i410r、i410w、r415c、r415l、r415m、r415y、e416d、e416f、e416l、e416n、n418a、n418p、n418v、h421a、h421g、h421l、h421p、h421q、h421y、p422d、p422g、p422i、p422n、p422q、p422s、n423g、n423h、n423i、n423l、n423m、n423p、n423q、n423v、n423w、n423y、g433a、g433n、g433s、p434i、p434l、g435c、g435l、g435m、g435t、g435v、k438a、k438i、k438q、k438s、k438v、w439a、w439d、w439i、w439k、w439l、w439n、w439s、w439t、w439v、w439y、k446a、k446f、a447d、a447y、q449t、v450d、v450n、h452l、t455c、t455m、t455v、n457d、n457e、n457i、n457l、n457v、k458d、k458l、g460m、g460v、t461f、t461i、t461q、t461v、v462c、n465a、n465c、n465e、n465g、n465h、n465l、n465p、n465t、a466f、a466i、a466y、d467i、w469a、w469e、w469h、w469l、w469n、w469q、w469r、w469s、w469y、n471a、n471d、n471m、n471w、s473n、n475a、n475c、n475d、n475e、n475f、n475g、n475h、n475i、n475l、n475m、n475p、n475q、n475s、n475t、n475v、n475w、g476f、g476l、g477a、g477h、g477q、g477s、g477w、s478a、s478f以及s478q，使用seq id no:1进行编号，并且其中所述变体与seq id no:4的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％但小于100％的序列同一性。
[0109]
在一方面，变体在对应于如下位置的位置处包含以下取代中的一个或多个：n3a、n3c、n3d、n3e、n3f、n3g、n3h、n3l、n3p、n3q、n3s、n3t、n3v、t5e、g7e、g7f、g7h、g7k、g7l、g7p、g7r、g7s、g7t、g7v、g7w、t8s、h16d、h16r、p18d、p18l、p18n、n25t、r26y、d29n、d30f、r35p、r37a、r37n、t40a、t40c、t40d、t40e、t40g、t40h、t40i、t40k、t40n、t40v、t40w、a41c、a41d、
a41e、a41h、a41i、a41k、a41n、a41r、a41t、a41v、a41y、w43e、p46a、g50m、g50p、g50q、g57a、g57s、a60e、a60s、a60v、e68f、e68y、q71f、g73d、g73h、g73i、g73l、g73q、g73s、g73t、g73w、t74f、k78s、k78t、t81m、q84i、q84w、q84y、e86k、e86s、s87g、s87l、s87p、h90p、a91q、a91v、a91w、k93v、v97c、v97h、q98e、q98f、q98g、q98i、q98k、q98l、q98m、q98r、q98t、q98y、v103c、v103g、v103s、m105f、g110k、g110r、a111e、a111q、a113t、t114m、t114v、n116c、n116y、v117f、a119h、a119l、a119y、v120e、e121i、n125s、n126i、n128e、q129t、i131y、s132a、s132d、s132h、s132i、s132k、s132l、s132p、s132r、s132t、s132v、s132y、g133e、g133l、g133t、g133v、y135c、y135d、y135e、y135p、i137d、i137n、i137q、i137w、i137y、e138s、e138v、a139l、w140a、w140d、w140m、w140n、w140p、w140s、w140t、w140v、t141g、k142e、k142n、f143h、f143i、f143m、f145g、f145h、f145i、f145l、f145s、p146a、p146h、p146n、g147d、g149f、g149k、w159a、w159e、h161w、f162t、v165p、w167d、w167g、w167p、q169l、q169p、q169v、q169y、r171p、r176e、r176q、r176v、r176y、i177h、i177p、k179a、k179m、k179v、f180d、f180g、r181d、r181e、r181g、r181m、r181y、k185t、k185v、k185w、a186d、w187t、n195y、g196d、n197v、n197y、a204f、a204h、a204l、v206n、m208d、p211c、p211m、e216l、r218q、r219v、t225d、t225f、t225h、t225k、t225l、t225n、t225r、t225y、l228v、l230c、l230f、d231g、d231t、d231v、i235a、k242l、y243d、y243m、y243n、r247g、r247p、r247s、l250s、l250y、t251d、h252p、v253f、v253s、r254d、r254f、r254h、r254p、r254t、r254v、r254w、n255c、n255f、n255p、t257a、t257c、t257d、t257e、t257g、t257p、t257q、t257s、t257w、t257y、k259p、k259v、k259w、k259y、e260v、m261d、m261f、m261p、m261r、m261s、m261w、f262a、f262c、f262e、f262h、f262i、f262k、f262l、f262n、f262p、f262q、f262r、f262s、f262t、f262v、f262w、a263e、a263h、a263w、a265q、l272w、g273q、a274d、l279i、n280p、k281h、k281i、k281s、n283p、w284a、w284d、w284e、w284g、w284i、w284k、w284m、w284n、w284p、w284q、w284s、w284t、w284v、w284y、s287i、s287k、s287l、s287p、s287r、s287t、s287v、s287y、p292l、p292m、p292y、h294n、h294s、n296t、y298d、y298e、n299t、a300g、s303a、s303c、s303d、s303e、s303f、s303g、s303h、s303l、s303m、s303n、s303q、s303t、s303v、s303y、g305e、y307s、a310d、a310n、k311a、k311c、l313q、n314p、n314s、g315e、g315m、g315v、q319c、q319e、k320s、k320w、h321f、h321k、h321l、h321r、h321t、h321v、h321w、p322c、p322e、p322h、p322t、p322y、m323a、m323c、m323d、m323e、m323g、m323h、m323l、m323n、m323p、m323r、m323s、m323t、m323w、m323y、h324a、h324i、h324p、h324t、h324w、h324y、s334v、g337v、l340m、s342a、s342g、s342t、v344a、v344c、v344i、q345n、e346a、w347a、w347e、w347f、w347g、w347h、w347k、w347n、w347p、w347r、p350a、p350c、p350n、p350t、r359c、r359f、r359g、r359m、r359s、r359w、e360d、e360h、e360p、e360t、e360w、q361d、q361h、q361i、q361k、q361l、q361m、q361n、q361p、q361r、q361s、q361t、q361v、q361w、q361y、g362m、y363a、y363e、y363f、y363g、y363i、y363l、y363q、y363r、y363s、y363t、y363v、y363w、p364c、y368c、y368q、y368r、y368t、y372c、y372g、y372n、y372t、p375q、p375t、p380f、m382i、k383c、k383l、k383p、k383t、a384d、a384n、k385n、k385v、d387c、d387p、d387r、d387w、p388i、e391m、r393k、r393m、n395c、n395d、n395k、n395v、n395w、f396e、f396g、f396t、a397v、y398e、q401h、h402s、d403a、d403e、d403t、f405c、f405n、f405s、f405t、d406v、h407c、h407q、h407t、i410h、i410m、
i410r、i410w、r415c、r415l、r415m、r415y、e416d、e416f、e416l、e416n、n418a、n418p、n418v、h421a、h421g、h421l、h421p、h421q、h421y、p422d、p422g、p422i、p422n、p422q、p422s、n423g、n423h、n423i、n423l、n423m、n423p、n423q、n423v、n423w、n423y、g433a、g433n、g433s、p434i、p434l、g435c、g435l、g435m、g435t、g435v、k438a、k438i、k438q、k438s、k438v、w439a、w439d、w439i、w439k、w439l、w439n、w439s、w439t、w439v、w439y、k446a、k446f、a447d、a447y、q449t、v450d、v450n、h452l、t455c、t455m、t455v、n457d、n457e、n457i、n457l、n457v、k458d、k458l、g460m、g460v、t461f、t461i、t461q、t461v、v462c、n465a、n465c、n465e、n465g、n465h、n465l、n465p、n465t、a466f、a466i、a466y、d467i、w469a、w469e、w469h、w469l、w469n、w469q、w469r、w469s、w469y、n471a、n471d、n471m、n471w、s473n、n475a、n475c、n475d、n475e、n475f、n475g、n475h、n475i、n475l、n475m、n475p、n475q、n475s、n475t、n475v、n475w、g476f、g476l、g477a、g477h、g477q、g477s、g477w、s478a、s478f以及s478q，使用seq id no:1进行编号，并且其中所述变体与seq id no:5的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％但小于100％的序列同一性。
[0110]
在一方面，变体在对应于如下位置的位置处包含以下取代中的一个或多个：n3a、n3c、n3d、n3e、n3f、n3g、n3h、n3l、n3p、n3q、n3s、n3t、n3v、t5e、g7e、g7f、g7h、g7k、g7l、g7p、g7r、g7s、g7t、g7v、g7w、t8s、h16d、h16r、p18d、p18l、p18n、n25t、r26y、d29n、d30f、r35p、r37a、r37n、t40a、t40c、t40d、t40e、t40g、t40h、t40i、t40k、t40n、t40v、t40w、a41c、a41d、a41e、a41h、a41i、a41k、a41n、a41r、a41t、a41v、a41y、w43e、p46a、g50m、g50p、g50q、g57a、g57s、a60e、a60s、a60v、e68f、e68y、q71f、g73d、g73h、g73i、g73l、g73q、g73s、g73t、g73w、t74f、k78s、k78t、t81m、q84i、q84w、q84y、e86k、e86s、s87g、s87l、s87p、h90p、a91q、a91v、a91w、k93v、v97c、v97h、q98e、q98f、q98g、q98i、q98k、q98l、q98m、q98r、q98t、q98y、v103c、v103g、v103s、m105f、g110k、g110r、a111e、a111q、a113t、t114m、t114v、n116c、n116y、v117f、a119h、a119l、a119y、v120e、e121i、n125s、n126i、n128e、q129t、i131y、s132a、s132d、s132h、s132i、s132k、s132l、s132p、s132r、s132t、s132v、s132y、g133e、g133l、g133t、g133v、y135c、y135d、y135e、y135p、i137d、i137n、i137q、i137w、i137y、e138s、e138v、a139l、w140a、w140d、w140m、w140n、w140p、w140s、w140t、w140v、t141g、k142e、k142n、f143h、f143i、f143m、f145g、f145h、f145i、f145l、f145s、p146a、p146h、p146n、g147d、g149f、g149k、w159a、w159e、h161w、f162t、v165p、w167d、w167g、w167p、q169l、q169p、q169v、q169y、r171p、r176e、r176q、r176v、r176y、i177h、i177p、k179a、k179m、k179v、f180d、f180g、r181d、r181e、r181g、r181m、r181y、k185t、k185v、k185w、a186d、w187t、n195y、g196d、n197v、n197y、a204f、a204h、a204l、v206n、m208d、p211c、p211m、e216l、r218q、r219v、t225d、t225f、t225h、t225k、t225l、t225n、t225r、t225y、l228v、l230c、l230f、d231g、d231t、d231v、i235a、k242l、y243d、y243m、y243n、r247g、r247p、r247s、l250s、l250y、t251d、h252p、v253f、v253s、r254d、r254f、r254h、r254p、r254t、r254v、r254w、n255c、n255f、n255p、t257a、t257c、t257d、t257e、t257g、t257p、t257q、t257s、t257w、t257y、k259p、k259v、k259w、k259y、e260v、m261d、m261f、m261p、m261r、m261s、m261w、f262a、f262c、f262e、f262h、f262i、f262k、f262l、f262n、f262p、f262q、f262r、f262s、f262t、f262v、f262w、a263e、a263h、a263w、a265q、l272w、g273q、a274d、
l279i、n280p、k281h、k281i、k281s、n283p、w284a、w284d、w284e、w284g、w284i、w284k、w284m、w284n、w284p、w284q、w284s、w284t、w284v、w284y、s287i、s287k、s287l、s287p、s287r、s287t、s287v、s287y、p292l、p292m、p292y、h294n、h294s、n296t、y298d、y298e、n299t、a300g、s303a、s303c、s303d、s303e、s303f、s303g、s303h、s303l、s303m、s303n、s303q、s303t、s303v、s303y、g305e、y307s、a310d、a310n、k311a、k311c、l313q、n314p、n314s、g315e、g315m、g315v、q319c、q319e、k320s、k320w、h321f、h321k、h321l、h321r、h321t、h321v、h321w、p322c、p322e、p322h、p322t、p322y、m323a、m323c、m323d、m323e、m323g、m323h、m323l、m323n、m323p、m323r、m323s、m323t、m323w、m323y、h324a、h324i、h324p、h324t、h324w、h324y、s334v、g337v、l340m、s342a、s342g、s342t、v344a、v344c、v344i、q345n、e346a、w347a、w347e、w347f、w347g、w347h、w347k、w347n、w347p、w347r、p350a、p350c、p350n、p350t、r359c、r359f、r359g、r359m、r359s、r359w、e360d、e360h、e360p、e360t、e360w、q361d、q361h、q361i、q361k、q361l、q361m、q361n、q361p、q361r、q361s、q361t、q361v、q361w、q361y、g362m、y363a、y363e、y363f、y363g、y363i、y363l、y363q、y363r、y363s、y363t、y363v、y363w、p364c、y368c、y368q、y368r、y368t、y372c、y372g、y372n、y372t、p375q、p375t、p380f、m382i、k383c、k383l、k383p、k383t、a384d、a384n、k385n、k385v、d387c、d387p、d387r、d387w、p388i、e391m、r393k、r393m、n395c、n395d、n395k、n395v、n395w、f396e、f396g、f396t、a397v、y398e、q401h、h402s、d403a、d403e、d403t、f405c、f405n、f405s、f405t、d406v、h407c、h407q、h407t、i410h、i410m、i410r、i410w、r415c、r415l、r415m、r415y、e416d、e416f、e416l、e416n、n418a、n418p、n418v、h421a、h421g、h421l、h421p、h421q、h421y、p422d、p422g、p422i、p422n、p422q、p422s、n423g、n423h、n423i、n423l、n423m、n423p、n423q、n423v、n423w、n423y、g433a、g433n、g433s、p434i、p434l、g435c、g435l、g435m、g435t、g435v、k438a、k438i、k438q、k438s、k438v、w439a、w439d、w439i、w439k、w439l、w439n、w439s、w439t、w439v、w439y、k446a、k446f、a447d、a447y、q449t、v450d、v450n、h452l、t455c、t455m、t455v、n457d、n457e、n457i、n457l、n457v、k458d、k458l、g460m、g460v、t461f、t461i、t461q、t461v、v462c、n465a、n465c、n465e、n465g、n465h、n465l、n465p、n465t、a466f、a466i、a466y、d467i、w469a、w469e、w469h、w469l、w469n、w469q、w469r、w469s、w469y、n471a、n471d、n471m、n471w、s473n、n475a、n475c、n475d、n475e、n475f、n475g、n475h、n475i、n475l、n475m、n475p、n475q、n475s、n475t、n475v、n475w、g476f、g476l、g477a、g477h、g477q、g477s、g477w、s478a、s478f以及s478q，使用seq id no:1进行编号，并且其中所述变体与seq id no:6的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％但小于100％的序列同一性。
[0111]
在一方面，变体在对应于如下位置的位置处包含以下取代中的一个或多个：n3a、n3c、n3d、n3e、n3f、n3g、n3h、n3l、n3p、n3q、n3s、n3t、n3v、t5e、g7e、g7f、g7h、g7k、g7l、g7p、g7r、g7s、g7t、g7v、g7w、t8s、h16d、h16r、p18d、p18l、p18n、n25t、r26y、d29n、d30f、r35p、r37a、r37n、t40a、t40c、t40d、t40e、t40g、t40h、t40i、t40k、t40n、t40v、t40w、a41c、a41d、a41e、a41h、a41i、a41k、a41n、a41r、a41t、a41v、a41y、w43e、p46a、g50m、g50p、g50q、g57a、g57s、a60e、a60s、a60v、e68f、e68y、q71f、g73d、g73h、g73i、g73l、g73q、g73s、g73t、g73w、t74f、k78s、k78t、t81m、q84i、q84w、q84y、e86k、e86s、s87g、s87l、s87p、h90p、a91q、a91v、
a91w、k93v、v97c、v97h、q98e、q98f、q98g、q98i、q98k、q98l、q98m、q98r、q98t、q98y、v103c、v103g、v103s、m105f、g110k、g110r、a111e、a111q、a113t、t114m、t114v、n116c、n116y、v117f、a119h、a119l、a119y、v120e、e121i、n125s、n126i、n128e、q129t、i131y、s132a、s132d、s132h、s132i、s132k、s132l、s132p、s132r、s132t、s132v、s132y、g133e、g133l、g133t、g133v、y135c、y135d、y135e、y135p、i137d、i137n、i137q、i137w、i137y、e138s、e138v、a139l、w140a、w140d、w140m、w140n、w140p、w140s、w140t、w140v、t141g、k142e、k142n、f143h、f143i、f143m、f145g、f145h、f145i、f145l、f145s、p146a、p146h、p146n、g147d、g149f、g149k、w159a、w159e、h161w、f162t、v165p、w167d、w167g、w167p、q169l、q169p、q169v、q169y、r171p、r176e、r176q、r176v、r176y、i177h、i177p、k179a、k179m、k179v、f180d、f180g、r181d、r181e、r181g、r181m、r181y、k185t、k185v、k185w、a186d、w187t、n195y、g196d、n197v、n197y、a204f、a204h、a204l、v206n、m208d、p211c、p211m、e216l、r218q、r219v、t225d、t225f、t225h、t225k、t225l、t225n、t225r、t225y、l228v、l230c、l230f、d231g、d231t、d231v、i235a、k242l、y243d、y243m、y243n、r247g、r247p、r247s、l250s、l250y、t251d、h252p、v253f、v253s、r254d、r254f、r254h、r254p、r254t、r254v、r254w、n255c、n255f、n255p、t257a、t257c、t257d、t257e、t257g、t257p、t257q、t257s、t257w、t257y、k259p、k259v、k259w、k259y、e260v、m261d、m261f、m261p、m261r、m261s、m261w、f262a、f262c、f262e、f262h、f262i、f262k、f262l、f262n、f262p、f262q、f262r、f262s、f262t、f262v、f262w、a263e、a263h、a263w、a265q、l272w、g273q、a274d、l279i、n280p、k281h、k281i、k281s、n283p、w284a、w284d、w284e、w284g、w284i、w284k、w284m、w284n、w284p、w284q、w284s、w284t、w284v、w284y、s287i、s287k、s287l、s287p、s287r、s287t、s287v、s287y、p292l、p292m、p292y、h294n、h294s、n296t、y298d、y298e、n299t、a300g、s303a、s303c、s303d、s303e、s303f、s303g、s303h、s303l、s303m、s303n、s303q、s303t、s303v、s303y、g305e、y307s、a310d、a310n、k311a、k311c、l313q、n314p、n314s、g315e、g315m、g315v、q319c、q319e、k320s、k320w、h321f、h321k、h321l、h321r、h321t、h321v、h321w、p322c、p322e、p322h、p322t、p322y、m323a、m323c、m323d、m323e、m323g、m323h、m323l、m323n、m323p、m323r、m323s、m323t、m323w、m323y、h324a、h324i、h324p、h324t、h324w、h324y、s334v、g337v、l340m、s342a、s342g、s342t、v344a、v344c、v344i、q345n、e346a、w347a、w347e、w347f、w347g、w347h、w347k、w347n、w347p、w347r、p350a、p350c、p350n、p350t、r359c、r359f、r359g、r359m、r359s、r359w、e360d、e360h、e360p、e360t、e360w、q361d、q361h、q361i、q361k、q361l、q361m、q361n、q361p、q361r、q361s、q361t、q361v、q361w、q361y、g362m、y363a、y363e、y363f、y363g、y363i、y363l、y363q、y363r、y363s、y363t、y363v、y363w、p364c、y368c、y368q、y368r、y368t、y372c、y372g、y372n、y372t、p375q、p375t、p380f、m382i、k383c、k383l、k383p、k383t、a384d、a384n、k385n、k385v、d387c、d387p、d387r、d387w、p388i、e391m、r393k、r393m、n395c、n395d、n395k、n395v、n395w、f396e、f396g、f396t、a397v、y398e、q401h、h402s、d403a、d403e、d403t、f405c、f405n、f405s、f405t、d406v、h407c、h407q、h407t、i410h、i410m、i410r、i410w、r415c、r415l、r415m、r415y、e416d、e416f、e416l、e416n、n418a、n418p、n418v、h421a、h421g、h421l、h421p、h421q、h421y、p422d、p422g、p422i、p422n、p422q、p422s、n423g、n423h、n423i、n423l、n423m、n423p、n423q、n423v、n423w、n423y、g433a、
g433n、g433s、p434i、p434l、g435c、g435l、g435m、g435t、g435v、k438a、k438i、k438q、k438s、k438v、w439a、w439d、w439i、w439k、w439l、w439n、w439s、w439t、w439v、w439y、k446a、k446f、a447d、a447y、q449t、v450d、v450n、h452l、t455c、t455m、t455v、n457d、n457e、n457i、n457l、n457v、k458d、k458l、g460m、g460v、t461f、t461i、t461q、t461v、v462c、n465a、n465c、n465e、n465g、n465h、n465l、n465p、n465t、a466f、a466i、a466y、d467i、w469a、w469e、w469h、w469l、w469n、w469q、w469r、w469s、w469y、n471a、n471d、n471m、n471w、s473n、n475a、n475c、n475d、n475e、n475f、n475g、n475h、n475i、n475l、n475m、n475p、n475q、n475s、n475t、n475v、n475w、g476f、g476l、g477a、g477h、g477q、g477s、g477w、s478a、s478f以及s478q，使用seq id no:1进行编号，并且其中所述变体与seq id no:7的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％但小于100％的序列同一性。
[0112]
在一方面，变体在对应于如下位置的位置处包含以下取代中的一个或多个：n3a、n3c、n3d、n3e、n3f、n3g、n3h、n3l、n3p、n3q、n3s、n3t、n3v、t5e、g7e、g7f、g7h、g7k、g7l、g7p、g7r、g7s、g7t、g7v、g7w、t8s、h16d、h16r、p18d、p18l、p18n、n25t、r26y、d29n、d30f、r35p、r37a、r37n、t40a、t40c、t40d、t40e、t40g、t40h、t40i、t40k、t40n、t40v、t40w、a41c、a41d、a41e、a41h、a41i、a41k、a41n、a41r、a41t、a41v、a41y、w43e、p46a、g50m、g50p、g50q、g57a、g57s、a60e、a60s、a60v、e68f、e68y、q71f、g73d、g73h、g73i、g73l、g73q、g73s、g73t、g73w、t74f、k78s、k78t、t81m、q84i、q84w、q84y、e86k、e86s、s87g、s87l、s87p、h90p、a91q、a91v、a91w、k93v、v97c、v97h、q98e、q98f、q98g、q98i、q98k、q98l、q98m、q98r、q98t、q98y、v103c、v103g、v103s、m105f、g110k、g110r、a111e、a111q、a113t、t114m、t114v、n116c、n116y、v117f、a119h、a119l、a119y、v120e、e121i、n125s、n126i、n128e、q129t、i131y、s132a、s132d、s132h、s132i、s132k、s132l、s132p、s132r、s132t、s132v、s132y、g133e、g133l、g133t、g133v、y135c、y135d、y135e、y135p、i137d、i137n、i137q、i137w、i137y、e138s、e138v、a139l、w140a、w140d、w140m、w140n、w140p、w140s、w140t、w140v、t141g、k142e、k142n、f143h、f143i、f143m、f145g、f145h、f145i、f145l、f145s、p146a、p146h、p146n、g147d、g149f、g149k、w159a、w159e、h161w、f162t、v165p、w167d、w167g、w167p、q169l、q169p、q169v、q169y、r171p、r176e、r176q、r176v、r176y、i177h、i177p、k179a、k179m、k179v、f180d、f180g、r181d、r181e、r181g、r181m、r181y、k185t、k185v、k185w、a186d、w187t、n195y、g196d、n197v、n197y、a204f、a204h、a204l、v206n、m208d、p211c、p211m、e216l、r218q、r219v、t225d、t225f、t225h、t225k、t225l、t225n、t225r、t225y、l228v、l230c、l230f、d231g、d231t、d231v、i235a、k242l、y243d、y243m、y243n、r247g、r247p、r247s、l250s、l250y、t251d、h252p、v253f、v253s、r254d、r254f、r254h、r254p、r254t、r254v、r254w、n255c、n255f、n255p、t257a、t257c、t257d、t257e、t257g、t257p、t257q、t257s、t257w、t257y、k259p、k259v、k259w、k259y、e260v、m261d、m261f、m261p、m261r、m261s、m261w、f262a、f262c、f262e、f262h、f262i、f262k、f262l、f262n、f262p、f262q、f262r、f262s、f262t、f262v、f262w、a263e、a263h、a263w、a265q、l272w、g273q、a274d、l279i、n280p、k281h、k281i、k281s、n283p、w284a、w284d、w284e、w284g、w284i、w284k、w284m、w284n、w284p、w284q、w284s、w284t、w284v、w284y、s287i、s287k、s287l、s287p、s287r、s287t、s287v、s287y、p292l、p292m、p292y、h294n、h294s、n296t、y298d、y298e、
n299t、a300g、s303a、s303c、s303d、s303e、s303f、s303g、s303h、s303l、s303m、s303n、s303q、s303t、s303v、s303y、g305e、y307s、a310d、a310n、k311a、k311c、l313q、n314p、n314s、g315e、g315m、g315v、q319c、q319e、k320s、k320w、h321f、h321k、h321l、h321r、h321t、h321v、h321w、p322c、p322e、p322h、p322t、p322y、m323a、m323c、m323d、m323e、m323g、m323h、m323l、m323n、m323p、m323r、m323s、m323t、m323w、m323y、h324a、h324i、h324p、h324t、h324w、h324y、s334v、g337v、l340m、s342a、s342g、s342t、v344a、v344c、v344i、q345n、e346a、w347a、w347e、w347f、w347g、w347h、w347k、w347n、w347p、w347r、p350a、p350c、p350n、p350t、r359c、r359f、r359g、r359m、r359s、r359w、e360d、e360h、e360p、e360t、e360w、q361d、q361h、q361i、q361k、q361l、q361m、q361n、q361p、q361r、q361s、q361t、q361v、q361w、q361y、g362m、y363a、y363e、y363f、y363g、y363i、y363l、y363q、y363r、y363s、y363t、y363v、y363w、p364c、y368c、y368q、y368r、y368t、y372c、y372g、y372n、y372t、p375q、p375t、p380f、m382i、k383c、k383l、k383p、k383t、a384d、a384n、k385n、k385v、d387c、d387p、d387r、d387w、p388i、e391m、r393k、r393m、n395c、n395d、n395k、n395v、n395w、f396e、f396g、f396t、a397v、y398e、q401h、h402s、d403a、d403e、d403t、f405c、f405n、f405s、f405t、d406v、h407c、h407q、h407t、i410h、i410m、i410r、i410w、r415c、r415l、r415m、r415y、e416d、e416f、e416l、e416n、n418a、n418p、n418v、h421a、h421g、h421l、h421p、h421q、h421y、p422d、p422g、p422i、p422n、p422q、p422s、n423g、n423h、n423i、n423l、n423m、n423p、n423q、n423v、n423w、n423y、g433a、g433n、g433s、p434i、p434l、g435c、g435l、g435m、g435t、g435v、k438a、k438i、k438q、k438s、k438v、w439a、w439d、w439i、w439k、w439l、w439n、w439s、w439t、w439v、w439y、k446a、k446f、a447d、a447y、q449t、v450d、v450n、h452l、t455c、t455m、t455v、n457d、n457e、n457i、n457l、n457v、k458d、k458l、g460m、g460v、t461f、t461i、t461q、t461v、v462c、n465a、n465c、n465e、n465g、n465h、n465l、n465p、n465t、a466f、a466i、a466y、d467i、w469a、w469e、w469h、w469l、w469n、w469q、w469r、w469s、w469y、n471a、n471d、n471m、n471w、s473n、n475a、n475c、n475d、n475e、n475f、n475g、n475h、n475i、n475l、n475m、n475p、n475q、n475s、n475t、n475v、n475w、g476f、g476l、g477a、g477h、g477q、g477s、g477w、s478a、s478f以及s478q，使用seq id no:1进行编号，并且其中所述变体与seq id no:8的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％但小于100％的序列同一性。
[0113]
在一方面，变体在对应于如下位置的位置处包含以下取代中的一个或多个：n3a、n3c、n3d、n3e、n3f、n3g、n3h、n3l、n3p、n3q、n3s、n3t、n3v、t5e、g7e、g7f、g7h、g7k、g7l、g7p、g7r、g7s、g7t、g7v、g7w、t8s、h16d、h16r、p18d、p18l、p18n、n25t、r26y、d29n、d30f、r35p、r37a、r37n、t40a、t40c、t40d、t40e、t40g、t40h、t40i、t40k、t40n、t40v、t40w、a41c、a41d、a41e、a41h、a41i、a41k、a41n、a41r、a41t、a41v、a41y、w43e、p46a、g50m、g50p、g50q、g57a、g57s、a60e、a60s、a60v、e68f、e68y、q71f、g73d、g73h、g73i、g73l、g73q、g73s、g73t、g73w、t74f、k78s、k78t、t81m、q84i、q84w、q84y、e86k、e86s、s87g、s87l、s87p、h90p、a91q、a91v、a91w、k93v、v97c、v97h、q98e、q98f、q98g、q98i、q98k、q98l、q98m、q98r、q98t、q98y、v103c、v103g、v103s、m105f、g110k、g110r、a111e、a111q、a113t、t114m、t114v、n116c、n116y、v117f、a119h、a119l、a119y、v120e、e121i、n125s、n126i、n128e、q129t、i131y、s132a、
s132d、s132h、s132i、s132k、s132l、s132p、s132r、s132t、s132v、s132y、g133e、g133l、g133t、g133v、y135c、y135d、y135e、y135p、i137d、i137n、i137q、i137w、i137y、e138s、e138v、a139l、w140a、w140d、w140m、w140n、w140p、w140s、w140t、w140v、t141g、k142e、k142n、f143h、f143i、f143m、f145g、f145h、f145i、f145l、f145s、p146a、p146h、p146n、g147d、g149f、g149k、w159a、w159e、h161w、f162t、v165p、w167d、w167g、w167p、q169l、q169p、q169v、q169y、r171p、r176e、r176q、r176v、r176y、i177h、i177p、k179a、k179m、k179v、f180d、f180g、r181d、r181e、r181g、r181m、r181y、k185t、k185v、k185w、a186d、w187t、n195y、g196d、n197v、n197y、a204f、a204h、a204l、v206n、m208d、p211c、p211m、e216l、r218q、r219v、t225d、t225f、t225h、t225k、t225l、t225n、t225r、t225y、l228v、l230c、l230f、d231g、d231t、d231v、i235a、k242l、y243d、y243m、y243n、r247g、r247p、r247s、l250s、l250y、t251d、h252p、v253f、v253s、r254d、r254f、r254h、r254p、r254t、r254v、r254w、n255c、n255f、n255p、t257a、t257c、t257d、t257e、t257g、t257p、t257q、t257s、t257w、t257y、k259p、k259v、k259w、k259y、e260v、m261d、m261f、m261p、m261r、m261s、m261w、f262a、f262c、f262e、f262h、f262i、f262k、f262l、f262n、f262p、f262q、f262r、f262s、f262t、f262v、f262w、a263e、a263h、a263w、a265q、l272w、g273q、a274d、l279i、n280p、k281h、k281i、k281s、n283p、w284a、w284d、w284e、w284g、w284i、w284k、w284m、w284n、w284p、w284q、w284s、w284t、w284v、w284y、s287i、s287k、s287l、s287p、s287r、s287t、s287v、s287y、p292l、p292m、p292y、h294n、h294s、n296t、y298d、y298e、n299t、a300g、s303a、s303c、s303d、s303e、s303f、s303g、s303h、s303l、s303m、s303n、s303q、s303t、s303v、s303y、g305e、y307s、a310d、a310n、k311a、k311c、l313q、n314p、n314s、g315e、g315m、g315v、q319c、q319e、k320s、k320w、h321f、h321k、h321l、h321r、h321t、h321v、h321w、p322c、p322e、p322h、p322t、p322y、m323a、m323c、m323d、m323e、m323g、m323h、m323l、m323n、m323p、m323r、m323s、m323t、m323w、m323y、h324a、h324i、h324p、h324t、h324w、h324y、s334v、g337v、l340m、s342a、s342g、s342t、v344a、v344c、v344i、q345n、e346a、w347a、w347e、w347f、w347g、w347h、w347k、w347n、w347p、w347r、p350a、p350c、p350n、p350t、r359c、r359f、r359g、r359m、r359s、r359w、e360d、e360h、e360p、e360t、e360w、q361d、q361h、q361i、q361k、q361l、q361m、q361n、q361p、q361r、q361s、q361t、q361v、q361w、q361y、g362m、y363a、y363e、y363f、y363g、y363i、y363l、y363q、y363r、y363s、y363t、y363v、y363w、p364c、y368c、y368q、y368r、y368t、y372c、y372g、y372n、y372t、p375q、p375t、p380f、m382i、k383c、k383l、k383p、k383t、a384d、a384n、k385n、k385v、d387c、d387p、d387r、d387w、p388i、e391m、r393k、r393m、n395c、n395d、n395k、n395v、n395w、f396e、f396g、f396t、a397v、y398e、q401h、h402s、d403a、d403e、d403t、f405c、f405n、f405s、f405t、d406v、h407c、h407q、h407t、i410h、i410m、i410r、i410w、r415c、r415l、r415m、r415y、e416d、e416f、e416l、e416n、n418a、n418p、n418v、h421a、h421g、h421l、h421p、h421q、h421y、p422d、p422g、p422i、p422n、p422q、p422s、n423g、n423h、n423i、n423l、n423m、n423p、n423q、n423v、n423w、n423y、g433a、g433n、g433s、p434i、p434l、g435c、g435l、g435m、g435t、g435v、k438a、k438i、k438q、k438s、k438v、w439a、w439d、w439i、w439k、w439l、w439n、w439s、w439t、w439v、w439y、k446a、k446f、a447d、a447y、q449t、v450d、v450n、h452l、t455c、t455m、t455v、n457d、
n457e、n457i、n457l、n457v、k458d、k458l、g460m、g460v、t461f、t461i、t461q、t461v、v462c、n465a、n465c、n465e、n465g、n465h、n465l、n465p、n465t、a466f、a466i、a466y、d467i、w469a、w469e、w469h、w469l、w469n、w469q、w469r、w469s、w469y、n471a、n471d、n471m、n471w、s473n、n475a、n475c、n475d、n475e、n475f、n475g、n475h、n475i、n475l、n475m、n475p、n475q、n475s、n475t、n475v、n475w、g476f、g476l、g477a、g477h、g477q、g477s、g477w、s478a、s478f以及s478q，使用seq id no:1进行编号，并且其中所述变体与seq id no:9的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％但小于100％的序列同一性。
[0114]
在一方面，变体在对应于如下位置的位置处包含以下取代中的一个或多个：n3a、n3c、n3d、n3e、n3f、n3g、n3h、n3l、n3p、n3q、n3s、n3t、n3v、t5e、g7e、g7f、g7h、g7k、g7l、g7p、g7r、g7s、g7t、g7v、g7w、t8s、h16d、h16r、p18d、p18l、p18n、n25t、r26y、d29n、d30f、r35p、r37a、r37n、t40a、t40c、t40d、t40e、t40g、t40h、t40i、t40k、t40n、t40v、t40w、a41c、a41d、a41e、a41h、a41i、a41k、a41n、a41r、a41t、a41v、a41y、w43e、p46a、g50m、g50p、g50q、g57a、g57s、a60e、a60s、a60v、e68f、e68y、q71f、g73d、g73h、g73i、g73l、g73q、g73s、g73t、g73w、t74f、k78s、k78t、t81m、q84i、q84w、q84y、e86k、e86s、s87g、s87l、s87p、h90p、a91q、a91v、a91w、k93v、v97c、v97h、q98e、q98f、q98g、q98i、q98k、q98l、q98m、q98r、q98t、q98y、v103c、v103g、v103s、m105f、g110k、g110r、a111e、a111q、a113t、t114m、t114v、n116c、n116y、v117f、a119h、a119l、a119y、v120e、e121i、n125s、n126i、n128e、q129t、i131y、s132a、s132d、s132h、s132i、s132k、s132l、s132p、s132r、s132t、s132v、s132y、g133e、g133l、g133t、g133v、y135c、y135d、y135e、y135p、i137d、i137n、i137q、i137w、i137y、e138s、e138v、a139l、w140a、w140d、w140m、w140n、w140p、w140s、w140t、w140v、t141g、k142e、k142n、f143h、f143i、f143m、f145g、f145h、f145i、f145l、f145s、p146a、p146h、p146n、g147d、g149f、g149k、w159a、w159e、h161w、f162t、v165p、w167d、w167g、w167p、q169l、q169p、q169v、q169y、r171p、r176e、r176q、r176v、r176y、i177h、i177p、k179a、k179m、k179v、f180d、f180g、r181d、r181e、r181g、r181m、r181y、k185t、k185v、k185w、a186d、w187t、n195y、g196d、n197v、n197y、a204f、a204h、a204l、v206n、m208d、p211c、p211m、e216l、r218q、r219v、t225d、t225f、t225h、t225k、t225l、t225n、t225r、t225y、l228v、l230c、l230f、d231g、d231t、d231v、i235a、k242l、y243d、y243m、y243n、r247g、r247p、r247s、l250s、l250y、t251d、h252p、v253f、v253s、r254d、r254f、r254h、r254p、r254t、r254v、r254w、n255c、n255f、n255p、t257a、t257c、t257d、t257e、t257g、t257p、t257q、t257s、t257w、t257y、k259p、k259v、k259w、k259y、e260v、m261d、m261f、m261p、m261r、m261s、m261w、f262a、f262c、f262e、f262h、f262i、f262k、f262l、f262n、f262p、f262q、f262r、f262s、f262t、f262v、f262w、a263e、a263h、a263w、a265q、l272w、g273q、a274d、l279i、n280p、k281h、k281i、k281s、n283p、w284a、w284d、w284e、w284g、w284i、w284k、w284m、w284n、w284p、w284q、w284s、w284t、w284v、w284y、s287i、s287k、s287l、s287p、s287r、s287t、s287v、s287y、p292l、p292m、p292y、h294n、h294s、n296t、y298d、y298e、n299t、a300g、s303a、s303c、s303d、s303e、s303f、s303g、s303h、s303l、s303m、s303n、s303q、s303t、s303v、s303y、g305e、y307s、a310d、a310n、k311a、k311c、l313q、n314p、n314s、g315e、g315m、g315v、q319c、q319e、k320s、k320w、h321f、h321k、h321l、h321r、
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[0115]
在一方面，变体在对应于如下位置的位置处包含以下取代中的一个或多个：n3a、n3c、n3d、n3e、n3f、n3g、n3h、n3l、n3p、n3q、n3s、n3t、n3v、t5e、g7e、g7f、g7h、g7k、g7l、g7p、g7r、g7s、g7t、g7v、g7w、t8s、h16d、h16r、p18d、p18l、p18n、n25t、r26y、d29n、d30f、r35p、r37a、r37n、t40a、t40c、t40d、t40e、t40g、t40h、t40i、t40k、t40n、t40v、t40w、a41c、a41d、a41e、a41h、a41i、a41k、a41n、a41r、a41t、a41v、a41y、w43e、p46a、g50m、g50p、g50q、g57a、g57s、a60e、a60s、a60v、e68f、e68y、q71f、g73d、g73h、g73i、g73l、g73q、g73s、g73t、g73w、t74f、k78s、k78t、t81m、q84i、q84w、q84y、e86k、e86s、s87g、s87l、s87p、h90p、a91q、a91v、a91w、k93v、v97c、v97h、q98e、q98f、q98g、q98i、q98k、q98l、q98m、q98r、q98t、q98y、v103c、v103g、v103s、m105f、g110k、g110r、a111e、a111q、a113t、t114m、t114v、n116c、n116y、v117f、a119h、a119l、a119y、v120e、e121i、n125s、n126i、n128e、q129t、i131y、s132a、s132d、s132h、s132i、s132k、s132l、s132p、s132r、s132t、s132v、s132y、g133e、g133l、g133t、g133v、y135c、y135d、y135e、y135p、i137d、i137n、i137q、i137w、i137y、e138s、
e138v、a139l、w140a、w140d、w140m、w140n、w140p、w140s、w140t、w140v、t141g、k142e、k142n、f143h、f143i、f143m、f145g、f145h、f145i、f145l、f145s、p146a、p146h、p146n、g147d、g149f、g149k、w159a、w159e、h161w、f162t、v165p、w167d、w167g、w167p、q169l、q169p、q169v、q169y、r171p、r176e、r176q、r176v、r176y、i177h、i177p、k179a、k179m、k179v、f180d、f180g、r181d、r181e、r181g、r181m、r181y、k185t、k185v、k185w、a186d、w187t、n195y、g196d、n197v、n197y、a204f、a204h、a204l、v206n、m208d、p211c、p211m、e216l、r218q、r219v、t225d、t225f、t225h、t225k、t225l、t225n、t225r、t225y、l228v、l230c、l230f、d231g、d231t、d231v、i235a、k242l、y243d、y243m、y243n、r247g、r247p、r247s、l250s、l250y、t251d、h252p、v253f、v253s、r254d、r254f、r254h、r254p、r254t、r254v、r254w、n255c、n255f、n255p、t257a、t257c、t257d、t257e、t257g、t257p、t257q、t257s、t257w、t257y、k259p、k259v、k259w、k259y、e260v、m261d、m261f、m261p、m261r、m261s、m261w、f262a、f262c、f262e、f262h、f262i、f262k、f262l、f262n、f262p、f262q、f262r、f262s、f262t、f262v、f262w、a263e、a263h、a263w、a265q、l272w、g273q、a274d、l279i、n280p、k281h、k281i、k281s、n283p、w284a、w284d、w284e、w284g、w284i、w284k、w284m、w284n、w284p、w284q、w284s、w284t、w284v、w284y、s287i、s287k、s287l、s287p、s287r、s287t、s287v、s287y、p292l、p292m、p292y、h294n、h294s、n296t、y298d、y298e、n299t、a300g、s303a、s303c、s303d、s303e、s303f、s303g、s303h、s303l、s303m、s303n、s303q、s303t、s303v、s303y、g305e、y307s、a310d、a310n、k311a、k311c、l313q、n314p、n314s、g315e、g315m、g315v、q319c、q319e、k320s、k320w、h321f、h321k、h321l、h321r、h321t、h321v、h321w、p322c、p322e、p322h、p322t、p322y、m323a、m323c、m323d、m323e、m323g、m323h、m323l、m323n、m323p、m323r、m323s、m323t、m323w、m323y、h324a、h324i、h324p、h324t、h324w、h324y、s334v、g337v、l340m、s342a、s342g、s342t、v344a、v344c、v344i、q345n、e346a、w347a、w347e、w347f、w347g、w347h、w347k、w347n、w347p、w347r、p350a、p350c、p350n、p350t、r359c、r359f、r359g、r359m、r359s、r359w、e360d、e360h、e360p、e360t、e360w、q361d、q361h、q361i、q361k、q361l、q361m、q361n、q361p、q361r、q361s、q361t、q361v、q361w、q361y、g362m、y363a、y363e、y363f、y363g、y363i、y363l、y363q、y363r、y363s、y363t、y363v、y363w、p364c、y368c、y368q、y368r、y368t、y372c、y372g、y372n、y372t、p375q、p375t、p380f、m382i、k383c、k383l、k383p、k383t、a384d、a384n、k385n、k385v、d387c、d387p、d387r、d387w、p388i、e391m、r393k、r393m、n395c、n395d、n395k、n395v、n395w、f396e、f396g、f396t、a397v、y398e、q401h、h402s、d403a、d403e、d403t、f405c、f405n、f405s、f405t、d406v、h407c、h407q、h407t、i410h、i410m、i410r、i410w、r415c、r415l、r415m、r415y、e416d、e416f、e416l、e416n、n418a、n418p、n418v、h421a、h421g、h421l、h421p、h421q、h421y、p422d、p422g、p422i、p422n、p422q、p422s、n423g、n423h、n423i、n423l、n423m、n423p、n423q、n423v、n423w、n423y、g433a、g433n、g433s、p434i、p434l、g435c、g435l、g435m、g435t、g435v、k438a、k438i、k438q、k438s、k438v、w439a、w439d、w439i、w439k、w439l、w439n、w439s、w439t、w439v、w439y、k446a、k446f、a447d、a447y、q449t、v450d、v450n、h452l、t455c、t455m、t455v、n457d、n457e、n457i、n457l、n457v、k458d、k458l、g460m、g460v、t461f、t461i、t461q、t461v、v462c、n465a、n465c、n465e、n465g、n465h、n465l、n465p、n465t、a466f、a466i、a466y、
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[0116]
在一方面，变体在对应于如下位置的位置处包含以下取代中的一个或多个：n3a、n3c、n3d、n3e、n3f、n3g、n3h、n3l、n3p、n3q、n3s、n3t、n3v、t5e、g7e、g7f、g7h、g7k、g7l、g7p、g7r、g7s、g7t、g7v、g7w、t8s、h16d、h16r、p18d、p18l、p18n、n25t、r26y、d29n、d30f、r35p、r37a、r37n、t40a、t40c、t40d、t40e、t40g、t40h、t40i、t40k、t40n、t40v、t40w、a41c、a41d、a41e、a41h、a41i、a41k、a41n、a41r、a41t、a41v、a41y、w43e、p46a、g50m、g50p、g50q、g57a、g57s、a60e、a60s、a60v、e68f、e68y、q71f、g73d、g73h、g73i、g73l、g73q、g73s、g73t、g73w、t74f、k78s、k78t、t81m、q84i、q84w、q84y、e86k、e86s、s87g、s87l、s87p、h90p、a91q、a91v、a91w、k93v、v97c、v97h、q98e、q98f、q98g、q98i、q98k、q98l、q98m、q98r、q98t、q98y、v103c、v103g、v103s、m105f、g110k、g110r、a111e、a111q、a113t、t114m、t114v、n116c、n116y、v117f、a119h、a119l、a119y、v120e、e121i、n125s、n126i、n128e、q129t、i131y、s132a、s132d、s132h、s132i、s132k、s132l、s132p、s132r、s132t、s132v、s132y、g133e、g133l、g133t、g133v、y135c、y135d、y135e、y135p、i137d、i137n、i137q、i137w、i137y、e138s、e138v、a139l、w140a、w140d、w140m、w140n、w140p、w140s、w140t、w140v、t141g、k142e、k142n、f143h、f143i、f143m、f145g、f145h、f145i、f145l、f145s、p146a、p146h、p146n、g147d、g149f、g149k、w159a、w159e、h161w、f162t、v165p、w167d、w167g、w167p、q169l、q169p、q169v、q169y、r171p、r176e、r176q、r176v、r176y、i177h、i177p、k179a、k179m、k179v、f180d、f180g、r181d、r181e、r181g、r181m、r181y、k185t、k185v、k185w、a186d、w187t、n195y、g196d、n197v、n197y、a204f、a204h、a204l、v206n、m208d、p211c、p211m、e216l、r218q、r219v、t225d、t225f、t225h、t225k、t225l、t225n、t225r、t225y、l228v、l230c、l230f、d231g、d231t、d231v、i235a、k242l、y243d、y243m、y243n、r247g、r247p、r247s、l250s、l250y、t251d、h252p、v253f、v253s、r254d、r254f、r254h、r254p、r254t、r254v、r254w、n255c、n255f、n255p、t257a、t257c、t257d、t257e、t257g、t257p、t257q、t257s、t257w、t257y、k259p、k259v、k259w、k259y、e260v、m261d、m261f、m261p、m261r、m261s、m261w、f262a、f262c、f262e、f262h、f262i、f262k、f262l、f262n、f262p、f262q、f262r、f262s、f262t、f262v、f262w、a263e、a263h、a263w、a265q、l272w、g273q、a274d、l279i、n280p、k281h、k281i、k281s、n283p、w284a、w284d、w284e、w284g、w284i、w284k、w284m、w284n、w284p、w284q、w284s、w284t、w284v、w284y、s287i、s287k、s287l、s287p、s287r、s287t、s287v、s287y、p292l、p292m、p292y、h294n、h294s、n296t、y298d、y298e、n299t、a300g、s303a、s303c、s303d、s303e、s303f、s303g、s303h、s303l、s303m、s303n、s303q、s303t、s303v、s303y、g305e、y307s、a310d、a310n、k311a、k311c、l313q、n314p、n314s、g315e、g315m、g315v、q319c、q319e、k320s、k320w、h321f、h321k、h321l、h321r、h321t、h321v、h321w、p322c、p322e、p322h、p322t、p322y、m323a、m323c、m323d、m323e、
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[0117]
在一方面，变体在对应于如下位置的位置处包含以下取代中的一个或多个：n3a、n3c、n3d、n3e、n3f、n3g、n3h、n3l、n3p、n3q、n3s、n3t、n3v、t5e、g7e、g7f、g7h、g7k、g7l、g7p、g7r、g7s、g7t、g7v、g7w、t8s、h16d、h16r、p18d、p18l、p18n、n25t、r26y、d29n、d30f、r35p、r37a、r37n、t40a、t40c、t40d、t40e、t40g、t40h、t40i、t40k、t40n、t40v、t40w、a41c、a41d、a41e、a41h、a41i、a41k、a41n、a41r、a41t、a41v、a41y、w43e、p46a、g50m、g50p、g50q、g57a、g57s、a60e、a60s、a60v、e68f、e68y、q71f、g73d、g73h、g73i、g73l、g73q、g73s、g73t、g73w、t74f、k78s、k78t、t81m、q84i、q84w、q84y、e86k、e86s、s87g、s87l、s87p、h90p、a91q、a91v、a91w、k93v、v97c、v97h、q98e、q98f、q98g、q98i、q98k、q98l、q98m、q98r、q98t、q98y、v103c、v103g、v103s、m105f、g110k、g110r、a111e、a111q、a113t、t114m、t114v、n116c、n116y、v117f、a119h、a119l、a119y、v120e、e121i、n125s、n126i、n128e、q129t、i131y、s132a、s132d、s132h、s132i、s132k、s132l、s132p、s132r、s132t、s132v、s132y、g133e、g133l、g133t、g133v、y135c、y135d、y135e、y135p、i137d、i137n、i137q、i137w、i137y、e138s、e138v、a139l、w140a、w140d、w140m、w140n、w140p、w140s、w140t、w140v、t141g、k142e、
k142n、f143h、f143i、f143m、f145g、f145h、f145i、f145l、f145s、p146a、p146h、p146n、g147d、g149f、g149k、w159a、w159e、h161w、f162t、v165p、w167d、w167g、w167p、q169l、q169p、q169v、q169y、r171p、r176e、r176q、r176v、r176y、i177h、i177p、k179a、k179m、k179v、f180d、f180g、r181d、r181e、r181g、r181m、r181y、k185t、k185v、k185w、a186d、w187t、n195y、g196d、n197v、n197y、a204f、a204h、a204l、v206n、m208d、p211c、p211m、e216l、r218q、r219v、t225d、t225f、t225h、t225k、t225l、t225n、t225r、t225y、l228v、l230c、l230f、d231g、d231t、d231v、i235a、k242l、y243d、y243m、y243n、r247g、r247p、r247s、l250s、l250y、t251d、h252p、v253f、v253s、r254d、r254f、r254h、r254p、r254t、r254v、r254w、n255c、n255f、n255p、t257a、t257c、t257d、t257e、t257g、t257p、t257q、t257s、t257w、t257y、k259p、k259v、k259w、k259y、e260v、m261d、m261f、m261p、m261r、m261s、m261w、f262a、f262c、f262e、f262h、f262i、f262k、f262l、f262n、f262p、f262q、f262r、f262s、f262t、f262v、f262w、a263e、a263h、a263w、a265q、l272w、g273q、a274d、l279i、n280p、k281h、k281i、k281s、n283p、w284a、w284d、w284e、w284g、w284i、w284k、w284m、w284n、w284p、w284q、w284s、w284t、w284v、w284y、s287i、s287k、s287l、s287p、s287r、s287t、s287v、s287y、p292l、p292m、p292y、h294n、h294s、n296t、y298d、y298e、n299t、a300g、s303a、s303c、s303d、s303e、s303f、s303g、s303h、s303l、s303m、s303n、s303q、s303t、s303v、s303y、g305e、y307s、a310d、a310n、k311a、k311c、l313q、n314p、n314s、g315e、g315m、g315v、q319c、q319e、k320s、k320w、h321f、h321k、h321l、h321r、h321t、h321v、h321w、p322c、p322e、p322h、p322t、p322y、m323a、m323c、m323d、m323e、m323g、m323h、m323l、m323n、m323p、m323r、m323s、m323t、m323w、m323y、h324a、h324i、h324p、h324t、h324w、h324y、s334v、g337v、l340m、s342a、s342g、s342t、v344a、v344c、v344i、q345n、e346a、w347a、w347e、w347f、w347g、w347h、w347k、w347n、w347p、w347r、p350a、p350c、p350n、p350t、r359c、r359f、r359g、r359m、r359s、r359w、e360d、e360h、e360p、e360t、e360w、q361d、q361h、q361i、q361k、q361l、q361m、q361n、q361p、q361r、q361s、q361t、q361v、q361w、q361y、g362m、y363a、y363e、y363f、y363g、y363i、y363l、y363q、y363r、y363s、y363t、y363v、y363w、p364c、y368c、y368q、y368r、y368t、y372c、y372g、y372n、y372t、p375q、p375t、p380f、m382i、k383c、k383l、k383p、k383t、a384d、a384n、k385n、k385v、d387c、d387p、d387r、d387w、p388i、e391m、r393k、r393m、n395c、n395d、n395k、n395v、n395w、f396e、f396g、f396t、a397v、y398e、q401h、h402s、d403a、d403e、d403t、f405c、f405n、f405s、f405t、d406v、h407c、h407q、h407t、i410h、i410m、i410r、i410w、r415c、r415l、r415m、r415y、e416d、e416f、e416l、e416n、n418a、n418p、n418v、h421a、h421g、h421l、h421p、h421q、h421y、p422d、p422g、p422i、p422n、p422q、p422s、n423g、n423h、n423i、n423l、n423m、n423p、n423q、n423v、n423w、n423y、g433a、g433n、g433s、p434i、p434l、g435c、g435l、g435m、g435t、g435v、k438a、k438i、k438q、k438s、k438v、w439a、w439d、w439i、w439k、w439l、w439n、w439s、w439t、w439v、w439y、k446a、k446f、a447d、a447y、q449t、v450d、v450n、h452l、t455c、t455m、t455v、n457d、n457e、n457i、n457l、n457v、k458d、k458l、g460m、g460v、t461f、t461i、t461q、t461v、v462c、n465a、n465c、n465e、n465g、n465h、n465l、n465p、n465t、a466f、a466i、a466y、d467i、w469a、w469e、w469h、w469l、w469n、w469q、w469r、w469s、w469y、n471a、n471d、
n471m、n471w、s473n、n475a、n475c、n475d、n475e、n475f、n475g、n475h、n475i、n475l、n475m、n475p、n475q、n475s、n475t、n475v、n475w、g476f、g476l、g477a、g477h、g477q、g477s、g477w、s478a、s478f以及s478q，使用seq id no:1进行编号，并且其中所述变体与seq id no:13的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％但小于100％的序列同一性。
[0118]
在一方面，变体在对应于如下位置的位置处包含以下取代中的一个或多个：n3a、n3c、n3d、n3e、n3f、n3g、n3h、n3l、n3p、n3q、n3s、n3t、n3v、t5e、g7e、g7f、g7h、g7k、g7l、g7p、g7r、g7s、g7t、g7v、g7w、t8s、h16d、h16r、p18d、p18l、p18n、n25t、r26y、d29n、d30f、r35p、r37a、r37n、t40a、t40c、t40d、t40e、t40g、t40h、t40i、t40k、t40n、t40v、t40w、a41c、a41d、a41e、a41h、a41i、a41k、a41n、a41r、a41t、a41v、a41y、w43e、p46a、g50m、g50p、g50q、g57a、g57s、a60e、a60s、a60v、e68f、e68y、q71f、g73d、g73h、g73i、g73l、g73q、g73s、g73t、g73w、t74f、k78s、k78t、t81m、q84i、q84w、q84y、e86k、e86s、s87g、s87l、s87p、h90p、a91q、a91v、a91w、k93v、v97c、v97h、q98e、q98f、q98g、q98i、q98k、q98l、q98m、q98r、q98t、q98y、v103c、v103g、v103s、m105f、g110k、g110r、a111e、a111q、a113t、t114m、t114v、n116c、n116y、v117f、a119h、a119l、a119y、v120e、e121i、n125s、n126i、n128e、q129t、i131y、s132a、s132d、s132h、s132i、s132k、s132l、s132p、s132r、s132t、s132v、s132y、g133e、g133l、g133t、g133v、y135c、y135d、y135e、y135p、i137d、i137n、i137q、i137w、i137y、e138s、e138v、a139l、w140a、w140d、w140m、w140n、w140p、w140s、w140t、w140v、t141g、k142e、k142n、f143h、f143i、f143m、f145g、f145h、f145i、f145l、f145s、p146a、p146h、p146n、g147d、g149f、g149k、w159a、w159e、h161w、f162t、v165p、w167d、w167g、w167p、q169l、q169p、q169v、q169y、r171p、r176e、r176q、r176v、r176y、i177h、i177p、k179a、k179m、k179v、f180d、f180g、r181d、r181e、r181g、r181m、r181y、k185t、k185v、k185w、a186d、w187t、n195y、g196d、n197v、n197y、a204f、a204h、a204l、v206n、m208d、p211c、p211m、e216l、r218q、r219v、t225d、t225f、t225h、t225k、t225l、t225n、t225r、t225y、l228v、l230c、l230f、d231g、d231t、d231v、i235a、k242l、y243d、y243m、y243n、r247g、r247p、r247s、l250s、l250y、t251d、h252p、v253f、v253s、r254d、r254f、r254h、r254p、r254t、r254v、r254w、n255c、n255f、n255p、t257a、t257c、t257d、t257e、t257g、t257p、t257q、t257s、t257w、t257y、k259p、k259v、k259w、k259y、e260v、m261d、m261f、m261p、m261r、m261s、m261w、f262a、f262c、f262e、f262h、f262i、f262k、f262l、f262n、f262p、f262q、f262r、f262s、f262t、f262v、f262w、a263e、a263h、a263w、a265q、l272w、g273q、a274d、l279i、n280p、k281h、k281i、k281s、n283p、w284a、w284d、w284e、w284g、w284i、w284k、w284m、w284n、w284p、w284q、w284s、w284t、w284v、w284y、s287i、s287k、s287l、s287p、s287r、s287t、s287v、s287y、p292l、p292m、p292y、h294n、h294s、n296t、y298d、y298e、n299t、a300g、s303a、s303c、s303d、s303e、s303f、s303g、s303h、s303l、s303m、s303n、s303q、s303t、s303v、s303y、g305e、y307s、a310d、a310n、k311a、k311c、l313q、n314p、n314s、g315e、g315m、g315v、q319c、q319e、k320s、k320w、h321f、h321k、h321l、h321r、h321t、h321v、h321w、p322c、p322e、p322h、p322t、p322y、m323a、m323c、m323d、m323e、m323g、m323h、m323l、m323n、m323p、m323r、m323s、m323t、m323w、m323y、h324a、h324i、
h324p、h324t、h324w、h324y、s334v、g337v、l340m、s342a、s342g、s342t、v344a、v344c、v344i、q345n、e346a、w347a、w347e、w347f、w347g、w347h、w347k、w347n、w347p、w347r、p350a、p350c、p350n、p350t、r359c、r359f、r359g、r359m、r359s、r359w、e360d、e360h、e360p、e360t、e360w、q361d、q361h、q361i、q361k、q361l、q361m、q361n、q361p、q361r、q361s、q361t、q361v、q361w、q361y、g362m、y363a、y363e、y363f、y363g、y363i、y363l、y363q、y363r、y363s、y363t、y363v、y363w、p364c、y368c、y368q、y368r、y368t、y372c、y372g、y372n、y372t、p375q、p375t、p380f、m382i、k383c、k383l、k383p、k383t、a384d、a384n、k385n、k385v、d387c、d387p、d387r、d387w、p388i、e391m、r393k、r393m、n395c、n395d、n395k、n395v、n395w、f396e、f396g、f396t、a397v、y398e、q401h、h402s、d403a、d403e、d403t、f405c、f405n、f405s、f405t、d406v、h407c、h407q、h407t、i410h、i410m、i410r、i410w、r415c、r415l、r415m、r415y、e416d、e416f、e416l、e416n、n418a、n418p、n418v、h421a、h421g、h421l、h421p、h421q、h421y、p422d、p422g、p422i、p422n、p422q、p422s、n423g、n423h、n423i、n423l、n423m、n423p、n423q、n423v、n423w、n423y、g433a、g433n、g433s、p434i、p434l、g435c、g435l、g435m、g435t、g435v、k438a、k438i、k438q、k438s、k438v、w439a、w439d、w439i、w439k、w439l、w439n、w439s、w439t、w439v、w439y、k446a、k446f、a447d、a447y、q449t、v450d、v450n、h452l、t455c、t455m、t455v、n457d、n457e、n457i、n457l、n457v、k458d、k458l、g460m、g460v、t461f、t461i、t461q、t461v、v462c、n465a、n465c、n465e、n465g、n465h、n465l、n465p、n465t、a466f、a466i、a466y、d467i、w469a、w469e、w469h、w469l、w469n、w469q、w469r、w469s、w469y、n471a、n471d、n471m、n471w、s473n、n475a、n475c、n475d、n475e、n475f、n475g、n475h、n475i、n475l、n475m、n475p、n475q、n475s、n475t、n475v、n475w、g476f、g476l、g477a、g477h、g477q、g477s、g477w、s478a、s478f以及s478q，使用seq id no:1进行编号，并且其中所述变体与seq id no:14的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％但小于100％的序列同一性。
[0119]
在一方面，变体在对应于如下位置的位置处包含以下取代中的一个或多个：n3a、n3c、n3d、n3e、n3f、n3g、n3h、n3l、n3p、n3q、n3s、n3t、n3v、t5e、g7e、g7f、g7h、g7k、g7l、g7p、g7r、g7s、g7t、g7v、g7w、t8s、h16d、h16r、p18d、p18l、p18n、n25t、r26y、d29n、d30f、r35p、r37a、r37n、t40a、t40c、t40d、t40e、t40g、t40h、t40i、t40k、t40n、t40v、t40w、a41c、a41d、a41e、a41h、a41i、a41k、a41n、a41r、a41t、a41v、a41y、w43e、p46a、g50m、g50p、g50q、g57a、g57s、a60e、a60s、a60v、e68f、e68y、q71f、g73d、g73h、g73i、g73l、g73q、g73s、g73t、g73w、t74f、k78s、k78t、t81m、q84i、q84w、q84y、e86k、e86s、s87g、s87l、s87p、h90p、a91q、a91v、a91w、k93v、v97c、v97h、q98e、q98f、q98g、q98i、q98k、q98l、q98m、q98r、q98t、q98y、v103c、v103g、v103s、m105f、g110k、g110r、a111e、a111q、a113t、t114m、t114v、n116c、n116y、v117f、a119h、a119l、a119y、v120e、e121i、n125s、n126i、n128e、q129t、i131y、s132a、s132d、s132h、s132i、s132k、s132l、s132p、s132r、s132t、s132v、s132y、g133e、g133l、g133t、g133v、y135c、y135d、y135e、y135p、i137d、i137n、i137q、i137w、i137y、e138s、e138v、a139l、w140a、w140d、w140m、w140n、w140p、w140s、w140t、w140v、t141g、k142e、k142n、f143h、f143i、f143m、f145g、f145h、f145i、f145l、f145s、p146a、p146h、p146n、
g147d、g149f、g149k、w159a、w159e、h161w、f162t、v165p、w167d、w167g、w167p、q169l、q169p、q169v、q169y、r171p、r176e、r176q、r176v、r176y、i177h、i177p、k179a、k179m、k179v、f180d、f180g、r181d、r181e、r181g、r181m、r181y、k185t、k185v、k185w、a186d、w187t、n195y、g196d、n197v、n197y、a204f、a204h、a204l、v206n、m208d、p211c、p211m、e216l、r218q、r219v、t225d、t225f、t225h、t225k、t225l、t225n、t225r、t225y、l228v、l230c、l230f、d231g、d231t、d231v、i235a、k242l、y243d、y243m、y243n、r247g、r247p、r247s、l250s、l250y、t251d、h252p、v253f、v253s、r254d、r254f、r254h、r254p、r254t、r254v、r254w、n255c、n255f、n255p、t257a、t257c、t257d、t257e、t257g、t257p、t257q、t257s、t257w、t257y、k259p、k259v、k259w、k259y、e260v、m261d、m261f、m261p、m261r、m261s、m261w、f262a、f262c、f262e、f262h、f262i、f262k、f262l、f262n、f262p、f262q、f262r、f262s、f262t、f262v、f262w、a263e、a263h、a263w、a265q、l272w、g273q、a274d、l279i、n280p、k281h、k281i、k281s、n283p、w284a、w284d、w284e、w284g、w284i、w284k、w284m、w284n、w284p、w284q、w284s、w284t、w284v、w284y、s287i、s287k、s287l、s287p、s287r、s287t、s287v、s287y、p292l、p292m、p292y、h294n、h294s、n296t、y298d、y298e、n299t、a300g、s303a、s303c、s303d、s303e、s303f、s303g、s303h、s303l、s303m、s303n、s303q、s303t、s303v、s303y、g305e、y307s、a310d、a310n、k311a、k311c、l313q、n314p、n314s、g315e、g315m、g315v、q319c、q319e、k320s、k320w、h321f、h321k、h321l、h321r、h321t、h321v、h321w、p322c、p322e、p322h、p322t、p322y、m323a、m323c、m323d、m323e、m323g、m323h、m323l、m323n、m323p、m323r、m323s、m323t、m323w、m323y、h324a、h324i、h324p、h324t、h324w、h324y、s334v、g337v、l340m、s342a、s342g、s342t、v344a、v344c、v344i、q345n、e346a、w347a、w347e、w347f、w347g、w347h、w347k、w347n、w347p、w347r、p350a、p350c、p350n、p350t、r359c、r359f、r359g、r359m、r359s、r359w、e360d、e360h、e360p、e360t、e360w、q361d、q361h、q361i、q361k、q361l、q361m、q361n、q361p、q361r、q361s、q361t、q361v、q361w、q361y、g362m、y363a、y363e、y363f、y363g、y363i、y363l、y363q、y363r、y363s、y363t、y363v、y363w、p364c、y368c、y368q、y368r、y368t、y372c、y372g、y372n、y372t、p375q、p375t、p380f、m382i、k383c、k383l、k383p、k383t、a384d、a384n、k385n、k385v、d387c、d387p、d387r、d387w、p388i、e391m、r393k、r393m、n395c、n395d、n395k、n395v、n395w、f396e、f396g、f396t、a397v、y398e、q401h、h402s、d403a、d403e、d403t、f405c、f405n、f405s、f405t、d406v、h407c、h407q、h407t、i410h、i410m、i410r、i410w、r415c、r415l、r415m、r415y、e416d、e416f、e416l、e416n、n418a、n418p、n418v、h421a、h421g、h421l、h421p、h421q、h421y、p422d、p422g、p422i、p422n、p422q、p422s、n423g、n423h、n423i、n423l、n423m、n423p、n423q、n423v、n423w、n423y、g433a、g433n、g433s、p434i、p434l、g435c、g435l、g435m、g435t、g435v、k438a、k438i、k438q、k438s、k438v、w439a、w439d、w439i、w439k、w439l、w439n、w439s、w439t、w439v、w439y、k446a、k446f、a447d、a447y、q449t、v450d、v450n、h452l、t455c、t455m、t455v、n457d、n457e、n457i、n457l、n457v、k458d、k458l、g460m、g460v、t461f、t461i、t461q、t461v、v462c、n465a、n465c、n465e、n465g、n465h、n465l、n465p、n465t、a466f、a466i、a466y、d467i、w469a、w469e、w469h、w469l、w469n、w469q、w469r、w469s、w469y、n471a、n471d、n471m、n471w、s473n、n475a、n475c、n475d、n475e、n475f、n475g、n475h、n475i、n475l、
n475m、n475p、n475q、n475s、n475t、n475v、n475w、g476f、g476l、g477a、g477h、g477q、g477s、g477w、s478a、s478f以及s478q，使用seq id no:1进行编号，并且其中所述变体与seq id no:15的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％但小于100％的序列同一性。
[0120]
在一方面，变体在对应于如下位置的位置处包含以下取代中的一个或多个：n3a、n3c、n3d、n3e、n3f、n3g、n3h、n3l、n3p、n3q、n3s、n3t、n3v、t5e、g7e、g7f、g7h、g7k、g7l、g7p、g7r、g7s、g7t、g7v、g7w、t8s、h16d、h16r、p18d、p18l、p18n、n25t、r26y、d29n、d30f、r35p、r37a、r37n、t40a、t40c、t40d、t40e、t40g、t40h、t40i、t40k、t40n、t40v、t40w、a41c、a41d、a41e、a41h、a41i、a41k、a41n、a41r、a41t、a41v、a41y、w43e、p46a、g50m、g50p、g50q、g57a、g57s、a60e、a60s、a60v、e68f、e68y、q71f、g73d、g73h、g73i、g73l、g73q、g73s、g73t、g73w、t74f、k78s、k78t、t81m、q84i、q84w、q84y、e86k、e86s、s87g、s87l、s87p、h90p、a91q、a91v、a91w、k93v、v97c、v97h、q98e、q98f、q98g、q98i、q98k、q98l、q98m、q98r、q98t、q98y、v103c、v103g、v103s、m105f、g110k、g110r、a111e、a111q、a113t、t114m、t114v、n116c、n116y、v117f、a119h、a119l、a119y、v120e、e121i、n125s、n126i、n128e、q129t、i131y、s132a、s132d、s132h、s132i、s132k、s132l、s132p、s132r、s132t、s132v、s132y、g133e、g133l、g133t、g133v、y135c、y135d、y135e、y135p、i137d、i137n、i137q、i137w、i137y、e138s、e138v、a139l、w140a、w140d、w140m、w140n、w140p、w140s、w140t、w140v、t141g、k142e、k142n、f143h、f143i、f143m、f145g、f145h、f145i、f145l、f145s、p146a、p146h、p146n、g147d、g149f、g149k、w159a、w159e、h161w、f162t、v165p、w167d、w167g、w167p、q169l、q169p、q169v、q169y、r171p、r176e、r176q、r176v、r176y、i177h、i177p、k179a、k179m、k179v、f180d、f180g、r181d、r181e、r181g、r181m、r181y、k185t、k185v、k185w、a186d、w187t、n195y、g196d、n197v、n197y、a204f、a204h、a204l、v206n、m208d、p211c、p211m、e216l、r218q、r219v、t225d、t225f、t225h、t225k、t225l、t225n、t225r、t225y、l228v、l230c、l230f、d231g、d231t、d231v、i235a、k242l、y243d、y243m、y243n、r247g、r247p、r247s、l250s、l250y、t251d、h252p、v253f、v253s、r254d、r254f、r254h、r254p、r254t、r254v、r254w、n255c、n255f、n255p、t257a、t257c、t257d、t257e、t257g、t257p、t257q、t257s、t257w、t257y、k259p、k259v、k259w、k259y、e260v、m261d、m261f、m261p、m261r、m261s、m261w、f262a、f262c、f262e、f262h、f262i、f262k、f262l、f262n、f262p、f262q、f262r、f262s、f262t、f262v、f262w、a263e、a263h、a263w、a265q、l272w、g273q、a274d、l279i、n280p、k281h、k281i、k281s、n283p、w284a、w284d、w284e、w284g、w284i、w284k、w284m、w284n、w284p、w284q、w284s、w284t、w284v、w284y、s287i、s287k、s287l、s287p、s287r、s287t、s287v、s287y、p292l、p292m、p292y、h294n、h294s、n296t、y298d、y298e、n299t、a300g、s303a、s303c、s303d、s303e、s303f、s303g、s303h、s303l、s303m、s303n、s303q、s303t、s303v、s303y、g305e、y307s、a310d、a310n、k311a、k311c、l313q、n314p、n314s、g315e、g315m、g315v、q319c、q319e、k320s、k320w、h321f、h321k、h321l、h321r、h321t、h321v、h321w、p322c、p322e、p322h、p322t、p322y、m323a、m323c、m323d、m323e、m323g、m323h、m323l、m323n、m323p、m323r、m323s、m323t、m323w、m323y、h324a、h324i、h324p、h324t、h324w、h324y、s334v、g337v、l340m、s342a、s342g、s342t、v344a、v344c、
v344i、q345n、e346a、w347a、w347e、w347f、w347g、w347h、w347k、w347n、w347p、w347r、p350a、p350c、p350n、p350t、r359c、r359f、r359g、r359m、r359s、r359w、e360d、e360h、e360p、e360t、e360w、q361d、q361h、q361i、q361k、q361l、q361m、q361n、q361p、q361r、q361s、q361t、q361v、q361w、q361y、g362m、y363a、y363e、y363f、y363g、y363i、y363l、y363q、y363r、y363s、y363t、y363v、y363w、p364c、y368c、y368q、y368r、y368t、y372c、y372g、y372n、y372t、p375q、p375t、p380f、m382i、k383c、k383l、k383p、k383t、a384d、a384n、k385n、k385v、d387c、d387p、d387r、d387w、p388i、e391m、r393k、r393m、n395c、n395d、n395k、n395v、n395w、f396e、f396g、f396t、a397v、y398e、q401h、h402s、d403a、d403e、d403t、f405c、f405n、f405s、f405t、d406v、h407c、h407q、h407t、i410h、i410m、i410r、i410w、r415c、r415l、r415m、r415y、e416d、e416f、e416l、e416n、n418a、n418p、n418v、h421a、h421g、h421l、h421p、h421q、h421y、p422d、p422g、p422i、p422n、p422q、p422s、n423g、n423h、n423i、n423l、n423m、n423p、n423q、n423v、n423w、n423y、g433a、g433n、g433s、p434i、p434l、g435c、g435l、g435m、g435t、g435v、k438a、k438i、k438q、k438s、k438v、w439a、w439d、w439i、w439k、w439l、w439n、w439s、w439t、w439v、w439y、k446a、k446f、a447d、a447y、q449t、v450d、v450n、h452l、t455c、t455m、t455v、n457d、n457e、n457i、n457l、n457v、k458d、k458l、g460m、g460v、t461f、t461i、t461q、t461v、v462c、n465a、n465c、n465e、n465g、n465h、n465l、n465p、n465t、a466f、a466i、a466y、d467i、w469a、w469e、w469h、w469l、w469n、w469q、w469r、w469s、w469y、n471a、n471d、n471m、n471w、s473n、n475a、n475c、n475d、n475e、n475f、n475g、n475h、n475i、n475l、n475m、n475p、n475q、n475s、n475t、n475v、n475w、g476f、g476l、g477a、g477h、g477q、g477s、g477w、s478a、s478f以及s478q，使用seq id no:1进行编号，并且其中所述变体与seq id no:16的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％但小于100％的序列同一性。
[0121]
在一方面，变体在对应于如下位置的位置处包含以下取代中的一个或多个：n3a、n3c、n3d、n3e、n3f、n3g、n3h、n3l、n3p、n3q、n3s、n3t、n3v、t5e、g7e、g7f、g7h、g7k、g7l、g7p、g7r、g7s、g7t、g7v、g7w、t8s、h16d、h16r、p18d、p18l、p18n、n25t、r26y、d29n、d30f、r35p、r37a、r37n、t40a、t40c、t40d、t40e、t40g、t40h、t40i、t40k、t40n、t40v、t40w、a41c、a41d、a41e、a41h、a41i、a41k、a41n、a41r、a41t、a41v、a41y、w43e、p46a、g50m、g50p、g50q、g57a、g57s、a60e、a60s、a60v、e68f、e68y、q71f、g73d、g73h、g73i、g73l、g73q、g73s、g73t、g73w、t74f、k78s、k78t、t81m、q84i、q84w、q84y、e86k、e86s、s87g、s87l、s87p、h90p、a91q、a91v、a91w、k93v、v97c、v97h、q98e、q98f、q98g、q98i、q98k、q98l、q98m、q98r、q98t、q98y、v103c、v103g、v103s、m105f、g110k、g110r、a111e、a111q、a113t、t114m、t114v、n116c、n116y、v117f、a119h、a119l、a119y、v120e、e121i、n125s、n126i、n128e、q129t、i131y、s132a、s132d、s132h、s132i、s132k、s132l、s132p、s132r、s132t、s132v、s132y、g133e、g133l、g133t、g133v、y135c、y135d、y135e、y135p、i137d、i137n、i137q、i137w、i137y、e138s、e138v、a139l、w140a、w140d、w140m、w140n、w140p、w140s、w140t、w140v、t141g、k142e、k142n、f143h、f143i、f143m、f145g、f145h、f145i、f145l、f145s、p146a、p146h、p146n、g147d、g149f、g149k、w159a、w159e、h161w、f162t、v165p、w167d、w167g、w167p、q169l、
q169p、q169v、q169y、r171p、r176e、r176q、r176v、r176y、i177h、i177p、k179a、k179m、k179v、f180d、f180g、r181d、r181e、r181g、r181m、r181y、k185t、k185v、k185w、a186d、w187t、n195y、g196d、n197v、n197y、a204f、a204h、a204l、v206n、m208d、p211c、p211m、e216l、r218q、r219v、t225d、t225f、t225h、t225k、t225l、t225n、t225r、t225y、l228v、l230c、l230f、d231g、d231t、d231v、i235a、k242l、y243d、y243m、y243n、r247g、r247p、r247s、l250s、l250y、t251d、h252p、v253f、v253s、r254d、r254f、r254h、r254p、r254t、r254v、r254w、n255c、n255f、n255p、t257a、t257c、t257d、t257e、t257g、t257p、t257q、t257s、t257w、t257y、k259p、k259v、k259w、k259y、e260v、m261d、m261f、m261p、m261r、m261s、m261w、f262a、f262c、f262e、f262h、f262i、f262k、f262l、f262n、f262p、f262q、f262r、f262s、f262t、f262v、f262w、a263e、a263h、a263w、a265q、l272w、g273q、a274d、l279i、n280p、k281h、k281i、k281s、n283p、w284a、w284d、w284e、w284g、w284i、w284k、w284m、w284n、w284p、w284q、w284s、w284t、w284v、w284y、s287i、s287k、s287l、s287p、s287r、s287t、s287v、s287y、p292l、p292m、p292y、h294n、h294s、n296t、y298d、y298e、n299t、a300g、s303a、s303c、s303d、s303e、s303f、s303g、s303h、s303l、s303m、s303n、s303q、s303t、s303v、s303y、g305e、y307s、a310d、a310n、k311a、k311c、l313q、n314p、n314s、g315e、g315m、g315v、q319c、q319e、k320s、k320w、h321f、h321k、h321l、h321r、h321t、h321v、h321w、p322c、p322e、p322h、p322t、p322y、m323a、m323c、m323d、m323e、m323g、m323h、m323l、m323n、m323p、m323r、m323s、m323t、m323w、m323y、h324a、h324i、h324p、h324t、h324w、h324y、s334v、g337v、l340m、s342a、s342g、s342t、v344a、v344c、v344i、q345n、e346a、w347a、w347e、w347f、w347g、w347h、w347k、w347n、w347p、w347r、p350a、p350c、p350n、p350t、r359c、r359f、r359g、r359m、r359s、r359w、e360d、e360h、e360p、e360t、e360w、q361d、q361h、q361i、q361k、q361l、q361m、q361n、q361p、q361r、q361s、q361t、q361v、q361w、q361y、g362m、y363a、y363e、y363f、y363g、y363i、y363l、y363q、y363r、y363s、y363t、y363v、y363w、p364c、y368c、y368q、y368r、y368t、y372c、y372g、y372n、y372t、p375q、p375t、p380f、m382i、k383c、k383l、k383p、k383t、a384d、a384n、k385n、k385v、d387c、d387p、d387r、d387w、p388i、e391m、r393k、r393m、n395c、n395d、n395k、n395v、n395w、f396e、f396g、f396t、a397v、y398e、q401h、h402s、d403a、d403e、d403t、f405c、f405n、f405s、f405t、d406v、h407c、h407q、h407t、i410h、i410m、i410r、i410w、r415c、r415l、r415m、r415y、e416d、e416f、e416l、e416n、n418a、n418p、n418v、h421a、h421g、h421l、h421p、h421q、h421y、p422d、p422g、p422i、p422n、p422q、p422s、n423g、n423h、n423i、n423l、n423m、n423p、n423q、n423v、n423w、n423y、g433a、g433n、g433s、p434i、p434l、g435c、g435l、g435m、g435t、g435v、k438a、k438i、k438q、k438s、k438v、w439a、w439d、w439i、w439k、w439l、w439n、w439s、w439t、w439v、w439y、k446a、k446f、a447d、a447y、q449t、v450d、v450n、h452l、t455c、t455m、t455v、n457d、n457e、n457i、n457l、n457v、k458d、k458l、g460m、g460v、t461f、t461i、t461q、t461v、v462c、n465a、n465c、n465e、n465g、n465h、n465l、n465p、n465t、a466f、a466i、a466y、d467i、w469a、w469e、w469h、w469l、w469n、w469q、w469r、w469s、w469y、n471a、n471d、n471m、n471w、s473n、n475a、n475c、n475d、n475e、n475f、n475g、n475h、n475i、n475l、n475m、n475p、n475q、n475s、n475t、n475v、n475w、g476f、g476l、g477a、g477h、g477q、
g477s、g477w、s478a、s478f以及s478q，使用seq id no:1进行编号，并且其中所述变体与seq id no:17多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％但小于100％的序列同一性。
[0122]
在一方面，本发明的α-淀粉酶变体相对于亲本多肽具有改善的特性，其中该改善的特性选自由以下组成的组：增加的催化效率、增加的催化速率、增加的化学稳定性、增加的氧化稳定性、增加的ph活性、增加的ph稳定性、增加的比活性、存储条件下增加的稳定性、增加的底物结合、增加的底物切割、增加的底物特异性、增加的底物稳定性、增加的表面特性、增加的热活性和增加的热稳定性。
[0123]
在一方面，本发明的α-淀粉酶变体相对于所述亲本多肽具有改善的特性。
[0124]
在一方面，本发明的α-淀粉酶变体相对于所述seq id no:1的亲本多肽具有改善的特性。
[0125]
在一方面，本发明的α-淀粉酶变体相对于所述seq id no:2的亲本多肽具有改善的特性。
[0126]
在一方面，本发明的α-淀粉酶变体相对于所述亲本多肽具有改善的特性并且其中所述的改善的特性是增加的比活性。
[0127]
在一方面，本发明的α-淀粉酶变体相对于所述亲本多肽具有改善的特性并且其中所述增加的比活性在标准a洗涤剂组合物中。
[0128]
在一方面，本发明的α-淀粉酶变体相对于所述亲本多肽在标准a洗涤剂组合物中具有以改善因子(if)》1.0测量的增加的比活性。
[0129]
在一方面，本发明的α-淀粉酶变体相对于所述亲本多肽在标准a洗涤剂组合物中具有以改善因子(if)≥1.1测量的增加的比活性。
[0130]
在一方面，本发明的α-淀粉酶变体相对于所述亲本多肽在标准a洗涤剂组合物中具有以改善因子(if)≥1.2测量的增加的比活性。
[0131]
在一方面，本发明的α-淀粉酶变体相对于所述亲本多肽在标准a洗涤剂组合物中具有以改善因子(if)≥1.3测量的增加的比活性。
[0132]
在一方面，本发明的α-淀粉酶变体相对于所述亲本多肽在标准a洗涤剂组合物中具有以改善因子(if)≥1.4测量的增加的比活性。
[0133]
在一方面，本发明的α-淀粉酶变体相对于所述亲本多肽在标准a洗涤剂组合物中具有以改善因子(if)≥1.5测量的增加的比活性。
[0134]
在一方面，本发明的α-淀粉酶变体相对于所述亲本多肽在标准a洗涤剂组合物中具有以改善因子(if)≥2.0测量的增加的比活性。
[0135]
在一方面，本发明的α-淀粉酶变体相对于所述亲本多肽在标准a洗涤剂组合物中具有以改善因子(if)≥2.5测量的增加的比活性。
[0136]
在另一方面，该变体在对应于位置3的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置3的位置处的氨基酸被ala、arg、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代n3a或n3c或n3d或n3e或n3f或n3g或n3h或n3l或n3p或n3q或n3s或n3t或n3v，或由其组成。
[0137]
在另一方面，该变体在对应于位置5的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，
在对应于位置5的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代t5e，或由其组成。
[0138]
在另一方面，该变体在对应于位置7的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置7的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代g7e或g7f或g7h或g7k或g7l或g7p或g7r或g7s或g7t或g7v或g7w，或由其组成。
[0139]
在另一方面，该变体在对应于位置8的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置8的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代t8s，或由其组成。
[0140]
在另一方面，该变体在对应于位置16的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置16的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代h16d或h16r，或由其组成。
[0141]
在另一方面，该变体在对应于位置18的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，对应于位置18的一个位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代p18d或p18l或p18n，或由其组成。
[0142]
在另一方面，该变体在对应于位置25的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置25的位置处的氨基酸被ala、arg、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代n25t，或由其组成。
[0143]
在另一方面，该变体在对应于位置26的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置26的位置处的氨基酸被ala、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代r26y，或由其组成。
[0144]
在另一方面，该变体在对应于位置29的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置29的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代d29n，或由其组成。
[0145]
在另一方面，该变体在对应于位置30的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置30的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代d30f，或由其组成。
[0146]
在另一方面，该变体在对应于位置35的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置35的位置处的氨基酸被ala、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代r35p，或由其组成。
[0147]
在另一方面，该变体在对应于位置37的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置37的位置处的氨基酸被ala、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代r37a或r37n，或由其组成。
[0148]
在另一方面，该变体在对应于位置40的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置40的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代t40a或t40c或t40d或t40e或t40g或t40h或t40i或t40k或t40n或t40v或t40w，或由其组成。
[0149]
在另一方面，该变体在对应于位置41的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置41的位置处的氨基酸被arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代a41c或a41d或a41e或a41h或a41i或a41k或a41n或a41r或a41t或a41v或a41y，或由其组成。
[0150]
在另一方面，该变体在对应于位置43的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置43的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代w43e，或由其组成。
[0151]
在另一方面，该变体在对应于位置46的位置处包含取代，或由其组成。在另一个方面，对应于位置46的一个位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代p46a，或由其组成。
[0152]
在另一方面，该变体在对应于位置50的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置50的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代g50m或g50p或g50q，或由其组成。
[0153]
在另一方面，该变体在对应于位置57的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置57的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代g57a或g57s，或由其组成。
[0154]
在另一方面，该变体在对应于位置60的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置60的位置处的氨基酸被arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代a60e或a60s或a60v，或由其组成。
[0155]
在另一方面，该变体在对应于位置68的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置68的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代e68f或e68y，或由其组成。
[0156]
在另一方面，该变体在对应于位置71的位置处包含取代，或由其组成。在另一方
面，在对应于位置71的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代q71f，或由其组成。
[0157]
在另一方面，该变体在对应于位置73的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置73的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代g73d或g73h或g73i或g73l或g73q或g73s或g73t或g73w，或由其组成。
[0158]
在另一方面，该变体在对应于位置74的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置74的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代t74f，或由其组成。
[0159]
在另一方面，该变体在对应于位置78的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置78的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代k78s或k78t，或由其组成。
[0160]
在另一方面，该变体在对应于位置81的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置81的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代t81m，或由其组成。
[0161]
在另一方面，该变体在对应于位置84的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置84的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代q84i或q84w或q84y，或由其组成。
[0162]
在另一方面，该变体在对应于位置86的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置86的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代e86k或e86s，或由其组成。
[0163]
在另一方面，该变体在对应于位置87的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置87的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代s87g或s87l或s87p，或由其组成。
[0164]
在另一方面，该变体在对应于位置90的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置90的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代h90p，或由其组成。
[0165]
在另一方面，该变体在对应于位置91的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置91的位置处的氨基酸被arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代a91q或a91v或a91w，或由其组成。
[0166]
在另一方面，该变体在对应于位置93的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置93的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代k93v，或由其组成。
[0167]
在另一方面，该变体在对应于位置97的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置97的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp或tyr取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代v97c或v97h，或由其组成。
[0168]
在另一方面，该变体在对应于位置98的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置98的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代q98e或q98f或q98g或q98i或q98k或q98l或q98m或q98r或q98t或q98y，或由其组成。
[0169]
在另一方面，该变体在对应于位置103的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置103的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp或tyr取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代v103c或v10g或v103s，或由其组成。
[0170]
在另一方面，该变体在对应于位置105的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置105的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代m105f，或由其组成。
[0171]
在另一方面，该变体在对应于位置110的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置110的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代g110k或g110r，或由其组成。
[0172]
在另一方面，该变体在对应于位置111的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置111的位置处的氨基酸被arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代a111e或a111q，或由其组成。
[0173]
在另一方面，该变体在对应于位置113的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置113的位置处的氨基酸被arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代a113t，或由其组成。
[0174]
在另一方面，该变体在对应于位置114的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置114的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代t114m或t114v，或由其组成。
[0175]
在另一方面，该变体在对应于位置116的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置116的位置处的氨基酸被arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、
lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代n116c或n116y，或由其组成。
[0176]
在另一方面，该变体在对应于位置117的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置117的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp或tyr取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代v117f，或由其组成。
[0177]
在另一方面，该变体在对应于位置119的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置119的位置处的氨基酸被arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代a119h或a119l或a119y，或由其组成。
[0178]
在另一方面，该变体在对应于位置120的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置120的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp或tyr取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代v120e，或由其组成。
[0179]
在另一方面，该变体在对应于位置121的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置121的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代e121i，或由其组成。
[0180]
在另一方面，该变体在对应于位置125的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置125的位置处的氨基酸被ala、arg、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代n125s，或由其组成。
[0181]
在另一方面，该变体在对应于位置126的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置126的位置处的氨基酸被ala、arg、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代n126i，或由其组成。
[0182]
在另一方面，该变体在对应于位置128的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置128的位置处的氨基酸被ala、arg、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代n128e，或由其组成。
[0183]
在另一方面，该变体在对应于位置129的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置129的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代q129t，或由其组成。
[0184]
在另一方面，该变体在对应于位置131的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置131的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代i131y，或由其组成。
[0185]
在另一方面，该变体在对应于位置132的位置处包含取代，或由其组成。在另一方
面，在对应于位置132的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代s132a或s132d或s132h或s132i或s132k或s132l或s132p或s132r或s132t或s132v或s132y，或由其组成。
[0186]
在另一方面，该变体在对应于位置133的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置133的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代g133e或g133l或g133t或g133v，或由其组成。
[0187]
在另一方面，该变体在对应于位置135的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置135的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代y135c或y135d或y135e或y135p，或由其组成。
[0188]
在另一方面，该变体在对应于位置137的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置137的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代i137d或i137n或i137q或i137w或i137y，或由其组成。
[0189]
在另一方面，该变体在对应于位置138的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置138的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代e138s或e138v，或由其组成。
[0190]
在另一方面，该变体在对应于位置139的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置139的位置处的氨基酸被arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代a139l，或由其组成。
[0191]
在另一方面，该变体在对应于位置140的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置140的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代w140a或w140d或w140m或w140n或w140p或w140s或w140t或w140v，或由其组成。
[0192]
在另一方面，该变体在对应于位置141的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置141的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代t141g，或由其组成。
[0193]
在另一方面，该变体在对应于位置142的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置142的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代k142e或k142n，或由其组成。
[0194]
在另一方面，该变体在对应于位置143的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置143的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多
肽的取代f143h或f143i或f143m，或由其组成。
[0195]
在另一方面，该变体在对应于位置145的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置145的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代f145g或f145h或f145i或f145l或f145s，或由其组成。
[0196]
在另一方面，该变体在对应于位置146的位置处包含取代，或由其组成。在另一个方面，对应于位置146的一个位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代p146a或p146h或p146n，或由其组成。
[0197]
在另一方面，该变体在对应于位置147的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置147的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代g147d，或由其组成。
[0198]
在另一方面，该变体在对应于位置149的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置149的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代g149f或g149k，或由其组成。
[0199]
在另一方面，该变体在对应于位置159的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置159的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代w159a或w159e，或由其组成。
[0200]
在另一方面，该变体在对应于位置161的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置161的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代h161w，或由其组成。
[0201]
在另一方面，该变体在对应于位置162的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置162的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代f162t，或由其组成。
[0202]
在另一方面，该变体在对应于位置165的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置165的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp或tyr取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代v165p，或由其组成。
[0203]
在另一方面，该变体在对应于位置167的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置167的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代w167d或w167g或w167p，或由其组成。
[0204]
在另一方面，该变体在对应于位置169的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置169的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、glu、gly、his、ile、leu、
lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代q169l或q169p或q169v或q169y，或由其组成。
[0205]
在另一方面，该变体在对应于位置171的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置171的位置处的氨基酸被ala、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代r171p，或由其组成。
[0206]
在另一方面，该变体在对应于位置176的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置176的位置处的氨基酸被ala、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代r176e或r176q或r176v或r176y，或由其组成。
[0207]
在另一方面，该变体在对应于位置177的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置177的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代i177h或i177p，或由其组成。
[0208]
在另一方面，该变体在对应于位置179的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置179的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代k179a或k179m或k179v，或由其组成。
[0209]
在另一方面，该变体在对应于位置180的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置180的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代f180d或f180g，或由其组成。
[0210]
在另一方面，该变体在对应于位置181的位置处包含缺失或取代，或由其组成。在另一方面，氨基酸对应于位置181的位置处的seq id no:1的多肽的缺失。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的缺失r181*，或由其组成。在另一方面，在对应于位置181的位置处的氨基酸被ala、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代r181d或r181e或r181g或r181m或r181y，或由其组成。
[0211]
在另一方面，该变体在对应于位置185的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置185的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代k185t或k185v或k185w，或由其组成。
[0212]
在另一方面，该变体在对应于位置186的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置186的位置处的氨基酸被arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代a186d，或由其组成。
[0213]
在另一方面，该变体在对应于位置187的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置187的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多
肽的取代w187t，或由其组成。
[0214]
在另一方面，该变体在对应于位置195的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置195的位置处的氨基酸被ala、arg、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代n195y，或由其组成。
[0215]
在另一方面，该变体在对应于位置196的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置196的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代g196d，或由其组成。
[0216]
在另一方面，该变体在对应于位置197的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置197的位置处的氨基酸被ala、arg、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代n197v或n197y，或由其组成。
[0217]
在另一方面，该变体在对应于位置204的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置204的位置处的氨基酸被arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代a204f或a204h或a204l，或由其组成。
[0218]
在另一方面，该变体在对应于位置206的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置206的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp或tyr取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代v206n，或由其组成。
[0219]
在另一方面，该变体在对应于位置208的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置208的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代m208d，或由其组成。
[0220]
在另一方面，该变体在对应于位置211的位置处包含取代，或由其组成。在另一个方面，对应于位置211的一个位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代p211c或p211m，或由其组成。
[0221]
在另一方面，该变体在对应于位置216的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置216的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代e216l，或由其组成。
[0222]
在另一方面，该变体在对应于位置218的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置218的位置处的氨基酸被ala、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代r218q，或由其组成。
[0223]
在另一方面，该变体在对应于位置219的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置219的位置处的氨基酸被ala、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、
lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代r219v，或由其组成。
[0224]
在另一方面，该变体在对应于位置225的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置225的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代t225d或t225f或t225h或t225k或t225l或t225n或t225r或t225y，或由其组成。
[0225]
在另一方面，该变体在对应于位置228的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置228的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代l228v，或由其组成。
[0226]
在另一方面，该变体在对应于位置230的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置230的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代l230c或l230f，或由其组成。
[0227]
在另一方面，该变体在对应于位置231的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置231的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代d213g或d231t或d231v，或由其组成。
[0228]
在另一方面，该变体在对应于位置235的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置235的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代i235a，或由其组成。
[0229]
在另一方面，该变体在对应于位置242的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置242的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代k242l，或由其组成。
[0230]
在另一方面，该变体在对应于位置243的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置243的位置处的氨基酸被ala、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代y243d或y243m或y243n，或由其组成。
[0231]
在另一方面，该变体在对应于位置247的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，对应于位置247的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代r247g或r247p或r247s，或由其组成。
[0232]
在另一方面，该变体在对应于位置250的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置250的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代l250s或l250y，或由其组成。
[0233]
在另一方面，该变体在对应于位置251的位置处包含取代，或由其组成。在另一方
面，在对应于位置251的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代t251d，或由其组成。
[0234]
在另一方面，该变体在对应于位置252的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置252的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代h252p，或由其组成。
[0235]
在另一方面，该变体在对应于位置253的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置253的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp或tyr取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代v253s或v253f，或由其组成。
[0236]
在另一方面，该变体在对应于位置254的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置254的位置处的氨基酸被ala、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代r254d或r254f或r254h或r254p或r254t或r254v或r254w，或由其组成。
[0237]
在另一方面，该变体在对应于位置255的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置255的位置处的氨基酸被ala、arg、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代n255c或n255f或n255p，或由其组成。
[0238]
在另一方面，该变体在对应于位置257的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置257的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代t257a或t257c或t257d或t257e或t257g或t257p或t257q或t257s或t257w或t257y，或由其组成。
[0239]
在另一方面，该变体在对应于位置259的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置259的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代k259p或k259v或k259w或k259y，或由其组成。
[0240]
在另一方面，该变体在对应于位置260的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置260的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代e260v，或由其组成。
[0241]
在另一方面，该变体在对应于位置261的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置261的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代m261d或m261f或m261p或m261r或m261s或m261w，或由其组成。
[0242]
在另一方面，该变体在对应于位置262的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置262的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多
肽的取代f262a或f262c或f262e或f262h或f262i或f262k或f262l或f262n或f262p或f262q或f262r或f262s或f262t或f262v或f262w，或由其组成。
[0243]
在另一方面，该变体在对应于位置263的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置263的位置处的氨基酸被arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代a263e或a263h或a263w，或由其组成。
[0244]
在另一方面，该变体在对应于位置265的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置265的位置处的氨基酸被arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代a265q，或由其组成。
[0245]
在另一方面，该变体在对应于位置272的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置272的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代l272w，或由其组成。
[0246]
在另一方面，该变体在对应于位置273的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置273的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代g273q，或由其组成。
[0247]
在另一方面，该变体在对应于位置274的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置274的位置处的氨基酸被arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代a274d，或由其组成。
[0248]
在另一方面，该变体在对应于位置279的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置279的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代l279i，或由其组成。
[0249]
在另一方面，该变体在对应于位置280的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置280的位置处的氨基酸被ala、arg、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代n280p，或由其组成。
[0250]
在另一方面，该变体在对应于位置281的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置281的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代k281h或k281i或k281s，或由其组成。
[0251]
在另一方面，该变体在对应于位置283的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置283的位置处的氨基酸被ala、arg、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代n283p，或由其组成。
[0252]
在另一方面，该变体在对应于位置284的位置处包含取代，或由其组成。在另一方
面，在对应于位置284的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代w284a或w284d或w284e或w284g或w284i或w284k或w284m或w284n或w284p或w284q或w284s或w284t或w284v或w284y，或由其组成。
[0253]
在另一方面，该变体在对应于位置287的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置287的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代s287i或s287k或s287l或s287p或s287r或s287t或s287v或s287y，或由其组成。
[0254]
在另一方面，该变体在对应于位置292的位置处包含取代，或由其组成。在另一个方面，对应于位置292的一个位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代p292l或p292m或p292y，或由其组成。
[0255]
在另一方面，该变体在对应于位置294的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置294的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代h294n或h249s，或由其组成。
[0256]
在另一方面，该变体在对应于位置296的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置296的位置处的氨基酸被ala、arg、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代n296t，或由其组成。
[0257]
在另一方面，该变体在对应于位置298的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置298的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代y298d或y298e，或由其组成。
[0258]
在另一方面，该变体在对应于位置299的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置299的位置处的氨基酸被ala、arg、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代n299t，或由其组成。
[0259]
在另一方面，该变体在对应于位置300的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置300的位置处的氨基酸被arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代a300g，或由其组成。
[0260]
在另一方面，该变体在对应于位置303的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置303的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代s303a或s303c或s303d或s303e或s303f或s303g或s303h或s303l或s303m或s303n或s303q或s303t或s303v或s303y，或由其组成。
[0261]
在另一方面，该变体在对应于位置305的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置305的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、his、ile、leu、
lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代g305e，或由其组成。
[0262]
在另一方面，该变体在对应于位置307的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置307的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代y307s，或由其组成。
[0263]
在另一方面，该变体在对应于位置310的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置310的位置处的氨基酸被arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代a310d或a310n，或由其组成。
[0264]
在另一方面，该变体在对应于位置311的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置311的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代k311c或k311c，或由其组成。
[0265]
在另一方面，该变体在对应于位置313的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置313的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代l313q，或由其组成。
[0266]
在另一方面，该变体在对应于位置314的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置314的位置处的氨基酸被ala、arg、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代n314s或n314p，或由其组成。
[0267]
在另一方面，该变体在对应于位置315的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置315的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代g315e或g315m或g315v，或由其组成。
[0268]
在另一方面，该变体在对应于位置319的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置319的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代q319c或q319e，或由其组成。
[0269]
在另一方面，该变体在对应于位置320的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置320的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代k320s或k320w，或由其组成。
[0270]
在另一方面，该变体在对应于位置321的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置321的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代h321f或h321k或h321l或h321r或h321t或h321v或h321w，或由其组成。
[0271]
在另一方面，该变体在对应于位置322的位置处包含取代，或由其组成。在另一个
方面，对应于位置322的一个位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代p322c或p322e或p322h或p322t或p322y，或由其组成。
[0272]
在另一方面，该变体在对应于位置323的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置323的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代m323a或m323c或m323d或m323e或m323g或m323h或m323l或m323n或m323p或m323r或m323s或m323t或m323w或m323y，或由其组成。
[0273]
在另一方面，该变体在对应于位置324的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置324的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代h324a或h324i或h324p或h324t或h324w或h324y，或由其组成。
[0274]
在另一方面，该变体在对应于位置334的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置334的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代s334v，或由其组成。
[0275]
在另一方面，该变体在对应于位置337的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置337的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代g337v，或由其组成。
[0276]
在另一方面，该变体在对应于位置340的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置340的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代l340m，或由其组成。
[0277]
在另一方面，该变体在对应于位置342的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置342的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代s342a或s342g或s342t，或由其组成。
[0278]
在另一方面，该变体在对应于位置344的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置344的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp或tyr取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代v344a或v344c或v344i，或由其组成。
[0279]
在另一方面，该变体在对应于位置345的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置345的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代q345n，或由其组成。
[0280]
在另一方面，该变体在对应于位置346的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置346的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多
肽的取代e346a，或由其组成。
[0281]
在另一方面，该变体在对应于位置347的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置347的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代w347a或w347e或w347f或w347g或w347h或w347k或w347n或w347p或w347r，或由其组成。
[0282]
在另一方面，该变体在对应于位置350的位置处包含取代，或由其组成。在另一个方面，对应于位置350的一个位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代p350a或p350c或p350n或p350t，或由其组成。
[0283]
在另一方面，该变体在对应于位置359的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置359的位置处的氨基酸被ala、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代r359c或r359f或r359g或r359m或r359s或r359w，或由其组成。
[0284]
在另一方面，该变体在对应于位置360的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置360的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代e360d或e360h或e360p或e360t或e360w，或由其组成。
[0285]
在另一方面，该变体在对应于位置361的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置361的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代q361d或q361h或q361i或q361k或q361l或q361m或q361n或q361p或q361r或q361s或q361t或q361v或q361w或q361y，或由其组成。
[0286]
在另一方面，该变体在对应于位置362的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置362的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代g326m，或由其组成。
[0287]
在另一方面，该变体在对应于位置362的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置362的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代y363a或y363e或y363f或y363g或y363i或y363l或y363q或y363r或y363s或y363t或y363v或y363w，或由其组成。
[0288]
在另一方面，该变体在对应于位置364的位置处包含取代，或由其组成。在另一个方面，对应于位置364的一个位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代p364c，或由其组成。
[0289]
在另一方面，该变体在对应于位置368的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置368的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多
肽的取代y368c或y368q或y368r或y368t，或由其组成。
[0290]
在另一方面，该变体在对应于位置372的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置372的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代y372c、y327g、y327n、y327t，或由其组成。
[0291]
在另一方面，该变体在对应于位置375的位置处包含取代，或由其组成。在另一个方面，对应于位置375的一个位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代p375q或p375t，或由其组成。
[0292]
在另一方面，该变体在对应于位置380的位置处包含取代，或由其组成。在另一个方面，对应于位置380的一个位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代p380f，或由其组成。
[0293]
在另一方面，该变体在对应于位置382的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置382的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代m328i，或由其组成。
[0294]
在另一方面，该变体在对应于位置383的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置383的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代k383c或k383l或k383p或k383t，或由其组成。
[0295]
在另一方面，该变体在对应于位置384的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置384的位置处的氨基酸被arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代a384d或a384n，或由其组成。
[0296]
在另一方面，该变体在对应于位置385的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置385的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代k385n或k385v，或由其组成。
[0297]
在另一方面，该变体在对应于位置387的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置387的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代d387c或d387p或d387r或d387w，或由其组成。
[0298]
在另一方面，该变体在对应于位置388的位置处包含取代，或由其组成。在另一个方面，对应于位置388的一个位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代p388i，或由其组成。
[0299]
在另一方面，该变体在对应于位置391的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置391的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、gly、his、ile、leu、
lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代e399m，或由其组成。
[0300]
在另一方面，该变体在对应于位置393的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置393的位置处的氨基酸被ala、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代r393k或r393m，或由其组成。
[0301]
在另一方面，该变体在对应于位置395的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置395的位置处的氨基酸被ala、arg、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代n395c或n395d或n395k或n395v或n395w，或由其组成。
[0302]
在另一方面，该变体在对应于位置396的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置396的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代f396e或f396g或f396t，或由其组成。
[0303]
在另一方面，该变体在对应于位置397的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置397的位置处的氨基酸被arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代a379v，或由其组成。
[0304]
在另一方面，该变体在对应于位置398的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置398的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代y398e，或由其组成。
[0305]
在另一方面，该变体在对应于位置401的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置401的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代q401h，或由其组成。
[0306]
在另一方面，该变体在对应于位置402的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置402的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代h402s，或由其组成。
[0307]
在另一方面，该变体在对应于位置403的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置403的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代d403a或d403e或d403t，或由其组成。
[0308]
在另一方面，该变体在对应于位置405的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置405的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代f405c或f405n或f405s或f405t，或由其组成。
[0309]
在另一方面，该变体在对应于位置406的位置处包含取代，或由其组成。在另一方
面，在对应于位置406的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代d406v，或由其组成。
[0310]
在另一方面，该变体在对应于位置407的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置407的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代h407c或h407q或h407t，或由其组成。
[0311]
在另一方面，该变体在对应于位置407的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置407的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代h407c或h407q或h407t，或由其组成。
[0312]
在另一方面，该变体在对应于位置410的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置410的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代i410h或i410m或i410r或i410w，或由其组成。
[0313]
在另一方面，该变体在对应于位置415的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置415的位置处的氨基酸被ala、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代r415c或r415l或r415m或r415y，或由其组成。
[0314]
在另一方面，该变体在对应于位置416的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置416的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代e416d或e416f或e416l或e416n，或由其组成。
[0315]
在另一方面，该变体在对应于位置418的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置418的位置处的氨基酸被ala、arg、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代n418a或n418p或n418v，或由其组成。
[0316]
在另一方面，该变体在对应于位置421的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置421的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代h421a或h421g或h421l或h421p或h421q或h421y，或由其组成。
[0317]
在另一方面，该变体在对应于位置422的位置处包含取代，或由其组成。在另一个方面，对应于位置422的一个位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代p422d或p422g或p422i或p422n或p422q或p422s，或由其组成。
[0318]
在另一方面，该变体在对应于位置423的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置423的位置处的氨基酸被ala、arg、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代n423g或n423h或n423i或n423l或n423m或n423p或n423q或n423v或n423w或n423y，
或由其组成。
[0319]
在另一方面，该变体在对应于位置433的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置433的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代g433a或g433n或g433s，或由其组成。
[0320]
在另一方面，该变体在对应于位置434的位置处包含取代，或由其组成。在另一个方面，对应于位置434的一个位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代p434i或p434l，或由其组成。
[0321]
在另一方面，该变体在对应于位置435的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置435的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代g435c或g435l或g435m或g435t或g435v，或由其组成。
[0322]
在另一方面，该变体在对应于位置438的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置438的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代k438a或k438i或k438q或k438s或k438v，或由其组成。
[0323]
在另一方面，该变体在对应于位置439的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置439的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代w439a或w439d或w439i或w439k或w439l或w439n或w439s或w439t或w439v或w439y，或由其组成。
[0324]
在另一方面，该变体在对应于位置446的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置446的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代k446a或k446f，或由其组成。
[0325]
在另一方面，该变体在对应于位置447的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置447的位置处的氨基酸被arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代a447d或a447y，或由其组成。
[0326]
在另一方面，该变体在对应于位置449的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置449的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代q449t，或由其组成。
[0327]
在另一方面，该变体在对应于位置450的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置450的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp或tyr取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代v450d或v450n，或由其组成。
[0328]
在另一方面，该变体在对应于位置452的位置处包含取代，或由其组成。在另一方
面，在对应于位置452的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代h452l，或由其组成。
[0329]
在另一方面，该变体在对应于位置455的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置455的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代t455c或t455m或t455v，或由其组成。
[0330]
在另一方面，该变体在对应于位置457的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置457的位置处的氨基酸被ala、arg、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代n457d或n457e或n457i或n457l或n457v，或由其组成。
[0331]
在另一方面，该变体在对应于位置458的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置458的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代k458d或k458l，或由其组成。
[0332]
在另一方面，该变体在对应于位置460的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置460的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代g460m或g460v，或由其组成。
[0333]
在另一方面，该变体在对应于位置461的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置461的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代t461f或t461i或t461q或t461v，或由其组成。
[0334]
在另一方面，该变体在对应于位置462的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置462的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp或tyr取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代v462c，或由其组成。
[0335]
在另一方面，该变体在对应于位置465的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置465的位置处的氨基酸被ala、arg、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代n465a或n465c或n465e或n465g或n465h或n465l或n465p或n465t，或由其组成。
[0336]
在另一方面，该变体在对应于位置466的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置466的位置处的氨基酸被arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代a466f或a466i或a466y，或由其组成。
[0337]
在另一方面，该变体在对应于位置467的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置467的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代d467i，或由其组成。
[0338]
在另一方面，该变体在对应于位置467的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置467的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代w469a或w469e或w469h或w469l或w469n或w469q或w469r或w469s或w469y，或由其组成。
[0339]
在另一方面，该变体在对应于位置471的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置471的位置处的氨基酸被ala、arg、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代n471a或n471d或n471m或n471w，或由其组成。
[0340]
在另一方面，该变体在对应于位置473的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置473的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代s473n，或由其组成。
[0341]
在另一方面，该变体在对应于位置475的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置475的位置处的氨基酸被ala、arg、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代n475a或n475c或n475d或n475e或n475f或n475g或n475h或n475i或n475l或n475m或n475p或n475q或n475s或n475t或n475v或n475w，或由其组成。
[0342]
在另一方面，该变体在对应于位置476的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置476的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代g476f或g476l，或由其组成。
[0343]
在另一方面，该变体在对应于位置477的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置477的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代g477a或g477h或g477q或g477s或g477w，或由其组成。
[0344]
在另一方面，该变体在对应于位置478的位置处包含取代，或由其组成。在另一方面，在对应于位置478的位置处的氨基酸被ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、thr、trp、tyr或val取代。在另一方面，该变体包含seq id no:1的多肽的取代s478a或s478f或s478q，或由其组成。
[0345]
在一方面，本发明的α-淀粉酶变体在对应于如下位置的位置处包含以下取代中的一个或多个：3、5、7、8、16、18、25、26、29、30、35、37、40、41、43、46、50、57、60、68、71、73、74、78、81、84、86、87、90、91、93、97、98、103、105、110、111、113、114、116、117、119、120、121、125、126、128、129、131、132、133、135、137、138、139、140、141、142、143、145、146、147、149、159、161、162、165、167、169、171、176、177、179、180、181、185、186、187、195、196、197、204、206、208、211、216、218、219、225、228、230、231、235、242、243、247、250、251、252、253、254、255、257、259、260、261、262、263、265、272、273、274、279、280、281、283、284、287、292、294、296、298、299、300、303、305、307、310、311、313、314、315、319、320、321、322、323、324、334、337、339、340、342、344、345、346、347、350、359、360、361、362、363、364、368、372、375、380、
382、383、384、385、387、388、391、393、395、396、397、398、401、402、403、405、406、407、410、415、416、418、421、422、423、433、434、435、438、439、446、447、449、450、452、455、457、458、460、461、462、465、466、467、469、471、473、475、476、477以及478，使用seq id no:1进行编号，并且其中所述α-淀粉酶变体具有以改善因子(if)≥1.1测量的增加的比活性并且进一步其中所述变体与seq id no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％但小于100％的序列同一性。
[0346]
在一方面，本发明的α-淀粉酶变体在对应于如下位置的位置处包含以下取代中的一个或多个：3、5、7、8、16、18、25、26、29、30、35、37、40、41、43、46、50、57、60、68、71、73、74、78、81、84、86、87、90、91、93、97、98、103、105、110、111、113、114、116、117、119、120、121、125、126、128、129、131、132、133、135、137、138、139、140、141、142、143、145、146、147、149、159、161、162、165、167、169、171、176、177、179、180、181、185、186、187、195、196、197、204、206、208、211、216、218、219、225、228、230、231、235、242、243、247、250、251、252、253、254、255、257、259、260、261、262、263、265、272、273、274、279、280、281、283、284、287、292、294、296、298、299、300、303、305、307、310、311、313、314、315、319、320、321、322、323、324、334、337、339、340、342、344、345、346、347、350、359、360、361、362、363、364、368、372、375、380、382、383、384、385、387、388、391、393、395、396、397、398、401、402、403、405、406、407、410、415、416、418、421、422、423、433、434、435、438、439、446、447、449、450、452、455、457、458、460、461、462、465、466、467、469、471、473、475、476、477以及478，使用seq id no:1进行编号，并且其中所述α-淀粉酶变体与seq id no:1亲本多肽相比具有以改善因子(if)≥1.1测量的增加的比活性并且进一步其中所述变体与seq id no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％但小于100％的序列同一性。
[0347]
在一方面，本发明的α-淀粉酶变体在对应于如下位置的位置处包含以下取代中的一个或多个：3、5、7、8、16、18、25、26、29、30、35、37、40、41、43、46、50、57、60、68、71、73、74、78、81、84、86、87、90、91、93、97、98、103、105、110、111、113、114、116、117、119、120、121、125、126、128、129、131、132、133、135、137、138、139、140、141、142、143、145、146、147、149、159、161、162、165、167、169、171、176、177、179、180、181、185、186、187、195、196、197、204、206、208、211、216、218、219、225、228、230、231、235、242、243、247、250、251、252、253、254、255、257、259、260、261、262、263、265、272、273、274、279、280、281、283、284、287、292、294、296、298、299、300、303、305、307、310、311、313、314、315、319、320、321、322、323、324、334、337、339、340、342、344、345、346、347、350、359、360、361、362、363、364、368、372、375、380、382、383、384、385、387、388、391、393、395、396、397、398、401、402、403、405、406、407、410、415、416、418、421、422、423、433、434、435、438、439、446、447、449、450、452、455、457、458、460、461、462、465、466、467、469、471、473、475、476、477以及478，使用seq id no:1进行编号，并且其中所述α-淀粉酶变体与seq id no:2亲本多肽相比具有以改善因子(if)≥1.1测量的增加的比活性并且进一步其中所述变体与seq id no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少
85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％但小于100％的序列同一性。
[0348]
在一方面，本发明的α-淀粉酶变体在对应于如下位置的位置处包含以下取代中的一个或多个：3、5、7、8、16、18、25、26、29、30、35、37、40、41、43、46、50、57、60、68、71、73、74、78、81、84、86、87、90、91、93、97、98、103、105、110、111、113、114、116、117、119、120、121、125、126、128、129、131、132、133、135、137、138、139、140、141、142、143、145、146、147、149、159、161、162、165、167、169、171、176、177、179、180、181、185、186、187、195、196、197、204、206、208、211、216、218、219、225、228、230、231、235、242、243、247、250、251、252、253、254、255、257、259、260、261、262、263、265、272、273、274、279、280、281、283、284、287、292、294、296、298、299、300、303、305、307、310、311、313、314、315、319、320、321、322、323、324、334、337、339、340、342、344、345、346、347、350、359、360、361、362、363、364、368、372、375、380、382、383、384、385、387、388、391、393、395、396、397、398、401、402、403、405、406、407、410、415、416、418、421、422、423、433、434、435、438、439、446、447、449、450、452、455、457、458、460、461、462、465、466、467、469、471、473、475、476、477以及478，使用seq id no:1进行编号，并且其中所述α-淀粉酶变体与seq id no:3亲本多肽相比具有以改善因子(if)≥1.1测量的增加的比活性并且进一步其中所述变体与seq id no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％但小于100％的序列同一性。
[0349]
在一方面，本发明的α-淀粉酶变体在对应于如下位置的位置处包含以下取代中的一个或多个：3、5、7、8、16、18、25、26、29、30、35、37、40、41、43、46、50、57、60、68、71、73、74、78、81、84、86、87、90、91、93、97、98、103、105、110、111、113、114、116、117、119、120、121、125、126、128、129、131、132、133、135、137、138、139、140、141、142、143、145、146、147、149、159、161、162、165、167、169、171、176、177、179、180、181、185、186、187、195、196、197、204、206、208、211、216、218、219、225、228、230、231、235、242、243、247、250、251、252、253、254、255、257、259、260、261、262、263、265、272、273、274、279、280、281、283、284、287、292、294、296、298、299、300、303、305、307、310、311、313、314、315、319、320、321、322、323、324、334、337、339、340、342、344、345、346、347、350、359、360、361、362、363、364、368、372、375、380、382、383、384、385、387、388、391、393、395、396、397、398、401、402、403、405、406、407、410、415、416、418、421、422、423、433、434、435、438、439、446、447、449、450、452、455、457、458、460、461、462、465、466、467、469、471、473、475、476、477以及478，使用seq id no:1进行编号，并且其中所述α-淀粉酶变体与seq id no:4亲本多肽相比具有以改善因子(if)≥1.1测量的增加的比活性并且进一步其中所述变体与seq id no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％但小于100％的序列同一性。
[0350]
在一方面，本发明的α-淀粉酶变体在对应于如下位置的位置处包含以下取代中的一个或多个：3、5、7、8、16、18、25、26、29、30、35、37、40、41、43、46、50、57、60、68、71、73、74、78、81、84、86、87、90、91、93、97、98、103、105、110、111、113、114、116、117、119、120、121、
125、126、128、129、131、132、133、135、137、138、139、140、141、142、143、145、146、147、149、159、161、162、165、167、169、171、176、177、179、180、181、185、186、187、195、196、197、204、206、208、211、216、218、219、225、228、230、231、235、242、243、247、250、251、252、253、254、255、257、259、260、261、262、263、265、272、273、274、279、280、281、283、284、287、292、294、296、298、299、300、303、305、307、310、311、313、314、315、319、320、321、322、323、324、334、337、339、340、342、344、345、346、347、350、359、360、361、362、363、364、368、372、375、380、382、383、384、385、387、388、391、393、395、396、397、398、401、402、403、405、406、407、410、415、416、418、421、422、423、433、434、435、438、439、446、447、449、450、452、455、457、458、460、461、462、465、466、467、469、471、473、475、476、477以及478，使用seq id no:1进行编号，并且其中所述α-淀粉酶变体与seq id no:5亲本多肽相比具有以改善因子(if)≥1.1测量的增加的比活性并且进一步其中所述变体与seq id no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％但小于100％的序列同一性。
[0351]
在一方面，本发明的α-淀粉酶变体在对应于如下位置的位置处包含以下取代中的一个或多个：3、5、7、8、16、18、25、26、29、30、35、37、40、41、43、46、50、57、60、68、71、73、74、78、81、84、86、87、90、91、93、97、98、103、105、110、111、113、114、116、117、119、120、121、125、126、128、129、131、132、133、135、137、138、139、140、141、142、143、145、146、147、149、159、161、162、165、167、169、171、176、177、179、180、181、185、186、187、195、196、197、204、206、208、211、216、218、219、225、228、230、231、235、242、243、247、250、251、252、253、254、255、257、259、260、261、262、263、265、272、273、274、279、280、281、283、284、287、292、294、296、298、299、300、303、305、307、310、311、313、314、315、319、320、321、322、323、324、334、337、339、340、342、344、345、346、347、350、359、360、361、362、363、364、368、372、375、380、382、383、384、385、387、388、391、393、395、396、397、398、401、402、403、405、406、407、410、415、416、418、421、422、423、433、434、435、438、439、446、447、449、450、452、455、457、458、460、461、462、465、466、467、469、471、473、475、476、477以及478，使用seq id no:1进行编号，并且其中所述α-淀粉酶变体与seq id no:6亲本多肽相比具有以改善因子(if)≥1.1测量的增加的比活性并且进一步其中所述变体与seq id no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％但小于100％的序列同一性。
[0352]
在一方面，本发明的α-淀粉酶变体在对应于如下位置的位置处包含以下取代中的一个或多个：3、5、7、8、16、18、25、26、29、30、35、37、40、41、43、46、50、57、60、68、71、73、74、78、81、84、86、87、90、91、93、97、98、103、105、110、111、113、114、116、117、119、120、121、125、126、128、129、131、132、133、135、137、138、139、140、141、142、143、145、146、147、149、159、161、162、165、167、169、171、176、177、179、180、181、185、186、187、195、196、197、204、206、208、211、216、218、219、225、228、230、231、235、242、243、247、250、251、252、253、254、255、257、259、260、261、262、263、265、272、273、274、279、280、281、283、284、287、292、294、296、298、299、300、303、305、307、310、311、313、314、315、319、320、321、322、323、324、334、
337、339、340、342、344、345、346、347、350、359、360、361、362、363、364、368、372、375、380、382、383、384、385、387、388、391、393、395、396、397、398、401、402、403、405、406、407、410、415、416、418、421、422、423、433、434、435、438、439、446、447、449、450、452、455、457、458、460、461、462、465、466、467、469、471、473、475、476、477以及478，使用seq id no:1进行编号，并且其中所述α-淀粉酶变体与seq id no:7亲本多肽相比具有以改善因子(if)≥1.1测量的增加的比活性并且进一步其中所述变体与seq id no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％但小于100％的序列同一性。
[0353]
在一方面，本发明的α-淀粉酶变体在对应于如下位置的位置处包含以下取代中的一个或多个：3、5、7、8、16、18、25、26、29、30、35、37、40、41、43、46、50、57、60、68、71、73、74、78、81、84、86、87、90、91、93、97、98、103、105、110、111、113、114、116、117、119、120、121、125、126、128、129、131、132、133、135、137、138、139、140、141、142、143、145、146、147、149、159、161、162、165、167、169、171、176、177、179、180、181、185、186、187、195、196、197、204、206、208、211、216、218、219、225、228、230、231、235、242、243、247、250、251、252、253、254、255、257、259、260、261、262、263、265、272、273、274、279、280、281、283、284、287、292、294、296、298、299、300、303、305、307、310、311、313、314、315、319、320、321、322、323、324、334、337、339、340、342、344、345、346、347、350、359、360、361、362、363、364、368、372、375、380、382、383、384、385、387、388、391、393、395、396、397、398、401、402、403、405、406、407、410、415、416、418、421、422、423、433、434、435、438、439、446、447、449、450、452、455、457、458、460、461、462、465、466、467、469、471、473、475、476、477以及478，使用seq id no:1进行编号，并且其中所述α-淀粉酶变体与seq id no:8的亲本多肽相比具有以改善因子(if)≥1.1测量的增加的比活性并且进一步其中所述变体与seq id no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％但小于100％的序列同一性。
[0354]
在一方面，本发明的α-淀粉酶变体在对应于如下位置的位置处包含以下取代中的一个或多个：3、5、7、8、16、18、25、26、29、30、35、37、40、41、43、46、50、57、60、68、71、73、74、78、81、84、86、87、90、91、93、97、98、103、105、110、111、113、114、116、117、119、120、121、125、126、128、129、131、132、133、135、137、138、139、140、141、142、143、145、146、147、149、159、161、162、165、167、169、171、176、177、179、180、181、185、186、187、195、196、197、204、206、208、211、216、218、219、225、228、230、231、235、242、243、247、250、251、252、253、254、255、257、259、260、261、262、263、265、272、273、274、279、280、281、283、284、287、292、294、296、298、299、300、303、305、307、310、311、313、314、315、319、320、321、322、323、324、334、337、339、340、342、344、345、346、347、350、359、360、361、362、363、364、368、372、375、380、382、383、384、385、387、388、391、393、395、396、397、398、401、402、403、405、406、407、410、415、416、418、421、422、423、433、434、435、438、439、446、447、449、450、452、455、457、458、460、461、462、465、466、467、469、471、473、475、476、477以及478，使用seq id no:1进行编号，并且其中所述α-淀粉酶变体与seq id no:9的亲本多肽相比具有以改善因子(if)≥1.1
测量的增加的比活性并且进一步其中所述变体与seq id no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％但小于100％的序列同一性。
[0355]
在一方面，本发明的α-淀粉酶变体在对应于如下位置的位置处包含以下取代中的一个或多个：3、5、7、8、16、18、25、26、29、30、35、37、40、41、43、46、50、57、60、68、71、73、74、78、81、84、86、87、90、91、93、97、98、103、105、110、111、113、114、116、117、119、120、121、125、126、128、129、131、132、133、135、137、138、139、140、141、142、143、145、146、147、149、159、161、162、165、167、169、171、176、177、179、180、181、185、186、187、195、196、197、204、206、208、211、216、218、219、225、228、230、231、235、242、243、247、250、251、252、253、254、255、257、259、260、261、262、263、265、272、273、274、279、280、281、283、284、287、292、294、296、298、299、300、303、305、307、310、311、313、314、315、319、320、321、322、323、324、334、337、339、340、342、344、345、346、347、350、359、360、361、362、363、364、368、372、375、380、382、383、384、385、387、388、391、393、395、396、397、398、401、402、403、405、406、407、410、415、416、418、421、422、423、433、434、435、438、439、446、447、449、450、452、455、457、458、460、461、462、465、466、467、469、471、473、475、476、477以及478，使用seq id no:1进行编号，并且其中所述α-淀粉酶变体与seq id no:10的亲本多肽相比具有以改善因子(if)≥1.1测量的增加的比活性并且进一步其中所述变体与seq id no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％但小于100％的序列同一性。
[0356]
在一方面，本发明的α-淀粉酶变体在对应于如下位置的位置处包含以下取代中的一个或多个：3、5、7、8、16、18、25、26、29、30、35、37、40、41、43、46、50、57、60、68、71、73、74、78、81、84、86、87、90、91、93、97、98、103、105、110、111、113、114、116、117、119、120、121、125、126、128、129、131、132、133、135、137、138、139、140、141、142、143、145、146、147、149、159、161、162、165、167、169、171、176、177、179、180、181、185、186、187、195、196、197、204、206、208、211、216、218、219、225、228、230、231、235、242、243、247、250、251、252、253、254、255、257、259、260、261、262、263、265、272、273、274、279、280、281、283、284、287、292、294、296、298、299、300、303、305、307、310、311、313、314、315、319、320、321、322、323、324、334、337、339、340、342、344、345、346、347、350、359、360、361、362、363、364、368、372、375、380、382、383、384、385、387、388、391、393、395、396、397、398、401、402、403、405、406、407、410、415、416、418、421、422、423、433、434、435、438、439、446、447、449、450、452、455、457、458、460、461、462、465、466、467、469、471、473、475、476、477以及478，使用seq id no:1进行编号，并且其中所述α-淀粉酶变体与seq id no:11的亲本多肽相比具有以改善因子(if)≥1.1测量的增加的比活性并且进一步其中所述变体与seq id no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％但小于100％的序列同一性。
[0357]
在一方面，本发明的α-淀粉酶变体在对应于如下位置的位置处包含以下取代中的
一个或多个：3、5、7、8、16、18、25、26、29、30、35、37、40、41、43、46、50、57、60、68、71、73、74、78、81、84、86、87、90、91、93、97、98、103、105、110、111、113、114、116、117、119、120、121、125、126、128、129、131、132、133、135、137、138、139、140、141、142、143、145、146、147、149、159、161、162、165、167、169、171、176、177、179、180、181、185、186、187、195、196、197、204、206、208、211、216、218、219、225、228、230、231、235、242、243、247、250、251、252、253、254、255、257、259、260、261、262、263、265、272、273、274、279、280、281、283、284、287、292、294、296、298、299、300、303、305、307、310、311、313、314、315、319、320、321、322、323、324、334、337、339、340、342、344、345、346、347、350、359、360、361、362、363、364、368、372、375、380、382、383、384、385、387、388、391、393、395、396、397、398、401、402、403、405、406、407、410、415、416、418、421、422、423、433、434、435、438、439、446、447、449、450、452、455、457、458、460、461、462、465、466、467、469、471、473、475、476、477以及478，使用seq id no:1进行编号，并且其中所述α-淀粉酶变体与seq id no:12的亲本多肽相比具有以改善因子(if)≥1.1测量的增加的比活性并且进一步其中所述变体与seq id no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％但小于100％的序列同一性。
[0358]
在一方面，本发明的α-淀粉酶变体在对应于如下位置的位置处包含以下取代中的一个或多个：3、5、7、8、16、18、25、26、29、30、35、37、40、41、43、46、50、57、60、68、71、73、74、78、81、84、86、87、90、91、93、97、98、103、105、110、111、113、114、116、117、119、120、121、125、126、128、129、131、132、133、135、137、138、139、140、141、142、143、145、146、147、149、159、161、162、165、167、169、171、176、177、179、180、181、185、186、187、195、196、197、204、206、208、211、216、218、219、225、228、230、231、235、242、243、247、250、251、252、253、254、255、257、259、260、261、262、263、265、272、273、274、279、280、281、283、284、287、292、294、296、298、299、300、303、305、307、310、311、313、314、315、319、320、321、322、323、324、334、337、339、340、342、344、345、346、347、350、359、360、361、362、363、364、368、372、375、380、382、383、384、385、387、388、391、393、395、396、397、398、401、402、403、405、406、407、410、415、416、418、421、422、423、433、434、435、438、439、446、447、449、450、452、455、457、458、460、461、462、465、466、467、469、471、473、475、476、477以及478，使用seq id no:1进行编号，并且其中所述α-淀粉酶变体与seq id no:13的亲本多肽相比具有以改善因子(if)≥1.1测量的增加的比活性并且进一步其中所述变体与seq id no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％但小于100％的序列同一性。
[0359]
在一方面，本发明的α-淀粉酶变体在对应于如下位置的位置处包含以下取代中的一个或多个：3、5、7、8、16、18、25、26、29、30、35、37、40、41、43、46、50、57、60、68、71、73、74、78、81、84、86、87、90、91、93、97、98、103、105、110、111、113、114、116、117、119、120、121、125、126、128、129、131、132、133、135、137、138、139、140、141、142、143、145、146、147、149、159、161、162、165、167、169、171、176、177、179、180、181、185、186、187、195、196、197、204、206、208、211、216、218、219、225、228、230、231、235、242、243、247、250、251、252、253、254、
255、257、259、260、261、262、263、265、272、273、274、279、280、281、283、284、287、292、294、296、298、299、300、303、305、307、310、311、313、314、315、319、320、321、322、323、324、334、337、339、340、342、344、345、346、347、350、359、360、361、362、363、364、368、372、375、380、382、383、384、385、387、388、391、393、395、396、397、398、401、402、403、405、406、407、410、415、416、418、421、422、423、433、434、435、438、439、446、447、449、450、452、455、457、458、460、461、462、465、466、467、469、471、473、475、476、477以及478，使用seq id no:1进行编号，并且其中所述α-淀粉酶变体与seq id no:14的亲本多肽相比具有以改善因子(if)≥1.1测量的增加的比活性并且进一步其中所述变体与seq id no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％但小于100％的序列同一性。
[0360]
在一方面，本发明的α-淀粉酶变体在对应于如下位置的位置处包含以下取代中的一个或多个：3、5、7、8、16、18、25、26、29、30、35、37、40、41、43、46、50、57、60、68、71、73、74、78、81、84、86、87、90、91、93、97、98、103、105、110、111、113、114、116、117、119、120、121、125、126、128、129、131、132、133、135、137、138、139、140、141、142、143、145、146、147、149、159、161、162、165、167、169、171、176、177、179、180、181、185、186、187、195、196、197、204、206、208、211、216、218、219、225、228、230、231、235、242、243、247、250、251、252、253、254、255、257、259、260、261、262、263、265、272、273、274、279、280、281、283、284、287、292、294、296、298、299、300、303、305、307、310、311、313、314、315、319、320、321、322、323、324、334、337、339、340、342、344、345、346、347、350、359、360、361、362、363、364、368、372、375、380、382、383、384、385、387、388、391、393、395、396、397、398、401、402、403、405、406、407、410、415、416、418、421、422、423、433、434、435、438、439、446、447、449、450、452、455、457、458、460、461、462、465、466、467、469、471、473、475、476、477以及478，使用seq id no:1进行编号，并且其中所述α-淀粉酶变体与seq id no:15的亲本多肽相比具有以改善因子(if)≥1.1测量的增加的比活性并且进一步其中所述变体与seq id no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％但小于100％的序列同一性。
[0361]
在一方面，本发明的α-淀粉酶变体在对应于如下位置的位置处包含以下取代中的一个或多个：3、5、7、8、16、18、25、26、29、30、35、37、40、41、43、46、50、57、60、68、71、73、74、78、81、84、86、87、90、91、93、97、98、103、105、110、111、113、114、116、117、119、120、121、125、126、128、129、131、132、133、135、137、138、139、140、141、142、143、145、146、147、149、159、161、162、165、167、169、171、176、177、179、180、181、185、186、187、195、196、197、204、206、208、211、216、218、219、225、228、230、231、235、242、243、247、250、251、252、253、254、255、257、259、260、261、262、263、265、272、273、274、279、280、281、283、284、287、292、294、296、298、299、300、303、305、307、310、311、313、314、315、319、320、321、322、323、324、334、337、339、340、342、344、345、346、347、350、359、360、361、362、363、364、368、372、375、380、382、383、384、385、387、388、391、393、395、396、397、398、401、402、403、405、406、407、410、415、416、418、421、422、423、433、434、435、438、439、446、447、449、450、452、455、457、458、
460、461、462、465、466、467、469、471、473、475、476、477以及478，使用seq id no:1进行编号，并且其中所述α-淀粉酶变体与seq id no:16的亲本多肽相比具有以改善因子(if)≥1.1测量的增加的比活性并且进一步其中所述变体与seq id no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％但小于100％的序列同一性。
[0362]
在一方面，本发明的α-淀粉酶变体在对应于如下位置的位置处包含以下取代中的一个或多个：3、5、7、8、16、18、25、26、29、30、35、37、40、41、43、46、50、57、60、68、71、73、74、78、81、84、86、87、90、91、93、97、98、103、105、110、111、113、114、116、117、119、120、121、125、126、128、129、131、132、133、135、137、138、139、140、141、142、143、145、146、147、149、159、161、162、165、167、169、171、176、177、179、180、181、185、186、187、195、196、197、204、206、208、211、216、218、219、225、228、230、231、235、242、243、247、250、251、252、253、254、255、257、259、260、261、262、263、265、272、273、274、279、280、281、283、284、287、292、294、296、298、299、300、303、305、307、310、311、313、314、315、319、320、321、322、323、324、334、337、339、340、342、344、345、346、347、350、359、360、361、362、363、364、368、372、375、380、382、383、384、385、387、388、391、393、395、396、397、398、401、402、403、405、406、407、410、415、416、418、421、422、423、433、434、435、438、439、446、447、449、450、452、455、457、458、460、461、462、465、466、467、469、471、473、475、476、477以及478，使用seq id no:1进行编号，并且其中所述α-淀粉酶变体与seq id no:17的亲本多肽相比具有以改善因子(if)≥1.1测量的增加的比活性并且进一步其中所述变体与seq id no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％但小于100％的序列同一性。
[0363]
在一方面，本发明的α-淀粉酶变体在对应于如下位置的位置处包含以下取代中的一个或多个：n3a、n3c、n3d、n3e、n3f、n3g、n3h、n3l、n3p、n3q、n3s、n3t、n3v、t5e、g7e、g7f、g7h、g7k、g7l、g7p、g7r、g7s、g7t、g7v、g7w、t8s、h16d、h16r、p18d、p18l、p18n、n25t、r26y、d29n、d30f、r35p、r37a、r37n、t40a、t40c、t40d、t40e、t40g、t40h、t40i、t40k、t40n、t40v、t40w、a41c、a41d、a41e、a41h、a41i、a41k、a41n、a41r、a41t、a41v、a41y、w43e、p46a、g50m、g50p、g50q、g57a、g57s、a60e、a60s、a60v、e68f、e68y、q71f、g73d、g73h、g73i、g73l、g73q、g73s、g73t、g73w、t74f、k78s、k78t、t81m、q84i、q84w、q84y、e86k、e86s、s87g、s87l、s87p、h90p、a91q、a91v、a91w、k93v、v97c、v97h、q98e、q98f、q98g、q98i、q98k、q98l、q98m、q98r、q98t、q98y、v103c、v103g、v103s、m105f、g110k、g110r、a111e、a111q、a113t、t114m、t114v、n116c、n116y、v117f、a119h、a119l、a119y、v120e、e121i、n125s、n126i、n128e、q129t、i131y、s132a、s132d、s132h、s132i、s132k、s132l、s132p、s132r、s132t、s132v、s132y、g133e、g133l、g133t、g133v、y135c、y135d、y135e、y135p、i137d、i137n、i137q、i137w、i137y、e138s、e138v、a139l、w140a、w140d、w140m、w140n、w140p、w140s、w140t、w140v、t141g、k142e、k142n、f143h、f143i、f143m、f145g、f145h、f145i、f145l、f145s、p146a、p146h、p146n、g147d、g149f、g149k、w159a、w159e、h161w、f162t、v165p、w167d、w167g、w167p、q169l、q169p、q169v、q169y、r171p、r176e、r176q、r176v、r176y、i177h、i177p、
k179a、k179m、k179v、f180d、f180g、r181d、r181e、r181g、r181m、r181y、k185t、k185v、k185w、a186d、w187t、n195y、g196d、n197v、n197y、a204f、a204h、a204l、v206n、m208d、p211c、p211m、e216l、r218q、r219v、t225d、t225f、t225h、t225k、t225l、t225n、t225r、t225y、l228v、l230c、l230f、d231g、d231t、d231v、i235a、k242l、y243d、y243m、y243n、r247g、r247p、r247s、l250s、l250y、t251d、h252p、v253f、v253s、r254d、r254f、r254h、r254p、r254t、r254v、r254w、n255c、n255f、n255p、t257a、t257c、t257d、t257e、t257g、t257p、t257q、t257s、t257w、t257y、k259p、k259v、k259w、k259y、e260v、m261d、m261f、m261p、m261r、m261s、m261w、f262a、f262c、f262e、f262h、f262i、f262k、f262l、f262n、f262p、f262q、f262r、f262s、f262t、f262v、f262w、a263e、a263h、a263w、a265q、l272w、g273q、a274d、l279i、n280p、k281h、k281i、k281s、n283p、w284a、w284d、w284e、w284g、w284i、w284k、w284m、w284n、w284p、w284q、w284s、w284t、w284v、w284y、s287i、s287k、s287l、s287p、s287r、s287t、s287v、s287y、p292l、p292m、p292y、h294n、h294s、n296t、y298d、y298e、n299t、a300g、s303a、s303c、s303d、s303e、s303f、s303g、s303h、s303l、s303m、s303n、s303q、s303t、s303v、s303y、g305e、y307s、a310d、a310n、k311a、k311c、l313q、n314p、n314s、g315e、g315m、g315v、q319c、q319e、k320s、k320w、h321f、h321k、h321l、h321r、h321t、h321v、h321w、p322c、p322e、p322h、p322t、p322y、m323a、m323c、m323d、m323e、m323g、m323h、m323l、m323n、m323p、m323r、m323s、m323t、m323w、m323y、h324a、h324i、h324p、h324t、h324w、h324y、s334v、g337v、l340m、s342a、s342g、s342t、v344a、v344c、v344i、q345n、e346a、w347a、w347e、w347f、w347g、w347h、w347k、w347n、w347p、w347r、p350a、p350c、p350n、p350t、r359c、r359f、r359g、r359m、r359s、r359w、e360d、e360h、e360p、e360t、e360w、q361d、q361h、q361i、q361k、q361l、q361m、q361n、q361p、q361r、q361s、q361t、q361v、q361w、q361y、g362m、y363a、y363e、y363f、y363g、y363i、y363l、y363q、y363r、y363s、y363t、y363v、y363w、p364c、y368c、y368q、y368r、y368t、y372c、y372g、y372n、y372t、p375q、p375t、p380f、m382i、k383c、k383l、k383p、k383t、a384d、a384n、k385n、k385v、d387c、d387p、d387r、d387w、p388i、e391m、r393k、r393m、n395c、n395d、n395k、n395v、n395w、f396e、f396g、f396t、a397v、y398e、q401h、h402s、d403a、d403e、d403t、f405c、f405n、f405s、f405t、d406v、h407c、h407q、h407t、i410h、i410m、i410r、i410w、r415c、r415l、r415m、r415y、e416d、e416f、e416l、e416n、n418a、n418p、n418v、h421a、h421g、h421l、h421p、h421q、h421y、p422d、p422g、p422i、p422n、p422q、p422s、n423g、n423h、n423i、n423l、n423m、n423p、n423q、n423v、n423w、n423y、g433a、g433n、g433s、p434i、p434l、g435c、g435l、g435m、g435t、g435v、k438a、k438i、k438q、k438s、k438v、w439a、w439d、w439i、w439k、w439l、w439n、w439s、w439t、w439v、w439y、k446a、k446f、a447d、a447y、q449t、v450d、v450n、h452l、t455c、t455m、t455v、n457d、n457e、n457i、n457l、n457v、k458d、k458l、g460m、g460v、t461f、t461i、t461q、t461v、v462c、n465a、n465c、n465e、n465g、n465h、n465l、n465p、n465t、a466f、a466i、a466y、d467i、w469a、w469e、w469h、w469l、w469n、w469q、w469r、w469s、w469y、n471a、n471d、n471m、n471w、s473n、n475a、n475c、n475d、n475e、n475f、n475g、n475h、n475i、n475l、n475m、n475p、n475q、n475s、n475t、n475v、n475w、g476f、g476l、g477a、g477h、g477q、g477s、g477w、s478a、s478f以及s478q；使用seq id no:1进行编号，并且其中
所述α-淀粉酶变体与seq id no:1的亲本多肽相比具有以改善因子(if)≥1.1测量的增加的比活性并且进一步其中所述变体与seq id no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％但小于100％的序列同一性。
[0364]
在一方面，本发明的α-淀粉酶变体在对应于如下位置的位置处包含以下取代中的一个或多个：n3a、n3c、n3d、n3e、n3f、n3g、n3h、n3l、n3p、n3q、n3s、n3t、n3v、t5e、g7e、g7f、g7h、g7k、g7l、g7p、g7r、g7s、g7t、g7v、g7w、t8s、h16d、h16r、p18d、p18l、p18n、n25t、r26y、d29n、d30f、r35p、r37a、r37n、t40a、t40c、t40d、t40e、t40g、t40h、t40i、t40k、t40n、t40v、t40w、a41c、a41d、a41e、a41h、a41i、a41k、a41n、a41r、a41t、a41v、a41y、w43e、p46a、g50m、g50p、g50q、g57a、g57s、a60e、a60s、a60v、e68f、e68y、q71f、g73d、g73h、g73i、g73l、g73q、g73s、g73t、g73w、t74f、k78s、k78t、t81m、q84i、q84w、q84y、e86k、e86s、s87g、s87l、s87p、h90p、a91q、a91v、a91w、k93v、v97c、v97h、q98e、q98f、q98g、q98i、q98k、q98l、q98m、q98r、q98t、q98y、v103c、v103g、v103s、m105f、g110k、g110r、a111e、a111q、a113t、t114m、t114v、n116c、n116y、v117f、a119h、a119l、a119y、v120e、e121i、n125s、n126i、n128e、q129t、i131y、s132a、s132d、s132h、s132i、s132k、s132l、s132p、s132r、s132t、s132v、s132y、g133e、g133l、g133t、g133v、y135c、y135d、y135e、y135p、i137d、i137n、i137q、i137w、i137y、e138s、e138v、a139l、w140a、w140d、w140m、w140n、w140p、w140s、w140t、w140v、t141g、k142e、k142n、f143h、f143i、f143m、f145g、f145h、f145i、f145l、f145s、p146a、p146h、p146n、g147d、g149f、g149k、w159a、w159e、h161w、f162t、v165p、w167d、w167g、w167p、q169l、q169p、q169v、q169y、r171p、r176e、r176q、r176v、r176y、i177h、i177p、k179a、k179m、k179v、f180d、f180g、r181d、r181e、r181g、r181m、r181y、k185t、k185v、k185w、a186d、w187t、n195y、g196d、n197v、n197y、a204f、a204h、a204l、v206n、m208d、p211c、p211m、e216l、r218q、r219v、t225d、t225f、t225h、t225k、t225l、t225n、t225r、t225y、l228v、l230c、l230f、d231g、d231t、d231v、i235a、k242l、y243d、y243m、y243n、r247g、r247p、r247s、l250s、l250y、t251d、h252p、v253f、v253s、r254d、r254f、r254h、r254p、r254t、r254v、r254w、n255c、n255f、n255p、t257a、t257c、t257d、t257e、t257g、t257p、t257q、t257s、t257w、t257y、k259p、k259v、k259w、k259y、e260v、m261d、m261f、m261p、m261r、m261s、m261w、f262a、f262c、f262e、f262h、f262i、f262k、f262l、f262n、f262p、f262q、f262r、f262s、f262t、f262v、f262w、a263e、a263h、a263w、a265q、l272w、g273q、a274d、l279i、n280p、k281h、k281i、k281s、n283p、w284a、w284d、w284e、w284g、w284i、w284k、w284m、w284n、w284p、w284q、w284s、w284t、w284v、w284y、s287i、s287k、s287l、s287p、s287r、s287t、s287v、s287y、p292l、p292m、p292y、h294n、h294s、n296t、y298d、y298e、n299t、a300g、s303a、s303c、s303d、s303e、s303f、s303g、s303h、s303l、s303m、s303n、s303q、s303t、s303v、s303y、g305e、y307s、a310d、a310n、k311a、k311c、l313q、n314p、n314s、g315e、g315m、g315v、q319c、q319e、k320s、k320w、h321f、h321k、h321l、h321r、h321t、h321v、h321w、p322c、p322e、p322h、p322t、p322y、m323a、m323c、m323d、m323e、m323g、m323h、m323l、m323n、m323p、m323r、m323s、m323t、m323w、m323y、h324a、h324i、h324p、h324t、h324w、h324y、s334v、g337v、l340m、s342a、s342g、s342t、v344a、v344c、v344i、q345n、e346a、w347a、w347e、w347f、w347g、w347h、w347k、w347n、
w347p、w347r、p350a、p350c、p350n、p350t、r359c、r359f、r359g、r359m、r359s、r359w、e360d、e360h、e360p、e360t、e360w、q361d、q361h、q361i、q361k、q361l、q361m、q361n、q361p、q361r、q361s、q361t、q361v、q361w、q361y、g362m、y363a、y363e、y363f、y363g、y363i、y363l、y363q、y363r、y363s、y363t、y363v、y363w、p364c、y368c、y368q、y368r、y368t、y372c、y372g、y372n、y372t、p375q、p375t、p380f、m382i、k383c、k383l、k383p、k383t、a384d、a384n、k385n、k385v、d387c、d387p、d387r、d387w、p388i、e391m、r393k、r393m、n395c、n395d、n395k、n395v、n395w、f396e、f396g、f396t、a397v、y398e、q401h、h402s、d403a、d403e、d403t、f405c、f405n、f405s、f405t、d406v、h407c、h407q、h407t、i410h、i410m、i410r、i410w、r415c、r415l、r415m、r415y、e416d、e416f、e416l、e416n、n418a、n418p、n418v、h421a、h421g、h421l、h421p、h421q、h421y、p422d、p422g、p422i、p422n、p422q、p422s、n423g、n423h、n423i、n423l、n423m、n423p、n423q、n423v、n423w、n423y、g433a、g433n、g433s、p434i、p434l、g435c、g435l、g435m、g435t、g435v、k438a、k438i、k438q、k438s、k438v、w439a、w439d、w439i、w439k、w439l、w439n、w439s、w439t、w439v、w439y、k446a、k446f、a447d、a447y、q449t、v450d、v450n、h452l、t455c、t455m、t455v、n457d、n457e、n457i、n457l、n457v、k458d、k458l、g460m、g460v、t461f、t461i、t461q、t461v、v462c、n465a、n465c、n465e、n465g、n465h、n465l、n465p、n465t、a466f、a466i、a466y、d467i、w469a、w469e、w469h、w469l、w469n、w469q、w469r、w469s、w469y、n471a、n471d、n471m、n471w、s473n、n475a、n475c、n475d、n475e、n475f、n475g、n475h、n475i、n475l、n475m、n475p、n475q、n475s、n475t、n475v、n475w、g476f、g476l、g477a、g477h、g477q、g477s、g477w、s478a、s478f以及s478q；使用seq id no:1进行编号，并且其中所述α-淀粉酶变体与seq id no:2的亲本多肽相比具有以改善因子(if)≥1.1测量的增加的比活性并且进一步其中所述变体与seq id no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％但小于100％的序列同一性。
[0365]
在一方面，本发明的α-淀粉酶变体在对应于如下位置的位置处包含以下取代中的一个或多个：n3a、n3c、n3d、n3e、n3f、n3g、n3h、n3l、n3p、n3q、n3s、n3t、n3v、t5e、g7e、g7f、g7h、g7k、g7l、g7p、g7r、g7s、g7t、g7v、g7w、t8s、h16d、h16r、p18d、p18l、p18n、n25t、r26y、d29n、d30f、r35p、r37a、r37n、t40a、t40c、t40d、t40e、t40g、t40h、t40i、t40k、t40n、t40v、t40w、a41c、a41d、a41e、a41h、a41i、a41k、a41n、a41r、a41t、a41v、a41y、w43e、p46a、g50m、g50p、g50q、g57a、g57s、a60e、a60s、a60v、e68f、e68y、q71f、g73d、g73h、g73i、g73l、g73q、g73s、g73t、g73w、t74f、k78s、k78t、t81m、q84i、q84w、q84y、e86k、e86s、s87g、s87l、s87p、h90p、a91q、a91v、a91w、k93v、v97c、v97h、q98e、q98f、q98g、q98i、q98k、q98l、q98m、q98r、q98t、q98y、v103c、v103g、v103s、m105f、g110k、g110r、a111e、a111q、a113t、t114m、t114v、n116c、n116y、v117f、a119h、a119l、a119y、v120e、e121i、n125s、n126i、n128e、q129t、i131y、s132a、s132d、s132h、s132i、s132k、s132l、s132p、s132r、s132t、s132v、s132y、g133e、g133l、g133t、g133v、y135c、y135d、y135e、y135p、i137d、i137n、i137q、i137w、i137y、e138s、e138v、a139l、w140a、w140d、w140m、w140n、w140p、w140s、w140t、w140v、t141g、k142e、k142n、f143h、f143i、f143m、f145g、f145h、f145i、f145l、f145s、p146a、p146h、p146n、g147d、g149f、g149k、w159a、w159e、h161w、f162t、v165p、w167d、w167g、
w167p、q169l、q169p、q169v、q169y、r171p、r176e、r176q、r176v、r176y、i177h、i177p、k179a、k179m、k179v、f180d、f180g、r181d、r181e、r181g、r181m、r181y、k185t、k185v、k185w、a186d、w187t、n195y、g196d、n197v、n197y、a204f、a204h、a204l、v206n、m208d、p211c、p211m、e216l、r218q、r219v、t225d、t225f、t225h、t225k、t225l、t225n、t225r、t225y、l228v、l230c、l230f、d231g、d231t、d231v、i235a、k242l、y243d、y243m、y243n、r247g、r247p、r247s、l250s、l250y、t251d、h252p、v253f、v253s、r254d、r254f、r254h、r254p、r254t、r254v、r254w、n255c、n255f、n255p、t257a、t257c、t257d、t257e、t257g、t257p、t257q、t257s、t257w、t257y、k259p、k259v、k259w、k259y、e260v、m261d、m261f、m261p、m261r、m261s、m261w、f262a、f262c、f262e、f262h、f262i、f262k、f262l、f262n、f262p、f262q、f262r、f262s、f262t、f262v、f262w、a263e、a263h、a263w、a265q、l272w、g273q、a274d、l279i、n280p、k281h、k281i、k281s、n283p、w284a、w284d、w284e、w284g、w284i、w284k、w284m、w284n、w284p、w284q、w284s、w284t、w284v、w284y、s287i、s287k、s287l、s287p、s287r、s287t、s287v、s287y、p292l、p292m、p292y、h294n、h294s、n296t、y298d、y298e、n299t、a300g、s303a、s303c、s303d、s303e、s303f、s303g、s303h、s303l、s303m、s303n、s303q、s303t、s303v、s303y、g305e、y307s、a310d、a310n、k311a、k311c、l313q、n314p、n314s、g315e、g315m、g315v、q319c、q319e、k320s、k320w、h321f、h321k、h321l、h321r、h321t、h321v、h321w、p322c、p322e、p322h、p322t、p322y、m323a、m323c、m323d、m323e、m323g、m323h、m323l、m323n、m323p、m323r、m323s、m323t、m323w、m323y、h324a、h324i、h324p、h324t、h324w、h324y、s334v、g337v、l340m、s342a、s342g、s342t、v344a、v344c、v344i、q345n、e346a、w347a、w347e、w347f、w347g、w347h、w347k、w347n、w347p、w347r、p350a、p350c、p350n、p350t、r359c、r359f、r359g、r359m、r359s、r359w、e360d、e360h、e360p、e360t、e360w、q361d、q361h、q361i、q361k、q361l、q361m、q361n、q361p、q361r、q361s、q361t、q361v、q361w、q361y、g362m、y363a、y363e、y363f、y363g、y363i、y363l、y363q、y363r、y363s、y363t、y363v、y363w、p364c、y368c、y368q、y368r、y368t、y372c、y372g、y372n、y372t、p375q、p375t、p380f、m382i、k383c、k383l、k383p、k383t、a384d、a384n、k385n、k385v、d387c、d387p、d387r、d387w、p388i、e391m、r393k、r393m、n395c、n395d、n395k、n395v、n395w、f396e、f396g、f396t、a397v、y398e、q401h、h402s、d403a、d403e、d403t、f405c、f405n、f405s、f405t、d406v、h407c、h407q、h407t、i410h、i410m、i410r、i410w、r415c、r415l、r415m、r415y、e416d、e416f、e416l、e416n、n418a、n418p、n418v、h421a、h421g、h421l、h421p、h421q、h421y、p422d、p422g、p422i、p422n、p422q、p422s、n423g、n423h、n423i、n423l、n423m、n423p、n423q、n423v、n423w、n423y、g433a、g433n、g433s、p434i、p434l、g435c、g435l、g435m、g435t、g435v、k438a、k438i、k438q、k438s、k438v、w439a、w439d、w439i、w439k、w439l、w439n、w439s、w439t、w439v、w439y、k446a、k446f、a447d、a447y、q449t、v450d、v450n、h452l、t455c、t455m、t455v、n457d、n457e、n457i、n457l、n457v、k458d、k458l、g460m、g460v、t461f、t461i、t461q、t461v、v462c、n465a、n465c、n465e、n465g、n465h、n465l、n465p、n465t、a466f、a466i、a466y、d467i、w469a、w469e、w469h、w469l、w469n、w469q、w469r、w469s、w469y、n471a、n471d、n471m、n471w、s473n、n475a、n475c、n475d、n475e、n475f、n475g、n475h、n475i、n475l、n475m、n475p、n475q、n475s、n475t、n475v、n475w、g476f、g476l、g477a、
g477h、g477q、g477s、g477w、s478a、s478f以及s478q；使用seq id no:1进行编号，并且其中所述α-淀粉酶变体具有以改善因子(if)≥1.1测量的增加的比活性并且进一步其中所述变体与seq id no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％但小于100％的序列同一性。
[0366]
在一方面，本发明的α-淀粉酶变体在对应于如下位置的位置处包含以下取代中的一个或多个：n3a、n3c、n3d、n3e、n3f、n3g、n3h、n3l、n3p、n3q、n3s、n3t、n3v、t5e、g7e、g7f、g7h、g7k、g7l、g7p、g7r、g7s、g7t、g7v、g7w、t8s、h16d、h16r、p18d、p18l、p18n、n25t、r26y、d29n、d30f、r35p、r37a、r37n、t40a、t40c、t40d、t40e、t40g、t40h、t40i、t40k、t40n、t40v、t40w、a41c、a41d、a41e、a41h、a41i、a41k、a41n、a41r、a41t、a41v、a41y、w43e、p46a、g50m、g50p、g50q、g57a、g57s、a60e、a60s、a60v、e68f、e68y、q71f、g73d、g73h、g73i、g73l、g73q、g73s、g73t、g73w、t74f、k78s、k78t、t81m、q84i、q84w、q84y、e86k、e86s、s87g、s87l、s87p、h90p、a91q、a91v、a91w、k93v、v97c、v97h、q98e、q98f、q98g、q98i、q98k、q98l、q98m、q98r、q98t、q98y、v103c、v103g、v103s、m105f、g110k、g110r、a111e、a111q、a113t、t114m、t114v、n116c、n116y、v117f、a119h、a119l、a119y、v120e、e121i、n125s、n126i、n128e、q129t、i131y、s132a、s132d、s132h、s132i、s132k、s132l、s132p、s132r、s132t、s132v、s132y、g133e、g133l、g133t、g133v、y135c、y135d、y135e、y135p、i137d、i137n、i137q、i137w、i137y、e138s、e138v、a139l、w140a、w140d、w140m、w140n、w140p、w140s、w140t、w140v、t141g、k142e、k142n、f143h、f143i、f143m、f145g、f145h、f145i、f145l、f145s、p146a、p146h、p146n、g147d、g149f、g149k、w159a、w159e、h161w、f162t、v165p、w167d、w167g、w167p、q169l、q169p、q169v、q169y、r171p、r176e、r176q、r176v、r176y、i177h、i177p、k179a、k179m、k179v、f180d、f180g、r181d、r181e、r181g、r181m、r181y、k185t、k185v、k185w、a186d、w187t、n195y、g196d、n197v、n197y、a204f、a204h、a204l、v206n、m208d、p211c、p211m、e216l、r218q、r219v、t225d、t225f、t225h、t225k、t225l、t225n、t225r、t225y、l228v、l230c、l230f、d231g、d231t、d231v、i235a、k242l、y243d、y243m、y243n、r247g、r247p、r247s、l250s、l250y、t251d、h252p、v253f、v253s、r254d、r254f、r254h、r254p、r254t、r254v、r254w、n255c、n255f、n255p、t257a、t257c、t257d、t257e、t257g、t257p、t257q、t257s、t257w、t257y、k259p、k259v、k259w、k259y、e260v、m261d、m261f、m261p、m261r、m261s、m261w、f262a、f262c、f262e、f262h、f262i、f262k、f262l、f262n、f262p、f262q、f262r、f262s、f262t、f262v、f262w、a263e、a263h、a263w、a265q、l272w、g273q、a274d、l279i、n280p、k281h、k281i、k281s、n283p、w284a、w284d、w284e、w284g、w284i、w284k、w284m、w284n、w284p、w284q、w284s、w284t、w284v、w284y、s287i、s287k、s287l、s287p、s287r、s287t、s287v、s287y、p292l、p292m、p292y、h294n、h294s、n296t、y298d、y298e、n299t、a300g、s303a、s303c、s303d、s303e、s303f、s303g、s303h、s303l、s303m、s303n、s303q、s303t、s303v、s303y、g305e、y307s、a310d、a310n、k311a、k311c、l313q、n314p、n314s、g315e、g315m、g315v、q319c、q319e、k320s、k320w、h321f、h321k、h321l、h321r、h321t、h321v、h321w、p322c、p322e、p322h、p322t、p322y、m323a、m323c、m323d、m323e、m323g、m323h、m323l、m323n、m323p、m323r、m323s、m323t、m323w、m323y、h324a、h324i、h324p、h324t、h324w、h324y、s334v、g337v、l340m、s342a、s342g、s342t、
v344a、v344c、v344i、q345n、e346a、w347a、w347e、w347f、w347g、w347h、w347k、w347n、w347p、w347r、p350a、p350c、p350n、p350t、r359c、r359f、r359g、r359m、r359s、r359w、e360d、e360h、e360p、e360t、e360w、q361d、q361h、q361i、q361k、q361l、q361m、q361n、q361p、q361r、q361s、q361t、q361v、q361w、q361y、g362m、y363a、y363e、y363f、y363g、y363i、y363l、y363q、y363r、y363s、y363t、y363v、y363w、p364c、y368c、y368q、y368r、y368t、y372c、y372g、y372n、y372t、p375q、p375t、p380f、m382i、k383c、k383l、k383p、k383t、a384d、a384n、k385n、k385v、d387c、d387p、d387r、d387w、p388i、e391m、r393k、r393m、n395c、n395d、n395k、n395v、n395w、f396e、f396g、f396t、a397v、y398e、q401h、h402s、d403a、d403e、d403t、f405c、f405n、f405s、f405t、d406v、h407c、h407q、h407t、i410h、i410m、i410r、i410w、r415c、r415l、r415m、r415y、e416d、e416f、e416l、e416n、n418a、n418p、n418v、h421a、h421g、h421l、h421p、h421q、h421y、p422d、p422g、p422i、p422n、p422q、p422s、n423g、n423h、n423i、n423l、n423m、n423p、n423q、n423v、n423w、n423y、g433a、g433n、g433s、p434i、p434l、g435c、g435l、g435m、g435t、g435v、k438a、k438i、k438q、k438s、k438v、w439a、w439d、w439i、w439k、w439l、w439n、w439s、w439t、w439v、w439y、k446a、k446f、a447d、a447y、q449t、v450d、v450n、h452l、t455c、t455m、t455v、n457d、n457e、n457i、n457l、n457v、k458d、k458l、g460m、g460v、t461f、t461i、t461q、t461v、v462c、n465a、n465c、n465e、n465g、n465h、n465l、n465p、n465t、a466f、a466i、a466y、d467i、w469a、w469e、w469h、w469l、w469n、w469q、w469r、w469s、w469y、n471a、n471d、n471m、n471w、s473n、n475a、n475c、n475d、n475e、n475f、n475g、n475h、n475i、n475l、n475m、n475p、n475q、n475s、n475t、n475v、n475w、g476f、g476l、g477a、g477h、g477q、g477s、g477w、s478a、s478f以及s478q；使用seq id no:1进行编号，并且其中所述α-淀粉酶变体在标准a洗涤剂组合物中具有以改善因子(if)≥1.1测量的增加的比活性并且进一步其中所述变体与seq id no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％但小于100％的序列同一性。
[0367]
在一方面，本发明的α-淀粉酶变体在对应于如下位置的位置处包含以下取代中的一个或多个：n3a；n3c；n3d；n3e；n3f；n3g；n3h；n3l；n3p；n3q；n3s；n3t；n3v；t5e；g7e；g7f；g7h；g7k；g7l；g7p；g7r；g7s；g7t；g7v；g7w；t8s；h16d；h16r；p18d；p18n；n25t；r26y；d29n；d30f；r37a；r37n；t40a；t40c；t40d；t40e；t40g；t40h；t40i；t40k；t40n；t40v；t40w；a41c；a41d；a41e；a41h；a41i；a41k；a41n；a41r；a41t；a41v；a41y；w43e；p46a；g50m；g50p；g50q；g57a；g57s；a60e；a60s；a60v；e68f；q71f；g73d；g73h；g73i；g73l；g73q；g73s；g73t；g73w；k78s；k78t；t81m；q84i；q84w；q84y；e86k；e86s；s87g；s87l；s87p；h90p；a91q；a91v；a91w；k93v；v97c；v97h；q98e；q98f；q98g；q98i；q98k；q98l；q98m；q98r；q98t；q98y；v103c；v103g；v103s；m105f；g110k；g110r；a111e；a111q；a113t；t114m；t114v；n116y；v117f；a119h；a119l；a119y；v120e；e121i；n125s；n126i；n128e；q129t；i131y；s132a；s132d；s132h；s132i；s132k；s132l；s132p；s132r；s132t；s132v；s132y；g133e；g133l；g133t；g133v；y135c；y135d；y135e；y135p；i137d；i137n；i137q；i137w；i137y；e138s；e138v；a139l；w140a；w140d；w140m；w140n；w140p；w140s；w140t；w140v；t141g；k142e；k142n；f143h；f143i；f143m；f145g；f145h；f145i；f145l；f145s；p146a；p146h；p146n；g147d；g149f；
id no:1进行编号，并且其中所述α-淀粉酶变体在标准a洗涤剂组合物中具有以改善因子(if)≥1.2测量的增加的比活性并且进一步其中所述变体与seq id no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％但小于100％的序列同一性。
[0368]
在一方面，本发明的α-淀粉酶变体在对应于如下位置的位置处包含以下取代中的一个或多个：n3a；n3c；n3d；n3e；n3f；n3g；n3h；n3l；n3p；n3q；n3v；t5e；g7e；g7f；g7h；g7l；g7r；g7s；g7t；g7v；g7w；h16d；r26y；d29n；d30f；r37a；r37n；t40a；t40c；t40d；t40e；t40g；t40h；t40i；t40n；t40v；t40w；a41c；a41d；a41e；a41h；a41i；a41k；a41n；a41r；a41y；p46a；g50q；g57a；g57s；a60s；a60v；e68f；g73d；g73h；g73i；g73l；g73q；g73s；g73t；g73w；k78t；t81m；q84i；q84w；e86s；s87g；h90p；q98f；q98i；q98k；q98l；q98m；q98y；v103c；v103g；g110k；g110r；a111e；a111q；a119l；a119y；v120e；n125s；n128e；i131y；s132a；s132d；s132h；s132i；s132k；s132l；s132r；s132v；s132y；g133e；y135c；y135d；y135e；y135p；i137n；i137w；e138s；e138v；a139l；w140a；w140d；w140m；w140n；w140p；w140s；w140t；k142e；f143h；f143i；f145i；p146a；p146h；p146n；g147d；g149k；h161w；v165p；w167d；w167p；q169v；r171p；r176e；r176q；r176y；i177h；k179a；k179v；r181e；r181g；r181m；r181y；a186d；w187t；g196d；n197v；n197y；a204h；a204l；p211c；p211m；t225d；t225f；t225h；t225k；t225l；t225n；t225r；t225y；l230c；l230f；d231v；y243d；y243n；r247g；r247p；l250s；h252p；v253f；r254t；r254v；r254w；n255p；t257a；t257c；t257d；t257e；t257g；t257w；k259p；k259v；k259w；e260v；m261d；m261f；m261p；m261r；m261s；m261w；f262a；f262c；f262e；f262h；f262i；f262k；f262l；f262n；f262p；f262q；f262r；f262s；f262t；f262v；f262w；a263e；a263h；a263w；a265q；l279i；k281i；n283p；w284a；w284d；w284e；w284g；w284i；w284k；w284m；w284n；w284p；w284q；w284s；w284t；w284v；w284y；s287k；s287l；s287r；s287t；s287v；s287y；h294s；n296t；y298d；n299t；s303a；s303c；s303d；s303e；s303f；s303g；s303h；s303l；s303m；s303n；s303q；s303t；s303v；s303y；g305e；y307s；a310n；k311a；k311c；l313q；n314p；n314s；g315e；g315v；q319e；k320w；h321f；h321k；h321l；h321v；p322c；p322e；p322h；p322t；p322y；m323a；m323c；m323d；m323e；m323g；m323h；m323l；m323n；m323p；m323r；m323s；m323y；h324a；h324i；h324p；h324t；h324w；h324y；g337v；l340m；s342g；v344c；e346a；w347e；w347f；w347g；w347h；w347k；w347n；w347p；w347r；p350c；p350n；p350t；r359g；r359w；e360d；e360t；e360w；q361d；q361h；q361i；q361k；q361l；q361m；q361n；q361p；q361r；q361t；q361v；q361w；q361y；g362m；y363a；y363f；y363g；y363i；y363q；y363s；y363t；y363v；y363w；p364c；y368c；y368q；y368r；y372c；y372g；p375q；p375t；p380f；k383c；k383t；a384d；k385n；k385v；d387c；d387p；d387r；e391m；r393k；r393m；n395c；n395d；n395w；f396e；f396g；f396t；y398e；h402s；d403a；d403t；f405c；f405n；f405s；f405t；d406v；h407c；h407q；h407t；i410h；i410m；i410w；r415c；r415l；r415m；r415y；e416f；e416l；e416n；n418a；n418p；h421a；h421g；h421l；h421p；h421q；h421y；p422d；p422g；p422n；p422s；n423g；n423i；n423l；n423m；n423q；n423v；n423w；n423y；g433s；p434i；p434l；g435m；g435t；g435v；k438i；k438q；k438s；k438v；w439a；w439d；w439i；w439k；w439l；w439n；w439s；
w439t；w439v；k446a；k446f；a447d；a447y；h452l；t455v；n457d；n457e；n457i；n457l；n457v；k458d；k458l；g460m；t461f；t461i；t461q；t461v；v462c；n465a；n465e；n465g；n465l；a466f；a466i；a466y；d467i；w469a；w469e；w469h；w469l；w469q；w469r；w469y；n471a；n471d；n471m；n475a；n475c；n475d；n475e；n475f；n475g；n475h；n475i；n475l；n475m；n475p；n475q；n475s；n475t；n475v；n475w；g476l；g477a；g477h；g477q；g477s；g477w；s478a；以及s478f；使用seq id no:1进行编号，并且其中所述α-淀粉酶变体在标准a洗涤剂组合物中具有以改善因子(if)≥1.3测量的增加的比活性并且进一步其中所述变体与seq id no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％但小于100％的序列同一性。
[0369]
在一方面，本发明的α-淀粉酶变体在对应于如下位置的位置处包含以下取代中的一个或多个：n3a；n3c；n3d；n3e；n3f；n3g；n3h；n3l；n3v；g7f；g7h；g7r；g7v；g7w；r26y；d29n；r37a；r37n；t40c；t40d；t40e；t40g；t40i；t40n；t40v；a41c；a41d；a41e；a41k；a41n；a41r；a41y；g73d；g73h；g73i；g73l；g73q；g73s；g73t；g73w；k78t；q84i；q84w；s87g；q98i；q98l；v103c；g110k；a111q；a119y；n125s；n128e；s132d；s132i；s132l；s132r；y135c；y135e；i137w；e138s；e138v；a139l；w140a；w140d；w140m；w140n；w140p；w140s；w140t；k142e；f143i；f145i；p146h；g149k；h161w；v165p；w167d；w167p；q169v；r176q；i177h；p211c；t225f；t225h；t225k；t225r；t225y；l230c；y243d；r247g；v253f；n255p；t257a；t257d；t257e；k259p；k259v；m261d；m261r；m261w；f262a；f262c；f262e；f262h；f262i；f262k；f262l；f262n；f262p；f262q；f262r；f262s；f262w；a263h；l279i；n283p；w284d；w284e；w284i；w284k；w284m；w284n；w284p；w284q；w284s；w284v；s287k；s287l；s287r；s287y；n296t；s303a；s303c；s303d；s303e；s303f；s303g；s303h；s303m；s303n；s303q；s303t；s303v；s303y；g305e；k311c；l313q；n314p；g315v；h321k；h321l；h321v；p322c；p322e；p322h；p322t；p322y；m323a；m323d；m323e；m323g；m323l；m323p；m323s；m323y；h324a；h324i；h324p；h324w；l340m；s342g；e346a；w347f；w347k；w347n；w347p；w347r；r359w；e360w；q361d；q361h；q361i；q361k；q361l；q361m；q361p；q361r；q361v；q361w；q361y；g362m；y363a；y363g；y363t；y363v；y363w；p364c；y368c；y368q；y372c；y372g；k383t；a384d；d387c；d387p；e391m；r393k；r393m；n395d；n395w；f396e；f396t；d403a；f405c；f405n；f405s；d406v；h407c；h407t；i410h；i410m；i410w；r415c；r415l；r415m；r415y；n418p；h421a；h421l；h421p；h421q；p422d；p422g；n423l；n423v；n423w；n423y；g433s；g435m；k438v；w439a；w439i；w439k；w439s；w439t；w439v；k446a；a447y；h452l；t455v；n457e；n457i；n457v；k458d；t461f；t461q；n465a；n465e；n465g；a466i；d467i；w469a；w469e；w469y；n471a；n471d；n471m；n475a；n475c；n475d；n475e；n475f；n475g；n475h；n475l；n475m；n475p；n475q；n475s；n475t；n475v；n475w；g477a；g477h；g477q；g477s；g477w；s478a；使用seq id no:1进行编号，并且其中所述α-淀粉酶变体在标准a洗涤剂组合物中具有以改善因子(if)≥1.4测量的增加的比活性并且进一步其中所述变体与seq id no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％但小于100％的序列同一性。
[0370]
在一方面，本发明的α-淀粉酶变体在对应于如下位置的位置处包含以下取代中的一个或多个：n3a；n3c；n3d；n3e；n3g；n3l；g7f；r26y；r37a；r37n；t40c；t40d；t40g；t40i；t40n；t40v；a41c；a41d；a41k；a41n；a41r；g73d；g73i；g73l；g73q；g73s；g73t；g73w；k78t；q84i；g110k；a111q；n128e；y135e；a139l；w140a；w140m；k142e；f145i；g149k；v165p；w167p；r176q；i177h；t225f；t225h；t225k；t225y；l230c；r247g；t257d；t257e；m261w；f262a；f262e；f262k；f262n；f262p；f262q；f262r；f262s；f262w；n283p；w284d；w284p；w284s；w284v；s287y；s303a；s303c；s303d；s303e；s303f；s303g；s303h；s303m；s303n；s303q；s303t；s303v；s303y；l313q；n314p；h321k；h321l；h321v；p322c；p322h；p322y；m323a；m323d；m323y；h324p；h324w；l340m；s342g；e346a；w347n；w347p；w347r；r359w；e360w；q361k；q361l；q361m；q361r；q361w；q361y；y363g；y363v；y363w；y368c；y372c；k383t；d387p；e391m；r393k；r393m；n395d；n395w；d403a；f405c；f405s；d406v；h407c；h407t；i410h；r415c；r415l；r415m；r415y；n418p；h421a；h421l；h421p；p422d；n423l；n423v；g435m；w439a；k446a；h452l；t455v；n457i；k458d；n465e；n471a；n471d；n471m；n475a；n475c；n475d；n475e；n475f；n475g；n475h；n475l；n475p；n475q；n475v；n475w；g477a；g477h；g477q；以及g477s；使用seq id no:1进行编号，并且其中所述α-淀粉酶变体在标准a洗涤剂组合物中具有以改善因子(if)≥1.5测量的增加的比活性并且进一步其中所述变体与seq id no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％但小于100％的序列同一性。
[0371]
在一方面，本发明的α-淀粉酶变体在对应于如下位置的位置处包含以下取代中的一个或多个：r37a；r176q；t225y；f262p；n283p；s303c；s303d；s303g；s303m；s303n；s303t；s303v；s303y y368c；n395d；h407t；i410h；r415c；h421a；g435m；n475c；g477a；以及g477h；使用seq id no:1进行编号，并且其中所述α-淀粉酶变体在标准a洗涤剂组合物中具有以改善因子(if)≥2.0测量的增加的比活性并且进一步其中所述变体与seq id no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％但小于100％的序列同一性。
[0372]
在一方面，本发明的α-淀粉酶变体在对应于如下位置的位置处包含以下取代中的一个或多个：s303c；s303t；y368c；以及h421a；使用seq id no:1进行编号，并且其中所述α-淀粉酶变体在标准a洗涤剂组合物中具有以改善因子(if)≥2.5测量的增加的比活性并且进一步其中所述变体与seq id no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％但小于100％的序列同一性。
[0373]
在另一方面，本发明的α-淀粉酶变体在对应于位置r181、g182、d183以及g184的两个或更多个位置处包含缺失，使用seq id no:1进行编号，并且进一步其中所述变体与seq id no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％但小于100％的序列同一性。
[0374]
在一方面，本发明的α-淀粉酶变体，其中缺失选自由以下组成的组：r181* g182*、
r181* d183*、r181* g184*、g182* d183*、g182* g184*或d183* g184*，优选地d183* g184*。
[0375]
这些变体可以进一步在一个或多个(例如几个)其他位置处包含一个或多个另外的取代和/或缺失。
[0376]
氨基酸改变可以具有微小性质，即，不会显著地影响蛋白质的折叠和/或活性的保守氨基酸取代或插入；典型地为1-30个氨基酸的小缺失；小的氨基末端或羧基末端延伸，如氨基末端的甲硫氨酸残基；多达20-25个残基的小接头肽；或小的延伸，其通过改变净电荷或另一功能(如聚组氨酸段、抗原表位或结合结构域)来促进纯化。
[0377]
因此，尽管根据本发明的α-淀粉酶变体可以仅包含一种特定的取代(该取代提供根据本发明的改善的特性)，但是它可能仍然具有另外的修饰，这些修饰导致α-淀粉酶变体与seq id no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％但小于100％的序列同一性。这些另外的修饰应优选不显著改变α-淀粉酶变体的改善的特性。
[0378]
保守取代的实例是在下组之内：碱性氨基酸(精氨酸、赖氨酸、和组氨酸)、酸性氨基酸(谷氨酸和天冬氨酸)、极性氨基酸(谷氨酰胺和天冬酰胺)、疏水性氨基酸(亮氨酸、异亮氨酸、和缬氨酸)、芳香族氨基酸(苯丙氨酸、色氨酸、和酪氨酸)、以及小氨基酸(甘氨酸、丙氨酸、丝氨酸、苏氨酸、和甲硫氨酸)。通常不会改变比活性的氨基酸取代是本领域已知的并且例如由h.neurath和r.l.hill,1979,于the proteins[蛋白质],academic press[学术出版社],纽约中描述。常见取代为ala/ser、val/ile、asp/glu、thr/ser、ala/gly、ala/thr、ser/asn、ala/val、ser/gly、tyr/phe、ala/pro、lys/arg、asp/asn、leu/ile、leu/val、ala/glu和asp/gly。
[0379]
可以根据本领域中已知的程序，如定点诱变或丙氨酸扫描诱变(cunningham和wells,1989,science[科学]244:1081-1085)来鉴定多肽中的必需氨基酸。在后一项技术中，在该分子中的每个残基处引入单个丙氨酸突变，并且对所得突变体分子的蛋白酶活性进行测试以鉴定对于该分子的活性至关重要的氨基酸残基。还参见，hilton等人,1996,j.biol.chem.[生物化学杂志]271:4699-4708。酶或其他生物学相互作用的活性位点还可通过对结构的物理分析来确定，如由下述技术确定：核磁共振、晶体学(crystallography)、电子衍射、或光亲和标记，连同对推定的接触位点氨基酸进行突变。参见例如，de vos等人,1992,science[科学]255:306-312；smith等人,1992,j.mol.biol.[分子生物学杂志]224:899-904；wlodaver等人,1992,febs lett.[欧洲生化学会联合会快报]309:59-64。
[0380]
在一个实施例中，该变体与亲本多肽相比具有改善的(增加的)比活性。
[0381]
在一个实施例中，该变体与亲本多肽(优选地seq id no:1和/或seq id no:2)相比，具有改善的(增加的)比活性。
[0382]
在一个实施例中，在存储条件下，该变体与亲本多肽(优选地seq id no:1和/或seq id no:2)相比，具有改善的(增加的)稳定性。
[0383]
在一个实施例中，该变体与亲本多肽(优选地seq id no:1和/或seq id no:2)相比，具有改善的(增加的)热稳定性。
[0384]
在一个实施例中，该变体与亲本多肽(优选地seq id no:1和/或seq id no:2)相
比，具有改善的(增加的)洗涤性能。
[0385]
亲本α-淀粉酶
[0386]
亲本α-淀粉酶可以是与seq id no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17的多肽中任一项具有至少60％序列同一性的多肽。
[0387]
在一个实施例中，亲本与seq id no:1的多肽具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少87％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性，所述多肽具有α-淀粉酶活性。在一个实施例中，亲本的氨基酸序列与seq id no:1的多肽相差不超过十个氨基酸，例如相差五个氨基酸、相差四个氨基酸、相差三个氨基酸、相差两个氨基酸以及相差一个氨基酸。
[0388]
亲本优选包括seq id no:1的氨基酸序列，或由其组成。在一个实施例中，亲本包含seq id no:1的多肽，或由其组成。在另一个实施例中，亲本是seq id no:1的多肽的等位基因变体。
[0389]
在一个实施例中，亲本与seq id no:2的多肽具有至少60％、例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少87％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性，所述多肽具有α-淀粉酶活性。在一个实施例中，亲本的氨基酸序列与seq id no:2的多肽相差不超过十个氨基酸，例如相差五个氨基酸、相差四个氨基酸、相差三个氨基酸、相差两个氨基酸以及相差一个氨基酸。
[0390]
亲本优选包括seq id no:2的氨基酸序列，或由其组成。在一个实施例中，亲本包含seq id no:2的多肽，或由其组成。在另一个实施例中，亲本是seq id no:2的多肽的等位基因变体。
[0391]
在一个实施例中，亲本与seq id no:3的多肽具有至少60％、例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少87％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性，所述多肽具有α-淀粉酶活性。在一个实施例中，亲本的氨基酸序列与seq id no:3的多肽相差不超过十个氨基酸，例如相差五个氨基酸、相差四个氨基酸、相差三个氨基酸、相差两个氨基酸以及相差一个氨基酸。
[0392]
亲本优选地包括seq id no:3的氨基酸序列，或由其组成。在一个实施例中，亲本包含seq id no:3的多肽，或由其组成。在另一个实施例中，亲本是seq id no:3的多肽的等位基因变体。
[0393]
在一个实施例中，亲本与seq id no:4的多肽具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少80％、至少85％、至少87％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性，所述多肽具有α-淀粉酶活性。在一个实施例中，亲本的氨基酸序列与seq id no:4的多肽相差不超过十个氨基酸，例如相差五个氨基酸、相差四个氨基酸、相差三个氨基酸、相差两个氨基酸以及相差一个氨基酸。
[0394]
亲本优选地包括seq id no:4的氨基酸序列，或由其组成。在一个实施例中，亲本包含seq id no:4的多肽，或由其组成。在另一个实施例中，亲本是seq id no:4的多肽的等位基因变体。
[0395]
在一个实施例中，亲本与seq id no:5的多肽具有至少60％、例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少87％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性，所述多肽具有α-淀粉酶活性。在一个实施例中，
亲本的氨基酸序列与seq id no:5的多肽相差不超过十个氨基酸，例如相差五个氨基酸、相差四个氨基酸、相差三个氨基酸、相差两个氨基酸以及相差一个氨基酸。
[0396]
亲本优选地包括seq id no:5的氨基酸序列，或由其组成。在一个实施例中，亲本包含seq id no:5的多肽，或由其组成。在另一个实施例中，亲本是seq id no:5的多肽的等位基因变体。
[0397]
在一个实施例中，亲本与seq id no:6的多肽具有至少60％、例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少87％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性，所述多肽具有α-淀粉酶活性。在一个实施例中，亲本的氨基酸序列与seq id no:6的多肽相差不超过十个氨基酸，例如相差五个氨基酸、相差四个氨基酸、相差三个氨基酸、相差两个氨基酸以及相差一个氨基酸。
[0398]
亲本优选地包括seq id no:6的氨基酸序列，或由其组成。在一个实施例中，亲本包含seq id no:6的多肽，或由其组成。在另一个实施例中，亲本是seq id no:6的多肽的等位基因变体。
[0399]
在一个实施例中，亲本与seq id no:7的多肽具有至少60％、例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少87％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性，所述多肽具有α-淀粉酶活性。在一个实施例中，亲本的氨基酸序列与seq id no:7的多肽相差不超过十个氨基酸，例如相差五个氨基酸、相差四个氨基酸、相差三个氨基酸、相差两个氨基酸以及相差一个氨基酸。
[0400]
亲本优选地包括seq id no:7的氨基酸序列，或由其组成。在一个实施例中，亲本包含seq id no:7的多肽，或由其组成。在另一个实施例中，亲本是seq id no:7的多肽的等位基因变体。
[0401]
在一个实施例中，亲本与seq id no:8的多肽具有至少60％、例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少87％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性，所述多肽具有α-淀粉酶活性。在一个实施例中，亲本的氨基酸序列与seq id no:8的多肽相差不超过十个氨基酸，例如相差五个氨基酸、相差四个氨基酸、相差三个氨基酸、相差两个氨基酸以及相差一个氨基酸。
[0402]
亲本优选地包括seq id no:8的氨基酸序列，或由其组成。在一个实施例中，亲本包含seq id no:8的多肽，或由其组成。在另一个实施例中，亲本是seq id no:8的多肽的等位基因变体。
[0403]
在一个实施例中，亲本与seq id no:9的多肽具有至少60％、例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少87％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性，所述多肽具有α-淀粉酶活性。在一个实施例中，亲本的氨基酸序列与seq id no:9的多肽相差不超过十个氨基酸，例如相差五个氨基酸、相差四个氨基酸、相差三个氨基酸、相差两个氨基酸以及相差一个氨基酸。
[0404]
亲本优选地包括seq id no:9的氨基酸序列，或由其组成。在一个实施例中，亲本包含seq id no:9的多肽，或由其组成。在另一个实施例中，亲本是seq id no:9的多肽的等位基因变体。
[0405]
在一个实施例中，亲本与seq id no:10的多肽具有至少60％、例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少87％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、
至少98％、至少99％或100％的序列同一性，所述多肽具有α-淀粉酶活性。在一个实施例中，亲本的氨基酸序列与seq id no:10的多肽相差不超过十个氨基酸，例如相差五个氨基酸、相差四个氨基酸、相差三个氨基酸、相差两个氨基酸以及相差一个氨基酸。
[0406]
亲本优选地包括seq id no:10的氨基酸序列，或由其组成。在一个实施例中，亲本包含seq id no:10的多肽，或由其组成。在另一个实施例中，亲本是seq id no:10的多肽的等位基因变体。
[0407]
在一个实施例中，亲本与seq id no:11的多肽具有至少60％、例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少87％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性，所述多肽具有α-淀粉酶活性。在一个实施例中，亲本的氨基酸序列与seq id no:11的多肽相差不超过十个氨基酸，例如相差五个氨基酸、相差四个氨基酸、相差三个氨基酸、相差两个氨基酸以及相差一个氨基酸。
[0408]
亲本优选地包括seq id no:11的氨基酸序列，或由其组成。在一个实施例中，亲本包含seq id no:11的多肽，或由其组成。在另一个实施例中，亲本是seq id no:11的多肽的等位基因变体。
[0409]
在一个实施例中，亲本与seq id no:12的多肽具有至少60％、例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少87％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性，所述多肽具有α-淀粉酶活性。在一个实施例中，亲本的氨基酸序列与seq id no:12的多肽相差不超过十个氨基酸，例如相差五个氨基酸、相差四个氨基酸、相差三个氨基酸、相差两个氨基酸以及相差一个氨基酸。
[0410]
亲本优选地包括seq id no:12的氨基酸序列，或由其组成。在一个实施例中，亲本包含seq id no:12的多肽，或由其组成。在另一个实施例中，亲本是seq id no:12的多肽的等位基因变体。
[0411]
在一个实施例中，亲本与seq id no:13的多肽具有至少60％、例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少87％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性，所述多肽具有α-淀粉酶活性。在一个实施例中，亲本的氨基酸序列与seq id no:13的多肽相差不超过十个氨基酸，例如相差五个氨基酸、相差四个氨基酸、相差三个氨基酸、相差两个氨基酸以及相差一个氨基酸。
[0412]
亲本优选地包括seq id no:13的氨基酸序列，或由其组成。在一个实施例中，亲本包含seq id no:13的多肽，或由其组成。在另一个实施例中，亲本是seq id no:13的多肽的等位基因变体。
[0413]
在一个实施例中，亲本与seq id no:14的多肽具有至少60％、例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少87％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性，所述多肽具有α-淀粉酶活性。在一个实施例中，亲本的氨基酸序列与seq id no:14的多肽相差不超过十个氨基酸，例如相差五个氨基酸、相差四个氨基酸、相差三个氨基酸、相差两个氨基酸以及相差一个氨基酸。
[0414]
亲本优选地包括seq id no:14的氨基酸序列，或由其组成。在一个实施例中，亲本包含seq id no:14的多肽，或由其组成。在另一个实施例中，亲本是seq id no:14的多肽的等位基因变体。
[0415]
在一个实施例中，亲本与seq id no:15的多肽具有至少60％、例如至少65％、至少
70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少87％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性，所述多肽具有α-淀粉酶活性。在一个实施例中，亲本的氨基酸序列与seq id no:15的多肽相差不超过十个氨基酸，例如相差五个氨基酸、相差四个氨基酸、相差三个氨基酸、相差两个氨基酸以及相差一个氨基酸。
[0416]
亲本优选地包括seq id no:15的氨基酸序列，或由其组成。在一个实施例中，亲本包含seq id no:15的多肽，或由其组成。在另一个实施例中，亲本是seq id no:15的多肽的等位基因变体。
[0417]
在一个实施例中，亲本与seq id no:16的多肽具有至少60％、例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少87％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性，所述多肽具有α-淀粉酶活性。在一个实施例中，亲本的氨基酸序列与seq id no:16的多肽相差不超过十个氨基酸，例如相差五个氨基酸、相差四个氨基酸、相差三个氨基酸、相差两个氨基酸以及相差一个氨基酸。
[0418]
亲本优选地包括seq id no:16的氨基酸序列，或由其组成。在一个实施例中，亲本包含seq id no:16的多肽，或由其组成。在另一个实施例中，亲本是seq id no:16的多肽的等位基因变体。
[0419]
在一个实施例中，亲本与seq id no:17的多肽具有至少60％、例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少87％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性，所述多肽具有α-淀粉酶活性。在一个实施例中，亲本的氨基酸序列与seq id no:17的多肽相差不超过十个氨基酸，例如相差五个氨基酸、相差四个氨基酸、相差三个氨基酸、相差两个氨基酸以及相差一个氨基酸。
[0420]
亲本优选地包括seq id no:17的氨基酸序列，或由其组成。在一个实施例中，亲本包含seq id no:17的多肽，或由其组成。在另一个实施例中，亲本是seq id no:17的多肽的等位基因变体。
[0421]
seq id no:1、seq id no:2、seq id no:3、seq id no:4、seq id no:5、seq id no:6、seq id no:7、seq id no:8、seq id no:9、seq id no:10、seq id no:11、seq id no:12、seq id no:13、seq id no:14、seq id no:15、seq id no:16、seq id no:17的氨基酸序列或其活性片段可被用于设计核酸探针，以根据本领域熟知的方法从不同属或物种的菌株鉴定并克隆编码亲本的dna。特别地，根据标准的dna印迹方法，可将这些探针用于与感兴趣的属或物种的基因组或cdna杂交，以鉴定和分离其中相应的基因。此类探针可明显短于完整序列，但是长度应为至少14个，例如至少25个、至少35个或至少70个核苷酸。优选地，核酸探针长度为至少100个核苷酸或长度为至少200个核苷酸、至少300个核苷酸、至少400个核苷酸、至少500个核苷酸、至少600个核苷酸、至少700个核苷酸、至少800个核苷酸或至少900个核苷酸。dna和rna探针两者都可使用。典型地将探针进行标记(例如，用
32
p、3h、
35
s、生物素、或抗生物素蛋白)，用于检测相应基因。此类探针涵盖于本发明中。
[0422]
可以针对与上文所述的探针杂交并编码亲本的dna来筛选由这类其他生物制备的基因组dna或cdna文库。可通过琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶电泳、或其他分离技术分离来自这类其他生物的基因组或其他dna。可将来自文库的dna或分离的dna转移到并固定在用于dna印迹中的硝化纤维素或其他适合的载体材料上。
[0423]
出于本发明的目的，杂交指示多核苷酸在低至非常高严格条件下，与被标记的核
苷酸探针杂交，该核苷酸探针对应于编码seq id no:1、seq id no:2、seq id no:3、seq id no:4、seq id no:5、seq id no:6、seq id no:7、seq id no:8、seq id no:9、seq id no:10、seq id no:11、seq id no:12、seq id no:13、seq id no:14、seq id no:15、seq id no:16、seq id no:17或其子序列的多核苷酸。可以使用例如x-射线片或本领域已知的任何其他检测手段来检测所述探针所杂交的分子。
[0424]
在一方面，所述核酸探针是编码seq id no:1、seq id no:2、seq id no:3、seq id no:4、seq id no:5、seq id no:6、seq id no:7、seq id no:8、seq id no:9、seq id no:10、seq id no:11、seq id no:12、seq id no:13、seq id no:14、seq id no:15、seq id no:16、seq id no:17的多肽或其活性片段的多核苷酸。
[0425]
对于长度为至少100个核苷酸的长探针而言，非常低至非常高严格条件定义为最佳地按照标准dna印迹程序，在42℃在5x sspe、0.3％sds、200微克/ml剪切并变性的鲑精dna中，以及对于非常低和低严格度在25％甲酰胺中，对于中和中-高严格度在35％甲酰胺中，或对于高和非常高严格度在50％甲酰胺中预杂交和杂交12至24小时。将载体材料最终使用2xssc、0.2％sds在45℃(非常低严格度)、50℃(低严格度)、55℃(中严格度)、60℃(中-高严格度)、65℃(高严格度)、或70℃(非常高严格度)洗涤三次，每次持续15分钟。
[0426]
对于长度为约15个核苷酸至约70个核苷酸的短探针而言，严格条件定义为最佳地遵循标准dna印迹程序，在比使用根据bolton和mccarthy(1962,proc.natl.acad.sci.usa[美国国家科学院院刊]48:1390)的计算所算出的tm低约5℃至约10℃，在每ml 0.9m nacl、0.09m tris-hcl(ph 7.6)、6mm edta、0.5％np-40、1x登哈特氏溶液(denhardt’s solution)、1mm焦磷酸钠、1mm磷酸二氢钠、0.1mm atp、以及0.2mg的酵母rna中预杂交和杂交12至24小时。将载体材料最终在比所计算的tm低5℃至10℃，在6xscc加0.1％sds中洗涤一次(持续15分钟)并且使用6x ssc洗涤两次(每次15分钟)。
[0427]
亲本可以从任何属的微生物中获得。出于本发明的目的，如文本与一种给定的来源相连使用的术语“从
……
中获得”意指由多核苷酸编码的亲本是由所述来源或者由其中已经插入来自所述来源的多核苷酸的细胞产生的。在一方面，亲本是胞外分泌的。
[0428]
亲本可以是细菌α-淀粉酶。例如，所述亲本可以是革兰氏阳性细菌多肽，如芽孢杆菌属(bacillus)、梭菌属(clostridium)、肠球菌属(enterococcus)、土芽孢杆菌属(geobacillus)、乳杆菌属(lactobacillus)、乳球菌属(lactococcus)、海洋芽孢杆菌属(oceanobacillus)、葡萄球菌属(staphylococcus)、链球菌属(streptococcus)、或链霉菌属(streptomyces)α-淀粉酶，或者革兰氏阴性细菌多肽，如弯曲杆菌属(campylobacter)、大肠杆菌(e.coli)、黄杆菌属(flavobacterium)、梭杆菌属(fusobacterium)、螺杆菌属(helicobacter)、泥杆菌属(ilyobacter)、奈瑟氏菌属(neisseria)、假单胞菌属(pseudomonas)、沙门氏菌属(salmonella)、或脲原体属(ureaplasma)α-淀粉酶。
[0429]
在一方面，所述亲本是嗜碱芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、短芽孢杆菌、环状芽孢杆菌、克劳氏芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、坚强芽孢杆菌、灿烂芽孢杆菌、迟缓芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、或苏云金芽孢杆菌α-淀粉酶。
[0430]
在另一方面，所述亲本是似马链球菌(streptococcus equisimilis)、酿脓链球菌(streptococcus pyogenes)、乳房链球菌(streptococcus uberis)、或马链球菌兽瘟亚种
(streptococcus equi subsp.zooepidemicus)α-淀粉酶。
[0431]
在另一方面，所述亲本是不产色链霉菌(streptomyces achromogenes)、除虫链霉菌(streptomyces avermitilis)、天蓝链霉菌(streptomyces coelicolor)、灰色链霉菌(streptomyces griseus)、或浅青紫链霉菌(streptomyces lividans)α-淀粉酶。
[0432]
所述亲本可以是真菌α-淀粉酶。例如，所述亲本可以是酵母α-淀粉酶，如假丝酵母属(candida)、克鲁维酵母属(kluyveromyces)、毕赤酵母属(pichia)、酵母属(saccharomyces)、裂殖酵母(schizosaccharomyces)或耶氏酵母属(yarrowia)α-淀粉酶。例如，所述亲本可以是丝状真菌α-淀粉酶，如枝顶孢属(acremonium)、伞菌属(agaricus)、链格孢属(alternaria)、曲霉属、短梗霉属(aureobasidium)、葡萄座腔菌属(botryospaeria)、拟蜡菌属(ceriporiopsis)、毛喙壳属(chaetomidium)、金孢子菌属(chrysosporium)、麦角菌属(claviceps)、旋孢腔菌属(cochliobolus)、鬼伞属(coprinopsis)、乳白蚁属(coptotermes)、棒囊壳属(corynascus)、隐丛赤壳菌属(cryphonectria)、隐球菌属(cryptococcus)、色二孢属(diplodia)、黑耳属(exidia)、线黑粉酵母属(filibasidium)、镰孢属(fusarium)、赤霉属(gibberella)、全鞭毛虫属(holomastigotoides)、腐质霉属(humicola)、耙齿菌属(irpex)、香菇属(lentinula)、小腔球菌属(leptospaeria)、梨孢菌属(magnaporthe)、黑果菌属(melanocarpus)、亚灰树花菌属、毛霉属(mucor)、毁丝霉属(myceliophthora)、新美鞭菌属(neocallimastix)、链孢菌属(neurospora)、拟青霉属(paecilomyces)、青霉菌属、平革菌属(phanerochaete)、瘤胃壶菌属(piromyces)、poitrasia、假黑盘菌属(pseudoplectania)、假披发虫属(pseudotrichonympha)、根毛霉属(rhizomucor)、裂褶菌属(schizophyllum)、柱顶孢属(scytalidium)、篮状菌属(talaromyces)、嗜热子囊菌属(thermoascus)、梭孢壳霉属(thielavia)、弯颈霉属(tolypocladium)、木霉属(trichoderma)、长毛盘菌属(trichophaea)、轮枝孢属(verticillium)、小包脚菇属(volvariella)、或炭角菌属(xylaria)α-淀粉酶。
[0433]
在另一方面，所述亲本是卡氏酵母(saccharomyces carlsbergensis)、酿酒酵母(saccharomyces cerevisiae)、糖化酵母(saccharomyces diastaticus)、道格拉氏酵母(saccharomyces douglasii)、克鲁弗酵母(saccharomyces kluyveri)、诺地酶母(saccharomyces norbensis)、或卵形酵母(saccharomyces oviformis)α-淀粉酶。
[0434]
在另一方面，所述亲本是解纤维枝顶孢霉(acremonium cellulolyticus)、棘孢曲霉(aspergillus aculeatus)、泡盛曲霉(aspergillus awamori)、臭曲霉(aspergillus foetidus)、烟曲霉(aspergillus fumigatus)、日本曲霉(aspergillus japonicus)、构巢曲霉(aspergillus nidulans)、黑曲霉(aspergillus niger)、米曲霉(aspergillus oryzae)、狭边金孢子菌(chrysosporium inops)、嗜角质金孢子菌(chrysosporium keratinophilum)、拉克淖金孢子菌(chrysosporium lucknowense)、粪状金孢子菌(chrysosporium merdarium)、毡金孢子菌(chrysosporium pannicola)、昆士兰金孢子菌(chrysosporium queenslandicum)、热带金孢子菌(chrysosporium tropicum)、带纹金孢子菌(chrysosporium zonatum)、杆孢状镰孢(fusarium bactridioides)、禾谷镰孢(fusarium cerealis)、库威镰孢(fusarium crookwellense)、黄色镰孢菌(fusarium culmorum)、禾谷镰孢菌(fusarium graminearum)、禾赤镰孢(fusarium graminum)、异孢镰
孢(fusarium heterosporum)、合欢木镰孢(fusarium negundi)、尖孢镰孢菌(fusarium oxysporum)、多枝镰孢(fusarium reticulatum)、粉红镰孢菌(fusarium roseum)、接骨木镰孢(fusarium sambucinum)、肤色镰孢(fusarium sarcochroum)、拟枝孢镰孢菌(fusarium sporotrichioides)、硫色镰孢菌(fusarium sulphureum)、圆镰孢(fusarium torulosum)、拟丝孢镰孢菌(fusarium trichothecioides)、镶片镰孢菌(fusarium venenatum)、灰腐质霉(humicola grisea)、特异腐质霉(humicola insolens)、疏棉状腐质霉(humicola lanuginosa)、白囊耙齿菌(irpex lacteus)、米黑毛霉(mucor miehei)、嗜热毁丝霉(myceliophthora thermophila)、粗糙脉孢菌(neurospora crassa)、绳状青霉菌(penicillium funiculosum)、产紫青霉(penicillium purpurogenum)、黄孢原毛平革菌(phanerochaete chrysosporium)、无色梭孢壳(thielavia achromatica)、成层梭孢壳菌(thielavia albomyces)、白毛梭孢壳(thielavia albopilosa)、澳洲梭孢壳(thielavia australeinsis)、粪梭孢壳(thielavia fimeti)、小孢梭孢壳(thielavia microspora)、卵孢梭孢壳(thielavia ovispora)、秘鲁梭孢壳(thielavia peruviana)、毛梭孢壳(thielavia setosa)、瘤孢梭孢壳(thielavia spededonium)、耐热梭孢壳(thielavia subthermophila)、土生梭孢壳(thielavia terrestris)、哈茨木霉(trichoderma harzianum)、康宁木霉(trichoderma koningii)、长枝木霉(trichoderma longibrachiatum)、里氏木霉(trichoderma reesei)、或绿色木霉(trichoderma viride)α-淀粉酶。
[0435]
在另一方面，亲本是芽孢杆菌属物种α-淀粉酶，例如，seq id no:1、seq id no:2、seq id no:3、seq id no:4、seq id no:5、seq id no:6、seq id no:7、seq id no:8、seq id no:9、seq id no:10、seq id no:11、seq id no:12、seq id no:13、seq id no:14、seq id no:15、seq id no:16、seq id no:17的α-淀粉酶。
[0436]
应理解的是，对于前述物种，本发明涵盖完全和不完全阶段(perfect and imperfect states)，和其他分类学等同物，例如无性型，而与它们已知的物种名无关。本领域的技术人员会容易地识别适当等同物的身份。
[0437]
这些物种的菌株可以容易地在许多培养物保藏中心为公众所获得，这些培养物保藏中心如美国典型培养物保藏中心(atcc)、德国微生物和细胞培养物保藏中心(deutsche sammlung von mikroorganismen und zellkulturen gmbh，dsm)、荷兰菌种保藏中心(centraalbureau voor schimmelcultures，cbs)以及美国农业研究服务专利培养物保藏中心北方地区研究中心(nrrl)。
[0438]
可以使用上述探针，从其他来源包括从自然界(例如，土壤、堆肥、水等)分离的微生物鉴定并获得所述亲本或从天然材料(例如，土壤、堆肥、水等)直接获得dna样品。用于从天然生境中直接分离微生物和dna的技术是本领域熟知的。随后可以通过类似地筛选另一种微生物的基因组或cdna文库或混合dna样品而得到编码亲本的多核苷酸。一旦已经用一种或多种探针检测到编码亲本的多核苷酸，则可通过利用对本领域的普通技术人员来说已知的技术来分离或克隆所述多核苷酸(参见例如，sambrook等人，1989，同上)。
[0439]
亲本可以是杂合多肽，其中一个多肽的一部分融合在另一个多肽的一部分的n末端或c末端处。
[0440]
亲本还可为一种融合多肽或可切割的融合多肽，其中一个多肽融合在另一个多肽
的n末端或c末端处。通过将编码一个多肽的多核苷酸融合至编码另一个多肽的多核苷酸而产生融合多肽。用于产生融合多肽的技术是本领域已知的，并包括连接编码多肽的编码序列，使得它们在阅读框中，并且使所述融合多肽的表达在相同的一个或多个启动子和终止子的控制下。还可使用内含肽技术构建融合多肽，其中在翻译后产生融合物(cooper等人,1993,embo j.[欧洲分子生物学学会杂志]12:2575-2583；dawson等人,1994,science[科学]266:776-779)。
[0441]
融合多肽可进一步包含两个多肽之间的切割位点。在融合蛋白分泌之时，位点被切割，从而释放出这两种多肽。切割位点的实例包括但不限于在以下文献中披露的位点：martin等人,2003,j.ind.microbiol.biotechnol.[工业微生物生物技术杂志]3:568-576；svetina等人,2000,j.biotechnol.[生物技术杂志]76:245-251；rasmussen-wilson等人,1997,appl.environ.microbiol.[应用与环境微生物学]63:3488-3493；ward等人,1995,biotechnology[生物技术]13:498-503；和contreras等人,1991,biotechnology[生物技术]9:378-381；eaton等人,1986,biochemistry[生物化学]25:505-512；collins-racie等人,1995,biotechnology[生物技术]13:982-987；carter等人,1989,proteins:structure,function,and genetics[蛋白质：结构、功能以及遗传学]6:240-248；以及stevens,2003,drug discovery world[药物发现世界]4:35-48。
[0442]
变体的制备
[0443]
本发明涉及获得具有α-淀粉酶活性的变体的方法，该方法包括(a)在对应于以下位置的一个或多个位置处向亲本α-淀粉酶引入取代：3、5、7、8、16、18、25、26、29、30、35、37、40、41、43、46、50、57、60、68、71、73、74、78、81、84、86、87、90、91、93、97、98、103、105、110、111、113、114、116、117、119、120、121、125、126、128、129、131、132、133、135、137、138、139、140、141、142、143、145、146、147、149、159、161、162、165、167、169、171、176、177、179、180、181、185、186、187、195、196、197、204、206、208、211、216、218、219、225、228、230、231、235、242、243、247、250、251、252、253、254、255、257、259、260、261、262、263、265、272、273、274、279、280、281、283、284、287、292、294、296、298、299、300、303、305、307、310、311、313、314、315、319、320、321、322、323、324、334、337、339、340、342、344、345、346、347、350、359、360、361、362、363、364、368、372、375、380、382、383、384、385、387、388、391、393、395、396、397、398、401、402、403、405、406、407、410、415、416、418、421、422、423、433、434、435、438、439、446、447、449、450、452、455、457、458、460、461、462、465、466、467、469、471、473、475、476、477以及478，使用seq id no:1进行编号，其中所述变体具有α-淀粉酶活性；以及(b)回收所述变体。
[0444]
在一方面，本发明涉及获得具有α-淀粉酶活性的变体的方法，该方法包括(a)在对应于以下位置的一个或多个位置处向亲本α-淀粉酶引入取代：3、5、7、8、16、18、25、26、29、30、35、37、40、41、43、46、50、57、60、68、71、73、74、78、81、84、86、87、90、91、93、97、98、103、105、110、111、113、114、116、117、119、120、121、125、126、128、129、131、132、133、135、137、138、139、140、141、142、143、145、146、147、149、159、161、162、165、167、169、171、176、177、179、180、181、185、186、187、195、196、197、204、206、208、211、216、218、219、225、228、230、231、235、242、243、247、250、251、252、253、254、255、257、259、260、261、262、263、265、272、273、274、279、280、281、283、284、287、292、294、296、298、299、300、303、305、307、310、311、
313、314、315、319、320、321、322、323、324、334、337、339、340、342、344、345、346、347、350、359、360、361、362、363、364、368、372、375、380、382、383、384、385、387、388、391、393、395、396、397、398、401、402、403、405、406、407、410、415、416、418、421、422、423、433、434、435、438、439、446、447、449、450、452、455、457、458、460、461、462、465、466、467、469、471、473、475、476、477以及478，使用seq id no:1进行编号，其中所述变体具有α-淀粉酶活性；以及(b)回收所述变体。
[0445]
在另一个实施例中，本发明涉及获得具有α-淀粉酶活性的变体的方法，该方法包括(a)在一个或多个位置处向亲本α-淀粉酶引入取代，其中该取代选自：n3a、n3c、n3d、n3e、n3f、n3g、n3h、n3l、n3p、n3q、n3s、n3t、n3v、t5e、g7e、g7f、g7h、g7k、g7l、g7p、g7r、g7s、g7t、g7v、g7w、t8s、h16d、h16r、p18d、p18l、p18n、n25t、r26y、d29n、d30f、r35p、r37a、r37n、t40a、t40c、t40d、t40e、t40g、t40h、t40i、t40k、t40n、t40v、t40w、a41c、a41d、a41e、a41h、a41i、a41k、a41n、a41r、a41t、a41v、a41y、w43e、p46a、g50m、g50p、g50q、g57a、g57s、a60e、a60s、a60v、e68f、e68y、q71f、g73d、g73h、g73i、g73l、g73q、g73s、g73t、g73w、t74f、k78s、k78t、t81m、q84i、q84w、q84y、e86k、e86s、s87g、s87l、s87p、h90p、a91q、a91v、a91w、k93v、v97c、v97h、q98e、q98f、q98g、q98i、q98k、q98l、q98m、q98r、q98t、q98y、v103c、v103g、v103s、m105f、g110k、g110r、a111e、a111q、a113t、t114m、t114v、n116c、n116y、v117f、a119h、a119l、a119y、v120e、e121i、n125s、n126i、n128e、q129t、i131y、s132a、s132d、s132h、s132i、s132k、s132l、s132p、s132r、s132t、s132v、s132y、g133e、g133l、g133t、g133v、y135c、y135d、y135e、y135p、i137d、i137n、i137q、i137w、i137y、e138s、e138v、a139l、w140a、w140d、w140m、w140n、w140p、w140s、w140t、w140v、t141g、k142e、k142n、f143h、f143i、f143m、f145g、f145h、f145i、f145l、f145s、p146a、p146h、p146n、g147d、g149f、g149k、w159a、w159e、h161w、f162t、v165p、w167d、w167g、w167p、q169l、q169p、q169v、q169y、r171p、r176e、r176q、r176v、r176y、i177h、i177p、k179a、k179m、k179v、f180d、f180g、r181d、r181e、r181g、r181m、r181y、k185t、k185v、k185w、a186d、w187t、n195y、g196d、n197v、n197y、a204f、a204h、a204l、v206n、m208d、p211c、p211m、e216l、r218q、r219v、t225d、t225f、t225h、t225k、t225l、t225n、t225r、t225y、l228v、l230c、l230f、d231g、d231t、d231v、i235a、k242l、y243d、y243m、y243n、r247g、r247p、r247s、l250s、l250y、t251d、h252p、v253f、v253s、r254d、r254f、r254h、r254p、r254t、r254v、r254w、n255c、n255f、n255p、t257a、t257c、t257d、t257e、t257g、t257p、t257q、t257s、t257w、t257y、k259p、k259v、k259w、k259y、e260v、m261d、m261f、m261p、m261r、m261s、m261w、f262a、f262c、f262e、f262h、f262i、f262k、f262l、f262n、f262p、f262q、f262r、f262s、f262t、f262v、f262w、a263e、a263h、a263w、a265q、l272w、g273q、a274d、l279i、n280p、k281h、k281i、k281s、n283p、w284a、w284d、w284e、w284g、w284i、w284k、w284m、w284n、w284p、w284q、w284s、w284t、w284v、w284y、s287i、s287k、s287l、s287p、s287r、s287t、s287v、s287y、p292l、p292m、p292y、h294n、h294s、n296t、y298d、y298e、n299t、a300g、s303a、s303c、s303d、s303e、s303f、s303g、s303h、s303l、s303m、s303n、s303q、s303t、s303v、s303y、g305e、y307s、a310d、a310n、k311a、k311c、l313q、n314p、n314s、g315e、g315m、g315v、q319c、q319e、k320s、k320w、h321f、h321k、h321l、h321r、h321t、h321v、h321w、p322c、p322e、p322h、p322t、p322y、m323a、m323c、m323d、m323e、m323g、m323h、
m323l、m323n、m323p、m323r、m323s、m323t、m323w、m323y、h324a、h324i、h324p、h324t、h324w、h324y、s334v、g337v、l340m、s342a、s342g、s342t、v344a、v344c、v344i、q345n、e346a、w347a、w347e、w347f、w347g、w347h、w347k、w347n、w347p、w347r、p350a、p350c、p350n、p350t、r359c、r359f、r359g、r359m、r359s、r359w、e360d、e360h、e360p、e360t、e360w、q361d、q361h、q361i、q361k、q361l、q361m、q361n、q361p、q361r、q361s、q361t、q361v、q361w、q361y、g362m、y363a、y363e、y363f、y363g、y363i、y363l、y363q、y363r、y363s、y363t、y363v、y363w、p364c、y368c、y368q、y368r、y368t、y372c、y372g、y372n、y372t、p375q、p375t、p380f、m382i、k383c、k383l、k383p、k383t、a384d、a384n、k385n、k385v、d387c、d387p、d387r、d387w、p388i、e391m、r393k、r393m、n395c、n395d、n395k、n395v、n395w、f396e、f396g、f396t、a397v、y398e、q401h、h402s、d403a、d403e、d403t、f405c、f405n、f405s、f405t、d406v、h407c、h407q、h407t、i410h、i410m、i410r、i410w、r415c、r415l、r415m、r415y、e416d、e416f、e416l、e416n、n418a、n418p、n418v、h421a、h421g、h421l、h421p、h421q、h421y、p422d、p422g、p422i、p422n、p422q、p422s、n423g、n423h、n423i、n423l、n423m、n423p、n423q、n423v、n423w、n423y、g433a、g433n、g433s、p434i、p434l、g435c、g435l、g435m、g435t、g435v、k438a、k438i、k438q、k438s、k438v、w439a、w439d、w439i、w439k、w439l、w439n、w439s、w439t、w439v、w439y、k446a、k446f、a447d、a447y、q449t、v450d、v450n、h452l、t455c、t455m、t455v、n457d、n457e、n457i、n457l、n457v、k458d、k458l、g460m、g460v、t461f、t461i、t461q、t461v、v462c、n465a、n465c、n465e、n465g、n465h、n465l、n465p、n465t、a466f、a466i、a466y、d467i、w469a、w469e、w469h、w469l、w469n、w469q、w469r、w469s、w469y、n471a、n471d、n471m、n471w、s473n、n475a、n475c、n475d、n475e、n475f、n475g、n475h、n475i、n475l、n475m、n475p、n475q、n475s、n475t、n475v、n475w、g476f、g476l、g477a、g477h、g477q、g477s、g477w、s478a、s478f以及s478q，使用seq id no:1进行编号，以及(b)回收该变体。
[0446]
可以使用本领域已知的任何诱变程序来制备这些变体，如定点诱变、合成基因构建、半合成基因构建、随机诱变、改组等。
[0447]
定点诱变是在编码该亲本的多核苷酸中在一个或多个限定位点处创建一个或多个(几个)突变的技术。
[0448]
通过涉及使用含有所希望的突变的寡核苷酸引物的pcr可以体外实现定点诱变。也可以通过盒式诱变进行体外定点诱变，该盒式诱变涉及由限制酶在包含编码亲本的多核苷酸的质粒中的位点处切割并且随后将含有突变的寡核苷酸连接在多核苷酸中。通常，消化质粒和寡核苷酸的限制性酶是相同的，允许质粒和插入物的粘性末端彼此连接。参见例如，scherer和davis,1979,proc.natl.acad.sci.usa[美国国家科学院院刊]76:4949-4955；和barton等人,1990,nucleic acids res.[核酸研究]18:7349-4966。
[0449]
还可以通过本领域中已知的方法在体内实现定点诱变。参见例如，美国专利申请公布号2004/0171154；storici等人,2001,nature biotechnol.[自然生物技术]19:773-776；kren等人,1998,nat.med.[自然医学]4:285-290；以及calissano和macino,1996,fungal genet.newslett.[真菌遗传学时事通讯]43:15-16。
[0450]
可以在本发明中使用任何定点诱变程序。存在可用于制备变体的许多可商购的试剂盒。
[0451]
合成基因构建需要设计的多核苷酸分子的体外合成以编码目的多肽。基因合成可以利用多种技术来进行，如由tian等人(2004,nature[自然]432:1050-1054)所述的基于多路微芯片的技术、以及其中在光可编程的微流芯片上合成并组装寡核苷酸的类似技术。
[0452]
使用已知的诱变、重组和/或改组方法，随后进行相关的筛选程序可以做出单或多氨基酸取代、缺失和/或插入并对其进行测试，该相关的筛选程序如由reidhaar-olson和sauer,1988,science[科学]241:53-57；bowie和sauer,1989,proc.natl.acad.sci.usa[美国国家科学院院刊]86:2152-2156；wo 95/17413；或wo 95/22625披露的那些。其他可以使用的方法包括易错pcr、噬菌体展示(例如lowman等人,1991,biochemistry[生物化学]30:10832-10837；美国专利号5,223,409；wo 92/06204)以及区域定向诱变(derbyshire等人,1986,gene[基因]46:145；ner等人,1988,dna 7:127)。
[0453]
诱变/改组方法可以与高通量、自动化的筛选方法组合以检测由宿主细胞表达的克隆的、诱变的多肽的活性(ness等人,1999,nature biotechnology[自然生物技术]17:893-896)。可从宿主细胞回收编码活性多肽的诱变的dna分子，并使用本领域的标准方法快速测序。这些方法允许快速确定多肽中各个氨基酸残基的重要性。
[0454]
通过组合合成基因构建、和/或定点诱变、和/或随机诱变、和/或改组的多方面来实现半合成基因构建。半合成构建典型地是利用合成的多核苷酸片段的过程与pcr技术组合。因此，基因的限定区域可以从头合成，而其他区域可以使用位点特异性诱变引物来扩增，而还有其他区域可以进行易错pcr或非易错pcr扩增。然后可以对多核苷酸子序列进行改组。
[0455]
多核苷酸
[0456]
本发明还涉及编码本发明的变体中的任一种的分离的多核苷酸。因此，本发明涉及编码如下变体的分离的多核苷酸，该变体在对应于以下位置的一个或多个位置处包含取代：3、5、7、8、16、18、25、26、29、30、35、37、40、41、43、46、50、57、60、68、71、73、74、78、81、84、86、87、90、91、93、97、98、103、105、110、111、113、114、116、117、119、120、121、125、126、128、129、131、132、133、135、137、138、139、140、141、142、143、145、146、147、149、159、161、162、165、167、169、171、176、177、179、180、181、185、186、187、195、196、197、204、206、208、211、216、218、219、225、228、230、231、235、242、243、247、250、251、252、253、254、255、257、259、260、261、262、263、265、272、273、274、279、280、281、283、284、287、292、294、296、298、299、300、303、305、307、310、311、313、314、315、319、320、321、322、323、324、334、337、339、340、342、344、345、346、347、350、359、360、361、362、363、364、368、372、375、380、382、383、384、385、387、388、391、393、395、396、397、398、401、402、403、405、406、407、410、415、416、418、421、422、423、433、434、435、438、439、446、447、449、450、452、455、457、458、460、461、462、465、466、467、469、471、473、475、476、477以及478，使用seq id no:1进行编号，并且其中该变体与seq id no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17中阐述的氨基酸序列具有至少60％、例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、例如至少85％、至少90％、例如至少95％、例如至少97％但小于100％的序列同一性，并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
[0457]
在一方面，seq id no:18的多核苷酸序列编码多肽seq id no:1和/或seq id no:2。
[0458]
核酸构建体
[0459]
本发明还涉及包含编码本发明的变体的、可操作地连接至一个或多个(几个)控制序列上的多核苷酸的核酸构建体，该一个或多个控制序列在与控制序列相容的条件下指导编码序列在适合的宿主细胞中表达。因此，本发明涉及核酸构建体，该核酸构建体包含编码如下变体的多核苷酸，该变体在对应于如下位置的一个或多个位置处包含取代：3、5、7、8、16、18、25、26、29、30、35、37、40、41、43、46、50、57、60、68、71、73、74、78、81、84、86、87、90、91、93、97、98、103、105、110、111、113、114、116、117、119、120、121、125、126、128、129、131、132、133、135、137、138、139、140、141、142、143、145、146、147、149、159、161、162、165、167、169、171、176、177、179、180、181、185、186、187、195、196、197、204、206、208、211、216、218、219、225、228、230、231、235、242、243、247、250、251、252、253、254、255、257、259、260、261、262、263、265、272、273、274、279、280、281、283、284、287、292、294、296、298、299、300、303、305、307、310、311、313、314、315、319、320、321、322、323、324、334、337、339、340、342、344、345、346、347、350、359、360、361、362、363、364、368、372、375、380、382、383、384、385、387、388、391、393、395、396、397、398、401、402、403、405、406、407、410、415、416、418、421、422、423、433、434、435、438、439、446、447、449、450、452、455、457、458、460、461、462、465、466、467、469、471、473、475、476、477以及478，使用seq id no:1进行编码，其中在与控制序列相容的条件下，该多核苷酸可操作地连接至一个或多个控制序列，该一个或多个控制序列指导该编码序列在合适的宿主细胞中的表达。
[0460]
可以按多种方式来操纵多核苷酸以提供一种变体的表达。取决于表达载体，在多核苷酸插入载体之前对其进行操纵可能是理想的或必需的。用于利用重组dna方法修饰多核苷酸的技术是本领域熟知的。
[0461]
控制序列可以是一个启动子序列，即由一个宿主细胞识别用于表达该多核苷酸的一种序列。启动子序列包含介导变体表达的转录控制序列。该启动子可以是在宿主细胞中显示出转录活性的任何核酸序列，包括突变体、截短的及杂合启动子，并且可以是从编码与该宿主细胞同源或异源的细胞外或细胞内多肽的基因获得。
[0462]
用于在细菌宿主细胞中指导本发明的核酸构建体的转录的合适启动子的实例是从以下各项中获得的启动子：解淀粉芽孢杆菌α-淀粉酶基因(amyq)、地衣芽孢杆菌α-淀粉酶基因(amyl)、地衣芽孢杆菌青霉素酶基因(penp)、嗜热脂肪芽孢杆菌麦芽糖淀粉酶基因(amym)、枯草芽孢杆菌果聚糖蔗糖酶基因(sacb)、枯草芽孢杆菌xyla和xylb基因、大肠杆菌lac操纵子、天蓝链霉菌琼脂水解酶基因(daga)、以及原核β-内酰胺酶基因(villa-kamaroff等人,1978,proc.natl.acad.sci.usa[美国国家科学院院刊]75:3727-3731)、以及tac启动子(deboer等人,1983,proc.natl.acad.sci.usa[美国国家科学院院刊]80:21-25)。另外的启动子描述于gilbert等人,1980,scientific american[科学美国人]242:74-94中的“useful proteins from recombinant bacteria[来自重组细菌的有用蛋白质]”；和sambrook等人,1989，见上文中。
[0463]
用于指导本发明的核酸构建体在丝状真菌宿主细胞中的转录的合适启动子的实例是从以下的基因获得的启动子：构巢曲霉乙酰胺酶、黑曲霉中性α-淀粉酶、黑曲霉酸稳定性α-淀粉酶、黑曲霉或泡盛曲霉葡糖淀粉酶(glaa)、米曲霉taka淀粉酶、米曲霉碱性蛋白酶、米曲霉丙糖磷酸异构酶、尖孢镰孢胰蛋白酶样蛋白酶(wo 96/00787)、镶片镰孢淀粉葡
糖苷酶(wo00/56900)、镶片镰孢daria(wo 00/56900)、镶片镰孢quinn(wo 00/56900)、米黑根毛霉(rhizomucor miehei)脂肪酶、米黑根毛霉天冬氨酸蛋白酶、里氏木霉β-葡糖苷酶、里氏木霉纤维二糖水解酶i、里氏木霉纤维二糖水解酶ii、里氏木霉内切葡聚糖酶i、里氏木霉内切葡聚糖酶ii、里氏木霉内切葡聚糖酶iii、里氏木霉内切葡聚糖酶iv、里氏木霉内切葡聚糖酶v、里氏木霉木聚糖酶i、里氏木霉木聚糖酶ii、里氏木霉β-木糖苷酶、以及na2-tpi启动子(一种修饰的启动子，包含曲霉中编码中性α-淀粉酶的基因，其中未翻译的前导子由来自曲霉中编码丙糖磷酸异构酶的基因的未翻译的前导子替代；非限制性实例包含修饰的启动子，包含来自黑曲霉中编码中性α-淀粉酶的基因，其中未翻译的前导子由来自构巢曲霉或米曲霉中编码丙糖磷酸异构酶的基因的未翻译的前导子替代)；及其突变型、截短型及杂合型启动子。
[0464]
在酵母宿主中，有用的启动子从以下的基因获得：酿酒酵母烯醇化酶(eno-1)、酿酒酵母半乳糖激酶(gal1)、酿酒酵母醇脱氢酶/甘油醛-3-磷酸脱氢酶(adh1，adh2/gap)、酿酒酵母丙糖磷酸异构酶(tpi)、酿酒酵母金属硫蛋白(cup1)和酿酒酵母3-磷酸甘油酸激酶。romanos等人,1992,yeast[酵母]8:423-488描述了酵母宿主细胞的其他有用的启动子。
[0465]
控制序列也可以是被宿主细胞识别以终止转录的适合的转录终止子序列。终止子序列可操作地连接至编码该变体的多核苷酸的3
’‑
末端。可以使用在宿主细胞中有功能的任何终止子。
[0466]
丝状真菌宿主细胞的优选终止子是从以下的基因中获得的：构巢曲霉邻氨基苯甲酸合酶、黑曲霉α-葡糖苷酶、黑曲霉葡糖淀粉酶、米曲霉taka淀粉酶以及尖孢镰孢菌胰蛋白酶样蛋白酶。
[0467]
对于酵母宿主细胞的优选终止子从以下的基因获得：酿酒酵母烯醇化酶、酿酒酵母细胞色素c(cyc1)和酿酒酵母甘油醛-3-磷酸脱氢酶。对于酵母宿主细胞其他有用的终止子由romanos等人，1992，见上文描述。
[0468]
调控序列还可以是合适的前导序列，其为对于宿主细胞的翻译重要的mrna非翻译区。前导序列可操作地连接至编码该变体的多核苷酸的5
’‑
末端。可以使用在宿主细胞中具有功能的任何前导序列。
[0469]
用于丝状真菌宿主细胞的优选前导序列是从米曲霉taka淀粉酶和构巢曲霉丙糖磷酸异构酶的基因获得的。
[0470]
对于酵母宿主细胞合适的前导序列从以下的基因获得：酿酒酵母烯醇化酶(eno-1)、酿酒酵母3-磷酸甘油酸激酶、酿酒酵母α因子和酿酒酵母醇脱氢酶/甘油醛-3-磷酸脱氢酶(adh2/gap)。
[0471]
控制序列还可以是多腺苷酸化序列，即被可操作地连接至变体编码序列的3
’‑
末端并且当转录时由宿主细胞识别为将聚腺苷酸残基添加到转录的mrna上的信号的序列。可以使用在宿主细胞中有功能的任何多腺苷酸化序列。
[0472]
丝状真菌宿主细胞的优选多聚腺苷酸化从针对以下的基因获得：构巢曲霉邻氨基苯甲酸酯合酶、黑曲霉葡糖淀粉酶、黑曲霉-α葡糖苷酶、米曲霉taka淀粉酶、和尖孢镰孢菌胰蛋白酶样蛋白酶。
[0473]
酵母宿主细胞的有用的多聚腺苷酸化序列由guo和sherman,1995,mol.cellular biol.[分子细胞生物学]15:5983-5990描述。
[0474]
控制序列还可以是信号肽编码区域，该编码区域编码与变体的n-末端连接的信号肽，并且指导该变体进入细胞的分泌途径。多核苷酸的编码序列的5’端可以固有地包含信号肽编码区，该信号肽编码序列在翻译阅读框中与编码该变体的编码区的区段天然地连接在一起。可替代地，编码序列的5’端可包含对编码序列而言为外来的信号肽编码区。当编码序列天然地不包含信号肽编码区时，外源信号肽编码区可能是需要的。可替代地，外源信号肽编码区可简单地替换天然信号肽编码区以增强变体的分泌。然而，可以使用指导表达的变体进入宿主细胞的分泌途径的任何信号肽编码区。
[0475]
用于细菌宿主细胞的有效信号肽编码序列是从芽孢杆菌ncib 11837生麦芽糖淀粉酶、地衣芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶、地衣芽孢杆菌β-内酰胺酶、嗜热脂肪芽孢杆菌α-淀粉酶、嗜热脂肪芽孢杆菌中性蛋白酶(nprt、nprs、nprm)、和枯草芽孢杆菌prsa的基因获得的信号肽编码序列。另外的信号肽由simonen和palva,1993,microbiological reviews[微生物评论]57:109-137描述。
[0476]
用于丝状真菌宿主细胞的有效信号肽编码序列是从黑曲霉中性淀粉酶、黑曲霉葡糖淀粉酶、米曲霉taka淀粉酶、特异腐质霉纤维素酶、特异腐质霉内切葡聚糖酶v、柔毛腐质霉脂肪酶和米黑根毛霉天冬氨酸蛋白酶的基因获得的信号肽编码序列。
[0477]
从酿酒酵母α-因子和酿酒酵母转化酶的基因获得用于酵母宿主细胞的有用信号肽。其他有用的信号肽编码序列由romanos等人,1992，见上文描述。
[0478]
控制序列也可以是编码位于变体n末端处的前肽的前肽编码区。所得的多肽被称为前体酶(proenzyme)或多肽原(或在一些情况下被称为酶原(zymogen))。多肽原通常是无活性的并且可通过催化切割或自身催化切割来自多肽原的前肽而转化为活性多肽。可以从枯草芽孢杆菌碱性蛋白酶(apre)、枯草芽孢杆菌中性蛋白酶(nprt)、嗜热毁丝霉漆酶(wo 95/33836)、米黑根毛霉天冬氨酸蛋白酶和酿酒酵母α-因子的基因获得前肽编码区。
[0479]
在变体的n末端处信号肽区和前肽区都存在的情况下，前肽区被定位成紧邻变体的n末端并且信号肽区被定位成紧邻前肽区的n末端。
[0480]
也可能令人希望的是添加调控序列，该调控序列允许相对于宿主细胞的生长而调节变体的表达。调节系统的实例是引起基因表达响应化学或物理刺激物，包括调节化合物的存在而开启或关闭的那些系统。原核系统中的调节系统包括lac、tac和trp操纵子系统。在酵母中，可以使用adh2系统或gal1系统。在丝状真菌中，可以使用黑曲霉葡糖淀粉酶启动子、米曲霉takaα-淀粉酶启动子、以及米曲霉葡糖淀粉酶启动子。调节序列的其他实例是允许基因扩增的那些序列。在真核系统中，这些调节序列包括在甲氨蝶呤存在下扩增的二氢叶酸还原酶基因以及用重金属扩增的金属硫蛋白基因。在这些情况下，编码变体的多核苷酸将与调节序列可操作地连接。
[0481]
表达载体
[0482]
本发明还涉及包含本发明的多核苷酸、启动子、以及转录和翻译终止信号的重组表达载体。因此，本发明涉及重组载体，该重组载体包含编码如下变体的多核苷酸，该变体在对应于如下位置的一个或多个位置处包含取代：3、5、7、8、16、18、25、26、29、30、35、37、40、41、43、46、50、57、60、68、71、73、74、78、81、84、86、87、90、91、93、97、98、103、105、110、111、113、114、116、117、119、120、121、125、126、128、129、131、132、133、135、137、138、139、140、141、142、143、145、146、147、149、159、161、162、165、167、169、171、176、177、179、180、
181、185、186、187、195、196、197、204、206、208、211、216、218、219、225、228、230、231、235、242、243、247、250、251、252、253、254、255、257、259、260、261、262、263、265、272、273、274、279、280、281、283、284、287、292、294、296、298、299、300、303、305、307、310、311、313、314、315、319、320、321、322、323、324、334、337、339、340、342、344、345、346、347、350、359、360、361、362、363、364、368、372、375、380、382、383、384、385、387、388、391、393、395、396、397、398、401、402、403、405、406、407、410、415、416、418、421、422、423、433、434、435、438、439、446、447、449、450、452、455、457、458、460、461、462、465、466、467、469、471、473、475、476、477以及478，使用seq id no:1、启动子、以及转录和翻译终止信号。各种核苷酸和控制序列可以连接在一起以产生重组表达载体，该重组表达载体可以包含一个或多个(几个)合宜的限制性位点以允许在这样的位点插入或取代编码变体的多核苷酸。可替代地，可以通过将多核苷酸或包含该多核苷酸的核酸构建体插入用于表达的适当载体中而表达该多核苷酸。在产生表达载体时，编码序列如此位于载体中，使得编码序列与用于表达的适当控制序列可操作地连接。
[0483]
重组表达载体可以是可以方便地经受重组dna程序并且可以引起多核苷酸表达的任何载体(例如，质粒或病毒)。载体的选择将典型地取决于载体与待引入载体的宿主细胞的相容性。载体可以是直链或闭合环状质粒。
[0484]
载体可以是自主复制载体，即作为染色体外实体存在的载体，其复制独立于染色体复制，例如质粒、染色体外元件、微染色体或人工染色体。载体可以含有用于确保自我复制的任何手段。可替代地，载体可以是这样的载体，当它引入宿主细胞中时整合入基因组中并与其中已整合了它的一个或多个染色体一起复制。此外，可以使用单独的载体或质粒或两个或更多个载体或质粒，其共同含有待引入宿主细胞基因组的总dna，或可以使用转座子。
[0485]
载体优选包含一个或多个(几个)允许方便地选择转化细胞、转染细胞、转导细胞等细胞的选择性标记。选择性标记是一种基因，其产物提供了杀生物剂抗性或病毒抗性、对重金属抗性、对营养缺陷型的原养型等。
[0486]
细菌选择性标记的实例是来自地衣芽孢杆菌或枯草芽孢杆菌的dal基因，或赋予抗生素抗性(例如氨苄青霉素、氯霉素、卡那霉素、或四环素抗性)的标记。酵母宿主细胞的适合的标记是ade2、his3、leu2、lys2、met3、trp1、以及ura3。
[0487]
载体优选包含允许载体整合到宿主细胞的基因组中或载体在细胞中独立于基因组自主复制的一个或多个元件。
[0488]
为了整合至宿主细胞基因组中，载体可以依赖于编码变体的多核苷酸序列或用于借助同源或非同源重组整合至基因组中的任何其他载体元件。可替代地，载体可以包含另外的核苷酸序列，用于通过同源重组指导在一个或多个染色体中的一个或多个精确位置处整合入宿主细胞的基因组中。为了增加在精确位置处整合的可能性，整合元件应当含有足够数目的核酸，如100至10,000个碱基对、400至10,000个碱基对和800至10,000个碱基对，这些核酸与对应的靶序列具有高度同一性以增强同源重组的概率。整合元件可以是与宿主细胞基因组内的靶序列同源的任何序列。此外，整合元件可以是非编码或编码核苷酸序列。另一方面，载体可以通过非同源重组整合入宿主细胞的基因组中。
[0489]
为了自主复制，载体可以进一步包含复制起点，该复制起点使得载体在讨论中的
宿主细胞中自主复制成为可能。复制起点可以是在细胞中发挥作用的介导自主复制的任何质粒复制子。术语“复制起点”或“质粒复制因子”意指使得质粒或载体能够在体内复制的核苷酸序列。
[0490]
可以将多于一个拷贝的本发明的多核苷酸插入宿主细胞中以增加变体的产生。通过将序列的至少一个另外的拷贝整合到宿主细胞基因组中或者通过包括与该多核苷酸一起的可扩增的选择性标记基因可以获得多核苷酸的提高的拷贝数目，其中通过在适当的选择性试剂的存在下培养细胞可以选择包含选择性标记基因的经扩增的拷贝以及由此该多核苷酸的另外的拷贝的细胞。
[0491]
用于连接以上所述的元件以构建本发明的重组表达载体的程序是本领域的普通技术人员熟知的(参见例如，sambrook等人,1989,同上)以获得基本上纯的变体。
[0492]
宿主细胞
[0493]
本发明还涉及重组宿主细胞，这些宿主细胞包含可操作地连接至一个或多个(几个)控制序列的本发明的多核苷酸，该一个或多个控制序列指导本发明的变体的产生。因此，本发明涉及重组宿主细胞，该重组宿主细胞包含编码如下变体的多核苷酸，该变体在对应于如下位置的一个或多个位置处包含取代：3、5、7、8、16、18、25、26、29、30、35、37、40、41、43、46、50、57、60、68、71、73、74、78、81、84、86、87、90、91、93、97、98、103、105、110、111、113、114、116、117、119、120、121、125、126、128、129、131、132、133、135、137、138、139、140、141、142、143、145、146、147、149、159、161、162、165、167、169、171、176、177、179、180、181、185、186、187、195、196、197、204、206、208、211、216、218、219、225、228、230、231、235、242、243、247、250、251、252、253、254、255、257、259、260、261、262、263、265、272、273、274、279、280、281、283、284、287、292、294、296、298、299、300、303、305、307、310、311、313、314、315、319、320、321、322、323、324、334、337、339、340、342、344、345、346、347、350、359、360、361、362、363、364、368、372、375、380、382、383、384、385、387、388、391、393、395、396、397、398、401、402、403、405、406、407、410、415、416、418、421、422、423、433、434、435、438、439、446、447、449、450、452、455、457、458、460、461、462、465、466、467、469、471、473、475、476、477以及478，使用seq id no:1进行编号，其中该核苷酸可操作地连接至指导变体产生的一个或多个控制序列。将包含多核苷酸的构建体或载体引入宿主细胞中，这样使得该构建体或载体作为染色体整合体或作为自主复制的染色体外载体维持，如较早前所述。术语“宿主细胞”涵盖由于复制期间出现的突变而与亲本细胞不相同的任何亲本细胞子代。宿主细胞的选择在很大程度上将取决于编码变体的基因及其来源。
[0494]
宿主细胞可以是在变体的重组产生中有用的任何细胞，例如原核细胞或真核细胞。
[0495]
原核宿主细胞可以是任何革兰氏阳性或革兰氏阴性细菌。革兰氏阳性细菌包括但不限于：芽孢杆菌属、梭菌属、肠球菌属、土芽孢杆菌属、乳杆菌属、乳球菌属、大洋芽孢杆菌属、葡萄球菌属、链球菌属以及链霉菌属。革兰氏阴性细菌包括但不限于：弯曲杆菌属(campylobacter)、大肠杆菌、黄杆菌属(flavobacterium)、梭杆菌属(fusobacterium)、螺杆菌属(helicobacter)、泥杆菌属(ilyobacter)、奈瑟氏菌属(neisseria)、假单胞菌属(pseudomonas)、沙门氏菌属(salmonella)、以及脲原体属(ureaplasma)。
[0496]
细菌宿主细胞可以是任何芽孢杆菌属细胞，包括但不限于嗜碱芽孢杆菌
(bacillus alkalophilus)、解淀粉芽孢杆菌(bacillus amyloliquefaciens)、短芽孢杆菌(bacillus brevis)、环状芽孢杆菌(bacillus circulans)、克劳氏芽孢杆菌(bacillus clausii)、凝结芽孢杆菌(bacillus coagulans)、坚硬芽孢杆菌(bacillus firmus)、灿烂芽孢杆菌(bacillus lautus)、迟缓芽孢杆菌(bacillus lentus)、地衣芽孢杆菌(bacillus licheniformis)、巨大芽孢杆菌(bacillus megaterium)、短小芽孢杆菌(bacillus pumilus)、嗜热脂肪芽孢杆菌(bacillus stearothermophilus)、枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)以及苏云金芽孢杆菌(bacillus thuringiensis)细胞。
[0497]
细菌宿主细胞还可以是任何链球菌属细胞，包括但不限于似马链球菌(streptococcus equisimilis)、酿脓链球菌(streptococcus pyogenes)、乳房链球菌(streptococcus uberis)和马链球菌兽疫亚种(streptococcus equi subsp.zooepidemicus)细胞。
[0498]
细菌宿主细胞还可以是任何链霉菌属细胞，包括但不限于：不产色链霉菌、除虫链霉菌、天蓝链霉菌、灰色链霉菌、以及浅青紫链霉菌细胞。
[0499]
例如，可以通过如下方法实现将dna引入芽孢杆菌属细胞中：原生质体转化(参见例如，chang和cohen,1979,mol.gen.genet.[分子与普通遗传学]168:111-115)、使用感受态细胞(参见例如，young和spizizen,1961,j.bacteriol.[细菌学杂志]81:823-829，或dubnau和davidoff-abelson,1971,j.mol.biol.[分子生物学杂志]56:209-221)、电穿孔(参见例如，shigekawa和dower,1988,biotechniques[生物技术]6:742-751)、或接合(参见例如，koehler和thorne,1987,j.bacteriol.[细菌学杂志]169:5271-5278)。例如通过原生质体转化(参见例如，hanahan,1983,j.mol.biol.[分子生物学杂志]166:557-580)或电穿孔(参见，例如，dower等人,1988,nucleic acids res.[核酸研究]16:6127-6145)可以实现将dna引入到大肠杆菌细胞中。例如可通过如下方法实现将dna引入到链霉菌属细胞：原生质体转化和电穿孔(参见，例如，gong等人,2004,folia microbiol.(praha)[叶线形微生物学(布拉格)]49:399-405)、接合(参见，例如，mazodier等人,1989,j.bacteriol.[细菌学杂志]171:3583-3585)、或转导(参见，例如，burke等人,2001,proc.natl.acad.sci.usa[美国国家科学院院刊]98:6289-6294)。例如通过电穿孔(参见，例如choi等人,2006,j.microbiol.methods[微生物学方法杂志]64:391-397)或通过接合(参见，例如pinedo和smets,2005,appl.environ.microbiol.[应用与环境微生物学]71:51-57)可以实现将dna引入到假单胞菌属细胞中。例如，将dna引入链球菌属细胞中可以通过以下来实现：天然感受态(natural competence)(参见例如，perry和kuramitsu,1981,infect.immun.[感染与免疫]32:1295-1297)、原生质体转化(参见例如，catt和jollick，1991，microbios[微生物学]68:189-2070)、电穿孔(参见例如，buckley等人,1999,appl.environ.microbiol.[应用与环境微生物学]65:3800-3804)、或接合(参见例如，clewell,1981,microbiol.rev.[微生物学评论]45:409-436)。然而，可以使用本领域已知的将dna引入宿主细胞中的任何方法。
[0500]
宿主细胞还可以是真核生物，如哺乳动物、昆虫、植物或真菌细胞。
[0501]
可以将真菌细胞通过涉及原生质体形成、原生质体转化、以及细胞壁再生的方法以本身已知的方式转化。用于转化曲霉属和木霉属宿主细胞的适合程序在ep 238023和yelton等人,1984，proc.natl.acad.sci.usa[美国国家科学院院刊]81:1470-1474中描述。用于转化镰孢属物种的适合方法由malardier等人,1989,gene[基因]78:147-156和wo 96/
00787描述。可以使用由以下文献描述的程序转化酵母：becker和guarente,在abelson,j.n.和simon,m.i.编辑,guide to yeast genetics and molecular biology[酵母遗传学与分子生物学指南],methods in enzymology[酶学方法],第194卷,第182-187页,academic press,inc.[学术出版社有限公司],纽约)；ito等人,1983,j.bacteriol.[细菌学杂志]153:163；以及hinnen等人,1978,proc.natl.acad.sci.usa[美国国家科学院院刊]75:1920。
[0502]
产生方法
[0503]
本发明还涉及产生变体的方法，这些方法包括：(a)在适合所述变体的表达的条件下培养本发明的宿主细胞；以及(b)回收该变体。因此，本发明涉及产生变体的方法，该方法包括(a)在适合变体表达的条件下，培养包含表达载体或编码变体的多核苷酸的宿主细胞，该变体在对应于如下位置的一个或多个位置处包含取代：3、5、7、8、16、18、25、26、29、30、35、37、40、41、43、46、50、57、60、68、71、73、74、78、81、84、86、87、90、91、93、97、98、103、105、110、111、113、114、116、117、119、120、121、125、126、128、129、131、132、133、135、137、138、139、140、141、142、143、145、146、147、149、159、161、162、165、167、169、171、176、177、179、180、181、185、186、187、195、196、197、204、206、208、211、216、218、219、225、228、230、231、235、242、243、247、250、251、252、253、254、255、257、259、260、261、262、263、265、272、273、274、279、280、281、283、284、287、292、294、296、298、299、300、303、305、307、310、311、313、314、315、319、320、321、322、323、324、334、337、339、340、342、344、345、346、347、350、359、360、361、362、363、364、368、372、375、380、382、383、384、385、387、388、391、393、395、396、397、398、401、402、403、405、406、407、410、415、416、418、421、422、423、433、434、435、438、439、446、447、449、450、452、455、457、458、460、461、462、465、466、467、469、471、473、475、476、477以及478，使用seq id no:1进行编号；以及(b)回收该变体。
[0504]
在一方面，本发明涉及获得α-淀粉酶变体的方法，该方法包括在对应于以下位置的一个或多个位置处向亲本α-淀粉酶引入取代，这些位置选自由以下组成的组：3、5、7、8、16、18、25、26、29、30、35、37、40、41、43、46、50、57、60、68、71、73、74、78、81、84、86、87、90、91、93、97、98、103、105、110、111、113、114、116、117、119、120、121、125、126、128、129、131、132、133、135、137、138、139、140、141、142、143、145、146、147、149、159、161、162、165、167、169、171、176、177、179、180、181、185、186、187、195、196、197、204、206、208、211、216、218、219、225、228、230、231、235、242、243、247、250、251、252、253、254、255、257、259、260、261、262、263、265、272、273、274、279、280、281、283、284、287、292、294、296、298、299、300、303、305、307、310、311、313、314、315、319、320、321、322、323、324、334、337、339、340、342、344、345、346、347、350、359、360、361、362、363、364、368、372、375、380、382、383、384、385、387、388、391、393、395、396、397、398、401、402、403、405、406、407、410、415、416、418、421、422、423、433、434、435、438、439、446、447、449、450、452、455、457、458、460、461、462、465、466、467、469、471、473、475、476、477以及478，使用seq id no:1进行编号，并且该变体具有α-淀粉酶活性；并且回收该变体。
[0505]
使用本领域已知的方法在适合于产生变体的营养培养基中培养宿主细胞。例如，可以通过摇瓶培养，或者在一种适合的培养基中并在允许所述多肽表达和/或分离的条件下在实验室或工业发酵罐中进行小规模或大规模发酵(包括连续发酵、分批发酵、分批给料
发酵或固态发酵)来培养所述细胞。使用本领域中已知的程序，培养发生在包含碳和氮来源及无机盐的适合的营养培养基中。适合的培养基可从商业供应商获得或可以根据公开的组成(例如，在美国典型培养物保藏中心(american type culture collection)的目录中)制备。如果变体被分泌到营养培养基中，则变体可以直接从培养基回收。如果变体没有分泌，则它可以从细胞裂解液中回收。
[0506]
可以使用本领域已知的对变体特异的方法检测该变体。这些检测方法可包括特异性抗体的使用、酶产物的形成或酶底物的消失。例如，可以使用酶测定来确定变体的活性。
[0507]
可以通过本领域已知的方法回收该变体。例如，可以通过多种常规程序从营养培养基中回收变体，这些常规程序包括但不限于收集、离心、过滤、提取、喷雾干燥、蒸发或沉淀。
[0508]
可以通过本领域中已知的多种程序来纯化变体以获得基本上纯的变体，这些程序包括但不限于色谱法(例如，离子交换色谱、亲和色谱、疏水作用色谱、色谱聚焦、以及尺寸排阻色谱)、电泳程序(例如，制备型等电点聚焦)、差别溶解度(例如，硫酸铵沉淀)、sds-page或萃取(参见例如，protein purification[蛋白质纯化],j.-c.janson和lars ryden编辑,vch publishers[vch出版社],纽约,1989)。
[0509]
在可替代的方面，没有回收变体，而是将表达变体的本发明的宿主细胞用作变体的来源。
[0510]
组合物
[0511]
本发明还涉及包含本发明的变体的组合物。因此，本发明涉及包含变体的组合物，该变体在对应于以下位置的一个或多个位置处包含取代：3、5、7、8、16、18、25、26、29、30、35、37、40、41、43、46、50、57、60、68、71、73、74、78、81、84、86、87、90、91、93、97、98、103、105、110、111、113、114、116、117、119、120、121、125、126、128、129、131、132、133、135、137、138、139、140、141、142、143、145、146、147、149、159、161、162、165、167、169、171、176、177、179、180、181、185、186、187、195、196、197、204、206、208、211、216、218、219、225、228、230、231、235、242、243、247、250、251、252、253、254、255、257、259、260、261、262、263、265、272、273、274、279、280、281、283、284、287、292、294、296、298、299、300、303、305、307、310、311、313、314、315、319、320、321、322、323、324、334、337、339、340、342、344、345、346、347、350、359、360、361、362、363、364、368、372、375、380、382、383、384、385、387、388、391、393、395、396、397、398、401、402、403、405、406、407、410、415、416、418、421、422、423、433、434、435、438、439、446、447、449、450、452、455、457、458、460、461、462、465、466、467、469、471、473、475、476、477以及478，使用seq id no:1进行编号。优选地，这些组合物富含此类变体。术语“富含”意指组合物的α-淀粉酶活性已经增加，例如，富集因子为1.1。
[0512]
所述组合物可以包含变体作为主要酶组分，例如单组分组合物。可替代地，该组合物可以包含多种酶活性，如氨肽酶、淀粉酶、糖酶、羧肽酶、过氧化氢酶、纤维素酶、几丁质酶、角质酶、环糊精糖基转移酶、脱氧核糖核酸酶、酯酶、α-半乳糖苷酶、β-半乳糖苷酶、葡糖淀粉酶、α-葡糖苷酶、β-葡糖苷酶、卤素过氧化物酶、转化酶、漆酶、脂肪酶、甘露糖苷酶、氧化酶、果胶分解酶、肽谷氨酰胺酶、过氧化物酶、植酸酶、多酚氧化酶、蛋白水解酶、核糖核酸酶、转谷氨酰胺酶或木聚糖酶。所述一种或多种另外的酶可以通过例如属于以下属的微生物产生：芽孢杆菌属，例如地衣芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌；或曲霉属，例如棘孢曲霉、泡盛曲
霉、臭曲霉、烟曲霉、日本曲霉、构巢曲霉、黑曲霉或米曲霉；镰孢属，例如杆孢状镰孢、禾谷镰孢、库威镰孢、大刀镰孢、禾本科镰孢、禾赤镰孢、异孢镰孢、合欢木镰孢、尖孢镰孢、多枝镰孢、粉红镰孢、接骨木镰孢、肤色镰孢、硫色镰孢、圆镰孢、拟丝孢镰孢或镶片镰孢；腐质霉属，例如特异腐质霉或疏棉状腐质霉；或木霉属，例如哈茨木霉、康宁木霉、长枝木霉、里氏木霉或绿色木霉；或本文所述的任何其他宿主细胞。
[0513]
可以根据本领域中已知的方法来制备组合物，并且组合物可以处于液体或干组合物的形式。例如，组合物可以呈颗粒或微颗粒的形式。可以根据本领域中已知的方法将变体稳定化。
[0514]
根据本发明，上述α-淀粉酶变体可典型地为清洁组合物(如洗涤剂组合物，例如衣物洗涤剂组合物或餐具洗涤洗涤剂组合物)中的组分。特别优选的是液体衣物洗涤剂组合物。
[0515]
此类清洁组合物包含清洁/洗涤剂辅助剂，优选地是组分的混合物。典型地，清洁辅助剂将以0.001至99.9wt％，更典型地0.01至80wt％的清洁辅助剂的量存在于组合物中。
[0516]
在另一个优选的方面，组合物包含一种或多种表面活性剂，所述一种或多种表面活性剂可为非离子的(包括半极性)和/或阴离子的和/或阳离子的和/或兼性离子的和/或两性的和/或半极性非离子的表面活性剂，和/或其混合物。表面活性剂典型地以组合物的按重量计0.1％至60％或0.5至50wt％或1至40wt％的水平存在。
[0517]
用途
[0518]
本发明还涉及用于使用α-淀粉酶变体的方法。
[0519]
本发明的α-淀粉酶变体可用于洗涤剂组合物、衣物洗涤、餐具洗涤和/或清洁过程。
[0520]
使用方法
[0521]
本发明还涉及用于清洁和/或处理部位(尤其是表面)或织物的方法。在一方面，披露了这样一种方法，该方法包括任选地洗涤和/或冲洗所述表面或织物，使所述表面或织物与本说明书中披露的任何消费品接触，然后任选地洗涤和/或冲洗所述表面或织物的步骤。
[0522]
如本文使用的，洗涤包括但不限于擦洗和机械搅拌。对此类表面或织物进行干燥可以通过在家庭或工业环境中采用的通用手段中的任一种来完成。在存在或不存在电磁辐射(包括日光、红外线、紫外线和微波照射)的情况下，此类手段包括但不限于在环境温度或升高的温度下在5与0.01大气压之间的压力下的鼓风干燥或静止空气干燥。在一方面，所述干燥可通过采用熨斗在高于环境的温度完成，其中，例如，所述织物可与所述熨斗直接接触相对短的或甚至延长的时间段，并且其中可施加超过由于重力另外通常存在的压力。在另一方面，所述干燥可以通过采用干燥器在高于环境的温度完成。用于干燥织物的设备是已知的，并且通常被称为干衣机。除了衣物之外，此类家用电器还用于干燥许多其他物品，这些物品包括毛巾、床单、枕套、尿布等，并且此类设备已经在世界上许多国家中被接受为标准便利，基本上取代了用于织物干燥的晾衣绳的使用。今天使用的大多数干燥器使用加热的空气，随着织物在干燥器内翻滚，加热的空气经过和/或穿过织物。例如，空气可通过电子方式、经由气体火焰、或甚至用微波照射加热。这样的空气可以从约15℃加热到约400℃、从约25℃加热到约200℃、从约35℃加热到约100℃、或甚至从约40℃加热到约85℃，并用于干燥器中以干燥表面和/或织物。如本领域技术人员会理解的，本发明的清洁组合物理想地适
用于衣物洗涤应用。因此，本发明包括用于洗涤织物的方法。该方法包括使待洗涤的织物与所述清洁衣物洗涤溶液接触，该清洁衣物洗涤溶液包含申请人的清洁组合物、清洁添加剂或其混合物的至少一种实施例。织物可以包括能够在常规消费者或公共机构使用条件下被洗涤的大多数任何织物。该溶液优选具有从约4.0至约12.0的ph。可以在溶液中以从约500ppm至约15,000ppm的浓度使用组合物。水温范围典型地是从约5℃至约90℃。水与织物比率典型地是从约1:1至约30:1。
[0523]
在以下段落中进一步描述本发明。
[0524]
1.一种亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体，该变体具有α-淀粉酶活性，在对应于以下位置的一个或多个位置处包含取代：3、5、7、8、16、18、25、26、29、30、35、37、40、41、43、46、50、57、60、68、71、73、74、78、81、84、86、87、90、91、93、97、98、103、105、110、111、113、114、116、117、119、120、121、125、126、128、129、131、132、133、135、137、138、139、140、141、142、143、145、146、147、149、159、161、162、165、167、169、171、176、177、179、180、181、185、186、187、195、196、197、204、206、208、211、216、218、219、225、228、230、231、235、242、243、247、250、251、252、253、254、255、257、259、260、261、262、263、265、272、273、274、279、280、281、283、284、287、292、294、296、298、299、300、303、305、307、310、311、313、314、315、319、320、321、322、323、324、334、337、339、340、342、344、345、346、347、350、359、360、361、362、363、364、368、372、375、380、382、383、384、385、387、388、391、393、395、396、397、398、401、402、403、405、406、407、410、415、416、418、421、422、423、433、434、435、438、439、446、447、449、450、452、455、457、458、460、461、462、465、466、467、469、471、473、475、476、477以及478，使用seq id no:1进行编号；并且其中所述变体与seq id no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％但小于100％序列同一性，并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中该α-淀粉酶变体相对于所述亲本多肽具有改善的特性。
[0525]
2.根据段落1所述的α-淀粉酶变体，其中该变体在对应于以下位置的一个或多个位置处包含取代：3、5、7、8、16、18、25、26、29、30、35、37、40、41、43、46、50、57、60、68、71、73、74、78、81、84、86、87、90、91、93、97、98、103、105、110、111、113、114、116、117、119、120、121、125、126、128、129、131、132、133、135、137、138、139、140、141、142、143、145、146、147、149、159、161、162、165、167、169、171、176、177、179、180、181、185、186、187、195、196、197、204、206、208、211、216、218、219、225、228、230、231、235、242、243、247、250、251、252、253、254、255、257、259、260、261、262、263、265、272、273、274、279、280、281、283、284、287、292、294、296、298、299、300、303、305、307、310、311、313、314、315、319、320、321、322、323、324、334、337、339、340、342、344、345、346、347、350、359、360、361、362、363、364、368、372、375、380、382、383、384、385、387、388、391、393、395、396、397、398、401、402、403、405、406、407、410、415、416、418、421、422、423、433、434、435、438、439、446、447、449、450、452、455、457、458、460、461、462、465、466、467、469、471、473、475、476、477以及478，使用seq id no:1进行编号；并且其中所述变体与seq id no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％但小于100％序列同一性，并且其中所述变
体具有α-淀粉酶活性并且其中该α-淀粉酶变体相对于所述seq id no:1的亲本多肽具有改善的特性。
[0526]
3.根据段落1所述的α-淀粉酶变体，其中该变体在对应于以下位置的一个或多个位置处包含取代：3、5、7、8、16、18、25、26、29、30、35、37、40、41、43、46、50、57、60、68、71、73、74、78、81、84、86、87、90、91、93、97、98、103、105、110、111、113、114、116、117、119、120、121、125、126、128、129、131、132、133、135、137、138、139、140、141、142、143、145、146、147、149、159、161、162、165、167、169、171、176、177、179、180、181、185、186、187、195、196、197、204、206、208、211、216、218、219、225、228、230、231、235、242、243、247、250、251、252、253、254、255、257、259、260、261、262、263、265、272、273、274、279、280、281、283、284、287、292、294、296、298、299、300、303、305、307、310、311、313、314、315、319、320、321、322、323、324、334、337、339、340、342、344、345、346、347、350、359、360、361、362、363、364、368、372、375、380、382、383、384、385、387、388、391、393、395、396、397、398、401、402、403、405、406、407、410、415、416、418、421、422、423、433、434、435、438、439、446、447、449、450、452、455、457、458、460、461、462、465、466、467、469、471、473、475、476、477以及478，使用seq id no:1进行编号；并且其中所述变体与seq id no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％但小于100％序列同一性，并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中该α-淀粉酶变体相对于所述seq id no:2的亲本多肽具有改善的特性。
[0527]
4.根据前述段落中任一项所述的α-淀粉酶变体，其中该变体相对于亲本多肽具有改善的特性，其中该改善的特性选自由以下组成的组：增加的催化效率、增加的催化速率、增加的化学稳定性、增加的氧化稳定性、增加的ph活性、增加的ph稳定性、增加的比活性、存储条件下增加的稳定性、增加的底物结合、增加的底物切割、增加的底物特异性、增加的底物稳定性、增加的表面特性、增加的热活性和增加的热稳定性。
[0528]
5.根据前述段落中任一项所述的α-淀粉酶变体，其中所述改善的特性相对于所述亲本多肽是增加的比活性，特别是在标准a洗涤剂组合物中增加的比活性。
[0529]
6.根据前述段落中任一项所述的α-淀粉酶变体，其中当与具有α-淀粉酶活性的所述亲本多肽相比，所述改善的特性是以改善因子(if)》1.0测量的增加的比活性。
[0530]
7.根据前述段落中任一项所述的α-淀粉酶变体，其中所述变体在对应于以下位置的位置处包含取代：3、5、7、8、16、18、25、26、29、30、35、37、40、41、43、46、50、57、60、68、71、73、74、78、81、84、86、87、90、91、93、97、98、103、105、110、111、113、114、116、117、119、120、121、125、126、128、129、131、132、133、135、137、138、139、140、141、142、143、145、146、147、149、159、161、162、165、167、169、171、176、177、179、180、181、185、186、187、195、196、197、204、206、208、211、216、218、219、225、228、230、231、235、242、243、247、250、251、252、253、254、255、257、259、260、261、262、263、265、272、273、274、279、280、281、283、284、287、292、294、296、298、299、300、303、305、307、310、311、313、314、315、319、320、321、322、323、324、334、337、339、340、342、344、345、346、347、350、359、360、361、362、363、364、368、372、375、380、382、383、384、385、387、388、391、393、395、396、397、398、401、402、403、405、406、407、410、415、416、418、421、422、423、433、434、435、438、439、446、447、449、450、452、455、457、
458、460、461、462、465、466、467、469、471、473、475、476、477以及478，使用seq id no:1进行编号；并且其中所述α-淀粉酶变体具有以改善因子(if)≥1.1测量的增加的比活性。
[0531]
8.根据前述段落中任一项所述的α-淀粉酶变体，其中不同的氨基酸残基选自由以下组成的组：a、c、d、e、f、g、h、i、k、l、m、n、p、q、r、s、t、v、w以及y，条件是该不同的氨基酸残基与天然存在的氨基酸残基不同。
[0532]
9.根据前述段落中任一项所述的α-淀粉酶变体，其中所述变体在对应于如下位置的位置处包含以下取代中的一个或多个：n3a、n3c、n3d、n3e、n3f、n3g、n3h、n3l、n3p、n3q、n3s、n3t、n3v、t5e、g7e、g7f、g7h、g7k、g7l、g7p、g7r、g7s、g7t、g7v、g7w、t8s、h16d、h16r、p18d、p18l、p18n、n25t、r26y、d29n、d30f、r35p、r37a、r37n、t40a、t40c、t40d、t40e、t40g、t40h、t40i、t40k、t40n、t40v、t40w、a41c、a41d、a41e、a41h、a41i、a41k、a41n、a41r、a41t、a41v、a41y、w43e、p46a、g50m、g50p、g50q、g57a、g57s、a60e、a60s、a60v、e68f、e68y、q71f、g73d、g73h、g73i、g73l、g73q、g73s、g73t、g73w、t74f、k78s、k78t、t81m、q84i、q84w、q84y、e86k、e86s、s87g、s87l、s87p、h90p、a91q、a91v、a91w、k93v、v97c、v97h、q98e、q98f、q98g、q98i、q98k、q98l、q98m、q98r、q98t、q98y、v103c、v103g、v103s、m105f、g110k、g110r、a111e、a111q、a113t、t114m、t114v、n116c、n116y、v117f、a119h、a119l、a119y、v120e、e121i、n125s、n126i、n128e、q129t、i131y、s132a、s132d、s132h、s132i、s132k、s132l、s132p、s132r、s132t、s132v、s132y、g133e、g133l、g133t、g133v、y135c、y135d、y135e、y135p、i137d、i137n、i137q、i137w、i137y、e138s、e138v、a139l、w140a、w140d、w140m、w140n、w140p、w140s、w140t、w140v、t141g、k142e、k142n、f143h、f143i、f143m、f145g、f145h、f145i、f145l、f145s、p146a、p146h、p146n、g147d、g149f、g149k、w159a、w159e、h161w、f162t、v165p、w167d、w167g、w167p、q169l、q169p、q169v、q169y、r171p、r176e、r176q、r176v、r176y、i177h、i177p、k179a、k179m、k179v、f180d、f180g、r181d、r181e、r181g、r181m、r181y、k185t、k185v、k185w、a186d、w187t、n195y、g196d、n197v、n197y、a204f、a204h、a204l、v206n、m208d、p211c、p211m、e216l、r218q、r219v、t225d、t225f、t225h、t225k、t225l、t225n、t225r、t225y、l228v、l230c、l230f、d231g、d231t、d231v、i235a、k242l、y243d、y243m、y243n、r247g、r247p、r247s、l250s、l250y、t251d、h252p、v253f、v253s、r254d、r254f、r254h、r254p、r254t、r254v、r254w、n255c、n255f、n255p、t257a、t257c、t257d、t257e、t257g、t257p、t257q、t257s、t257w、t257y、k259p、k259v、k259w、k259y、e260v、m261d、m261f、m261p、m261r、m261s、m261w、f262a、f262c、f262e、f262h、f262i、f262k、f262l、f262n、f262p、f262q、f262r、f262s、f262t、f262v、f262w、a263e、a263h、a263w、a265q、l272w、g273q、a274d、l279i、n280p、k281h、k281i、k281s、n283p、w284a、w284d、w284e、w284g、w284i、w284k、w284m、w284n、w284p、w284q、w284s、w284t、w284v、w284y、s287i、s287k、s287l、s287p、s287r、s287t、s287v、s287y、p292l、p292m、p292y、h294n、h294s、n296t、y298d、y298e、n299t、a300g、s303a、s303c、s303d、s303e、s303f、s303g、s303h、s303l、s303m、s303n、s303q、s303t、s303v、s303y、g305e、y307s、a310d、a310n、k311a、k311c、l313q、n314p、n314s、g315e、g315m、g315v、q319c、q319e、k320s、k320w、h321f、h321k、h321l、h321r、h321t、h321v、h321w、p322c、p322e、p322h、p322t、p322y、m323a、m323c、m323d、m323e、m323g、m323h、m323l、m323n、m323p、m323r、m323s、m323t、m323w、m323y、h324a、h324i、h324p、h324t、h324w、h324y、s334v、g337v、
l340m、s342a、s342g、s342t、v344a、v344c、v344i、q345n、e346a、w347a、w347e、w347f、w347g、w347h、w347k、w347n、w347p、w347r、p350a、p350c、p350n、p350t、r359c、r359f、r359g、r359m、r359s、r359w、e360d、e360h、e360p、e360t、e360w、q361d、q361h、q361i、q361k、q361l、q361m、q361n、q361p、q361r、q361s、q361t、q361v、q361w、q361y、g362m、y363a、y363e、y363f、y363g、y363i、y363l、y363q、y363r、y363s、y363t、y363v、y363w、p364c、y368c、y368q、y368r、y368t、y372c、y372g、y372n、y372t、p375q、p375t、p380f、m382i、k383c、k383l、k383p、k383t、a384d、a384n、k385n、k385v、d387c、d387p、d387r、d387w、p388i、e391m、r393k、r393m、n395c、n395d、n395k、n395v、n395w、f396e、f396g、f396t、a397v、y398e、q401h、h402s、d403a、d403e、d403t、f405c、f405n、f405s、f405t、d406v、h407c、h407q、h407t、i410h、i410m、i410r、i410w、r415c、r415l、r415m、r415y、e416d、e416f、e416l、e416n、n418a、n418p、n418v、h421a、h421g、h421l、h421p、h421q、h421y、p422d、p422g、p422i、p422n、p422q、p422s、n423g、n423h、n423i、n423l、n423m、n423p、n423q、n423v、n423w、n423y、g433a、g433n、g433s、p434i、p434l、g435c、g435l、g435m、g435t、g435v、k438a、k438i、k438q、k438s、k438v、w439a、w439d、w439i、w439k、w439l、w439n、w439s、w439t、w439v、w439y、k446a、k446f、a447d、a447y、q449t、v450d、v450n、h452l、t455c、t455m、t455v、n457d、n457e、n457i、n457l、n457v、k458d、k458l、g460m、g460v、t461f、t461i、t461q、t461v、v462c、n465a、n465c、n465e、n465g、n465h、n465l、n465p、n465t、a466f、a466i、a466y、d467i、w469a、w469e、w469h、w469l、w469n、w469q、w469r、w469s、w469y、n471a、n471d、n471m、n471w、s473n、n475a、n475c、n475d、n475e、n475f、n475g、n475h、n475i、n475l、n475m、n475p、n475q、n475s、n475t、n475v、n475w、g476f、g476l、g477a、g477h、g477q、g477s、g477w、s478a、s478f以及s478q，使用seq id no:1进行编号，并且其中所述α-淀粉酶变体具有以改善因子(if)测量的≥1.1增加的比活性。
[0533]
10.根据前述段落中任一项所述的α-淀粉酶变体，其中所述变体在对应于如下位置的位置处包含以下取代中的一个或多个：n3a、n3c、n3d、n3e、n3f、n3g、n3h、n3l、n3p、n3q、n3s、n3t、n3v、t5e、g7e、g7f、g7h、g7k、g7l、g7p、g7r、g7s、g7t、g7v、g7w、t8s、h16d、h16r、p18d、p18l、p18n、n25t、r26y、d29n、d30f、r35p、r37a、r37n、t40a、t40c、t40d、t40e、t40g、t40h、t40i、t40k、t40n、t40v、t40w、a41c、a41d、a41e、a41h、a41i、a41k、a41n、a41r、a41t、a41v、a41y、w43e、p46a、g50m、g50p、g50q、g57a、g57s、a60e、a60s、a60v、e68f、e68y、q71f、g73d、g73h、g73i、g73l、g73q、g73s、g73t、g73w、t74f、k78s、k78t、t81m、q84i、q84w、q84y、e86k、e86s、s87g、s87l、s87p、h90p、a91q、a91v、a91w、k93v、v97c、v97h、q98e、q98f、q98g、q98i、q98k、q98l、q98m、q98r、q98t、q98y、v103c、v103g、v103s、m105f、g110k、g110r、a111e、a111q、a113t、t114m、t114v、n116c、n116y、v117f、a119h、a119l、a119y、v120e、e121i、n125s、n126i、n128e、q129t、i131y、s132a、s132d、s132h、s132i、s132k、s132l、s132p、s132r、s132t、s132v、s132y、g133e、g133l、g133t、g133v、y135c、y135d、y135e、y135p、i137d、i137n、i137q、i137w、i137y、e138s、e138v、a139l、w140a、w140d、w140m、w140n、w140p、w140s、w140t、w140v、t141g、k142e、k142n、f143h、f143i、f143m、f145g、f145h、f145i、f145l、f145s、p146a、p146h、p146n、g147d、g149f、g149k、w159a、w159e、h161w、f162t、v165p、w167d、w167g、w167p、q169l、q169p、q169v、q169y、r171p、r176e、r176q、
id no:1进行编号，并且其中所述α-淀粉酶变体在标准a洗涤剂组合物中具有以改善因子(if)≥1.1测量的增加的比活性。
[0534]
11.根据前述段落中任一项所述的α-淀粉酶变体，其中所述变体在对应于如下位置的位置处包含以下取代中的一个或多个：n3a；n3c；n3d；n3e；n3f；n3g；n3h；n3l；n3p；n3q；n3s；n3t；n3v；t5e；g7e；g7f；g7h；g7k；g7l；g7p；g7r；g7s；g7t；g7v；g7w；t8s；h16d；h16r；p18d；p18n；n25t；r26y；d29n；d30f；r37a；r37n；t40a；t40c；t40d；t40e；t40g；t40h；t40i；t40k；t40n；t40v；t40w；a41c；a41d；a41e；a41h；a41i；a41k；a41n；a41r；a41t；a41v；a41y；w43e；p46a；g50m；g50p；g50q；g57a；g57s；a60e；a60s；a60v；e68f；q71f；g73d；g73h；g73i；g73l；g73q；g73s；g73t；g73w；k78s；k78t；t81m；q84i；q84w；q84y；e86k；e86s；s87g；s87l；s87p；h90p；a91q；a91v；a91w；k93v；v97c；v97h；q98e；q98f；q98g；q98i；q98k；q98l；q98m；q98r；q98t；q98y；v103c；v103g；v103s；m105f；g110k；g110r；a111e；a111q；a113t；t114m；t114v；n116y；v117f；a119h；a119l；a119y；v120e；e121i；n125s；n126i；n128e；q129t；i131y；s132a；s132d；s132h；s132i；s132k；s132l；s132p；s132r；s132t；s132v；s132y；g133e；g133l；g133t；g133v；y135c；y135d；y135e；y135p；i137d；i137n；i137q；i137w；i137y；e138s；e138v；a139l；w140a；w140d；w140m；w140n；w140p；w140s；w140t；w140v；t141g；k142e；k142n；f143h；f143i；f143m；f145g；f145h；f145i；f145l；f145s；p146a；p146h；p146n；g147d；g149f；g149k；w159a；h161w；f162t；v165p；w167d；w167g；w167p；q169v；q169y；r171p；r176e；r176q；r176v；r176y；i177h；i177p；k179a；k179m；k179v；f180d；f180g；r181d；r181e；r181g；r181m；r181y；k185v；k185w；a186d；w187t；n195y；g196d；n197v；n197y；a204f；a204h；a204l；m208d；p211c；p211m；e216l；r219v；t225d；t225f；t225h；t225k；t225l；t225n；t225r；t225y；l228v；l230c；l230f；d231g；d231t；d231v；i235a；k242l；y243d；y243m；y243n；r247g；r247p；l250s；l250y；t251d；h252p；v253f；v253s；r254d；r254f；r254h；r254p；r254t；r254v；r254w；n255c；n255f；n255p；t257a；t257c；t257d；t257e；t257g；t257p；t257q；t257s；t257w；t257y；k259p；k259v；k259w；k259y；e260v；m261d；m261f；m261p；m261r；m261s；m261w；f262a；f262c；f262e；f262h；f262i；f262k；f262l；f262n；f262p；f262q；f262r；f262s；f262t；f262v；f262w；a263e；a263h；a263w；a265q；l272w；g273q；l279i；n280p；k281h；k281i；k281s；n283p；w284a；w284d；w284e；w284g；w284i；w284k；w284m；w284n；w284p；w284q；w284s；w284t；w284v；w284y；s287i；s287k；s287l；s287p；s287r；s287t；s287v；s287y；p292l；p292m；p292y；h294n；h294s；n296t；y298d；y298e；n299t；a300g；s303a；s303c；s303d；s303e；s303f；s303g；s303h；s303l；s303m；s303n；s303q；s303t；s303v；s303y；g305e；y307s；a310d；a310n；k311a；k311c；l313q；n314p；n314s；g315e；g315m；g315v；q319c；q319e；k320s；k320w；h321f；h321k；h321l；h321r；h321t；h321v；h321w；p322c；p322e；p322h；p322t；p322y；m323a；m323c；m323d；m323e；m323g；m323h；m323l；m323n；m323p；m323r；m323s；m323y；h324a；h324i；h324p；h324t；h324w；h324y；s334v；g337v；l340m；s342a；s342g；s342t；v344a；v344c；v344i；q345n；e346a；w347a；w347e；w347f；w347g；w347h；w347k；w347n；w347p；w347r；p350a；p350c；p350n；p350t；r359c；r359f；r359g；r359m；r359w；e360d；e360h；e360p；e360t；e360w；q361d；q361h；q361i；q361k；q361l；q361m；q361n；q361p；q361r；q361s；q361t；q361v；q361w；q361y；g362m；y363a；y363e；y363f；
y363g；y363i；y363l；y363q；y363s；y363t；y363v；y363w；p364c；y368c；y368q；y368r；y368t；y372c；y372g；y372n；y372t；p375q；p375t；p380f；m382i；k383c；k383l；k383p；k383t；a384d；a384n；k385n；k385v；d387c；d387p；d387r；d387w；p388i；e391m；r393k；r393m；n395c；n395d；n395k；n395v；n395w；f396e；f396g；f396t；a397v；y398e；q401h；h402s；d403a；d403e；d403t；f405c；f405n；f405s；f405t；d406v；h407c；h407q；h407t；i410h；i410m；i410r；i410w；r415c；r415l；r415m；r415y；e416d；e416f；e416l；e416n；n418a；n418p；n418v；h421a；h421g；h421l；h421p；h421q；h421y；p422d；p422g；p422i；p422n；p422q；p422s；n423g；n423h；n423i；n423l；n423m；n423q；n423v；n423w；n423y；g433a；g433s；p434i；p434l；g435c；g435l；g435m；g435t；g435v；k438a；k438i；k438q；k438s；k438v；w439a；w439d；w439i；w439k；w439l；w439n；w439s；w439t；w439v；w439y；k446a；k446f；a447d；a447y；q449t；v450d；v450n；h452l；t455c；t455m；t455v；n457d；n457e；n457i；n457l；n457v；k458d；k458l；g460m；t461f；t461i；t461q；t461v；v462c；n465a；n465c；n465e；n465g；n465h；n465l；n465p；n465t；a466f；a466i；a466y；d467i；w469a；w469e；w469h；w469l；w469n；w469q；w469r；w469y；n471a；n471d；n471m；n471w；s473n；n475a；n475c；n475d；n475e；n475f；n475g；n475h；n475i；n475l；n475m；n475p；n475q；n475s；n475t；n475v；n475w；g476f；g476l；g477a；g477h；g477q；g477s；g477w；s478a；s478f；以及s478q，使用seq id no:1进行编号，并且其中所述α-淀粉酶变体在标准a洗涤剂组合物中具有以改善因子(if)≥1.2测量的增加的比活性。
[0535]
12.根据前述段落中任一项所述的α-淀粉酶变体，其中所述变体在对应于如下位置的位置处包含以下取代中的一个或多个：n3a；n3c；n3d；n3e；n3f；n3g；n3h；n3l；n3p；n3q；n3v；t5e；g7e；g7f；g7h；g7l；g7r；g7s；g7t；g7v；g7w；h16d；r26y；d29n；d30f；r37a；r37n；t40a；t40c；t40d；t40e；t40g；t40h；t40i；t40n；t40v；t40w；a41c；a41d；a41e；a41h；a41i；a41k；a41n；a41r；a41y；p46a；g50q；g57a；g57s；a60s；a60v；e68f；g73d；g73h；g73i；g73l；g73q；g73s；g73t；g73w；k78t；t81m；q84i；q84w；e86s；s87g；h90p；q98f；q98i；q98k；q98l；q98m；q98y；v103c；v103g；g110k；g110r；a111e；a111q；a119l；a119y；v120e；n125s；n128e；i131y；s132a；s132d；s132h；s132i；s132k；s132l；s132r；s132v；s132y；g133e；y135c；y135d；y135e；y135p；i137n；i137w；e138s；e138v；a139l；w140a；w140d；w140m；w140n；w140p；w140s；w140t；k142e；f143h；f143i；f145i；p146a；p146h；p146n；g147d；g149k；h161w；v165p；w167d；w167p；q169v；r171p；r176e；r176q；r176y；i177h；k179a；k179v；r181e；r181g；r181m；r181y；a186d；w187t；g196d；n197v；n197y；a204h；a204l；p211c；p211m；t225d；t225f；t225h；t225k；t225l；t225n；t225r；t225y；l230c；l230f；d231v；y243d；y243n；r247g；r247p；l250s；h252p；v253f；r254t；r254v；r254w；n255p；t257a；t257c；t257d；t257e；t257g；t257w；k259p；k259v；k259w；e260v；m261d；m261f；m261p；m261r；m261s；m261w；f262a；f262c；f262e；f262h；f262i；f262k；f262l；f262n；f262p；f262q；f262r；f262s；f262t；f262v；f262w；a263e；a263h；a263w；a265q；l279i；k281i；n283p；w284a；w284d；w284e；w284g；w284i；w284k；w284m；w284n；w284p；w284q；w284s；w284t；w284v；w284y；s287k；s287l；s287r；s287t；s287v；s287y；h294s；n296t；y298d；n299t；s303a；s303c；s303d；s303e；s303f；s303g；s303h；s303l；s303m；s303n；s303q；s303t；s303v；s303y；g305e；y307s；a310n；k311a；k311c；l313q；n314p；n314s；g315e；
g315v；q319e；k320w；h321f；h321k；h321l；h321v；p322c；p322e；p322h；p322t；p322y；m323a；m323c；m323d；m323e；m323g；m323h；m323l；m323n；m323p；m323r；m323s；m323y；h324a；h324i；h324p；h324t；h324w；h324y；g337v；l340m；s342g；v344c；e346a；w347e；w347f；w347g；w347h；w347k；w347n；w347p；w347r；p350c；p350n；p350t；r359g；r359w；e360d；e360t；e360w；q361d；q361h；q361i；q361k；q361l；q361m；q361n；q361p；q361r；q361t；q361v；q361w；q361y；g362m；y363a；y363f；y363g；y363i；y363q；y363s；y363t；y363v；y363w；p364c；y368c；y368q；y368r；y372c；y372g；p375q；p375t；p380f；k383c；k383t；a384d；k385n；k385v；d387c；d387p；d387r；e391m；r393k；r393m；n395c；n395d；n395w；f396e；f396g；f396t；y398e；h402s；d403a；d403t；f405c；f405n；f405s；f405t；d406v；h407c；h407q；h407t；i410h；i410m；i410w；r415c；r415l；r415m；r415y；e416f；e416l；e416n；n418a；n418p；h421a；h421g；h421l；h421p；h421q；h421y；p422d；p422g；p422n；p422s；n423g；n423i；n423l；n423m；n423q；n423v；n423w；n423y；g433s；p434i；p434l；g435m；g435t；g435v；k438i；k438q；k438s；k438v；w439a；w439d；w439i；w439k；w439l；w439n；w439s；w439t；w439v；k446a；k446f；a447d；a447y；h452l；t455v；n457d；n457e；n457i；n457l；n457v；k458d；k458l；g460m；t461f；t461i；t461q；t461v；v462c；n465a；n465e；n465g；n465l；a466f；a466i；a466y；d467i；w469a；w469e；w469h；w469l；w469q；w469r；w469y；n471a；n471d；n471m；n475a；n475c；n475d；n475e；n475f；n475g；n475h；n475i；n475l；n475m；n475p；n475q；n475s；n475t；n475v；n475w；g476l；g477a；g477h；g477q；g477s；g477w；s478a；以及s478f；使用seq id no:1进行编号，并且其中所述α-淀粉酶变体在标准a洗涤剂组合物中具有以改善因子(if)≥1.3测量的增加的比活性。
[0536]
13.根据前述段落中任一项所述的α-淀粉酶变体，其中所述变体在对应于如下位置的位置处包含以下取代中的一个或多个：n3a；n3c；n3d；n3e；n3f；n3g；n3h；n3l；n3v；g7f；g7h；g7r；g7v；g7w；r26y；d29n；r37a；r37n；t40c；t40d；t40e；t40g；t40i；t40n；t40v；a41c；a41d；a41e；a41k；a41n；a41r；a41y；g73d；g73h；g73i；g73l；g73q；g73s；g73t；g73w；k78t；q84i；q84w；s87g；q98i；q98l；v103c；g110k；a111q；a119y；n125s；n128e；s132d；s132i；s132l；s132r；y135c；y135e；i137w；e138s；e138v；a139l；w140a；w140d；w140m；w140n；w140p；w140s；w140t；k142e；f143i；f145i；p146h；g149k；h161w；v165p；w167d；w167p；q169v；r176q；i177h；p211c；t225f；t225h；t225k；t225r；t225y；l230c；y243d；r247g；v253f；n255p；t257a；t257d；t257e；k259p；k259v；m261d；m261r；m261w；f262a；f262c；f262e；f262h；f262i；f262k；f262l；f262n；f262p；f262q；f262r；f262s；f262w；a263h；l279i；n283p；w284d；w284e；w284i；w284k；w284m；w284n；w284p；w284q；w284s；w284v；s287k；s287l；s287r；s287y；n296t；s303a；s303c；s303d；s303e；s303f；s303g；s303h；s303m；s303n；s303q；s303t；s303v；s303y；g305e；k311c；l313q；n314p；g315v；h321k；h321l；h321v；p322c；p322e；p322h；p322t；p322y；m323a；m323d；m323e；m323g；m323l；m323p；m323s；m323y；h324a；h324i；h324p；h324w；l340m；s342g；e346a；w347f；w347k；w347n；w347p；w347r；r359w；e360w；q361d；q361h；q361i；q361k；q361l；q361m；q361p；q361r；q361v；q361w；q361y；g362m；y363a；y363g；y363t；y363v；y363w；p364c；y368c；y368q；y372c；y372g；k383t；a384d；d387c；d387p；e391m；r393k；r393m；n395d；n395w；f396e；f396t；d403a；f405c；f405n；f405s；d406v；h407c；h407t；i410h；i410m；i410w；
r415c；r415l；r415m；r415y；n418p；h421a；h421l；h421p；h421q；p422d；p422g；n423l；n423v；n423w；n423y；g433s；g435m；k438v；w439a；w439i；w439k；w439s；w439t；w439v；k446a；a447y；h452l；t455v；n457e；n457i；n457v；k458d；t461f；t461q；n465a；n465e；n465g；a466i；d467i；w469a；w469e；w469y；n471a；n471d；n471m；n475a；n475c；n475d；n475e；n475f；n475g；n475h；n475l；n475m；n475p；n475q；n475s；n475t；n475v；n475w；g477a；g477h；g477q；g477s；g477w；s478a；使用seq id no:1进行编号，并且其中所述α-淀粉酶变体在标准a洗涤剂组合物中具有以改善因子(if)≥1.4测量的增加的比活性。
[0537]
14.根据前述段落中任一项所述的α-淀粉酶变体，其中所述变体在对应于如下位置的位置处包含以下取代中的一个或多个：n3a；n3c；n3d；n3e；n3g；n3l；g7f；r26y；r37a；r37n；t40c；t40d；t40g；t40i；t40n；t40v；a41c；a41d；a41k；a41n；a41r；g73d；g73i；g73l；g73q；g73s；g73t；g73w；k78t；q84i；g110k；a111q；n128e；y135e；a139l；w140a；w140m；k142e；f145i；g149k；v165p；w167p；r176q；i177h；t225f；t225h；t225k；t225y；l230c；r247g；t257d；t257e；m261w；f262a；f262e；f262k；f262n；f262p；f262q；f262r；f262s；f262w；n283p；w284d；w284p；w284s；w284v；s287y；s303a；s303c；s303d；s303e；s303f；s303g；s303h；s303m；s303n；s303q；s303t；s303v；s303y；l313q；n314p；h321k；h321l；h321v；p322c；p322h；p322y；m323a；m323d；m323y；h324p；h324w；l340m；s342g；e346a；w347n；w347p；w347r；r359w；e360w；q361k；q361l；q361m；q361r；q361w；q361y；y363g；y363v；y363w；y368c；y372c；k383t；d387p；e391m；r393k；r393m；n395d；n395w；d403a；f405c；f405s；d406v；h407c；h407t；i410h；r415c；r415l；r415m；r415y；n418p；h421a；h421l；h421p；p422d；n423l；n423v；g435m；w439a；k446a；h452l；t455v；n457i；k458d；n465e；n471a；n471d；n471m；n475a；n475c；n475d；n475e；n475f；n475g；n475h；n475l；n475p；n475q；n475v；n475w；g477a；g477h；g477q；以及g477s；使用seq id no:1进行编号，并且其中所述α-淀粉酶变体在标准a洗涤剂组合物中具有以改善因子(if)≥1.5测量的增加的比活性。
[0538]
15.根据前述段落中任一项所述的α-淀粉酶变体，其中所述变体在对应于如下位置的位置处包含以下取代中的一个或多个：r37a；r176q；t225y；f262p；n283p；s303c；s303d；s303g；s303m；s303n；s303t；s303v；s303y y368c；n395d；h407t；i410h；r415c；h421a；g435m；n475c；g477a；以及g477h；使用seq id no:1进行编号，并且其中所述α-淀粉酶变体在标准a洗涤剂组合物中具有以改善因子(if)≥2.0测量的增加的比活性。
[0539]
16.根据前述段落中任一项所述的α-淀粉酶变体，其中所述变体在对应于如下位置的位置处包含以下取代中的一个或多个：s303c；s303t；y368c；以及h421a；使用seq id no:1进行编号，并且其中所述α-淀粉酶变体在标准a洗涤剂组合物中具有以改善因子(if)≥2.5测量的增加的比活性。
[0540]
17.根据前述段落中任一项所述的α-淀粉酶变体，该变体进一步在对应于位置r181、g182、d183以及g184的两个或更多个位置处包含缺失，使用seq id no:1进行编号。
[0541]
18.根据段落17所述的α-淀粉酶变体，其中该缺失选自由以下组成的组：r181* g182*、r181* d183*、r181* g184*、g182* d183*、g182* g184*或d183* g184*，优选地d183* g184*。
[0542]
19.根据前述段落中任一项所述的α-淀粉酶变体，其中该亲本多肽与seq id no:
1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17的多肽具有至少60％、例如至少62％、至少63％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％但小于100％的序列同一性。
[0543]
20.根据前述段落中任一项所述的α-淀粉酶变体，其中所述亲本多肽包含seq id no:1或seq id no:2、seq id no:3、seq id no:4、seq id no:5、seq id no:6、seq id no:7、seq id no:8、seq id no:9、seq id no:10、seq id no:11、seq id no:12、seq id no:13、seq id no:14、seq id no:15、seq id no:16或seq id no:17的多肽，或由其组成。
[0544]
21.根据前述段落中任一项所述的α-淀粉酶变体，该α-淀粉酶变体与亲本多肽的氨基酸序列具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％同一性、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％但小于100％的序列同一性。
[0545]
22.根据前述段落中任一项所述的α-淀粉酶变体，其中所述变体在1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个位置处包含取代。
[0546]
23.一种多核苷酸，该多核苷酸编码根据前述段落1-22中任一项所述的变体。
[0547]
24.一种核酸构建体，该核酸构建体包含根据段落23所述的多核苷酸。
[0548]
25.一种表达载体，该表达载体包含根据段落23所述的多核苷酸。
[0549]
26.一种宿主细胞，该宿主细胞包含根据段落23所述的多核苷酸、根据段落24所述的核酸构建体、或根据段落25所述的表达载体。
[0550]
27.一种组合物，该组合物包含根据段落1至22中任一项所述的变体和至少一种另外的活性组分。
[0551]
28.根据段落27所述的组合物，其中该至少一种另外的活性组分是酶。
[0552]
29.根据段落28所述的组合物，其中所述酶选自由以下组成的组：蛋白酶、脂肪酶、纤维素酶、果胶裂解酶和甘露聚糖酶。
[0553]
30.根据段落27至29中任一项所述的组合物，其中所述组合物是洗涤剂组合物，如液体洗涤剂组合物或粉末洗涤剂组合物。
[0554]
31.根据段落27至30中任一项所述的组合物，其中所述组合物是液体衣物洗涤组合物或液体餐具洗涤组合物，例如自动餐具洗涤(adw)液体洗涤剂组合物，或粉末衣物洗涤组合物，例如皂条，或粉末餐具洗涤组合物，例如adw单位剂量洗涤剂组合物以及例如手动餐具洗涤(hdw)洗涤剂组合物。
[0555]
32.一种获得亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体的方法，该方法包括以下步骤:
[0556]
a)在对应于以下位置的一个或多个位置处引入取代：3、5、7、8、16、18、25、26、29、30、35、37、40、41、43、46、50、57、60、68、71、73、74、78、81、84、86、87、90、91、93、97、98、103、105、110、111、113、114、116、117、119、120、121、125、126、128、129、131、132、133、135、137、138、139、140、141、142、143、145、146、147、149、159、161、162、165、167、169、171、176、177、179、180、181、185、186、187、195、196、197、204、206、208、211、216、218、219、225、228、230、231、235、242、243、247、250、251、252、253、254、255、257、259、260、261、262、263、265、272、273、274、279、280、281、283、284、287、292、294、296、298、299、300、303、305、307、310、311、313、314、315、319、320、321、322、323、324、334、337、339、340、342、344、345、346、347、350、359、360、361、362、363、364、368、372、375、380、382、383、384、385、387、388、391、393、395、
396、397、398、401、402、403、405、406、407、410、415、416、418、421、422、423、433、434、435、438、439、446、447、449、450、452、455、457、458、460、461、462、465、466、467、469、471、473、475、476、477以及478，使用seq id no:1进行编号；
[0557]
b)任选地在亲本α-淀粉酶的所述位置r181、g182、d183以及g184中的两个或更多个位置处引入缺失，使用seq id no:1进行编号；
[0558]
并且所述方法由此提供所述亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体，其中所述变体与seq id no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17的多肽的氨基酸序列具有至少60％、例如至少65％、例如至少70％、例如至少75％、例如至少80％、例如至少85％、例如至少90％、例如至少95％、例如至少97％、例如至少99％但小于100％的序列同一性，并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中该α-淀粉酶变体相对于所述亲本具有改善的特性。
[0559]
33.根据段落1至20中任一项所述的变体在清洁过程如衣物洗涤或包括餐具洗涤和工业清洁的硬表面清洁中的用途。
[0560]
实例
[0561]
实例1：根据本发明的变体的产生
[0562]
酶：sp722：seq id no:1，可购自诺维信公司(novozymes)且在wo 95/26397中披露。通过标准程序制备seq id no:1(sp722)的淀粉酶变体，简言之：将随机和/或定点突变引入基因中，用突变基因转化枯草芽孢杆菌宿主细胞，发酵经转化的宿主细胞(例如，如描述于wo 2004/111220的实例1中)。参考淀粉酶或seq id no:1的亲本多肽在枯草芽孢杆菌中以类似方式重组产生。
[0563]
生成变体库，这些变体在选自以下位置的不同位置中具有取代：n3a、n3c、n3d、n3e、n3f、n3g、n3h、n3l、n3p、n3q、n3s、n3t、n3v、t5e、g7e、g7f、g7h、g7k、g7l、g7p、g7r、g7s、g7t、g7v、g7w、t8s、h16d、h16r、p18d、p18l、p18n、n25t、r26y、d29n、d30f、r35p、r37a、r37n、t40a、t40c、t40d、t40e、t40g、t40h、t40i、t40k、t40n、t40v、t40w、a41c、a41d、a41e、a41h、a41i、a41k、a41n、a41r、a41t、a41v、a41y、w43e、p46a、g50m、g50p、g50q、g57a、g57s、a60e、a60s、a60v、e68f、e68y、q71f、g73d、g73h、g73i、g73l、g73q、g73s、g73t、g73w、t74f、k78s、k78t、t81m、q84i、q84w、q84y、e86k、e86s、s87g、s87l、s87p、h90p、a91q、a91v、a91w、k93v、v97c、v97h、q98e、q98f、q98g、q98i、q98k、q98l、q98m、q98r、q98t、q98y、v103c、v103g、v103s、m105f、g110k、g110r、a111e、a111q、a113t、t114m、t114v、n116c、n116y、v117f、a119h、a119l、a119y、v120e、e121i、n125s、n126i、n128e、q129t、i131y、s132a、s132d、s132h、s132i、s132k、s132l、s132p、s132r、s132t、s132v、s132y、g133e、g133l、g133t、g133v、y135c、y135d、y135e、y135p、i137d、i137n、i137q、i137w、i137y、e138s、e138v、a139l、w140a、w140d、w140m、w140n、w140p、w140s、w140t、w140v、t141g、k142e、k142n、f143h、f143i、f143m、f145g、f145h、f145i、f145l、f145s、p146a、p146h、p146n、g147d、g149f、g149k、w159a、w159e、h161w、f162t、v165p、w167d、w167g、w167p、q169l、q169p、q169v、q169y、r171p、r176e、r176q、r176v、r176y、i177h、i177p、k179a、k179m、k179v、f180d、f180g、r181d、r181e、r181g、r181m、r181y、k185t、k185v、k185w、a186d、w187t、n195y、g196d、n197v、n197y、a204f、a204h、a204l、v206n、m208d、p211c、p211m、e216l、r218q、r219v、t225d、t225f、t225h、t225k、t225l、t225n、t225r、t225y、l228v、l230c、l230f、d231g、d231t、d231v、i235a、k242l、y243d、y243m、y243n、r247g、r247p、r247s、
l250s、l250y、t251d、h252p、v253f、v253s、r254d、r254f、r254h、r254p、r254t、r254v、r254w、n255c、n255f、n255p、t257a、t257c、t257d、t257e、t257g、t257p、t257q、t257s、t257w、t257y、k259p、k259v、k259w、k259y、e260v、m261d、m261f、m261p、m261r、m261s、m261w、f262a、f262c、f262e、f262h、f262i、f262k、f262l、f262n、f262p、f262q、f262r、f262s、f262t、f262v、f262w、a263e、a263h、a263w、a265q、l272w、g273q、a274d、l279i、n280p、k281h、k281i、k281s、n283p、w284a、w284d、w284e、w284g、w284i、w284k、w284m、w284n、w284p、w284q、w284s、w284t、w284v、w284y、s287i、s287k、s287l、s287p、s287r、s287t、s287v、s287y、p292l、p292m、p292y、h294n、h294s、n296t、y298d、y298e、n299t、a300g、s303a、s303c、s303d、s303e、s303f、s303g、s303h、s303l、s303m、s303n、s303q、s303t、s303v、s303y、g305e、y307s、a310d、a310n、k311a、k311c、l313q、n314p、n314s、g315e、g315m、g315v、q319c、q319e、k320s、k320w、h321f、h321k、h321l、h321r、h321t、h321v、h321w、p322c、p322e、p322h、p322t、p322y、m323a、m323c、m323d、m323e、m323g、m323h、m323l、m323n、m323p、m323r、m323s、m323t、m323w、m323y、h324a、h324i、h324p、h324t、h324w、h324y、s334v、g337v、l340m、s342a、s342g、s342t、v344a、v344c、v344i、q345n、e346a、w347a、w347e、w347f、w347g、w347h、w347k、w347n、w347p、w347r、p350a、p350c、p350n、p350t、r359c、r359f、r359g、r359m、r359s、r359w、e360d、e360h、e360p、e360t、e360w、q361d、q361h、q361i、q361k、q361l、q361m、q361n、q361p、q361r、q361s、q361t、q361v、q361w、q361y、g362m、y363a、y363e、y363f、y363g、y363i、y363l、y363q、y363r、y363s、y363t、y363v、y363w、p364c、y368c、y368q、y368r、y368t、y372c、y372g、y372n、y372t、p375q、p375t、p380f、m382i、k383c、k383l、k383p、k383t、a384d、a384n、k385n、k385v、d387c、d387p、d387r、d387w、p388i、e391m、r393k、r393m、n395c、n395d、n395k、n395v、n395w、f396e、f396g、f396t、a397v、y398e、q401h、h402s、d403a、d403e、d403t、f405c、f405n、f405s、f405t、d406v、h407c、h407q、h407t、i410h、i410m、i410r、i410w、r415c、r415l、r415m、r415y、e416d、e416f、e416l、e416n、n418a、n418p、n418v、h421a、h421g、h421l、h421p、h421q、h421y、p422d、p422g、p422i、p422n、p422q、p422s、n423g、n423h、n423i、n423l、n423m、n423p、n423q、n423v、n423w、n423y、g433a、g433n、g433s、p434i、p434l、g435c、g435l、g435m、g435t、g435v、k438a、k438i、k438q、k438s、k438v、w439a、w439d、w439i、w439k、w439l、w439n、w439s、w439t、w439v、w439y、k446a、k446f、a447d、a447y、q449t、v450d、v450n、h452l、t455c、t455m、t455v、n457d、n457e、n457i、n457l、n457v、k458d、k458l、g460m、g460v、t461f、t461i、t461q、t461v、v462c、n465a、n465c、n465e、n465g、n465h、n465l、n465p、n465t、a466f、a466i、a466y、d467i、w469a、w469e、w469h、w469l、w469n、w469q、w469r、w469s、w469y、n471a、n471d、n471m、n471w、s473n、n475a、n475c、n475d、n475e、n475f、n475g、n475h、n475i、n475l、n475m、n475p、n475q、n475s、n475t、n475v、n475w、g476f、g476l、g477a、g477h、g477q、g477s、g477w、s478a、s478f以及s478q，使用seq id no:1进行编号。
[0564]
实例2：变体的比活性
[0565]
为了确定如在实例1中描述产生的变体是否具有维持或甚至改善的活性，通过微样片测定法来评估这些变体。制备以下洗涤剂组合物
[0566]
表1：标准洗涤剂a(以w/w给出百分比)
[0567]
化合物化合物的含量(％w/w)活性组分％(％w/w)las12.0011.60aeos，sles17.634.90大豆脂肪酸2.752.48可可脂肪酸2.752.80aeo11.0011.00氢氧化钠1.751.80乙醇/丙-2-醇3.002.70/0.30mpg6.006.00甘油1.711.70tea3.333.30甲酸钠1.001.00柠檬酸钠2.002.00dtmpa0.480.20pca0.460.18苯氧基乙醇0.500.50h2o，离子交换33.6433.64
[0568]
制备标准a洗涤剂(0.33％)：
[0569]
4:1摩尔比的cacl2和mgcl2储备溶液，具有6000dh(水硬度)。称取125.8g的cacl2.2h2o至1升瓶中，并向其中添加500ml i型水并充分搅拌。向其中称取并添加43.8g的mgcl2.6h2o，并充分溶解，并且最终体积用i型水补至1000ml。
[0570]
0.535m nahco3的溶液：将44.9g的碳酸氢钠溶解在100ml的i型水中。
[0571]
标准a洗涤剂，水硬度为15(15
°
dh)：称取3.335g的标准a洗涤剂并转移到1升瓶中，并向其中添加865ml的i型水并充分混合。向其中添加7.5ml的0.535m nahco3，充分混合，并且体积用1型水补至1升。为了将水硬度调节至15
°
dh，添加2.5ml的4:1摩尔比的cacl2.2h2o和mgcl2.6h2o储备溶液(6000
°
dh)，并将混合物搅拌15min。
[0572]
实验程序
[0573]
制备母板：
[0574]
通过菌落挑取器(k生物系统公司(kbiosystems))从转化的板中挑取菌落并接种在包括tbgly培养基的96孔培养板中生长。使培养物在37℃下生长3天，并通过离心从板中回收上清液。
[0575]
制备底物板：
[0576]
从测试材料中心(center for testmaterials)(cft，荷兰)获得5-米样品-cs-27并使用样品打孔器将其切割为6mm微样品。将一个样品置于96孔nunc板的每个孔中，向其中添加180μl标准a洗涤剂(0.33％)。将培养上清液用100mm mops稀释至500x、用0.1mm cacl2、0.01％triton-x稀释至ph 7。向含有样品和标准a洗涤剂的板中添加20ul稀释的上清液并在25℃下、800rpm下孵育10min。将40ul反应混合物转移至另一个96孔板，为了将所有释放的寡糖消化为葡萄糖，添加10ul 0.1mg/ml淀粉葡糖苷酶(amg)并在室温下孵育5min。从商业产品amg 300l(诺维信公司(novozymes))中纯化出amg。通过对羟基苯甲酸酰
肼(pahbah)法(lever m anal biochem.[分析生物化学]81:21-7)检测还原末端。为制备1.5％pahbah试剂，将1.5g对羟基苯甲酸酰肼(pahbah)溶解于含有1.0mna2co3、0.17m酒石酸钠钾和5mm bi(no3)3.5h2o的缓冲液中。向50ul amg消化物添加50ul 1.5％pahbah试剂并在95℃下加热10min。在405nm下测量所得混合物的吸光度，其与酶活性成比例。通过elisa使用特异性抗体确定表达的酶的浓度。通过取按浓度计的比活性的比率计算比活性，并且命中被鉴定为高于亲本α-淀粉酶的比活性的一切。该参照α-淀粉酶或亲本α-淀粉酶是seq id no:1。参照α-淀粉酶或亲本α-淀粉酶的改善因子(if)为if＝1.0。
[0577]
改善因子(if)计算如下：
[0578]
改善因子(if)：[变体的比活性]/[亲本α-淀粉酶的比活性]
[0579]
表2：通过上述方法获得根据本发明作为培养上清液的变体的改善因子(if)如下(氨基酸取代是指seq id no:1)：
[0580]
[0581]
[0582]
[0583]
[0584]
[0585][0586]
针对标准a洗涤剂显示至少1.1的if的变体被认为当与亲本α-淀粉酶(即具有seq id no:1中阐述的氨基酸序列的α-淀粉酶)相比时具有改善的特性。
[0587]
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