降低抗人白介素-33单克隆抗体生产中宿主细胞蛋白含量的亲和纯化方法与流程

技术特征：
1.一种降低抗人白介素-33单克隆抗体生产中宿主细胞蛋白含量的亲和纯化方法，其包括下述步骤：上样前平衡：使用缓冲液一平衡亲和层析介质，从而得到平衡好的亲和层析介质；上样：将抗人白介素-33单克隆抗体发酵液与所述平衡好的亲和层析介质结合；洗脱：随后，先后进行预洗脱和终洗脱，从而去除宿主细胞蛋白，得到纯化的抗人白介素-33单克隆抗体；所述抗人白介素-33单克隆抗体包含三个重链互补决定区和三个轻链互补决定区，所述三个重链互补决定区为cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3，所述三个轻链互补决定区为cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3，其中：cdr-h1的氨基酸序列如seq id no：1所示；cdr-h2的氨基酸序列如seq id no：2所示；cdr-h3的氨基酸序列如seq id no：3所示；cdr-l1的氨基酸序列如seq id no：4所示；cdr-l2的氨基酸序列如seq id no：5所示；cdr-l3的氨基酸序列如seq id no：6所示。2.根据权利要求1所述的亲和纯化方法，其特征在于，所述抗人白介素-33单克隆抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中，所述重链可变区的氨基酸序列如seq id no：7所示；所述轻链可变区的氨基酸序列如seq id no：8所示。3.根据权利要求1或2所述的亲和纯化方法，其特征在于，所述亲和层析介质选自配基交联到琼脂糖、聚乙烯醚、羟基化聚醚树脂、聚丙烯酸树脂、聚苯乙烯二乙烯苯基树脂、聚甲基丙烯酸树脂、聚苯乙烯树脂、羟基磷灰石、玻璃基质上的层析介质中的一种，优选为配基交联到聚乙烯醚的层析介质；优选地，所述配基为protein a、protein g或protein l，进一步优选为protein a。4.根据权利要求1～3中任一项所述的亲和纯化方法，其特征在于，所述缓冲液一选自磷酸盐缓冲液、tris-hcl缓冲液和硼酸-硼砂缓冲液中的一种；所述缓冲液一中，盐浓度为5mm～0.25m，ph为5.5～8.0。5.根据权利要求1～4中任一项所述的亲和纯化方法，其特征在于，采用预洗脱缓冲液进行预洗脱，所述预洗脱缓冲液为中性缓冲液和/或酸性缓冲液；优选地，所述中性缓冲液选自磷酸盐缓冲液、三羟甲基氨基甲烷缓冲液和甘氨酸缓冲液中的一种；优选地，所述酸性缓冲液选自柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液、醋酸-醋酸钠缓冲液和柠檬酸-柠檬酸三钠缓冲液中的一种；优选地，所述预洗脱缓冲液的ph为5.0～7.5，进一步优选为5.5～6.5。6.根据权利要求1～5中任一项所述的亲和纯化方法，其特征在于，采用预洗脱缓冲液进行预洗脱时，还向所述预洗脱缓冲液中加入预洗脱活性剂；优选地，所述预洗脱活性剂选自盐酸胍、聚山梨酯80和氯化钠中的一种或两种以上；优选地，所述预洗脱活性剂为盐酸胍；进一步优选地，所述盐酸胍的浓度为0.01～1m。
7.根据权利要求1～6中任一项所述的亲和纯化方法，其特征在于，采用终洗脱缓冲液进行终洗脱；所述终洗脱缓冲液选自柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液、醋酸缓冲液、甘氨酸-hcl缓冲液和柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液中的一种或两种或三种以上，优选为柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液；优选地，所述柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液的ph为2.9～3.8。8.根据权利要求1～7中任一项所述的亲和纯化方法，其特征在于，在抗人白介素-33单克隆抗体发酵液与所述平衡好的亲和层析介质结合时，使用缓冲液一进行平衡。9.根据权利要求1～8中任一项所述的亲和纯化方法，其特征在于，洗脱步骤中，在预洗脱后，在终洗脱前，还包括使用缓冲液二平衡预洗脱后的溶液。10.根据权利要求9所述的亲和纯化方法，其特征在于，所述缓冲液二选自磷酸盐缓冲液、tris-hcl缓冲液和硼酸-硼砂缓冲液中的一种；优选地，所述缓冲液二为磷酸盐缓冲液或tris-hcl缓冲液；优选地，所述缓冲液二的ph为5.5～8.0。

技术总结
本申请公开一种降低抗人白介素-33单克隆抗体生产中宿主细胞蛋白含量的亲和纯化方法，包括下述步骤：上样前平衡：使用缓冲液一平衡亲和层析介质，从而得到平衡好的亲和层析介质；上样：将抗人白介素-33单克隆抗体发酵液与平衡好的亲和层析介质结合；洗脱：将混合溶液进行预洗脱和终洗脱，从而去除宿主细胞蛋白，得到纯化的抗人白介素-33单克隆抗体；抗人白介素-33单克隆抗体包含三个重链互补决定区和三个轻链互补决定区，三个重链互补决定区为CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，三个轻链互补决定区为CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3。该方法简单易行，能够进行放大纯化生产，细胞发酵上清液无需进行前处理，洗脱样品得率高，HCP残留量保持在较低水平，从而减轻之后纯化步骤中去除HCP的压力。从而减轻之后纯化步骤中去除HCP的压力。从而减轻之后纯化步骤中去除HCP的压力。


技术研发人员：戴长松 朱华杰 李帅 徐义超 唐宇杰 戴璐 李梦茹 李梦杰 何勇梅 吴亦亮
受保护的技术使用者：江苏荃信生物医药股份有限公司
技术研发日：2021.12.01
技术公布日：2022/1/11