一种利用微生物菌剂提高牧草抗病性的方法和用途与流程

1.本发明涉及牧草抗病性方法领域，具体涉及一种利用微生物菌剂提高牧草抗病性的方法和用途。


背景技术：

2.牧草指供饲养的牲畜食用的草或其他草本植物。牧草再生力强，一年可收割多次，富含各种微量元素和维生素，因此成为饲养家畜的首选。
3.扁穗雀麦是禾本科、雀麦属一年生草本植物，秆直立，高可达100厘米，叶鞘闭合，被柔毛；叶片散生柔毛。圆锥花序开展，粗糙，小穗两侧极压扁，含小花，第一颖具7脉，第二颖稍长，具7
‑
11脉；外稃沿脉粗糙，无毛；内稃窄小，两脊生纤毛；颖果与内稃贴生，花果期春季5月和秋季9月。
4.多种牧草均容易出现黑粉病，黑粉病也是严重影响扁穗雀麦生长和产量的病害类型，而目前对于黑粉病的防治主要依靠化合物，而众所周知的是利用化学方法处理病虫害虽然效果显著，但是对于土壤和环境容易造成二次污染，而生物方法用于提高牧草抗病性的同时还能避免二次污染，但是目前对于牧草的生物防治方法和抗病微生物的选择仍然及其缺乏。


技术实现要素：

5.为解决上述技术问题，本发明提供了一种利用微生物菌剂提高牧草抗病性的方法和用途，通过使用由杜仲类芽孢杆菌菌悬液和灰色链霉菌菌悬液混合而成微生物菌剂浸泡牧草种子，抽穗前喷施微生物菌剂显著提高了牧草的抗病性，能够有效防治黑粉病。
6.本发明提供了一种利用微生物菌剂提高牧草抗病性的方法，具体包括如下步骤：
7.s1，制备微生物菌剂：
8.所述微生物菌剂由杜仲类芽孢杆菌菌悬液和灰色链霉菌菌悬液混合而成；
9.s2，用上述微生物菌剂浸泡牧草种子，种植后，待牧草抽穗前喷施微生物菌剂。
10.进一步地，s1中，所述杜仲类芽孢杆菌菌悬液和灰色链霉菌菌悬液的体积比为2:1，且所述杜仲类芽孢杆菌菌悬液和灰色链霉菌菌悬液的od
600
值均等于0.7。
11.进一步地，s2中，所述穗雀麦种子的浸泡时间为24h。
12.进一步地，s2中，所述微生物菌剂的喷施量为1ml/株。
13.本发明还提供了上述方法制备得到的微生物菌剂，所述微生物菌剂包括杜仲类芽孢杆菌和灰色链霉菌。
14.本发明还提供了上述微生物菌剂在牧草抗病中的用途。
15.进一步地，所述牧草为扁穗雀麦。
16.进一步地，所述微生物菌剂用于黑粉病防治。
17.进一步地，所述黑粉病由小麦黑粉菌导致。
18.与现有技术相比，本发明的有益效果在于：
19.1、本发明通过制备得到的微生物菌剂用于牧草种子浸泡和种植喷施，显著提供了牧草的抗病性，实现了对黑粉病的有效防治；
20.2、本发明制备得到的微生物菌剂能够抑制小麦黑粉菌，所述微生物菌剂中的杜仲类芽孢杆菌和灰色链霉菌均能够抑制小麦黑粉菌的生长。
具体实施方式
21.下面对本发明的具体实施方式进行详细描述，但应当理解本发明的保护范围并不受具体实施方式的限制。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。本发明各实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
22.实施例1
23.本实施例提供一种利用微生物菌剂提高牧草抗病性的方法，
24.一、菌株准备
25.1、受试菌株
26.(1)小麦黑粉菌(atcc28135)，是扁穗雀麦黑粉病的致病菌之一。
27.(2)杜仲类芽孢杆菌(保藏编号为cpcc 100226t)，购买自中国医学科学院医药生物技术研究所；
28.灰色链霉菌(保藏编号为cicc 11002)，购买自中国食品发酵工业研究院有限公司。
29.2、杜仲类芽孢杆菌和灰色链霉菌分别对小麦黑粉菌的抑菌性研究
30.(1)配制ym琼脂培养基，ym液体培养基和lb液体培养基；
31.(2)首先将小麦黑粉菌在ym琼脂培养基上进行活化，然后挑取单菌落接种于ym液体培养基中，28℃，200rpm培养3天，然后吸取1ml菌液在转速为8000rpm的低温冷冻离心机中离心10min，弃掉上清液后用0.85％的生理盐水洗涤三次，用无菌水调节菌液浓度为od
600
等于0.7，然后稀释至10
‑4，将稀释的菌悬液涂布至ym琼脂培养基上；
32.将杜仲类芽孢杆菌和灰色链霉菌分别接种于lb液体培养基中，于30℃，培养24h获得杜仲类芽孢杆菌菌液和灰色链霉菌菌液；
33.(3)用已灭菌的打孔器在涂布有小麦黑粉菌的ym琼脂培养基上打孔，设三个平板重复，每个平板上打四个孔，分别记为a、b、c、d孔，在a、b两孔中加入杜仲类芽孢杆菌菌液，c、d孔中加入灰色链霉菌菌液，然后正置培养48h。
34.(4)观察测量平板上的抑菌圈的大小，分别计算杜仲类芽孢杆菌和灰色链霉菌产生抑菌圈的平均直径，将结果记录在表1中。
35.二、微生物菌剂对黑粉病的防治效果
36.1、微生物菌剂的制备
37.(1)首先将上述杜仲类芽孢杆菌和灰色链霉菌划线接种于同一lb固体培养基的平板上，交叉划线，然后30℃倒置培养48h，观察后发现杜仲类芽孢杆菌和灰色链霉菌之间并不存在拮抗性，能够用于同一菌剂的制备中；
38.(2)将杜仲类芽孢杆菌和灰色链霉菌分别接种于lb培养基中，待杜仲类芽孢杆菌
和灰色链霉菌分别培养至od
600
值为0.7，获得杜仲类芽孢杆菌菌悬液和灰色链霉菌菌悬液，然后按照杜仲类芽孢杆菌菌悬液和灰色链霉菌菌悬液的体积比2:1混合，获得微生物菌剂。
39.2、本发明提供的微生物菌剂对扁穗雀麦的黑粉病的防治效果
40.(1)首先选择优质的扁穗雀麦种子分为两组，分别为实验组和对照组(各取十个样)；
41.实验组处理过程：将扁穗雀麦种子浸泡于微生物菌剂中24h，然后采用常规方式种植；在扁穗雀麦抽穗前接种小麦黑粉菌，3天后，喷施微生物菌剂，喷施量为1ml/株。
42.对照组中将微生物菌剂替换为无菌水。
43.所述小麦黑粉菌的接种方式：
44.将小麦黑粉菌在ym琼脂培养基上进行活化，然后挑取单菌落接种于ym液体培养基中，28℃，200rpm培养6天，加入新鲜的ym液体培养基继续培养6天，然后将菌液的调整为孢子浓度调整到6
×
105个/ml，在扁穗雀麦抽穗前8天用注射器接种小麦黑粉菌，一个月后统计发病率和计算平均发病面积，并记录于表2中；
45.三、实验结果
46.1、杜仲类芽孢杆菌和灰色链霉菌分别对小麦黑粉菌的抑菌性研究
47.表1杜仲类芽孢杆菌和灰色链霉菌对小麦黑粉菌的抑菌情况
[0048][0049][0050]
由表1可以看出，本发明中选择的类芽孢杆菌和灰色链霉菌均对小麦黑粉菌具有较强的抑制作用，能够产生抑菌圈，说明类芽孢杆菌和灰色链霉菌能够用于小麦黑粉菌引起的黑粉病防治。
[0051]
2、微生物菌剂对黑粉病的防治效果
[0052]
表2微生物菌剂对黑粉病的防治效果
[0053]
组别发病率(％)平均发病面积(％)对照组9136实验组236
[0054]
结果如表2所示，我们通过微生物菌剂处理后，实验组的扁穗雀麦抗黑粉病的抗病性显著提高，少数发病的扁穗雀麦的发病平均面积也远远低于对照组，说明微生物菌剂能够防治黑粉病。
[0055]
尽管已描述了本发明的优选实施例，但本领域内的技术人员一旦得知了基本创造性概念，则可对这些实施例作出另外的变更和修改。所以，所附权利要求意欲解释为包括优选实施例以及落入本发明范围的所有变更和修改。
[0056]
显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。